CN116970526A - 甲基杆菌属新种菌株、包含该菌株的组合物以及其作为生物刺激剂和内生固氮细菌的用途 - Google Patents

甲基杆菌属新种菌株、包含该菌株的组合物以及其作为生物刺激剂和内生固氮细菌的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN116970526A
CN116970526A CN202310939397.XA CN202310939397A CN116970526A CN 116970526 A CN116970526 A CN 116970526A CN 202310939397 A CN202310939397 A CN 202310939397A CN 116970526 A CN116970526 A CN 116970526A
Authority
CN
China
Prior art keywords
plant
nitrogen
methylobacterium
strain
plants
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310939397.XA
Other languages
English (en)
Inventor
J·华雷斯莫利纳
F·费尔南德斯马丁
A·J·伯纳贝加西亚
A·维拉马丁内兹
F·J·莫雷诺穆诺兹
R·托雷斯维拉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Simberg Ltd
Original Assignee
Simberg Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Simberg Ltd filed Critical Simberg Ltd
Publication of CN116970526A publication Critical patent/CN116970526A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing liquids as carriers, diluents or solvents
    • A01N25/04—Dispersions, emulsions, suspoemulsions, suspension concentrates or gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing solids as carriers or diluents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P21/00—Plant growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers
    • C05F11/08—Organic fertilisers containing added bacterial cultures, mycelia or the like
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/32—Processes using, or culture media containing, lower alkanols, i.e. C1 to C6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/30—Fuel from waste, e.g. synthetic alcohol or diesel
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
    • Y02P60/20—Reduction of greenhouse gas [GHG] emissions in agriculture, e.g. CO2
    • Y02P60/21—Dinitrogen oxide [N2O], e.g. using aquaponics, hydroponics or efficiency measures
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
    • Y02W30/00—Technologies for solid waste management
    • Y02W30/40—Bio-organic fraction processing; Production of fertilisers from the organic fraction of waste or refuse

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Cultivation Of Plants (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Fertilizers (AREA)

Abstract

本发明涉及农学领域。具体而言，本发明涉及保藏号为CECT 9580的甲基杆菌属新种(Methylobacterium sp.nov.)菌株，包含该菌株的组合物，以及其在植株中作为生物刺激剂和内生固氮细菌的用途。

