CN117205225A - 栀子苷在制备治疗骨髓增殖性肿瘤药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了栀子苷在制备治疗骨髓增殖性肿瘤药物中的应用。所述骨髓增殖性肿瘤包括真性红细胞增多症、原发性血小板增多症和原发性骨髓纤维化。本发明发现栀子苷通过作用于AMPK有效抑制了MPN小鼠血液中WBC、RBC、HGB及HCT的含量；恢复MPN小鼠体重，降低脾脏重量及脾指数；增加骨髓粒细胞系及粒红比，减少红细胞；减轻MPN小鼠脾脏组织中纤维化程度；同时栀子苷能够上调MPN小鼠脾脏中AMPK和p‑AMPK蛋白表达，抑制STAT3和p‑STAT3蛋白表达。
Description
技术领域
本发明涉及一种环烯醚萜类化合物栀子苷的新用途，具体是栀子苷在制备治疗骨髓增殖性肿瘤药物中的应用。
背景技术
栀子苷是一种有机化合物，分子式为C17H24O10。从茜草科植物栀子的干燥成熟果实中运用高科技生产工艺提取精制而成的产品。栀子苷为环烯醚萜苷类化合物，异名京尼平苷，都梅子素葡萄糖苷去羟栀子苷。纯品为白色粉末，比旋度[α]D20+7.5°(水)。易溶于水，能溶于乙醇，不溶于石油醚。栀子苷有多种用途，不同条件的发酵，可以制成天然食用着色剂栀子蓝和栀子红，也是用于治疗心脑血管、肝胆等疾病及糖尿病的原料药物。栀子苷具有缓泻、镇痛、利胆、抗炎、治疗软组织损伤以及抑制胃液分泌和降低胰淀粉酶等作用。
BCR-ABL阴性骨髓增殖性肿瘤(Myeloproliferative Neoplasm，MPN)具有骨髓造血干细胞特异性增殖的特征，包括真性红细胞增多症(PolycythemiaVera，PV)、原发性血小板增多症(Essential Ehrombocythemia，ET)和原发性骨髓纤维化(PrimaryPyelofibrosis，PMF)，致病机制较为复杂，主要是由于JAK2 V617F基因突变导致。除骨髓造血干细胞特异性增殖外，该疾病还伴有骨髓中相对成熟细胞和外周血细胞增殖，外周器官浸润，肝脾肿大，甚至出现肾衰竭以及向急性髓系白血病(Acute Myelocytic Leukemia,AML)转化的风险。
MPN致病机制较为复杂，存在多种信号通路的异常活化，且各信号通路之间相互联系，是一种难以治愈的疾病，并因此受到极大关注。自2005年有国外学者在MPN患者中发现JAK2V617F突变，该基因突变存在于大部分PV患者中，及部分ET和PMF患者，随后陆续又有学者在部分患者中发现JAK212号外显子、钙结合蛋白(Calreticulin，CALR)和骨髓增生性白血病病毒癌基因(Myeloproliferative LeukemiaVirus Oncogene，MPL)的突变，此外，研究还发现TET2、EZH2、IDH1/IDH2、DNMT3A、ASXL1等与MPN表观遗传调控有关的基因突变，特异性较低，但与MPN预后相关。
鉴于JAK2 V617F突变是MPN中最常见的基因突变，目前MPN疾病动物模型主要是导入JAK2 V617F突变的小鼠模型，其构建策略包括转染突变基因细胞移植、转基因和基因敲入。转染突变基因细胞移植小鼠模型通过逆转录病毒载体将JAK2 V617F突变基因导入到正常野生型小鼠骨髓细胞，然后将其移植到受辐射后的野生型小鼠体内，建立骨髓移植模型，该模型能够表现许多PV表型特征，部分也表现出类似MF的表型。使用此方法构建MPN模型可以相对快速地构建多个小鼠模型，并且可以使用共同表达转基因和绿色荧光蛋白(GFP)的载体来跟踪突变细胞，但也存在如获得的普遍表达和/或非生理表达水平以及转基因整合位点之间表达的位置效应差异等缺点；转基因模型通过原核注射可以建立携带人JAK2V617F突变的cDNA转基因小鼠，不同株系的转基因小鼠表现出不同严重程度的MPN特征。转基因模型是通过将突变基因与靶细胞特异性启动子组成的DNA结构显微注射到受精卵中而建立，该方法能够使基因表达接近生理表达水平且对其他基因影响最小，不足之处在于该模型的建立耗时较长；目前小鼠JAK2 V617F杂合子和纯合子敲入模型已经成功创建，该模型能够复制人类PV的主要特征。在基因敲入模型中，带有突变的同一基因被整合进入到基因组的目标基因座，且由于表达受内源性启动子控制，突变基因在生理上以适当的时机和数量表达，表明转基因插入位点对基因表达没有影响。此外，Cre-lox重组的造血细胞特异性条件表达是可能的。因此，敲入模型是最能准确模拟突变基因表达的模型，但建立该模型比较消耗时间和成本。
对于MPN的治疗，目前临床上主要是对症治疗，如羟基脲、干扰素等或联合抗血栓治疗。鉴于JAK2等基因突变在MPN发病机制的重要作用，基于抑制JAK2及其下游相关信号通路的激活是目前治疗MPN新药研发的主要方向。2011年11月16日，美国食品和药物管理局(FDA)批准ruxolitinib(RUX)用于治疗中度和高度风险性骨髓纤维化(MF)，包括PMF和post-PV/post-ET MF。随后，2014年12月4日，FDA批准RUX治疗对羟基脲(HU)反应不足或不耐受PV患者。虽然JAK2抑制剂是目前临床上治疗MPN的主要药物，但是其存在副作用大、容易耐受等缺点，除JAK抑制剂外，目前在研的针对MPN的药物有端粒酶抑制剂、雷帕霉素靶蛋白抑制剂、组蛋白脱乙酰胺酶抑制剂、AMP活化的蛋白激酶抑制剂等，发现具有新作用机制的抗MPN药物是当前血液系统增生性疾病研究热点之一。
经检索，CN114432329A公开了栀子苷在制备治疗银屑病的药物中的应用。CN105030806B公开了一种治疗糖尿病的药物组合物及其用途，包括栀子苷。CN110051677A公开了一种栀子苷在缓解糖皮质激素副作用方面的应用，暂未发现栀子苷在制备治疗骨髓增殖性肿瘤药物中的应用。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是基于现有MPN体内、体外造模技术，探索治疗MPN的新靶点和对应的药物。我们基于MPN小鼠模型和体外细胞增殖模型发现栀子苷能够通过激活AMPK磷酸化有效抑制MPN疾病的发生发展，为MPN的治疗药物提供了新的方向。
本发明的技术方案是：
本发明提供了栀子苷在制备治疗骨髓增殖性肿瘤药物中的应用。
本发明还提供了一种药物组合物在制备治疗骨髓增殖性肿瘤药物中的应用，所述药物组合物中包含栀子苷。
优选的，所述骨髓增殖性肿瘤包括真性红细胞增多症、原发性血小板增多症和原发性骨髓纤维化。
优选的，所述药物组合物通过现有方法可以被制成片剂、胶囊、口服液、注射剂、粉剂、膏剂或外用药液。
具体的：
1.本发明包含体内抗骨髓增殖性肿瘤作用研究：选择合格SPF级雄性C57BL/6小鼠，以尾静脉注射人源JAK2 V617F突变的骨髓细胞(2×106个细胞/只)，建立MPN小鼠模型。选取模型小鼠36只，按血液学指标及体重分层随机分为6组，分别为模型对照组，鲁索替尼磷酸盐组(5mg/kg)，栀子苷低、中、高剂量组(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg)和栀子苷+AMPK抑制剂Compound C(后文简称Compound C，AMPK抑制剂Compound C是现有已知化合物)(20mg/kg+0.2mg/kg)，每组6只动物，另选未移植的正常C57BL/6小鼠6只，作为正常对照组，除正常对照组和模型对照组给予等体积生理盐水外，其余每组小鼠每天灌胃给予不同剂量的栀子苷处理，连续4周。监测各组小鼠体重及脾指数变化；五分类血液细胞分析仪检测小鼠血液中白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)和红细胞比容(HCT)含量；骨髓涂片观察小鼠骨髓中有核细胞计数变化，并采用PCR检测股骨中JAK2 V617F突变基因载量；网状纤维染色观察小鼠脾组织纤维化程度；Western Blot检测AMPK、p-AMPK、STAT3、p-STAT3蛋白表达情况。
2.本发明包含体外抗骨髓增殖性肿瘤作用研究：
(1)采用含EPOR和JAK2 V617F突变基因的慢病毒感染小鼠原B细胞(Ba/F3)，构建MPN体外细胞增殖模型Ba/F3 JAK2 V617F细胞，人红白细胞白血病细胞(HEL)作为对照。两种细胞分别设置模型/正常对照组和3个栀子苷剂量组，栀子苷处理48h后，CCK8检测各组细胞活性，分别计算栀子苷作用于Ba/F3 JAK2 V617F细胞和HEL细胞的IC50值。
(2)取IC50值1倍、1/2倍、1/4倍作为栀子苷高、中、低剂量组。将造模成功的Ba/F3JAK2 V617F细胞分为模型对照组、栀子苷低、中、高剂量组(5μM、10μM、20μM)，另设正常Ba/F3细胞为正常对照组；HEL细胞分为正常对照组、栀子苷低、中、高剂量组(12.5μM、25μM、50μM)。各组细胞给予相应药物处理后分别培养0h、24h、48h和72h，CCK8检测各组细胞各个时间段的细胞活性。
(3)将造模成功的Ba/F3 JAK2 V617F细胞分为模型对照组，鲁索替尼磷酸盐组(300nM)，栀子苷组(20μM)，栀子苷+Compound C(20μM+1μM)组，另设正常Ba/F3细胞为正常对照组；HEL细胞分为正常对照组、鲁索替尼磷酸盐组(300nM)，栀子苷组(50μM)，栀子苷+Compound C组(50μM+1μM)。各组细胞给予相应药物处理后48h，CCK8检测各组细胞活性。
(4)将造模成功的Ba/F3 JAK2 V617F细胞分为模型对照组、鲁索替尼磷酸盐组(300nM)、栀子苷低、中、高剂量组(5μM、10μM、20μM)、栀子苷+Compound C(20μM+1μM)组，另设正常Ba/F3细胞为正常对照组；HEL细胞分为模型对照组、鲁索替尼磷酸盐组(300nM)、栀子苷低、中、高剂量组(5μM、10μM、20μM)、栀子苷+Compound C(20μM+1μM)组，另设正常HEL细胞为正常对照组。Western Blot检测栀子苷处理48h后各组细胞AMPK、p-AMPK、STAT3、p-STAT3蛋白表达情况。
与现有技术相比，本发明的优势是：
本发明通过体内动物实验证明：栀子苷通过作用于AMPK有效抑制了MPN小鼠血液中WBC、RBC、HGB及HCT的含量；恢复MPN小鼠体重，降低脾脏重量及脾指数；增加骨髓粒细胞系及粒红比，减少红细胞；减轻MPN小鼠脾脏组织中纤维化程度；同时栀子苷能上调MPN小鼠脾脏中AMPK和p-AMPK蛋白的表达，抑制STAT3和p-STAT3蛋白表达。
本发明通过体外细胞实验证明：栀子苷通过作用于AMPK能够随时间和剂量依赖性显著抑制Ba/F3 JAK2V617F和HEL细胞活性；上调两种细胞中p-AMPK蛋白的表达，抑制STAT3和p-STAT3蛋白的表达。
