CN116875548B - 一种nk细胞活性培养管及其生产工艺 - Google Patents
一种nk细胞活性培养管及其生产工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116875548B CN116875548B CN202311155223.0A CN202311155223A CN116875548B CN 116875548 B CN116875548 B CN 116875548B CN 202311155223 A CN202311155223 A CN 202311155223A CN 116875548 B CN116875548 B CN 116875548B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- culture tube
- cell activity
- production process
- cell active
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 106
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 78
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 23
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 22
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 6
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 5
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 claims description 5
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 claims description 5
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 5
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 claims description 5
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 abstract 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000011017 operating method Methods 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000009124 positive feedback regulation Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
- C12M23/08—Flask, bottle or test tube
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/20—Material Coatings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/38—Caps; Covers; Plugs; Pouring means
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M99/00—Subject matter not otherwise provided for in other groups of this subclass
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/34—Sugars
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/50—Soluble polymers, e.g. polyethyleneglycol [PEG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/998—Proteins not provided for elsewhere
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种NK细胞活性培养管及其生产工艺，涉及生物学技术领域，NK细胞活性培养管的生产工艺包括如下步骤：（1）NK细胞活性培养液的配制：将NK细胞激活因子溶解于NK细胞活性培养基中，充分混匀；（2）分装：将配制好的NK细胞活性培养液分装于NK细胞活性培养管内，分装体积为10~20µL；（3）冻干：将NK细胞活性培养管进行冻干，冻干分为5个阶段，分别为‑50~‑70℃1~3小时、‑30~‑20℃8~12小时、0~4℃0.5~1小时、16~20℃0.5~1小时；本发明生产工艺操作简单、用时较短、可重复性强，生产的NK细胞活性培养管质量稳定，可在2~8℃长期储存，有利于大规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及生物学技术领域，具体涉及一种NK细胞活性培养管及其生产工艺。
背景技术
NK细胞是大颗粒淋巴细胞，其来源于骨髓，可分布在淋巴结、脾脏和外周血液之中。NK细胞不需要抗原事先刺激和抗体存在，就能发挥细胞毒活性，且不受主要组织相容性复合体（MHC）约束。其主要功能为抗肿瘤，抗感染，对T、B淋巴细胞、骨髓干细胞具有调控作用，还能发挥自身正反馈调节。
NK细胞活性预示着机体先天免疫细胞抵御致病性细胞的免疫能力，其变化可作为考察某些疾病疗效和预后的指标之一。许多疾病的发生、发展及转归与NK活性密切相关。当NK活性减弱，其杀伤循环血液中的肿瘤细胞能力受到影响，将不能有效地发挥其监视功能。肿瘤病人的NK活性明显低于正常人，并随病情而变化。病情严重时，NK活性下降更为明显，病情好转时，NK活性回升。血浆中细胞因子的含量可直接反映NK细胞的活力，以此进一步评估个体的免疫情况，特别是可能的状况或疾病对NK细胞活力的影响而导致身体免疫力的变化。
但是，NK细胞活性刺激因子的活性和稳定性受到温度、pH值、保存时间等因素的影响，其溶液必须于-80±5℃保存，且其活性有效期仅为6个月；若存放于-20℃或4℃，其活性下降明显，这给产品的生产控制及应用都带来了不便，所以，摸索和优化NK细胞活性刺激因子的保存方法，对于加强NK细胞活性培养管的生产批次控制、其活性的维持及其客户端的应用推广均非常有必要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种NK细胞活性培养管及其生产工艺，生产工艺操作简单、用时较短、可重复性强，生产的NK细胞活性培养管质量稳定，可在2~8℃长期储存，有利于大规模生产。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种NK细胞活性培养管的生产工艺，包括如下步骤：
（1）NK细胞活性培养液的配制：将NK细胞激活因子溶解于NK细胞活性培养基中，充分混匀；
（2）分装：将配制好的NK细胞活性培养液分装于NK细胞活性培养管内，分装体积为10~20µL；
（3）冻干：将NK细胞活性培养管进行冻干，冻干分为5个阶段，分别为-50~-70℃1~3小时、-30~-20℃8~12小时、0~4℃0.5~1小时、16~20℃0.5~1小时。
步骤（3）中，冻干过程不盖管盖。
还包括步骤（4）：盖好管盖，存放于2~8℃。
步骤（1）中，NK细胞激活因子为1ng/mL的IL-2。
步骤（1）中，NK细胞活性培养基的制备方法为：将1%的海藻糖加入0.1mol/L的Tris体系溶液中，调节其pH值至7.0，加入0.1%的牛血清白蛋白，使用0.22µm的滤膜过滤，加入1%的水解乳蛋白、0.3%的甘氨酸，搅拌均匀，加入0.1%的PEG6000，继续搅拌，定容。
一种NK细胞活性培养管的生产工艺生产的NK细胞活性培养管，包括管体，管体的上端螺纹连接有管盖，管体的下端设有若干支脚。
干支脚沿管体的下端周向均匀分布。
所述管体的上端外周设有圆环。
所述管体为聚苯乙烯材质。
所述NK细胞活性培养液放置在管体内。
本发明采取以上技术方案，具有以下优点：本发明生产工艺操作简单、用时较短、可重复性强，生产的NK细胞活性培养管质量稳定，可在2~8℃长期储存，有利于大规模生产。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
附图说明
图1是本发明实施例中NK细胞活性培养管的结构示意图。
图中，
1-管体，2-管盖，3-圆环，4-支脚，5-信息标注框。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，实施例中未注明具体条件，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市场购买获得的常规产品。
所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下所有实施例和对比例中的百分数均为质量百分数。
实施例1
一种NK细胞活性培养管，包括管体1，管体1为聚苯乙烯材质，管体1的上端螺纹连接有管盖2，管体1的上端外周设有圆环3，管体1的下端设有若干支脚4，若干支脚4沿管体1的下端周向均匀分布，管体1内设有NK细胞活性培养液，管体1上设有信息标注框5，可实现培养后培养管直接上机检测，避免后续的样本转移，优化了操作步骤，增加客户使用的便利性。
一种NK细胞活性培养管的生产工艺，包括如下步骤：
（1）NK细胞活性培养液的配制：将NK细胞激活因子溶解于NK细胞活性培养基中，充分混匀；
（2）分装：将配制好的NK细胞活性培养液分装于NK细胞活性培养管内，分装体积为10µL；
（3）冻干：将NK细胞活性培养管进行冻干，冻干分为5个阶段，分别为-50℃1小时、-30℃8小时、0℃0.5小时、16℃0.5小时，冻干过程不盖管盖；
（4）盖好管盖，存放于2℃。
步骤1中，NK细胞激活因子为1ng/mL的IL-2；
