CN114177232A - 一种茶叶多酚提取物的提取方法、提取的茶叶多酚提取物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种茶叶多酚提取物的提取方法、提取的茶叶多酚提取物及其应用，属于细菌感染预防技术领域。本发明提供的基于老茶枝、老茶叶以及茶沫的茶叶多酚提取物的提取方法，能够使老茶枝、老茶叶以及茶沫中的多酚提取率高达16～26％，提取的茶叶多酚提取物中多酚含量达654～702mg/kg，EGCG含量达456～547mg/kg，能够充分利用茶产业资源，经济高效。同时，本发明提供的茶叶多酚提取物可在3d内使兔产气荚膜梭菌病的治愈率达到85％以上，可在3d内使牛产气荚膜梭菌病的治愈率达到100％，对兔产气荚膜梭菌病和牛产气荚膜梭菌病的治疗作用十分显著。
Description
技术领域
本发明属于细菌感染预防技术领域，尤其涉及一种茶叶多酚提取物的提取方法、提取的茶叶多酚提取物及其应用。
背景技术
产气荚膜梭菌原称魏氏梭菌，是一种重要的人兽共患病原菌，广泛分布于自然界，也是人和动物肠道中的常在菌之一，能产生多种外毒素，对人和动物致病，是引起各种动物坏死性肠炎、肠毒血症，人类食物中毒和创伤性气性坏疽的主要病原菌之一。产气荚膜梭菌病主要是由产气荚膜梭菌引起的条件性、高度致死性传染病。该菌导致的动物猝死症，发病急、病程短、死亡率高，各类家畜均有发病，尤以兔、牛的发病最多，此病的发生可给养殖业的发展造成严重威胁。产气荚膜梭菌是革兰氏阳性杆状厌氧菌，对大多数抗生素均不敏感，防治非常困难。而且大量使用抗生素会导致耐药风险和食品安全风险，因此天然的活性物质作为抗生素的替代物具有极大的开发和应用价值。
茶多酚(Green Tea Polyphenols，简写为GTP)又名抗氧灵、维多酚、防哈灵，是茶叶中多羟基酚类化合物的复合物，由30种以上的酚类物质组成，其主体成分是儿茶素及其衍生物，是茶叶中具有保健功能的主要化学成分，具有抗氧化、防辐射、抗衰老、降血脂、降血糖、抑菌抑酶等多种生理活性。
目前，茶多酚的抑菌功能已被诸多实验研究证实，但是涉及的病原细菌一般为金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、伤寒沙门氏杆菌、志贺氏痢疾杆菌、铜绿色假单孢杆菌、枯草杆菌、口腔变异链球菌、大肠埃希氏杆菌等。尚未有茶多酚在防治病原细菌为产气荚膜梭菌的细菌性疾病防治中相关应用的报道。
同时，茶树修剪时产生的老茶枝、老茶叶以及茶叶生产过程中产生的茶沫没有作为茶叶使用的价值，但是其中仍然含有较多的茶叶多酚，然而这类材料通常被弃之不用，也造成了大量资源的浪费。
发明内容
本发明提供的基于老茶枝、老茶叶以及茶沫的茶叶多酚提取物的提取方法，能够使老茶枝、老茶叶以及茶沫中的多酚提取率高达16～26％，提取的茶叶多酚提取物中多酚含量达654～702mg/kg，EGCG含量达456～547mg/kg，能够充分利用茶产业资源，经济高效。同时，本发明提供的茶叶多酚提取物添加量仅占兔粮总重的0.4％～0.6％即可在3d内使兔产气荚膜梭菌病的治愈率达到85％以上，仅使用10mg/kg的量即可在3d内使牛产气荚膜梭菌病的治愈率达到100％，对兔产气荚膜梭菌病和牛产气荚膜梭菌病的治疗作用都十分显著。
本发明为了实现上述目的采用了如下技术方案。
本发明提供了一种茶叶多酚提取物的提取方法，所述茶叶多酚提取物的原料为老茶枝、老茶叶或茶沫。
优选的，取原料晒干后制成的粗粉，55～65℃烘干3.5～4.5h，超微粉碎过500目筛，按照1:20的重量体积比加入乙酸乙酯，超声处理25～35min，旋干，收集即得所述茶叶多酚提取物。
优选的，所述烘干温度为60℃，所述烘干时间为4h。
优选的，所述超声处理时间为30min。
本发明还提供了一种由所述提取方法提取的茶叶多酚提取物。
本发明还提供了一种所述提茶叶多酚提取物在制备产气荚膜梭菌病防治药物中的应用。
优选的，所述产气荚膜梭菌病为兔产气荚膜梭菌病，所述茶叶多酚提取物的添加量占兔粮总重的0.4％～0.8％，所述兔产气荚膜梭菌病的治疗天数为3d。
优选的，所述茶叶多酚提取物的添加量占兔粮总重的0.6％。
优选的，所述产气荚膜梭菌病为牛产气荚膜梭菌病，所述茶叶多酚提取物的用量为10mg/kg，所述牛产气荚膜梭菌病的治疗天数为2～4d。
优选的，所述牛产气荚膜梭菌病的治疗天数为3d。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明采用的茶叶多酚提取物的提取方法，以茶产业中的废弃物老茶枝、老茶叶以及茶沫为原料，而且使老茶枝、老茶叶以及茶沫中的多酚提取率高达16～26％，充分利用了茶产业资源，利于自然资源的可持续发展与利用。
(2)本发明提取的茶叶多酚提取物中多酚含量达654～702mg/kg，EGCG含量达456～547mg/kg，生物活性高。
(3)本发明提供的茶叶多酚提取物在实际生产中，添加量仅占兔粮总重的0.4％～0.6％即可在3d内使兔产气荚膜梭菌病的治愈率达到85％以上，对兔产气荚膜梭菌病的治疗作用显著。
(4)本发明提供的茶叶多酚提取物在实际生产中，仅使用10mg/kg的量即可在2d内使牛产气荚膜梭菌病的治愈率达到60％以上，3d内使牛产气荚膜梭菌病的治愈率达到100％，对牛产气荚膜梭菌病的治疗作用更加显著。
具体实施方式
下文将结合具体实施例详细描述本发明。应当注意的是，下述实施例中描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的，它们可以被相互组合从而达到更好的技术效果。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规实验方法，所使用的试剂如无特殊说明，均由常规购买渠道获得。
实施例1基于老茶枝的茶叶多酚提取物的提取制备
取老茶枝晒干后制成的粗粉，在60℃烘干4h，置于超微粉碎机粉碎至过500目筛，然后按照1:20的重量体积比加入乙酸乙酯，超声处理30min，旋转蒸发仪旋干，最后收集即得基于老茶枝的茶叶多酚提取物。
实施例2基于老茶叶的茶叶多酚提取物的提取制备
取老茶叶晒干后制成的粗粉，在60℃烘干4h，置于超微粉碎机粉碎至过500目筛，然后按照1:20的重量体积比加入乙酸乙酯，超声处理30min，旋转蒸发仪旋干，最后收集即得基于老茶叶的茶叶多酚提取物。
实施例3基于茶沫的茶叶多酚提取物的提取制备
取茶叶生产中的茶沫晒干后制成的粗粉，在60℃烘干4h，置于超微粉碎机粉碎至过500目筛，然后按照1:20的重量体积比加入乙酸乙酯，超声处理30min，旋转蒸发仪旋干，最后收集即得基于茶沫的茶叶多酚提取物。
实施例4
使用红外光谱法测定实施例1-3中三种原料及所对应提取物中多酚的含量，计算多酚提取率，然后使用高效液相色谱仪检测提取物中EGCG的含量。结果如表1所示。
表1三种原料所对应的提取物中的多酚含量、EGCG含量以及多酚提取率
结果显示：本发明的提取方法，经超微粉碎后直接一步提取，可制备高含量的茶叶多酚提取物，老茶枝、老茶叶以及茶沫中的多酚提取率分别高达16％、26％以及24％，经济高效。同时，本发明的提取物中多酚含量达654～702mg/kg，EGCG含量达456～547mg/kg，提取物的生物活性十分高。
实施例5茶叶多酚提取物对兔产气荚膜梭菌病的作用研究
选取临床出现腹胀和腹泻的仔兔，采集粪便进行分离鉴定，确认为产气荚膜梭菌感染的仔兔共45只，分为三组，使用实施例2中提取的茶叶多酚提取物进行拌料给药，茶叶多酚提取物的添加量分别占兔粮总重的0.2％，0.4％和0.6％，用药三天，三天后分别以腹胀率，腹泻率、死亡率和产气荚膜梭菌感染情况考察药物的有效性。结果如表2所示。
表2本发明的茶叶多酚提取物对兔产气荚膜梭菌病的防治作用
结果显示：本发明提供的茶叶多酚提取物能够很好地应用于兔产气荚膜梭菌病的防治，3d的时间内0.2％的茶叶多酚提取物对兔产气荚膜梭菌病的治愈率就达到了53.3％，0.4％的茶叶多酚提取物对兔产气荚膜梭菌病的治愈率就达到了86.7％，0.6％的茶叶多酚提取物对兔产气荚膜梭菌病的治愈率更是达到了93.3％。
实施例6茶叶多酚提取物对牛产气荚膜梭菌病的作用研究
于某牛场采集腹泻牛粪便通过细菌分离、培养和鉴定，筛选出产气荚膜梭菌的阳牛5头，再根据临床症状确诊为产气荚膜梭菌感染，阳性病牛隔离饲养，除常规处理外，还以10mg/kg的量使用实施例2中提取的茶叶多酚提取物对病牛进行灌胃给药，并分别于用药后1、2、3天进行腹泻观察，采取粪便进行细菌消除情况检测。结果如表3所示。
表3本发明的茶叶多酚提取物对牛产气荚膜梭菌病的防治作用
结果显示：本发明提供的茶叶多酚提取物能够很好地应用于牛产气荚膜梭菌病的防治，第1d病状就有所缓解，第2d茶叶多酚提取物对牛产气荚膜梭菌病的治愈率就达到了60％，第3d茶叶多酚提取物对牛产气荚膜梭菌病的治愈率更是达到了100％。
本文虽然已经给出了本发明的一些实施例，但是本领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明精神的情况下，可以对本文的实施例进行改变。上述实施例只是示例性的，不应以本文的实施例作为本发明权利范围的限定。
Claims (10)
1.一种茶叶多酚提取物的提取方法，其特征在于，所述茶叶多酚提取物的原料为老茶枝、老茶叶或茶沫。
2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，包括以下提取步骤：取原料晒干后制成的粗粉，55～65℃烘干3.5～4.5h，超微粉碎过500目筛，按照1:20的重量体积比加入乙酸乙酯，超声处理25～35min，旋干，收集即得所述茶叶多酚提取物。
3.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述烘干温度为60℃，所述烘干时间为4h。
4.如权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述超声处理时间为30min。
5.如权利要求1～4任一所述的提取方法提取的茶叶多酚提取物。
6.如权利要求5所述的茶叶多酚提取物在制备产气荚膜梭菌病防治药物中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述产气荚膜梭菌病为兔产气荚膜梭菌病，所述茶叶多酚提取物的添加量占兔粮总重的0.4％～0.8％，所述兔产气荚膜梭菌病的治疗天数为3d。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述茶叶多酚提取物的添加量占兔粮总重的0.6％。
9.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述产气荚膜梭菌病为牛产气荚膜梭菌病，所述茶叶多酚提取物的用量为10mg/kg，所述牛产气荚膜梭菌病的治疗天数为2～4d。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述牛产气荚膜梭菌病的治疗天数为3d。
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