以下结合附图和具体实施方式对本发明的详细结构作进一步描述。
附图说明
图1为JAK2 V617F突变小鼠模型脾脏图，注：A正常对照组；B模型对照组；C鲁索替尼磷酸盐组；D栀子苷低剂量组；E栀子苷中剂量组；F栀子苷高剂量组；G栀子苷+Compound C组。
图2为JAK2 V617F突变小鼠脾脏组织网状纤维染色病理图，注：A正常对照组；B模型对照组；C鲁索替尼磷酸盐组；D栀子苷低剂量组；E栀子苷中剂量组；F栀子苷高剂量组；G栀子苷+Compound C组。
图3为JAK2 V617F突变小鼠脾脏组织中AMPK和p-AMPK、STAT3、p-STAT3蛋白表达情况图注：(a)栀子苷对小鼠脾脏组织中AMPK和p-AMPK蛋白表达的影响；(b)栀子苷对小鼠脾脏组织中STAT3和p-STAT3蛋白表达的影响。
图4是JAK2 V617F突变小鼠脾脏组织中AMPK和p-AMPK、STAT3、p-STAT3蛋白灰度条带图，注：A正常对照组；B模型对照组；C鲁索替尼磷酸盐组；D栀子苷低剂量组；E栀子苷中剂量组；F栀子苷高剂量组；G栀子苷+Compound C组。
图5为栀子苷对Ba/F3 JAK2 V617F和HEL细胞活性的影响图，注：(a)不同浓度的栀子苷处理0h、24h、48h、72h后对Ba/F3 JAK2 V617F细胞活性的影响；(b)CCK8法检测不同试验组处理48h后对Ba/F3 JAK2 V617F细胞活性的影响；(c)不同浓度的栀子苷处理0h、24h、48h、72h后对HEL细胞活性的影响；(d)CCK8法检测不同试验组处理48h后对HEL细胞活性的影响。
图6为Ba/F3 JAK2 V617F细胞中AMPK和p-AMPK、STAT3和p-STAT3蛋白表达情况图；注：(a)栀子苷处理48h后对Ba/F3 JAK2 V617F细胞中AMPK和p-AMPK蛋白表达的影响；(b)栀子苷处理48h后对Ba/F3 JAK2 V617F细胞中STAT3和p-STAT3蛋白表达的影响。
图7为Ba/F3 JAK2V617F细胞中AMPK和p-AMPK、STAT3和p-STAT3蛋白灰度条带图，注：A正常对照组；B模型对照组；C鲁索替尼磷酸盐组；D栀子苷低剂量组；E栀子苷中剂量组；F栀子苷高剂量组；G栀子苷+Compound C组。
图8为HEL细胞中AMPK和p-AMPK、STAT3和p-STAT3蛋白表达情况图，注：(a)栀子苷处理48h后对HEL细胞中AMPK和p-AMPK蛋白表达的影响；(b)栀子苷处理48h后对HEL细胞中STAT3和p-STAT3蛋白表达的影响。
图9为HEL细胞中AMPK和p-AMPK、STAT3和p-STAT3蛋白灰度条带图，注：A正常对照组；B鲁索替尼磷酸盐组；C栀子苷低剂量组；D栀子苷中剂量组；E栀子苷高剂量组；F栀子苷+Compound C组。
下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步的解释和说明。
具体实施方式
药理实验：
实施例1：栀子苷抗小鼠骨髓增殖性肿瘤作用
1、动物模型的构建：准备9周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠56只，体重23～25g，分为正常对照组(6只)和模型对照组(50只)。模型对照组小鼠每天灌胃给予硫酸新霉素液体(硫酸新霉素液体配制：称取4g硫酸新霉素，加入超纯水充分溶解，配制2mg/mL硫酸新霉素母液，采用0.45μm微孔滤膜过滤备用。取超纯水加入浓盐酸配制pH＝2.8-3.0的酸化水，经高压灭菌后加入硫酸新霉素母液中配制1mg/mL硫酸新霉素液体，供小鼠备用)，正常对照组给予等体积生理盐水，连续1周，1周后模型对照组小鼠经过9.0Gay全身辐照，辐照完成后经尾静脉接种人源JAK2 V617F突变的骨髓细胞(2×106个细胞/只)，接种细胞后每天灌胃给予硫酸新霉素液体，连续4周，建立小鼠MPN模型。造模完成后，对各组小鼠进行颈静脉采血，用五分类血液细胞分析仪检测白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比容(HCT)含量，判断小鼠骨髓增殖性肿瘤成模情况。
2、分组与给药：选取模型小鼠36只，按血液学指标及体重分层随机分为6组，分别为模型对照组，鲁索替尼磷酸盐组(5mg/kg)，栀子苷低、中、高剂量组(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg)和栀子苷+Compound C组(20mg/kg+0.2mg/kg)，每组6只动物，另选未移植的正常C57BL/6小鼠6只，作为正常对照组，除正常对照组和模型对照组给予等体积生理盐水外，其余每组小鼠每天灌胃给予不同剂量的栀子苷处理，连续4周。
3、指标检测
3.1血液学指标；各组动物分别于给药前、末次给药后次日进行颈静脉采血，采用五分类血液细胞分析仪检测小鼠血液中白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)和红细胞比容(HCT)含量。
3.2体重、脾脏指数测定：于末次给药后次日各组动物称重，颈椎脱臼安乐死，解剖取脾脏，称量脾脏湿重，计算脾脏指数。
3.3骨髓细胞测定：于末次给药后次日各组动物颈椎脱臼安乐死，解剖取骨髓，采用骨髓涂片晾干后经瑞氏-姬姆萨染色，显微镜下观察骨髓象(粒细胞系统和红细胞系统、粒红比值、巨核细胞)。
3.4JAK2 V617F基因载量测定：于末次给药后次日各组动物颈椎脱臼安乐死，解剖取股骨，按体积(mL)：RNA提取液(mL)＝1：9加入RNA提取液，混匀制成悬液，将所提RNA逆转录成c-DNA，采用实时荧光定量PCR法检测股骨组织中JAK2 V617F突变基因表达量。
3.5组织病理学检查：解剖取脾脏组织，置于10％中性福尔马林溶液固定，切片、石蜡包埋，网状纤维染色，镜下观察各组动物脾组织中纤维化程度。
具体染色步骤(1)脱蜡：依次将上述准备好的组织切片浸泡在二甲苯I中10min,二甲苯Ⅱ10min；(2)清洗：将组织切片置于染色架上，滴加Gomori氧化剂进行氧化5min，蒸馏水稍洗；(3)漂白：置于草酸溶液中漂白1-2min，缓水流冲洗2min，蒸馏水稍洗；(4)媒染：硫酸铁铵溶液媒染5min，缓水流冲洗1min，蒸馏水稍洗；(5)染色：滴加Gomori银氨溶液染色3min，蒸馏水稍洗；(6)还原：Gomori还原剂还原1min，缓水流冲洗10min；(7)封片：常规脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
3.6组织中相关蛋白表达检测：解剖取脾脏组织，采用Westernblot方法检测脾脏中AMPK和p-AMPK、STAT3和p-STAT3蛋白表达，并检测内参β蛋白表达量，计算各组蛋白表达量与内参β比值，作为相关蛋白相对表达量。
3.6.1Westernblot方法检测步骤
3.6.1.1蛋白样品制备：末次给药后，解剖取出小鼠脾脏，用手术剪剪取脾脏组织约50mg，分装于冻存管中，-80℃保存备用。将剪取的小鼠脾脏组织用0.9％氯化钠注射液漂洗，除尽残留血液，并用滤纸吸干，加入裂解液(RIPA：PMSF＝100:1)，置于低温冷冻研磨仪中进行组织研磨，研磨完成后，4℃，12000rpm/min，离心10min，提取上清液即为组织总蛋白，-80℃保存。
3.6.1.2蛋白浓度检测(BCA试剂盒检测)：(1)按试剂盒要求配制BCA工作液(试剂A:试剂B＝50:1)；(2)以浓度为0.5mg/ml蛋白标准液配制标准品(0mg/ml、0.025mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml)；(3)将以上制备的各组组织总蛋白样品及标准品(20μL/孔)分别加入到96孔板中，每孔加入200μLBCA工作液，37℃避光孵育30min；(4)孵育完成后用酶标仪测定OD值，检测波长562nm，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出蛋白浓度。
3.6.1.3蛋白变性：在提取的各组组织总蛋白样品中加入6×SDS-PAGE loadingbuffer，并将其稀释为1×，混匀后，置于105℃金属浴中恒温变性10min，变性完成后分装，-80℃保存备用。
3.6.1.4Western Blot法检测：(1)配制分离胶和浓缩胶：根据待测蛋白分子量大小配制分离胶，加入玻璃板中，并加入异丙醇液封，待分离胶凝胶后，除去异丙醇，冲洗凝胶顶部表面，滤纸吸干玻璃板中水分，配制浓缩胶加入玻璃板中，将梳子插入玻璃板中，待浓缩胶凝胶，拔出梳子；(2)预电泳：配胶完成后将凝胶板固定在电泳装置中，电泳槽中加入1×SDS电泳缓冲液，预电泳10min；(3)蛋白样品上样并电泳：将准备好的各组待测蛋白样品按顺序加入到浓缩胶的样品孔中，在待测蛋白样品两侧加入Marker，打开电源，调节电压至60V，待溴酚蓝染料从浓缩胶跑至分离胶时，将电压调至120V，直至溴酚蓝染料跑至分离胶底，结束电泳；(4)转膜：电泳结束，取出凝胶板，掀开一侧玻璃板，切割除去上层浓缩胶和底部含溴酚蓝染料的凝胶，根据切割凝胶面积大小裁剪PVDF膜，浸泡在甲醇中，准备转膜三明治结构，浸泡在转膜液中，将凝胶和PVDF膜按顺序放置在三明治结构中，放置过程中不能有气泡产生，夹紧转置于转膜槽中，转移到电泳槽，调节电压至100V，电泳90min，转膜过程中电泳槽放置于碎冰中；(5)清洗：取出PVDF膜浸泡在1×TBST中，置于摇床上清洗，清洗3次，每次10min；(6)封闭：将PVDF膜浸泡在1×TBST配制的脱脂牛奶中，摇床上封闭1h；(7)孵育一抗：根据待测蛋白分子量大小，裁剪对应的蛋白条带，放入稀释好的一抗中，置于摇床上4℃过夜；(8)清洗：取出PVDF膜浸泡在1×TBST中，置于摇床上清洗，清洗3次，每次10min；(9)孵育二抗：根据一抗选择对应的二抗，取出PVDF膜浸泡在二抗中，摇床上室温孵育1h；(10)清洗：取出PVDF膜浸泡在1×TBST中，置于摇床上清洗，清洗3次，每次10min；(11)显影：按试剂盒要求配制显影液，混匀，滴在PVDF膜上，避光孵育，用化学发光图像分析系统进行显影。
结果：
1、栀子苷对JAK2 V617F突变小鼠血液学的影响