NK细胞活性培养基的制备方法为：将1%的海藻糖加入0.1mol/L的Tris体系溶液中，调节其pH值至7.0，加入0.1%的牛血清白蛋白，使用0.22µm的滤膜过滤，加入1%的水解乳蛋白、0.3%的甘氨酸，搅拌均匀，加入0.1%的PEG6000，继续搅拌，定容。
实施例2
一种NK细胞活性培养管，包括管体1，管体1为聚苯乙烯材质，管体1的上端螺纹连接有管盖2，管体1的上端外周设有圆环3，管体1的下端设有若干支脚4，若干支脚4沿管体1的下端周向均匀分布，管体1内设有NK细胞活性培养液，管体1上设有信息标注框5，可实现培养后培养管直接上机检测，避免后续的样本转移，优化了操作步骤，增加客户使用的便利性。
一种NK细胞活性培养管的生产工艺，包括如下步骤：
（1）NK细胞活性培养液的配制：将NK细胞激活因子溶解于NK细胞活性培养基中，充分混匀；
（2）分装：将配制好的NK细胞活性培养液分装于NK细胞活性培养管内，分装体积为20µL；
（3）冻干：将NK细胞活性培养管进行冻干，冻干分为5个阶段，分别为-70℃3小时、-20℃12小时、4℃1小时、20℃1小时，冻干过程不盖管盖；
（4）盖好管盖，存放于8℃。
步骤1中，NK细胞激活因子为1ng/mL的IL-2；
NK细胞活性培养基的制备方法为：将1%的海藻糖加入0.1mol/L的Tris体系溶液中，调节其pH值至7.0，加入0.1%的牛血清白蛋白，使用0.22µm的滤膜过滤，加入1%的水解乳蛋白、0.3%的甘氨酸，搅拌均匀，加入0.1%的PEG6000，继续搅拌，定容。
实施例3
一种NK细胞活性培养管，包括管体1，管体1为聚苯乙烯材质，管体1的上端螺纹连接有管盖2，管体1的上端外周设有圆环3，管体1的下端设有若干支脚4，若干支脚4沿管体1的下端周向均匀分布，管体1内设有NK细胞活性培养液，管体1上设有信息标注框5，可实现培养后培养管直接上机检测，避免后续的样本转移，优化了操作步骤，增加客户使用的便利性。
一种NK细胞活性培养管的生产工艺，包括如下步骤：
（1）NK细胞活性培养液的配制：将NK细胞激活因子溶解于NK细胞活性培养基中，充分混匀；
（2）分装：将配制好的NK细胞活性培养液分装于NK细胞活性培养管内，分装体积为15µL；
（3）冻干：将NK细胞活性培养管进行冻干，冻干分为5个阶段，分别为-60℃2小时、-25℃10小时、2℃0.8小时、18℃0.7小时，冻干过程不盖管盖；
（4）盖好管盖，存放于5℃。
步骤1中，NK细胞激活因子为1ng/mL的IL-2；
NK细胞活性培养基的制备方法为：将1%的海藻糖加入0.1mol/L的Tris体系溶液中，调节其pH值至7.0，加入0.1%的牛血清白蛋白，使用0.22µm的滤膜过滤，加入1%的水解乳蛋白、0.3%的甘氨酸，搅拌均匀，加入0.1%的PEG6000，继续搅拌，定容。
实验1
NK细胞活性培养管性能评估：
按照实施例1操作，进行3批次NK细胞活性培养管的生产，每批次随机抽取12支，分别对其进行编号、称量，取同一样本分别在12支NK细胞活性培养管内进行NK细胞活性物质的培养并按顺序进行编号，编号第一位代表批次，后面的按顺序排号，然后使用NK细胞活性检测试剂盒进行检测，记录其信号值如下表：
表1：
分别分析其批内及批间的重量差异、信号值差异，以评估其生产工艺的稳定性及得到的NK细胞活性培养管性能，其结果如下表2、表3。
表2：
表3：
由表2、表3可以得出，三批产品重量差异不大，其批间精密度在1%以内，可满足生产工艺稳定的要求。从其活性物质检测信号值来看，三批次培养管得到的样本信号值相近，精密度满足应用要求。由此，可证明本发明NK细胞活性培养管的生产工艺稳定性高。
实验2
按照实施例1操作，进行3批次NK细胞活性培养管的生产，每批次随机抽取3支，分别对其进行编号后，置于2~8℃储存，放置1年，不定期取样，使用NK细胞活性检测试剂盒测量其活性信号值，每批次均取3支NK细胞活性培养管所得数值的均值，分别评价不同时期取样与第1天结果的差异性，结果如下表4所示：
表4：
由表4可以得出，本发明生产的NK细胞活性培养管在2~8℃存放1年，其性能可满足使用要求。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，实施方式的举例，其中未详细述及的部分均为本领域普通技术人员的公知常识，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种NK细胞活性培养管的生产工艺，其特征在于：包括如下步骤：
（1）NK细胞活性培养液的配制：将NK细胞激活因子溶解于NK细胞活性培养基中，充分混匀，NK细胞活性培养基的制备方法为：将1%的海藻糖加入0.1mol/L的Tris体系溶液中，调节其pH值至7.0，加入0.1%的牛血清白蛋白，使用0.22µm的滤膜过滤，加入1%的水解乳蛋白、0.3%的甘氨酸，搅拌均匀，加入0.1%的PEG6000，继续搅拌，定容；
（2）分装：将配制好的NK细胞活性培养液分装于NK细胞活性培养管内，分装体积为10~20µL；
（3）冻干：将NK细胞活性培养管进行冻干，冻干分为5个阶段，分别为-50~-70℃1~3小时、-30~-20℃8~12小时、0~4℃0.5~1小时、16~20℃0.5~1小时。
2.根据权利要求1所述的一种NK细胞活性培养管的生产工艺，其特征在于：步骤（3）中，冻干过程不盖管盖。
