CN116829947A - 过敏原检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明的课题在于提供在设计检测精度优异的过敏原检测试剂盒时,用于选择过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的简单且简便的方法,所述过敏原检测试剂盒在拭取试样的检测面中没有附着水分的情况或优选处于干燥状态的情况下使用。通过经过如下的两阶段工序,能够选择检测精度优异的适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合:进行使用树脂体的简单的第一次预选择;接着,实施进行第二次正式选择的工序来进行第二次正式选择,在所述第二次正式选择的工序中,通过将从树脂中流下并从树脂的底部流出的含过敏原展开液载持于免疫层析试纸条的试样用载体上,进行过敏原的检测。
Description
技术领域
本发明涉及用于选择适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的、包括预选择工序和正式选择工序的方法等。
背景技术
过敏是食品或蜱虫等所含的过敏诱发物质(以下,也称为“过敏原”)的摄取为原因的有害的免疫反应,已知会引起皮肤炎、哮喘、消化器官障碍、过敏性休克等。特别是还存在过敏性休克导致死亡的实例,因此提出了用于检测过敏原的各种方法。
其中,利用抗原抗体反应检测由特定的抗原或抗体构成的被检测物质的免疫测定法被广泛使用,采用如下的免疫测定法:通过免疫反应,使由荧光物质等构成的标记物质标记了的抗体或抗原与试样中的被检测物质结合,测定结合后的标记物质。在这些免疫测定法中,广泛使用竞争型反应、夹心型反应,基于利用夹心型反应的免疫色谱法(例如参照专利文献1)的过敏原检测试剂盒有售卖。
本申请的申请人提出了一种免疫层析法:使用利用变性剂和还原剂的提取溶液提取食物过敏原,能够抑制伴随金胶体的崩解的非特异反应,迅速且高精度地检测过敏原(例如参照专利文献2)。此外,提出了一种基于免疫层析法的过敏原的检测方法:不使用在日本被指定为毒物的2-巯基乙醇,而使用阴离子性表面活性剂和硫代硫酸盐或者阴离子性表面活性剂和非离子性表面活性剂,提取出变性和未变性的过敏原,使用包含所述过敏原的测定试样的展开液,根据金胶体的集聚的有无来检测过敏原(例如参照专利文献3)。此外,还提出了一种过敏原的检测方法,其特征在于,对清洗液或冲洗液等的液态试样实施免疫层析处理(例如参照专利文献4)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开平5-010950号公报
专利文献2:日本特开2007-278773号公报
专利文献3:国际公开WO2010/095469号小册子
专利文献4:日本特开2017-129422号公报
发明内容
发明要解决的课题
本发明的发明人如上所述,开发了通过采集食品制造设备中的清洗水或冲洗液作为液态试样并实施免疫层析处理、从而迅速且高精度地检测过敏原的方法。该方法专门用于通过用棉棒等擦拭拭取溶液或清洗水等来检测液态的试样中的过敏原,在能够检测清洗作业或冲洗作业之后是否残留有过敏原的方面是非常有用的方法。但是,在食品制造现场,也有需要在清洗作业前检测过敏原的有无的情况;此外,在食品制造工序中,也有不特别使用水分的工序。而且,存在包装容器、具有电气系统的装置、仓库的备件等不适合进行清洗的地方,在这些地方也有难以通过使用清洗液或冲洗液作为液态试样来检测过敏原的情况。此外,在家庭中,例如在尝试检测蜱虫过敏原时,也多有不适宜用水擦拭拭取部位的情况。此外,用于检测过敏原的试剂盒由于在食品制造现场等其使用频率大,所以被要求价格低且加工性好,但为了从庞大数量的备选中根据检测对象的过敏原确定这样的能够兼顾特性和过敏原的检测精度的拭取部的树脂或展开液等,既耗费时间又费功夫。
本发明的课题在于提供一种在设计检测精度优异的过敏原检测试剂盒时,用于选择适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的简单且简便的方法,所述过敏原检测试剂盒在拭取试样的检测面中没有附着水分的情况或优选处于干燥状态的情况下使用。
用来解决课题的手段
本发明的发明人首先选择已知价格低、加工性好、耐久性好的聚乙烯树脂,进而期待展开液的浸透性变好而使用多孔性的聚乙烯树脂,开始了研究。制作在涂布各种食物过敏原后进行了风干的铝箔作为检测面,使用干燥的多孔性的聚乙烯树脂,拭取干燥的上述检测面。在使用市售的拭取试剂盒中包含的磷酸缓冲生理盐水(phosphate bufferedsaline)(以下有时也称为“PBS”。)作为展开液,将拭取上述过敏原之后的各树脂的拭取面作为顶面而滴加上述展开液的情况下,研究是否包含过敏原的展开液浸透到树脂中、能够从各树脂的底面回收包含过敏原的展开液。但是,在从聚乙烯树脂的顶面滴加由PBS构成的展开液的情况下,展开液完全不浸透到聚乙烯树脂中,无法从树脂的底面回收包含过敏原的展开液。
因此想到,作为适于过敏原检测试剂盒的树脂,除了聚乙烯树脂以外还将聚酯树脂和聚乙烯醇树脂包含在研究对象中,并且在PBS中以各种浓度添加各种表面活性剂,由此制备出包含过敏原的各种展开液作为各种测试用液。而且,通过将各树脂和各种测试用液组合,计算每个过敏原向树脂的浸透性作为过敏原通过率,对于作为检测对象的每个过敏原,选择适于简单且简便的过敏原检测试剂盒的树脂的种类和展开液的种类的组合。
而且,将在磷酸缓冲生理盐水中添加有各种表面活性剂、添加上述表面活性剂的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%的展开液500μL中含有5ppm的过敏原的展开液作为测试用液,滴加到顶面和底面的面积均为35mm2、高度为10mm的长方体的树脂体的顶面,在此情况下,选择截至10分钟后通过了树脂体的底面的过敏原的通过率为75%以上的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合。
在上述通过了树脂体的底面的过敏原的通过率为75%以上的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合中,通过将实际在树脂中流下并从树脂的底部流出的含过敏原展开液载持在过敏原检测试剂盒所使用的免疫层析试纸条的试样用载体上,确认是否能够进行过敏原的检测,结果确认了:即使是通过了树脂体的底面的过敏原的通过率显示75%以上、80%以上、85%以上、90%以上或95%以上的高数值的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,在使用载持有免疫层析试纸条的试样用载体的试剂盒的情况下,有时也无法检测出过敏原。此外,在对聚乙烯树脂中气孔孔径不同的2种树脂进行了研究的情况下,有时得到不同的结果。
因而,确认了通过经过两阶段工序,能够选择适于检测精度更优异的的、例如能够以2μg/mL(ppm)的水平检测过敏原的过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,从而完成了本发明;所述两阶段工序为:作为使用上述树脂体的简单的第一次预备性的选择而进行预选择;接着,实施进行第二次正式选择的工序来进行第二次正式选择,在所述第二次正式选择的工序中,通过将在树脂中流下并从树脂的底部流出的含过敏原展开液载持于免疫层析试纸条的试样用载体上,进行过敏原的检测。
即,本发明如以下事项所规定。
[1]一种选择适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的方法,其包括以下的(a)和(b)的工序:
(a)预选择工序,在将各展开液500μL中含有5ppm的过敏原的测试用液滴加到顶面和底面的面积均为35mm2、高度为10mm的长方体的树脂体的顶面的情况下,预选择截至10分钟后通过了树脂体的底面的过敏原的通过率为75%以上的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,所述各展开液是在磷酸缓冲生理盐水中添加有表面活性剂的展开液,添加所述表面活性剂的浓度分别为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%;
(b)正式选择工序,实施该预选择的组合的过敏原的检测确认测试,正式选择能够检测出2μg/mL的水平的过敏原的适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合。
[2]如上述[1]所述的方法,其中,截至10分钟后通过了树脂体的底面的过敏原的通过率为85%以上。
[3]如上述[1]或[2]所述的方法,其特征在于,树脂为多孔质。
[4]如上述[1]~[3]中任一项所述的方法,其特征在于,树脂选自聚酯、聚乙烯和聚乙烯醇。
[5]如上述[1]~[4]中任一项所述的方法,其特征在于,表面活性剂为聚氧乙烯(10)辛基苯基醚、十二烷基硫酸钠或聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯。
[6]如上述[1]~[5]中任一项所述的方法,其特征在于,过敏原为食物过敏原。
[7]如上述[6]所述的方法,其特征在于,食物过敏原为鸡蛋、牛奶或小麦。
[8]一种用于过敏原检测试剂盒的、通过以下的(a)和(b)的工序选择的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,
(a)预选择工序,在将各展开液500μL中含有5ppm的过敏原的测试用液滴加到顶面和底面的面积均为35mm2、高度为10mm的长方体的树脂体的顶面的情况下,预选择截至10分钟后通过了树脂体的底面的过敏原的通过率为75%以上的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,所述各展开液是在磷酸缓冲生理盐水中添加有表面活性剂的展开液,添加所述表面活性剂的浓度分别为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%;
(b)正式选择工序,实施该预选择的组合的过敏原的检测确认测试,正式选择能够检测出2μg/mL的水平的过敏原的适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合。
[9]一种过敏原检测试剂盒,
具备:长条状的盒主体,在内部具有分别在规定的位置处固定有标记抗体和单克隆抗体的展开支承体,所述标记抗体在对于变性和未变性的过敏原均能够识别的单克隆抗体上结合有标记物,所述单克隆抗体对于变性和未变性的过敏原均能够识别,且识别与上述结合有标记物的标记抗体不同的表位;上述盒主体的盖体,在一端部卡止有由树脂构成的拭取部;以及展开液;
上述拭取部的底部位于上述展开支承体的一端上,其拭取面以将盒主体的盖体插通且突出到外方的状态配置于上述盖体上;
其特征在于,
使用由通过选择适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的方法选择的树脂制成的拭取部和所选择的展开液,来检测过敏原;所述方法包括:
预选择工序,在将各展开液500μL中含有5ppm的过敏原的测试用液,滴加到顶面和底面的面积均为35mm2、高度为10mm的长方体的树脂体的顶面的情况下,预选择截至10分钟后通过了树脂体的底面的过敏原的通过率为75%以上的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,所述各展开液是在磷酸缓冲生理盐水中添加有表面活性剂的展开液,添加所述表面活性剂的浓度分别为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%;以及正式选择工序,实施该预选择的组合的过敏原的检测确认测试,正式选择能够检测出2μg/mL的水平的过敏原的、适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合。
[10]一种过敏原检测试剂盒,
具备:长条状的盒主体,在内部具有分别在规定的位置处固定有标记抗体和单克隆抗体的展开支承体,所述标记抗体在对于变性和未变性的过敏原均能够识别的单克隆抗体上结合有标记物,所述单克隆抗体对于变性和未变性的过敏原均能够识别,且识别与上述结合有标记物的标记抗体不同的表位;上述盒主体的盖体,在一端部卡止有由树脂构成的拭取部;以及展开液;
上述拭取部的底部位于上述展开支承体的一端上,其拭取面以将盒主体的盖体插通且突出到外方的状态配置于上述盖体上;
其特征在于,
使用由通过上述[1]~[7]中任一项所述的方法选择的树脂构成的拭取部和所选择的展开液,检测所选择的过敏原。
[11]如上述[9]或[10]所述的试剂盒,其特征在于,树脂为多孔质。
[12]如上述[9]~[11]中任一项所述的试剂盒,其特征在于,树脂选自聚酯、聚乙烯和聚乙烯醇。
[13]如上述[9]~[12]中任一项所述的试剂盒,其特征在于,展开液包含聚氧乙烯(10)辛基苯基醚、十二烷基硫酸钠或聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯。
[14]如上述[9]~[13]中任一项所述的试剂盒,其特征在于,盒主体和盖体在距拭取部的远端部被卡合,通过在距拭取部的近端部将盒主体和盖体开闭,能够将测定后的展开支承体取出。
发明效果
根据本发明的方法,从达到庞大数量的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合中,通过将包含过敏原的展开液(测试溶液)滴加于树脂体这一非常简单的方法,预选择通过了树脂体的底面的过敏原的通过率为75%以上的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,进而进行使用过敏原试剂盒进行过敏原检测的正式选择,所述过敏原试剂盒采用通过将在树脂中流下并从树脂的底部流出的含过敏原展开液载持于免疫层析试纸条的试样用载体上等的方式,由此,能够以价格低且耗时少的方式选择适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合。
附图说明
图1是表示将在添加有TritonX-100的PBS溶液中溶解有鸡蛋过敏原的、包含5ppm的鸡蛋过敏原的测试用液滴加500μL到树脂体的顶面后截至10分钟后通过了(a)PES、(b)PE1、(c)PE2、(d)PVA的各树脂体底面的过敏原的通过率的图表。
图2是表示将在添加有SDS的PBS溶液中溶解有鸡蛋过敏原的、包含5ppm的鸡蛋过敏原的测试用液滴加500μL到树脂体的顶面后截至10分钟后通过了(a)PES、(b)PE1、(c)PE2、(d)PVA的各树脂体底面的过敏原的通过率的图表。
图3是表示将在添加有Tween20的PBS溶液中溶解有鸡蛋过敏原的、包含5ppm的鸡蛋过敏原的测试用液滴加500μL到树脂体的顶面后截至10分钟后通过了(a)PES、(b)PE1、(c)PE2、(d)PVA的各树脂体底面的过敏原的通过率的图表。
图4是表示将在添加有TritonX-100的PBS溶液中溶解有牛奶过敏原的、包含5ppm的牛奶过敏原的测试用液滴加500μL到树脂体的顶面后截至10分钟后通过了(a)PES、(b)PE1、(c)PE2、(d)PVA的各树脂体底面的过敏原的通过率的图表。
图5是表示将在添加有SDS的PBS溶液中溶解有牛奶过敏原的、包含5ppm的牛奶过敏原的测试用液滴加500μL到树脂体的顶面后截至10分钟后通过了(a)PES、(b)PE1、(c)PE2、(d)PVA的各树脂体底面的过敏原的通过率的图表。
图6是表示将在添加有Tween20的PBS溶液中溶解有牛奶过敏原的、包含5ppm的牛奶过敏原的测试用液滴加500μL到树脂体的顶面后截至10分钟后通过了(a)PES、(b)PE1、(c)PE2、(d)PVA的各树脂体底面的过敏原的通过率的图表。
图7是表示将在添加有TritonX-100的PBS溶液中溶解有小麦过敏原的、包含5ppm的小麦过敏原的测试用液滴加500μL到树脂体的顶面后10分钟后通过了(a)PES、(b)PE1、(c)PE2、(d)PVA的各树脂体底面的过敏原的通过率的图表。
图8是表示将在添加有SDS的PBS溶液中溶解有小麦过敏原的、包含5ppm的小麦过敏原的测试用液滴加500μL到树脂体的顶面后截至10分钟后通过了(a)PES、(b)PE1、(c)PE2、(d)PVA的各树脂体底面的过敏原的通过率的图表。
图9是表示将在添加有Tween20的PBS溶液中溶解有小麦过敏原的、包含5ppm的小麦过敏原的测试用液滴加500μL到树脂体的顶面后截至10分钟后通过了(a)PES、(b)PE1、(c)PE2、(d)PVA的各树脂体底面的过敏原的通过率的图表。
图10表示本发明的试剂盒的主体盒的概念图。
具体实施方式
作为选择适于本发明的过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的方法,只要是包括以下的(a)和(b)的工序的方法即可,没有特别限制:
(a)预选择工序,在将各展开液500μL中含有5ppm的过敏原的测试用液滴加到顶面和底面的面积均为35mm2、高度为10mm的长方体的树脂体的顶面的情况下,预选择截至10分钟后通过了树脂体的底面的过敏原的通过率为75%以上的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,所述各展开液是在磷酸缓冲生理盐水中添加有表面活性剂的展开液,添加所述表面活性剂的浓度分别为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%;
(b)正式选择工序,实施该预选择的组合的过敏原的检测确认测试,正式选择能够检测出2μg/mL的水平的过敏原的适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合;
过敏原、通过了底面的过敏原的通过率为75%以上的树脂和展开液的组合,通过对每个过敏原改变构成拭取部的树脂的种类和展开液的种类(在PBS中添加的表面活性剂的种类和浓度等)进行实验,能够容易地取得。
作为上述工序(a)中的预选择过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的工序,可以列举如下方法:将在各展开液500μL中包含5ppm的过敏原的测试用液滴加到顶面和底面的面积均为35mm2、高度为10mm的长方体的树脂(树脂体)的顶面的情况下,选择截至10分钟后的过敏原透过率为75%以上的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,所述各展开液是在磷酸缓冲生理盐水中添加有表面活性剂的展开液,添加上述表面活性剂的浓度分别为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%;作为上述过敏原的通过率的计算方法,可以通过将通过了上述树脂体的底面的展开液回收而作为回收试样,利用公知的ELISA等的抗原浓度确定方法来确定回收试样中的上述检测对象的过敏原的浓度,具体可以列举计算能够由以下的式子表示的通过了树脂体的底面的过敏原的浓度的比例作为通过率的方法。
[数式1]
作为上述树脂,只要是上述过敏原的通过率为75%以上的公知的树脂即可,没有特别限制,可以例示聚酯、聚乙烯、聚乙烯醇等。
作为上述聚酯,优选为多孔质的聚酯,作为多孔质的聚酯的气孔率,可以例示60%~90%、优选为70%~85%、更优选为73%~83%。
作为上述聚乙烯,优选为多孔质的聚乙烯,更优选为由烧结制法制作的多孔质聚乙烯,作为多孔质的聚乙烯的平均气孔径,可以列举50μm~250μm、优选为75μm~225μm,或者50μm~150μm、优选为75μm~125μm,或者150μm~250μm、优选为175μm~225μm。此外,作为多孔质的聚乙烯的气孔率,可以例示15%~90%、优选为20%~70%、更优选为30%~50%。
作为上述聚乙烯醇,优选为多孔质的聚乙烯醇,作为平均气孔径,可以列举50μm~250μm、优选为75μm~225μm、更优选为100μm~200μm、进一步优选为125μm~175μm。此外,作为多孔质的聚乙烯醇的气孔率,可以例示40%~95%、优选为60%~95%、更优选为80%~92%。
作为上述过敏原,只要是能够诱导抗体的产生的任意的抗原蛋白质或肽即可,没有特别限制,可以例示蛋类,牛奶类,牛肉等的肉类,鲑鱼、金枪鱼等的鱼类,虾、蟹等的甲壳类及软体动物类,谷类,豆类和坚果类,果实类,蔬菜类,啤酒酵母、明胶等的食物过敏原,其中,包括作为乳过敏原的主要成分的αs1酪蛋白、作为乳清过敏原的主要成分的β乳球蛋白、或作为蛋白过敏原的卵清蛋白和卵类粘蛋白、作为小麦过敏原的主要成分的麦醇溶蛋白、作为荞麦的主要蛋白质的分子量24kDa和76kDa的蛋白质、作为花生的主要蛋白质的Arah1、大豆所含的大豆7S球蛋白、芝麻所含的芝麻11S球蛋白、甲壳类所含的原肌球蛋白等的食物过敏原,除此以外,还可以包括室内灰尘、蜱虫及蜱虫的排泄物、花粉、动物的毛、上皮及排泄物、昆虫、霉菌等过敏原。
作为上述展开液,只要是将在磷酸缓冲生理盐水添加有表面活性剂的展开液且包含5ppm的过敏原的500μL展开液作为测试用液滴加到树脂体的顶面后截至10分钟后、通过了树脂体的底面的过敏原的比例为75%以上的展开液即可,没有特别限制,可以列举包含磷酸缓冲生理盐水的展开液,可以适当地列举包含磷酸缓冲生理盐水与聚氧乙烯(10)辛基苯基醚、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate)或聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯(Polyoxyethylene Sorbitan Monolaurate)的展开液。
作为上述磷酸缓冲生理盐水,可以列举在生物学研究中通常所使用的包含氯化钠、氯化钾、钠磷酸盐、钾磷酸盐的公知的缓冲液,可以包括包含钙、镁的PBS(+)、不含钙和镁的PBS(-)。
作为上述聚氧乙烯(10)辛基苯基醚,作为一般的商品名,可以列举以TritonX-100的名称流通的非离子性表面活性剂。上述十二烷基硫酸钠(SDS)作为阴离子性表面活性剂被广泛所知。作为上述聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯,作为通常的商品名,可以列举以Tween20的名称广泛流通的非离子性表面活性剂。
利用上述工序(a)的预选择工序中的过敏原的通过率为75%以上的、过敏原、树脂和展开液的组合,实施上述工序(b)的该预选择的组合的过敏原的检测确认测试,将其测试结果加入考量,能够向正式选择适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的工序进展。
作为本发明中的工序(b)的、正式选择适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的工序,只要是实施上述预选择的组合的过敏原的检测确认测试、选择能够检测出2μg/mL的水平的过敏原的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的工序即可,没有特别限制;上述过敏原的检测确认测试可以使用上述(a)工序中预选择的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,在设想使用的过敏原检测试剂盒中进行。
作为上述过敏原检测试剂盒,可以例示如下的过敏原检测试剂盒,其具备:长条状的盒主体,在内部具有分别在规定的位置处固定有标记抗体和单克隆抗体的展开支承体,所述标记抗体在对于变性和未变性的过敏原均能够识别的单克隆抗体上结合有标记物,所述单克隆抗体对于变性和未变性的过敏原均能够识别,且识别与上述结合有标记物的标记抗体不同的表位;上述盒主体的盖体,在一端部卡止有由树脂构成的拭取部;以及展开液;上述拭取部的底部位于上述展开支承体的一端上,其拭取面以将盒主体的盖体插通且突出到外方的状态配置于上述盖体上。
作为上述拭取部进行拭取的对象的检测面,只要是有可能检测到过敏原的地方即可,没有特别限制,可以例示食品制造现场中的没有附着水分而干燥的食品制造装置、构成食品制造装置的各部件、地面、墙壁、窗户、包装容器等的过敏原有可能附着、残留的地方。此外,可以包括家庭或学校中的桌子、椅子等的家具或备件、地面、墙壁、窗户、门把手、床上用品、窗帘。此外,作为检测面,也包括清洗液或冲洗液的水分蒸发后的检测面,但只要能够发挥本发明的效果,在成为拭取对象的检测面也可以残留有水分。
作为由上述树脂构成的拭取部,其底面位于展开支承体的一端上,以其拭取面将盒主体的盖体插通且突出到外方的状态被卡止于该盖体,只要是由从在上述预选择的工序中过敏原通过率为75%以上的树脂中正式选择的树脂构成的拭取部即可,没有特别限定,为了方便起见也包括拭取部具有支承树脂(部)的框等的支承体等其他部件的情况。
通过构成上述拭取部的树脂的拭取面以将检测盒的盖体插通且突出到外方的状态被卡止于该盖体,上述拭取面能够拭取作为用于检测过敏原有无的对象的检测面;作为将上述树脂以插通盒主体的盖体且突出到外方的状态卡止于该盖体的方法,只要是公知的卡止方法即可,没有特别限定,优选为将树脂卡止到穿孔于盖体中的框上的方法,例如可以列举:通过粘接剂、热板焊接、溶剂结合、超声波焊接等进行卡止的方法;将构成拭取部的树脂利用树脂的伸缩性嵌入到形成用于将树脂卡止的穿孔的框中的方法;在树脂形成槽并嵌入到形成穿孔的框的至少一部分中的方法。
作为构成上述拭取部的树脂的拭取面的形状,可以优选地列举平面,但为了能够应对检测面具有凸凹形状的等不是平面的情况,也可以是凹凸状等的面。
通过构成上述拭取部的树脂的底部位于展开支承体的一端上,在由拭取部的树脂的拭取面拭取检测面后,将展开液从上述拭取部的顶面滴加的情况下,包含过敏原的展开液通过浸透到拭取部的树脂中而流下,经由拭取部的底部,含过敏原展开液能够到达展开支承体的规定的位置。作为上述树脂的底部的形状,只要含过敏原展开液能够到达展开支承体的规定的位置即可,没有特别限制,既可以是四边形等多边形、圆形、椭圆形等的平面,也可以是使展开液以前端变细状流下的圆锥状或棱锥状。
优选的是,在上述展开支承体的规定的位置处设置能够载持上述展开液的试样用载体。作为上述试样用载体,可以例示玻璃棉制的试样垫。而且,通过在该试样用载体、金胶体标记抗体载持体、上述展开支承体优选的是该展开支承体的另一端依次连接吸收展开液的吸收垫等的吸收体,能够制成免疫层析测定用试验片(免疫层析试纸条)。而且,展开液中的过敏原通过毛细管现象等而移动,与金胶体标记抗体结合,该抗原抗体复合体在展开支承体上仍通过毛细管现象等移动,在固定有识别与金胶体标记抗体不同的表位的对于变性和未变性的过敏原的单克隆抗体的规定位置,捕集抗原抗体复合体,根据在规定位置出现的被着色的判定线的有无,能够检测过敏原。
作为在上述单克隆抗体上结合有金胶体的金胶体标记抗体的制作方法,包括现有公知的方法,没有特别限制,例如可以列举以下的方法:在用0.2M碳酸钾溶液调制为pH9.0的金胶体溶液中,加入在2mM硼酸缓冲液(pH9.0)溶解有单克隆抗体的溶液,在室温下反应30分钟后,加入10%BSA溶液,再反应15分钟,进行离心分离。此外,可以通过将上述制作出的金胶体标记抗体涂布于例如玻璃棉制结合垫上并使其干燥,来制作金胶体标记抗体的载持体(部)。
上述展开支承体可以通过将包含识别与金胶体标记抗体不同的表位的对于变性和未变性的过敏原的单克隆抗体的缓冲液例如以直线状涂布在硝酸纤维素膜上并使其干燥后、进行封闭处理来制作。
作为对于上述变性和未变性的过敏原均可识别的单克隆抗体的例子,可以优选列举特异性地识别从作为乳过敏原的主要成分的αs1酪蛋白、作为乳清过敏原的主要成分的β乳球蛋白、作为蛋白过敏原的卵清蛋白和卵类粘蛋白、作为小麦过敏原的主要成分的醇溶蛋白、作为荞麦的主要蛋白质的分子量24kDa和76kDa的蛋白质、作为花生的主要蛋白质的Arah1、作为大豆的主要过敏原的7S球蛋白、作为芝麻的主要过敏原的11S球蛋白中选择的变性和未变性的过敏原的2种单克隆抗体。
更具体而言,作为由本发明的发明人制作出的抗αs1酪蛋白单克隆抗体,可以列举杂交瘤(FERM BP-10263)产生的抗αs1酪蛋白单克隆抗体Pas1CN1、或杂交瘤(FERM BP-10264)产生的抗αs1酪蛋白单克隆抗体Pas1CN2;作为抗β乳球蛋白单克隆抗体,可以列举杂交瘤(FERM BP-11237)产生的抗β乳球蛋白单克隆抗体PβLG3、或杂交瘤(FERM BP-11238)产生的抗β乳球蛋白单克隆抗体PβLG4。
杂交瘤(FERM BP-10263)和杂交瘤(FERM BP-10264)在2004年9月7日被委托保藏于日本国家技术评估学会专利生物保藏中心(NITE-IPOD)(日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 120号室)。杂交瘤(FERM BP-11237)和杂交瘤(FERM BP-11238)在2006年2月2日被委托保藏于日本国家技术评估学会专利生物保藏中心(NITE-IPOD)(日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 120号室)。
作为抗卵清蛋白单克隆抗体,可以列举杂交瘤(FERM BP-11235)产生的抗卵清蛋白单克隆抗体PDOA3和杂交瘤(FERM BP-11236)产生的抗卵清蛋白单克隆抗体PDOA4;作为抗卵类粘蛋白单克隆抗体,可以列举杂交瘤(FERM BP-10279)产生的抗卵类粘蛋白单克隆抗体PNOM1和杂交瘤(FERM BP-10280)产生的抗卵类粘蛋白单克隆抗体PNOM2、杂交瘤(FERM BP-10277)产生的抗卵类粘蛋白单克隆抗体PDOM1和杂交瘤(FERM BP-10278)产生的抗卵类粘蛋白单克隆抗体PDOM2。
杂交瘤(FERM BP-11235)和杂交瘤(FERM BP-11236)在2005年9月6日被委托保藏于日本国家技术评估学会专利生物保藏中心(NITE-IPOD)(日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 120号室)。杂交瘤(FERM BP-10279)、杂交瘤(FERM BP-10280)、杂交瘤(FERMBP-10277)和杂交瘤(FERM BP-10278)在2005年2月24日被委托保藏于日本国家技术评估学会专利生物保藏中心(NITE-IPOD)(日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 120号室)。
作为上述抗小麦醇溶蛋白单克隆抗体,可以列举杂交瘤(FERM BP-10267)产生的抗小麦醇溶蛋白单克隆抗体PGL1和杂交瘤(FERM BP-10268)产生的抗小麦醇溶蛋白单克隆抗体PGL2。
杂交瘤(FERM BP-10267)和杂交瘤(FERM BP-10268)在2004年9月7日被委托保藏于日本国家技术评估学会专利生物保藏中心(NITE-IPOD)(日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 120号室)。
作为上述抗荞麦蛋白质单克隆抗体,可以列举杂交瘤(FERM BP-11241)产生的抗24kDa蛋白质单克隆抗体PBW5、杂交瘤(FERM BP-10272)产生的抗24kDa蛋白质单克隆抗体PBW1、杂交瘤(FERM BP-10273)产生的抗76kDa蛋白质单克隆抗体PBW2、杂交瘤(FERM BP-10274)产生的抗76kDa蛋白质单克隆抗体PBW3。
杂交瘤(FERM BP-11241)在2008年9月22日被委托保藏于日本国家技术评估学会专利生物保藏中心(NITE-IPOD)(日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 120号室)。杂交瘤(FERM BP-10272)、杂交瘤(FERM BP-10273)和杂交瘤(FERM BP-10274)在2005年2月24日被委托保藏于日本国家技术评估学会专利生物保藏中心(NITE-IPOD)(日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 120号室)。
作为上述抗花生Ara h1蛋白质单克隆抗体,可以列举杂交瘤(FERM BP-11240)产生的抗Arah1蛋白质单克隆抗体PAh1-5、杂交瘤(FERM BP-11239)产生的抗Ara h1蛋白质单克隆抗体PAh1-4。
杂交瘤(FERM BP-11240)和杂交瘤(FERM BP-11239)在2006年7月20日被委托保藏于日本国家技术评估学会专利生物保藏中心(NITE-IPOD)(日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 120号室)。
作为上述抗大豆7S球蛋白单克隆抗体,可以列举杂交瘤(NITE BP-02039)产生的抗大豆7S球蛋白单克隆抗体PDSY1和杂交瘤(NITE BP-02040)产生的抗大豆7S球蛋白单克隆抗体PDSY2。
杂交瘤(NITE BP-02039)和杂交瘤(NITE BP-02040)在2015年5月7日被委托保藏于日本国家技术评估学会专利微生物保藏中心(NPMD)(日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室)。
作为上述抗芝麻11S球蛋白单克隆抗体,可以列举杂交瘤(NITE BP-02041)产生的抗芝麻11S球蛋白单克隆抗体PDSE1和杂交瘤(NITE BP-02042)产生的抗芝麻11S球蛋白单克隆抗体PDSE2。
杂交瘤(NITE BP-02041)和杂交瘤(NITE BP-02042)在2015年5月7日被委托保藏于日本国家技术评估学会专利微生物保藏中心(NPMD)(日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室)。
作为能够由本发明检测的过敏原量,作为展开液中的浓度优选为2μg/mL以上,如果考虑拭取部的形状、面积、拭取工作量,希望每100cm2能够检测出1μg以上的过敏原。
在上述长条状的盒主体,只要展开支承体配置在盒主体的内部即可,没有特别限制,但优选的是,与盒的盖体在距拭取部的远端部卡合,通过在距拭取部的近端部将盒主体和盖体开闭,能够将测定后的展开支承体取出;例如,能够用手指将突设在盖体的周壁一部分上的盖体开放片和在上述主体盒的主体周壁上突设于上述盖开放片的附近的主体盒开放片相互离开,通过将上述盖体从上述主体容器开放或分离,能够将盒主体和盖体开闭。
盒主体及其盖体只要能够发挥本发明的效果,其原材料没有限制,但为了能够确认被着色的判定线而优选为透明~半透明的塑料,此外,为了确认被着色后的判定线,也可以在盒主体的盖体上设置透视窗。作为由树脂构成的拭取部和展开支承体被配置在盒主体的内部、与盒的盖体在距拭取部的远端部卡合、在距拭取部的近端部能够将盒主体和盖体开闭的检测盒的例子,可以参照图10。
以下,通过实施例更具体地说明本发明,但本发明的技术范围并不限定于这些例示。
实施例
[参考例]
[各树脂的PBS的通过率]
在以往的拭取检查中,利用浸渍到PBS中的棉棒等的包含水分的拭取部进行拭取,因此,在将聚乙烯树脂作为拭取部在干燥的状态下进行食物过敏原的拭取的情况下,预先确认单独通过PBS,干燥表面的过敏原能否通过拭取部。此外,在这之后,作为PBS,如附录所记载的那样制备并使用Dulbecco PBS(-)粉末“NISSUI”(日水制药公司制)。
[食品蛋白质的制备]
(鸡蛋蛋白的制备)
鸡蛋蛋白从按照“关于包含过敏物质的食品的检查方法(参考)(2014年3月26日,消费者厅)”中记载的标准品规格的方法制作得到的粉末制备。
(牛奶蛋白质的制备)
作为牛奶蛋白质,使用酪蛋白。酪蛋白从按照“关于包含过敏物质的食品的检查方法(参考)(2014年3月26日,消费者厅)”中记载的标准品规格的方法制作得到的粉末制备。
(小麦蛋白质的制备)
小麦蛋白质从按照“关于包含过敏物质的食品的检查方法(参考)(2014年3月26日,消费者厅)”中记载的标准品规格的方法制作得到的粉末制备。
[各树脂的PBS的通过率]
在做成使用以往的拭取检查试剂盒所使用的PBS作为展开液、在拭取部中使用聚乙烯树脂的一体型试剂盒的情况下,确认能否检查。将结果表示于以下的表1。
[表1]
(结果)
可知用PBS单独的展开液,过敏原不能通过使用了聚乙烯树脂的拭取部。
[实施例1]
[预选择过敏原的通过率为75%以上的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的工序]
(构成拭取部的树脂)
作为在拭取部中使用的树脂,使用以下4种原材料。
(1)聚酯制气孔率79%(+4~-6%)(PES)
(2)聚乙烯制1平均气孔径100μm(PE1)
(3)聚乙烯制2平均气孔径200μm(PE2)
(4)聚乙烯醇制平均气孔径150μm气孔率89%(PVA)
关于构成拭取部的树脂,对上述(1)~(4)的各树脂即PES、PE1、PE2、PVA,分别制作5mm×7mm×高度10mm的长方体的树脂进行研究。对各树脂体的顶面滴加包含5ppm的过敏原的展开液500μL后,计算截至10分钟后通过了底面的过敏原的比例,由此确定过敏原通过率。
作为食物过敏原,使用上述鸡蛋蛋白、牛奶(酪蛋白)蛋白质或小麦蛋白质。关于含鸡蛋蛋白溶液,使用“Allergeneye ELISAII鸡蛋”(Primaham公司制),关于含牛奶蛋白质溶液,使用“Morinaga FASPEK ELISAII牛奶(酪蛋白)”(森永生科学研究所制),关于含小麦蛋白质溶液,使用“Allergeneye ELISAII小麦”(Primaham公司制),计算各食物过敏原蛋白质的浓度。将各食物过敏原蛋白质在包含PBS和表面活性剂的展开液中分别稀释以成为5ppm,制成含过敏原展开液(测试用液)。此外,作为表面活性剂,作为聚氧乙烯(10)辛基苯基醚使用TritonX-100(Sigma公司制),作为十二烷基硫酸钠使用SDS(富士胶片和光纯药社制),作为聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯使用Tween20(MP Biomedical公司制),进行研究。
上述各树脂的过敏原通过率的计算,通过在对各树脂体的顶面滴加包含各食物过敏原蛋白质5ppm的展开液500μL后10分钟期间中将通过了树脂体的底面的溶液回收,对所回收的试样使用上述ELISA试剂盒测定各食物过敏原蛋白质的浓度来进行。通过了树脂体的底面的各食物过敏原蛋白质的浓度的比例(通过率)用以下式子计算。
[数式2]
(鸡蛋-TritonX-100)
在图1(a)~图1(d)中表示了将鸡蛋蛋白在包含PBS和TritonX-100的展开溶液中稀释以成为5ppm、作为含过敏原展开液的情况下的过敏原通过率。
(结果)
根据图1(a)可知,在聚酯树脂(PES)时,在仅PBS的情况下,通过率为100%。在TritonX-100的浓度为0.01%时通过率为99.7%,在浓度为0.05%时通过率为96.8%,在浓度为0.1%时通过率为99.9%,在浓度为0.5%时通过率为99.3%,在浓度为1.0%时通过率为100%,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下,通过率全部为95%以上。另外,这之后“%”是指质量%。
根据图1(b)可知,在聚乙烯树脂(PE1)时,在仅PBS和TritonX-100的浓度为0.01%时为0%的通过率,但在浓度为0.05%时显示96.1%的通过率,在浓度为0.1%、0.5%、1.0%时显示100%的通过率,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下通过率为95%以上。
根据图1(c)可知,在聚乙烯树脂(PE2)时,在仅PBS和TritonX-100的浓度为0.01%时为0%的通过率,但在浓度为0.05%时显示98.5%的通过率,在0.1%时显示100%的通过率,在0.5%时显示98.9%的通过率,在1.0%时显示100%的通过率,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下,通过率为95%以上。
根据图1(d)可知,在聚乙烯醇树脂(PVA)时,在仅PBS的情况下通过率为88.7%。在TritonX-100的浓度为0.01%时显示100%的通过率,在浓度为0.05%时显示98.5%的通过率,在浓度为0.1%时显示100%的通过率,在浓度为0.5%时显示99.2%的通过率,在浓度为1.0%时显示100%的通过率,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下,通过率为95%以上。
(鸡蛋-TritonX-100的小结)
如上所述,添加到PBS中的TritonX-100显示出鸡蛋过敏原的通过率的提高效果。在选择鸡蛋过敏原作为检测对象、作为树脂选择PES或PVA的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为95%以上。在作为树脂选择PE的情况下,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为95%以上。
(鸡蛋-SDS)
在图2(a)~图2(d)中表示了将鸡蛋蛋白在包含PBS和SDS的展开溶液中稀释以成为5ppm、作为含过敏原展开液时的过敏原通过率。
根据图2(a)可知,在聚酯树脂(PES)时,在仅PBS和SDS的浓度为0.01%、0.05%和0.1%时显示100%的通过率,在浓度为0.5%时显示98.0%的通过率,在浓度为1.0%时显示99.2%的通过率,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下通过率为95%以上。
根据图2(b)可知,在聚乙烯树脂(PE1)时,在仅PBS和SDS的浓度为0.01%时为0%的通过率,但在浓度为0.05%时显示99.3%的通过率,在浓度为0.1%、0.5%和1.0%时为100%的通过率,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下通过率为95%以上。
根据图2(c)可知,在聚乙烯树脂(PE2)时,在仅PBS和SDS的浓度为0.01%时为0%的通过率,但在浓度为0.05%、0.1%、0.5%和1.0%时显示100%的通过率,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下通过率为95%以上。
根据图2(d)可知,在聚乙烯醇树脂(PVA)时,在仅PBS的情况下为88.7%的通过率。在SDS的浓度为0.01%时显示97.7%的通过率,在浓度为0.05%时显示94.5%的通过率,在浓度为0.1%时显示100%的通过率,在浓度为0.5%时显示97.8%的通过率,在浓度为1.0%时显示100%的通过率,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下通过率为90%以上。
(鸡蛋-SDS的小结)
如上所述,添加到PBS中的SDS显示出鸡蛋过敏原的通过率的提高效果。在选择鸡蛋过敏原作为检测对象、作为树脂选择PES的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下通过率全部为95%以上。在作为树脂选择PE的情况下,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下通过率全部为95%以上。在作为树脂选择PVA的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下通过率全部为90%以上。
(鸡蛋-Tween20)
在图3(a)~图3(d)中表示了将鸡蛋蛋白在包含PBS和Tween20的展开溶液中稀释以成为5ppm、作为含过敏原展开液时的过敏原通过率。
根据图3(a)可知,在聚酯树脂(PES)时,在仅PBS的情况下,通过率为100%。在Tween20的浓度为0.01%时显示95.3%的通过率,在浓度为0.05%、0.1%和0.5%时显示100%的通过率,在浓度为1.0%时显示98.6%的通过率,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的Tween20的浓度下通过率为95%以上。
根据图3(b)和图3(c)可知,在聚乙烯树脂(PE1)和聚乙烯树脂(PE2)的情况下,不论添加到PBS中的Tween20的浓度如何,通过率均为0%。
根据图3(d)可知,在聚乙烯醇树脂(PVA)时,在仅PBS的情况下显示88.7%的通过率,在Tween20的浓度为0.01%时显示94.5%的通过率,在浓度为0.05%时显示93.9%的通过率,在浓度为0.1%和0.5%时显示100%的通过率,在浓度为1.0%时显示97.3%的通过率,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的Tween20浓度下,通过率为90%以上。
(鸡蛋-Tween20的小结)
在选择鸡蛋过敏原作为检测对象、作为树脂选择PES的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的Tween20浓度下通过率全部为95%以上。在作为树脂选择PE的情况下,在哪个Tween20浓度下通过率均为0%。在作为树脂选择PVA的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的Tween20浓度下通过率全部为90%以上。
(牛奶-TritonX-100)
在图4(a)~图4(d)中表示了将牛奶蛋白质在包含PBS和TritonX-100的展开液中稀释以成为5ppm、作为含过敏原展开液时的过敏原通过率。
根据图4(a)可知,在聚酯树脂(PES)时,在仅PBS的情况下显示60.7%的通过率,在TritonX-100的浓度为0.01%时显示89.8%的通过率,在0.05%的浓度时显示95.3%的通过率,在0.1%浓度时显示5.5%的通过率,在0.5%浓度时显示100%的通过率,在1.0%浓度时显示96.5%的通过率,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下,通过率为85%以上。
根据图4(b)可知,在聚乙烯树脂(PE1)时,在仅PBS和TritonX-100的浓度为0.01%时为0%的通过率,但在浓度为0.05%时显示99.4%的通过率,在浓度为0.1%时显示98.2%的通过率,在浓度为0.5%时显示100%的通过率,在浓度为1.0%时显示95.7%的通过率,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下,通过率为95%以上。
根据图4(c)可知,在聚乙烯树脂(PE2)时,在仅PBS和TritonX-100的浓度为0.01%时为0%的通过率,但在浓度为0.05%时显示99.0%的通过率,在浓度为0.1%和0.5%时显示100%的通过率,在浓度为1.0%时显示94.9%的通过率,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下,通过率为90%以上。
根据图4(d)可知,在聚乙烯醇树脂(PVA)时,在仅PBS的情况下为15.3%的通过率,在TritonX-100的浓度为0.01%时为46.6%的通过率,但在浓度为0.05%时显示87.7%的通过率,在浓度为0.1%时显示86.4%的通过率,在浓度为0.5%时显示93.2%的通过率,在浓度为1.0%时显示92.8%的通过率,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下,通过率为85%以上。
(牛奶-TritonX-100的小结)
在选择牛奶过敏原作为检测对象、作为树脂选择PES的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为85%以上。在作为树脂选择PE的情况下,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为90%以上。在作为树脂选择PVA的情况下,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为85%以上。
(牛奶-SDS)
在图5(a)~图5(d)中表示了将牛奶蛋白质在包含PBS和SDS的展开溶液中稀释以成为5ppm、作为含过敏原展开液时的过敏原通过率。
根据图5(a)可知,在聚酯树脂(PES)时,在仅PBS的情况下显示60.7%的通过率。在SDS的浓度为0.01%时显示95.2%的通过率,在浓度为0.05%和0.1%时显示100%的通过率,在浓度为0.5%时显示99.6%的通过率,在浓度为1.0%时显示99.0%的通过率,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下,通过率为95%以上。
根据图5(b)可知,在聚乙烯树脂(PE1)时,在仅PBS和SDS的浓度为0.01%时为0%的通过率,但在浓度为0.05%时显示100%的通过率,在浓度为0.1%时显示98.1%的通过率,在浓度为0.5%时显示97.6%的通过率,在浓度为1.0%时显示98.3%的通过率,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下,通过率为95%以上。
根据图5(c)可知,在聚乙烯树脂(PE2)时,在仅PBS和SDS的浓度为0.01%时为0%的通过率,在浓度为0.05%时显示100%的通过率,在浓度为0.1%时显示97.7%的通过率,在浓度为0.5%和1.0%时显示100%的通过率,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下,通过率为95%以上。
根据图5(d)可知,在聚乙烯醇树脂(PVA)时,在仅PBS的情况下显示15.3%的通过率。在SDS的浓度为0.01%时为87.1%的通过率。此外,在浓度为0.05%、0.1%和0.5%时显示100%的通过率,在浓度为1.0%时显示99.5%的通过率。在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下,通过率为85%以上。
(牛奶-SDS的小结)
在选择牛奶过敏原作为检测对象、作为树脂选择PES的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下通过率全部为95%以上。在作为树脂选择PE的情况下,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下通过率全部为95%以上。在作为树脂选择PVA的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下通过率全部为85%以上。
(牛奶-Tween20)
在图6(a)~图6(d)中表示了将牛奶蛋白质在含有PBS和Tween20的展开溶液中稀释以成为5ppm、作为含过敏原展开液时的过敏原通过率。
根据图6(a)可知,在聚酯树脂(PES)时,在仅PBS时显示60.7%的通过率,在Tween20的浓度为0.01%时显示75.6%的通过率,在浓度为0.05%时显示76.1%的通过率,在浓度为0.1%时显示78.5%的通过率,在浓度为0.5%时显示92.4%的通过率,在浓度为1.0%时显示93.0%的通过率,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的Tween20浓度下,通过率为75%以上。
根据图6(b)和图6(c)可知,在聚乙烯树脂(PE1)和聚乙烯树脂(PE2)时,不论在PBS中添加的Tween20的浓度如何,通过率均为0%。
根据图6(d)可知,在聚乙烯醇树脂(PVA)时,在仅PBS的情况下显示15.3%的通过率,在Tween20的浓度为0.01%时显示42.8%的通过率,在浓度为0.05%时显示55.0%的通过率,在浓度为0.1%时显示55.4%的通过率,在浓度为0.5%时显示83.0%的通过率,在浓度为1.0%时显示78.3%的通过率,在0.5%和1.0%的Tween20浓度下,通过率为75%以上。
(牛奶-Tween20的小结)
在选择牛奶过敏原作为检测对象、作为树脂选择PES的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的Tween20浓度下通过率全部为75%以上。在作为树脂选择PE的情况下,在哪个Tween20浓度下通过率均为0%。在作为树脂选择PVA的情况下,在0.5%和1.0%的Tween20浓度下,通过率为75%以上。
(小麦-TritonX-100)
在图7(a)~图7(d)中表示了在将小麦蛋白质在包含PBS和TritonX-100的展开液中稀释以成为5ppm、作为含过敏原展开液时的过敏原通过率。
根据图7(a)可知,在聚酯树脂(PES)时,在仅PBS的情况下,显示85.1%的通过率,在TritonX-100的浓度为0.01%、0.05%和0.1%时显示100%的通过率,在浓度为0.5%时显示96.0%的通过率,在浓度为1.0%时显示100%的通过率,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100的浓度下,通过率为95%以上。
根据图7(b)可知,在聚乙烯树脂(PE1)时,在仅PBS和TritonX-100的浓度为0.01%时为0%的通过率,但在浓度为0.05%时显示92.2%的通过率,在浓度为0.1%时显示94.1%的通过率,在浓度为0.5%和1.0%时显示100%的通过率,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下,通过率为90%以上。
根据图7(c)可知,在聚乙烯树脂(PE2)时,在仅PBS和TritonX-100的浓度为0.01%时显示0%的通过率,但在浓度为0.05%时显示87.1%的通过率,在浓度为0.1%时显示98.9%的通过率,在浓度为0.5%和1.0%时显示100%的通过率,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下,通过率为85%以上。
根据图7(d)可知,在聚乙烯醇树脂(PVA)时,在仅PBS的情况下显示59.0%的通过率,在TritonX-100的浓度为0.01%时显示85.7%的通过率,在浓度为0.05%时显示88.2%的通过率,在浓度为0.1%、0.5%和1.0%时显示100%的通过率,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下,通过率为85%以上。
(小麦-TritonX-100的小结)
在选择小麦过敏原作为检测对象、作为树脂选择PES的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为95%以上。在作为树脂选择PE的情况下,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为85%以上。在作为树脂选择PVA的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为85%以上。
(小麦-SDS)
在图8(a)~图8(d)中表示了在将小麦蛋白质在包含PBS和SDS的展开液中稀释以成为5ppm、作为含过敏原展开液时的过敏原通过率。
根据图8(a)可知,在聚酯树脂(PES)时,在仅PBS的情况下显示85.1%的通过率。在SDS的浓度为0.01%时显示86.0%的通过率,在浓度为0.05%时显示95.0%的通过率,在浓度为0.1%时显示99.4%的通过率,在浓度为0.5%时显示92.6%的通过率,在浓度为1.0%时显示98.8%的通过率,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下,通过率为85%以上。
根据图8(b)可知,在聚乙烯树脂(PE1)时,在仅PBS和SDS的浓度为0.01%时为0%的通过率,但在浓度为0.05%时显示100%的通过率,在浓度为0.1%时显示99.4%的通过率,在浓度为0.5%时显示96.8%的通过率,在浓度为1.0%时显示100%的通过率,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下,通过率为95%以上。
根据图8(c)可知,在聚乙烯树脂(PE2)时,在仅PBS和SDS的浓度为0.01%时为0%的通过率,但在浓度为0.05%和0.1%时显示100%的通过率,在浓度为0.5%时显示98.3%的通过率,在浓度为1.0%时显示100%的通过率,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下,通过率为95%以上。
根据图8(d)可知,在聚乙烯醇树脂(PVA)时,在仅PBS的情况下显示59.0%的通过率。在SDS的浓度为0.01%时为59.5%的通过率。此外,在浓度为0.05%和0.1%时显示100%的通过率,在浓度为0.5%时显示94.5%的通过率,在浓度为1.0%时显示97.2%的通过率,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下通过率为90%以上。
(小麦-SDS的小结)
在选择小麦过敏原作为检测对象、作为树脂选择PES的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下通过率全部为85%以上。在作为树脂选择PE的情况下,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下通过率全部为95%以上。在作为树脂选择PVA的情况下,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下通过率全部为90%以上。
(小麦-Tween20)
在图9(a)~图9(d)中表示了在将小麦蛋白质在包含PBS和Tween20的展开液中稀释以成为5ppm、作为含过敏原展开液时的过敏原通过率。
根据图9(a)可知,在聚酯树脂(PES)时,在仅PBS时显示85.1%的通过率,在Tween20的浓度为0.01%时显示92.8%的通过率,在浓度为0.05%时显示89.8%的通过率,在浓度为0.1%时显示95.1%的通过率,在浓度为0.5%时显示98.1%的通过率,在浓度为1.0%时显示99.1%的通过率,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的Tween20浓度下,通过率为85%以上。
根据图9(b)和图9(c)可知,在聚乙烯树脂(PE1)和聚乙烯树脂(PE2)时,不论在PBS中添加的Tween20的浓度如何,通过率均为0%。
根据图9(d)可知,在聚乙烯醇树脂(PVA)时,在仅PBS的情况下显示59.0%的通过率,在Tween20的浓度为0.01%时显示83.4%的通过率,在浓度为0.05%时显示81.4%的通过率,在浓度为0.1%时显示88.6%的通过率,在浓度为0.5%时显示93.6%的通过率,在浓度为1.0%时显示99.9%的通过率,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的Tween20浓度下,通过率为80%以上。
(小麦-Tween20的小结)
在选择小麦过敏原作为检测对象、作为树脂选择PES的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的Tween20浓度下通过率为85%以上。在作为树脂选择PE的情况下,在哪个Tween20浓度下通过率均为0%。在作为树脂选择PVA的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的Tween20浓度下,通过率为80%以上。
[实施例2]
[正式选择过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的工序]
接下来,使用拭取部一体型试剂盒进行正式选择。
[拭取部一体型试剂盒的制作]
(卵清蛋白检测用免疫层析试纸条的制作)
1)金胶体标记抗体的制作
用2mM硼酸缓冲液(pH9.0)制备PDOA3单克隆抗体溶液以成为1mg/mL。在预先用0.2M碳酸钾溶液调制为pH9.0的金胶体溶液(Sigma公司制)5mL中加入PDOA3单克隆抗体溶液500μL,在室温下反应30分钟后,加入10%BSA溶液635μL,再反应15分钟。进行离心分离,用1%BSA溶液调制以成为OD525=1.0。涂布在玻璃棉制结合垫上以成为68μL/cm2,并使其干燥。
2)抗体固定化膜的制作
用磷酸缓冲生理盐水(phosphate buffered saline:PBS)制备PDOA4单克隆抗体溶液以成为4mg/mL,以直线状涂布在硝化纤维素膜上并使其干燥。然后,用包含0.1%牛明胶的TBS在37℃下封闭1小时后,用TBS清洗并使其干燥。
3)免疫层析试纸条的组装
除了抗体固定化膜以外,另外准备作为试样用载体的玻璃棉制试样垫、液态试样吸收用的玻璃棉制吸收垫,以试样垫、抗体固定化膜、吸收垫的顺序分别贴附,制作免疫层析试纸条。
(酪蛋白检测用免疫层析试纸条的制作)
在上述1)的金胶体标记抗体的制作中制备Pas1CN1的单克隆抗体溶液,在上述2)的抗体固定化膜的制作中制备Pas1CN2的单克隆抗体溶液,除此以外,按照与上述卵清蛋白检测用免疫层析试纸条的制作同样的次序,制作酪蛋白检测用免疫层析试纸条。
(小麦醇溶蛋白检测用免疫层析试纸条的制作)
在上述1)的金胶体标记抗体的制作中制备PGL1的单克隆抗体溶液,在上述2)的抗体固定化膜的制作中制备PGL2的单克隆抗体溶液,除此以外,按照与上述卵清蛋白检测用免疫层析试纸条的制作同样的次序,制作小麦醇溶蛋白检测用免疫层析试纸条。
[拭取部一体型试剂盒的制作]
准备主体盒,其中,盖体在距拭取部的远端部被卡合,在距拭取部的近端部,将盒主体和盖体通过盖体开放片和主体盒开放片开闭。将上述卵清蛋白检测用、酪蛋白检测用和小麦醇溶蛋白检测用的各食物过敏原检测用免疫层析试纸条分别以试样垫处于拭取部侧的方式载置在长条状的主体盒内。使用上述(1)~(4)的任意原材料作为拭取部的树脂,其底部位于上述展开支承体的一端上,以与上述各免疫层析试纸条的试样载体部接触的方式设置,在其拭取面将盒主体的盖体插通而突出到外侧的状态下卡止于该盖体。作为构成拭取部的树脂,使用以5mm×7mm的平面(顶面)为拭取面、高度10mm的长方体。
[使用本发明的试剂盒的拭取试验]