如表1所示，与正常对照组比较，模型对照组血中WBC、RBC、HGB、HCT均显著升高(P≤0.01)；与模型对照组比较，鲁索替尼磷酸盐组、栀子苷中、高剂量组血中WBC、RBC、HGB、HCT均显著降低(P≤0.05，P≤0.01)，栀子苷低剂量组血中RBC、HCT均显著降低(P≤0.01)。与栀子苷高剂量组比较，栀子苷+Compound C血中WBC、RBC、HGB、HCT均显著升高(P≤0.05，P≤0.01)。上述结果表明，栀子苷能明显降低JAK2 V617F突变小鼠血液学WBC、RBC、HGB、HCT含量，加入Compound C后，血中WBC、RBC、HGB、HCT均显著升高，提示Compound C可能会影响JAK2 V617F突变小鼠血液学指标变化。
I：表1JAK2 V617F突变小鼠血液学指标检测(n＝6)
注：与正常对照组相比﹟﹟P≤0.01；与模型对照组相比*P≤0.05，**P≤0.01；与栀子苷高剂量组相比+P≤0.05，++P≤0.01。
2、栀子苷对JAK2 V617F突变小鼠体重、脾脏重量、脾脏指数的影响
如表2所示，与正常对照组比较，模型对照组脾脏重量、脾脏指数均显著增加(P≤0.01)，体重显著降低(P≤0.01)；与模型对照组比较，鲁索替尼磷酸盐组、栀子苷中、高剂量组脾脏重量、脾脏指数均显著减少(P≤0.05，P≤0.01)，体重显著增加(P≤0.05，P≤0.01)，栀子苷低剂量组脾脏指数显著降低(P≤0.01)。与栀子苷高剂量组比较，栀子苷+CompoundC脾脏重量、脾脏指数均显著增加(P≤0.01)，体重显著降低(P≤0.01)。上述结果表明，栀子苷能明显降低JAK2 V617F突变小鼠脾脏指数，增加小鼠体重。
II：表2 JAK2 V617F突变小鼠体重、脾脏、脾指数检测结果(n＝6)
注：与正常对照组相比﹟﹟P≤0.01；与模型对照组相比*P≤0.05，**P≤0.01；与栀子苷高剂量组相比++P≤0.01
III：JAK2 V617F突变小鼠模型脾脏图片，见图1。
3、栀子苷对JAK2 V617F突变小鼠骨髓的影响
如表3所示，与正常对照组比较，模型对照组粒细胞、粒红比值均显著减少(P≤0.01)，红细胞数量显著增加(P≤0.01)；与模型对照组比较，鲁索替尼磷酸盐组、栀子苷中、高剂量组粒细胞、粒红比值均显著增加(P≤0.05，P≤0.01)，红细胞数量显著减少(P≤0.01)，栀子苷低剂量组红细胞数量显著减少(P≤0.01)。与栀子苷高剂量组比较，栀子苷+Compound C粒细胞、粒红比值均显著减少(P≤0.01)，红细胞数量显著增加(P≤0.01)。上述结果表明，栀子苷能明显减少JAK2 V617F突变小鼠骨髓红细胞数量，增加粒细胞和粒红比值。
IV：表3 JAK2 V617F突变小鼠骨髓中有核细胞计数(n＝6)
注：与正常对照组相比﹟﹟P≤0.01；与模型对照组相比*P≤0.05，**P≤0.01；与栀子苷高剂量组相比+P≤0.05，++P≤0.01。
4、栀子苷对JAK2 V617F突变小鼠骨髓JAK2 V617F突变基因载量的影响
如表4所示，与正常对照组比较，模型对照组骨髓中JAK2 V617F突变基因载量显著增加(P≤0.01)；与模型对照组比较，鲁索替尼磷酸盐组、栀子苷低、中、高剂量组骨髓中JAK2 V617F突变基因载量均显著减少(P≤0.05，P≤0.01)。与栀子苷高剂量组比较，栀子苷+Compound C骨髓中JAK2 V617F突变基因载量显著增加(P≤0.01)。上述结果表明，栀子苷能明显减少JAK2 V617F突变小鼠骨髓中JAK2 V617F突变基因载量，加入Compound C，栀子苷+Compound C组小鼠骨髓中JAK2 V617F突变基因载量显著增加，进一步证实MPN小鼠JAK2V617F突变基因与AMPK蛋白表达有关。
V：表4 JAK2 V617F突变小鼠骨髓中JAK2 V617F突变基因载量(n＝6)
注：与正常对照组相比﹟﹟P≤0.01；与模型对照组相比*P≤0.05，**P≤0.01；与栀子苷高剂量组相比++P≤0.01。
5、栀子苷对JAK2 V617F突变小鼠脾脏组织纤维化的影响
正常对照组脾脏组织中未见明显网状纤维、胶原纤维增生；模型对照组脾脏组织可见中度至重度网状纤维、胶原纤维增生；鲁索替尼磷酸盐组可见轻度网状纤维、胶原纤维增生，栀子苷低剂量组可见中度网状纤维、胶原纤维增生、栀子苷中剂量组可见轻度网状纤维、胶原纤维增生、栀子苷高剂量组可见轻度网状纤维、胶原纤维增生。上述结果表明，栀子苷能显著减轻JAK2 V617F突变小鼠脾脏纤维化程度。
VI：JAK2 V617F突变小鼠脾脏组织病理图片，见图2。
6、栀子苷对JAK2 V617F突变小鼠脾脏组织蛋白表达的影响
与正常对照组比较，模型对照组脾脏组织AMPK蛋白表达量显著降低(P≤0.01)，p-STAT3蛋白表达量显著升高(P≤0.01)；与模型对照组比较，鲁索替尼磷酸盐组p-STAT3、STAT3蛋白表达量均显著降低(P≤0.05，P≤0.01)，栀子苷低剂量组AMPK蛋白表达量显著升高(P≤0.01)，STAT3蛋白表达量显著降低(P≤0.05)，栀子苷中剂量组p-AMPK、AMPK蛋白表达量均显著升高(P≤0.05，P≤0.01)，栀子苷高剂量组p-AMPK蛋白表达量显著升高(P≤0.01)，p-STAT3蛋白表达量显著降低(P≤0.01)。与栀子苷高剂量组比较，栀子苷+CompoundC p-AMPK蛋白表达量显著减少(P≤0.01)，p-STAT3、STAT3蛋白表达量均显著升高(P≤0.05，P≤0.01)。上述结果表明，栀子苷能上调MPN小鼠脾脏中AMPK和p-AMPK蛋白的表达，抑制STAT3和p-STAT3蛋白表达，加入Compound C后，能抑制脾脏中p-AMPK蛋白表达，上调p-STAT3、STAT3蛋白表达，提示Compound C能抑制AMPK/STAT3信号通路。
VII：JAK2 V617F突变小鼠脾脏组织中AMPK和p-AMPK、STAT3和p-STAT3蛋白表达情况，见图3、图4。
实施例2：栀子苷对骨髓增殖性肿瘤体外细胞模型的影响
1、细胞模型的建立：将小鼠原B细胞(Ba/F3)用含10％胎牛血清(FBS)和10ng/mL白介素3(IL-3)的1640完全培养基于37℃，5％CO2条件下的培养箱内培养至对数生长期，用无血清1640培养基制备密度为5×105/mL的Ba/F3细胞悬液，取1mL/孔加入6孔板中，用无血清培养基将含突变基因的慢病毒载体(pCDH-CMV-MCS-COpGFP-T2A-Puro-JAK-V617F和pCDH-CMV-EPOR(human)-EF1-CopGFP-T2A-Puro)稀释为浓度1×108TU/mL，取10μL/孔加入6孔板中，混匀，继续培养，空白对照组加入1mL1640完全培养基。感染12h后用含10％FBS的1640完全培养基换液，保持细胞正常生长及活性，感染72h，荧光表达丰度较高时，用显微镜观察，感染效率在80％左右时，即可进行后续实验。
2、细胞活性的检测：将Ba/F3 JAK2 V617F(2×104个/孔)和HEL细胞(4×104个/孔)分别接种于96孔板中，按上述细胞分组及处理，每组设置6个平行复孔并给予相应处理，在37℃，5％CO2条件下的培养箱内培养0h、24h、48h和72h，培养结束后加入10μL CCK-8溶液，培养4h，取出96孔板，置于酶标仪上，震荡15s，然后在450nm下测定OD值，检测细胞增殖情况。
3、蛋白样品制备：分别收集各组处理48h后的细胞，0.9％氯化钠注射液洗涤细胞3次，加入300μL细胞裂解液(RIPA：PMSF＝100：1)，置于冰上裂解30min(裂解期间反复吹打混匀)，使细胞完全裂解。裂解完成后，4℃，12000rpm/min，离心10min，提取上清液即为细胞总蛋白，-80℃保存。
4、体外试验
(1)采用含EPOR和JAK2 V617F突变基因的慢病毒感染小鼠原B细胞(Ba/F3)，构建MPN体外细胞增殖模型Ba/F3 JAK2 V617F细胞，人红白细胞白血病细胞(HEL)作为对照。两种细胞分别设置模型/正常对照组和3个栀子苷剂量组，栀子苷处理48h后，CCK8检测各组细胞活性，分别计算栀子苷作用于Ba/F3 JAK2 V617F细胞和HEL细胞的IC50值。
(2)取IC50值1倍、1/2倍、1/4倍作为栀子苷高、中、低剂量组。将造模成功的Ba/F3JAK2 V617F细胞分为模型对照组、栀子苷低、中、高剂量组(5μM、10μM、20μM)，另设正常Ba/F3细胞为正常对照组；HEL细胞分为正常对照组、栀子苷低、中、高剂量组(12.5μM、25μM、50μM)。各组细胞给予相应药物处理后分别培养0h、24h、48h和72h，CCK8检测各组细胞各个时间段的细胞活性。
(3)将造模成功的Ba/F3 JAK2 V617F细胞分为模型对照组，鲁索替尼磷酸盐组(300nM)，栀子苷组(20μM)，栀子苷+Compound C(20μM+1μM)组，另设正常Ba/F3细胞为正常对照组；HEL细胞分为正常对照组、鲁索替尼磷酸盐组(300nM)，栀子苷组(50μM)，栀子苷+Compound C组(50μM+1μM)。各组细胞给予相应药物处理后48h，CCK8检测各组细胞活性。
(4)将造模成功的Ba/F3 JAK2 V617F细胞分为模型对照组、鲁索替尼磷酸盐组(300nM)、栀子苷低、中、高剂量组(5μM、10μM、20μM)、栀子苷+Compound C(20μM+1μM)组，另设正常Ba/F3细胞为正常对照组；HEL细胞分为模型对照组、鲁索替尼磷酸盐组(300nM)、栀子苷低、中、高剂量组(5μM、10μM、20μM)、栀子苷+Compound C(20μM+1μM)组，另设正常HEL细胞为正常对照组。Western Blot检测栀子苷处理48h后各组细胞AMPK、p-AMPK、STAT3、p-STAT3蛋白表达情况。
结果：
1、栀子苷对Ba/F3 JAK2 V617F和HEL细胞活性的影响
(1)经不同浓度栀子苷处理Ba/F3 JAK2 V617F细胞，人红白细胞白血病细胞48h后，采用CCK8测得细胞活性，栀子苷作用于Ba/F3 JAK2 V617F细胞和HEL细胞的IC50值分别为20μM、50μM。与正常对照组比较，处理24h、48h、72h后栀子苷低、中、高剂量组Ba/F3 JAK2V617F和HEL细胞活性均显著降低(P≤0.05，P≤0.01)，处理前栀子苷中、高剂量组HEL细胞活性均显著降低(P≤0.01)，处理前栀子苷高剂量组Ba/F3JAK2V617F细胞活性显著降低(P≤0.05)。