3.根据权利要求1所述的一种NK细胞活性培养管的生产工艺，其特征在于：还包括步骤（4）：盖好管盖，存放于2~8℃。
4.根据权利要求1所述的一种NK细胞活性培养管的生产工艺，其特征在于：步骤（1）中，NK细胞激活因子为1ng/mL的IL-2。
5.根据权利要求1所述的一种NK细胞活性培养管的生产工艺生产的NK细胞活性培养管，其特征在于：包括管体，管体的上端螺纹连接有管盖，管体的下端设有若干支脚。
6.根据权利要求5所述的一种NK细胞活性培养管的生产工艺生产的NK细胞活性培养管，其特征在于：若干支脚沿管体的下端周向均匀分布。
7.根据权利要求6所述的一种NK细胞活性培养管的生产工艺生产的NK细胞活性培养管，其特征在于：所述管体的上端外周设有圆环。
8.根据权利要求7所述的一种NK细胞活性培养管的生产工艺生产的NK细胞活性培养管，其特征在于：所述管体为聚苯乙烯材质。
9.根据权利要求8所述的一种NK细胞活性培养管的生产工艺生产的NK细胞活性培养管，其特征在于：所述NK细胞活性培养液放置在管体内。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311155223.0A CN116875548B (zh) | 2023-09-08 | 2023-09-08 | 一种nk细胞活性培养管及其生产工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311155223.0A CN116875548B (zh) | 2023-09-08 | 2023-09-08 | 一种nk细胞活性培养管及其生产工艺 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116875548A CN116875548A (zh) | 2023-10-13 |
| CN116875548B true CN116875548B (zh) | 2024-01-02 |
Family
ID=88257331
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311155223.0A Active CN116875548B (zh) | 2023-09-08 | 2023-09-08 | 一种nk细胞活性培养管及其生产工艺 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116875548B (zh) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103232972A (zh) * | 2013-04-15 | 2013-08-07 | 广州白云山拜迪生物医药有限公司 | 一种用于淋巴细胞培养的培养基冻干粉生产工艺 |
| CN208933384U (zh) * | 2018-09-27 | 2019-06-04 | 潍坊市康华生物技术有限公司 | 一种培养管 |
| CN111548994A (zh) * | 2020-04-24 | 2020-08-18 | 广东华夏健康生命科学有限公司 | 一种细胞培养基及其培养nk细胞的方法 |
| WO2023288007A2 (en) * | 2021-07-15 | 2023-01-19 | WUGEN, Inc. | Expansion of memory natural killer cells |
| CN115855779A (zh) * | 2023-01-18 | 2023-03-28 | 山东康华生物医疗科技股份有限公司 | 一种定量检测nk细胞活性的磁微粒化学发光试剂盒及其检测方法 |
| CN116068207A (zh) * | 2023-03-24 | 2023-05-05 | 山东康华生物医疗科技股份有限公司 | 一种用于检测nk细胞活性的试剂盒 |
| CN116676263A (zh) * | 2023-06-16 | 2023-09-01 | 上海中赛德康生物制药有限公司 | 冻存pbmc诱导nk细胞的培养试剂盒及使用方法 |
-
2023
- 2023-09-08 CN CN202311155223.0A patent/CN116875548B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103232972A (zh) * | 2013-04-15 | 2013-08-07 | 广州白云山拜迪生物医药有限公司 | 一种用于淋巴细胞培养的培养基冻干粉生产工艺 |
| CN208933384U (zh) * | 2018-09-27 | 2019-06-04 | 潍坊市康华生物技术有限公司 | 一种培养管 |
| CN111548994A (zh) * | 2020-04-24 | 2020-08-18 | 广东华夏健康生命科学有限公司 | 一种细胞培养基及其培养nk细胞的方法 |
| WO2023288007A2 (en) * | 2021-07-15 | 2023-01-19 | WUGEN, Inc. | Expansion of memory natural killer cells |
| CN115855779A (zh) * | 2023-01-18 | 2023-03-28 | 山东康华生物医疗科技股份有限公司 | 一种定量检测nk细胞活性的磁微粒化学发光试剂盒及其检测方法 |
| CN116068207A (zh) * | 2023-03-24 | 2023-05-05 | 山东康华生物医疗科技股份有限公司 | 一种用于检测nk细胞活性的试剂盒 |
| CN116676263A (zh) * | 2023-06-16 | 2023-09-01 | 上海中赛德康生物制药有限公司 | 冻存pbmc诱导nk细胞的培养试剂盒及使用方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116875548A (zh) | 2023-10-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105018360B (zh) | 一种酿酒酵母诱变菌株及其应用 | |
| Lee et al. | In vitro autolysis of plant cell walls | |
| CN103898041B (zh) | 杂交瘤细胞的培养方法 | |
| CN104826101B (zh) | 冻干人用狂犬病疫苗及其制备方法 | |
| US20160230192A1 (en) | Triterpenoids high yielding strain of antrodia cinnamomea and use thereof | |
| CN116875548B (zh) | 一种nk细胞活性培养管及其生产工艺 | |
| Kowalczyk et al. | Process challenges relating to hematopoietic stem cell cultivation in bioreactors | |
| CN103898153A (zh) | 一种多拷贝的金属硫蛋白重组表达载体及其高效表达金属硫蛋白的方法 | |
| CN1238495C (zh) | 动物细胞多孔微载体固定化高效培养方法及其培养基 | |
| CN111073858A (zh) | 一种yap1基因修饰的间充质干细胞及其制备方法 | |
| Mitra et al. | Nature of the repair process associated with the recovery of Escherichia coli after exposure to Cd2+ | |
| Raymond et al. | Encapsulation of brewers yeast in chitosan coated carrageenan microspheres by emulsification/thermal gelation | |
| CN109321519A (zh) | Cho-k1悬浮驯化培养基及驯化方法 | |
| CN103392512B (zh) | 樟芝高产三萜菌株及其应用 | |
| CN202107707U (zh) | Cik细胞的诱导活化试剂盒 | |
| CN112029723A (zh) | 一种体外培养脐带血cik细胞的方法 | |
| CN110857435B (zh) | 用于培养从脐血中分离的免疫细胞的培养基及其培养方法 | |
| Mamun-Or-Rashid et al. | Isolation, Identification, Optimization of Baker’s Yeast from Natural Sources, Scale-Up Production Using Molasses as a Cheap Carbohydrate Source, and Evaluation for Bread Production | |
| Klapper et al. | Factors affecting the synthesis and release of the extracellular protease of Aspergillus oryzae NRRL 2160 | |
| Lu et al. | Effects and mechanism of Lactococcus lactis thermo-sensitive hydrogel on the wound healing of full-thickness skin defects in diabetic mice | |
| CN110591927A (zh) | 一株木霉菌株hb20111在消解作物连作障碍因子酚酸类自毒物质方面的应用及菌剂 | |
| CN114085813B (zh) | 用于评价物质具有免疫调节功能的方法 | |
| CN105176916A (zh) | 一种适于Vero细胞生长的低血清无蛋白培养基及其制备方法 | |
| CN108251375B (zh) | 一种发酵生产重组人白介素-12的方法 | |
| CN110655554B (zh) | 一种提高酿酒酵母增殖和乙醇耐受性的蛋白活性肽及其制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |