CN117143173A - 一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及活性肽提取技术领域，公开了一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，将动物眼球进行冷冻处理，并在低温条件下快速研磨成粉末状，以保持活性肽的完整性和稳定性，制备一种特殊的提取剂，该提取剂由多种天然有机溶剂和表面活性剂组成，其中成分和比例经过精确调配，以提高活性肽的提取效率和纯度，动物眼球粉末与特殊提取剂充分混合，并搅拌和震荡，特殊提取剂与动物眼球中的小分子活性肽发生选择性结合，将混合物进行离心和过滤，采用反相高效液相色谱的纯化技术对提取物进行纯化。相比传统方法具有更高的效率和纯度，特殊的提取剂能够与动物眼球中的小分子活性肽发生选择性结合，从而提供更优质的活性肽产品。
Description
技术领域
本发明涉及活性肽提取技术领域，具体为一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法。
背景技术
活性肽，是一千多种肽的总称（如大豆肽，深海鱼皮肽，海参肽等是活性肽中的一种）。肽是两个或两个以上的氨基酸以肽键相连的化合物，在人体内起重要生理作用，发挥生理功能。具有活性的多肽称为活性肽，又称生物活性肽或生物活性多肽。目前，动物眼球中的小分子活性肽被广泛认为具有重要的生物活性和医药应用潜力。
然而，现有的提取方法存在许多技术难题，提取效率低，操作步骤复杂，活性肽的提取数量较少，并且得到的活性肽纯度和稳定性不足。为此，需要设计相应的技术方案给予解决。
发明内容
（一）解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，解决了提取效率低，操作步骤复杂，活性肽的提取数量较少，并且得到的活性肽纯度和稳定性不足的技术问题。
（二）技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，方法步骤包括如下：
S1、冷冻研磨预处理：将动物眼球进行冷冻处理，并在低温条件下快速研磨成粉末状，以保持活性肽的完整性和稳定性；
S2、特殊提取剂的制备：制备一种特殊的提取剂，该提取剂由多种天然有机溶剂和表面活性剂组成，其中成分和比例经过精确调配，以提高活性肽的提取效率和纯度；
S3、提取过程：将S1中制备的动物眼球粉末与S2中的特殊提取剂充分混合，并在适当的温度和pH条件下进行搅拌和震荡，特殊提取剂与动物眼球中的小分子活性肽发生选择性结合，并将其从组织中释放；
S4、分离过滤：经过一定时间的提取，将混合物进行离心和过滤，以去除残留的固体颗粒和杂质；
S5、对提取物纯化：采用反相高效液相色谱的纯化技术对提取物进行纯化，以获得高纯度的小分子活性肽。
优选的，步骤S1中，所述冷冻处理采用液氮罐进行液氮冷冻处理，冷冻处理温度控制在-190℃至-200℃之间；
所述低温研磨采用低温研磨仪进行低温研磨，温度控制在-80℃至-120℃之间，并可在研磨过程中保持样品的低温状态。
优选的，步骤S2中，所述天然有机溶剂包括有乙醇、丙酮和甲醇，所述表面活性剂包括有十二烷基硫酸钠、三十烷基磺酸钠和辛基糖苷，其中按重量分数为：乙醇20-40份，丙酮10-30份，甲醇5-15份，十二烷基硫酸钠1-5份，三十烷基磺酸钠0.5-2份，辛基糖苷0.1-1份。
优选的，步骤S3中，所述混合装置采用震荡器作为实验室设备进行，搅拌和震荡的温度控制在4℃左右的低温条件下进行；pH条件控制在6-8之间；
所述震荡器由一个坚固的外壳构成，内部包含电机、震荡平台和控制面板，所述震荡器内部配备一个电机，通过电源供电，驱动震荡平台进行振动；
所述震荡平台的表面较为平整，用于放置容器，包括有烧瓶或试管，由不锈钢的耐腐蚀材料制成；
所述震荡器上配备有控制面板，用于设置和调整振动的参数，包括有振动频率、振幅和计时器，控制面板还包括显示屏，显示当前的操作状态和参数设置。
优选的，步骤S4中，所述离心设备采用高速离心机进行离心操作，高速离心机通过产生高速旋转的离心力，将液体中的固体颗粒沉淀到管底；
所述过滤设备在离心操作后，使用过滤设备进一步去除残留的固体颗粒和杂质，所述过滤设备中过滤器的孔径为0.2微米至0.45微米的滤膜。
优选的，步骤S5中，对提取物进行纯化的方法步骤包括以下步骤：
准备样品：将提取物进行适当的预处理，包括去除悬浮物、固体颗粒或杂质，使用离心、过滤或其他方法进行初步清除；
选择纯化技术：根据样品的特性和纯化需求，选择反相高效液相色谱的纯化技术，实现目标化合物与杂质的有效分离；
设计分离方案：根据所选择的纯化技术，设计分离方案，确定合适的流动相和梯度条件，通过试验和优化来确定最佳的分离条件；
样品加载：将预处理后的提取物样品加载到纯化系统中，根据纯化技术的不同，采用填充柱、载样器或其他适当的装置进行样品的加载；
进行纯化：根据设计的分离方案，进行纯化操作，确保流动相的稳定性和流速的控制，根据所选择的纯化技术，需要进行多次循环或梯度洗脱来获得目标化合物；
监测和收集：通过检测器监测流出的溶液，以监控目标化合物的峰，根据所需纯化的目标，选择根据吸光度、荧光强度或其他检测信号来进行定量监测，在目标化合物的峰出现时，进行样品收集，以分数收集或时间窗口收集的方式；
分析和验证：对纯化后的样品进行分析和验证，确保纯化后的样品符合预期的纯度和质量要求。
优选的，步骤S3中，所述提取过程中引入超声波辅助脉冲提取，具体步骤如下：
设备准备：准备一个超声波装置，用于产生高频率的超声波脉冲，确保设备的功率和频率可调节；
提取条件优化：在混合物的搅拌和震荡过程中，通过超声波辅助脉冲提取，优化超声波的功率、频率和脉冲时间；
超声波辅助脉冲提取：将混合物置于超声波装置中，设定适当的超声波参数，并施加脉冲；
分离和过滤：经过一定时间的超声波辅助脉冲提取，将混合物进行离心和过滤；
对提取物纯化：采用反相高效液相色谱的纯化技术对提取物进行纯化。
优选的，步骤S3中，在提取过程中引入分子印迹技术，以增强对小分子活性肽的选择性提取，具体步骤如下：
分子印迹材料制备：根据目标小分子活性肽的结构特征，设计并合成分子印迹聚合物；
分子印迹固相萃取：将分子印迹聚合物与提取物混合，并进行固相萃取，在适当的温度和pH条件下，目标活性肽与分子印迹聚合物中的识别空腔发生选择性结合；
脱附和洗脱：通过调节脱附条件，将目标活性肽从分子印迹聚合物中脱附和洗脱；
分离和过滤：经过分子印迹固相萃取后，将混合物进行离心和过滤，以去除残留的固体颗粒和杂质；
对提取物纯化：采用反相高效液相色谱的纯化技术对提取物进行纯化，以获得高纯度的小分子活性肽。
优选的，步骤S4中，提取时间控制在30-120min，提取过程中，间隔30min进行分析评估目标活性肽的提取效率。
优选的，所述动物眼球包括但不限于哺乳动物眼球、鱼类眼球、虾类眼球、昆虫眼球和脊椎动物眼球。
（三）有益效果
与现有技术相比，本发明的有益效果：相比传统方法具有更高的效率和纯度，特殊的提取剂能够与动物眼球中的小分子活性肽发生选择性结合，从而提高提取效果，可以获得高纯度的动物眼球中的小分子活性肽，为后续的生物学研究和医药应用提供了优质的原料，实现了对动物眼球中小分子活性肽的高效提取，克服了现有技术的局限性，具有更高的提取效率、更简化的操作步骤和更好的活性肽保护效果，能够提取到动物眼球中更多的小分子活性肽，并保持其完整性和生物活性，通过优化的提取剂组成和比例，能够提高活性肽的纯度和稳定性，从而提供更优质的活性肽产品。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例提供一种技术方案：一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，方法步骤包括如下：
S1、冷冻研磨预处理：将动物眼球进行冷冻处理，并在低温条件下快速研磨成粉末状，以保持活性肽的完整性和稳定性；
S2、特殊提取剂的制备：制备一种特殊的提取剂，该提取剂由多种天然有机溶剂和表面活性剂组成，其中成分和比例经过精确调配，以提高活性肽的提取效率和纯度；