(2)与正常对照组比较，模型对照组Ba/F3 JAK2V617F细胞活性增加(P≤0.01)；与模型对照组比较，鲁索替尼磷酸盐组(300nM)、栀子苷组(20μM)Ba/F3 JAK2 V617F细胞活性显著降低(P≤0.01)。与正常对照组比较，鲁索替尼磷酸盐组(300nM)、栀子苷组(50μM)HEL细胞活性均显著降低(P≤0.01)。与栀子苷组(20μM)比较，栀子苷+Compound C(20μM+1μM)组Ba/F3 JAK2 V617F细胞活性增加(P≤0.01)；与栀子苷组(50μM)比较，栀子苷+CompoundC(50μM+1μM)组HEL细胞活性增加(P≤0.01)。
I：栀子苷对Ba/F3 JAK2 V617F和HEL细胞活性的影响，见图5。
2、栀子苷对Ba/F3 JAK2V617F细胞中AMPK、p-AMPK、STAT3和p-STAT3蛋白表达的影响
与正常对照组比较，模型对照组Ba/F3 JAK2 V617F细胞中p-AMPK蛋白表达量显著降低(P≤0.01)，p-STAT3蛋白表达量显著升高(P≤0.01)；与模型对照组比较，鲁索替尼磷酸盐组、栀子苷低、中、高剂量组Ba/F3 JAK2 V617F细胞中p-AMPK蛋白表达量显著升高(P≤0.01)，鲁索替尼磷酸盐组、栀子苷低、高剂量组p-STAT3蛋白表达量显著降低(P≤0.01)。与栀子苷高剂量组比较，栀子苷+Compound C组Ba/F3 JAK2V617F细胞中p-STAT3、STAT3蛋白表达量均显著升高(P≤0.01)。上述结果表明，栀子苷能上调Ba/F3JAK2 V617F细胞中p-AMPK蛋白的表达，抑制p-STAT3蛋白表达，加入Compound C，能抑制Ba/F3 JAK2 V617F细胞中p-AMPK蛋白的表达，进而上调STAT3蛋白表达。
II：Ba/F3 JAK2 V617F细胞中AMPK和p-AMPK、STAT3和p-STAT3蛋白表达情况，见图6、图7。
2、栀子苷对HEL细胞中AMPK、p-AMPK、STAT3和p-STAT3蛋白表达的影响
与正常对照组比较，模型对照组HEL细胞中p-AMPK蛋白表达量显著升高(P≤0.01)，STAT3蛋白表达量显著降低(P≤0.01)；与模型对照组比较，鲁索替尼磷酸盐组、栀子苷低、中、高剂量组HEL细胞中p-AMPK蛋白表达量显著升高(P≤0.01)，STAT3蛋白表达量均显著降低(P≤0.05，P≤0.01)，栀子苷中、高剂量组HEL细胞中p-STAT3蛋白表达量显著降低(P≤0.01)。与栀子苷高剂量组比较，栀子苷+Compound C组HEL细胞中p-STAT3、STAT3蛋白表达量均显著升高(P≤0.01)，p-AMPK蛋白表达量显著降低(P≤0.01)。上述结果表明，栀子苷能上调HEL细胞中p-AMPK蛋白的表达，抑制p-STAT3、STAT3蛋白表达，加入Compound C，能抑制HEL细胞中p-AMPK蛋白的表达，进而上调STAT3蛋白表达。
III：HEL细胞中AMPK和p-AMPK、STAT3和p-STAT3蛋白表达情况，见图8、图9。
以上所述为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围不局限于此，任何熟悉技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (4)
1.栀子苷在制备治疗骨髓增殖性肿瘤药物中的应用。
2.一种药物组合物在制备治疗骨髓增殖性肿瘤药物中的应用，其特征是，所述药物组合物中包含栀子苷。
3.根据权利要求1或2所述应用，其特征是，所述骨髓增殖性肿瘤包括真性红细胞增多症、原发性血小板增多症和原发性骨髓纤维化。
4.根据权利要求2所述应用，其特征是，所述药物组合物被制成片剂、胶囊、口服液、注射剂、粉剂、膏剂或外用药液。
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Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101212963A (zh) * | 2005-07-22 | 2008-07-02 | 四川九章生物化工科技发展有限公司 | 绿原酸在制备具有增加骨髓细胞功效的药物中的用途 |
| WO2008150388A1 (en) * | 2007-05-23 | 2008-12-11 | Rhode Island Hospital | Inhibiton of mitochnodrial uncoupling protein |
| CN105492011A (zh) * | 2013-04-08 | 2016-04-13 | 丹尼斯·M·布朗 | 不理想给药化学化合物的治疗增效 |
| CN107400128A (zh) * | 2017-07-27 | 2017-11-28 | 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室 | 拟单萜吲哚生物碱及其制备方法和应用 |
| CN113476466A (zh) * | 2021-07-14 | 2021-10-08 | 暨南大学 | 黄芩苷在制备抗慢性粒细胞白血病耐药性药物中的应用 |
| CN113975327A (zh) * | 2021-12-10 | 2022-01-28 | 山东汉方制药有限公司 | 复方黄柏液涂剂在制备治疗骨髓增生性肿瘤药物中的应用 |
| WO2022228323A1 (zh) * | 2021-04-26 | 2022-11-03 | 中南大学湘雅二医院 | Ly3009120在制备治疗骨髓增殖性肿瘤的药物中的应用 |
| CN117257810A (zh) * | 2023-09-22 | 2023-12-22 | 湖南普瑞玛药物研究中心有限公司 | 一种咪唑吡啶衍生物在制备治疗或预防骨髓增殖性肿瘤药物中的应用 |
-
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Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101212963A (zh) * | 2005-07-22 | 2008-07-02 | 四川九章生物化工科技发展有限公司 | 绿原酸在制备具有增加骨髓细胞功效的药物中的用途 |
| WO2008150388A1 (en) * | 2007-05-23 | 2008-12-11 | Rhode Island Hospital | Inhibiton of mitochnodrial uncoupling protein |
| CN105492011A (zh) * | 2013-04-08 | 2016-04-13 | 丹尼斯·M·布朗 | 不理想给药化学化合物的治疗增效 |
| CN107400128A (zh) * | 2017-07-27 | 2017-11-28 | 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室 | 拟单萜吲哚生物碱及其制备方法和应用 |
| WO2022228323A1 (zh) * | 2021-04-26 | 2022-11-03 | 中南大学湘雅二医院 | Ly3009120在制备治疗骨髓增殖性肿瘤的药物中的应用 |
| CN113476466A (zh) * | 2021-07-14 | 2021-10-08 | 暨南大学 | 黄芩苷在制备抗慢性粒细胞白血病耐药性药物中的应用 |
| CN113975327A (zh) * | 2021-12-10 | 2022-01-28 | 山东汉方制药有限公司 | 复方黄柏液涂剂在制备治疗骨髓增生性肿瘤药物中的应用 |
| CN117257810A (zh) * | 2023-09-22 | 2023-12-22 | 湖南普瑞玛药物研究中心有限公司 | 一种咪唑吡啶衍生物在制备治疗或预防骨髓增殖性肿瘤药物中的应用 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| FENGTAO LI，等: "Geniposide alleviates diabetic nephropathy of mice through AMPK/SIRT1/NF-κB pathway", 《EUR J PHARMACOL》, vol. 886, 4 August 2020 (2020-08-04), pages 1 - 10, XP086288701, DOI: 10.1016/j.ejphar.2020.173449 * |
| HOANG ANH，等: "Chemical constituents of Oldenlandia pinifolia and their antiproliferative activities", 《NATURAL PRODUCT RESEARCH 》, vol. 33, no. 06, 30 June 2019 (2019-06-30), pages 796 - 802 * |
| MIN JEE JO，等: "Genipin induces mitochondrial dysfunction and apoptosis via downregulation of Stat3/mcl-1 pathway in gastric cancer", 《BMC CANCER》, vol. 19, no. 01, 27 July 2019 (2019-07-27), pages 1 - 12 * |
| 冯璐瑶，等: "骨髓增殖性肿瘤动物模型和药物研发进展", 《中国新药杂志》, vol. 31, no. 05, 31 May 2022 (2022-05-31), pages 448 - 454 * |
| 李雅琳，等: "栀子苷、黄芩苷、华蟾酥毒基对体外培养的B16恶性黑素瘤细胞细胞增殖的抑制作用", 《中国中西医结合皮肤性病学杂志》, vol. 6, no. 4, 30 June 2007 (2007-06-30), pages 206 - 209 * |
| 盛国良，等: "黄连解毒汤中黄酮成分逆转K562/ADM多药耐药的实验观察", 《中国实验方剂学杂志》, vol. 18, no. 24, 31 December 2012 (2012-12-31), pages 217 - 219 * |
| 赵莉，等: "清热消炎宁片治疗冠状病毒感染的作用及机制研究", 《中草药》, vol. 54, no. 02, 31 January 2023 (2023-01-31), pages 579 - 585 * |
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