CN116990513B - 胃蛋白酶原1的化学发光检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了胃蛋白酶原1的化学发光检测方法，属于分子检测领域，所述的方法中使用特定磁微粒载体的缓冲体系：十二水合磷酸氢二钠5.6‑5.9 g/L；磷酸二氢钠0.55‑0.60g/L；氯化钠5‑9g/L；牛血清白蛋白1‑10 g/L；蔗糖75‑135g/L；2‑羟乙基纤维素0.5‑10 g/L；明胶3‑20 g/L；羟基磷灰石5‑10 g/L；0.1%‑0.3%吐温；余量为水；所述缓冲体系pH值6.2‑8.0。本发明的方法可以检测血清或者血浆中的胃蛋白酶原胃蛋白酶原1的含量，具有简便、快速的优势，避免了X‑射线对人体的侵害和胃镜的不便。
Description
技术领域
本发明属于分子检测领域，具体涉及胃蛋白酶原1的化学发光检测方法。
背景技术
人的胃蛋白酶原（PG）是胃蛋白酶的前体，比胃蛋白酶多44个氨基酸。根据其生化性质和免疫原性可以分成2个亚群，其中胃蛋白酶原1-5组分的免疫原性相同，称为胃蛋白酶原I（PGI），主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌。血清PGI反映胃黏膜腺体和细胞的数量，是检测胃泌酸腺细胞功能的指征，也间接反映胃黏膜不同部位的分泌功能。胃酸分泌增多对应PGI升高，胃酸分泌减少或胃粘膜腺体萎缩对应PGI降低；PGI/PGII比值进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关，对以上数据进行检测有助于胃部相关疾病的临床筛查，PGI、PGII、PGI/PGII在临床上主要用于筛查慢性萎缩性胃炎。不断改进PGI检测方法对于慢性萎缩性胃炎的临床诊断具有重要意义。
申请号为CN202011479499.0的中国专利中公开了：一种用于超顺磁微粒及其蛋白连接物保存的缓冲液及制备方法。所述用于超顺磁微粒及其蛋白连接物保存的缓冲液，包括以下组分：十二水合磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、牛血清白蛋白、蔗糖、黄原胶、海藻酸钠、明胶。该发明提供的缓冲剂可以使微米级超顺磁性微粒及超顺磁微粒与特定蛋白质的连接物进行长时间的存储，使其不会因物理作用(如沉降、板结)而失效；是一种特殊的缓冲液，用于超顺磁微粒及其蛋白连接物的长期保存。
申请号为CN202210055883.0的中国专利中公开了：一种高灵敏度的定量检测GFAP试剂盒，所述定量检测GFAP试剂盒包括FITC-抗FITC抗体信号放大体系，所述FITC-抗FITC抗体信号放大体系由FITC标记的GFAP抗体溶液和抗FITC抗体标记的磁微粒溶液组成，该发明的FITC-抗FITC抗体信号放大体系在磁微粒数量不变的情况下可以使信号值放大8倍；在信号值相同的情况下可以使磁微粒和抗体2用量减小8倍，节省大量生产成本。在实际应用中会采用折中的方法，一般可以使信号值方法3-4倍、灵敏度提高50％-70％、生产成本下降5％-15％。其中涉及了抗FITC抗体标记的磁微粒溶解于缓冲液9，缓冲液9由以下组分组成：Na2HPO4·12H2O 5.6-5.9g/L、NaH2PO40.55-0.60g、NaCl 9.0g/L、牛血清白蛋白1.0-50g/L、蔗糖80-140g/L、黄原胶0.1-5.0g/L、海藻酸钠0.1-5.0g/L 和明胶1.0-15g/L，pH为6.2-8.0。
但现有技术中的缓冲液在应用于蛋白酶原I的磁微粒化学发光法检测中时，检测效果并不好，准确性和重复性等数据都有待提升。
发明内容
本发明的目的是为了能够快速、简便地检测人外周血蛋白酶原I的含量，而提供的一种操作简便、能为慢性萎缩性胃炎提供辅助诊断的体外诊断试剂盒及其制备方法和使用。本试剂盒是一种采用磁微粒化学发光法定量分析人外周血PGI的水平，用于慢性萎缩性胃炎等胃部疾病的辅助诊断。检测血清或者血浆中的胃蛋白酶原PGI的含量，具有简便、快速的优势，避免了X-射线对人体的侵害和胃镜的不便。
一方面，本发明提供了一种磁微粒载体的缓冲体系。
所述的缓冲体系由以下成分组成：十二水合磷酸氢二钠5.6-5.9 g/L；磷酸二氢钠0.55-0.60g/L；氯化钠5-9g/L；牛血清白蛋白1-10 g/L；蔗糖75-135g/L；2-羟乙基纤维素0.5-10 g/L；明胶3-20 g/L；羟基磷灰石5-10 g/L；0.1%-0.3%吐温；余量为水；所述缓冲体系pH值6.2-8.0。
优选地，所述的缓冲体系由以下成分组成：十二水合磷酸氢二钠5.9 g/L；磷酸二氢钠0.55-0.60g/L；氯化钠8-9g/L；牛血清白蛋白5-10 g/L；蔗糖75-100g/L；2-羟乙基纤维素10 g/L；明胶3-10 g/L；羟基磷灰石8-10 g/L；0.1%-0.2%吐温；余量为水；所述缓冲体系pH值6.2-7.0。
进一步优选地，所述的缓冲体系由以下成分组成：十二水合磷酸氢二钠5.9 g/L；磷酸二氢钠0.60g/L；氯化钠8g/L；牛血清白蛋白5 g/L；蔗糖100g/L；2-羟乙基纤维素10 g/L；明胶10 g/L；羟基磷灰石8 g/L；0.2%吐温；余量为水；所述缓冲体系pH值7.0。
另一方面，本发明提供了前述的缓冲体系在制备胃蛋白酶原1检测试剂盒中的应用。
所述的试剂盒为磁微粒化学发光法定量分析试剂盒。
再一方面，本发明提供了包括前述的缓冲体系在制备胃蛋白酶原1检测试剂盒。
所述的缓冲体系用于混合胃蛋白酶原1抗体磁微粒偶联物。
所述的试剂盒中还包括酶标记PGI抗体及其缓冲体系。
所述的酶标记PGI抗体缓冲体系由以下成分组成：Tris-HCl3.0-30 g/L；氯化钠9.0 g/L；牛血清白蛋白1.0-30 g/L；蔗糖5.0-50 g/L；酶水解明胶2.0-40g/L；酶稳定剂30-250mL/L；1M 氯化镁0.2-10mL/L；1M氯化锌0.2-10mL/L；余量为水；pH值7.4-8.2。
优选地，所述的酶标记PGI抗体缓冲体系由以下成分组成：Tris-HCl 20 g/L；氯化钠9.0 g/L；牛血清白蛋白20 g/L；蔗糖25 g/L；酶水解明胶20g/L；酶稳定剂150mL/L；1M 氯化镁5mL/L；1M氯化锌5mL/L；余量为水；pH值8。
所述的酶稳定剂为碱性磷酸酶结合物酶稳定剂。
优选地，所述的酶标记PGI抗体中的酶包括但不限于碱性磷酸酶。
所述的试剂盒中还可以包括校准品或质控品。
本发明的有益效果：
1、本发明使用免疫学检测手段对为蛋白酶原I进行血液检测，与影像学检测手段（主要为CT、核磁、胃镜）相比，更能简便地反映样本的真实情况，减少了病人的痛苦、辐射伤害及等待时间。
2、本发明使用全自动仪器进行检测，只需加入血清样本，20分钟即可得到准确结果，而CT、核素、胃镜检测时间较长。
3、本发明改进了磁微粒发光法中磁微粒载体的缓冲体系（缓冲液8）。磁微粒是有一定质量的颗粒，成分主要为FeO及Fe2O3，其直径在1-4微米之间且不溶于水，磁微粒抗体偶连物由于连接了蛋白有一定的亲水性。由于重力作用，磁微粒抗体偶连物会在水介质中快速下沉。在一定时间后，甚至会板结，板结后再次混匀的难度很大。
缓冲液8有以下特性：
（1）使磁微粒抗体偶连物在在常温环境下7天内不会出现肉眼可见的下沉；
（2）使试剂B（含磁微粒载体的试剂）在常温环境下保持很好的流动性，在仪器进行吸取操作时时不会影响吸取量，在混匀时，溶液不会出现挂壁残留；
（3）使试剂B在2-8℃的环境下可以变为凝胶状，6个月内可以保持磁微粒抗体偶连物的悬浮性；具体地，在第13个月进行试验，虽然磁微粒抗体偶连物已经完全沉降，但极易混匀；实验数据表明第14个月的重复性结果CV小于8%、与第0月的准确度结果偏差不超过10%；相较于对比组在第14个月的结果的重复性结果CV大于30%、与第0月的准确度结果偏差超过70%，本发明的试剂B稳定性更好。
附图说明
图1为PGI检测试剂条示意图。
图2为PGI检测流程示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
基础实施例
1.材料
1.1设备
蛋白纯化仪、低温高速离心机、分析天平、pH计、磁力搅拌器、磁分离架等。
1.2缓冲液配方（配制量均为1L）
缓冲液1
缓冲液1配方如表1。配制方法：称取14.8-15.1g的乙醇胺、5.8-6.0g的NaCl加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，调试pH值在7.3-7.6之间并定容至1000mL。用0.22μm的滤膜进行过滤。
表1 缓冲液1配方
缓冲液2
缓冲液2配方如表2。配制方法：称取75g的甘氨酸加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，定容至1000mL。用0.22μm的滤膜进行过滤。
表2 缓冲液2配方
缓冲液3
缓冲液3配方如表3。配制方法：称取7.0-10.0g的Na2B4O7·10H2O加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，调试pH值在9.0-11.0之间并定容至1000mL。用0.22μm的滤膜进行过滤。
表3 缓冲液3配方
| 原料名称 | 称取量 | 具体实施例用量 |
| 十水合四硼酸钠 | 7.0-10.0 g | 8g |
| pH值 | 9.0-11.0 | 10 |
| 纯化水 | 定容至1000mL | 定容至1000mL |
缓冲液4
缓冲液4配方如表4。配制方法：称取470-530g的K2HPO4加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，调试pH值在9.0-11.0之间并定容至1000mL。用0.22μm的滤膜进行过滤。
表4 缓冲液4配方
| 原料名称 | 称取量 | 具体实施例用量 |
| 磷酸氢二钾 | 470-530 g | 500g |
| pH值 | 9.0-11.0 | 10 |
| 纯化水 | 定容至1000mL | 定容至1000mL |
缓冲液5
缓冲液5配方如表5。配制方法：称取7.5-8.0g的Tris、9.0g的NaCl、3.0-10.0g的牛血清白蛋白加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，量取5-20mL吐温20加入上述容器中，调试pH值在7.3-7.8之间并定容至1000mL。用0.22μm的滤膜进行过滤。
表5 缓冲液5配方
| 原料名称 | 称取量 | 具体实施例用量 |
| 三羟甲基氨基甲烷 | 7.5-8.0 g | 7.8g |
| 氯化钠 | 9.0 g | 9.0 g |
| 牛血清白蛋白 | 3.0-10.0 g | 5g |
| 吐温20 | 5-20mL | 10mL |
| pH值 | 7.3-7.8 | 7.5 |
| 纯化水 | 定容至1000mL | 定容至1000mL |
缓冲液6
缓冲液6配方如表6。配制方法：称取12.0-15.0g的Tris、5.0-50g的牛血清白蛋白、1.0-30g甘氨酸加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，调试pH值在7.6-8.8之间并定容至1000mL。用0.22μm的滤膜进行过滤。
表6 缓冲液6配方
| 原料名称 | 称取量 | 具体实施例用量 |
| 三羟甲基氨基甲烷 | 12.0-15.0 g | 14.0g |
| 牛血清白蛋白 | 5.0-50 g | 30g |
| 甘氨酸 | 1.0-30 g | 20g |
| pH值 | 7.6-8.8 | 8 |
| 纯化水 | 定容至1000mL | 定容至1000mL |
缓冲液7
缓冲液7配方如表7。配制方法：称取9.0-30g的Tris-HCl、9.0g的NaCl、1.0-30g的牛血清白蛋白、5.0-50g的蔗糖、2.0-40g的酶水解明胶（蛋白来源可以是牛、羊、猪、驴等哺乳动物或鱼类中的一种或多种）、30-250mL酶稳定剂（碱性磷酸酶结合物酶稳定剂，郑州赛润生物技术有限公司，货号EAS05）、0.2-10mL 1M氯化镁（1000mL纯化水中溶解95g氯化镁）、0.2-10mL 1M氯化锌（1000mL纯化水中溶解136g氯化锌）加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，调试pH值在7.4-8.2之间并定容至1000mL。用0.22μm的滤膜进行过滤。
表7 缓冲液7配方
| 原料名称 | 称取量 | 具体实施例用量 |
| Tris-HCl | 3.0-30 g | 20g |
| 氯化钠 | 9.0 g | 9.0 g |
| 牛血清白蛋白 | 1.0-30 g | 20g |
| 蔗糖 | 5.0-50 g | 25g |
| 酶水解明胶 | 2.0-40g | 20g |
| 酶稳定剂 | 30-250mL | 150mL |
| 1M 氯化镁 | 0.2-10mL | 5mL |
| 1M氯化锌 | 0.2-10mL | 5mL |
| pH值 | 7.4-8.2 | 8 |
| 纯化水 | 定容至1000mL | 定容至1000mL |
缓冲液8
称取5.6-5.9g的Na2HPO4·12H2O、0.55-0.60g的 NaH2PO4、5.0-9.0g的NaCl、1.0-10g的牛血清白蛋白、70-135g蔗糖、0.5-10.0g 2-羟乙基纤维素、3-20g明胶（蛋白来源可以是牛、羊、猪、驴等哺乳动物或鱼类中的一种或多种）、5-10g 羟基磷灰石、0.1%-0.3%吐温（吐温20、吐温40、吐温60或吐温80）加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，调试pH值在6.2～8.0之间并定容至1000mL。用0.22μm的滤膜进行过滤。
表8 缓冲液8配方
| 原料名称 | 称取量 |
| 十二水合磷酸氢二钠 | 5.6-5.9 g |
| 磷酸二氢钠 | 0.55-0.60 g |
| 氯化钠 | 5.0-9.0 g |
| 牛血清白蛋白 | 1.0-10 g |
| 蔗糖 | 75-135 g |
| 2-羟乙基纤维素 | 0.5-10.0 g |
| 明胶 | 3.0-20 g |
| 羟基磷灰石 | 5.0-10.0g |
| 吐温 | 0.1%-0.3% |
| PH值 | 6.2-8.0 |
| 纯化水 | 定容至1000mL |
2.方法
2.1酶标记抗体及纯化
2.1.1抗体1的活化
抗体1的活化需在十万级洁净厂房内进行。称取4-8mg 2-亚氨基硫烷盐酸盐（2IT），用缓冲液1溶解至13.76mg/mL。按2-IT与抗体1摩尔比15:1-30:1的比例（即：1mg抗体1加入10-20μL 2IT溶液）将2IT溶液加入抗体1溶液中进行活化。震荡混匀后在室温下反应30分钟。终止活化，按1mg抗体1加入5-20μL 缓冲液2的比例，将缓冲液2加入抗体1溶液中，室温反应10min。使用PD10脱盐柱除去过量的2IT，收集活化后的抗体1。
2.1.2碱性磷酸酶（ALP）的活化
ALP的活化需在十万级洁净厂房内进行。称取2-4mg (N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯（SMCC），用二甲基甲酰胺（DMF）溶解至6.69mg/mL。按SMCC与ALP摩尔比15:1-60:1的比例在ALP溶液中加入SMCC溶液（即：1mg ALP加入8.5-34.5μL SMCC溶液）。震荡混匀后，室温下反应30分钟。终止活化，按1mg ALP加入10-50μL 缓冲液2的比例，将缓冲液2加入ALP溶液中，室温反应10min。使用PD10脱盐柱除去过量的SMCC，收集活化后的ALP。
2.1.3抗体1和ALP的连接
抗体1和ALP的连接需在十万级洁净厂房内进行。按抗体1与ALP质量比1:2-1:1的比例在抗体1溶液中的加入ALP溶液（即：1.0mg抗体加入1.0-2.0mg ALP）。震荡混匀后，将混合物在2℃-8℃环境中反应12-18小时。
2.1.4抗体1偶联物的终止和纯化
抗体1偶联物的终止和纯化需在十万级洁净厂房内进行。称取1-10mg马来酰亚胺，用DMF溶解至9.7mg/mL。按1/10比例，用缓冲液1稀释，得到0.97mg/mL马来酰亚胺溶液。按1mg抗体1加入10μL 0.97mg/mL马来酰亚胺溶液比例加入该溶液，在室温下反应15分钟。准确量取6μL乙醇胺，用缓冲液1溶解至100mM。即在6μL乙醇胺加入994μL缓冲液1。按1mg抗体1加入10-50μL 100mM乙醇胺溶液的比例加入该溶液，震荡混匀。使用超滤浓缩管将待纯化的抗体1偶联物浓缩至0.5-2mg/mL。使用纯化蛋白分析仪和Superdex 200制备级2.6/60凝胶柱进行抗体纯化，洗脱液为缓冲液2。纯化后的液体为酶标抗体偶联物。
2.2抗体2偶联磁微粒
将磁微粒用缓冲液3清洗后，重悬至5mg/mL。按磁微粒与抗体2质量比100:1-100:10的比例在磁微粒溶液中加入抗体2，按缓冲液3与磁微粒体积质量比100:1-100:10的比例在上述混合物中加入缓冲液3，室温反应10min。按缓冲液4与磁微粒体积质量比100:1-1000:10的比例在上述混合物中加入缓冲液4，在37℃环境中反应16-24小时。
用缓冲液5清洗磁微粒偶联物，重悬至5mg/mL。在37℃环境中反应16-24小时。用缓冲液7清洗清洗磁微粒偶联物，重悬至10mg/mL。制成物为抗体磁微粒偶联物。
本试剂盒采用双抗体夹心法测定PGI的含量。样本中PGI和试剂A中的PGI抗体1（博奥森，货号BS-7369R）及试剂B中的PGI抗体2（瑞楚生物，货号G05557）结合，形成“三明治”夹心结构。经洗涤，发光底物被复合物中的酶催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时便发出光子。产生的光子数与样本中PGI的浓度成正相关。
PGI试剂盒由检测试剂条、校准品、质控品、二维码组成。其中检测试剂条由一系列溶液和附件组成一个整体，可以独立检测一个样本。校准品由含有两个浓度的PGI抗原和缓冲液配制而成，用于校准标准曲线；质控品由含有两个浓度的PGI抗原和缓冲液配制而成；二维码中录入了当批次的标准曲线。
表9 试剂盒主要组分
| 试剂盒主要组分 | 装量 |
| 检测试剂条 | 10条 |
| 质控品1 | 200μL×1 |
| 质控品2 | 200μL×1 |
| 校准品1 | 200μL×1 |
| 校准品2 | 200μL×1 |
| 盒签二维码 | 1个 |
检测试剂条由试剂A、试剂B、清洗液、发光底物、测读孔、洗脱套、吸头组成。试剂A为含碱性磷酸酶标记的PGI抗体1溶液；试剂B为含磁微粒标记的PGI抗体2溶液；清洗液用于反应过程的清洗；发光底物为ALP催化的发光底物；测读孔用于最终的检测读值。PGI检测试剂条示意图如图1。
表10试剂条主要组分
| 位置 | 检测试剂条组分 | 装量/数量 |
| 1 | 【无】样本孔位 | / |
| 2 | 吸头 | 1个 |
| 3 | 洗脱套 | 1个 |
| 4 | 清洗液 | 2.0mL |
| 5 | 发光底物 | 180μL |
| 6 | 试剂B | 60μL |
| 7 | 【无】 | / |
| 8 | 试剂A | 80μL |
| 9 | 【无】 | / |
| 10 | 【无】 | / |
| 11 | 【无】反应孔位 | / |
| 12 | 【无】清洗孔位 | / |
| 13 | 【无】清洗孔位 | / |
| 14 | 【无】清洗孔位 | / |
| 15 | 测读孔 | 1个 |
3.生产工艺
3.1校准品、质控品的生产
将PGI重组蛋白作为校准品的原料。以缓冲液6将其溶解，充分混合后配制成2个校准品，浓度为10ng/mL、250ng/mL。
将PGI重组蛋白作为质控品的原料。以缓冲液6将其溶解，充分混合后配制成2个质控品。浓度为50ng/mL、300ng/mL。
3.2试剂A的生产
将酶标记PGI抗体偶联物作为试剂A的原料。以缓冲液7将其充分混匀配制成试剂A。
3.3试剂B的生产
将PGI抗体磁微粒偶联物作为试剂B的原料。以缓冲液8将其充分混匀配制成试剂B。
4.检测方法
采用北京美联泰科生物技术有限公司自研的全自动化学发光免疫分析仪（MS-Fast 系列80A，pro80、pro160、pro240）进行检测。反应所需样本量为30μL，自动检验流程为：
①免疫反应：将30μL样本、50μL试剂B、50μL试剂A依次加入11号孔位，在37℃条件下反应20min。
②磁分离及清洗：在12号孔位加入300μL清洗液，将含磁微粒的混合物用磁力吸出11号孔位，在12号孔位脱磁。清洗2min后。在13、14号孔位分别进行1次磁分离及清洗。
③读值：在15号孔位加入150μL发光底物，将含磁微粒的混合物用磁力吸出14号孔位，在15号孔位脱磁.。碱性磷酸酶催化的发光底物发光后用自研仪器检测相对发光强度（RLU）。
④根据检测的校准品数值可获得一条PGI浓度-发光值标准曲线。该曲线使用四参数Logistic方程拟合。
⑤样本的检测值可以和这条曲线上获得唯一的浓度值对应，从而实现对未知样本的浓度检测。
5.检测指标
5.1准确度
将浓度约为500ng/mL(允许偏差±10%)的胃蛋白酶原I（PGI）液（A）加入到浓度范围0ng/mL-1ng/mL的样本B中，所加入PGI抗原与样本B之间的体积比例为1:9，根据公式（1）计算回收率R，其回收率应在85%-115%范围内。
R=……………(1)
式中：
R—回收率；
V—样品A液的体积；
V0—血清样品B液的体积；
C—血清样品B液加入A液后的3次测量平均值；
C0—血清样品B液的3次测量平均值；
CS—样品A液的浓度。
5.2空白限
将不含任何分析物的样本重复测试20次，得到20次测试结果的浓度值，计算其平均值和标准差（SD）。平均值/>+2SD即为空白限，结果应≤1ng/mL。
5.3线性区间
将接近线性区间上限的高值样本与接近线性区间下限的低值样本或零浓度样本混合成不少于5个稀释浓度，其中低值浓度的样本须接近线性区间的下限。对每一浓度的样本各重复测试3次得到发光值，记录各样品的测量结果，并计算各样品3次测量值的平均值（）。以稀释浓度（/>）为自变量，以测定结果均值（/>）为因变量求出线性回归方程。按公式（2）计算线性回归的相关系数（r），在2-500ng/mL的线性区间内，相关系数r应≥0.990。
……………（2）
式中：
—相关系数；
—稀释比例；
—各个样本测定结果均值；
—稀释比例的均值；
—样本测定结果总均值。
5.4重复性
同批号试剂盒重复测试质控品10次，计算10次测试结果的平均值和标准差SD。按公式（3）计算变异系数(CV)。
…………………(3)
式中：SD—样本测试值的标准差；
—样本测试值的平均值。
5.5批间差
用3个批号的试剂盒分别重复测试质控品10次，计算30次测试结果的平均值和标准差SD，根据公式（3）得出变异系数（CV）。
5.6特异性
在不含任何分析物的样本中加入不低于100ng/mL的胃蛋白酶原II，测3次取均值，测定结果不高于1ng/mL。
实施例1
本实施例所采用的缓冲液8的配方为：
| 原料名称 | 称取量 |
| 十二水合磷酸氢二钠 | 5.9 g |
| 磷酸二氢钠 | 0.55 g |
| 氯化钠 | 9.0 g |
| 牛血清白蛋白 | 1.0 g |
| 蔗糖 | 75 g |
| 2-羟乙基纤维素 | 10.0 g |
| 明胶 | 3.0 g |
| 羟基磷灰石 | 10.0g |
| 吐温-20 | 0.1% |
| PH值 | 6.2 |
| 纯化水 | 定容至1000mL |
实施例2
本实施例所采用的缓冲液8的配方为：
| 原料名称 | 称取量 |
| 十二水合磷酸氢二钠 | 5.6 g |
| 磷酸二氢钠 | 0.60 g |
| 氯化钠 | 5.0 g |
| 牛血清白蛋白 | 10 g |
| 蔗糖 | 135 g |
| 2-羟乙基纤维素 | 0.5 g |
| 明胶 | 20 g |
| 羟基磷灰石 | 5.0g |
| 吐温20 | 0.3% |
| PH值 | 8.0 |
| 纯化水 | 定容至1000mL |
实施例3
本实施例所采用的缓冲液8的配方为：
| 原料名称 | 称取量 |
| 十二水合磷酸氢二钠 | 5.9 g |
| 磷酸二氢钠 | 0.60 g |
| 氯化钠 | 8.0 g |
| 牛血清白蛋白 | 5 g |
| 蔗糖 | 100 g |
| 2-羟乙基纤维素 | 10.0g |
| 明胶 | 10.0 g |
| 羟基磷灰石 | 8.0g |
| 吐温-20 | 0.2% |
| PH值 | 7.0 |
| 纯化水 | 定容至1000mL |
试验例
参照基础实施例的检测方法，验证本实施例的缓冲液8的效果，结果如下：
对比例1
使用现有技术CN112710824B实施例1中的缓冲液进行检测，根据本发明基础实施例中的检测项目对其效果进行验证。
具体检测结果如下：
对比例2-7
参照实施例3设置对比例，具体如下：
根据本发明基础实施例中的检测项目对其效果进行验证。
具体检测结果如下：
| 检测指标 | 对比例2 | 对比例3 | 对比例4 | 对比例5 | 对比例6 | 对比例7 |
| 准确度 | 102% | 119% | 80% | 88% | 76% | 134% |
| 空白限 | 0.4ng/L | 1.6ng/L | 1.7ng/L | 2.4ng/L | 1.3ng/L | 3.3ng/L |
| 重复性CV | 4.5% | 13.6% | 9.3% | 8.2% | 13.4% | 17.5% |
| 批间差CV | 9.6% | 17.8% | 24.7% | 11.7% | 18.2% | 18.6% |
| 特异性 | 1.2g/mL | 3.4g/mL | 4.1g/mL | 5.7g/mL | 4.4g/mL | 7.6g/mL |
以上结果表明，本发明的缓冲液在实际检测中能够起到更好的效果，且各组分之间具有一定的协同作用。
以上实施例仅用于说明本发明，不用于限制本发明，本领域技术人员在本发明公开的技术方案基础上进行常规的替换和调整均属于本发明保护的范围内，包括但不限于本发明保护范围内的含量调节和常规成分替换。
Claims (12)
1.一种磁微粒载体的缓冲体系在制备胃蛋白酶原1检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述的缓冲体系由以下成分组成：十二水合磷酸氢二钠5.6-5.9 g/L；磷酸二氢钠0.55-0.60g/L；氯化钠5-9g/L；牛血清白蛋白1-10 g/L；蔗糖75-135g/L；2-羟乙基纤维素0.5-10g/L；明胶3-20 g/L；羟基磷灰石5-10 g/L；0.1%-0.3%吐温；余量为水；所述缓冲体系pH值6.2-8.0；所述的缓冲体系用于混合胃蛋白酶原1抗体磁微粒偶联物。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的缓冲体系由以下成分组成：十二水合磷酸氢二钠5.9 g/L；磷酸二氢钠0.55-0.60g/L；氯化钠8-9g/L；牛血清白蛋白5-10 g/L；蔗糖75-100g/L；2-羟乙基纤维素10 g/L；明胶3-10 g/L；羟基磷灰石8-10 g/L；0.1%-0.2%吐温；余量为水；所述缓冲体系pH值6.2-7.0。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的缓冲体系由以下成分组成：十二水合磷酸氢二钠5.9 g/L；磷酸二氢钠0.60g/L；氯化钠8g/L；牛血清白蛋白5 g/L；蔗糖100g/L；2-羟乙基纤维素10 g/L；明胶10 g/L；羟基磷灰石8 g/L；0.2%吐温；余量为水；所述缓冲体系pH值7.0。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的试剂盒为磁微粒化学发光法定量分析试剂盒。
5.一种胃蛋白酶原1的检测试剂盒，其特征在于，包括一种磁微粒载体的缓冲体系，所述的缓冲体系由以下成分组成：十二水合磷酸氢二钠5.6-5.9 g/L；磷酸二氢钠0.55-0.60g/L；氯化钠5-9g/L；牛血清白蛋白1-10 g/L；蔗糖75-135g/L；2-羟乙基纤维素0.5-10g/L；明胶3-20 g/L；羟基磷灰石5-10 g/L；0.1%-0.3%吐温；余量为水；所述缓冲体系pH值6.2-8.0。
6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的缓冲体系用于混合胃蛋白酶原1抗体磁微粒偶联物。
7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括酶标记PGI抗体及其缓冲体系。
8.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的酶标记PGI抗体缓冲体系由以下成分组成：Tris-HCl3.0-30 g/L；氯化钠9.0 g/L；牛血清白蛋白1.0-30 g/L；蔗糖5.0-50 g/L；酶水解明胶2.0-40g/L；酶稳定剂30-250mL/L；1M 氯化镁0.2-10mL/L；1M氯化锌0.2-10mL/L；余量为水；pH值7.4-8.2。
9.根据权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的酶标记PGI抗体缓冲体系由以下成分组成：Tris-HCl 20 g/L；氯化钠9.0 g/L；牛血清白蛋白20 g/L；蔗糖25 g/L；酶水解明胶20g/L；酶稳定剂150mL/L；1M 氯化镁5mL/L；1M氯化锌5mL/L；余量为水；pH值8。
10.根据权利要求9所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的酶稳定剂为碱性磷酸酶结合物酶稳定剂。
11.根据权利要求10所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的酶标记PGI抗体中的酶为碱性磷酸酶。
12.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括校准品或质控品。
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