S3、提取过程：将S1中制备的动物眼球粉末与S2中的特殊提取剂充分混合，并在适当的温度和pH条件下进行搅拌和震荡，特殊提取剂与动物眼球中的小分子活性肽发生选择性结合，并将其从组织中释放；
S4、分离过滤：经过一定时间的提取，将混合物进行离心和过滤，以去除残留的固体颗粒和杂质；
S5、对提取物纯化：采用反相高效液相色谱的纯化技术对提取物进行纯化，以获得高纯度的小分子活性肽。
进一步改进地，步骤S1中，所述冷冻处理采用液氮罐进行液氮冷冻处理，有效地冻结眼球组织并保持活性肽的完整性和稳定性，冷冻处理温度控制在-190℃至-200℃之间，以确保足够低的温度来冻结眼球组织；
所述低温研磨采用低温研磨仪进行低温研磨，温度控制在-80℃至-120℃之间，并可在研磨过程中保持样品的低温状态，以避免活性肽的降解和失活。
进一步改进地，步骤S2中，所述天然有机溶剂包括有乙醇、丙酮和甲醇，所述表面活性剂包括有十二烷基硫酸钠、三十烷基磺酸钠和辛基糖苷，其中按重量分数为：乙醇20-40份，丙酮10-30份，甲醇5-15份，十二烷基硫酸钠1-5份，三十烷基磺酸钠0.5-2份，辛基糖苷0.1-1份。
乙醇（酒精）具有良好的溶解性和提取能力；丙酮是一种极性有机溶剂，常用于提取和溶解多种化合物；甲醇是一种极性有机溶剂，对一些活性肽具有良好的提取效果。
十二烷基硫酸钠（SDS）是一种常用的阴离子表面活性剂，具有良好的溶解性和分散性；三十烷基磺酸钠（Triton X-100）是一种非离子表面活性剂，常用于提取和溶解脂质类化合物；辛基糖苷（Octyl glucoside）是一种非离子表面活性剂，常用于提取膜蛋白和疏水性化合物。
进一步改进地，步骤S3中，所述混合装置采用震荡器作为实验室设备进行，搅拌和震荡的温度控制在4℃左右的低温条件下进行，以保持活性肽的稳定性；pH条件控制在6-8之间，具有较好的稳定性和溶解性；
所述震荡器由一个坚固的外壳构成，内部包含电机、震荡平台和控制面板，所述震荡器内部配备一个电机，通过电源供电，驱动震荡平台进行振动，电机通常具有可调速功能，允许根据需要调整震荡的频率和振幅；
所述震荡平台的表面较为平整，用于放置容器，包括有烧瓶或试管，由不锈钢的耐腐蚀材料制成，以确保耐用性和易于清洁；
所述震荡器上配备有控制面板，用于设置和调整振动的参数，包括有振动频率、振幅和计时器，控制面板还包括显示屏，显示当前的操作状态和参数设置。
进一步改进地，步骤S4中，所述离心设备采用高速离心机进行离心操作，高速离心机通过产生高速旋转的离心力，将液体中的固体颗粒沉淀到管底，以便分离清液；
所述过滤设备在离心操作后，使用过滤设备进一步去除残留的固体颗粒和杂质，所述过滤设备中过滤器的孔径为0.2微米至0.45微米的滤膜。
确保筛网孔径足够小以去除固体颗粒和杂质，同时要避免筛网孔径过小导致过滤阻力增加和样品损失。
进一步改进地，步骤S5中，对提取物进行纯化的方法步骤包括以下步骤：
准备样品：将提取物进行适当的预处理，包括去除悬浮物、固体颗粒或杂质，使用离心、过滤或其他方法进行初步清除；
选择纯化技术：根据样品的特性和纯化需求，选择反相高效液相色谱（RP-HPLC）的纯化技术，实现目标化合物与杂质的有效分离；
设计分离方案：根据所选择的纯化技术，设计分离方案，确定合适的流动相和梯度条件，以实现目标化合物的分离和纯化，通过试验和优化来确定最佳的分离条件；
样品加载：将预处理后的提取物样品加载到纯化系统中，根据纯化技术的不同，采用填充柱、载样器或其他适当的装置进行样品的加载；
进行纯化：根据设计的分离方案，进行纯化操作，确保流动相的稳定性和流速的控制，以保证有效的分离和纯化效果，根据所选择的纯化技术，可能需要进行多次循环或梯度洗脱来获得目标化合物；
监测和收集：通过检测器监测流出的溶液，以监控目标化合物的峰，根据所需纯化的目标，选择根据吸光度、荧光强度或其他检测信号来进行定量监测，在目标化合物的峰出现时，进行样品收集，通常是以分数收集或时间窗口收集的方式；
分析和验证：对纯化后的样品进行分析和验证，确保纯化后的样品符合预期的纯度和质量要求。
进一步改进地，步骤S3中，所述提取过程中引入超声波辅助脉冲提取，具体步骤如下：
设备准备：准备一个超声波装置，用于产生高频率的超声波脉冲，确保设备的功率和频率可调节；
提取条件优化：在混合物的搅拌和震荡过程中，通过超声波辅助脉冲提取，优化超声波的功率、频率和脉冲时间，以提高小分子活性肽的释放和提取效率；
超声波辅助脉冲提取：将混合物置于超声波装置中，设定适当的超声波参数，并施加脉冲，超声波的作用将引起组织细胞的破裂和破碎，促进小分子活性肽的释放；
分离和过滤：经过一定时间的超声波辅助脉冲提取，将混合物进行离心和过滤，以去除残留的固体颗粒和杂质；
对提取物纯化：采用反相高效液相色谱的纯化技术对提取物进行纯化，以获得高纯度的小分子活性肽。
该方法在于引入超声波辅助脉冲提取步骤，在提取过程中利用超声波的机械作用，促进动物眼球中小分子活性肽的释放；超声波脉冲可以破坏细胞结构，增加细胞膜通透性，从而加速活性肽的释放；可以提高提取效率和纯度，同时减少提取时间。
进一步改进地，步骤S3中，在提取过程中引入分子印迹技术，以增强对小分子活性肽的选择性提取，具体步骤如下：
分子印迹材料制备：根据目标小分子活性肽的结构特征，设计并合成分子印迹聚合物，该聚合物能与目标活性肽形成特异的识别空腔；
分子印迹固相萃取：将分子印迹聚合物与提取物混合，并进行固相萃取，在适当的温度和pH条件下，目标活性肽与分子印迹聚合物中的识别空腔发生选择性结合，从而实现目标活性肽的高效提取；
脱附和洗脱：通过调节脱附条件，将目标活性肽从分子印迹聚合物中脱附和洗脱，可以使用特定的溶剂或梯度洗脱来实现；
分离和过滤：经过分子印迹固相萃取后，将混合物进行离心和过滤，以去除残留的固体颗粒和杂质；
对提取物纯化：采用反相高效液相色谱的纯化技术对提取物进行纯化，以获得高纯度的小分子活性肽。
该方法引入分子印迹技术，利用特异的识别空腔与目标活性肽进行选择性结合，从而增强了目标活性肽的提取效率和纯度，分子印迹技术是一种高度特异的分离技术，可以根据目标分子的结构特征定制识别材料，实现高效的选择性分离。
进一步改进地，步骤S4中，提取时间控制在30-120min，提取过程中，间隔30min进行分析评估目标活性肽的提取效率，通过观察提取效果是否随着提取时间的增加而提高，或者是否在某个时间点达到饱和状态，来确定最佳的提取时间。
具体改进地，所述动物眼球包括但不限于哺乳动物眼球、鱼类眼球、虾类眼球、昆虫眼球和脊椎动物眼球。
多样性和复杂性：哺乳动物眼球中含有丰富多样的小分子活性肽，包括生长因子、神经递质、免疫调节肽等；与其他动物眼球相比，哺乳动物眼球中的小分子活性肽种类更为多样，具有更复杂的生物活性；因此，选择哺乳动物眼球作为提取源可以获得更广泛和更具潜力的活性肽。
医学应用潜力：哺乳动物眼球中的小分子活性肽具有许多医学应用潜力，包括治疗眼部疾病、神经退行性疾病和免疫系统相关疾病；这些活性肽可以作为药物或药物候选物，用于开发创新的治疗方法和药物。
生物相似性：哺乳动物眼球中的小分子活性肽更接近人类眼球中的活性肽，具有更高的生物相似性；这对于研究和开发与人类眼球相关的疾病治疗方法非常重要，因为动物眼球中的活性肽可以更好地模拟人体生理和病理状态。
研究工具：哺乳动物眼球中的小分子活性肽可以作为研究工具，在生物学研究中发挥重要作用；通过提取和纯化哺乳动物眼球中的活性肽，可以获得高纯度和高活性的活性肽样品，用于研究其生物学功能、相互作用以及与疾病相关的机制。
因此，选择哺乳动物眼球作为提取源具有丰富的活性肽资源、广泛的医学应用前景、生物相似性和研究工具的优势，为小分子活性肽的提取和应用提供了更多的机会和潜力。
鱼类眼球：鱼类眼球中含有多种生物活性肽，如抗菌肽和生长因子，这些活性肽在鱼类的免疫系统和生长发育中起着重要作用，鱼类眼球提取的活性肽可以用于生物医学研究、药物开发和免疫调节等领域。
虾类眼球：虾类眼球中也含有多种活性肽，如抗菌肽和免疫调节肽，虾类眼球提取的活性肽具有抗菌、抗炎和免疫调节等生物活性，可能具有潜在的药物开发和抗菌治疗应用价值。
昆虫眼球：昆虫眼球中含有多种活性肽，如昆虫抗菌肽和昆虫生长因子，昆虫眼球提取的活性肽具有广泛的生物活性，包括抗菌、免疫调节和生长发育调控等，这些活性肽对于昆虫自身的生存和抵抗外界环境的侵袭起着重要作用，并具有潜在的医学和农业应用价值。
脊椎动物眼球：除了哺乳动物之外，其他脊椎动物的眼球中也含有活性肽，例如，鸟类眼球中含有多种生长因子和免疫调节肽，具有促进生长和修复的作用，爬行动物和两栖动物的眼球中也含有一些特定的活性肽，对于它们的生物学功能和适应性具有重要意义。
总而言之，不同动物眼球中的活性肽种类和功能具有差异，选择适当的动物眼球作为提取源可以根据具体需求和研究目的来确定，每种动物眼球中的活性肽都可能具有特定的生物活性和潜在的应用价值，对于药物开发、生物医学研究和农业领域都具有重要意义。
综述，相比传统方法具有更高的效率和纯度，特殊的提取剂能够与动物眼球中的小分子活性肽发生选择性结合，从而提高提取效果，可以获得高纯度的动物眼球中的小分子活性肽，为后续的生物学研究和医药应用提供了优质的原料，实现了对动物眼球中小分子活性肽的高效提取，克服了现有技术的局限性，具有更高的提取效率、更简化的操作步骤和更好的活性肽保护效果，能够提取到动物眼球中更多的小分子活性肽，并保持其完整性和生物活性，通过优化的提取剂组成和比例，能够提高活性肽的纯度和稳定性，从而提供更优质的活性肽产品。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点,对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (10)
1.一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于，方法步骤包括如下：
S1、冷冻研磨预处理：将动物眼球进行冷冻处理，并在低温条件下快速研磨成粉末状，以保持活性肽的完整性和稳定性；
S2、提取剂的制备：制备一种提取剂，该提取剂由多种天然有机溶剂和表面活性剂组成，其中成分和比例经过精确调配，以提高活性肽的提取效率和纯度；
S3、提取过程：将S1中制备的动物眼球粉末与S2中的提取剂充分混合，并在适当的温度和pH条件下进行搅拌和震荡，提取剂与动物眼球中的小分子活性肽发生选择性结合，并将其从组织中释放；
S4、分离过滤：经过提取，将混合物进行离心和过滤，以去除残留的固体颗粒和杂质；
S5、对提取物纯化：采用反相高效液相色谱的纯化技术对提取物进行纯化，以获得高纯度的小分子活性肽。
2.根据权利要求1所述的一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于：步骤S1中，冷冻处理采用液氮罐进行液氮冷冻处理，冷冻处理温度控制在-190℃至-200℃之间；
低温研磨采用低温研磨仪进行低温研磨，温度控制在-80℃至-120℃之间，并可在研磨过程中保持样品的低温状态。
3.根据权利要求1所述的一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于：步骤S2中，所述天然有机溶剂包括有乙醇、丙酮和甲醇，所述表面活性剂包括有十二烷基硫酸钠、三十烷基磺酸钠和辛基糖苷，其中按重量分数为：乙醇20-40份，丙酮10-30份，甲醇5-15份，十二烷基硫酸钠1-5份，三十烷基磺酸钠0.5-2份，辛基糖苷0.1-1份。
4.根据权利要求1所述的一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于：步骤S3中，混合装置采用震荡器作为实验室设备进行，搅拌和震荡的温度控制在4℃的低温条件下进行；pH条件控制在6-8之间；
所述震荡器由一个坚固的外壳构成，内部包含电机、震荡平台和控制面板，所述震荡器内部配备一个电机，通过电源供电，驱动震荡平台进行振动；
所述震荡平台的表面较为平整，用于放置容器，包括有烧瓶或试管，由不锈钢的耐腐蚀材料制成；
所述震荡器上配备有控制面板，用于设置和调整振动的参数，包括有振动频率、振幅和计时器，控制面板还包括显示屏，显示当前的操作状态和参数设置。
5.根据权利要求1所述的一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于：步骤S4中，离心设备采用高速离心机进行离心操作，高速离心机通过产生高速旋转的离心力，将液体中的固体颗粒沉淀到管底；
过滤设备在离心操作后，使用过滤设备进一步去除残留的固体颗粒和杂质，过滤设备中过滤器的孔径为0.2微米至0.45微米的滤膜。
6.根据权利要求1所述的一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于：步骤S5中，对提取物进行纯化的方法步骤包括以下步骤：
准备样品：将提取物进行适当的预处理，包括去除悬浮物、固体颗粒或杂质，使用离心、过滤或其他方法进行初步清除；
选择纯化技术：根据样品的特性和纯化需求，选择反相高效液相色谱的纯化技术，实现目标化合物与杂质的有效分离；
设计分离方案：根据所选择的纯化技术，设计分离方案，确定合适的流动相和梯度条件，通过试验和优化来确定最佳的分离条件；
样品加载：将预处理后的提取物样品加载到纯化系统中，根据纯化技术的不同，采用填充柱、载样器或其他适当的装置进行样品的加载；
进行纯化：根据设计的分离方案，进行纯化操作，确保流动相的稳定性和流速的控制，根据所选择的纯化技术，需要进行多次循环或梯度洗脱来获得目标化合物；
监测和收集：通过检测器监测流出的溶液，以监控目标化合物的峰，根据所需纯化的目标，选择根据吸光度、荧光强度或其他检测信号来进行定量监测，在目标化合物的峰出现时，进行样品收集，以分数收集或时间窗口收集的方式；
分析和验证：对纯化后的样品进行分析和验证，确保纯化后的样品符合预期的纯度和质量要求。
7.根据权利要求1所述的一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于：步骤S3中，所述提取过程中引入超声波辅助脉冲提取，具体步骤如下：
设备准备：准备一个超声波装置，用于产生高频率的超声波脉冲，确保设备的功率和频率可调节；
提取条件优化：在混合物的搅拌和震荡过程中，通过超声波辅助脉冲提取，优化超声波的功率、频率和脉冲时间；
超声波辅助脉冲提取：将混合物置于超声波装置中，设定适当的超声波参数，并施加脉冲；
分离和过滤：经过超声波辅助脉冲提取，将混合物进行离心和过滤；
对提取物纯化：采用反相高效液相色谱的纯化技术对提取物进行纯化。
8.根据权利要求1所述的一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于：步骤S3中，在提取过程中引入分子印迹技术，以增强对小分子活性肽的选择性提取，具体步骤如下：
分子印迹材料制备：根据目标小分子活性肽的结构特征，设计并合成分子印迹聚合物；
分子印迹固相萃取：将分子印迹聚合物与提取物混合，并进行固相萃取，在适当的温度和pH条件下，目标活性肽与分子印迹聚合物中的识别空腔发生选择性结合；
脱附和洗脱：通过调节脱附条件，将目标活性肽从分子印迹聚合物中脱附和洗脱；
分离和过滤：经过分子印迹固相萃取后，将混合物进行离心和过滤，以去除残留的固体颗粒和杂质；
对提取物纯化：采用反相高效液相色谱的纯化技术对提取物进行纯化，以获得高纯度的小分子活性肽。
9.根据权利要求1所述的一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于：步骤S4中，提取时间控制在30-120min，提取过程中，间隔30min进行分析评估目标活性肽的提取效率。
10.根据权利要求1所述的一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于：所述动物眼球包括但不限于哺乳动物眼球、鱼类眼球、虾类眼球、昆虫眼球和脊椎动物眼球。
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