Description

甲基杆菌属新种菌株、包含该菌株的组合物以及其作为生物 刺激剂和内生固氮细菌的用途
本申请是申请日为2020年5月7日、申请号为202080041209.6、发明名称为“甲基杆菌属新种菌株、包含该菌株的组合物以及其作为生物刺激剂和内生固氮细菌的用途”的申请的分案申请。
发明领域
本发明涉及农学领域。具体而言，本发明涉及甲基杆菌属新种(Methylobacteriumsp.nov.)菌株，包含该菌株的组合物，以及其在植株中作为生物刺激剂和内生固氮细菌的用途。
背景技术
许多肥料在农业领域中是已知的。特别地，基于氮的肥料，例如氨、硝酸铵(NH4NO3)和尿素，通常用于使作物产量保持尽可能高。事实上，植株中的许多生物过程都涉及氮；例如，氮参与氨基酸的生产，因此也参与蛋白质的生产。
然而，施用于作物的基于氮的肥料中只有一小部分转化为植株物质。未转化为植株物质的肥料的量可能在土壤中积累，或者可能流入地表水或地下水，从而造成水污染。
为了减少化学肥料的使用，可以使用包括固氮菌在内的接种剂来部分替代这些化学肥料。
甲基营养菌的主要储存库通常是土壤和水(甜的和咸的)，但这些细菌也存在于各种自然和人工环境中，包括灰尘、湖泊沉积物、空气、面霜、发酵产品、供水网络、浴室和空调系统。
然而，已知的接种剂在刺激植株生长方面不能取得令人满意的结果，也不能替代化学肥料，更不能显著减少此类化学产品的使用。
大多数已知的用作生长刺激剂和/或固氮的微生物不能产生显著的氮含量以显著减少植株生长所需的氮单位。这些已知的微生物产生一些种类的生长素，如吲哚乙酸，其相比于氮固定更能促进生根。
US2015/101373 A1公开了固氮和促进植株生长的甲基杆菌(Methylobacterium)NRRL B-50628和NRRL B-50629。
KR 2007 0106867A公开了固氮和促进植株生长的藤泽氏甲基杆菌(Methylobacterium fujisawaense)CBMB 20。
US2018/168167 A1公开了植株生长促进真菌Glomus Iranicumvar.tenuihypharum BCCM 54871。
SI-WON LEE等人的以下文章公开了丹氏甲基杆菌(Methylobacteriumdankookense)的酶活性和遗传相似性：SI-WON LEE ET AL:“Methylobacteriumdankookense sp.nov.,isolated from drinking water”,THE JOURNAL OFMICROBIOLOGY,vol.47,no.6,(2009-12-01),pages 716-720,XP055350364,DOI:10.1007/s12275-009-0126-6。
发明内容
因此，本发明的一个目的是提供一种甲基杆菌属新种菌株，以及包含该菌株的组合物，以对作物提供积极影响。
本发明的另一个目的是提供一种甲基杆菌属新种菌株，其允许至少减少基于氮的化学肥料的使用。
这些和其他目的通过根据权利要求1所述的甲基杆菌属新种菌株实现。
一方面，本发明提供了保藏号为CECT 9580的甲基杆菌属新种(Methylobacteriumsp.nov.)菌株。
另一方面，本发明提供了一种包含保藏号为CECT 9580的甲基杆菌属新种菌株的组合物。
在一个实施方案中，所述组合物还包含一种或多种农业上可接受的载体和/或一种或多种农业上可接受的助剂。
在一个实施方案中，所述载体和/或助剂选自滑石；粘土；麦芽糊精；脱脂乳；葡萄糖；植物的干提取物，例如茶、木薯和藜麦的干提取物；高岭土；椰壳纤维；硅藻土；几丁质；CaCO3；藻酸盐；角叉菜；表面活性素；鼠李糖脂；槐糖脂；皂苷；油酸钾；及其混合物。
在一个实施方案中，所述组合物的形式选自固体形式、水性液体形式、油性液体形式、乳液形式、半固体形式或凝胶形式。
在一个实施方案中，所述组合物为固体形式。
在一个实施方案中，所述组合物为粉末形式。
在一个实施方案中，所述组合物的特征在于，其作为种子包衣，通过土壤施用，优选滴灌系统或浸湿，或通过叶面施用进行施用。
另一方面，本发明提供了一种用于制备所述组合物的方法，其包括以下步骤：
·提供至少一个根据本发明的保藏号为CECT 9580的甲基杆菌属新种；
·在包括甲醇的液体培养基中接种所述甲基杆菌属新种；
·培养所述甲基杆菌属新种以获得包含甲基杆菌的液体培养物；
·干燥所述液体培养物以获得干的组合物。
在一个实施方案中，所述保藏号为CECT 9580的甲基杆菌属新种分离自保藏号为BCCM 54871的菌根真菌Glomus iranicum var.tenuihypharum的孢子内部。
在一个实施方案中，所述方法还包括在干燥前将一种或多种农业上可接受的载体加入到包含甲基杆菌的液体培养物中的步骤。
在一个实施方案中，所述方法还包括加入一种或多种农业上可接受的助剂的步骤。
在一个实施方案中，将所述一种或多种农业上可接受的助剂加入到所述干的组合物中。
又一方面，本发明提供了根据权利要求1所述的甲基杆菌属新种菌株作为植株的生物刺激剂的用途。
在一个实施方案中，所述植株是园艺作物、粗放草本和禾本科作物、木作物如葡萄树、浆果和豆科植物。
在一个实施方案中，所述用途是用于增加所述植株的产量。
又一方面，本发明提供了所述甲基杆菌属新种菌株用于减少氮的外部输入直到60％的用途。
又一方面，本发明提供了所述组合物作为植株的生物刺激剂的用途。
在一个实施方案中，所述植株是园艺作物、粗放草本和禾本科作物、木作物如葡萄树、浆果和豆科植物。
在一个实施方案中，所述用途是用于增加所述植株的产量。
详细说明
在以下描述中，将参考示例性实施方案描述本发明的特征；然而，这里公开的本发明的任何特征可以与本文公开的一个或多个其他特征组合以提供本发明的进一步实施方案。这样的实施方案应当被认为是本申请所公开的。
因此，本发明的一个目的是甲基杆菌属新种的菌株，其保藏号为CECT 9580。
本发明的甲基杆菌属新种的菌株，由保藏人用参考号SB0023/3标识，于2018年3月21日由西姆博格有限公司(Symborg S.L.，地址为Campus de Espinardo,7,edificioCEEIM,30100Murcia，西班牙)保藏在国际保藏机构西班牙典型培养物保藏中心(International Depositary Authority Colección De Cultivos Tipo，CECT)，Edificio 3 CUE,Parc Científic Universitat de Valencia,Catedrático Agustín Escardino,9,46980 Paterna(Valencia)西班牙，保藏号为CECT 9580。
本发明的菌株是从菌根真菌Glomus iranicum var.tenuihypharum的孢子内部分离的。Glomus iranicum var.tenuihypharum是一种丛枝菌根真菌，其本身是本领域已知的。Glomus iranicum var.tenuihypharum于2013年4月19日由西姆博格有限公司(SymborgS.L.)保藏在地址为Université Catholique de Louvain,Mycothèque de l'Universitécatholique de Louvain(MUCL),Croix du Sud 2,Box L7.05.06,1348 Louvain-la-Neuve的国际保藏机构比利时微生物协调保藏中心(BCCM)，保藏号为BCCM 54871。
WO2015/000612和WO2015/000613中公开了Glomus iranicumvar.tenuihypharum。
根据本发明的菌株显示出与丹氏甲基杆菌(Methylobacterium dankookense)的高度相似性(基于gen 16S的序列为98.7％)。
通过UBCG进行的系统基因组学分析表明丹氏甲基杆菌与本发明的菌株的亲缘关系最近。收集到的数据支持创建新种以容纳本发明的菌株，例如，可以提议其名称为Methylobacterium symbioense nov.。
为了证明它是否可以被视为一个新种，对表型和基因型特征进行了分析。
本发明的菌株为革兰氏阴性菌，严格需氧，其呈芽孢杆菌形状(宽0.8-1μm，长1.2-1.6μm)，具有侧鞭毛，显示为单独或成对，无孢子形成。在MMM琼脂或NFbM琼脂上生长5至7天的菌落呈圆形、粉色，边界清晰，这在其他类似菌株中尚未描述过。它的最佳温度为28℃。在NaCl存在下，生长速率降低，至3％ NaCl或更高时，它停止生长。
通过使用UBCG工具实现了多基因、基于基因组的系统发育方法，以更好地鉴定与本发明菌株CECT 9580亲缘关系最近的菌株。在包含该属内该亲缘关系的15个基因组的UBCG树中探索了根据本发明的菌株的位置。树(图13)显示了与丹氏甲基杆菌(M.dankookense)的特定关系。
有利地，根据实施方案，根据本发明的菌株的特征在于以下事实：其是内生菌固氮细菌，能够向植株提供氮，使外部氮输入减少直到60％。换句话说，相对于不存在所述菌株的情况下所需的外部氮输入，根据本发明的菌株使外部氮输入减少多达60％。
有利地，本发明的菌株能够通过植株从根移动到叶子，以及从叶子移动到根。
本发明的菌株的分离方法包括以下步骤：
·提供Glomus iranicum var.tenuihypharum的一个或多个孢子；
·从孢子中提取细胞质；
·将提取的细胞质接种在含甲醇的培养基中；和
·温育接种的培养基以使本发明的甲基杆菌属新种菌株生长。
根据实施方案，用于分离本发明的菌株的方法包括以下步骤：
·从先前通过外部消毒循环过程进行表面消毒的Glomus iranicumvar.tenuihypharum的孢子中分离以获得孢子溶液；
·在所述过程之后，浸渍孢子溶液，将真菌细胞质在最低盐甲醇培养基(MMM)中培养；
·鉴定本发明菌株的菌落，挑取显示粉色的那些菌落中的一个并重新与培养基分离。
根据实施方案，在提取细胞质之前，孢子用消毒剂处理，以消毒孢子的外壁。
孢子外壁的消毒可以根据其本身是本领域已知的技术进行。例如，孢子外壁的消毒可以通过用次氯酸钠(例如，在缓冲液例如80中的5％次氯酸钠溶液)处理孢子来进行。
