CN108865946A - 一株高地芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫中的应用 - Google Patents

一株高地芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株高地芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫中的应用。该菌株为高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)菌株YT2002。该菌株已于2018年1月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.15213。实验表明：高地芽孢杆菌菌株YT2002生物制剂对番茄根结线虫具有较好的防治效果，最后一次施药后14d其防治效果为63.03％。从番茄长势看，高地芽孢杆菌菌株YT2002对番茄具有明显的促进生长效果，没有药害，安全可靠。

Description

一株高地芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫中的应用
技术领域
本发明属于植物病害生物防治技术领域。具体而言，本发明涉及一株高地芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫中的应用，本发明还涉及采用该高地芽孢杆菌制备的生物防治制剂。
背景技术
根结线虫(Meloidogyne spp.)是危害番茄的主要病害之一，它广泛分布于世界各地。随着保护地蔬菜生产面积的增加，特别是日光温室的大面积推广以来，复种指数增加，加之重茬严重，导致根结线虫危害日趋严重，一般可造成减产10％～20％，严重可达30％～40％，甚至绝产。根结线虫对番茄的危害一方面表现在根结线虫取食时食道腺分泌物刺激寄主细胞产生巨形细胞或合细胞，从而使植物体内矿物质代谢、蛋白质和碳水化合物的合成、呼吸作用等正常生理功能改变；另一方面，根结线虫取食和侵入造成的伤口有利于其他病原物侵入，形成复合病害。
目前防治番茄根结线虫的方法包括农业防治和化学防治。其中，农业防治效率低、劳动量大，而且防治作用并不明显；而化学防治的长期用药，使番茄根结线虫产生抗药性，最终导致防治效果不理想，再加上化学药剂的大量使用对番茄质量安全与环境造成许多负面影响。而生物防治具有对人畜安全、环境兼容性好且病原菌不易产生抗药性等优点，因此番茄根结线虫的绿色无公害生物防治越来越多的受到人们关注。芽孢杆菌易从土壤和植株中分离得到，能产生耐热、抗逆性的芽孢，具有生长速度快、营养需求简单、有较强的耐热性及抗逆性、在植物表面易于存活与繁殖、对人畜无害、不污染环境、制剂稳定、施用方便等优点，不仅符合人们对绿色食品的需求，而且为农业的可持续发展提供了保障。因此，芽孢杆菌作为一种较为理想的生防微生物，逐渐成为近年来研究的热点。目前，用于防治植物病害的芽孢杆菌主要有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、侧孢芽孢杆菌(B.laterosporus)、蜡样芽孢杆菌(B.cereus)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)、短小芽孢杆菌(B.pumilus)等。对高地芽孢杆菌的研究报道较少。
发明内容
本发明的目的是提供一株用于高效防治番茄根结线虫的新的微生物——高地芽孢杆菌菌株YT2002。本发明的高地芽孢杆菌菌株具有生长速度快、产孢量大、抗逆性强，在植物表面能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。
本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：本发明所提供的菌株为高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)菌株YT2002，是从烟台市牟平养马岛海滩泥沙中分离获得的，已于2018年1月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏号为CGMCCNo.15213。其具有以下生物学特性：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基或LB(Luria-Bertani)培养基上该菌株菌落形状呈圆形，中部透明，颜色微黄，边缘不整齐；在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，28℃下培养两天后，镜检，菌体细胞呈杆状。经革兰氏染色呈阳性(以大肠杆菌为对照)。经芽孢染色后观察芽孢呈椭圆形或柱状。
本发明高地芽孢杆菌(B.altitudinis)菌株YT2002的培养方法或繁殖方法包括：
(1)普通培养保存采用LB培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15～20g，蒸馏水1000mL，pH调至6.8～7.0。
(2)实验室液体培养采用LB液体培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至6.8～7.0。
(3)固体培养基配方：固料和无机盐，所述固料和无机盐的质量比为98.7∶0.3；所述固料按质量比计为稻壳∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮＝50∶24∶20∶6；所述无机盐的组分及重量比为：磷酸二氢钾11％，硫酸镁9％，硫酸铵15％，轻质碳酸钙65％。
(4)发酵培养配方：同(3)中固体培养基配方。
本发明还提供了一种用于防治番茄根结线虫的生物防治制剂，所述生物防治制剂包括所述的高地芽孢杆菌(B.altitudinis)菌株YT2002。
并且，本发明还提供了一种用于防治番茄根结线虫的生物防治方法，所述生物防治方法包括向具有根结线虫的番茄植株施用上述高地芽孢杆菌(B.altitudinis)菌株YT2002或者上述生物防治制剂。
本发明也提供了上述高地芽孢杆菌菌株或者上述生物防治制剂在防治番茄根结线虫中的用途。
本发明所述的生物防治制剂的制备方法包括以下步骤：
(1)制备高地芽孢杆菌菌株YT2002的种子液；
(2)将步骤(1)制备的种子液接种到固体培养基中，27～29℃下恒温培养；
(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水按质量比1∶15的比例混合，过滤，将滤液接种至发酵培养基，在室温27～29℃、相对湿度85％以上的发酵室中进行发酵培养。
在本发明的一个具体实施方案中，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将所述高地芽孢杆菌的孢子移植到LB液体培养基，27～29℃摇床振荡培养3～5d得到种子液；
(2)将步骤(1)制备的种子液按质量比10％的比例接种到固体培养基中，27～29℃下振荡培养3～5d；
(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水按质量比1∶15的比例混合，过滤，将滤液按体积比1∶6的比例接种至发酵培养基，室温27～29℃、相对湿度85％以上的发酵室中发酵培养8～9d；活性菌可达到70～80亿/克。
其中，步骤(1)中的LB液体培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至6.8～7.0。
步骤(2)中的固体培养基由固料和无机盐组成，所述固料和无机盐的质量比为98.7∶0.3；所述固料按质量比计为稻壳∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮＝50∶24∶20∶6；所述无机盐的组分及重量比为：磷酸二氢钾11％，硫酸镁9％，硫酸铵15％，轻质碳酸钙65％。
步骤(3)中的发酵培养基同步骤(2)的固体培养基。
实验表明，本发明的高地芽孢杆菌菌株具有生长速度快、产孢量大、抗逆性强，在植物表面能够快速大量定殖等特点，具有良好的应用前景。高地芽孢杆菌菌株YT2002生物制剂对番茄根结线虫具有较好的防治效果，最后一次施药后14d其防治效果为63.03％。从番茄长势看，高地芽孢杆菌菌株YT2002对番茄具有明显的促进生长效果，没有药害，安全可靠。该微生物制剂可以作为生物农药或生物肥料，防治番茄根结线虫。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是示例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均在本发明的保护范围内。
实施例1
1、高地芽孢杆菌(B.altitudinis)YT2002的分离与纯化
本发明的高地芽孢杆菌(B.altitudinis)YT2002是从烟台市牟平养马岛海滩泥沙中采用稀释平板法和平板划线法分离获得的，分离方法为：
(1)菌株的分离
样品于2014年4月30日采集自烟台市牟平养马岛海滩泥沙。称取1g泥沙样品于100mL无菌水中，置于30℃摇床中150rpm震荡10min，然后置于60℃水浴锅中孵育30min，取100μL 10-2、10-3、10-4稀释液涂布于LB培养基平板上，每个梯度涂布三个平行，在30℃培养2d后挑取LB培养基上的不同形态的微生物菌落于LB培养基平板上进行划线，定时观察菌落生长情况。然后采用平板划线法，纯化芽孢杆菌菌株，并编号保存。
(2)番茄根结线虫高效拮抗菌株的筛选
①初筛
A.根结线虫二龄幼虫悬浮液的制备
从番茄根部挑取新鲜卵块，置于自制孵化装置中进行孵化，24h后开始收集幼虫，每天收集一次，共收集一周。线虫液稀释为100条/mL，4℃保存待用。
B.芽孢杆菌菌株对南方根结线虫二龄幼虫的作用
吸取菌悬液2mL，加入直径为7.5cm的灭菌培养皿中，再加入2mL二龄幼虫的悬浮液，以清水作对照，各处理3次重复，25℃培养。分别在12h、24h、36h、48h和60h后观察线虫的活力。
C.芽孢杆菌菌株对南方根结线虫卵块孵化的作用
吸取菌悬液2mL，加入直径为7.5cm的灭菌培养皿中，再加入10粒卵块，以清水作对照，各处理3次重复，25℃培养。分别在24h、48h和60h后观察幼虫的孵化情况。
②复筛
将筛选到的具有高效拮抗活性的芽孢杆菌菌株进行复筛，主要是经过耐温性、耐酸碱性、耐药性试验，筛选到耐性较好的芽孢杆菌菌株，进行盆栽防治试验和田间试验。
本发明人通过大量筛选工作得到一株能够高效防治番茄根结线虫病的高地芽孢杆菌(B.altitudinis)YT2002。实验证明，该高地芽孢杆菌在防治番茄根结线虫病中显示出非常高效的防治效果，使得番茄长势良好。因而，本发明的高地芽孢杆菌是具有广泛应用前景的高地芽孢杆菌新菌株，可以用于制备防治番茄根结线虫病的生物防治制剂。
2、菌株鉴定
(1)微生物学特性：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基或LB(Luria-Bertani)培养基上该菌株菌落形状呈圆形，中部透明，颜色微黄，边缘不整齐；在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，28℃下培养两天后，镜检，菌体细胞呈杆状。经革兰氏染色呈阳性(以大肠杆菌为对照)。经芽孢染色后观察芽孢呈椭圆形或柱状。
(2)分子生物学特性
该菌株的16s rDNA基因序列测定结果如下(SEQ No.1)：TGCAGTCGAGCGGACAGAAGAGAGCTTGCTCCCGGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGAGCTAATACCGGATAGTTCCTTGAACCGCATGGTTCAAGGATGAAAGACGGTTTCGGCTGTCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCAAGAGTAACTGCTTGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTGCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAACCCTAGAGATAGGGCTTTCCCTTCGGGGACAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCTGCGAGACCGCAAGGTTTAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGCAACACCCGAAGTCGG。
(3)细胞形态和理化实验结果
高地芽孢杆菌(B.altitudinis)YT2002的细胞形态和理化实验结果如表1所示。
表1高地芽孢杆菌(B.altitudinis)YT2002的细胞形态和理化实验结果
该高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)菌株YT2002，已于2018年1月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏号为CGMCC No.15213。
实施例2
1、高地芽孢杆菌菌种发酵过程
LB液体培养基配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至6.8～7.0。
发酵培养基由固料和无机盐组成，其中固料为：按质量比稻壳∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮＝50∶24∶20∶6；无机盐的组分及质量比为：磷酸二氢钾11％，硫酸镁9％，硫酸铵15％，轻质碳酸钙65％；固料和无机盐的质量比为98.7∶0.3(质量比)。配制方法：加入适量的水(10-15倍质量)溶解无机盐，得到无机盐溶液；无机盐溶液与固料混合，并加入水最终调整固体培养基的含水量为40-60％，以将固体培养基攥在手中，指缝中有水但不会滴落为宜。
发酵培养基同固体培养基。
高地芽孢杆菌(B.altitudinis)菌株YT2002大量固体发酵过程：
①菌种种子液培养
将高地芽孢杆菌菌株(B.altitudinis)YT2002从试管斜面中挑取少量细菌，移至LB液体培养基中，28℃摇床振荡培养3～5d，此为种子液。
②固体生产菌种的培养
将种子液按10％的质量比接种到固体培养基(500mL三角瓶)中，28℃恒温培养3～5d，中间多次振荡。
③大量固体发酵
将②中固体培养的培养物加入无菌水按1∶15比例稀释，并用灭菌纱布过滤，除去粗渣，即为生产菌液，接种比例按体积比1∶6接种于发酵培养基。将接种的原料置于发酵室(28℃和相对湿度85％以上)中发酵培养8～9d，得到固体发酵培养物活性菌可达到70～80亿/克。
为了明确高地芽孢杆菌(B.altitudinis)菌株固体发酵培养物对番茄根结线虫的防治效果，为其推广应用提供依据。我们于2016年10月～12月在山东省聊城市莘县进行试验，现将试验结果报告如下：
1供试材料及方法
1.1供试药剂
按本发明实施例2发酵方法生产的高地芽孢杆菌(B.altitudinis)菌株YT2002固体发酵培养物(70亿/g)；1.8％阿维菌素乳油(河南绿野之星作物保护有限公司生产，市售)。
1.2试验材料与防治对象
试验材料为番茄，品种为西粉3号；防治对象为番茄根结线虫病。
1.3试验地情况
试验地设在山东省聊城市莘县十八里镇宁塘村冬暖大棚。该地区由于连续种植番茄，番茄根结线虫病的发生也日益严重，特别是在温室条件下四季连续发病，其毁苗种植事件经常发生，产量损失达19％～41％，严重的甚至绝收。试验土壤类型为潮土，有机质含量为1.25％，pH值为7.6，所有试验小区栽培条件及管理措施一致，施药时番茄根结线虫处于发病初期。1.4试验设计及安排
本试验共3个处理，分别为高地芽孢杆菌(B.altitudinis)菌株YT2002固体发酵培养物10倍液、1.8％阿维菌素乳油1000倍液、不施药清水作对照，每个处理4次重复，每个处理60株。于发病初期对病株及其附近植株灌根，连续2次，每次每病株灌药液250ml。于2016年10月16日和12月15日各灌根一次。
1.5试验调查及计算方法
1.5.1气象条件
第1次施药(10月18日)当日多云，风力3级，最高气温为24℃，最低气温为13℃，相对湿度为70％。第2次施药(12月16日)，当日晴，风力3级，最高气温为10℃，最低气温为0℃，相对湿度为69％。
1.5.2药效及安全性调查
药效调查：最后一次施药后14d进行调查。调查30株，调查病株及根系受侵染程度，记录病情级数并计算病情指数。
安全性调查：于第一次施药后7d和14d观察番茄的安全性，如有药害发生，详细描述药害症状并按药害程度分级标准确定药害程度。
番茄根结线虫分级标准：
0级：根系上无根结。
1级：轻度感染，仅有少量的小根结，根结率在3％以下。
2级：根结率为3％～25％。
3级：根结较多，根结率为25％～50％。
4级：在根瘤上有再次根结，50％～75％根系有根结。
5级：根结相互连接成根结团块，75％以上根系有根。
1.5.3药效计算方法
防治效果按式(1)、(2)计算：
式中：CK0——空白对照区施药前病情指数；
CK1——空白对照区施药后病情指数；
PT0————药剂处理前施药前病情指数；
PT1————药剂处理后施药后病情指数。
1.5.4对番茄的直接影响
观察药剂对番茄有无药害，记录药害的类型和程度。此外，也要记录对番茄长势的影响。
用下列方式记录药害：
(a)如果药害能被测量或计算，要用绝对值表示，例如株高。
(b)在其他情况下，可以按下列两种方法估计药害程度和频率：
①按照药害分级方法记录每小区的药害程度，以—、+、++、+++、++++表示。
药害分级方法：
—：无药害；
+：轻度药害，不影响植物生长；
++：中度药害，可复原，不会降低植物生物量；
+++：中度药害，影响植物正常生长，对植物生物量造成一定程度的降低；
++++：严重药害，植物生长受阻，植物生物量降低严重。
②将药剂处理区与空白对照区比较，评价其药害百分率。同时，要准确描述植物的药害症状(矮化、褪绿、畸形等)。
2结果
2.1供试药剂对番茄根结线虫的防治效果
化学防治具有效果快、效率高等优点，但其长期用药，可使番茄根结线虫产生抗药性，最终导致防治效果不理想，再加上化学药剂的大量使用对番茄质量安全与环境造成许多负面影响。而生物防治具有对人畜安全、环境兼容性好且病原菌不易产生抗药性等优点，因此番茄根结线虫的绿色无公害生物防治越来越多的受到人们关注。表3结果显示，高地芽孢杆菌(B.altitudinis)菌株YT2002固体发酵培养物对番茄根结线虫防治效果为63.03％，与1.8％阿维菌素乳油70.25％的防治效果相差较小，表现出了较好的防治效果。采用本发明的高地芽孢杆菌(B.altitudinis)菌株YT2002固体发酵培养物代替阿维菌素来防治番茄根结线虫病，具有对人畜安全、环境兼容性好且病原菌不易产生抗药性等优点。
表2三种药剂处理前番茄根结线虫病害情况
表3三种药剂处理对番茄根结线虫的防治效果
2.2番茄安全性调查
经施药7d和14d观察，各药剂处理区与对照区相比，番茄生长正常，无药害产生，说明高地芽孢杆菌粉剂对番茄安全。
3小结
3.1从病情指数和防治效果来看，高地芽孢杆菌(B.altitudinis)菌株YT2002(保藏号CGMCC No.15213)对番茄根结线虫具有较好的防治效果，最后一次施药后14d其防治效果为63.03％。
3.2从番茄长势看，高地芽孢杆菌(B.altitudinis)菌株YT2002对番茄具有明显的促进生长效果，没有药害，安全可靠。
SEQUENCE LISTING
<110> 毕乃亮
<120> 一株高地芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫中的应用
<130> 0
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1389
<212> DNA
<213> 高地芽孢杆菌（Bacillus altitudinis）菌株YT2002的16s rDNA基因序列
<400> 1
tgcagtcgag cggacagaag agagcttgct cccggatgtt agcggcggac gggtgagtaa 60
cacgtgggta acctgcctgt aagactggga taactccggg aaaccggagc taataccgga 120
tagttccttg aaccgcatgg ttcaaggatg aaagacggtt tcggctgtca cttacagatg 180
gacccgcggc gcattagcta gttggtgagg taacggctca ccaaggcaac gatgcgtagc 240
cgacctgaga gggtgatcgg ccacactggg actgagacac ggcccagact cctacgggag 300
gcagcagtag ggaatcttcc gcaatggacg aaagtctgac ggagcaacgc cgcgtgagtg 360
atgaaggttt tcggatcgta aagctctgtt gttagggaag aacaagtgca agagtaactg 420
cttgcacctt gacggtacct aaccagaaag ccacggctaa ctacgtgcca gcagccgcgg 480
taatacgtag gtggcaagcg ttgtccggaa ttattgggcg taaagggctc gcaggcggtt 540
tcttaagtct gatgtgaaag cccccggctc aaccggggag ggtcattgga aactgggaaa 600
cttgagtgca gaaggggaga gtggaattcc acgtgtagcg gtgaaatgcg tagagatgtg 660
gaggaacacc agtggcgaag gcgactctct ggtctgtaac tgacgctgag gagcgaaagc 720
gtggggagcg aacaggatta gataccctgg tagtgcacgc cgtaaacgat gagtgctaag 780
tgttaggggg tttccgcccc ttagtgctgc agctaacgca ttaagcactc cgcctgggga 840
gtacggtcgc aagactgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca 900
tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt cttgacatcc tctgacaacc 960
ctagagatag ggctttccct tcggggacag agtgacaggt ggtgcatggt tgtcgtcagc 1020
tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc aacccttgat cttagttgcc 1080
agcattcagt tgggcactct aaggtgactg ccggtgacaa accggaggaa ggtggggatg 1140
acgtcaaatc atcatgcccc ttatgacctg ggctacacac gtgctacaat ggacagaaca 1200
aagggctgcg agaccgcaag gtttagccaa tcccacaaat ctgttctcag ttcggatcgc 1260
agtctgcaac tcgactgcgt gaagctggaa tcgctagtaa tcgcggatca gcatgccgcg 1320
gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcaca ccacgagagt ttgcaacacc 1380
cgaagtcgg 1389

Claims (8)

1.高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)菌株YT2002，所述菌株的保藏编号为：CGMCCNo.15213。
2.权利要求1所述的高地芽孢杆菌菌株YT2002在防治番茄根结线虫中的用途。
3.一种生物防治制剂，包括权利要求1所述的高地芽孢杆菌菌株YT2002。
4.权利要求3所述的生物防治制剂的制备方法，其特征是，包括以下步骤：
(1)制备高地芽孢杆菌菌株YT2002的种子液；
(2)将步骤(1)制备的种子液接种到固体培养基中进行培养；
(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水混合，过滤，将滤液接种至发酵培养基，在室温27～29℃、相对湿度85％以上的发酵室中进行发酵培养。
5.如权利要求4所述的生物防治制剂的制备方法，其特征是，
步骤(2)中的固体培养基包括固料和无机盐，所述固料和无机盐的质量比为98.7∶0.3；所述固料按质量比计为稻壳∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮＝50∶24∶20∶6；所述无机盐的组分及重量比为：磷酸二氢钾11％，硫酸镁9％，硫酸铵15％，轻质碳酸钙65％；
步骤(3)中的发酵培养基同步骤(2)的固体培养基。
6.如权利要求5所述的生物防治制剂的制备方法，其特征是，
(1)将高地芽孢杆菌菌株YT2002的孢子移植到LB液体培养基，27～29℃摇床振荡培养3～5d得到种子液；
(2)将步骤(1)制备的种子液按质量比10％的比例接种到固体培养基中，27～29℃下振荡培养3～5d；
(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水按质量比1∶15的比例混合，过滤，将滤液按体积比1∶6的比例接种至发酵培养基，室温27～29℃、相对湿度85％以上的发酵室中发酵培养8～9d。
7.权利要求3所述的生物防治制剂在防治番茄根结线虫中的用途。
8.一种用于防治番茄根结线虫的生物防治方法，包括向具有根结线虫的番茄植株施用权利要求1所述的高地芽孢杆菌菌株YT2002或者权利要求3所述的生物防治制剂。
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