CN117137822B - 一种抗衰老组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗衰老组合物及其应用，属于美容肽技术领域。一种抗衰老组合物包括：美容肽和活性物质；美容肽选自蜂毒肽、棕榈酰二肽‑7、乙酰基四肽‑2和抗皱六肽中的至少2种，抗皱六肽为Ac‑Trp‑Phe(4‑Cl)‑Arg‑D‑Leu‑Ala‑His‑NH2；活性物质选自透明质酸钠、氨基化透明质酸钠、麦角硫因和γ‑氨基丁酸中的至少1种。本发明抗衰老组合物用成分之间能够发挥协同增效作用，通过提高基底胶原蛋白表达而发挥抗皱作用，同时抗衰老组合物对皮肤还具有优异的保湿效果，抗皱和保湿功效使得本发明组合物具有较强的抗衰老作用。
Description
技术领域
本发明属于美容肽技术领域，具体涉及一种抗衰老组合物及其应用。
背景技术
皮肤老化是由自然因素或非自然因素造成的皮肤衰老现象。人出生后皮肤组织日益发达，功能逐渐活跃。皮肤组织的成长期一般结束于25岁左右，自此后生长与老化同时进行，皮肤弹力纤维渐渐变粗，40～50岁初老期，皮肤的老化慢慢明显。皮肤的衰老是一种自然规律，抗衰老是永恒的美容话题，虽然我们不能阻止皮肤的自然老化，但可以通过科学而有效的措施，改变皮肤的衰老状态。在化妆品领域，美容肽在抗衰老领域已经成为了一类重要的活性成分。现有技术中，申请号为2017103647182的发明专利公开了抗衰老活性物组合物，包含如下按质量百分比计的组分：大分子透明质酸钠0.1～5％；小分子透明质酸钠0.1～5％；人表皮生长因子0.1～2％；乙酰六肽-8 0.01～0.1％；肌肽0.1～2％；水补足100％；该活性物组合物具有明显的抗衰老功能，用于配制化妆品时，用量为1～10％w/w，使用30天后可达到非常明显的抗衰老效果，肌肤变得紧致充盈，恢复年轻态。现有技术中，申请号为2020108182022的发明专利公开了一种抗衰老肽类组合物，由四肽、六胜肽-11、铜三肽、五肽-18和大豆多肽组成；四肽、铜三肽、五肽-18、大豆多肽和六胜肽-11的质量比为：(5-5.5):(3.2-4):(6.8-8.3):(9.3-10):(0-0.3)。本发明肽类组合物中各组分以适宜的质量比协同配合，应用在皮肤上，不仅可以有效修复皮肤损伤，美白抗皱效果好，而且不会对皮肤造成二次损伤，相比于其它配比，其抗衰老效果具有显著性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有抗皱和保湿效果的抗衰老组合物。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
一种抗衰老组合物，包括：
-美容肽，美容肽选自蜂毒肽、棕榈酰二肽-7、乙酰基四肽-2和抗皱六肽中的至少2种，抗皱六肽为Ac-Trp-Phe(4-Cl)-Arg-D-Leu-Ala-His-NH2；和，
-活性物质，活性物质选自透明质酸钠、氨基化透明质酸钠、麦角硫因和γ-氨基丁酸中的至少1种。
上述蜂毒肽具有抗炎、抗菌、抗辐射、肉毒素样祛皱、激发皮肤产生胶原蛋白和弹力蛋白等多种功效；棕榈酰二肽-7通过引入棕榈酰基团来避免氨基酸离子性质的限制，激活NRF2信号通路抗氧化，促进细胞外ECM基质再生，恢复肌肤紧实弹性年轻态，对抗由于基质流失带来的老化问题；乙酰基四肽-2能针对DEJ半桥粒组成胶原COL17A1有一定的促进作用，同时能有效促进胶原蛋白水平和弹性纤维，促进细胞与ECM的结合，对抗导致皮肤紧实度和粘附力丧失的不利作用；抗皱六肽具有优良的抗皱性能与保湿性能，同时具有优良的细胞存活率，安全无毒，能够广泛应用于护肤品或化妆品等领域。上述透明质酸钠为低分子透明质酸钠，其分子量为30-50kDa，能深层保湿，提高皮肤弹性，减少皱纹；氨基化透明质酸钠为通过酰胺化反应将γ-氨基丁酸上的氨基耦合到透明质酸钠分子链上获得，具有优良的抗皱性能与保湿性能；麦角硫因能保护皮肤细胞的DNA和线粒体，抗氧化，抗光老化，减少色斑和细纹，提高皮肤含水量和弹性；γ-氨基丁酸是天然抗衰老因子，舒展皱纹，光滑肌肤，促进细胞新生，修复受损肌肤。本发明抗衰老组合物用成分之间能够发挥协同增效作用，通过提高基底胶原蛋白表达而发挥抗皱作用，同时抗衰老组合物对皮肤还具有优异的保湿效果，抗皱和保湿功效使得本发明组合物具有较强的抗衰老作用。
在一个实施方案中，美容肽包括蜂毒肽和棕榈酰二肽-7，活性物质选自透明质酸钠、氨基化透明质酸钠、麦角硫因和γ-氨基丁酸中的至少1种，蜂毒肽、棕榈酰二肽-7和活性物质的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5。
在一个实施方案中，美容肽包括蜂毒肽和棕榈酰二肽-7，活性物质为透明质酸钠和γ-氨基丁酸，蜂毒肽、棕榈酰二肽-7、透明质酸钠和γ-氨基丁酸的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5。
在一个实施方案中，美容肽包括蜂毒肽、棕榈酰二肽-7和乙酰基四肽-2，活性物质选自透明质酸钠、氨基化透明质酸钠、麦角硫因和γ-氨基丁酸中的至少1种，蜂毒肽、棕榈酰二肽-7、乙酰基四肽-2和活性物质的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5。
在一个实施方案中，美容肽包括蜂毒肽、棕榈酰二肽-7和乙酰基四肽-2，活性物质为透明质酸钠和γ-氨基丁酸，蜂毒肽、棕榈酰二肽-7、乙酰基四肽-2、透明质酸钠和γ-氨基丁酸的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5。
在一个实施方案中，美容肽包括蜂毒肽、棕榈酰二肽-7和乙酰基四肽-2，活性物质包括透明质酸钠、麦角硫因和γ-氨基丁酸，蜂毒肽、棕榈酰二肽-7、乙酰基四肽-2、透明质酸钠、麦角硫因和γ-氨基丁酸的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5。
在一个实施方案中，美容肽包括乙酰基四肽-2和抗皱六肽，乙酰基四肽-2和抗皱六肽的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5。乙酰基四肽-2和抗皱六肽联合使用时，能够发挥协同增益作用，能够显著上调皮肤弹性蛋白相关基因的表达，提高皮肤的弹性，达到抗皱和保湿效果，实现抗衰老的目的。
在一个实施方案中，美容肽包括乙酰基四肽-2和抗皱六肽，活性物质选自透明质酸钠、氨基化透明质酸钠、麦角硫因和γ-氨基丁酸中的至少1种，乙酰基四肽-2、抗皱六肽和活性物质的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5。
在一个实施方案中，美容肽包括乙酰基四肽-2和抗皱六肽，活性物质为透明质酸钠和γ-氨基丁酸，乙酰基四肽-2、抗皱六肽、透明质酸钠和γ-氨基丁酸的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5。
在一个实施方案中，氨基化透明质酸钠为γ-氨基丁酸上的氨基耦合到透明质酸钠分子链上。氨基化透明质酸钠为通过酰胺化反应将γ-氨基丁酸上的氨基耦合到透明质酸钠分子链上获得，具有优良的抗皱性能与保湿性能。
在一个实施方案中，抗衰老组合物包括乙酰基四肽-2、抗皱六肽和氨基化透明质酸钠，乙酰基四肽-2、抗皱六肽和氨基化透明质酸钠的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5。
在一个实施方案中，抗皱六肽为抗皱六肽季铵盐。
在一个实施方案中，抗皱六肽季铵盐为抗皱六肽和肌肽反应制得。相较于抗皱六肽，抗皱六肽季铵盐不仅具有更佳优良的抗皱性能、保湿性能和生物相容性。因此，抗皱六肽季铵盐对皮肤能够起到更优异的抗衰老作用，作为抗衰老组合物的活性成分具有良好的应用前景。
在一个实施方案中，美容肽包括乙酰基四肽-2和抗皱六肽季铵盐，乙酰基四肽-2和抗皱六肽季铵盐的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5。乙酰基四肽-2和抗皱六肽季铵盐联合使用时，能够发挥协同增益作用，能够显著上调皮肤弹性蛋白相关基因的表达，提高皮肤的弹性，达到抗皱和保湿效果，实现抗衰老的目的。
在一个实施方案中，美容肽包括乙酰基四肽-2和抗皱六肽季铵盐，活性物质选自透明质酸钠、氨基化透明质酸钠、麦角硫因和γ-氨基丁酸中的至少1种，乙酰基四肽-2、抗皱六肽季铵盐和活性物质的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5。
在一个实施方案中，美容肽包括乙酰基四肽-2和抗皱六肽季铵盐，活性物质为透明质酸钠和γ-氨基丁酸，乙酰基四肽-2、抗皱六肽季铵盐、透明质酸钠和γ-氨基丁酸的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5。
在一个实施方案中，抗衰老组合物中各组分的质量相同。
抗衰老组合物的制备采用剂型为水剂，在一个实施方案中，抗衰老组合物还包括水。抗衰老组合物中各组分的含量为0.01-1.0wt%。
在一个优选的实施方案中，抗衰老组合物还包括防腐剂，防腐剂为对羟基苯乙酮和1,2己二醇。
在一个优选的实施方案中，抗衰老组合物中各组分的含量为0.01-1.0wt%。
本发明还公开了上述的抗衰老组合物的制备方法，包括，将美容肽和活性物质混合均匀，然后加入水中，搅拌均匀，得到抗衰老组合物。
本发明还公开了上述的氨基化透明质酸钠的制备方法，包括：
将透明质酸钠和γ-氨基丁酸在EDC和NHS存在的条件下反应，得到氨基化透明质酸钠。
在一个实施方案中，透明质酸钠和γ-氨基丁酸的质量比为1:1-5。
在一个实施方案中，透明质酸钠、EDC和NHS的用量比为1g:3-6mmol:5-10mmol。
在一个实施方案中，氨基化透明质酸钠的制备方法，包括：
将透明质酸钠溶于去离子水中，加入EDC和NHS，搅拌均匀后利用0.01-0.1M的盐酸溶液和/或0.01-0.1M的氢氧化钠溶液调节pH至4.0-5.0，室温下反应1-3h，反应结束后加入γ-氨基丁酸，搅拌均匀后利用0.01-0.1M的盐酸溶液和/或0.01-0.1M的氢氧化钠溶液调节pH至4.0-5.0，室温下继续反应12-36h，反应结束后将反应液装入透析袋，置于浓度为0.05-0.2M的碳酸钠溶液中透析6-12h，然后换去离子水透析48-72h，透析完成后，将透析溶液冷冻干燥，得到氨基化透明质酸钠。
在一个优选的实施方案中，透明质酸钠和去离子水的用量比为1g:100-200mL。
本发明还公开了上述的抗皱六肽季铵盐的制备方法，包括：
将抗皱六肽加入二甲基甲酰胺中，搅拌均匀后加入肌肽，然后在70-90℃下搅拌反应6-12h，反应产物过滤，然后利用甲醇和二氯甲烷各洗2-5次，干燥，制得抗皱六肽季铵盐。
在一个实施方案中，抗皱六肽和二甲基甲酰胺的用量比为1g:10-50mL。
在一个实施方案中，抗皱六肽和肌肽的摩尔比为1:0.9-1.1。
本发明还公开了上述的抗衰老组合物在制备护肤品中的应用。
在一个实施方案中，抗衰老组合物在制备抗衰老护肤品中的应用。
本发明还公开了一种护肤品，包括上述的抗衰老组合物。
本发明还公开了乙酰基四肽-2和抗皱六肽在制备抗衰老组合物中的应用，抗皱六肽为Ac-Trp-Phe(4-Cl)-Arg-D-Leu-Ala-His-NH2。
在一个实施方案中，乙酰基四肽-2和抗皱六肽的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5。
本发明还公开了乙酰基四肽-2和抗皱六肽季铵盐在制备抗衰老组合物中的应用，抗皱六肽季铵盐为抗皱六肽和肌肽反应制得，抗皱六肽为Ac-Trp-Phe(4-Cl)-Arg-D-Leu-Ala-His-NH2。
在一个实施方案中，乙酰基四肽-2和抗皱六肽季铵盐的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5。
本发明抗衰老组合物由于采用美容肽和活性物质，因而具有如下有益效果：本发明抗衰老组合物用成分之间能够发挥协同增效作用，通过提高基底胶原蛋白表达而发挥抗皱作用，同时抗衰老组合物对皮肤还具有优异的保湿效果，抗皱和保湿功效使得本发明组合物具有较强的抗衰老作用；本发明抗衰老组合物中乙酰基四肽-2和抗皱六肽的联合使用能够发挥协同增益作用，能够显著上调皮肤弹性蛋白相关基因的表达，提高皮肤的弹性，达到抗皱效果，实现抗衰老的目的；本发明抗衰老组合物用氨基化透明质酸钠具有优良的抗皱性能与保湿性能；本发明抗衰老组合物用抗皱六肽季铵盐具有更佳优良的抗皱性能、保湿性能和生物相容性。因此，本发明的目的在于提供一种具有抗皱和保湿效果的抗衰老组合物。
附图说明
图1为抗皱六肽季铵盐的质谱图；
图2为氨基化透明质酸钠和透明质酸钠在相对湿度RH=81%条件下的保湿率；
图3为氨基化透明质酸钠和透明质酸钠在相对湿度RH=0%条件下的保湿率；
图4为抗衰老组合物对皱纹的改善率。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进一步详细说明。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明实施例用透明质酸钠为低分子透明质酸钠，其分子量为30kDa。
本发明实施例用抗皱六肽（Ac-Trp-Phe(4-Cl)-Arg-D-Leu-Ala-His-NH2）为杭州湃肽生化科技有限公司的已有专利（申请号 202310826252.9）中的抗皱六肽化合物6，其制备方法和检测试方法参考该专利，本发明实施例用抗皱六肽的结构式为：
。
实施例1：
一种抗衰老组合物，包括：蜂毒肽、棕榈酰二肽-7和透明质酸钠，其质量比为1:1:1。
实施例2：
一种抗衰老组合物，包括：蜂毒肽、棕榈酰二肽-7和麦角硫因，其质量比为1:1:1。
实施例3：
一种抗衰老组合物，包括：蜂毒肽、棕榈酰二肽-7和γ-氨基丁酸，其质量比为1:1:1。
实施例4：
一种抗衰老组合物，包括：蜂毒肽、棕榈酰二肽-7和氨基化透明质酸钠，其质量比为1:1:1。
其中，氨基化透明质酸钠的制备方法为：
将透明质酸钠溶于去离子水中，透明质酸钠和去离子水的用量比为1g:150mL，加入EDC和NHS，透明质酸钠、EDC和NHS的用量比为1g:5mmol:7.5mmol，搅拌均匀后利用0.01M的盐酸溶液和0.01M的氢氧化钠溶液调节pH至4.5，室温下反应2h，反应结束后加入γ-氨基丁酸，透明质酸钠和γ-氨基丁酸的质量比为1:4，搅拌均匀后利用0.01M的盐酸溶液和0.01M的氢氧化钠溶液调节pH至4.5，室温下继续反应24h，反应结束后将反应液装入透析袋，置于浓度为0.1M的碳酸钠溶液中透析12h，然后换去离子水透析48h，期间每隔6h换一次水，透析完成后，将透析溶液冷冻干燥，得到氨基化透明质酸钠。氨基化透明质酸钠的1HNMR光谱中，在3.22ppm、2.30ppm和1.93ppm处出现为-CO-NH-CH2-CH2-CH2-COOH中CH2的H原子，这意味着γ-氨基丁酸连接到透明质酸钠上得到氨基化透明质酸钠。
实施例5：
一种抗衰老组合物，包括：蜂毒肽、棕榈酰二肽-7、透明质酸钠和γ-氨基丁酸，其质量比为1:1:0.5:0.5。
实施例6：
一种抗衰老组合物，包括：蜂毒肽、棕榈酰二肽-7、乙酰基四肽-2和透明质酸钠，其质量比为1:1:1:1。
实施例7：
一种抗衰老组合物，包括：蜂毒肽、棕榈酰二肽-7、乙酰基四肽-2和麦角硫因，其质量比为1:1:1:1。
实施例8：
一种抗衰老组合物，包括：蜂毒肽、棕榈酰二肽-7、乙酰基四肽-2和γ-氨基丁酸，其质量比为1:1:1:1。
实施例9：
一种抗衰老组合物，包括：蜂毒肽、棕榈酰二肽-7、乙酰基四肽-2和氨基化透明质酸钠，其质量比为1:1:1:1。
其中，氨基化透明质酸钠的制备方法同实施例4。
实施例10：
一种抗衰老组合物，包括：蜂毒肽、棕榈酰二肽-7、乙酰基四肽-2、透明质酸钠和γ-氨基丁酸，其质量比为1:1:1:0.5:0.5。
实施例11：
一种抗衰老组合物，包括：蜂毒肽、棕榈酰二肽-7、乙酰基四肽-2、透明质酸钠、麦角硫因和γ-氨基丁酸，其质量比为1:1:1:1:1:1。
实施例12：
一种抗衰老组合物，包括：乙酰基四肽-2、抗皱六肽和透明质酸钠，其质量比为1:1:1。
实施例13：
一种抗衰老组合物，包括：乙酰基四肽-2、抗皱六肽和麦角硫因，其质量比为1:1:1。
实施例14：
一种抗衰老组合物，包括：乙酰基四肽-2、抗皱六肽和γ-氨基丁酸，其质量比为1:1:1。
实施例15：
一种抗衰老组合物，包括：乙酰基四肽-2、抗皱六肽和氨基化透明质酸钠，其质量比为1:1:1。
其中，氨基化透明质酸钠的制备方法同实施例4。
实施例16：
一种抗衰老组合物，包括：乙酰基四肽-2、抗皱六肽、透明质酸钠和γ-氨基丁酸，其质量比为1:1:0.5:0.5。
实施例17：
一种抗衰老组合物，包括：乙酰基四肽-2、抗皱六肽季铵盐和透明质酸钠，其质量比为1:1:1。
其中，抗皱六肽季铵盐的制备方法为：
将抗皱六肽加入二甲基甲酰胺中，抗皱六肽和二甲基甲酰胺的用量比为1g:30mL，搅拌均匀后加入肌肽，抗皱六肽和肌肽的摩尔比为1:1，然后在80℃下搅拌反应10h，反应产物过滤，然后利用甲醇和二氯甲烷各洗3次，干燥，制得抗皱六肽季铵盐，其结构式为：
；其分子量理论精确值m/z为1129.53，MW理论观测值m/z为1130.64，质谱如图1所示。
实施例18：
一种抗衰老组合物，包括：乙酰基四肽-2、抗皱六肽季铵盐和麦角硫因，其质量比为1:1:1。
实施例19：
一种抗衰老组合物，包括：乙酰基四肽-2、抗皱六肽和γ-氨基丁酸，其质量比为1:1:1。
其中，抗皱六肽季铵盐的制备方法同实施例17。
实施例20：
一种抗衰老组合物，包括：乙酰基四肽-2、抗皱六肽和氨基化透明质酸钠，其质量比为1:1:1。
其中，氨基化透明质酸钠的制备方法同实施例4，抗皱六肽季铵盐的制备方法同实施例17。
实施例21：
一种抗衰老组合物，包括：乙酰基四肽-2、抗皱六肽、透明质酸钠和γ-氨基丁酸，其质量比为1:1:0.5:0.5。
其中，抗皱六肽季铵盐的制备方法同实施例17。
试验例1：
氨基化透明质酸钠的性能测试
1、保湿性能测试
称取0.5g样品（记为m0），分别置于相对湿度RH=81%和变色硅胶（RH=0%）的干燥器中，室温条件下放置48h，分别在2h、4h、8h、24h、48h时取出称重，取出称重（记为mt）。根据下式计算保湿率：保湿率=mt/m0×100%。
氨基化透明质酸钠和透明质酸钠在相对湿度RH=81%条件下的保湿率见图2，氨基化透明质酸钠和透明质酸钠在相对湿度RH=0%条件下的保湿率见图3，可以看出，在相同湿度条件下，氨基化透明质酸钠和透明质酸钠在相同时间点的保湿率几乎相同，这说明氨基化透明质酸钠和透明质酸钠一样，具有优良的保湿性能。
2、细胞毒性测试
按照2×105个/孔的接种密度接种成纤细胞至96孔板，培养箱（37℃、5%CO2）中培养24h，然后加入100μL浓度为1.0mg/mL的氨基化透明质酸钠（试验组），空白对照组为加入100μL的生理盐水，置于培养箱（37℃、5%CO2）中培养24h，弃去培养孔内的培养基，每孔加入25μL MTT（5mg/mL）溶液继续培养8h，吸去原液，每孔加入200μL二甲基亚砜，震荡15min充分溶解，用酶标仪测定560nm波长处的吸光值，计算细胞存活率，计算公式为：细胞存活率（%）=试验组的平均吸光度/空白对照组的平均吸光度×100%。
氨基化透明质酸钠的细胞存活率为98.69%，可以看出，氨基化透明质酸钠具有优良的细胞相容性。
试验例2：
抗皱六肽季铵盐的性能测试
1、细胞毒性测试
按照2×105个/孔的接种密度接种成纤细胞至96孔板，培养箱（37℃、5%CO2）中培养24h，然后加入100μL浓度为1.5mg/mL的抗皱六肽季铵盐水溶液（试验组），空白对照组为加入100μL的生理盐水，置于培养箱（37℃、5%CO2）中培养24h，弃去培养孔内的培养基，每孔加入25μL MTT（5mg/mL）溶液继续培养8h，吸去原液，每孔加入200μL二甲基亚砜，震荡15min充分溶解，用酶标仪测定560nm波长处的吸光值，计算细胞存活率，计算公式为：细胞存活率（%）=试验组的平均吸光度/空白对照组的平均吸光度×100%。
表1为抗皱六肽季铵盐的细胞存活率，可以看出，抗皱六肽季铵盐具有优良的细胞相容性。
表1 抗皱六肽季铵盐的细胞存活率
| 组别 | 细胞存活率/% |
| 抗皱六肽季铵盐 | 99.47 |
| 抗皱六肽 | 100.12 |
2、抗皱性能测试
1）细胞接种：按照2×105个/孔的接种密度接种成纤维细胞（批号：Fb19052002，由广东博溪生物科技有限公司提供）至6孔板，培养箱（37℃、5%CO2）中孵育过夜；配制的样品如表2所示。
2）给药：根据表2中的给药方案，待6孔板中细胞铺板率达到40%-60%时，进行分组给药，每孔给药量为2mL，每组设3个复孔，培养箱（37℃、5%CO2）中孵育24h。
3）UVA辐照：根据试验分组，对有UVA照射的组别进行30J/cm2的UVA辐照，置于培养箱（37℃、5%CO2）中继续培养24h。
4）收集细胞：培养24h后，收集细胞上清后，1mL/孔PBS清洗两次，每孔加入1mLRNAiso Plus，吹打裂解细胞后，收样。
5）基因表达检测：提取RNA，反转录至cDNA后，进行荧光定量PCR检测，采用2-△△CT方法进行结果计算。
表2 给药方案
Collagen Ι、Elastin、MMP-1和MMP-3基因表达的测定结果见表3，从表3可以看出，与BC组相比，NC组基因Collagen Ι的表达明显下调，说明本次测试刺激条件有效；与NC组相比，PC组基因Collagen Ι的表达明显上调，这说明本次阳性对照测试有效；与NC组相比，试验组1对基因Collagen Ι的表达的具有上调作用，这说明抗皱六肽季铵盐能促进细胞外基质蛋白的合成，抵御UVA照射导致的细胞外基质蛋白合成减少。从表3还可以看出，与BC组相比，NC组基因Elastin的表达明显下调，说明本次测试刺激条件有效；与NC组相比，PC组基因Elastin的表达明显上调，这说明本次阳性对照测试有效；与NC组相比，试验组1对基因Elastin的表达明显上调，这说明抗皱六肽季铵盐能增加经紫外线照射的皮肤的成纤维细胞中的Elastin含量，进而增加皮肤的弹性，具有优良的抗皱作用。从表3还可以看出，与BC组相比，NC组基因MMP-1、MMP-3的表达明显上调，说明本次测试刺激条件有效；与NC组相比，PC 组基因MMP-1、MMP-3的表达明显下调，这说明本次阳性对照测试有效；与 NC 组相比，试验组1对基因MMP-1和MMP-3的表达明显下调，这说明抗皱六肽季铵盐能减少成纤维细胞中的MMP含量，具有优良的抗皱作用。从表3还可以看出，试验组3对Collagen Ι和Elastin基因的表达上调的效果优于试验组1，这说明乙酰基四肽-2和抗皱六肽季铵盐联合使用能够显著上调皮肤弹性蛋白相关基因的表达，提高皮肤的弹性，达到抗皱效果，实现抗衰老的目的；试验组4对Collagen Ι和Elastin基因的表达上调的效果优于试验组2，这说明乙酰基四肽-2和抗皱六肽联合使用能够显著上调皮肤弹性蛋白相关基因的表达，提高皮肤的弹性，达到抗皱效果，实现抗衰老的目的。
表3 Collagen Ι、Elastin、MMP-1和MMP-3基因表达的测定结果
透明质酸合成酶（HAS1）基因表达的测定结果见表4，从表4可以看出，与BC组相比，NC组基因HAS1的表达明显下调，说明本次测试刺激条件有效；与NC组相比，PC组基因HAS1的表达明显上调，这说明本次阳性对照测试有效；与NC组相比，试验组1基因HAS1的表达明显上调Collagen Ι，这说明抗皱六肽季铵盐能明显增加成纤维细胞中的基因HAS1含量，达到优良的抗皱作用。
表4 HAS1基因表达的测定结果
| 组别 | 扩增倍数 | 上调率/% |
| BC | 1.00 | / |
| NC | 0.65 | / |
| PC | 2.09 | 222 |
| 试验组1 | 1.35 | 107.7 |
| 试验组2 | 0.93 | 43.08 |
综上，抗皱六肽季铵盐可以上调Collagen Ι、Elastin和HAS1基因的表达水平，下调MMP-1和MMP-3基因的表达水平。因此，抗皱六肽季铵盐能促进光老化皮肤的修复，抑制皮肤细胞的急性光损伤，进而改善皮肤光老化，实现抗衰老的目的，抗皱六肽季铵盐的抗衰老性能优于抗皱六肽。
试验例3：
抗衰老组合物的性能测试
1、在人体皮肤上的测试
选择30名年龄在40-60岁的志愿者作为测试人员签署书面知情同意书；在测试人员的一边脸部涂覆实施例1-21抗衰老组合物的水溶液（将美容肽和活性物质混合均匀，然后加入水中，搅拌均匀，得到抗衰老组合物的水溶液，抗衰老组合物的浓度为2.4wt%），每天使用2次，早晚各一次，共用28天，记录使用前后测试人员的皱纹深度（D0）与使用28天后的皱纹深度（D28），进而计算皱纹的改善率，皱纹的改善率的计算公式为：改善率（%）=（D0-D28）/D0×100%。
抗衰老组合物对皱纹的改善率见图4，可以看出，在使用28天后，实施例1-21抗衰老组合物对皱纹具有改善作用，改善率均高于11%。还可以看出，实施例4抗衰老组合物对皱纹的改善率高于实施例1、实施例3和实施例5抗衰老组合物，实施例9抗衰老组合物对皱纹的改善率高于实施例6、实施例8和实施例10抗衰老组合物，实施例15抗衰老组合物对皱纹的改善率高于实施例12、实施例14和实施例16抗衰老组合物，实施例20抗衰老组合物对皱纹的改善率高于实施例17、实施例19和实施例21抗衰老组合物，这说明相对于透明质酸钠和γ-氨基丁酸在抗衰老组合物中的单独使用或复配使用，氨基化透明质酸钠使得抗衰老组合物的抗皱效果更佳。还可以看出，实施例12-实施例16抗衰老组合物对皱纹的改善率均高于13%，这说明乙酰基四肽-2和抗皱六肽季铵盐联合使用时，抗皱效果更佳。还可以看出，实施例17抗衰老组合物对皱纹的改善率高于实施例12，实施例18抗衰老组合物对皱纹的改善率高于实施例13，实施例19抗衰老组合物对皱纹的改善率高于实施例14，实施例20抗衰老组合物对皱纹的改善率高于实施例15，实施例21抗衰老组合物对皱纹的改善率高于实施例16，这说明相较于含有抗皱六肽的抗衰老组合物，含有抗皱六肽季铵盐的抗衰老组合物的抗皱效果更佳。还可以看出，实施例17-实施例21抗衰老组合物对皱纹的改善率均高于15%，这说明乙酰基四肽-2和抗皱六肽季铵盐联合使用时，抗皱效果更佳。
2、保湿性能测试
1. 测试要求
1）年龄在18-60岁之间（妊娠或哺乳期妇女除外）；
2）前臂测试区域电容法皮肤水分测定仪的基础值在15-45（ComeometerUnit，C.U.）之间；
3）无严重系统疾病、无免疫缺陷或自身免疫性疾病者，受试部分没有接受过皮肤治疗、美容以及其他可能影响结果的测试；
4）无活动性过敏性疾病者；
5）无体质高度敏感者；
6）近一个月内未曾使用激素类药物以及免疫抑制剂者；
7）现在或最近三个月受试部位未参加其他临床试验者。
2. 测试流程项目
a）按照要求筛选合格受试者入组测试，签署书面知情同意书；
b）受试者用干纸巾清洁前臂内侧，在温度（21±1）℃，（50±10）%RH的实验室中静坐30min；
c）实验员对受试者前臂内侧做好测试区域标记，每个区域面积为4cm×4cm，间隔至少1cm，样品区域和空白区域随机分布于手臂内侧标定区域，确保所有样品区和空白区位置在统计学上达到平衡；
d）实验员在前臂内侧样品区和空白区采集皮肤角质层水分含量基础值（T0），每个区域平行测定3次；
e）实验员根据样品使用要求在样品区使用测试样品，样品使用量为（2.5±0.1）mg/cm2，空白区不使用样品（空白对照组）；
f）使用样品后4h采集数据（T4）；
g）使用样品后8h采集数据（T8）；
h）测试流程结束，离开实验室。
3. 测试指标
指标名称为：皮肤角质层水分含量；测试仪器/方法为：皮肤水分测试探头CM825；测试区域：前臂标记区域；指标说明：值越高表示皮肤水分含量越高。
4. 测试样品
实施例12、实施例15、实施例17和实施例20抗衰老组合物，测定的皮肤角质层水分含量基础值（T0）平均值为30.70（a.u.）。
表5为抗衰老组合物的皮肤角质层水分含量，可以看出，实施例12、实施例15、实施例17和实施例20抗衰老组合物均具有较佳的保湿效果。可以看出，实施例15抗衰老组合物T4值和T8值和实施例12相当，实施例20抗衰老组合物T4值和T8值和实施例17相当，这说明氨基化透明质酸钠使得抗衰老组合物具有较佳的保湿效果。还可以看出，实施例17抗衰老组合物T4值和T8值均高于实施例12，实施例20抗衰老组合物T4值和T8值均高于实施例15，这说明相较于抗皱六肽，抗皱六肽季铵盐使得抗衰老组合物的保湿效果更佳。
表5 抗衰老组合物的皮肤角质层水分含量
| 组别 | T4/a.u. | 变化率/% | T8/a.u. | 变化率/% |
| 实施例12 | 46.15 | 50.33 | 44.87 | 46.16 |
| 实施例15 | 46.83 | 52.54 | 45.79 | 49.15 |
| 实施例17 | 48.46 | 57.85 | 47.11 | 53.45 |
| 实施例20 | 49.2 | 60.26 | 48.05 | 56.51 |
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包括在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种抗衰老组合物，其特征在于：所述的抗衰老组合物包括：
-美容肽，所述的美容肽选自蜂毒肽、棕榈酰二肽-7、乙酰基四肽-2和抗皱六肽中的至少2种，所述的抗皱六肽为Ac-Trp-Phe(4-Cl)-Arg-D-Leu-Ala-His-NH2，其结构式为；和，
-活性物质，所述的活性物质选自氨基化透明质酸钠，或，所述的活性物质包含氨基化透明质酸钠和选自透明质酸钠、麦角硫因和γ-氨基丁酸中的至少1种；所述的氨基化透明质酸钠为通过酰胺化反应将γ-氨基丁酸上的氨基耦合到透明质酸钠分子链上获得。
2.根据权利要求1所述的一种抗衰老组合物，其特征在于：所述的美容肽包括蜂毒肽和棕榈酰二肽-7，所述的活性物质为氨基化透明质酸钠，所述的蜂毒肽、棕榈酰二肽-7和活性物质的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5。
3.根据权利要求1所述的一种抗衰老组合物，其特征在于：所述的美容肽包括蜂毒肽、棕榈酰二肽-7和乙酰基四肽-2，所述的活性物质为氨基化透明质酸钠，所述的蜂毒肽、棕榈酰二肽-7、乙酰基四肽-2和活性物质的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5。
4.根据权利要求1所述的一种抗衰老组合物，其特征在于：所述的抗衰老组合物包括乙酰基四肽-2、抗皱六肽和氨基化透明质酸钠，乙酰基四肽-2、抗皱六肽和氨基化透明质酸钠的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5。
5.权利要求1所述的一种抗衰老组合物在制备护肤品中的应用。
6.一种护肤品，其特征在于：所述的护肤品包括权利要求1所述的抗衰老组合物。
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| CN117137822A (zh) | 2023-12-01 |
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