CN116850131A - 一种雷公藤多苷自溶性微针及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明所要解决的技术问题在于提供一种雷公藤多苷自溶性微针及其制备方法。DMNs‑TG成型性、机械效能、溶解性良好，且微针作用后人体皮肤后无明显刺激性。DMNs‑TG中含总二萜量为2.17±0.11μg/片、总生物碱含量为210.76±2.46μg/片。通过降低大鼠血清中炎性因子的TNF‑ɑ、IL‑17、PGE2、IgG、IgM、IgA水平，并通过调控滑膜中OPG及RANKL蛋白因子水平发挥治疗RA的作用。

Description

一种雷公藤多苷自溶性微针及其制备方法
发明领域：
本发明涉及一种雷公藤多苷自溶性微针及其制备方法，属于药品技术的领域。
背景技术
类风湿性关节炎，是一种病因未明的慢性、以炎性滑膜炎为主的系统性疾病。其特征是手、足小关节的多关节、对称性、侵袭性关节炎症，经常伴有关节外器官受累及血清类风湿因子阳性，可以导致关节畸形及功能丧失。我国目前约有500万名类风湿性关节炎患者，平均发病年龄只有45岁。类风湿关节炎病情多反复且逐渐加重，最终造成关节结构破坏、畸形，导致患者残疾、丧失劳动力，给患者、家庭及社会带来沉重负担。类风湿性关节炎治疗可以选择经皮给药的方式，经皮给药系统指药物经皮肤吸收进入血液循环并达到有效血药浓度，发挥疾病治疗或预防作用的控释药物系统，它的给药频率较低，延长服药时间，病人的依从性好。这种透皮给药方式虽有许多的优点，但是由于皮肤对药物的吸收主要是表皮途径，其中的角质层是药物透皮吸收的主要屏障，透皮的关键在于如何突破皮肤的屏障作用，而以传统透皮方式透皮给药难以达到预期的治疗效果。因此，开发有效且高效的、安全的物理促渗新方法是促进经皮给药系统发展的基础。
微针(microneedles，MNs)作为一种新型物理促渗技术，能直接穿透皮肤给药。而微针中的可溶性微针(dissolving microneedles，DMNs)因能包载药物，并在插入皮肤后能溶解，具有良好的生物相容性，因此被广泛使用。可溶性微针还有药物缓释作用，可根据治疗需求制作不同降解速度的可溶性微针。
雷公藤多苷(tripterygium glycosides，TG)是从卫矛科植物雷公藤中提取分离到的一种有效组分，其主要的生理活性成分是生物碱类和二萜类物质。近几年TG已广泛用于临床，研究表明TG具有一定的细胞免疫抑制作用，其可能通过降低外周血清TNF-α、IL-6等多种细胞因子水平，在多个环节上抑制免疫应答过程，从而抑制RA病变关节组织表达趋化因子(CCL5)。本发明治疗类风湿性关节炎，将可溶性微针与雷公藤多苷结合制备DMNs-TG，控制雷公藤多苷释放剂量，增强雷公藤制剂的用药安全性，提高生物利用度，最大限度发挥药物作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种雷公藤多苷自溶性微针及其制备方法。DMNs-TG成型性、机械效能、溶解性良好，且微针作用后人体皮肤后无明显刺激性。
为解决以上技术问题，本发明采用以下技术方案实现：
一种雷公藤多苷自溶性微针，按照重量份计，所述雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方为PVP25-28份、PVA7.5-8.5份、CMC-Na0.40-0.64份、雷公藤多苷0.40-0.47份、蒸馏水42-44份和无水乙醇20-23份；所述雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方为PVP32.5-36.5份、PVA9-12份和蒸馏水53-57份。
前述的雷公藤多苷自溶性微针，按照重量份计，所述雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方为PVP26-27份、PVA8-8.1份、CMC-Na0.45-0.62份、雷公藤多苷0.42-0.44份、蒸馏水42.5-43份和无水乙醇21-22份；所述雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方为PVP33.5-35.5份、PVA10-11份和蒸馏水54-56份。
具体的说，前述的雷公藤多苷自溶性微针，按照重量份计，所述雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方为PVP26.77份、PVA8.03份、CMC-Na0.54份、雷公藤多苷0.43份、蒸馏水42.82份和无水乙醇21.42份；所述雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方为PVP34.48份、PVA10.34份和蒸馏水55.17份。
前述的雷公藤多苷自溶性微针的制备方法，所述的雷公藤多苷自溶性微针按照以下步骤制备：
(1)针头的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方称取针尖材料充分溶解并搅拌均匀后注入微针模具中，离心，除去并收集微针模具表面的含药基质液，放入干燥器干燥，得针尖含药的微针模具；
(2)微针背衬层的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方称取基质材料搅拌均匀，离心，除去气泡后注入针尖含药的微针模具，离心，取出具有含药基质液的微针模具干燥成形，脱模，即得。
具体的说，前述的雷公藤多苷自溶性微针的制备方法，所述的雷公藤多苷自溶性微针按照以下步骤制备：
(1)针头的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方称取针尖材料充分溶解并搅拌均匀后注入微针模具中，3950-4050r/min离心9-11min，除去并收集微针模具表面的含药基质液，放入干燥器干燥5.5-6.5h，得针尖含药的微针模具；
(2)微针背衬层的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方称取基质材料搅拌均匀4950-5050r/min离心19-21min除去气泡后注入针尖含药的微针模具，3950-4050r/min离心4-6min，取出具有含药基质液的微针模具干燥成形，脱模，即得。
更具体的说，前述的雷公藤多苷自溶性微针的制备方法，所述的雷公藤多苷自溶性微针按照以下步骤制备：
(1)针头的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方称取针尖材料充分溶解并搅拌均匀后注入微针模具中，4000r/min离心10min，除去并收集微针模具表面的含药基质液，放入干燥器干燥6h，得针尖含药的微针模具；
(2)微针背衬层的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方称取基质材料搅拌均匀5000r/min离心20min除去气泡后注入针尖含药的微针模具，4000r/min离心5min，取出具有含药基质液的微针模具干燥成形，脱模，即得。
前述的雷公藤多苷自溶性微针用于类风湿关节炎的治疗。
具体的说，前述的雷公藤多苷自溶性微针用于类风湿关节炎的治疗是通过通过降低大鼠血清中炎性因子的TNF-ɑ、IL-17、PGE2、IgG、IgM、IgA水平，并通过调控滑膜中OPG及RANKL蛋白因子水平发挥治疗类风湿关节炎的作用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
DMNs-TG成型性、机械效能、溶解性良好，且微针作用后人体皮肤后无明显刺激性。DMNs-TG中含总二萜量为2.17±0.11μg/片、总生物碱含量为210.76±2.46μg/片。通过降低大鼠血清中炎性因子的TNF-ɑ、IL-17、PGE2、IgG、IgM、IgA水平，并通过调控滑膜中OPG及RANKL蛋白因子水平发挥治疗RA的作用。
说明书附图说明：
图1：雷公藤多苷可溶性微针制备图；
图2：DMNs-TG的形态学观察(1：4*10的显微镜图；2：相机全景图)；
图3：DMNs-TG的皮肤穿刺形态图；
图4：在体实验溶解情况；
图5：离体实验溶解情况；
图6：雷公藤甲素紫外线性关系图；
图7：雷公藤次碱标准曲线图；
图8：各组大鼠造模后的足爪图片；
图9：各组大鼠给药后的足爪图片；
图10：各组大鼠心脏指数图；
图11：各组大鼠肝脏指数图；
图12：各组大鼠脾脏指数图；
图13：各组大鼠肺脏指数图；
图14：各组大鼠肾脏指数图；
图15：各组大鼠滑膜H&E染色情况；
图16：各组大鼠关节软骨H&E染色情况；
图17：各炎症因子标准曲线图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
实施例1。
1处方：
(1)雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方为PVP26.77g、PVA8.03g、CMC-Na0.54g、雷公藤多苷0.43g、蒸馏水42.82g和无水乙醇21.42g；
(2)所述雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方为PVP34.48g、PVA10.34份和蒸馏水55.17g。
2.制备工艺：
(1)针头的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方称取针尖材料充分溶解并搅拌均匀后注入微针模具中，4000r/min离心10min，除去并收集微针模具表面的含药基质液，放入干燥器干燥6h，得针尖含药的微针模具；
(2)微针背衬层的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方称取基质材料搅拌均匀5000r/min离心20min除去气泡后注入针尖含药的微针模具，4000r/min离心5min，取出具有含药基质液的微针模具干燥成形，脱模，即得。
实施例2。
1处方：
(1)雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方为PVP25g、PVA7.5g、CMC-Na0.40g、雷公藤多苷0.40g、蒸馏水42g和无水乙醇20g；
(2)雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方为PVP32.5g、PVA9g和蒸馏水53g。
2工艺：
(1)针头的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方称取针尖材料充分溶解并搅拌均匀后注入微针模具中，3950r/min离心9min，除去并收集微针模具表面的含药基质液，放入干燥器干燥5.5h，得针尖含药的微针模具；
(2)微针背衬层的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方称取基质材料搅拌均匀4950r/min离心19min除去气泡后注入针尖含药的微针模具，3950r/min离心4min，取出具有含药基质液的微针模具干燥成形，脱模，即得。
实施例3。
1处方：
(1)雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方为PVP28g、PVA8.5g、CMC-Na0.64g、雷公藤多苷0.47g、蒸馏水44g和无水乙醇23g；
(2)雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方为PVP36.5g、PVA12份和蒸馏水57g。
2工艺：
(1)针头的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方称取针尖材料充分溶解并搅拌均匀后注入微针模具中，4050r/min离心11min，除去并收集微针模具表面的含药基质液，放入干燥器干燥6.5h，得针尖含药的微针模具；
(2)微针背衬层的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方称取基质材料搅拌均匀5050r/min离心21min除去气泡后注入针尖含药的微针模具，4050r/min离心6min，取出具有含药基质液的微针模具干燥成形，脱模，即得。
实施例4。
1处方：
(1)雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方为PVP25g、PVA8.5g、CMC-Na0.48g、雷公藤多苷0.41g、蒸馏水43g和无水乙醇20g；
(2)雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方为PVP35g、PVA12份和蒸馏水57g。
2工艺：
(1)针头的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方称取针尖材料充分溶解并搅拌均匀后注入微针模具中，3950r/min离心11min，除去并收集微针模具表面的含药基质液，放入干燥器干燥6h，得针尖含药的微针模具；
(2)微针背衬层的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方称取基质材料搅拌均匀5050r/min离心19min除去气泡后注入针尖含药的微针模具，4000r/min离心5min，取出具有含药基质液的微针模具干燥成形，脱模，即得。
本发明进行了大量的实验研究，以下为本发明实验研究的结果：
一、雷公藤多苷可溶性微针的制备及其初步质量评价
1.材料
1.1仪器
1.2试药
实验用水为去离子水，其他试剂均为分析纯。
2.微针的制备方法与评价指标
2.1微针的制备
实验中采取两步离心法制备DMNs-TG。第1步，微针头的制备：按一定比例称取基质材料于烧杯中，加入一定量对照品的含醇水溶液，充分溶解并搅拌均匀。将含药的基质液注入微针模具中，在常温条件下，4000r/min(3580×g)离心10min，除去并收集微针模具表面多余的含药基质液，放入干燥器中干燥6h后取出备用；第2步，微针背衬层的制备：称取基质材料溶于去离子水，搅拌均匀离心除去气泡后注入微针模具，4000r/min(3580×g)离心5min，取出具有含药基质液的微针模具干燥成形，用弯镊小心脱模，即得含药自溶性微针。微针模具放入热水中超声清洗后，放入鼓风干燥箱干燥。制备工艺流程如图1。
2.2.微针成型性的评价
以成膜性、平整度、气泡量、含针率四个评价指标考察基质材料的成型性，并考察相容性。通过肉眼及正置光学显微镜下观察其外观形态。具体检测项目如下表1.1。
表1.1自溶性微针成型性观察项目
2.3雷公藤多苷可溶性微针机械性能评价
按照表1.2所列操作，采用铝箔穿刺和离体大鼠皮肤穿刺实验对微针的机械强度进行考察。
表1.2微针机械效能观察项目
3.微针处方前研究
两步离心法制备的微针由背衬层以及针尖两层构成，考虑微针载药量低以及针尖载药会降低微针机械性能等问题，需对微针的针尖是否加入增塑剂以及助溶剂进行考察。通过预实验对影响微针制备中的因素如基质溶液除气泡方法、微针的基质材料以及基质材料的加水量、微针干燥方法进行了考察，确定了微针针尖增塑剂的种类、助溶剂的种类以及助溶剂的量。
3.1微针基质背衬层材料的选择
3.1.1基质溶液除气泡方法的选择
微针基质溶解后会产生大量的气泡，基质溶液气泡的有无直接影响了后续微针制备的成型性。本实验分别考察了静置、超声与离心除气泡的效果，时间均为20min，离心转数为5000r/min，而超声频率为53HZ。
3.1.2微针背衬层单一基质微针制备的筛选
自溶性微针的给药机理是微针刺入皮肤后针尖到达真皮层或活性表皮层，药物随着针体融化而释放，从而达到透皮给药作用，这就要求基质材料固化后具有足够的机械强度、溶解性、稳定性。目前用于微针制备的基质材料可分为天然材料与合成聚合物材料两大类。前者主要包括糖类与蛋白质类。而后者具有结构和性能可调控，且成本相对较低的优点。实验中分别配制20％、30％、40％、50％、60％、70％的PVP溶液；10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％的PVA溶液；1％、2％、3％的HA溶液；10％、15％、20％、25％的CS溶液；30％、50％、70％的海藻糖溶液；20％、30％的蔗糖溶液及20％、30％的ɑ-葡聚糖溶液；10％、15％的海藻酸钠溶液；2％的CMC-Na溶液取单一的基质来浇注模具，制备聚合物微针贴片，以“2.2项下”“2.3项下”方法综合进行考察。
3.1.3微针背衬层复合基质材料微针制备的筛选
由单一基质的筛选筛选出PVP基质，PVP属于脆性材料，将它制备成微针会使微针阵列易碎，将几种材料复合制备微针能弥补单一材料的不足。制备过程中改变制备工艺，将两种或两种以上的材料按不同方式复合，可以制备出不同结构的微针，从而得到单一材料微针不具备的性质。目前复合方式主要包括均匀型、层状型、包衣型、包裹微粒型四类。包裹微粒型较均匀型以及层状型来说可以解决药物的载入可能会降低材料的强度的问题。实验拟将PVP与PVA、HA、卡波姆940、海藻酸钠、Dex-40、CMC-Na溶液混合制备微针，对用量进行优选。
3.1.4微针背衬层复合基质材料比例的筛选
有研究表明，称取脆性材料5g与韧性材料1.5g，加入10mL的蒸馏水，均匀溶解后能制得针形良好，机械效能优的微针。本实验优选PVP与PVA最优配比。分别以PVP与PVA配比1:1、1:2、1:3、1:4、2:1、2:3、3:1、3:2、3:4、4:1、4:2、4:3及10:3，按照上述“2.1项下”方法制备微针，基质材料与加水量的比例13：20，制备复合材料微针，显微镜下观察其成形性，铝箔穿刺考察微针的机械效能。
3.2微针背衬层加水量的选择
PVP与PVA的基质材料需要加入适量水溶解，而加水量直接影响微针的机械强度。实验中考察了6、8、10、12、14mL，按照“2.1项下”项方法，PVP与PVA配比为10:3，制备DMNs-TG，相机下观察其成形性，并通过铝箔穿刺观察其机械强度。
3.3干燥方法的选择
实验对室温干燥器干燥、30℃烘箱干燥以及30℃真空干燥三种进行考察，以“2.2、2.3”项下微针的成型性评分作为考察指标。
3.4微针针尖处方优化
3.4.1微针针尖增塑剂的选择
微针制备时，为保证针尖的机械性能，在针尖基质中加入增塑剂以增强微针的机械效能。本实验中在基质中加入0.1g的CMC-Na、甘油以及PEG-400等增塑剂，与未加增塑剂的微针机械性能进行比较筛选。
3.4.2微针针尖助溶剂的选择
由于实验中微针所载的药均为脂溶性成分，实验中在针尖的基质材料中加入一定量的助溶剂来加大药物的溶解以增加载药量。本实验中考察了无水乙醇、甘油、丙二醇等助溶剂对药物溶解情况以及微针的机械强度的影响。预实验发现5mg雷公藤甲素在加入了0.4mL的助溶剂后能完全分散并溶解于基质材料类，为进一步增大载药量，在针尖基质材料液里加入7mg的雷公藤甲素(过量)以及0.4mL不同的助溶剂，按照“2.1项下”项方法制备微针，并观察微针的载药量，载药均匀度以及成型性以及机械性能。其中甲素的色谱条件为甲醇：水＝42:58(v/v)；流速：1.0mL/min；检测波长：218nm。
3.4.3微针针尖加醇量的选择
针尖基质材料液中加入无水乙醇可以增大雷公藤甲素的溶解度，但会影响微针的机械性能等，也会影响微针的载药量。本实验在考察了0.2、0.4、0.6、0.8mL，按照“2.1”项方法制备微针，并观察微针的载药量，载药均匀度以及机械性能。
4.预实验结果
4.1微针基质选择与筛选
(1)通过预实验可知，离心除气泡的效果最好，同时，离心时间可根据制备基质溶液的量来选择。
(2)PVP为脆性材料，制备的微针贴片易发生断裂，而PVA，HA等均为相对韧性的材料，故选用脆性与韧性材料的搭配来制备复合的自溶性微针，实验中通过将韧性材料加到脆性材料里来改善脆性材料易碎的性质。因此本次实验选用PVP作为脆性材料，PVP和PVA搭配制备的微针的综合性能较优。
(3)PVP与PVA比例为3:1和10:3时，其综合的物理性能较优，但鼠皮穿刺实验10:3比例的微针其微针穿刺鼠皮时的孔洞要比3:1比例的微针多，表明10:3比例的微针的穿刺效果要好些，故选择10:3比例的微针。
4.2微针背衬层加水量结果
加水量为8mL制备的DMNs-TG成形性和机械强度最优
4.3干燥方法选择的结果
夏季制备时置于室内干燥器干燥，温度在30±5℃内波动；冬季制备时，将干燥器置于真空干燥箱内，不加压，温度设置30℃进行干燥。
4.4微针针尖处方优选结果
(1)往微针的针尖基质材料中加入CMC-Na可以增加微针的机械效能。
(2)本实验中选用无水乙醇作为助溶剂。
(3)实验中加入0.6mL的乙醇时，微针针尖机械性能不受太大影响，且载药量适中，其RSD值小于3％。
(4)最佳微针处方为当往微针针尖加入8mg的多苷提取物时，微针的成型性及机械效能未受大影响，且其载药均匀性好、因此实验最佳微针处方为8mg的多苷溶液、0.8mL的水、0.4mL的无水乙醇以及7mg的药物量对照品。
4.5正交试验优选微针的最佳处方
其中加水量、加醇量以及加药量为因素，以成型性、机械性能、载药量、载药均匀度为评价指标，正交试验优选DMNs-TG针尖制备。其中成型性与机械性能根据客观评分，而载药量评分，则是当载药为0-50μg时评70分，50-100μg时评80分，100-150μg时评90分，150-200μg时评100分；RSD值评分则为当RSD值为0-2.5％为90分，2.5-5％为80分，5-7.5％为70分，7.5-10％为60分，10-15％为50分，15以上的为40分。其权重系数分别为(0.2，0.2，0.4，0.2)，综合评分＝成型性评分×0.2+机械性能评分×0.2+载药量评分×0.4+RSD值评分×0.2，正交表以及正交试验表结果见表1.3、1.4所示。
表1.3正交因素表
表1.4正交试验表
5.1验证实验
当往微针针尖加入8mg的多苷提取物时，微针的成型性及机械效能未受太大影响，且其载药均匀性好，因此实验中往微针针尖的材料中加入8mg的多苷溶液。
5.DMNs-TG质量评价
5.1自溶性微针成型性考察
分别将制备好的DMNs-TG置于相机及正置光学显微镜下观察其外观形态。结果如图2所示。结果发现，微针的针型清晰完整，针体呈四棱锥形，表面平整。
5.2自溶性微针皮肤穿刺性能考察
采用离体大鼠皮肤穿刺实验考察微针的机械强度进行考察。将制备好的DMNs-TG，进行皮肤刺入实验，具体步骤按照第一部分“2.2.2项下”进行。结果如图3所示。H&E染色结果发现，DMNs-TG的刺入深度为104.70μm，两者之间深度不易的原因是皮肤具有回弹性。因皮肤角质层为皮肤最外层，厚约15-20μm，104.70μm大于其厚度，可以得出结论，微针能穿透大鼠的皮肤角质层，具有良好的机械性能。
5.3自溶性微针溶解性能考察
微针溶解性能的考察分为在体实验以及离体实验。在体实验：为将SD大鼠用10％的水合氯醛麻醉后，用脱毛机脱去大鼠腹部的毛，再用硫化钠涂抹脱毛，然后用生理盐水擦拭干净后，制备好的载药微针按压于大鼠皮肤上，分别于0、5、10、15、20、25min取下，用相机拍摄微针的溶解程度。载药微针在20min时就已全部溶解，说明微针的溶解度良好。离体实验：将制备好的载药微针按印在聚丙烯保鲜膜上，并将此膜覆盖在恒温并装满水的37℃的烧杯上，在0、2、5、10、15、20、25、30min后，肉眼下观察微针针头在饱和蒸汽环境中溶解后的图像。载药微针在25min就已经完全溶解，30min后微针的背衬层也已经溶解了。结果如图4、5。
6.自溶性微针的处方与制备
6.1自溶性微针的处方
DMNs-TG微针的针尖基质处方为PVP 26.77％、PVA 8.03％、CMC-Na 0.54％、雷公藤多苷0.43％、蒸馏水42.82％和无水乙醇21.41％；而微针的背衬层基质处方为PVP34.48％与PVA 10.34％、蒸馏水55.17％。
6.2自溶性微针的制备
按照“2.1项下”步骤制备微针。针头的制备：将针尖材料称取充分溶解并搅拌均匀后注入微针模具中，4000r/min离心10min，除去并收集微针模具表面的含药基质液，放入干燥器干燥6h后取出备用；微针背衬层的制备：称取基质材料搅拌均匀5000r/min离心20min除去气泡后注入针尖含药的微针模具，4000r/min离心5min，取出具有含药基质液的微针模具干燥成形，脱模，即得。
二、雷公藤多苷可溶性微针的含量测定
1.DMNs-TG中总二萜的含量测定
1.1溶液制备
对照品储备液的制备：精密称取雷公藤甲素对照品5.08mg，加甲醇溶解并定容于10mL的容量瓶中，得质量浓度为0.508mg/mL的对照品储备溶液。
供试品溶液的制备：将制备好的DMNs-TG用50％乙醇溶液3mL超声溶解后8000r/min离心10min后倒出上清液，即得。
1.2检测波长的选择
分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各2.0mL，冰水浴中冷却后加入2％3，5-二硝基苯甲酸溶液2.0mL和2mol/LKOH溶液2.0mL，冰水浴中放置10min后，自来水冲淋2min。以无水乙醇加显色剂为空白，在400～800nm波长范围内进行扫描，结果对照品与供试品在543nm处均有最大吸收，故选择543nm作为DMNs-TG中总二萜的检测波长。
1.3标准曲线的绘制
分别精密移取TG对照品储备溶液0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μL置于50mL离心管中，用无水乙醇稀释20.0mL，配的浓度为0.635、1.27、2.54、3.81、5.08、6.35、7.62μg/mL的各对照品溶液，之后加入等量的两种显色剂，显色，在543nm下测定吸光度。结果见表2.1所示，以质量浓度(c)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，建立相应的回归方程为A＝0.0534c+0.1585，r＝0.9997。表明雷公藤甲素在0.635～7.62μg/mL的范围内时，吸光度与浓度具有良好的线性关系。见图6。
表2.1雷公藤甲素紫外线性数据结果(n＝7)
浓度(μg/mL) 0.635 1.27 2.54 3.81 5.08 6.35 7.62
吸光度A 0.1924 0.2284 0.2916 0.3658 0.4245 0.4958 0.5688
1.4精密度试验
取质量浓度为1.27μg/mL的雷公藤甲素对照品溶液，按“2.2.2项下”方法显色后，连续测定6次吸光度值，RSD＝1.03％小于3％，表明精密度良好。结果见表2.2。
表2.2雷公藤甲素紫外精密度结果(n＝6)
次数 1 2 3 4 5 6 RSD％
吸光度A 0.2291 0.2288 0.2284 0.2274 0.2268 0.2228 1.03
1.5稳定性试验
取一份DMNs-TG(批号20201109)样品按“1.1项下”制备供试品溶液，显色后每隔5min测定吸光度值。DMNs-TG在35min内8次测得的吸光度RSD＝2.89％小于3％表明样品溶液在显色后35min内较为稳定，可以进行含量分析。结果见表2.3。
表2.3DMNs-TG总二萜的稳定性结果(n＝8)
时间(min) 0 5 10 15 20 25 30 35 RSD％
吸光度A 0.1903 0.1918 0.1949 0.1978 0.2009 0.202 0.2037 0.2063 2.89
1.6重复性试验
平行制备6份DMNs-TG(批号20201109)供试品溶液，依法测定后计算含量，RSD＝0.0.96％小于3％，说明该方法重复性良好，计算得到每片DMNs-TG中含总二萜为2.17±0.11μg。结果见表2.4。
表2.4DMNs-TG总二萜的重复性结果(n＝6)
1.7加样回收率试验
精密称取6份已知含量的DMNs-TG(批号20201109)，分别加入相应量的雷公藤甲素对照品，按“1.1项”下方法制备供试品溶液，依法测定，计算得加样回收率为(101.61±2.28)％，RSD＝2.24％小于3％，加样回收符合要求。结果见表2.5。
表2.5DMNs-TG总二萜的加样回收结果(n＝6)
2.DMNs-TG中总生物碱的测定
2.1溶液制备
对照品溶液的制备：精密称取雷公藤次碱对照品2.585mg，加乙腈溶解并定容于5mL的容量瓶中，得质量浓度为0.517mg/mL的对照品溶液。
供试品溶液的制备：将制备好的DMNs-TG用50％乙醇溶液4mL超声溶解后8000r/min离心10min后倒出上清液，即得。
2.2检测波长的选择
分别将对照品溶液及供试品溶液，在200～500nm波长范围内进行扫描，以乙腈溶液为空白，结果对照品与供试品在225nm、268nm处均有最大吸收，为避免225nm处雷公藤二萜类及三萜类的较强吸收干扰，故选择268nm作为DMNs-TG中总生物碱的检测波长。
2.3标准曲线的绘制
分别精密移取雷公藤次碱对照品溶液0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mL置于10mL离心管中，用乙腈稀释10.0mL，配制浓度为25.85、31.02、36.19、41.36、46.53、51.7μg/mL的各对照品溶液，在268nm下测定吸光度。以质量浓度(c)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标。结果见表2.6所示，建立相应的回归方程为A＝0.009c+0.0212，r＝0.9995，表明雷公藤次碱在25.85～51.7μg/mL的范围内时，吸光度与浓度具有良好的线性关系。见图7。
表2.6雷公藤次碱的线性实验结果(n＝6)
2.4精密度试验
取质量浓度为46.53μg/mL的雷公藤次碱对照品溶液，按“2.1项”下方法，连续测定6次吸光度值，RSD＝0.81％小于3％，说明精密度良好。结果见表2.7。
表2.7雷公藤次碱的精密度结果(n＝6)
次数 1 2 3 4 5 6 RSD％
吸光度A 0.4427 0.4431 0.4453 0.4462 0.4475 0.4526 0.81
2.5稳定性试验
取一份DMNs-TG(批号20201109)样品按“2.1项”下制备供试品溶液，溶解好后于0、2、4、6、8、10、12、24h测定吸光度值。雷公藤多苷自溶性微针在35min内8次测得的吸光度RSD＝2.00％小于3％，表明样品溶液在24h内较为稳定，可以进行含量分析。结果见表2.8。
表2.8DMNs-TG生物碱的稳定性结果(n＝8)
时间(h) 0 2 4 6 8 10 12 24 RSD％
吸光度A 0.4619 0.4755 0.4655 0.4670 0.4771 0.4844 0.4894 0.4767 2.00
2.6重复性试验
平行制备6份DMNs-TG(批号20201109)供试品溶液，依法测定后计算含量，6份供试品溶液中总二萜含量的RSD＝1.12％小于3％，说明该方法重复性良好，计算得到每片DMNs-TG中总生物碱含量为210.76±2.46μg。结果见表2.9。
表2.9DMNs-TG生物碱的重复性结果(n＝6)
2.7加样回收率试验
取6份已知含量的DMNs-TG(批号20201109)，分别加入相应量的雷公藤次碱对照品，按“2.1项”下方法制备供试品溶液，依法测定，按标准曲线计算含量，结果见表2.10所示，计算得加样回收率为(101.11±1.66)％，RSD＝1.64％小于3％，加样回收符合要求。
表2.10DMNs-TG生物碱的加样回收结果(n＝6)
3.讨论与结论
本发明制备了质量稳定的微针贴剂，对微针的质量进行了初步评价，建立多苷提取物的HPLC含量测定方法及DMNs-TG总二萜和总生物碱紫外含量测定方法，DMNs-TG中含总二萜量为2.17±0.11μg/片、总生物碱含量为210.76±2.46μg/片。雷公藤多苷中总二萜含量为2.33～10.79mg/g，而总生物碱的含量为269.58～708.01mg/g，计算出DMNs-TG中载雷公藤多苷的量为297.67～781.81μg/片。对微针的成型性、机械效能、溶解性、对皮肤刺激性、稳定性的考察，说明样品不同批次之间含量无差异且成型性与机械性能、溶解性良好、对皮肤无明显刺激性、稳定性良好、制备工艺稳定。
三、雷公藤多苷可溶性微针治疗大鼠类风湿的药效学评价
1.1试药
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1.2实验动物
SD大鼠(240±20g)，批号：430726200100342862；许可证号：SCXK(湘)2019-0013，由长沙天勤生物技术有限公司提供。
2方法与结果
2.1类风湿关节炎模型的建立
造模前将胶原溶液与不完全氟氏佐剂从4℃冰箱中取出，取一份冰乙酸与牛II型胶原配成的胶原溶液不完全氟氏佐剂低温等体积充分乳化，乳化后取一滴滴入装满水的烧杯中，呈水滴状即证明充分乳化。随后将除正常组外的9组大鼠先左后足跖皮下注射乳化剂0.4mL，造模第14d同法右后足跖注射0.1mL加强造模6d。
2.2实验分组和给药方案
将70只SD大鼠适应性喂养1w后，随机分为空白组；模型组；雷公藤多苷自溶性微针高、中、低剂量组；吡罗昔康贴片组以及雷公藤多苷片剂组。
按第一部分“6.2项下”的处方制备DMNs-TG微针，其中“6.2项下”处方作为各组的高剂量，中剂量的加药量为高剂量的一半，低剂量加药量为中剂量的一半；吡罗昔康贴片以及雷公藤多苷片组的给药剂量则根据体型系数换算法公式计算。结果可知雷公藤多苷片组以5.6mg/kg进行灌胃，1d/1次；吡罗昔康组为每天1贴，即4.47mg/kg。其余各微针贴片组均为每天一片面积为2.75cm2微针贴剂进行给药。每组每天均正常给水和饲料。造模完成后开始给药，给药时间为28d。
(D代表种属剂量(mg/Kg)，R代表体系系数，大鼠的体表系数为0.09，人的体表系数为0.1、W表示体重。一般人体重按60kg计。大鼠按照0.25kg计。)
2.3观察指标及结果
2.3.1各组大鼠平均重量变化情况
观察大鼠给药及造模期间皮毛光泽度和精神状态，分别于造模前、第二次造模、给药前、给药14d、给药结束后测定大鼠体质量，做好记录。
造模后，除空白组外，各组大鼠精神萎靡、毛发暗淡、后足红肿，行动受限，24h后足爪明显肿胀，14d后出现对侧足爪发生继发性病变，20d后模型足大鼠普遍出现足爪红肿；给药后各组大鼠精神较好，进食正常，毛色有光泽，与正常组相似。从体重变化可以看出，造模后除空白组之外，其余各组的体重增长明显降低，给药后，各组的体重增长开始升高，且各组给药后体重增长率大于模型组。
2.3.2大鼠关节指数的测量
分别于造模后及给药后对每组大鼠的后足关节及继发病变程度进行观察并评分，评分标准见表3.1所示。
表3.1大鼠关节指数评分项目表
造模后各组之间的关节指数与空白组相比，差异极显著(P<0.01)，说明该方法造模效果好；而各组与模型组相比，无显著性差异，说明该方法的造模效果稳定。给药结束后，吡罗昔康组、DMNs-TG高剂量组与模型组相比，差异极显著(P<0.01)；而雷公藤多苷片组、DMNs-TG中剂量组与DMNs-TG低剂量组与模型组相比，差异显著(P<0.05)；关节指数直观分析数据说明，吡罗昔康组、以及DMNs-TG高剂量组的治疗效果要优于雷公藤多苷片组、DMNs-TG中剂量组与DMNs-TG低剂量组。从上述数据可以知道，各给药组效果最好的是DMNs-TG高剂量组。结果见表3.2。
表3.2各组大鼠造模后关节指数评分比较(n＝8，分)
注：与正常组比较，1)P<0.05；2)P<0.01。与模型组比较，3)P<0.05；4)P<0.01。
2.3.3大鼠足爪图片及大鼠肿胀度
相机拍取大鼠给药前及给药后足爪图片，并用游标卡尺测量大鼠足趾肿胀的厚度，即为足趾肿胀度；分别于造模前、造模后(给药前)、给药14d、28d测量各组大鼠的左后足容积，并进行分析。
各组不同时期足肿胀度结果见表3-3所示，造模后各组大鼠足肿胀度图片如图8所示，结束后各组足肿胀度图片如图9所示。从表3.3可知，造模后，除空白组外，各组足肿胀程度明显上升；各组之间的关节指数与空白组相比，差异极显著(P<0.01)，说明该方法造模效果稳定。给药结束后，各治疗组除DMNs-TG低剂量组外均与模型组差异极显著(P<0.01)，说明各治疗组除DMNs-TG低剂量组外均对RA有治疗作用；而DMNs-TG低剂量组虽然有改善的趋势，但无明显差异(P＞0.05)。各治疗组与空白组相比，除阳性药组外，DMNs-TG各组间高剂量组差异极显著(P<0.05)，中剂量组及低剂量组差异极显著(P<0.01)；说明DMNs-TG高剂量组效果优于DMNs-TG中剂量组、低剂量组，其中DMNs-TG高剂量组效果最好。
表3.3各组大鼠在不同时间的足肿胀度数据(n＝8，cm)/>
注：与正常组比较，1)P<0.05；2)P<0.01。与模型组比较，3)P<0.05；4)P<0.01。
2.3.4各组大鼠脏器指数的情况
研究表明，雷公藤多苷具备多种脏器毒性。实验于给药后处死大鼠，取出各组大鼠的心、肝、脾、肺、肾后，剔除脂肪和筋膜，挤尽血液，用滤纸吸干表面的液体并精密称量，分别计算其占体质量的比例(mg/g)。
大鼠造模后心脏指数、肺脏指数、脾脏指数、肾脏指数、肝脏指数均显著性上升，与空白组相比有显著性差异(P<0.01)。给药结束后，各治疗组大鼠的脏器指数有不同程度的下降，与模型组相比，DMNs-TG各剂量组的脾脏指数显著性降低(P<0.01)，肺脏指数有降低(P<0.05)；雷公藤多苷片组的脾脏指数有显著性降低(P<0.01)；吡罗昔康组的心脏指数、肺脏指数、肾脏指数有降低(P<0.05)，脾脏指数显著性降低(P<0.01)。综上，DMNs-TG各组降低脾脏指数的效果要优于其他各组，且其效果比雷公藤多苷片组要好。具体脏器指数趋势见表3.4、图10-图14(注：1)P<0.05；2)P<0.01。与模型组比较，3)P<0.05；4)P<0.01)。
表3.4各组大鼠脏器指数的比较(n＝8，mg/g)
注：与正常组比较，1)P<0.05；2)P<0.01。与模型组比较，3)P<0.05；4)P<0.01。
2.3.5各组大鼠H&E染色情况观察
各组大鼠结束给药后，禁食不禁水喂养24h后，取出各组大鼠的关节滑膜与关节软骨置于4％的多聚甲醛中固定，进行染色，同时对滑膜和软骨进行评分。
滑膜H&E结果如图15所示，正常组大鼠滑膜细胞排列规则、层次明显；模型组见滑膜细胞脉络模糊且排列紊乱，滑膜下层纤维组织增生，炎性细胞浸润及结缔组织增生，DMNs-TG高及吡罗昔康组、雷公藤多苷片组上述情况明显减少；低剂量组上述情况轻微减少。各组滑膜炎病理学评分结果见表4-5所示，结果表明正常组无滑膜炎，模型组为高度滑膜炎，DMNs-TG中、低剂量组为中度滑膜炎，DMNs-TG高剂量组，雷公藤多苷片组及吡罗昔康组为轻度滑膜炎；模型组较之正常组评分显著升高，给药后各组均明显下降，DMNs-TG高剂量组下降最多，DMNs-TG高剂量组下降幅度较少与雷公藤多苷片组下降幅度大致相同；但与空白相比，吡罗昔康组有差异(P<0.05)；DMNs-TG高剂量组、雷公藤多苷片组有显著差异(P<0.01)；综上可知，DMNs-TG各剂量组均能抑制RA大鼠滑膜炎症和血管新生，以DMNs-TG高剂量组为最优。
关节滑膜H&E结果如图16所示，从H&E染色中可以知道，空白组小鼠软骨表层结构完整，软骨细胞均匀分布，软骨基质染色均匀，潮线基本平整，未见其他明显变化；模型组小鼠可见关节组织缺失严重，软骨结构紊乱部分变薄直至缺失，且软骨细胞大量减少消失，局部可见血细胞在外游离；其余各给药组软骨组织关节软骨表面较模型组更为完整，裂隙减小，软骨细胞较模型组更多，无血细胞在外游离。Markin’s评分结果见表3.5、表3.6所示，与空白组相比，吡罗昔康组外的Markin’s评分无显著差异，其余各给药组的Markin’s评分均显著减少(P<0.01)，与模型组相比，各给药组的Markin’s评分均显著减少(P<0.01)，说明各给药组对RA大鼠的关节软骨均有明显改善作用，以吡罗昔康组最优。
表3.5各组大鼠膝关节滑膜炎评分比较(n＝3，分)
注：与正常组比较，1)P<0.05；2)P<0.01。与模型组比较，3)P<0.05；4)P<0.01。
表3.6各组大鼠关节软骨病理组织滑膜炎Markin’s评分比较(n＝3，分)/>
2.3.6血清中TNF-α、IL-17、IgG、IgA、IgM、PGE2的表达
大鼠给药28d后，禁食不禁水喂养24h后腹主动脉取血，3000r/min，10min分离血清，TNF-α、IL-17、IgG、IgA、IgM分别按伊莱瑞特试剂盒方法，检测血清中上述指标含有量。
根据各因子标准品的OD值绘制标准品的剂量反应曲线，结果如图17所示。将各组的值带入得到具体的剂量，其血清中TNF-α、IL-17、IgG、IgA、IgM、PGE2的表达结果见表3.7、表3.8所示。各组小鼠血清ELISA结果，模型组血清中TNF-α、IL-17、PGE2、IgG、IgA、IgM各炎症因子的值均高于空白对照组，有显著性差异(P<0.01)，说明实验造模成功；给药结束后，与空白组相比,雷公藤多苷片组及DMNs-TG高剂量组中PGE2有差异(P<0.05)，其余因子显著性差异(P<0.01)；其余各组各因子均为显著性差异(P<0.01)。与模型组相比，各组之间除了DMNs-TG低剂量组、空白组之外的炎症因子的降低都具有显著性差异(P<0.01)，DMNs-TG低剂量组的TNF-α、PGE2、IgG降低有差异(P<0.05)，IL-17、IgA、IgM的降低都具有显著性差异(P<0.01)，由此说明各组对于RA均有治疗作用。与贴剂组相比，DMNs-TG中剂量组的IgG、IgA、TNF-α、PGE2有差异(P<0.05)，IgM有显著性差异(P<0.01)；DMNs-TG低剂量组的TNF-α、PGE2、IgG有显著差异(P<0.01)，IgA、IgM有差异(P<0.05)。与雷公藤多苷片组相比，DMNs-TG低剂量组TNF-α、IL-17、PGE2、IgG、IgA、IgM有显著性差异(P<0.01)。综上，DMNs-TG高剂量组疗效最优。
表3.7各组大鼠血清中TNF-α、IL-17、PGE2的表达(n＝8，OD值，pg/mL)
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注：与正常组比较，1)P<0.05；2)P<0.01。与模型组比较，3)P<0.05；4)P<0.01；与吡罗昔康组比较，5)P<0.05；6)P<0.01；与雷公藤多苷片组比较，7)P<0.05；8)P<0.01。
表3.8各组大鼠血清中IgG、IgA、IgM的表达(n＝8，OD值)
注：与正常组比较，1)P<0.05；2)P<0.01。与模型组比较，3)P<0.05；4)P<0.01；与吡罗昔康组比较，5)P<0.05；6)P<0.01；与雷公藤多苷片组比较，7)P<0.05；8)P<0.01。
2.3.7滑膜中OPG、RANKL的表达
大鼠给药28d，禁食不禁水喂养24h后，处死。取出各组大鼠的3个关节滑膜置于空EP管中，置于-80℃冰箱冷冻保存。将低温冷冻保存的各组大鼠滑膜组织粉碎后，加入细胞裂解液提取蛋白，后进行电泳(蛋白上样量为40μg)，恒流电转到PVDF膜后TBST漂洗，加入5％脱脂奶粉避光封闭2h后漂洗5次，加入一抗(RANKL、OPG的1/1000稀释液)4℃恒温过夜。漂洗3次后添加二抗(RANKL、OPG的1/50000稀释液)，TBST漂洗5次后加入ECL，曝光后用BandScan分析胶片灰度值(选择GAPDH为内参蛋白)。
滑膜中OPG、RANKL的表达结果见表3.9所示。实验结果表明，与空白对照组相比，模型组大鼠踝关节滑膜组织中OPG的蛋白表达降低，RANKL蛋白表达及RANKL/OPG的比值均显著升高(P<0.01)，说明模型造模成功；与模型组相比,DMNs-TG各剂量组均可以升高OPG的表达、降低RANKL表达和RANKL/OPG比值的趋势，且呈现出一定的量效关系。其中高剂量组作用效果最佳，中剂量组次之，低剂量组虽有降低的趋势，但DMNs-TG低剂量组无统计学意义(P＞0.05)。综上可知，DMNs-TG各剂量组对RA均有不同程度的治疗作用，尤以DMNs-TG高剂量组最优。
表3.9各组大鼠滑膜中OPG、RANKL的蛋白表达以及RANKL/OPG比值/>
注：与正常组比较，1)P<0.05；2)P<0.01。与模型组比较，3)P<0.05；4)P<0.01；与吡罗昔康组比较，5)P<0.05；6)P<0.01；与雷公藤多苷片组比较，7)P<0.05；8)P<0.01。
3.结论与讨论
造模后，模型组较正常组大鼠足爪见明显肿胀、畸形及溶骨现象，给药后各组症状均有减轻，正常组未见异常；H&E染色显示，正常组大鼠滑膜及软骨组织形态正常，模型组大鼠滑膜组织中有大量炎细胞浸润、结缔组织增生，软骨组织中结构紊乱，软骨细胞大量减少消失，局部可见血细胞在外游离；给药后各组上述情况均有减少，DMNs-TG各组降低脾脏指数的效果要优于其他各组，其效果比雷公藤多苷片组还要好。ELISA结果分析发现各治疗组TNF-ɑ、IL-17、PGE2、IgG、IgM、IgA的表达较模型组均有明显减少；免疫组化结果显示，模型组大鼠滑膜组织中OPG的表达显著降低、RANKL及RANKL/OPG比值显著升高，用药后各组较之模型组OPG的表达升高，RANKL、RANKL/OPG比值下降，尤其是DMNs-TG高剂量组。上述实验表明，DMNs-TG各剂量组可以通过改善滑膜组织的炎性浸润、结缔组织增生等情况，以及可以降低大鼠血清中炎性因子的TNF-ɑ、IL-17、PGE2、IgG、IgM、IgA水平，并通过调控滑膜中OPG、RANKL蛋白因子的表达来发挥治疗RA的作用。将DMNs-TG高剂量组与雷公藤多苷片剂组比较可以知道，由于DMNs-TG的给药剂量低于雷公藤多苷片灌胃组，而DMNs-TG高剂量组的疗效却要优于雷公藤多苷片剂组，说明微针作为一种新型物理透皮技术，其治疗作用较于传统的剂型其具备优势，能够直接作用于给药部位，较少的剂量便可以达到与口服相同的效果，证实了微针作为新型物理透皮技术的优越性。

Claims (8)

1.一种雷公藤多苷自溶性微针，其特征在于：按照重量份计，所述雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方为PVP25-28份、PVA7.5-8.5份、CMC-Na0.40-0.64份、雷公藤多苷0.40-0.47份、蒸馏水42-44份和无水乙醇20-23份；所述雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方为PVP32.5-36.5份、PVA9-12份和蒸馏水53-57份。
2.根据权利要求1所述的雷公藤多苷自溶性微针，其特征在于：按照重量份计，所述雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方为PVP26-27份、PVA8-8.1份、CMC-Na0.45-0.62份、雷公藤多苷0.42-0.44份、蒸馏水42.5-43份和无水乙醇21-22份；所述雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方为PVP33.5-35.5份、PVA10-11份和蒸馏水54-56份。
3.根据权利要求2所述的雷公藤多苷自溶性微针，其特征在于：按照重量份计，所述雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方为PVP26.77份、PVA8.03份、CMC-Na0.54份、雷公藤多苷0.43份、蒸馏水42.82份和无水乙醇21.42份；所述雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方为PVP34.48份、PVA10.34份和蒸馏水55.17份。
4.根据权利要求1-3任一项所述的雷公藤多苷自溶性微针的制备方法，其特征在于：所述的雷公藤多苷自溶性微针按照以下步骤制备：
(1)针头的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方称取针尖材料充分溶解并搅拌均匀后注入微针模具中，离心，除去并收集微针模具表面的含药基质液，放入干燥器干燥，得针尖含药的微针模具；
(2)微针背衬层的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方称取基质材料搅拌均匀，离心，除去气泡后注入针尖含药的微针模具，离心，取出具有含药基质液的微针模具干燥成形，脱模，即得。
5.根据权利要求4所述的雷公藤多苷自溶性微针的制备方法，其特征在于：所述的雷公藤多苷自溶性微针按照以下步骤制备：
(1)针头的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方称取针尖材料充分溶解并搅拌均匀后注入微针模具中，3950-4050r/min离心9-11min，除去并收集微针模具表面的含药基质液，放入干燥器干燥5.5-6.5h，得针尖含药的微针模具；
(2)微针背衬层的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方称取基质材料搅拌均匀4950-5050r/min离心19-21min除去气泡后注入针尖含药的微针模具，3950-4050r/min离心4-6min，取出具有含药基质液的微针模具干燥成形，脱模，即得。
6.根据权利要求5所述的所述的雷公藤多苷自溶性微针的制备方法，其特征在于：所述的雷公藤多苷自溶性微针按照以下步骤制备：
(1)针头的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的针尖基质处方称取针尖材料充分溶解并搅拌均匀后注入微针模具中，4000r/min离心10min，除去并收集微针模具表面的含药基质液，放入干燥器干燥6h，得针尖含药的微针模具；
(2)微针背衬层的制备：按照雷公藤多苷自溶性微针的背衬层基质处方称取基质材料搅拌均匀5000r/min离心20min除去气泡后注入针尖含药的微针模具，4000r/min离心5min，取出具有含药基质液的微针模具干燥成形，脱模，即得。
7.根据权利要求1-6任一项所述的雷公藤多苷自溶性微针，其特征在于：所述的雷公藤多苷自溶性微针用于类风湿关节炎的治疗。
8.根据权利要求7所述的所雷公藤多苷自溶性微针，其特征在于：所述的雷公藤多苷自溶性微针用于类风湿关节炎的治疗是通过通过降低大鼠血清中炎性因子的TNF-ɑ、IL-17、PGE2、IgG、IgM、IgA水平，并通过调控滑膜中OPG及RANKL蛋白因子水平发挥治疗类风湿关节炎的作用。
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