CN116875509B - 一种芽孢杆菌生防种衣剂及其制备方法 - Google Patents
一种芽孢杆菌生防种衣剂及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116875509B CN116875509B CN202310941366.8A CN202310941366A CN116875509B CN 116875509 B CN116875509 B CN 116875509B CN 202310941366 A CN202310941366 A CN 202310941366A CN 116875509 B CN116875509 B CN 116875509B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus
- biocontrol
- seed coating
- coating agent
- cabbage
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 title claims abstract description 83
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 title claims abstract description 70
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 title claims abstract description 59
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 claims abstract description 82
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 claims abstract description 82
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 claims abstract description 82
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 claims abstract description 82
- 241000193410 Bacillus atrophaeus Species 0.000 claims abstract description 78
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims abstract description 20
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 46
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 claims description 35
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 35
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 claims description 32
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 21
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 19
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 11
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 claims description 10
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 claims description 10
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000002002 slurry Substances 0.000 claims description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 9
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 claims description 6
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 6
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 4
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 4
- 241001443715 Fusarium oxysporum f. sp. conglutinans Species 0.000 claims 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 abstract description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 33
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 23
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 23
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 17
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 12
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 11
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 11
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 10
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 10
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 5
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 5
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- YDEXUEFDPVHGHE-GGMCWBHBSA-L disodium;(2r)-3-(2-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-[2-methoxy-4-(3-sulfonatopropyl)phenoxy]propane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].COC1=CC=CC(C[C@H](CS([O-])(=O)=O)OC=2C(=CC(CCCS([O-])(=O)=O)=CC=2)OC)=C1O YDEXUEFDPVHGHE-GGMCWBHBSA-L 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000009969 flowable effect Effects 0.000 description 3
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 3
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 3
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000918585 Pythium aphanidermatum Species 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 2
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 description 1
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 description 1
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 1
- 241000193417 Brevibacillus laterosporus Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000013382 Gelatinases Human genes 0.000 description 1
- 108010026132 Gelatinases Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000243785 Meloidogyne javanica Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229920000715 Mucilage Polymers 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 241000881860 Paenibacillus mucilaginosus Species 0.000 description 1
- 241000194105 Paenibacillus polymyxa Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000003570 air Substances 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000002528 anti-freeze Effects 0.000 description 1
- 229940054340 bacillus coagulans Drugs 0.000 description 1
- 239000007633 bacillus mucilaginosus Substances 0.000 description 1
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000008199 coating composition Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000000447 pesticide residue Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
Abstract
本发明提供一株萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825，其保藏编号为CCTCC NO：M2021736。本发明还提供应用该菌株制备的芽孢杆菌生防种衣剂及其制备方法。本发明的生防种衣剂安全、高效、无污染，对人畜安全，对环境友好，可用于防治由镰孢菌引起的的甘蓝枯萎病。
Description
技术领域
本发明属于生物防治技术领域，具体涉及一种以生防细菌为活性成分的微生物型种子包衣剂及其制备方法。
背景技术
种衣剂是一种可直接或经稀释后包覆于种子表面，形成具有一定强度和通透性的保护层膜的农药制剂，具有靶标性强、用药量少、高效安全的特点，在防治农作物土传性病害中应用广泛。
土传性病害是指病原体如真菌、细菌、线虫和病毒随病残体生活在土壤中，条件适宜时从作物根部或茎部侵害作物而引起的病害，常见的土传性病害主要有枯萎病、立枯病、疫病、青枯病、猝倒病、根结线虫等，常常引起作物缺苗断垄、枯萎死亡，严重时造成大面积减产，甚至绝收。土传性病害的发生与根际致病菌种类和数量有密切关系，而土壤微生物、植物内生细菌等有益微生物对病害发展有制约作用。因此，如何有效保护和丰富植物根系有益微生物群落多样性，保护根系不受致病菌侵染，是进行土传病害防治的基础。目前土传性病害的防治主要以化学防治为主，高浓度大剂量农药进行土壤和灌根处理，造成了土壤和水源污染，破坏了土壤微生态平衡，不利于生态环境保护。
生物防治是利用生物及其代谢产物来控制病虫害的一种防治方法。在植物病害防治中通常以“以菌抑菌”的方式来达到防治目的，其作用机理主要表现为重寄生、拮抗作用、竞争、诱导抗性等。芽孢杆菌是一类广泛分布于土壤、水、空气及动物消化道等处的细菌，它们抗逆性强、生长快、营养简单，能产生耐热、抗逆的芽孢，是目前研究和应用最广的生防细菌。芽孢杆菌还能产生抑菌物质，与病原菌形成竞争关系，尤其对于土传病害防治效果显著，目前应用较多的有枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、巨大芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌等等。这些芽孢杆菌不仅对人畜无害，不污染环境，而且能够从多方面作用来抑制病菌侵害。
目前种衣剂中的有效成分仍以化学农药为主，虽然与土壤处理等其它施药方式相比，大幅度降低了农药使用量，但实际使用中由于药剂持效期短，往往达不到防治效果，而且化学农药使用后容易造成环境污染和农药残留。以生防菌及其代谢产物为活性成分的生物种衣剂克服了以上缺点，具有促生、防病、增产的效果，是当前研发种衣剂的发展方向。
发明内容
本发明目的在于克服目前农作物土传性病害防治中化学农药使用量大、污染严重的问题，提供一种安全、高效、无残留、对环境友好的芽孢杆菌生防种衣剂，可用于防治甘蓝枯萎病等土传性病害；本发明还提供其制备方法。
本发明采用的技术方案如下：
本发明提供一株萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825，其保藏编号为CCTCC NO：M2021736。
本发明还提供含有上述的萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825的微生物菌剂。
本发明还提供上述的萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825微生物菌剂的制备方法，将萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825加入液体培养基中进行发酵培养，得到微生物菌剂；
作为优选，每升所述液体培养基的配方为：马铃薯200g、蔗糖15g、酵母浸粉12g、硫酸镁5g、水1000mL，pH值为7；
作为优选，所述发酵培养是在32±1℃下进行的；
作为优选，所述发酵培养后发酵液中活菌数达到109cfu/mL以上。
本发明还提供一种芽孢杆菌生防种衣剂，所述芽孢杆菌生防种衣剂的有效成分为上述的萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825或微生物菌剂。
作为优选，所述芽孢杆菌生防种衣剂由上述的微生物菌剂和助剂组成；所述微生物菌剂与助剂的体积比为2:1；所述助剂由以下各组分组成：分散剂3-5g/L、成膜剂0.25-0.75g/L、稳定剂1-2mL/L、防冻剂0.5-1.5g/L、着色剂1g/L，溶剂为水；所述水优选为无菌水。
作为进一步优选，所述分散剂为木质素磺酸钠、SD-811、吐温-80、十二烷基硫酸钠中的一种或几种；和/或
所述成膜剂为甲基纤维素、羧甲基纤维素、聚乙烯醇、羟乙基纤维素中的一种或几种；和/或
所述稳定剂为膨润土；和/或
所述防冻剂为乙二醇；和/或
所述着色剂为珠光粉。
作为进一步优选，所述助剂中各组分的比例为：SD811：羧甲基纤维：膨润土：乙二醇：珠光粉：无菌水=4g：0.25g：1g：0.5ml：1g：100mL。
本发明还提供上述的芽孢杆菌生防种衣剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）将萎缩芽孢杆菌ZY1825制备成萎缩芽孢杆菌菌液，其中的菌量在109cfu/mL以上；
（2）将分散剂、成膜剂、稳定剂、防冻剂、着色剂，无菌水混合混匀，然后在有氧密闭、加压的条件下充分乳化、分散，使预混浆料均匀、细化，最后再研磨2-3次，得到助剂；
（3）取步骤（1）制备的萎缩芽孢杆菌ZY1825菌液与步骤（2）制备的助剂按照1:1-2:1的体积比例混匀，得到芽孢杆菌生防种衣剂；作为优选，所述萎缩芽孢杆菌ZY1825菌液与助剂按照2:1的体积比例混匀。
本发明还提供上述的芽孢杆菌生防种衣剂在包衣甘蓝种子中的应用；作为优选，所述芽孢杆菌生防种衣剂与甘蓝种子的重量比为1:30-1:100；最优选地，所述芽孢杆菌生防种衣剂与甘蓝种子的重量比为1:30。
本发明还提供上述的萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825、或微生物菌剂、或芽孢杆菌生防种衣剂在制备防治甘蓝枯萎病病原菌的药物中的应用；
作为优选，所述药物为包衣剂；
作为优选，所述甘蓝枯萎病病原菌为镰孢菌；所述镰孢菌优选为尖孢镰孢霉的粘团专化型（Fusarium oxysporumf.sp. conglutinans）。
本发明的有益效果在于：该生防种衣剂安全、高效、无污染，对人畜安全，对环境友好，可用于防治由镰孢菌引起的的甘蓝枯萎病。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1中，A图为萎缩芽孢杆菌ZY1825 CCTCC NO：M2021736电镜(×30000)下的图片，B图为活化后的萎缩芽孢杆菌ZY1825 CCTCC NO：M2021736，C图为活化后的甘蓝枯萎病病原菌。
图2为本发明的萎缩芽孢杆菌ZY1825 CCTCC NO：M2021736对甘蓝枯萎病病原菌的抑菌效果图。
图3为萎缩芽孢杆菌ZY1825菌液与助剂按不同比例制备的种衣剂与甘蓝枯萎病病原菌的平板对峙实验效果。
图4为萎缩芽孢杆菌ZY1825菌液与助剂按不同比例制备的种衣剂包衣后的发芽率。
图5为以芽孢杆菌生防种衣剂为活性成分制备的生防种衣剂小样。
图6为经实施例5的芽孢杆菌生防种衣剂包衣的甘蓝种子。
图7为芽孢杆菌生防种衣剂与甘蓝种子不同包衣比包衣后的发芽率。
图8中，A图为芽孢杆菌生防种衣剂按药种重量比1:30包衣到甘蓝种子后，芽孢杆菌生防种衣剂与甘蓝枯萎病病原菌的对峙结果，B图为对照组的实验结果。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均购自常规生化试剂公司。
实施例1萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825的获得
将采自甘肃省武威市民勤县黄坝湾的荒漠土壤，采用梯度稀释法、平板涂布法和平板划线法分离纯化土壤中细菌。将分离纯化后的细菌转移至LB液体培养基，在恒温振荡器(28℃、150r/min)中培养72h后，装入终浓度20％甘油中保存于-80℃冰箱中，以备进一步筛选。采用平板对峙培养法将候选菌株菌液与甘蓝枯萎病病菌进行平板对峙，以病原菌单独培养作为对照，记录各处理病原菌半径及抑菌带宽度，计算抑菌率，筛选出抑菌效果最好的细菌为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825。
萎缩芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种，萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825单个菌体（2.3～6.91）×（0.87～1.94）μm，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，菌体为杆状，如图1中的A图。菌落表面粗糙，表面有褶皱，呈淡黄色，不透明，边缘不整齐，培养96h后菌落及培养基逐渐变为深褐色，有黑色色素产生。萎缩芽孢杆菌ZY1825能分解葡萄糖产生丙酮酸、能够发酵葡萄糖、具有明胶酶。
将上述筛选得到的萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825于2021年6月21日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，保藏编号为：CCTCC NO：M2021736。
实施例2萎缩芽孢杆菌ZY1825 CCTCC NO：M2021736对甘蓝枯萎病病原菌的抑制效果
萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825 CCTCC NO：M2021736菌液的制备：
（1）菌株的活化：将10μL保存于-80℃冰箱的萎缩芽孢杆菌ZY1825 CCTCC NO：M2021736菌液在LB平板上划线培养48h，如图1中的B图所示。
（2）液体培养：取平皿上的单菌落接种至液体培养基中，32℃，210r/min培养24h，使发酵液中活菌数达到109cfu/mL以上，得到萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825CCTCC NO：M2021736菌液。
萎缩芽孢杆菌ZY1825的液体培养基：马铃薯200g、蔗糖15g、酵母浸粉12g、硫酸镁5g、水1000mL，其pH值为7。
甘蓝枯萎病病原菌为尖孢镰孢霉的粘团专化型（Fusarium oxysporum Schltdl.ex Snyder et Hansen f. sp. conglutinans（Wollenw）Snyder et Hansen），该病原菌在PDA平板上菌落形态如图1中的C图所示。
图1中，A图为萎缩芽孢杆菌ZY1825 CCTCC NO：M2021736电镜(×30000)下的图片，B图为活化后的萎缩芽孢杆菌ZY1825 CCTCC NO：M2021736，C图为活化后的甘蓝枯萎病病原菌。
本发明的萎缩芽孢杆菌ZY1825对甘蓝枯萎病病原菌的抑制效果：
实验方法：平板对峙试验。
将甘蓝枯萎病病原菌在PDA平板上培养5d，从菌落边缘用无菌打孔器打取长势一致且直径为0.6mm的菌饼，然后在直径90mm的PDA平板距边缘约2cm的相对位置处，分别接种甘蓝枯萎病病原菌和萎缩芽孢杆菌单菌落，重复3次，置于28℃恒温培养箱中培养，以甘蓝枯萎病病原菌单独培养作为对照，连续观察菌落生长情况，培养至对照处理中病原菌菌落直径≥4.5cm，记录各处理甘蓝枯萎病病原菌半径及抑菌带宽度，计算抑菌率，结果如图2所示。
图2为本发明的萎缩芽孢杆菌ZY1825 CCTCC NO：M2021736对甘蓝枯萎病病原菌的抑菌效果图。其中，A图为萎缩芽孢杆菌ZY1825 CCTCC NO：M2021736与甘蓝枯萎病病原菌的对峙图，B为对照甘蓝枯萎病病病原菌图。
由图2可以看出萎缩芽孢杆菌ZY1825 CCTCC NO：M2021736对甘蓝枯萎病病原菌有较好的抑制效果，计算得出抑菌率为54.95%。
实施例3芽孢杆菌生防种衣剂中助剂的确定
本实施例的芽孢杆菌生防种衣剂由以下各组分制备而成：生防菌剂20mL，分散剂0.3-0.5g、成膜剂0.025-0.075g、稳定剂0.1-0.2mL、防冻剂0.05-0.15g、着色剂0.1g，无菌水10mL。
所述生防菌剂为按照实施例2方法制备的萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825 CCTCC NO：M2021736菌液，生防菌剂中萎缩芽孢杆菌ZY1825的活菌量为109cfu/mL。
其中，分散剂、成膜剂、防冻剂、稳定剂、着色剂和无菌水构成助剂。
所述分散剂为木质素磺酸钠（前衍化学科技(武汉)有限公司）、SD-811（上海是大高分子材料有限公司）、吐温-80（河北润步生物科技有限公司）、十二烷基硫酸钠（西安天正药用辅料有限公司）中的一种或几种。
所述成膜剂为甲基纤维素、羧甲基纤维素、聚乙烯醇、羟乙基纤维素中的一种或几种。
所述稳定剂为膨润土。
所述防冻剂为乙二醇。
所述着色剂为珠光粉。
本实施例的芽孢杆菌生防种衣剂的制备方法为：
（1）将萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825 CCTCC NO：M2021736按1％接种量接种至实施例2中所述的液体培养基中，32℃，210r/min培养24h，当菌量达到109cfu/mL，芽孢数占90％以上时，得到萎缩芽孢杆菌菌液（即生防菌剂）。
（2）向无菌三角瓶中加入配方量的分散剂、成膜剂、稳定剂、防冻剂、着色剂，无菌水，震荡，使固体在水中均匀分散，再混合分散10分钟，形成预混浆料。将预混浆料抽提到的高剪切乳化分散机内，在密闭（有氧）、加压的条件下充分乳化、分散，使预混浆料均匀、细化，然后将此浆料通过管道和隔离泵泵入砂磨机内，研磨2～3次（每次0.5小时）后出料。经过筛、分装后得到红色的可流动的悬浮液体，即为助剂。
（3）取步骤（1）制备的萎缩芽孢杆菌ZY1825菌液与步骤（2）制备的助剂按照2:1的体积比例混匀，得到芽孢杆菌生防种衣剂。
通过分散性测定从木质素磺酸钠、SD-811、吐温-80、十二烷基硫酸钠中筛选出最佳分散剂，通过包衣脱落率和倾倒性测定从甲基纤维素、羧甲基纤维素、聚乙烯醇、羟乙基纤维素中筛选出最佳成膜剂，通过对分散剂（助剂中，相对于无菌水的重量百分比分别为3%、4%、5%）、成膜剂（助剂中，相对于无菌水的重量百分比分别为0.25%、0.5%、0.75%）、稳定剂（助剂中，相对于无菌水的体积百分比分别为1%、1.5%、2%）、防冻剂（助剂中，相对于无菌水的重量百分比分别为0.5%、1%、1.5%）进行4因素3水平的正交试验筛选出分散剂、成膜剂、防冻剂、稳定剂的最佳配比，结果为：
最优助剂配方组合中：分散剂：成膜剂：稳定剂：防冻剂=SD811：羧甲基纤维：膨润土：乙二醇=4g：0.25g：1g：0.5ml。
即，最优助剂配方为：SD811：羧甲基纤维：膨润土：乙二醇：珠光粉：无菌水=4g：0.25g：1g：0.5ml：1g：100mL。
本发明将以最优助剂配方进行后续实验。
取萎缩芽孢杆菌ZY1825菌液（1×109cfu/mL）适量（50μL）于NA平板上，用曲玻棒涂满全皿，采用滤纸片对峙法测定上述助剂是否对萎缩芽孢杆菌的生长有影响，结果发现助剂对萎缩芽孢杆菌的生长无影响。
然后将最优助剂配方与甘蓝种子按1:30重量比加入到盛有甘蓝种子的密封袋中，向密封袋中吹气迅速摇匀，将助剂均匀的包衣到甘蓝种子上，以不包衣的甘蓝种子为对照，进行发芽测试，包衣后的甘蓝种子发芽率达到97%，显著高于对照的92.67%。
发芽率的测定方法为：将甘蓝种子浸在1%NaClO溶液10min，进行表面消毒，然后用无菌水清洗2～3次，洗去NaClO残留液。将最优助剂配方组与甘蓝种子按1:30的重量比包衣到甘蓝种子上，在培养皿（120cm）中放一张圆形滤纸，加3mL无菌水浸湿，每个培养皿放100粒甘蓝种子，3次重复。后将培养皿置于25℃恒温培养箱中培养，24h后统计发芽数。每次统计完后，分别补充1mL灭菌水保持种子发芽湿度。参照国家种子检验规程GB/T3543.4，3d后测定发芽率。
实施例4芽孢杆菌生防种衣剂配方的确定
本实施例的芽孢杆菌生防种衣剂由生防菌剂和助剂制备而成。
所述生防菌剂为按照实施例2方法制备的萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825 CCTCC NO：M2021736菌液，生防菌剂中萎缩芽孢杆菌ZY1825的活菌量为109cfu/mL。
所述助剂由下述配比的各组分制备而成：SD811：羧甲基纤维：膨润土：乙二醇：珠光粉：无菌水=4g：0.25g：1g：0.5ml：1g：100mL。
将萎缩芽孢杆菌ZY1825菌液（109cfu/mL）与助剂按体积比2:1、1.5:1、1:1三个比例混合均匀后，采用平板对峙，将甘蓝枯萎病病原菌接到培养基中央，四周等距离接上沾有按比例混匀后液体的大小均一滤纸片，以甘蓝枯萎病病原菌单独培养为对照，培养（28℃）3d后，计算抑菌率，记录不同比例对峙效果是否有差异。
将甘蓝种子浸在1%NaClO溶液10min，进行表面消毒，然后用无菌水清洗2～3次，洗去NaClO残留液。将上述不同比例制备的芽孢杆菌生防种衣剂与甘蓝种子按药种比（重量比）1:30分别包衣到甘蓝种子上，在培养皿（120cm）中放一张圆形滤纸，加3mL无菌水浸湿，每个培养皿放100粒甘蓝种子，3次重复。后将培养皿置于25°C恒温培养箱中培养，24h后统计发芽数。每次统计完后，分别补充1mL灭菌水保持种子发芽湿度。参照国家种子检验规程GB/T3543.4，3d后测定发芽率。
综合对峙效果和发芽率确定萎缩芽孢杆菌ZY1825菌液与助剂的比例。结果如图3和图4所示。
图3为萎缩芽孢杆菌ZY1825菌液与助剂按不同比例制备的种衣剂与甘蓝枯萎病病原菌的平板对峙实验效果。
由图3中的实验结果计算抑菌圈半径，2:1比例对病原菌抑制效果显著高于1:1和1.5:1。
图4为萎缩芽孢杆菌ZY1825菌液与助剂按不同比例制备的种衣剂包衣后的发芽率。
从图4可知2：1的发芽率最高。
综合对峙效果，选择萎缩芽孢杆菌ZY1825菌液与助剂按2:1体积比配制种衣剂。
实施例5芽孢杆菌生防种衣剂的制备方法
本实施例的芽孢杆菌生防种衣剂由以下各组分制备而成：20mL萎缩芽孢杆菌菌液、0.4g SD811、0.025g羧甲基纤维素、0.1g膨润土、0.05mL乙二醇、0.1 g红色珠光粉和10mL无菌水。
所述生防菌剂为按照实施例2方法制备的萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825 CCTCC NO：M2021736菌液，生防菌剂中萎缩芽孢杆菌ZY1825的活菌量为109cfu/mL。
本实施例的芽孢杆菌生防种衣剂的制备方法如下：
（1）将萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825 CCTCC NO：M2021736按1％接种量接种至实施例2中所述的液体培养基中，32℃，210r/min培养24h，当菌量达到109cfu/mL，芽孢数占90％以上时，得到萎缩芽孢杆菌菌液（即生防菌剂）。
（2）向无菌三角瓶中加入0.4g SD811、0.025g羧甲基纤维素、0.1g膨润土、0.05mL乙二醇、0.1g珠光粉、10mL无菌水，震荡，使固体在水中均匀分散，再混合分散10分钟，形成预混浆料。将预混浆料抽提到的高剪切乳化分散机内，在密闭（有氧）、加压的条件下充分乳化、分散，使预混浆料更加均匀、细化，然后将此浆料通过管道和隔离泵泵入砂磨机内，研磨2～3次（每次0.5小时）后出料。经过筛、分装后得到红色的可流动的悬浮液体，即为助剂。如图5所示。
（3）取步骤（1）制备的萎缩芽孢杆菌ZY1825菌液与助剂按照2:1的体积比例混匀，得到芽孢杆菌生防种衣剂。
图5为以芽孢杆菌生防种衣剂为活性成分制备的芽孢杆菌生防种衣剂小样。
本实施例制备的芽孢杆菌生防种衣剂的相关技术指标：
（1）外观：艳红色，可流动的悬浮液，无结块。长期静置会出现少量沉淀，轻微摇晃后恢复悬浮状态。
（2）成膜时间：使用本实施例的芽孢杆菌生防种衣剂包衣甘蓝种子，包衣后室温下放置待完全晾干需要2min，包衣后种子呈红色。
图6为经实施例5的芽孢杆菌生防种衣剂包衣的甘蓝种子。
实施例6芽孢杆菌生防种衣剂对甘蓝枯萎病病原菌的抑制作用
将甘蓝种子浸在1%NaClO溶液10min，进行表面消毒，然后用无菌水清洗2～3次，洗去NaClO残留液。将实施例5制备的芽孢杆菌生防种衣剂与甘蓝种子分别按1：30、1：50、1：100包衣比（重量比）包衣甘蓝种子，在培养皿中放一张圆形滤纸，加3mL无菌水浸湿，每个培养皿放100粒甘蓝种子，以未包衣的种子为对照，3次重复。后将培养皿置于25℃恒温培养箱中培养，24h后统计发芽数。每次统计完后，分别补充1mL灭菌水保持种子发芽湿度。参照国家种子检验规程GB/T3543.4，3d后测定发芽率。计算发芽率。综合色泽、粘稠度和发芽试验确定最佳包衣比。结果如图7所示。
图7为芽孢杆菌生防种衣剂与甘蓝种子不同包衣比包衣后的发芽率。
从图7中可知，1:30的发芽率显著高于1:50和1:100，与对照接近。
以下试验验证了本实施例制备的芽孢杆菌生防种衣剂包衣以后对甘蓝枯萎病病原菌的抑制作用：
实验方法：将实施例5制备的芽孢杆菌生防种衣剂按药种重量比1:30包衣到甘蓝种子上，采用平板对峙法，将甘蓝枯萎病病原菌用打孔器接种到直径90mm的PDA 培养基中央，在其四周分别接上使用芽孢杆菌生防种衣剂包衣后的甘蓝种子，3次重复，置于28℃恒温培养箱中培养，以未包芽孢杆菌生防种衣剂的甘蓝种子与甘蓝枯萎病病原菌对峙培养作为对照，连续观察菌落生长情况，培养至对照处理中甘蓝枯萎病病原菌菌落直径≥1.5cm，记录各处理病原菌半径及抑菌带宽度，计算抑菌率。观察使用芽孢杆菌生防种衣剂包衣后的甘蓝种子对甘蓝枯萎病病原菌生长抑制效果。实验结果如图8所示。
图8中，A图为芽孢杆菌生防种衣剂按药种重量比1:30包衣到甘蓝种子后，芽孢杆菌生防种衣剂与甘蓝枯萎病病原菌的对峙结果，B图为对照组的实验结果。
从图8中可以看出使用芽孢杆菌生防种衣剂包衣后的甘蓝种子对甘蓝枯萎病病原菌有明显抑制作用。
以下试验验证了本实施例制备的芽孢杆菌生防种衣剂对甘蓝枯萎病防效评价：
实验方法：将甘蓝枯萎病病原菌尖孢镰孢霉的粘团专化型接种至PLB液体培养基，于25℃、150r/min摇床上培养3d后收集菌液备用，将灭过菌的土壤装到盆中（直径10cm），将使用实施例5制备的芽孢杆菌生防种衣剂包衣及未包衣的甘蓝种子分别种植到装有病土的盆中（直径10cm），每盆1株，每处理10株，重复3次，待甘蓝长至2-3叶期时，将甘蓝枯萎病病原菌菌液均匀倒到甘蓝苗根部附近。甘蓝生长至播种40天后，根据甘蓝枯萎病病情分级标准记录病情级别。结果如表1所示。
表1 甘蓝枯萎病病情指数
| 处理 | 病情指数/100% | 防治效果/100% |
| 种衣剂 | (4.5±0.1155)b | 64.94 |
| 对照 | (12.8333±0.076)a | - |
由表1可知：病情指数CK＞种衣剂，使用本发明的芽孢杆菌生防种衣剂对甘蓝种子包衣后，对甘蓝枯萎病的防治效果达到64.94％。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.芽孢杆菌生防种衣剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）将萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ZY1825制备成萎缩芽孢杆菌菌液，其中的菌量在109cfu/mL以上；所述萎缩芽孢杆菌ZY1825ZY1825的保藏编号为CCTCC NO：M2021736；
（2）将SD811、羧甲基纤维、膨润土、乙二醇、珠光粉，无菌水混合混匀，然后在有氧密闭、加压的条件下充分乳化、分散，使预混浆料均匀、细化，最后再研磨2-3次，得到助剂；所述助剂中各组分的比例为：SD811：羧甲基纤维：膨润土：乙二醇：珠光粉：无菌水=4g：0.25g：1g：0.5ml：1g：100mL；
（3）取步骤（1）制备的萎缩芽孢杆菌ZY1825菌液与步骤（2）制备的助剂按照2:1的体积比例混匀，得到芽孢杆菌生防种衣剂。
2.一种芽孢杆菌生防种衣剂，是应用权利要求1所述的方法制备得到的。
3.权利要求2所述的芽孢杆菌生防种衣剂在包衣甘蓝种子中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述芽孢杆菌生防种衣剂与甘蓝种子的重量比为1:30-1:100。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述芽孢杆菌生防种衣剂与甘蓝种子的重量比为1:30。
6.权利要求2所述的芽孢杆菌生防种衣剂在制备防治甘蓝枯萎病病原菌的包衣剂中的应用；所述甘蓝枯萎病病原菌为尖孢镰孢霉的粘团专化型（Fusarium oxysporum f.sp. conglutinans）。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310941366.8A CN116875509B (zh) | 2023-07-28 | 一种芽孢杆菌生防种衣剂及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310941366.8A CN116875509B (zh) | 2023-07-28 | 一种芽孢杆菌生防种衣剂及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116875509A CN116875509A (zh) | 2023-10-13 |
| CN116875509B true CN116875509B (zh) | 2024-06-04 |
Family
ID=
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20070077357A (ko) * | 2006-01-23 | 2007-07-26 | 충남대학교산학협력단 | 신규 바실러스 아트로페어스 cnu05-1 및 이를 이용한식물병 방제용 조성물 |
| CN104195074A (zh) * | 2014-08-13 | 2014-12-10 | 甘肃农业大学 | 一种高寒草地牧草内生细菌深褐芽孢杆菌菌株、微生物菌剂及其制备方法和应用 |
| CN104430307A (zh) * | 2014-08-03 | 2015-03-25 | 石河子大学 | 一种微胶囊化悬浮微生物种衣剂及制备方法 |
| CN104531545A (zh) * | 2014-09-11 | 2015-04-22 | 北京理工大学 | 一株萎缩芽孢杆菌株dppg-28及其在作物病害防治方面的应用 |
| CN104946567A (zh) * | 2015-07-02 | 2015-09-30 | 北京市农林科学院 | 一株深褐芽孢杆菌及其应用 |
| CN105695366A (zh) * | 2016-04-05 | 2016-06-22 | 中国农业科学院植物保护研究所 | 一种芽孢杆菌及其应用 |
| CN105961425A (zh) * | 2016-07-29 | 2016-09-28 | 惠州市银农科技股份有限公司 | 一种含有咯菌腈和噻虫嗪的悬浮种衣剂及其制备方法 |
| CN106359398A (zh) * | 2016-08-31 | 2017-02-01 | 山东润博生物科技有限公司 | 一种悬浮种衣剂及制备方法与应用 |
| CN107227276A (zh) * | 2017-07-06 | 2017-10-03 | 山西大学 | 一种拮抗黄芪根腐病的芽孢杆菌菌株及其发酵培养基 |
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20070077357A (ko) * | 2006-01-23 | 2007-07-26 | 충남대학교산학협력단 | 신규 바실러스 아트로페어스 cnu05-1 및 이를 이용한식물병 방제용 조성물 |
| CN104430307A (zh) * | 2014-08-03 | 2015-03-25 | 石河子大学 | 一种微胶囊化悬浮微生物种衣剂及制备方法 |
| CN104195074A (zh) * | 2014-08-13 | 2014-12-10 | 甘肃农业大学 | 一种高寒草地牧草内生细菌深褐芽孢杆菌菌株、微生物菌剂及其制备方法和应用 |
| CN104531545A (zh) * | 2014-09-11 | 2015-04-22 | 北京理工大学 | 一株萎缩芽孢杆菌株dppg-28及其在作物病害防治方面的应用 |
| CN104946567A (zh) * | 2015-07-02 | 2015-09-30 | 北京市农林科学院 | 一株深褐芽孢杆菌及其应用 |
| CN105695366A (zh) * | 2016-04-05 | 2016-06-22 | 中国农业科学院植物保护研究所 | 一种芽孢杆菌及其应用 |
| CN105961425A (zh) * | 2016-07-29 | 2016-09-28 | 惠州市银农科技股份有限公司 | 一种含有咯菌腈和噻虫嗪的悬浮种衣剂及其制备方法 |
| CN106359398A (zh) * | 2016-08-31 | 2017-02-01 | 山东润博生物科技有限公司 | 一种悬浮种衣剂及制备方法与应用 |
| CN107227276A (zh) * | 2017-07-06 | 2017-10-03 | 山西大学 | 一种拮抗黄芪根腐病的芽孢杆菌菌株及其发酵培养基 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Bacillus atrophaeus NX-12 Utilizes Exosmotic Glycerol from Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum for Fengycin Production;Xue J等;《J Agric Food Chem》;20230706;第71卷(第28期);第10565-10574页 * |
| In vitro screening of native rhizobacteria and selection of Bacillus atrophaeus for the biocontrol of pepper root rot in the Gansu Province, China;Xu SJ等;《Tropical Plant Pathology》;20230511;第48卷(第04期);第431-442页 * |
| 芽孢杆菌对大豆根腐病防治效果研究;朱文静;伍辉军;高学文;;大豆科学;20110825(第04期);第621-625页 * |
| 萎缩芽胞杆菌MQ19ST15鉴定及对甘蓝枯萎病的盆栽防效;陈云云等;《植物保护》;20211008;第47卷(第05期);第64-71页 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Abdullah et al. | Biological control of Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary with Trichoderma harzianum and Bacillus amyloliquefaciens | |
| CN102952768B (zh) | 一种芽孢杆菌及其菌剂和制备方法与应用 | |
| CN105557756A (zh) | 利用甲基营养型芽孢杆菌nkg-1实施的植物抑菌方法 | |
| CN109699682A (zh) | 一种番茄生防种衣剂及其应用 | |
| CN105132312A (zh) | 一种枯草芽孢杆菌和应用、含有该枯草芽孢杆菌的微生物杀菌剂及其制备方法 | |
| CN108865946A (zh) | 一株高地芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫中的应用 | |
| CN107881129A (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌及其菌剂、菌剂制备方法与应用 | |
| CN104357338B (zh) | 淡紫拟青霉微菌核的发酵方法及其应用 | |
| CN109136123A (zh) | 一株线虫生防菌及其应用 | |
| CN104531571B (zh) | 荧光假单胞菌及生物制剂和在防治甘蔗鞭黑穗病中的应用 | |
| CN102851245A (zh) | 一种抗烟草青枯病的烟草内生菌菌株及菌剂 | |
| JP4247841B2 (ja) | イネ科植物病害に対して防除能を有する糸状菌、これを利用した防除剤、防除方法、および生物資材 | |
| CN109169712A (zh) | 一种复合生防菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN103525748A (zh) | 哈茨木霉厚垣孢子的生产方法 | |
| CN108739804A (zh) | 球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法 | |
| CN116875509B (zh) | 一种芽孢杆菌生防种衣剂及其制备方法 | |
| CN116162577A (zh) | 一株胶质芽孢杆菌及其应用 | |
| CN116875509A (zh) | 一种芽孢杆菌生防种衣剂及其制备方法 | |
| CN106591153B (zh) | 一株对苹果蠹蛾高致病力的绿僵菌菌株及其应用 | |
| CN114774293A (zh) | 一株葡萄穗霉hn17496菌株、生防菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN111349589B (zh) | 一种防治金线莲茎腐病的解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
| CN111642520B (zh) | 一种淡紫拟青霉可湿性粉剂及其应用 | |
| CN114304190A (zh) | 一种木霉菌可湿性粉剂的制备方法 | |
| CN109699683B (zh) | 一种滑石基质爪哇虫草孢子制剂 | |
| CN115851476A (zh) | 一株水稻根内生高地芽孢杆菌258r-7及其生物制剂与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant |