CN116942720B - 一种苍术提取物应用于抑制细菌生物膜及抑制细菌生物膜形成的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种苍术提取物应用于抑制细菌生物膜及抑制细菌生物膜形成的组合物,属于生物膜领域,所述苍术提取物为苍术乙醇提取物,抑制细菌生物膜形成的组合物含有苍术提取物,所述苍术提取物为苍术乙醇提取物,所述苍术乙醇提取物为苍术乙醇提取物氯仿部位。本发明苍术提取物在不抑制菌生长的情况下,可以抑制生物被膜的形成。
Description
技术领域
本发明属于生物膜领域,涉及一种苍术提取物应用于抑制细菌生物膜及抑制细菌生物膜形成的组合物。
背景技术
苍术有效成分繁多,构成复杂,现有研究发现,苍术中含有的有效成分包括,苍术素、苍术酮、β-桉叶醇、白术内酯等药物成分。其有效成分药理作用包括但不限于缓解胃溃疡,增加肠道菌群丰度,杀灭病原菌等作用。而与抑制细菌毒力但不抑制细菌生长的相关研究突破较为缺乏,成为行业研发的热点。
发明内容
针对上述缺陷,本发明提供一种苍术提取物应用于抑制细菌生物膜,在不抑制菌生长的情况下,可以抑制生物被膜的形成。
技术方案是:一种苍术提取物在制备抑制细菌生物膜形成的组合物中的应用。
作为优选,所述细菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、鲍曼不动杆菌、绿脓杆菌、产气荚膜梭菌、肺炎克雷伯菌或巴氏杆菌。
作为优选,所述苍术提取物的含量为7-1000μg/ml。
作为优选,所述苍术提取物为苍术乙醇提取物。
作为优选,所述苍术乙醇提取物为苍术乙醇提取物氯仿部位,该苍术乙醇提取物氯仿部位通过以下步骤获取:
用乙醇提取苍术获得溶于乙醇的溶液,然后将溶于乙醇的溶液再用氯仿萃取,获得苍术乙醇提取物氯仿部位。
本发明还提供一种抑制细菌生物膜形成的组合物。
技术方案是:一种抑制细菌生物膜形成的组合物,该抑制细菌生物膜形成的组合物含有苍术提取物。
作为优选,所述细菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、鲍曼不动杆菌、绿脓杆菌、产气荚膜梭菌、肺炎克雷伯菌或巴氏杆菌。
作为优选,所述苍术提取物的含量为7-1000μg/ml。
作为优选,所述苍术提取物为苍术乙醇提取物。
作为优选,所述苍术乙醇提取物为苍术乙醇提取物氯仿部位,该苍术乙醇提取物氯仿部位通过以下步骤获取:
用乙醇提取苍术获得溶于乙醇的溶液,然后将溶于乙醇的溶液再用氯仿萃取,获得苍术乙醇提取物氯仿部位。
与现有技术相比,本发明具有以下的有益效果:
本发明苍术提取物在不抑制菌生长的情况下,可以抑制生物被膜的形成。
具体实施方式
下面将对本发明作进一步说明。
本申请中,生物膜抑制活性检测方法如下:
(1)将培养液100μl加入96孔聚苯乙烯微板培养板的各孔中,接种过夜培养菌液10μl,添加适量的药物提取物(或药物),稀释溶剂为二甲基亚砜(DMSO),并设置二甲基亚砜(DMSO)为对照,在37℃下孵育36小时;
(2)吸出培养液,向每个孔中加入200μl无菌PBS缓冲液,洗涤平板孔3次;
(3)在每孔中加入100μl甲醇,持续15分钟,然后吸出培养孔中的甲醇,自然风干;
(4)向每个孔中加入100μl 按照质量百分数加入1%的结晶紫溶液,并在室温下染色5分钟;
(5)将培养液中的结晶紫染色液吸出后,用流水冲洗掉多余的染料;
(6)倒置滤纸上的板以除去残留的水,并在37°C的烤箱中干燥或在室温下干燥;
(7)完全干燥后,向各孔中加入100μl的33%冰醋酸溶液,并在37℃的恒温箱中作用30分钟,使结晶紫溶解;
(8)用酶标仪在590nm处测量培养孔中溶液的OD值;
(9)在每个测试中为每个菌株重复3孔,并取3个平均值(D值)作为测试值;
(10)将未接种细菌的培养液用作阴性对照,该阴性值为极限值(Dc)的两倍。
本申请生物膜抑制活性检测方法中,如无特别说明,药物提取物(或药物)对各菌生物膜为24h形成的抑制。
实施例1
取适量苍术药材,使用水或者80%的乙醇充分浸泡,沸腾回流提取两次,合并滤液浓缩至干,冻干,计算水提取物或乙醇提取物的得率,得率如下表1。
得率的计算方式为:得率=100%*(提取物重量÷苍术药材重量)
提取的水提取物或乙醇提取物供下面实施例2-3使用。
实施例2
取实施例1制备的水提取物或乙醇提取物,使用DMSO配制为10mg/ml的母液,然后用该10mg/ml的母液再分别配制成256、128、64、32μg/ml的浓度,采用生物膜抑制活性检测方法检测各浓度对沙门氏菌生物膜的抑制能力,结果见表1。
表1 不同提取方式对苍术提取物生物膜抑制能力的影响
从表1可知,苍术醇提取物对沙门氏菌生物膜的抑制能力强于水提取物,并且所选浓度均不抑制细菌生长。
实施例3
取实施例1制备的乙醇提取物,使用蒸馏水充分分散,依次使用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取(各自以体积比1:2萃取2次),得到氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和剩下的水溶部位,萃取液浓缩后冻干,分别获得苍术乙醇提取物氯仿部位、苍术乙醇提取物乙酸乙酯部位、苍术乙醇提取物正丁醇部位和苍术乙醇提取物水溶部位,分别计算苍术乙醇提取物氯仿部位、苍术乙醇提取物乙酸乙酯部位、苍术乙醇提取物正丁醇部位和苍术乙醇提取物水溶部位的得率,得率如下表2。
得率的计算方式为:得率=100%*(乙醇提取物部位重量÷乙醇提取物重量)。
苍术乙醇提取物氯仿部位、苍术乙醇提取物乙酸乙酯部位、苍术乙醇提取物正丁醇部位和苍术乙醇提取物水溶部位供下面实施例4-5使用。
实施例4
取实施例3制备的苍术乙醇提取物氯仿部位、苍术乙醇提取物乙酸乙酯部位、苍术乙醇提取物正丁醇部位和苍术乙醇提取物水溶部位,各自使用DMSO配制为10mg/ml的母液,然后用该10mg/ml的母液再各自分别配制成256、128、64、32μg/ml的浓度,加入培养液中,在37℃培养24h,采用生物膜抑制活性检测方法检测各浓度对沙门氏菌生物膜的抑制能力,结果见表2。
表2 不同萃取部位苍术提取物生物膜抑制能力的影响
从表2可知,苍术乙醇提取物中不同部位对生物膜的抑制能力强弱为氯仿>乙酸乙酯>正丁醇>水溶部位,所选浓度均不抑制细菌生长。
实施例5
取实施例3制备的苍术乙醇提取物氯仿部位,使用DMSO配制为10mg/ml的母液,然后用该10mg/ml的母液再配制成32、16、8μg/ml的浓度(均为无抑菌效果浓度),加入培养液中,在37℃培养24h,采用生物膜抑制活性检测方法检测各浓度对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、鲍曼不动杆菌、绿脓杆菌、产气荚膜梭菌、肺炎克雷伯菌、巴氏杆菌生物膜形成的影响,结果见表3。
表3 苍术乙醇提取物氯仿部位对不同细菌生物膜形成能力的影响
从表3可以看出,苍术乙醇提取物氯仿部位对不同的细菌生物膜形成能力都具有较好的抑制作用,能够开发为生物膜抑制剂。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,对于本领域的技术人员来说,本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种苍术提取物在制备抑制细菌生物膜形成的药物中的应用,其特征在于,所述苍术提取物为苍术乙醇提取物氯仿部位,该苍术乙醇提取物氯仿部位通过以下步骤获取:
用80%乙醇提取苍术获得溶于乙醇的溶液,然后将溶于乙醇的溶液再用氯仿萃取,获得苍术乙醇提取物氯仿部位;
所述细菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、鲍曼不动杆菌、绿脓杆菌、产气荚膜梭菌、肺炎克雷伯菌或巴氏杆菌;
所述苍术提取物的含量为7-1000μg/ml。
2.一种抑制细菌生物膜形成的药物,其特征在于,该药物活性成分为苍术乙醇提取物氯仿部位,该苍术乙醇提取物氯仿部位通过以下步骤获取:
用80%乙醇提取苍术获得溶于乙醇的溶液,然后将溶于乙醇的溶液再用氯仿萃取,获得苍术乙醇提取物氯仿部位;
所述细菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、鲍曼不动杆菌、绿脓杆菌、产气荚膜梭菌、肺炎克雷伯菌或巴氏杆菌;
所述苍术提取物的含量为7-1000μg/ml。
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PB01 | Publication | ||
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