CN104195074A - 一种高寒草地牧草内生细菌深褐芽孢杆菌菌株、微生物菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种高寒草地牧草内生细菌深褐芽孢杆菌菌株、微生物菌剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种高寒草地牧草内生细菌深褐芽孢杆菌菌株，命名为深褐芽孢杆菌（Bacillusatrophaeus）菌株QLY001，保藏编号为CGMCC No.8904，并提供了以其发酵制备的微生物菌剂和应用。该深褐芽孢杆菌QLY001微生物菌剂具有抑菌作用，可以作为微生物农药使用，抑制马铃薯褐腐病菌、马铃薯坏疽病菌、小麦根腐病菌、番茄早疫病原菌和马铃薯炭疽病菌，抑菌率达到60%以上，可以克服现有技术中化学农药环保性差、易产生抗药性和安全性差的缺陷，以实现环保性好、不易产生抗药性和安全性好的优点。

Description

一种高寒草地牧草内生细菌深褐芽孢杆菌菌株、微生物菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及微生物领域，具体涉及一种内生细菌深褐芽孢杆菌菌株、微生物菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
随着社会发展，人们对食品的要求越来越高，基于化学农药对环境的污染和农药残留等问题，植物病害的生物防治成为了研究热点，其中尤以植物内生细菌作为拮抗菌的研究得到众多学者的观注。植物内生细菌是指生活在植物体内，但对植物没有任何实质性伤害的细菌，其具有固氮、溶磷和产IAA等生物学功能，特别是抑菌功能是其成为生防菌资源的有力支撑。植物内生菌的固氮、溶磷和产IAA等生物学功能对宿主有促进生长的作用；植物内生细菌也可以通过分泌抑菌物质、与病原菌竞争营养空间及诱导植物获得抗病性阻止或降低病原菌对植物的侵染或造成的危害。以内生细菌为菌种资源研制的微生物农药不易产生抗药性，不伤害天敌，且能利用农副产品等广泛生产，更重要的是内生细菌可以定殖于作物体内，甚至可以通过种子(苗木)传播于下一代，长期起作用，省时省力，高效，应用于农业生产后为生产绿色或无公害农产品提供了一个新的途径。
微生物肥料作为一种新型肥料，施入土壤后，通过其特定菌株的快速繁殖，能固定大气中的氮素、释放土壤中固定态的磷、钾元素，使得环境的养分潜力得以充分发挥，并为作物生长营造一个良好的土壤微生物环境，在减少化肥用量、降低环境污染、提高农作物品质等方面具有重要意义。尤其是集抑菌、固氮、解磷、解钾和作物生长素于一身的复合微生物肥料的研发，在农业可持续发展中有举足轻重的作用。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术中化学农药和化学肥料环保性差、易产生抗药性和安全性差的缺陷，提供了一种内生细菌深褐芽孢杆菌菌株。
为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种高寒草地牧草内生细菌深褐芽孢杆菌菌株，命名为深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2014年03月10日，保藏编号为CGMCCNo.8904。
进一步的，上述的一种高寒草地牧草内生细菌深褐芽孢杆菌菌株，所述深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001在不含色氨酸的King氏培养基中分泌IAA的浓度为2.6mg/L，在含100mg/L色氨酸的King氏培养基中分泌IAA的浓度为3.42mg/L。
本发明的第二个目的是提供了上述一种内生细菌深褐芽孢杆菌菌株在抑制病原菌中的应用。
进一步的，上述的应用，所述病原菌包括有马铃薯褐腐病菌(Stysanus stemonitis)、马铃薯坏疽病菌(Phoma foveata)、小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、番茄早疫病原菌(Alternaria solani)、马铃薯炭疽病菌(Colletotrichum coccodes)、马铃薯枯萎病菌(Fusarium avenaceum)、孜然根腐病菌(Fusarium solani)和马铃薯干腐病菌(Fusariumoxysporum)。
本发明的第三个目的是提供了一种微生物菌剂，其活性成分为上述深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001的菌体。
进一步的，上述的一种微生物菌剂，所述微生物菌剂中，含有按重量百分比计的深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY0016-12％，培养基余量。
进一步的，上述的一种微生物菌剂，所述培养基由以下物质组成：氯化铵8-16g，玉米粉13-21g，牛肉膏4-6g，蒸馏水或无离子水1000mL，所述培养基的pH值为6.6-7.4。
进一步的，上述的一种微生物菌剂，所述微生物菌剂中，深褐芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)菌株QLY001的活菌数为1.82×1010CFU/mL-3.5×1010CFU/mL。
本发明的第四个目的是提供了上述一种微生物菌剂的制备方法，是将深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001接入至培养基中发酵，接入量为6-12％，发酵时间为33-39h，发酵温度为24-32℃，发酵转速为140-180r/min，发酵溶氧量为55％-75％。
本发明的第五个目的是提供了上述一种微生物菌剂在制备农药或肥料中的应用。
下面通过试验一至试验二，分别对本发明提供的深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)QLY001(CGMCC No.8904)在形态、16S rDNA基因序列进行鉴定。
试验一：对深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)的形态鉴定：
将深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)接种于牛肉膏蛋白胨平板培养基上，28℃培养5d的培养性状为：菌落大小为3-5mm，乳黄色，隆起，较软，不透明，边缘整齐；QLY001(CGMCC No.8904)呈革兰氏阳性，芽孢中生，菌体大小为2.7～6.1μm×0.7～1.5μm。
试验二：对深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)的16S rDNA基因序列鉴定：
将深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)的16S rDNA基因序列在Genebank中与Bacillus atrophaeus(HF545325.1)的同源性在99％以上，并在系统发育树上聚在一起，结合形态特征，将QLY001(CGMCC No.8904)鉴定为深褐芽孢杆菌Bacillusatrophaeus。
下面通过试验三和试验四对深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)的室内抑菌活性和田间防治效果进行测定。
试验三：深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)室内抑菌活性测定：
首次筛选出内生细菌深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)拮抗菌株，将该拮抗菌株接种于QLY001(CGMCC No.8904)培养基中进行培养；同时，将指示菌株接种于马铃薯葡萄糖琼脂(即PDA)培养基中进行培养。当拮抗菌株和指示菌株在各自的培养基中培养活化后，分别用打孔器打成直径为6mm的菌饼。选取指示菌株的菌饼一块，置于PDA培养基中；具体的，可以将该菌饼接种于盛装PDA培养基的平皿的中央位置(平皿直径9cm)；再选取由拮抗菌株得到的菌饼四块，根据对峙法，将该四块菌饼等距接种于距该平皿中央位置为2.5cm的圆周上。将该培养皿在28℃的环境温度下培养5天后，用十字法多次重复测定该PDA培养基中上述菌株的抑菌圈直径，在本试验中，重复测定3次。
深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)对部分病原菌抑菌能力的测定结果如表1所示。
表1
由表1可知，深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)对表1中8种常见病原真菌的抑制率至少可以达到45.01％，特别是对马铃薯坏疽病菌P.foveata、马铃薯褐腐病菌S.stemonitis和马铃薯炭疽病菌C.coccodes的抑制充在70％以上，开发马铃薯专用药肥前景较好。
试验四：深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)菌剂对马铃薯贮藏期坏疽病防治效果测定：
在甘肃省定西市马铃薯入库贮藏时选择来自于重病田的200个均匀一致的薯块，将QLY001(CGMCC No.8904)的发酵液配制成1：10倍液喷于薯块表面，分别用10％氟硅唑5000倍液和50％醚菌酯3000倍液作药剂对照，以清水为空白对照，于2011年11月15日喷药，2012年3月23日调查发病率，并计算防效。结果表明，清水对照马铃薯坏疽病的发病率为38.60％，菌株QLY001(CGMCC No.8904)处理后发病率为18.26％，其防效为52.67％，比5000倍液10％氟硅唑的防效低34个百分点，但与3000倍液50％嘧菌酯相似，如表2所示为深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)对马铃薯坏疽病的防效，说明QLY001(CGMCC No.8904)在贮藏库中对马铃薯坏疽病(P.foveata)具有较好防治效果。
表2
QLY001(CGMCC No.8904) 10％氟硅唑 50％嘧菌酯 CK
发病率(％) 18.26±0.134 5.04±0.220 18.34±0.198 38.60±0.120
防效(％) 52.67 86.93 52.48
下面通过试验五和实验六对深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)的最适培养基及其微生物菌剂的性能进行检测。
试验五：确定深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)的最适培养基：
将深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)分别接种于标号依次为A、B、C、D、E、F和G的培养基中，观测深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCCNo.8904)在这7种培养基中的生长能力。
经观测，发现深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)在这7种培养基中均能生长，但活菌数有差异。其中，对深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCCNo.8904)在这7种培养基中活菌数的测定结果如图1所示。
在图1中，“A”表示营养琼脂(Nutrient Agar，简称NA)培养基，在NA培养基中，包括牛肉胨5.0g、蛋白胨10g、蔗糖20g和蒸馏水/去离子水1000mL；“B”表示PDA培养基，在PDA培养基中，包括马铃薯200g、蛋白胨10g、蔗糖20g和蒸馏水/去离子水1000mL；“C”表示营养肉汤(Nutrient Broth，简称NB)培养基，在NB培养基中，包括牛肉胨3g、蛋白胨5.0g、葡萄糖2.5g和蒸馏水/去离子水1000mL；“D”表示酵母葡萄糖固体(即NYDA)培养基，在NYDA培养基中，包括牛肉胨8g、酵母浸膏5.0g、葡萄糖10g和蒸馏水/去离子水1000mL；“E”表示第一玉米淀粉培养基，在第一玉米淀粉培养基中，包括玉米淀粉2.5g、(NH4)2SO410g、蔗糖10g和蒸馏水/去离子水1000mL；“F”表示第二玉米淀粉培养基，在第二玉米淀粉培养基中，包括玉米淀粉3.0g、(NH4)2SO410g、KH2PO415g、蔗糖10g和蒸馏水/去离子水1000mL；“G”表示蛋白胨培养基，在蛋白胨培养基中，包括蛋白胨10g、酵母浸膏5.0g、NaCl10g和蒸馏水/去离子水1000mL。
由图1可知，在相同的条件下，选择7种不同的培养液培养QLY001(CGMCC No.8904)，其活菌量有明显差异。在A培养液中QLY001(CGMCC No.8904)活菌数为6.83×109CFU/mL，培养液E和G中活菌数均低于3×103CFU/mL，培养液B，C，D和F活菌数显著低于A培养液(图1)。可见，培养液A较为理想，因此，牛肉膏5.0g、蛋白胨10g、蔗糖20g、水1000mL为QLY002(CGMCC No.8904)的基础培养基。
在确定A培养基为最适合深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)生长的培养基的基础上，进一步利用正交法对A培养基中碳氮源含量和pH值进行优化。
将深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)以6％的接种量，以150r/min的转速，在28℃的温度条件下发酵24h后，以玉米粉、马铃薯淀粉、玉米淀粉、白砂糖和不加碳源为处理，测定发酵液中的活菌数。
经综合测定，用4种不同的碳源培养，深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCCNo.8904)活菌量有明显差异，而以玉米粉处理中的活菌量为1.13×1010CFU/mL显著高于其他碳源。因此，玉米粉为筛选出的较优碳源。
将深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)以6％的接种量，以150r/min的转速，在28℃的温度条件下发酵24h后，以硝酸钾、氯化铵、硫酸铵、黄豆粉和不加氮源为处理，测定发酵液中的活菌数。
经综合测定，用4种不同的氮源培养，深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCCNo.8904)活菌量有明显差异，当氮源为氯化铵时活菌数为1.87×1010CFU/mL，显著高于其他氮源所对应的活菌数，因此，选取氯化铵作为最优培养基的氮源。
通过培养基及碳氮源筛选，确定基础培养液的主要成分为氯化铵、玉米粉和牛肉膏，培养液的pH为7，对各因子取不同水平的值，响应曲面设计试验各因子取值范围如表3所示。根据响应曲面法(Box-Behnken)设计，试验设计与结果如表4所示，利用Design-Expert 7.0软件进行二次多项回归拟合，得出菌株QLY002(CGMCC No.8904)的活菌数对氯化铵、玉米粉、牛肉膏及pH的动态响应模型：
Y＝2.039×1010+2.098×109X1+4.830×108X2+9.460×108X3+8.615×108X4-2.827×109+2.973×109X1X3+2.125×109X1X4-5.180×108X2X3-1.067×109X2X4+1.920×108X3X4-5.869×109X1 2-3.073×109X2 2-2.721×109X3 2-1.172×109X4 2+1.605×109X1 2X3+1.929×109X1X2 2-3.312×109X2 2X4+2.757×109X2X3 3-3.100×109X3X4 2
R2＝0.9798，矫正决定系数Adj-R2＝0.9370，式中Y为QLY001(CGMCC No.8904)活菌数的预测值。由校正决定系数可以认为回归模型拟合程度较好；氯化铵、玉米粉、牛肉膏及pH对活菌数的影响显著，该模型P<0.0001，表明回归方程的拟合度极显著。因此，可通过回归模型预测菌株QLY001(CGMCC No.8904)的最佳培养条件。该模型预测当氯化铵、玉米粉和牛肉膏的添加量分别为11.8g/L、16.95g/L、4.95g/L；培养液pH为6.97时，QLY001(CGMCCNo.8904)的活菌数有最大值2.06×1010CFU/mL；经在该培养条件下验证，QLY001(CGMCCNo.8904)的活菌数可达2.18×1010CFU/mL，与预测值差异不显著。说明菌株QLY001(CGMCCNo.8904)的最佳培养液配方为氯化铵11.8g/L、玉米粉16.95g/L、牛肉膏4.95g/L，pH6.97。
表3
表4
试验号 X1 X2 X3 X4 Y(CFU/mL)
1 0 0 0 0 2.03×1010
2 -1 0 0 -1 1.13×1010
3 0 0 -1 -1 1.90×1010
4 -1 1 0 0 1.18×1010
5 1 0 1 0 1.95×1010
6 0 0 0 0 2.04×1010
7 1 0 0 1 1.80×1010
8 0 0 -1 1 1.99×1010
9 0 0 0 0 2.05×1010
10 0 1 -1 0 1.66×1010
11 -1 0 0 1 9.25×109
12 -1 0 -1 0 1.03×1010
13 0 0 1 -1 1.43×1010
14 0 1 0 -1 2.00×1010
15 0 -1 -1 0 9.04×109
16 0 0 0 0 2.02×1010
17 1 1 0 0 1.42×1010
18 0 -1 0 -1 1.74×1010
19 0 1 0 1 1.30×1010
20 0 -1 0 1 1.46×1010
21 -1 0 1 0 9.48×109
22 0 0 0 0 2.06×1010
23 0 1 1 0 1.74×1010
24 0 -1 1 0 1.20×1010
25 0 0 1 1 1.60×1010
26 -1 -1 0 0 4.65×109
27 1 -1 0 0 1.84×1010
28 1 0 -1 0 8.32×109
29 1 0 0 -1 1.15×1010
将深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)在上述优化后的培养基中发酵，发酵液中活菌数可以达到1.03×1010CFU/mL～2.06×1010CFU/mL。另外，将深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)在包含氯化铵、玉米粉和牛肉膏的添加量分别为11.8g/L、16.95g/L、4.95g/L；pH6.97，蒸馏水/去离子水1000mL的培养基中发酵，发酵液中活菌数可以达到2.18×1010CFU/mL。
试验六：对深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)微生物菌剂的活性进行检测：
在上述试验五中已确定深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)的最适培养基的基础上，将保存在斜面培养基中的深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)，在营养琼脂(Nutrient Agar，简称NA)培养基的平皿上培养活化24h后，接种于营养肉汤(Nutrient Broth，简称NB)培养基中；培养24h之后，以6％的接种量接入种子发酵罐中培养24h之后，转接种于10L的发酵罐中进行发酵，以发酵液中活菌数为指标，分别对溶氧量、转速、pH值和接种量进行优化，最终深褐芽孢杆菌BacillusatrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)在10L发酵罐中的最适发酵条件为：温度24-32℃，转速为140-180r/min，接种量6％-12％，溶氧量为55％-75％的条件下，进行液体发酵33-39h，活菌数为1.82×1010CFU/mL-3.50×1010CFU/mL。
将深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)在上述发酵条件的发酵罐中发酵，即可制得到具有良好促生能力和防病能力的微生物菌剂。其中，在温度为28℃，接种量为8％，pH值为7.0，溶氧量65％，转速为160r/min和培养时间为36h的发酵条件下，发酵液中活菌数可以达到3.5×1010CFU/mL。
下面通过试验七对深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)的产生吲哚乙酸能力进行检测。
试验七：对深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)的产生吲哚乙酸(IAA)能力测定：
将深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)接种于含有100mg/L色氨酸(或者不含色氨酸)的金氏(King)培养液培养12天后对菌悬浮液和空白对照离心10min，转速为10000r/min，取上清液4mL分别加入等量比色液，黑暗中静置30min后立即用分光光度计测定OD530值，深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)在含有色氨酸(100mg/L)和不含色氨酸的金氏培养基中分泌IAA的量分别为3.42mg/L和2.6mg/L。
本发明的有益效果为：本发明提供的一种内生细菌深褐芽孢杆菌菌株、微生物菌剂及其制备方法和应用，即将具有生物活性的深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCCNo.8904)6-12％，接种于最适培养基中进行液体发酵，得到的发酵液可以直接作为深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)微生物菌剂使用，该深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)微生物菌剂具有抑菌作用，可以作为微生物农药使用，抑制马铃薯褐腐病菌(Stysanus stemonitis)、马铃薯坏疽病菌(Phoma foveata)、小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、番茄早疫病原菌(Alternaria solani)和马铃薯炭疽病菌(Colletotrichum coccodes)，其抑菌率在60％以上，可以作为微生物农药使用，从而可以克服现有技术中化学农药环保性差、易产生抗药性和安全性差的缺陷，以实现环保性好、不易产生抗药性和安全性好的优点。
附图说明
图1为培养液对活菌数的影响结果。
其中，字母表示水平差异显著，小写：P<0.05；大写：P<0.01。
具体实施方式
实施例1：
一种内生细菌深褐芽孢杆菌菌株，命名为深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2014年03月10日，保藏编号为CGMCC No.8904；所述深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001在不含色氨酸的King氏培养基中分泌IAA的浓度为2.6mg/L，在含100mg/L色氨酸的King氏培养基中分泌IAA的浓度为3.42mg/L。
上述内生细菌深褐芽孢杆菌菌株在抑制病原菌中的应用，所述病原菌包括有马铃薯褐腐病菌(Stysanus stemonitis)、马铃薯坏疽病菌(Phoma foveata)、小麦根腐病菌(Bipolarissorokiniana)、番茄早疫病原菌(Alternaria solani)、马铃薯炭疽病菌(Colletotrichumcoccodes)、马铃薯枯萎病菌(Fusarium avenaceum)、孜然根腐病菌(Fusarium solani)和马铃薯干腐病菌(Fusarium oxysporum)。
如上述表1所示，内生细菌深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)对马铃薯坏疽病菌(Phoma foveata)的抑菌率为74.45％；内生细菌深褐芽孢杆菌BacillusatrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)对马铃薯炭疽病菌(Colletotrichum coccodes)抑菌率为70.05％；内生细菌深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)对马铃薯褐腐病菌(Stysanus stemonitis)的抑菌率为71.97％；内生细菌深褐芽孢杆菌BacillusatrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)对小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)的抑菌率为64.65％。
实施例2：
一种微生物菌剂，其活性成分为上述深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001的菌体，其中，含有按重量百分比计的深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001：6％，培养基余量，培养基由以下物质组成：氯化铵8g，玉米粉13g，牛肉膏4g，蒸馏水或无离子水1000mL，所述培养基的pH值为6.6，深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001的活菌数为1.82×1010CFU/mL。
上述微生物菌剂的制备方法，是将深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001接入至培养基中发酵，接入量为6％，发酵时间为33h，发酵温度为24℃，发酵转速为140r/min，发酵溶氧量为55％。微生物菌剂可用作制备农药或肥料。
实施例3：
一种微生物菌剂，其活性成分为上述深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001的菌体，其中，含有按重量百分比计的深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001：9％，培养基余量，培养基由以下物质组成：氯化铵12g，玉米粉17g，牛肉膏5g，蒸馏水或无离子水1000mL，所述培养基的pH值为7.0，深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001的活菌数为3.5×1010CFU/mL。
上述微生物菌剂的制备方法，是将深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001接入至培养基中发酵，接入量为9％，发酵时间为36h，发酵温度为28℃，发酵转速为160r/min，发酵溶氧量为65％。微生物菌剂可用作制备农药或肥料。
实施例4：
一种微生物菌剂，其活性成分为上述深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001的菌体，其中，含有按重量百分比计的深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001：12％，培养基余量，培养基由以下物质组成：氯化铵16g，玉米粉21g，牛肉膏6g，蒸馏水或无离子水1000mL，所述培养基的pH值为7.4，深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001的活菌数为2.18×1010CFU/mL。
上述微生物菌剂的制备方法，是将深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株QLY001接入至培养基中发酵，接入量为12％，发酵时间为39h，发酵温度为32℃，发酵转速为180r/min，发酵溶氧量为75％。微生物菌剂可用作制备农药或肥料。
经试验验证，上述深褐芽孢杆菌Bacillus atrophaeusQLY001(CGMCC No.8904)微生物菌剂，适宜于防治番茄早疫病、小麦根腐病、马铃薯褐腐病、马铃薯坏疽病和马铃薯炭疽病。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种高寒草地牧草内生细菌深褐芽孢杆菌菌株，其特征在于，分离自极端环境条件下的高寒草地牧草体内，命名为深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）菌株QLY001，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2014年03月10日，保藏编号为CGMCC No.8904。
2.根据权利要求1所述的一种高寒草地牧草内生细菌深褐芽孢杆菌菌株，其特征在于，所述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）菌株QLY001在不含色氨酸的King氏培养基中分泌IAA的浓度为2.6 mg/L，在含100 mg/L色氨酸的King氏培养基中分泌IAA的浓度为3.42 mg/L。
3.如权利要求1所述的一种高寒草地牧草内生细菌深褐芽孢杆菌菌株在抑制病原菌中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述病原菌包括有马铃薯褐腐病菌（Stysanus stemonitis）、马铃薯坏疽病菌（Phoma foveata)、小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、番茄早疫病原菌(Alternaria solani)、马铃薯炭疽病菌(Colletotrichum coccodes) 、马铃薯枯萎病菌（Fusarium avenaceum）、孜然根腐病菌（Fusarium solani）和马铃薯干腐病菌（Fusarium oxysporum）。
5.一种微生物菌剂，其特征在于，其活性成分为权利要求1或2所述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）菌株QLY001的菌体。
6.根据权利要求5所述的一种微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂中，含有按重量百分比计的深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）菌株QLY001：6-12%，培养基余量。
7.根据权利要求6所述的一种微生物菌剂，其特征在于，所述培养基由以下物质组成：氯化铵8-16 g，玉米粉13-21 g，牛肉膏4-6 g，蒸馏水或无离子水1000mL，所述培养基的pH值为6.6-7.4。
8.根据权利要求7所述的一种微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂中，深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）菌株QLY001的活菌数为1.82×1010CFU/mL-3.5×1010CFU/mL。
9.根据权利要求5-8任一所述的一种微生物菌剂的制备方法，其特征在于，是将深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）菌株QLY001接入至培养基中发酵，接入量为6-12%，发酵时间为33-39h，发酵温度为24-32℃，发酵转速为140-180r/min，发酵溶氧量为55%-75%。
10.根据权利要求5-8任一所述的一种微生物菌剂在制备农药或肥料中的应用。
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Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104946567A (zh) * 2015-07-02 2015-09-30 北京市农林科学院 一株深褐芽孢杆菌及其应用
CN105410031A (zh) * 2015-11-09 2016-03-23 江苏省农业科学院 一株深褐芽孢杆菌yl3及其应用
CN106007950A (zh) * 2016-05-23 2016-10-12 四川省兰月科技有限公司 芽孢杆菌ly152在制备微生物肥料上的应用
CN106350470A (zh) * 2016-11-18 2017-01-25 甘肃农业大学 解淀粉芽孢杆菌及菌剂和该菌剂的生产方法及其应用
CN107227276A (zh) * 2017-07-06 2017-10-03 山西大学 一种拮抗黄芪根腐病的芽孢杆菌菌株及其发酵培养基
CN108641982A (zh) * 2018-05-09 2018-10-12 青海省农林科学院 一种特氏盐芽孢杆菌s61及其应用
CN110760459A (zh) * 2019-09-29 2020-02-07 青海省农林科学院 一种萎缩芽孢杆菌e20303及其应用
CN111560324A (zh) * 2019-01-28 2020-08-21 福建省农业科学院农业生物资源研究所 一种促生解磷固氮的芽孢杆菌及其应用
CN113667617A (zh) * 2021-08-06 2021-11-19 甘肃农业大学 一种天然高寒草原专用微生物菌剂及其制备方法和应用
CN116333906A (zh) * 2022-07-13 2023-06-27 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) 一种芽孢杆菌及其制备依克多因的方法
CN116875509A (zh) * 2023-07-28 2023-10-13 甘肃省农业科学院植物保护研究所 一种芽孢杆菌生防种衣剂及其制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103333844A (zh) * 2013-07-22 2013-10-02 北京林业大学 一株拮抗杨树炭疽病菌的菌株及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103333844A (zh) * 2013-07-22 2013-10-02 北京林业大学 一株拮抗杨树炭疽病菌的菌株及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HE J等: "Concurrent selection for microbial suppression of Fusarium graminearum, Fusarium head blight and deoxynivalenol in wheat", 《JOURNAL OF APPLIED MICROBIOLOGY》 *
李晶等: "生防枯草芽孢杆菌的研究进展", 《安徽农业科学》 *

Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104946567B (zh) * 2015-07-02 2018-03-23 北京市农林科学院 一株深褐芽孢杆菌及其应用
CN104946567A (zh) * 2015-07-02 2015-09-30 北京市农林科学院 一株深褐芽孢杆菌及其应用
CN105410031A (zh) * 2015-11-09 2016-03-23 江苏省农业科学院 一株深褐芽孢杆菌yl3及其应用
CN105410031B (zh) * 2015-11-09 2018-03-27 江苏省农业科学院 一株深褐芽孢杆菌yl3及其应用
CN106007950A (zh) * 2016-05-23 2016-10-12 四川省兰月科技有限公司 芽孢杆菌ly152在制备微生物肥料上的应用
CN106350470A (zh) * 2016-11-18 2017-01-25 甘肃农业大学 解淀粉芽孢杆菌及菌剂和该菌剂的生产方法及其应用
CN107227276A (zh) * 2017-07-06 2017-10-03 山西大学 一种拮抗黄芪根腐病的芽孢杆菌菌株及其发酵培养基
CN107227276B (zh) * 2017-07-06 2020-08-04 山西大学 一种拮抗黄芪根腐病的芽孢杆菌菌株及其发酵培养基
CN108641982A (zh) * 2018-05-09 2018-10-12 青海省农林科学院 一种特氏盐芽孢杆菌s61及其应用
CN111560324A (zh) * 2019-01-28 2020-08-21 福建省农业科学院农业生物资源研究所 一种促生解磷固氮的芽孢杆菌及其应用
CN110760459A (zh) * 2019-09-29 2020-02-07 青海省农林科学院 一种萎缩芽孢杆菌e20303及其应用
CN110760459B (zh) * 2019-09-29 2021-10-08 青海省农林科学院 一种萎缩芽孢杆菌e20303及其应用
CN113667617A (zh) * 2021-08-06 2021-11-19 甘肃农业大学 一种天然高寒草原专用微生物菌剂及其制备方法和应用
CN116333906A (zh) * 2022-07-13 2023-06-27 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) 一种芽孢杆菌及其制备依克多因的方法
CN116333906B (zh) * 2022-07-13 2023-10-17 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) 一种芽孢杆菌及其制备依克多因的方法
CN116875509A (zh) * 2023-07-28 2023-10-13 甘肃省农业科学院植物保护研究所 一种芽孢杆菌生防种衣剂及其制备方法
CN116875509B (zh) * 2023-07-28 2024-06-04 甘肃省农业科学院植物保护研究所 一种芽孢杆菌生防种衣剂及其制备方法

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