从Glomus iranicum var.tenuihypharum的孢子中提取细胞质可以根据其本身是本领域已知的技术进行，例如，通过在合适的缓冲液，优选林格溶液中浸渍孢子。
之后将提取的细胞质接种在含甲醇的培养基(例如，最低盐甲醇培养基(MMM))中。优选地，含甲醇的培养基具有以下组成：甲醇，20.0ml；NaNO3，0.5g；(NH4)2SO4，0.5g；MgSO4·7H2O，0.5g；K2HPO4，1.0g；FeSO4·7H2O，0.01g；CaCl2·2H2O，0.01g；KCl，0.5g；维生素溶液，1.0ml；微量营养素溶液，2.0ml；琼脂，12g；pH 7.20。将接种的培养基温育，优选在28℃下温育5天，以允许根据本发明的甲基杆菌属新种菌株生长。
根据实施方案，温育可以在25℃至30℃(优选28℃)的温度下进行。
根据实施方案，温育可以在5至9(优选7)的pH下进行。
在本发明的菌株进行温育和生长之后，通过产生典型的粉色来肉眼鉴定菌落。然后，挑取一个或多个菌落并重新分离，优选至少分离三次，以确保它们没有任何可能的污染。
本发明的菌株适合被包含在组合物中。
因此，本发明的另一个目的是一种包含保藏号为CECT 9580的甲基杆菌属新种菌株的组合物。
根据实施方案，本发明的组合物可以包含一种或多种农业上可接受的载体和/或一种或多种农业上可接受的助剂(co-formulant)。
农业上可接受的载体和农业上可接受的助剂本身是本领域已知的。
根据实施方案，载体和/或助剂可以选自滑石；粘土；麦芽糊精；脱脂乳；葡萄糖；植物的干提取物，例如茶、木薯和藜麦的干提取物；高岭土；椰壳纤维；硅藻土；几丁质；CaCO3；藻酸盐；角叉菜(carragen)；表面活性素(surfactin)；鼠李糖脂；槐糖脂；皂苷；油酸钾；及其混合物。
根据实施方案，组合物可以是固体形式、水性液体形式、油性液体形式、乳液形式、半固体形式或凝胶形式。
优选地，组合物为固体形式，更优选地，组合物为粉末形式。
本发明的另一个目的是一种用于制备包含本发明的菌株即保藏号为CECT 9580的甲基杆菌属新种的菌株的组合物的方法。
根据实施方案，本发明的组合物的特征在于其作为种子包衣；通过土壤施用，例如通过滴灌系统或浸湿(drench)；或通过叶面施用来施用。
制备本发明的组合物的方法包括以下步骤：
·提供至少一个根据本发明的保藏号为CECT 9580的甲基杆菌属新种；
·在包括甲醇的液体培养基中接种所述甲基杆菌属新种；
·培养所述甲基杆菌属新种以获得包含甲基杆菌的液体培养物；
·干燥所述液体培养物以获得干的组合物。
有利地，在培养步骤结束时，通过测量培养物中细菌的光密度和生物质生产量来证实本发明的甲基杆菌的最终产生。
根据实施方案，本发明的保藏号为CECT 9580的甲基杆菌属新种分离自保藏号为BCCM 54871的菌根真菌Glomus iranicum var.tenuihypharum的孢子内部。
根据实施方案，包括甲醇的培养基是MMMM，即，具有甲醇的最低矿物培养基。
根据实施方案，所述培养所述甲基杆菌属新种以获得包含甲基杆菌的液体培养物的步骤可以通过在25℃至30℃(优选28℃)的温度下温育3-10天，优选5-7天来进行。
根据实施方案，上述提供至少一个本发明的甲基杆菌属新种的步骤可以包括使用无氮培养基例如NFBG(补充有葡萄糖的无氮细菌培养基)回收本发明的菌株的步骤，例如NFBG培养基可以具有以下组成：葡萄糖；苹果酸5.0g；甲醇20.0ml；(NH4)6Mo7O24 4H2O0.002g；MgSO4 7H2O 0.2g；K2HPO4 0.1g；KH2PO4 0.4g；FeCl3 0.01g；NaCl 0.1g；KOH 4.8g；微量营养素溶液2.0ml；维生素溶液1.0ml；在KOH 2N 2.0ml中的0.5％溴百里酚蓝溶液，pH6.9。
根据实施方案，使用无氮培养基回收本发明的甲基杆菌属新种可以通过以下进行：在25℃至30℃(优选28℃)的温度下温育3-10天，优选5-7天。
有利地，本发明的菌株形成红粉色的菌落。因此，可以容易地鉴定本发明菌株的菌落。
根据实施方案，上述提供至少一个本发明的甲基杆菌属新种的步骤还可以包括以下步骤：选择本发明的甲基杆菌属新种的菌落并使用无氮、包括甲醇的培养基(例如MMMNF，含甲醇且无氮的最低矿物培养基)选择性地使所述甲基杆菌属新种生长。
根据实施方案，在使用无氮、包括甲醇的培养基选择性生长之后，可以选择本发明的甲基杆菌属新种的菌落并在包括甲醇的液体培养基中接种。根据实施方案，所述选择性生长的步骤可以通过在25℃至30℃(优选28℃)的温度温育3-10天、优选5-7天来进行。
根据实施方案，上述培养所述甲基杆菌属新种以获得包含甲基杆菌的液体培养物的步骤可以通过发酵进行。
根据实施方案，上述培养所述甲基杆菌属新种以获得包含甲基杆菌的液体培养物的步骤可以包括生长以获得待用作预接种物的甲基杆菌属新种的培养物的第一步骤，以及优选通过发酵进行大规模生长的第二步骤。
本发明的另一个目的是本发明的保藏号为CECT 9580的甲基杆菌属新种菌株作为植株中的生物刺激剂和/或内生固氮细菌的用途。
事实上，令人惊讶地观察到，本发明的菌株以及包含它的组合物能够刺激植株以提高植株的健康和产量。
此外，有利地，已经令人惊讶地观察到，本发明的菌株以及包含它的组合物可用于向植株提供氮。特别地，已经观察到，通过向植株提供本发明的菌株，可以显著减少化学氮肥的使用；例如，已经观察到使用本发明的菌株或包含它的组合物可以获得高达60％的化学氮肥量的减少。
因此，本发明的另一个目的是本发明的甲基杆菌属新种菌株用于减少氮的外部输入优选直到60％的用途。
有利地，本发明的菌株可以单独提供给植株，或作为包括其他农业上可接受的组分的组合物的组分提供给植株。
已经观察到，本发明的菌株可以通过固定大气氮从根和/或地上部分刺激植株。不受具体科学解释的束缚，已经观察到本发明的菌株渗透植株组织中并激活微生物酶系统，该系统包含固氮酶复合物，该酶复合物将大气中的氮还原为NH4 +，其可能是在特定生理条件下，通过线粒体Glu脱氢酶(NADH-GDH)将2-氧戊二酸(2-oxoglutarate)胺化而直接掺入Glu(谷氨酸)中，然后通过胞质谷氨酰胺合成酶1(GS1)掺入谷氨酰胺中。谷氨酰胺氧戊二酸氨基转移酶是一种酶，通常缩写为GOGAT，它从谷氨酰胺和α-酮戊二酸产生谷氨酸，并且与谷氨酰胺合成酶一起，在植株光合同化中的氮同化的调节中起核心作用。
有利地，还观察到本发明的菌株增加了磷的溶解度(这在幼苗阶段特别有用)，能够产生刺激次生根发育的生长素和胡萝卜素。
有利地，可以将本发明的菌株提供给多种作物。
例如，当提供给园艺栽培、禾本科植株、柑橘栽培、核果(stone fruits)(核果(drupe))栽培、葡萄树栽培和林业时，本发明的菌株特别有用。
本发明菌株的另一个优点是它有利于宿主植株中的光合作用，因此有利于植株生物质的增加。
附图简述
·图1显示了在生长室在小窝(alveoli)中生长的植株。
·图2显示了在消毒后暴露于特定培养基以使甲基杆菌生长的植物组织样品(根(a)、茎(b)和叶(c))。
·图3显示了用本发明的菌株通过拌种(a-c)、灌溉(d-f)和叶面施用(g-i)处理的植株的植株组织样品的图像，这些植株组织样品暴露于用于甲基杆菌(metilobacteria)的特定营养培养基。
·图4显示了采用使用本发明菌株的处理1和处理2对照的试验的分布的图像。田地1(a)、田地2(b)、田地3(c)。
·图5显示了施用30天后SPAD测量值的图。
·图6显示了田地1(a)、田地2(b)和田地3(c)的NDVI指数。
·图7显示了田地1(a)、田地2(b)和田地3(c)的组合CIR指数。
·图8显示了采用使用本发明菌株的处理1和处理2对照的试验的分布的图像。田地1(a)，田地2(b)。
·图9显示了施用30天后SPAD测量值的图。
·图10显示了处理45天后田地1的NDVI指数，每15天测量一次。
·图11显示了处理45天后田地2的NDVI指数，每15天测量一次。
·图12A显示了施用处理时的喷雾器，图12B显示了施用处理时的谷物大小。
·图13显示了通过使用氨基酸序列用UBCG生成的系统发育树。节点处的数字表示基因支持指数(最大值为92)。基因组登录号在括号中标出。条(Bar)，每个位置0.05个取代。
实验部分
将参考以下非限制性实施例说明本发明的其他方面和优点。
本发明的菌株获自Glomus iranicum var.tenuihypharum的孢子。
它是从孢子内部分离出来的，通过用0.5％次氯酸钠加Tween 80洗涤孢子外壁5分钟，进行5次消毒循环的方法对孢子外壁消毒几次。之后，将孢子溶液浸渍并在最低盐甲醇培养基(MMM)(甲醇，20.0ml；NaNO3，0.5g；(NH4)2SO4，0.5g；MgSO4·7H2O，0.5g；K2HPO4，1.0g；FeSO4·7H2O，0.01g；CaCl2·2H2O，0.01g；KCl，0.5g；维生素溶液，1.0ml；微量营养素溶液，2.0ml；琼脂，12g；pH 7.20)中在28℃下播种真菌细胞质5天。从培养基中鉴定出5个不同的菌落，挑出呈粉色的那些菌落并重新分离至少3次，以确保它们没有任何其他可能的污染。
实施例1
试验1.本发明的菌株的施用途径
在通过叶面施用、土壤施用和种子包衣(即拌种)施用本发明的菌株，即保藏号为CECT 9580的甲基杆菌属新种菌株的栽培室中进行了实验。
在叶、茎和根中评估本发明菌株的存在。还评价了菌株在植株中从根到叶和从叶到根的行进时间，以及菌株通过根气孔和种子的渗透。
为了证实甲基杆菌进入植株中和不同组织的定植，进行了一项试验，将种子接种到小窝中，将玉米植株接种到培养盆中。在这种情况下，采用了三种处理方法：种子包衣、通过灌溉施用和叶面施用。在接种后的不同小时和天数(“h.a.i.”和“d.a.i.”)，在三个生物重复样品的根、茎和叶中分析了本发明菌株菌落的存在。
·材料和方法
使用的植株材料和微生物
将涂覆有咯菌腈(Fludioxonil)和精甲霜灵(Mefenoxam)杀真菌剂的玉米种子(玉米(Zea mays L.))用作种植材料。属于本发明的甲基杆菌属新种和织片草螺菌(Herbaspirillum seropedicae)菌株的细菌用作微生物接种剂。
玉米植株的生长条件
对于玉米植株的生长，使用小塑料容器，将基于比例为2:1的硅砂和椰子纤维的无菌基质混合物，放置在24℃和60％相对湿度(RH)的存在光的生长室中，如图1所示，持续4周。每周用无菌脱钙水给植株浇水两次。播种15天后，用0.3％的N:P:K为4:1.7:4.5的营养溶液加微量营养素溶液浇灌植株仅一次。
用本发明的菌株处理玉米植株
通过种子包衣(即拌种)、灌溉和叶面施用(即叶面途径)的方式，用，即保藏号为CECT 9580的甲基杆菌属新种菌株对玉米植株进行不同处理。接种物以固体形式(粉末)使用。粉末中的细菌浓度为约1 x-109CFU/g。将研究的每种处理与作为阴性对照的未经处理的植株进行比较。此外，使用固氮细菌织片草螺菌作为试验的阳性对照，其固体形式浓度为1.2-x 106CFU/g。
a)种子包衣
用本发明的甲基杆菌属新种菌株的粉末接种物对玉米种子进行包衣。
b)灌溉途径
播种后4天后，通过灌溉以每株植株1-1.2×106CFU之间的浓度接种本发明的甲基杆菌属新种菌株和织片草螺菌。为此目的，将固体形式的细菌接种物在水中稀释以进行进一步处理。
c)叶面途径
当植株出现两到三片真叶时，对应于分类BBCH 12-13，通过叶面途径接种本发明的甲基杆菌属新种菌株和织片草螺菌。将固体细菌接种物在水中稀释至1-x 106CFU/植株的浓度。之前，将基质用塑料覆盖以防止被处理污染。通过用喷雾器喷洒叶子来进行细菌处理。
·在根、茎和叶中检测本发明的甲基杆菌属新种菌株的菌落
用本发明的甲基杆菌属新种菌株处理后，分析了该细菌及其阳性对照织片草螺菌在不同植株组织中的存在。对这些进行表面消毒以避免假阳性。为此，将它们在乙醇(70％)溶液中浸泡30秒，并在次氯酸钠(1％)溶液中浸泡2分钟，然后用双蒸水洗涤。一旦消毒(根和叶)，在茎上进行纵向和横向切割，随后转移到用于甲基杆菌的特定培养基中。图2显示了在消毒后暴露于特定培养基中以使甲基杆菌生长的此类植株组织样品。特别是，图2的图“a”显示了根样品，图2的图“b”显示了茎样品，图2的图“c”显示了叶样品。置于培养基中的组织样品在28℃下温育7天。在Leica Wetzlar立体显微镜中观察菌落生长，并使用MC170HD Leica相机拍摄照片。在接种(灌溉和叶面)或发芽(包衣)后在第一天的1到24小时之间以及在第2-10天之间收获植株用于分析。对于三种处理和所分析的时间中的每一个使用三个生物重复样品。
·所得结果的统计分析
对于结果的统计分析，使用的方法是简单的ANOVA分析以及最小显著差异的Fisher检验，显著性水平为p<0.05。使用STATGRAPHICS Centurion 18软件以及MicrosoftExcel进行数据处理和图形表示。
·结果
本发明的甲基杆菌属新种菌株的施用效果：植株的感染和定殖。
(a)拌种
在48小时(这与种子发芽的时间一致)时进行第一次评价，以检测通过包衣接种的处理植株中的细菌菌落。分析显示，两天后本发明的甲基杆菌属新种菌株存在于内部组织中，4天后它们存在于茎中并且6天后它们出现在叶中。因此，随着植株的发育，发生了细菌向新结构的传递。
b)灌溉
在通过灌溉接种的情况下，在处理后1小时，细菌存在于根的内部组织中，在4至8天之间上升到茎，10天到达叶片。值得强调的是，在这种情况下，在所有重复样品中这都不是均匀的。
c)叶面途径
通过叶面途径，接种后1小时在叶的内部组织中发现细菌，在处理后6小时后在茎和根中均检测到细菌。
图3显示了通过拌种(a-c)、灌溉(d-f)和叶面施用(g-i)用本发明的菌株处理的植株的植株组织样品暴露于用于甲基杆菌的特定营养培养基的图像。
下文报告的表1显示了在10天内在植株的不同部分中检测本发明的甲基杆菌属新种菌株的菌落相关的数据。图例：H：小时；d：天；细菌的存在为20-40％(+)、50-80％(++)和90-100％(+++)。茎A：顶端茎；茎B：基部茎。
·结论
在该试验中，确定微生物通过根区和地上部分都能有效进入。因此，在通过任何方法处理的植株中，定位了本发明的甲基杆菌属新种菌株的菌落，这表明该内生菌微生物从根部运输到叶部并返回。
实施例2试验2：使用本发明的菌株在长周期玉米栽培中减少40％氮肥的功效。
·目的
在常规生长条件下减少40％的氮覆盖施肥的情况下，通过叶的绿色进化(SPAD)、植被指数、植株中的氮含量、叶片中微生物的浓度和生产产量(production yield)，来了解本发明的菌株对玉米(corn)(玉米(maize))发育的功效。
·材料和方法
试验田地和施肥
该试验在西班牙Huesca的三个农场进行。第一个农场位于Huesca的Montesusin，坐标为41°52'12.7"N，0°23'11.1"W；第二个农场的坐标为41°40'47.6"N，0°17'09.5"EBelver de cinca，Huesca；第三个农场的坐标为41°47'58.1"N，0°23'56.0"E Tamarite delitera，Huesca。
施肥建议是常规施肥和减少40％的减氮处理。为此目的，使用施肥机按本文下面报告的表2中指定的数量分配肥料。
表2显示了每小块地上每种肥料中使用的肥料数量、类型和氮肥单位(NFU)。
·田地中处理的分布
这些田地具有以下表面：田地1(5.43公顷)、田地2(3.28公顷)和田地3(2.34公顷)。取了两个16米宽的连续区域来评价参数。标有“1”的区域为处理区域，标有“2”的区域为对照区域。
图4显示了采用使用本发明的甲基杆菌属新种菌株的处理1(在区域1中)和处理2对照(在区域2中)的测试的分布。具体地，图4的图“a”显示了田地1，图4的图“b”显示了田地2，而图4的图“c”显示了田地3。
·本发明的甲基杆菌属新种菌株在长周期玉米中的培养和应用中的特征
对于谷物选择玉米种子(Zea mays)，品种为“40F”，种植比率为300kg/ha，播种深度为3cm，行间隔为75cm，同一行内间隔15cm。在洒水器之间每条播道的宽度为16m。播种日期为2018年5月1日至5日，五天后出现茎，施用本发明的甲基杆菌属新种菌株的日期为播种后40天，即2018年6月12日，使用条播机在农民指定的田地中播种，所述田地是西班牙玉米种植的代表性区域。进行随机设计，选择一小块田地进行每种处理。
在氮施肥减少40％的情况下，通过叶面施用以333g/ha(3×107CFU/g)的剂量施用本发明的甲基杆菌属新种菌株。将结果与常规施肥处理进行比较。当植株处于BBCH等级的第13-14阶段时，在气温为17℃，相对湿度为52％，北向风速为2.3mps，叶片上没有露水，云度为60％的情况下，用喷雾器进行叶面施用，每公顷喷洒300-400升液体培养基(broth)。
·参数和评价方法
计数每g叶的菌落形成单位(CFU/g)
测量这个参数是为了确定微生物在整个培养周期中以及以什么数量存在于叶片上。通过以下步骤对其进行测量：从20株以下植株的第四片叶子中取出1g叶，并通过将它们播种在以甲醇为碳源的无氮选择性培养基中进行系列稀释。
SPAD(叶中的叶绿素水平)
该参数是植株营养状况良好的指标，与氮和铁水平密切相关。为此，使用了称为SPAD(土壤植株分析开发)的仪表，并对每种处理的100株以下植株的第四片叶子进行了100次测量。
叶、茎和穗轴谷物中的氮
该参数是收获时每个植株组织中积累的氮量的指标。从100株植株中取出叶、茎和穗轴谷物，通过Kjeldahl法分析总氮。
无人机照片(无人机飞行获得的不同指数)
NDVI(归一化差异植被指数)。对比植株叶子中反映的红光和近红外波段。它是冠层密度的一般指标，常用于区分活的绿色植被和土壤，土壤中的叶绿素越多看起来越蓝。
组合CIR(红外颜色)。红外复合色，其结合了NIR(近红外)、红色和绿色波段。健康的植被反映高水平的NIR(近红外)并且看起来是红色的。潜在植被通常呈绿色或古铜色，而沙质土壤呈浅棕色，粘质土壤呈深棕色或蓝绿色。
产量(Yield)
为了评价收获物的产量，随机抽取6个地块并对30平方米的表面积进行收获。对获得的谷物进行称重，扣除每个区域的湿度损失。
统计分析
使用适用于Windows 5.1的Statgraphics Plus软件(Manugistics,Inc.,USA)，通过ANOVA分析每个参数的因素(SPAD和性能)及其相互作用。
·结果
菌落形成单位(cfu)的计数
下面报告的表3显示了与处理后(4/6/18)和处理(4/6/18)后一个月每g叶和施用罐中的菌落形成单位(CFU)相关的数据。
在施用罐中，存在产品的均匀混合物并且正确施用在植株中，在玉米叶中施用一个月后，菌群得以维持并且它们的生长增加，如在所有小地块中所见。
SPAD
图5显示了施用本发明的甲基杆菌属新种菌株后30天的SPAD测量结果。
施用一个月后，植株保持与对照相同的SPAD水平，所有田地均无显著差异，证实化学氮的减少没有对植株产生负面影响，因为它是由细菌贡献的。
叶、茎和穗轴中的氮
下面报告的表4显示了有关在收获时在玉米植株的不同组织中发现的氮浓度(g/植株)的数据。
无人机照片(45幅)
图6显示了田地1(图“a”)、田地2(图“b”)和田地3(图“c”)的用于NDVI指数确定的无人机照片。
图7显示了田地1(图“a”)、田地2(图“b”)和田地3(图“c”)的用于组合CIR指数确定的无人机照片。
考虑NDVI和组合CIR指数，与对照相比，在任何田地中在植株冠层密度、叶绿素和植株健康(蓝色和红色的强度)方面均未观察到差异，除了田地3，其在灌溉水压方面存在问题，在洒水器未正确浇水的区域观察到作物的色差。
产量
下面报告的表5显示了有关每块田地的产量的数据。
在表5中，行上后面为不同字母的平均值彼此具有显著差异。
在田地1中，对照的产量为16881kg/ha。在施用本发明的甲基杆菌属新种菌株的情况下，产量为17511kg/ha；这意味着生产量增加了4％。
在田地2中，对照的产量为14346kg/ha。在施用本发明的甲基杆菌属新种菌株的情况下，产量为18335kg/ha，即生产量增加了28％。
在田地3中，对照的产量为14312kg/ha。本发明的甲基杆菌属新种菌株的施用产生了17539kg/ha的产量，导致净生产量增加了22.5％。
下面报告的表6显示了有关氮平衡——通过施肥提供(输入)的氮、提取后植株同化的氮、植株中输入和提取之间的同化平衡的数据。每吨谷物的氮需求(即所需输入)和每吨谷物的氮提取。
/>
·结论
本发明的甲基杆菌属新种菌株在玉米种植和植株中微生物的持续存在方面具有有效的应用。
本发明的菌株保持与常规施肥相同的SPAD(叶绿素)、植株健康和植株冠层密度(NDVI指数和组合CIR指数)水平，其中常规施肥使用更高量的氮肥。
本发明的菌株提供了覆盖施肥中减少了40％的总氮肥单位，并且还提供了4％至27％的生产量增加。由于每株植株只有一个穗轴，这种增加将与谷物的具体重量和/或运行次数有关。
如果我们观察通过施肥和所进行的植株中氮的提取贡献的氮肥单位的平衡，氮增长为每公顷66到111kg氮。这意味着那些千克的氮在培养周期中被本发明的菌株所固定。这个结果是在处理植株中产生的每吨谷物的氮需求中间接观察到的，因为生产一吨谷物的需求低于对照。还必须考虑到，生产1吨处理谷物的需求低于生产该吨谷物所进行的氮提取。在对照中情况正好相反，因为生产相同量的谷物需要更多的氮。
实施例3
试验3.使用本发明的甲基杆菌属新种菌株在玉米的短周期种植中减少30％氮肥的功效。
·目的
在常规生长条件下减少30％的氮覆盖施肥的情况下，通过叶的绿色进化(SPAD)、植被指数、植株中的氮水平、叶中微生物的浓度和产量，来了解本发明的甲基杆菌属新种菌株对玉米(玉米)发育的功效。
·材料和方法
试验田地和施肥
该试验在西班牙在两块田地中进行：一块田地位于Huesca的Pomar de Cinca，坐标为41°50'13.8"N，0°05'38.0"E；另一块位于Albacete的Finca Orán，坐标为38°49'55.3"N，1°50'27.1"W。
施肥建议是常规施肥和减少30％的减氮处理。为此，使用施肥机按照本文下面报告的表7中指定的数量分配肥料。
表7显示了每小块地上每种肥料中使用的肥料的数量、类型和氮肥单位(NFU)。
·田地中处理的分布
这些田地具有以下表面：田地1(74公顷)、田地2(3.67公顷)；取了两个16米宽的连续区域来评价参数。标有“1”的区域为处理区域，标有“2”的区域为对照区域。
图8显示了采用使用本发明的甲基杆菌属新种菌株的处理1(在区域1中)和处理2对照(在区域2中)的测试的分布。特别地，图8的图“a”显示了田地1，图8的图“b”显示了田地2。
·本发明的甲基杆菌属新种菌株在培养和应用中的特征
在田地1中选择“Guasi”品种的玉米种子，在田地2中选择DKC 5032 YG品种，种植比率为300kg/ha，播种深度为3cm，行间隔为75cm，同一行内间隔15cm。每条播道的宽度为16m。播种日期对于田地1为6月20日，对于田地2为6月30日，10天后出现茎，施用本发明的甲基杆菌属新种菌株的日期分别为播种后22天，即2018年7月12日(田地1)，和20天，即2018年7月20日(田地2)。
通过叶面施用以333g/ha(3×107CFU/g)的剂量施用本发明的甲基杆菌属新种菌株。
当植株处于BBCH等级的第13-14阶段时，在气温分别为22和20℃，相对湿度分别为72和58％，北向和西北向风速分别为2.3和12mps，叶片上没有露水，云度分别为0和15％的情况下，用喷雾器机器进行叶面施用，每公顷喷洒300-400升液体培养基。
·参数和评价方法
计数每g叶的菌落形成单位(CFU/g)
测量这个参数是为了确定微生物在整个培养周期中以及以什么数量存在于叶片上。通过以下步骤对其进行测量：从20株以下植株的第四片叶子中取出1g叶，并通过将它们播种在以甲醇为碳源的无氮选择性培养基中进行系列稀释。
SPAD(叶中的叶绿素水平)
该参数是植株营养状况良好的指标，与氮和铁水平密切相关。为此，使用了称为SPAD(土壤植株分析开发)的仪表，并对每种处理的100株以下植株的第四片叶子进行了100次测量。
叶、茎和穗轴谷物中的氮
该参数是收获时每个植株组织中积累的氮量的指标。从100株植株中取出叶、茎和穗轴谷物，通过Kjeldahl法分析总氮。
卫星照片
将来自ESA哥白尼卫星的照片下载并用Qgis程序处理以获得NDVI指数。
NDVI(归一化差异植被指数)。其对比植株叶子中反映的红光和近红外波段。它是冠层密度的一般指标，常用于区分活的绿色植被和土壤，土壤中的叶绿素越多看起来越蓝。
产量
为了评价收获物的产量，随机抽取6个地块并对30平方米的表面积进行收获。对获得的谷物进行称重，扣除每个区域的湿度损失。
统计分析
使用适用于Windows 5.1的Statgraphics Plus软件(Manugistics,Inc.,USA)，通过ANOVA分析每个参数的因素(SPAD和产量)及其相互作用。
·结果
菌落形成单位(cfu)的计数
下面报告的表8显示了与处理后(12-20/7/18)和处理一个月后(15/8/18)，每g叶和施用罐(12-20/7/18)中的菌落形成单位(CFU)相关的数据。
在施用罐中，存在产品的均匀混合物并且在植株中存在正确的施用，在玉米叶中施用一个月后，菌群得以维持并且它们的生长增加，如在所有田地中所见。
SPAD
图9显示了施用30天后的SPAD测量结果。
施用一个月后，植株保持与对照相同的SPAD水平，所有田地均无显著差异，证实化学氮的减少没有对植株产生负面影响，因为它是由细菌贡献的。
叶、茎和穗轴中的氮
下面报告的表9显示了关于玉米植株的每个组织中的氮量(g)的数据。
卫星照片
图10显示了在处理45天后，田地1的用于NDVI指数确定的卫星照片，每15天测量一次。
图11显示了在处理45天后，田地2的用于NDVI指数确定的卫星照片，每15天测量一次。
在采用本发明的甲基杆菌属新种菌株进行处理并减少施肥的情况下，与对照相比，在整个种植周期中观察到NDVI值(绿色强度)的均匀性。
产量
下面报告的表10显示了有关每块田地产量的数据。
在田地1中，对照的产量为10515kg/ha，然而，在施用本发明的菌株的情况下，获得产量11828kg/ha；产量增加了12.5％。
在田地2中，对照的产量为12525kg/ha，在施用本发明的菌株的情况下，获得产量12863kg/ha；产量增加了2.7％。
表11显示了有关氮平衡——通过施肥提供的氮、提取后植株同化的氮、植株中输入和提取之间的同化平衡的数据。每吨谷物的氮需求和每吨谷物的氮提取。
·结论
本发明的甲基杆菌属新种菌株在玉米栽培和植株中微生物的持续存在方面具有有效的应用。
本发明的甲基杆菌属新种菌株保持与常规施肥相同的SPAD(叶绿素)、植株健康和植株冠层密度(NDVI指数)水平，其中常规施肥使用更高量的氮肥。
对于产量方面，本发明的菌株在覆盖施肥中减少了30％的总氮肥单位，并且还提供了2.7％至12.5％的生产量增加。由于每株植株只有一个穗轴，这种增加将与谷物的具体重量和/或运行次数有关。
如果我们观察通过施肥和所进行的植株中氮的提取贡献的氮肥单位的平衡，氮增长为每公顷氮43到57kg氮。这意味着那些千克的氮在生长周期期间被本发明的菌株所固定。这个结果是在用本发明的菌株处理的植株中产生的每吨谷物的氮需求中间接观察到的，因为生产一吨谷物的需求低于对照。还必须考虑到，生产1吨处理谷物的需求低于生产该吨谷物所进行的氮提取；并且在对照中情况正好相反，因为生产相同量的谷物需要更多的氮。
实施例4
试验4：在不同剂量的氮施肥下，评价本发明的甲基杆菌属新种菌株在草莓培养中的功效。
·目的
通过叶的绿色进化(SPAD)、植株中的氮水平、叶中微生物的浓度和产量来了解本发明的甲基杆菌属新种菌株对以不同剂量进行氮施肥的草莓作物的发育的功效，所述剂量为常规施肥的0、25、50、75和100％。
·材料和方法
试验田地和施肥
该试验在位于Symborg的实验农场中的田地中进行，其位于Murcia的Los Martínez del Puerto，坐标为37°48'59.6"N，1°05'43.6"W。田地面积为192m2，宽8m，长24m。
所有处理的灌溉和施肥管理都不同。矿物施肥程序由5种不同氮含量的溶液组成。
表12显示了处理的不同施肥，以UFN为单位进行测量。
·处理
表13涉及基于5个施肥水平的10个处理，其又分为用本发明的甲基杆菌菌株处理的和未经处理的。
·本发明的甲基杆菌属新种菌株的培养和应用的特征
植物材料
裸根草莓植株，品种为Fortuna，由苗圃提供种植。
种植园的藤架和密度
种植藤架为种植行间距2m，植株间距0.1m，以五点形种植在1m×0.18m×0.15m的椰子纤维袋中，密度为每公顷100,000株，每平方米10株，田地面积为192m2，使得整个试验有1920株植株。
种植和移除作物的日期
草莓的移植于2017年11月2日进行，在2018年6月1日移除作物。
液压设计
使用3.5kv电动泵，其连接到32mm的辅助管道，该辅助管道与16mm的软管连接，带有3l/h的自补偿外部滴头。
灌溉水
试验所用灌溉水来自海水淡化厂，整个试验每株用水130升，硝酸盐浓度为每升0.1g(每株13g)。所述水的特性总结在下表中(表14)。下面报告的表14显示了有关灌溉水特性的数据。
通过叶面施用以333g/ha(3×107CFU/g)的剂量施用本发明的菌株。
当植株处于BBCH等级的第13-14阶段时，在气温为20℃，相对湿度为50％，叶片上没有露水，云度为15％的情况下，用背负式喷雾机以每公顷200升液体培养基的比率进行叶面施用。
·参数和评价方法
计数每g叶的菌落形成单位(CFU/g)
测量这个参数是为了确定微生物在整个培养周期中以及以什么数量存在于叶片上。通过以下步骤对其进行测量：从50株植株取出1g叶，并通过将它们播种在以甲醇为碳源的无氮选择性培养基中进行系列稀释。
叶中的氮
该参数是分析时每个植株组织中积累的氮量的指标。从100株植株中取出叶、茎和果实，通过Kjeldahl法分析总氮。
产量
为了评价作物产量，在整个作物周期对每个处理随机选择30株，并收获。
统计分析
使用适用于Windows 5.1的Statgraphics Plus软件(Manugistics,Inc.,USA)，通过ANOVA分析每个参数的因素(产量)及其相互作用。
·结果
每g叶的菌落形成单位的计数(CFU/g)
下面报告的表15显示了有关施用后每月测量的每g叶的菌落形成单位的结果。
通过菌落采样的方式，在植株的整个培养周期中观察到本发明的甲基杆菌属新种菌株的持续存在。
总氮
下文报告的表16显示了与草莓作物中氮浓度(g/100g植株)、总氮(g/植株)和植株鲜重相关的数据。
表16显示，在对照和用本发明的甲基杆菌属新种菌株处理的那些样品中，氮浓度随着氮施肥的增加而增加。
在用本发明的菌株处理的植株中观察到总氮增加，直到达到氮肥的75％，最高值为3.28，用本发明的菌株处理的植株中氮浓度的最高值。施肥100％时，处理植株中的氮含量降低。
生产量(Production)
从它们开始生产的那一刻起，每周收获30株植株，在整个培养周期从每个处理中随机选择。
下面报告的表17显示了每个处理的每株植株的产量(千克)。
具有最高生产量的处理是9(75％的氮并施用本发明的甲基杆菌属新种菌株)，每株1.4千克，与其他处理差异显著。
使用0UFN的处理是每株具有最低kg草莓生产量的那些，差异显著。
下面报告的表18显示了关于氮平衡：通过施肥提供的氮、提取后植株同化的氮、植株中输入(即提供的氮)和提取之间的同化平衡的数据。
·结论
每g叶的菌落形成单位(CFU/g叶)
在整个草莓生长周期中观察到叶中微生物的持续存在。
总氮
与所有对照处理相比，处理9中的用本发明的甲基杆菌属新种菌株处理的植株在叶中具有最高的氮浓度。
生产量
在处理9(503UFN)中本发明的甲基杆菌属新种菌株的施用相对于对照处理5(671UFN)，生产量增加21％；相对于相应施肥的处理4(503UFN)，增加了33％。
实施例5
试验5-葡萄栽培中的田地验证试验
·目的
通过叶的绿色进化(SPAD)、叶中微生物的浓度和生产产量来了解本发明的菌株对以常规剂量进行氮施肥的葡萄栽培发育的功效。
·材料和方法
试验田地和施肥
该试验在两块田地进行：一块位于Jumilla，坐标为38°33'13.9"N，1°21'16.5"W；另一块位于Tomelloso，坐标为39°11'22.4"N，2°59'15.8"W。
施肥建议是常规施肥与700kg NPK(15-15-15)的背景施肥，相当于整个培养周期105UFN。
·在田地中处理的分布
田地具有以下表面：田地1(1公顷)、田地2(2.20公顷)；选取两个相邻的16米宽的地块(即，区域)用于评价参数。
·本发明的甲基杆菌属新种菌株的培养和应用的特征
在田地1中葡萄品种是petit verdot，在田地2中品种是Grenache，本发明的菌株的施用日期是2018年5月10日(田地1)和2018年5月15日(田地2)。
通过叶面施用以333g/ha(3×107CFU/g)的剂量施用本发明的甲基杆菌属新种菌株。
当植株处于胡椒子(peppercorn)阶段时，在气温分别为17和20℃，相对湿度分别为20和38％，南向和西北向风速分别为5.4和9mps，叶片上没有露水，云度分别为10和25％的情况下，用喷雾器进行叶面施用，每公顷喷洒350升液体培养基。
图12A显示了施用处理时的喷雾器，图12B显示了施用处理时的谷物大小。
·参数和评价方法
产量
为了评价作物的产量，随机选取6个地块并收获30平方米的表面，称重从植株中获得的葡萄。
统计分析
使用适用于Windows 5.1的Statgraphics Plus软件(Manugistics,Inc.,USA)，通过ANOVA分析每个参数的因素(产量)及其相互作用。
·结果
产量
下文报告的表19A和表19B显示了关于每个处理的每株植株的产量(kg)的结果。
结论
在田地1中，相对于未经处理的对照，本发明的甲基杆菌属新种菌株的施用可以使产量提高18％。
在田地2中，相对于未经处理的对照，本发明的甲基杆菌属新种菌株的施用可以使产量提高41％。
实施例6
试验6–评价本发明的甲基杆菌属新种菌株对于菊苣作物(栽培菊苣(Cichorium endivia latifolia)，品种Lempika)产量的功效
以下测试由经认证的实现GEP试验的独立实体进行。
本研究的设计、结果分析和报告尽可能遵循EPPO指南PP 1/152(4)、PP 135(4)和PP 1/181(4)进行。
试验的一般信息
试验于2018年8月17日在西班牙Gerona省的Vila-Sacra开始，于同年11月12日结束。移植日期为2018年8月21日。8月23日进行常规施肥，一旦培养物达到合适的发育阶段(BBCH 17-19)，于9月28日施用本发明的甲基杆菌属新种菌株。
试验设计
该试验包括一个随机区块系统，具有4个处理和5次重复。每个初级田地(小块地)宽2.5米，长7米，面积为17.5平方米。植株行距为0.56米，行中的间隔为0.35米，共4行80株。
培养物
在菊苣作物(栽培菊苣(Cichorium endivia latifolia)，品种Lempika)中研究了本发明的甲基杆菌属新种菌株的功效。该区域以前的作物在2018年是洋葱，在2017年是向日葵及生菜。
土壤
土壤显示出良好的施肥水平：
％MO：2.02
质地：粘壤土
pH：7.70
CEC：0.22
土壤排水：一般
维护
在整个培养周期中，应用了维持植株健康所需的植株检疫处理。
统计评论
用Manager of Agricultural Investigation(ARM)软件(由Gylling DatesManagement Inc.开发)实现了统计分析和报告。使用单向方差分析(ANOVA)结合Student-Newman-Keuls(进行均值比较，α＝5％)分析所评价的数据。后面是相同字母的平均值没有显著差异。
试验目的
1.-在正常施肥比率或减少施肥的情况下，评价本发明的甲基杆菌属新种菌株对于作物行为和菊苣作物的产量的影响。
2.-比较本发明的甲基杆菌属新种菌株与标准商业施肥的作用。
3.-评价本发明的甲基杆菌属新种菌株对于目标作物的任何非预期影响。
试验总结
该试验的目的是评价当氮(施肥)剂量减少时，本发明的甲基杆菌属新种菌株(3×107CFU/g)对菊苣作物产量的影响。该试验场所位于西班牙东北部的Vila-Sacra市(Girona)，在开阔田地中，在一个典型的小面积蔬菜种植区。该研究是根据欧盟第1107/2009号条例规定的良好实验规范(Good Experimental Practices)原则进行的。
在采用不同氮施肥比率(100％(通常)、60％和40％)的三个区域以相同的比率(300g fp/ha)测试本发明的菌株，并对其进行评价并与“未经处理的”对照(采用100％的N施肥，但没有采用本发明的甲基杆菌属新种菌株)进行比较。
在移植前进行施肥(2018年8月23日)。在BBCH第17-19阶段(2018年9月28日)使用经过校准的背负式喷雾机HONDA WRJ2525施用该产品。
在作物发育过程中对作物活力进行了三次评估，以百分比表示。在收获或接近收获时记录产量参数，评价小地块的两个中心行，每行20株，评估时不考虑两个边界行。评估植株直径(cm)、存在的植株数量(区分可销售、不可销售、死亡和萎黄病植株)、植株重量和产量(2个中心行(7.84m2)上的数量和kg)。使用ARM软件自动计算每公顷可销售植株的产量和数量以及相对于不使用标准施肥的处理(处理1)的增加百分比。在整个试验过程中进行了植株毒性和活力评估。
下面报告的表20显示了处理列表
在表20中，使用了以下标记：
UTC：未经处理的对照
UF：通常施肥
F：施肥
M.s.：甲基杆菌属新种菌株，即本发明的甲基杆菌属新种菌株
结论
产品效果
根据试验条件，可以得出结论，与仅施用一次常规肥料(没有本发明的甲基杆菌属新种菌株)相比，本发明的甲基杆菌属新种菌株的施用在氮剂量减少的情况下获得了平均植株重量(kg)和商业产量(每公顷植株数)的数值增加，这意味着本发明的甲基杆菌属新种菌株为植株的正确发育提供了必要的氮。
与处理1相比，处理3和4分别实现了3.8％和13.89％的作物产量增加，获得了显著的统计学差异。但在其余评估参数中，在采用不同剂量氮的情况下，在本发明的甲基杆菌属新种菌株处理之间没有获得显著差异，尽管获得的结果表明在较高的氮减少的情况下获得最好结果。
当作物具有7到9片叶子(BBCH 17-19)时，以300g/ha(3×107cfu/g)的剂量施用本发明的甲基杆菌属新种菌株。
在常规施肥(N＝40％)的情况下以300g/ha(3×107cfu/g)施用本发明的菌株，显示试验的结果最好，产量增加13.89％，具有统计学显著差异。
关于评估的其他参数，处理之间没有显著的统计学差异，这表明本发明的甲基杆菌属新种菌株能够为植株的正确发育提供必要的氮。
使用本发明的甲基杆菌属新种菌株减少作物所需氮施肥的量，因为评估参数的结果显示与使用常规施肥所获得的结果相似或甚至更好。
实施例7–用于制备根据本发明的示例性组合物的方法
·回收甲基杆菌属新种菌株NFBG培养基(补充有葡萄糖的无氮细菌培养基)
生长参数：
ο生长温度20-35℃。
ο温育时间5-7天。
·选择一个单独的粉红色菌落并将其重新接种在选择性培养基MMMNF(含甲醇且 无氮的最低培养基)中。
生长参数：
ο生长温度20-35℃。
ο温育时间5-7天。
·选择一个单独的菌落(粉红色)并将其重新接种在MMM(含甲醇的最低矿物培养 基)中，以使将用作预接种物的液体培养物生长
发酵参数：
ο生长温度20-35℃。
ο搅拌(r.p.m.)50-250。
ο发酵时间5-7天。
·用微生物的预接种物接种整个生物反应器。
发酵参数：
ο生长温度20-35℃。
ο搅拌(r.p.m.)50-250。
ο曝气0.3-3.2N*m3/h。
ο发酵时间80-130小时。
·与载体混合并采用喷雾干燥进行干燥
·每升含有微生物的发酵液体培养基与农业上可接受的载体混合
·混合物喷雾干燥后，根据以下干燥参数：
ο进料流量7-11ml/l。
ο压缩空气流量225-375l/h。
ο干燥空气流量35-50m3/h。
ο入口温度100-180℃。
ο旋风性能25-40％。
·混合用于最终产品配方的产品
每1g干产品(粉末+微生物)与以下助剂混合，直到获得101-550g最终产品，其用于一公顷的施肥。
ο1-50g农业上可接受的助剂。
ο100-500g农业上可接受的载体。
下文报告的表21显示了在整个制造过程中使用的培养基的组成，以g/L表示。
一旦培养基冷却到<60℃的温度，在高压灭菌后加入通过过滤灭菌的组分。
下面报告的表22指的是微量营养素和维生素的量，以克表示。
/>

Claims (10)

1.一种细菌接种物，其包含保藏号为CECT 9580的甲基杆菌属新种(Methylobacteriumsp.nov.)菌株。
2.根据权利要求1所述的细菌接种物在植株、植株部分或植株繁殖体中作为生物刺激剂的用途。
3.一种改善植株生产力的方法，其包括用根据权利要求1所述的细菌接种物接种所述植株的步骤。
4.一种发酵液体培养基，其包含保藏号为CECT 9580的甲基杆菌属新种(Methylobacterium sp.nov.)菌株。
5.一种增加作物植株产量的方法，其包括用根据权利要求1所述的细菌接种物接种所述作物植株的步骤。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述细菌接种物中所述甲基杆菌属菌株的浓度为每公顷1x 106CFU/g至每公顷3x 107CFU/g。
7.一种组合物，其包含根据权利要求1所述的细菌接种物。
8.根据权利要求7所述的组合物用于土壤处理的用途。
9.一种培养植株的方法，其包括以下步骤：
-用根据权利要求7所述的组合物接种植株、植株部分或植株繁殖体，从而获得接种的植株、植株部分或植株繁殖体；
-从所述接种的植株、植株部分或植株繁殖体生长植株；和
-使用光谱图像来评估所述植株的健康状况。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述光谱图像是NDVI(归一化差异植被指数)和/或组合CIR(红外颜色)图像。
CN202310939397.XA 2019-06-03 2020-05-07 甲基杆菌属新种菌株、包含该菌株的组合物以及其作为生物刺激剂和内生固氮细菌的用途 Pending CN116970526A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP19382457.0 2019-06-03
EP19382457.0A EP3747267B1 (en) 2019-06-03 2019-06-03 Methylobacterium sp. nov. strain, compositions comprising it, and its use as bio-stimulant and endophyte nitrogen-fixing bacterium
CN202080041209.6A CN114423291B (zh) 2019-06-03 2020-05-07 甲基杆菌属新种菌株、包含该菌株的组合物以及其作为生物刺激剂和内生固氮细菌的用途
PCT/IB2020/054319 WO2020245675A1 (en) 2019-06-03 2020-05-07 Methylobacterium sp. nov. strain, compositions comprising it, and its use as bio-stimulant and endophyte nitrogen-fixing bacterium

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080041209.6A Division CN114423291B (zh) 2019-06-03 2020-05-07 甲基杆菌属新种菌株、包含该菌株的组合物以及其作为生物刺激剂和内生固氮细菌的用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116970526A true CN116970526A (zh) 2023-10-31

Family

ID=66821146

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310939397.XA Pending CN116970526A (zh) 2019-06-03 2020-05-07 甲基杆菌属新种菌株、包含该菌株的组合物以及其作为生物刺激剂和内生固氮细菌的用途
CN202080041209.6A Active CN114423291B (zh) 2019-06-03 2020-05-07 甲基杆菌属新种菌株、包含该菌株的组合物以及其作为生物刺激剂和内生固氮细菌的用途

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080041209.6A Active CN114423291B (zh) 2019-06-03 2020-05-07 甲基杆菌属新种菌株、包含该菌株的组合物以及其作为生物刺激剂和内生固氮细菌的用途

Country Status (28)

Country Link
US (1) US20220248684A1 (zh)
EP (2) EP3747267B1 (zh)
JP (1) JP2022538745A (zh)
KR (1) KR20220016154A (zh)
CN (2) CN116970526A (zh)
AR (1) AR119045A1 (zh)
AU (1) AU2020288736A1 (zh)
BR (1) BR112021024415A2 (zh)
CA (1) CA3140962A1 (zh)
CL (1) CL2021003210A1 (zh)
CO (1) CO2021018249A2 (zh)
CR (1) CR20210680A (zh)
DK (1) DK3747267T3 (zh)
EA (1) EA202192916A1 (zh)
EC (1) ECSP21091556A (zh)
ES (1) ES2962935T3 (zh)
HR (1) HRP20231365T1 (zh)
HU (1) HUE064295T2 (zh)
IL (1) IL288286A (zh)
MA (1) MA53537B1 (zh)
MX (1) MX2021014723A (zh)
PE (1) PE20220493A1 (zh)
PL (1) PL3747267T3 (zh)
PT (1) PT3747267T (zh)
RS (1) RS64763B1 (zh)
UY (1) UY38704A (zh)
WO (1) WO2020245675A1 (zh)
ZA (1) ZA202110898B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114591877B (zh) * 2022-05-09 2022-07-26 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) 一株甲基杆菌和其发酵产物及其在抑制藻类生长中的应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100873961B1 (ko) * 2006-05-01 2008-12-15 충북대학교 산학협력단 신규한 메틸로박테리움 푸지사와엔스 씨비엠비 20 균주 및이를 이용한 식물 생장촉진방법
US9580363B2 (en) * 2012-03-21 2017-02-28 Temasek Life Sciences Laboratory Limited Nitrogen-fixing bacterial inoculant for improvement of crop productivity and reduction of nitrous oxide emission
HUE028607T2 (en) 2013-07-02 2016-12-28 Symborg S L Glomus iranicum var. tenuihypharum var. nov. strain and application as bionematocide
ES2594455T3 (es) 2013-07-02 2016-12-20 Symborg, S.L. Cepa de Glomus iranicum var. tenuihypharum var. nov y su uso como bioestimulante
US20160376628A1 (en) * 2013-12-10 2016-12-29 Hyundai Motor Company Method for screening antimicrobial agent
UA125897C2 (uk) * 2015-09-11 2022-07-06 Новозімес Біоаґ А/С Стабільна композиція з інокулянтом і спосіб її одержання
US20180201549A1 (en) * 2017-01-13 2018-07-19 Novozymes Bioag A/S Use of fungal strains to solubilize phosphate and enhance plant growth/yield

Also Published As

Publication number Publication date
EP4230043A1 (en) 2023-08-23
RS64763B1 (sr) 2023-11-30
DK3747267T3 (da) 2023-10-23
HUE064295T2 (hu) 2024-02-28
CO2021018249A2 (es) 2022-01-17
KR20220016154A (ko) 2022-02-08
PL3747267T3 (pl) 2024-02-12
EP3747267B1 (en) 2023-08-02
EP3747267A1 (en) 2020-12-09
PT3747267T (pt) 2023-11-03
IL288286A (en) 2022-01-01
UY38704A (es) 2020-10-30
AR119045A1 (es) 2021-11-17
ZA202110898B (en) 2023-10-25
CN114423291B (zh) 2023-08-18
ES2962935T3 (es) 2024-03-21
MX2021014723A (es) 2022-01-18
AU2020288736A1 (en) 2021-12-09
PE20220493A1 (es) 2022-04-07
MA53537B1 (fr) 2023-11-30
CR20210680A (es) 2022-03-21
CA3140962A1 (en) 2020-12-10
ECSP21091556A (es) 2022-06-30
WO2020245675A1 (en) 2020-12-10
CL2021003210A1 (es) 2022-10-07
JP2022538745A (ja) 2022-09-06
EA202192916A1 (ru) 2022-03-22
US20220248684A1 (en) 2022-08-11
BR112021024415A2 (pt) 2022-01-18
HRP20231365T1 (hr) 2024-02-16
CN114423291A (zh) 2022-04-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2002227228B2 (en) Bacterial inoculants for enhancing plant growth
WO2010109436A1 (en) Microbial formulation for widespread uesd in agricultural practices
CN114437982B (zh) 一种提高土壤肥效的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN113862189A (zh) 玉米促生、益生、生防菌肥一体化制剂及其制备方法
KR20180114794A (ko) 식물의 비생물적 스트레스 저항성을 증진시키는 바실러스 아리아바타이 균주 및 이의 용도
JP5374260B2 (ja) 農業用資材
CN114423291B (zh) 甲基杆菌属新种菌株、包含该菌株的组合物以及其作为生物刺激剂和内生固氮细菌的用途
US20190208789A1 (en) Compositions and methods for enhancing plant growth
CN105875412B (zh) 富有机硒甘味绞股蓝的种植方法
RU2459402C1 (ru) Способ возделывания ярового рапса на семена
RU2558291C2 (ru) Полифункциональное средство для растениеводства
CN110982740A (zh) 一株胶冻样类芽孢杆菌及其应用
CN105316258A (zh) 一种防治水稻纹枯病的菌株1ln2及其应用
KR102520264B1 (ko) 식물 생육 촉진 효과 및 삼투 스트레스 내성 유도 효과가 있는 브루셀라 앤스로피 t16r-87 균주 및 이의 용도
RU2736340C1 (ru) Средство для стимуляции роста сельскохозяйственных культур
KR100616408B1 (ko) 라이조푸스 올리고스포러스을 포함하는 잔디생장촉진제 및이를 이용한 잔디 생장 촉진 방법
KR102010826B1 (ko) 인삼생육 촉진 활성을 가지는 알칼리제네스 패카리스 ga41 및 이의 이용
RU2640286C1 (ru) Способ выращивания льна-долгунца
CN107236689B (zh) 一株荧光假单胞菌pf27及其在植物促生中的应用
JPH0725717A (ja) 農業生産の生刺激において有効なストレプトミセスｎｃｉｍｂ４０２７７
Miller STUDIES OF THE PARASITISM OF CERCOSPORA ARACHIDICOLA HORI AND CERCOSPORA PERSONATA (B. AND C.) ELL. AND EV.
RU2800418C1 (ru) Штамм бактерий paenibacillus xylanexedens w018 в качестве средства улучшения фосфорного питания и увеличения продуктивности зерновых и овощных культур
RU2800426C9 (ru) Штамм bacillus amyloliquefaciens p20 в качестве средства для борьбы с ризоктониозом картофеля
CN114436698B (zh) 一种液体复合微生物肥及其在农业生产中的应用
RU2649359C1 (ru) Штамм бактерий Bacillus megaterium V3 в качестве средства для ускорения роста и увеличения продуктивности винограда, зерновых, овощных и древесных культур

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination