CN107353335A - 从深海鱼鱼皮中提取胶原蛋白的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了从深海鱼鱼皮中提取胶原蛋白的方法，包括非胶原蛋白的去除、胶原蛋白的提取、胶原蛋白的提纯、雌激素的去除和冷冻干燥。有益效果为：利用深海鱼皮制备的胶原蛋白具有良好的品质，深海鱼排除了人工饲养的可能性，激素的含量较少，再利用高效的MZMIP涂层进行自动化固相微萃取后，雌激素脱除率为99.98%。适用于皮肤松弛、色素沉淀的人群，具有补充胶原蛋白的作用，是优质的胶原蛋白产品。
Description
技术领域
本发明涉及一种技术领域，尤其是涉及从深海鱼鱼皮中提取胶原蛋白的方法。
背景技术
胶原蛋白是一种生物性高分子物质，是一种白色、不透明、无支链的纤维性蛋白质，它可以补充皮肤各层所需的营养，使皮肤中胶原活性增强，对滋润皮肤，延缓衰老、美容、消皱、养发等有一定功效，随着年龄的增长，胶原蛋白会逐渐的流失，随着人们生活水平的提高和饮食结构的改变，以及生活环境的不断变化，伴随而来的皮肤松弛、色素沉淀不断影响着人们的正常生活，并且女性在20 岁时胶原蛋白已经开始流失，胶原蛋白含量逐年下降，25 岁则进入流失的高峰期，40 岁时，含量不到18 岁时的一半，老年人脸上沟沟坎坎的皱纹，正是因为胶原蛋白和水分流失，造成皮肤塌陷。胶原蛋白的流失导致支撑皮肤的胶原肽键和弹力网断裂，其螺旋网状结构随即被破坏，皮肤组织被氧化、萎缩、塌陷，肌肤就会出现干燥、皱纹、松弛无弹性等衰老现象
现有产品中粗加工胶原蛋白存在激素残留，雌激素是一类类固醇小分子物质，包括内源性雌激素和外源性雌激素两大类。雌激素由于人为的非法添加或动物本身的分泌而广泛的存在于食品中，而且能够通过食物链被人体吸收，从而诱发人体的乳腺癌，前列腺癌和卵巢癌等等。痕量的雌激素很难被检测到，这给人们带来了极大的隐患。可见，国内市场胶原蛋白存在着质量不高，产品副作用被低估的问题，因而开发具有良好功能的优质无害胶原蛋白具有重要意义。
现有技术如授权公告号为CN103740793B的中国发明专利，公开了一种生产鱼皮胶原蛋白的方法，它是将冻干的鱼手工剥下鱼皮，或手工分割的鲜鱼皮低温烘干或冻干，鱼皮的水份保持在10-15%，经捶打、揉搓、剪切，鱼肉、鱼鳞、鱼骨等破碎，与鱼皮分离，再风选，变得膨松、色白、柔软；起到了去杂、脱色和脱腥作用，90℃热提取，lcalase2.4L和Neutrase0.8L酶解，脱色除味，5微米孔径滤膜过滤，灭菌、浓缩、喷雾干燥，得到的胶原蛋白，其分子量在1000Da以下多肽含量为93.7%，得率提高40%，还提供了鱼皮精制分离机，为生产的鱼皮胶原蛋白优质纯正的原料，解决了不能规模化、产业化生产的瓶颈问题。本发明的胶原蛋白产率高，分子量小，但是未对鱼肉进行激素脱除，存在潜在健康危害风险。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从深海鱼鱼皮中提取胶原蛋白的方法，提取的胶原蛋白安全无激素、纯度高效果好。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：从深海鱼鱼皮中提取的胶原蛋白的方法包括非胶原蛋白的去除、胶原蛋白的提取、胶原蛋白的提纯、雌激素的去除和冷冻干燥。
非胶原蛋白去除步骤为：将解冻的碎鱼皮分别加入浓度为1.5%~3.5%氯化钠溶液，于5~10℃连续搅拌12~24h，用尼龙纱过滤，得滤液；测滤液中的蛋白质浓度和羟脯氨酸含量，用蒸馏水水洗鱼皮并过滤，重复1~4次。
胶原蛋白提取步骤为：去除杂蛋白的鱼皮分别加入0.4~0.6mol/L醋酸、0.05mol/l~0.1mol/l的柠檬酸进行溶胀，体积比为1：15~20，然后均质3~6min，用1：8~12的水稀释后的酸洗涤均质器，将洗涤液并入均质液中，即得到鱼皮胶原蛋白的酸粗提取液。将酸粗提取液连续搅拌。采用上述方法可避免产生有毒的D型旋光物，保证胶原蛋白的超螺旋结构，保持其生物活性，所得到的胶原蛋白分子量较小，容易被人体组织利用。
胶原蛋白提纯步骤为：在滤液中加入固体氯化钠至进行搅拌盐析，然后冷冻离心4000r/min~7000r/min，离心10~30min，将得到的沉淀复溶于酸中，透析外液为蒸馏水。溶液中的氯化钠可破坏胶原蛋白表面的水化层，使其在水中的溶解度大幅下降，胶原蛋白以沉淀形式从溶液中析出，生物活性未被破坏。先利用胶原蛋白的溶解特性，对胶原蛋白进行提纯，再通过透析去除附着在胶原蛋白表面的氯化钠及其他小分子杂质。对胶原蛋白提纯后再去除激素，能大大降低成本，并能使激素脱除率达到极值。
雌激素的去除步骤为：利用以磁性沸石咪唑酯骨架结构材料为基底合成的一种高效的MZMIP涂层进行自动化固相微萃取微量的雌激素，将胶原蛋白超声10min~25min后利用MZMIP涂层洗脱15~30min；MZMIP涂层表面附着纳米级活性短肽，其氨基酸序列为QSASCTSYYCSKCYTAGCGCYPGKCLHCSR。MZMIP涂层具有大的比表面积，吸附性能优异，同时上述纳米级活性短肽对雌激素有特异性吸附，因此上述涂层为吸附雌激素的功能吸附涂层，具体吸附机理并不明确。
冷冻干燥步骤为：预冻：-35~-45℃预冻3~5h；冷冻干燥：-45~-35℃，0~4Pa冷冻干燥5~7h，-10~-5℃，6~14Pa冷冻干燥1~2h；升华干燥：4~8℃，50~60Pa升华干燥2~3h；解析干燥：0~4℃，3~5Pa解析干燥2~4h，得到胶原蛋白。冻干整个过程都在程序的控制下，操作简单，工序简洁，自动化程度高，减少了人力、物力。低温下干燥能更好地保留胶原蛋白的活性。上述的胶原蛋白去除了鱼皮胶原蛋白中的激素，服用携带方便，适用于皮肤松弛、色素沉淀的人群，具有补充胶原蛋白的作用，是优质的胶原蛋白产品。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明利用以磁性沸石咪唑酯骨架结构材料为基底合成的一种高效的MZMIP涂层进行自动化固相微萃取微量的雌激素，制得的胶原蛋白中无雌激素残留，品质优异，绿色健康。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述：
实施例1：
从深海鱼鱼皮中提取胶原蛋白的方法，具体步骤为：
1）非胶原蛋白的去除：
将解冻的碎鱼皮分别加入浓度为2.5%氯化钠溶液，于5℃连续搅拌24h，或搅拌12h后换液、继续搅拌12h，用尼龙纱过滤，得滤液。测滤液中的蛋白质浓度和羟脯氨酸含量。用蒸馏水(1：10)水洗样品并过滤，重复三次；
2）胶原蛋白的提取：
去除杂蛋白的鱼皮分别加入0.5mol/L醋酸、0.1mol/l柠檬酸进行溶胀(1：20)，然后均质3min，用酸(1：10)洗涤均质器，将洗涤液并入均质液中，即得到鱼皮胶原蛋白的酸粗提取液。将酸粗提取液连续搅拌，1h后，分别定量取样、真空抽滤；
3）胶原蛋白的提纯：
将滤液中加入固体氯化钠至进行搅拌盐析，然后冷冻离心(6000r／min，10min)，将得到的沉淀复溶于酸中，透析外液为蒸馏水；
4）雌激素的去除：
利用以磁性沸石咪唑酯骨架结构材料为基底合成的一种高效的MZMIP涂层进行自动化固相微萃取微量的雌激素，将胶原蛋白超声10min后利用MZMIP涂层洗脱15min（用乙酸乙酯作为洗脱剂）。MZMIP涂层表面附着纳米级活性短肽，其氨基酸序列为QSASCTSYYCSKCYTAGCGCYPGKCLHCSR；
5）冷冻干燥步骤为：
预冻：-40℃预冻4h；冷冻干燥：-40℃，2Pa冷冻干燥6h，-8℃，10a冷冻干燥1.4h；升华干燥：6℃，55Pa升华干燥2.8h；解析干燥：2℃，3.5Pa解析干燥3h，得到胶原蛋白。制备得到的胶原蛋白去除了鱼皮胶原蛋白中的激素，服用携带方便，适用于皮肤松弛、色素沉淀的人群，具有补充胶原蛋白的作用，是优质的胶原蛋白产品。
实施例2：
从深海鱼鱼皮中提取胶原蛋白的方法，最优选步骤为：
1）非胶原蛋白的去除：
将解冻的碎鱼皮分别加入浓度为1.5%氯化钠溶液，于8℃连续搅拌24h，或搅拌12h后换液、继续搅拌12h，用尼龙纱过滤，得滤液。测滤液中的蛋白质浓度和羟脯氨酸含量。用蒸馏水(1：10)水洗样品并过滤，重复三次；
2）胶原蛋白的提取：
去除杂蛋白的鱼皮分别加入0.5mol/L醋酸、0.08mol/l柠檬酸进行溶胀(1：18)，然后均质3min，用酸(1：10)洗涤均质器，将洗涤液并入均质液中，即得到鱼皮胶原蛋白的酸粗提取液。将酸粗提取液连续搅拌，1.2h后，分别定量取样、真空抽滤；
3）胶原蛋白的提纯：
将滤液中加入固体氯化钠至进行搅拌盐析，然后冷冻离心(6000r／min，10min)，将得到的沉淀复溶于酸中，透析外液为蒸馏水；
4）雌激素的去除：
利用以磁性沸石咪唑酯骨架结构材料为基底合成的一种高效的MZMIP涂层进行自动化固相微萃取微量的雌激素，将胶原蛋白超声10min后利用MZMIP涂层洗脱15min（用乙酸乙酯作为洗脱剂）。MZMIP涂层表面附着厚度为20~50nm的纳米级活性短肽，其氨基酸序列为QSASCTSYYCSKCYTAGCGCYPGKCLHCSR；
5）冷冻干燥步骤为：
预冻：-40℃预冻4h；冷冻干燥：-40℃，2Pa冷冻干燥6h，-8℃，10a冷冻干燥1.4h；升华干燥：6℃，55Pa升华干燥2.8h；解析干燥：2℃，3.5Pa解析干燥3h，得到胶原蛋白。制备得到的胶原蛋白去除了鱼皮胶原蛋白中的激素，服用携带方便，适用于皮肤松弛、色素沉淀的人群，具有补充胶原蛋白的作用，是优质的胶原蛋白产品。
实施例3：
从深海鱼鱼皮中提取胶原蛋白的方法，具体步骤为：
1）非胶原蛋白的去除：
将解冻的碎鱼皮分别加入浓度为3.0%氯化钠溶液，于5℃连续搅拌24h，或搅拌12h后换液、继续搅拌12h，用尼龙纱过滤，得滤液。测滤液中的蛋白质浓度和羟脯氨酸含量。用蒸馏水(1：10)水洗样品并过滤，重复三次；
2）胶原蛋白的提取：
去除杂蛋白的鱼皮分别加入0.5mol/L醋酸、0.1mol/l柠檬酸进行溶胀(1：18)，然后均质3min，用酸(1：10)洗涤均质器，将洗涤液并入均质液中，即得到鱼皮胶原蛋白的酸粗提取液。将酸粗提取液连续搅拌，1.2h后，分别定量取样、真空抽滤；
3）胶原蛋白的提纯：
将滤液中加入固体氯化钠至进行搅拌盐析，然后冷冻离心(6000r／min，10min)，将得到的沉淀复溶于酸中，透析外液为蒸馏水；
4）雌激素的去除：
利用以磁性沸石咪唑酯骨架结构材料为基底合成的一种高效的MZMIP涂层进行自动化固相微萃取微量的雌激素，将胶原蛋白超声10min后利用MZMIP涂层洗脱15min（用乙酸乙酯作为洗脱剂）。MZMIP涂层表面附着厚度为20~50nm的纳米级活性短肽，其氨基酸序列为QSASCTSYYCSKCYTAGCGCYPGKCLHCSR；
5）冷冻干燥步骤为：
预冻：-40℃预冻4h；冷冻干燥：-40℃，2Pa冷冻干燥6h，-8℃，10a冷冻干燥1.4h；升华干燥：6℃，55Pa升华干燥2.8h；解析干燥：2℃，3.5Pa解析干燥3h，得到胶原蛋白。制备得到的胶原蛋白去除了鱼皮胶原蛋白中的激素，服用携带方便，适用于皮肤松弛、色素沉淀的人群，具有补充胶原蛋白的作用，是优质的胶原蛋白产品。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 兰溪市哥特生物技术有限公司
<120> 从深海鱼鱼皮中提取胶原蛋白的方法
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 1
Gln Ser Ala Ser Cys Thr Ser Tyr Tyr Cys Ser Lys Cys Tyr Thr Ala
1 5 10 15
Gly Cys Gly Cys Tyr Pro Gly Lys Cys Leu His Cys Ser Arg
20 25 30
Claims (5)
1.从深海鱼鱼皮中提取胶原蛋白的方法，包括非胶原蛋白的去除、胶原蛋白的提取、胶原蛋白的提纯、雌激素的去除和冷冻干燥，其特征在于：所述的非胶原蛋白去除步骤为：将解冻的碎鱼皮分别加入浓度为1.5%~3.5%氯化钠溶液，于5~10℃连续搅拌12~24h，用尼龙纱过滤，得滤液；测滤液中的蛋白质浓度和羟脯氨酸含量，用蒸馏水水洗鱼皮并过滤，重复1~4次。
2.根据权利要求1所述的从深海鱼鱼皮中提取胶原蛋白的方法，其特征在于：所述的胶原蛋白提取步骤为：去除杂蛋白的鱼皮分别加入0.4~0.6mol/L醋酸、0.05mol/l~0.1mol/l的柠檬酸进行溶胀，体积比为1：15~20，然后均质3~6min，用1：8~12的水稀释后的酸洗涤均质器，将洗涤液并入均质液中，即得到鱼皮胶原蛋白的酸粗提取液。
3.根据权利要求1所述的从深海鱼鱼皮中提取胶原蛋白的方法，其特征在于：所述的胶原蛋白提纯步骤为：在滤液中加入固体氯化钠至进行搅拌盐析，然后冷冻离心4000r/min~7000r/min，离心10~30min，将得到的沉淀复溶于酸中，透析外液为蒸馏水。
4.根据权利要求1所述的从深海鱼鱼皮中提取胶原蛋白的方法，其特征在于：所述的雌激素的去除步骤为：利用以磁性沸石咪唑酯骨架结构材料为基底合成的一种高效的MZMIP涂层进行自动化固相微萃取微量的雌激素，将胶原蛋白超声10min~25min后利用MZMIP涂层洗脱15~30min；MZMIP涂层表面附着纳米级活性短肽，其氨基酸序列为QSASCTSYYCSKCYTAGCGCYPGKCLHCSR。
5.根据权利要求1所述的从深海鱼鱼皮中提取胶原蛋白的方法，其特征在于：所述的冷冻干燥步骤为：预冻：-35~-45℃预冻3~5h；冷冻干燥：-45~-35℃，0~4Pa冷冻干燥5~7h，-10~-5℃，6~14Pa冷冻干燥1~2h；升华干燥：4~8℃，50~60Pa升华干燥2~3h；解析干燥：0~4℃，3~5Pa解析干燥2~4h，得到胶原蛋白。
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN110144376A (zh) * | 2019-06-05 | 2019-08-20 | 杭州柏淼生物科技有限公司 | 纳米级胶原蛋白肽及其制备方法 |
| CN116138375A (zh) * | 2022-11-01 | 2023-05-23 | 广州迈菲科技有限公司 | 一种基于深海鱼溶解提取胶原蛋白的饮料及其生产方法 |
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- 2017-07-27 CN CN201710624321.2A patent/CN107353335A/zh not_active Withdrawn
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