使用上述拭取部一体型试剂盒,将上述3种表面活性剂即TritonX-100、SDS和Tween20添加到展开液中,通过上述过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,确认是否能够检测过敏原。
(检测面的制作)
将铝箔裁切成边长10cm的四方形,滴加包含各种过敏原蛋白质20ppm、10ppm或5ppm的溶液200μL,由此制作涂布了4μg、2μg或1μg/100cm2的食物过敏原蛋白质的检测面。在室温下静置,使其完全干燥,制作涂布有鸡蛋蛋白、酪蛋白或小麦蛋白质的检测面。
(使用试剂盒的检查)
以上述试剂盒的拭取部朝下的方式,用食指以从背面压着的方式拿着,将拭取部水平地推抵于上述检测面以免将试剂盒倾斜。一边推抵拭取部一边使其在纵向和横向上分别往复10次,拭取涂布于检测面的各过敏原整体。将以下表示的添加有TritonX-100、SDS或Tween20的PBS用微量移液器一滴一滴地滴加共计500μL到拭取部的拭取面,使含过敏原展开液流下到拭取面的底部,使得到达试样用载体的含过敏原展开液在免疫层析试纸条上展开。在10分钟后,以目视判断判定线的有无。
另外,包含4μg、2μg或1μg的过敏原的500μL的展开液中的过敏原浓度分别为8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL(ppm)。
[正式选择]
(PBS+TritonX-100)
在检测面上分别涂布4μg以下所示的各食物过敏原蛋白质,将在PBS中添加0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%的TritonX-100而制备了展开液的情况下的结果表示于表2-1~3。将展开液不浸透而不能检查的情况记作不能检查。将能够检查的情况按照判定线从强到弱的顺序记作+、+w、+-,将阴性记作-。
表2-1(a)涂布了4μg鸡蛋的情况
[判定线的浓度:+>+w>+->-(阴性)]
以后,在说明书中,“PE1”“PE2”用表中的PE①、PE②表示。
(结果)
根据表2-1可知,在涂布了4μg鸡蛋的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,0.05%(+)、0.1%(+)和0.5%(+)时为阳性。
在PE2的情况下,0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+-)时为阳性。
在PVA的情况下,0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+-)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测4μg鸡蛋的情况下的展开液,在为PES和PVA时,在添加到PBS中的TritonX-100的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测;在为PE1时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.05%、0.1%和0.5%的情况下能够检测。在为PE2时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的的情况下能够检测。
表2-2(b)涂布了4μg牛奶的情况
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(结果)
根据表2-2可知,在涂布了4μg牛奶的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)和0.5%(+-)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+)和0.1%(+)的浓度下为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+w)和0.5%(+w)的浓度下为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)和0.5%(+-)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测4μg牛奶时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.01%、0.05%、0.1%和0.5%的情况下能够检测;在为PE1时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.05%和0.1%的情况下能够检测;在为PE2时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.05%、0.1%和0.5%的情况下能够检测。
表2-3(c)涂布了4μg小麦的情况
根据表2-3可知,在涂布了4μg小麦的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测4μg小麦时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测,在为PE1和PE2时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测。
(TritonX-100-小结)
对以上的结果进行总结,通过在展开液中使用TritonX-100,用所有原材料都能够进行拭取检查。此外,如果TritonX-100的浓度变高,则有时会成为阴性。由于认为是TritonX-100对试剂盒的抗原抗体反应带来不良影响的结果,所以需要对每个过敏原的项目选择适当的浓度。
(PBS+SDS)
在检测面上分别涂布4μg以下所示的各食物过敏原蛋白质,将在PBS中添加0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%的SDS而制备展开液的情况下的结果表示于表3-1~3。
表3-1(a)涂布了4μg鸡蛋的情况
(结果)
根据表3-1可知,在涂布了4μg鸡蛋的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测4μg的鸡蛋时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测;在为PE1和PE2时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测。
表3-2(b)涂布了4μg牛奶的情况
(结果)
根据表3-2可知,在涂布了4μg牛奶的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)和0.05%(+)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+w)、0.1%(+w)和0.5%(+-)的浓度下为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+)和0.1%(+)的浓度下为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+)和0.05%(+)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测4μg牛奶时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.01%和0.05%的情况下能够检测;在为PE1时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.05%、0.1%和0.5%的情况下能够检测;在为PE2时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.05%和0.1%的情况下能够检测。
表3-3(b)涂布了4μg小麦的情况
根据表3-3可知,在涂布了小麦4μg的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测4μg的小麦时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测;在为PE1和PE2时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测。
(SDS-小结)
对以上的结果进行总结,通过在展开液中使用SDS,用所有原材料拭取都能够检查。此外,如果SDS的浓度变高则有时会成为阴性。由于认为是SDS对试剂盒的抗原抗体反应带来不良影响的结果,所以需要对每个过敏原的项目选择适当的浓度。
(PBS+Tween20)
在检测面分别涂布4μg以下所示的各食物过敏原蛋白质,将在PBS中添加0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%的Tween20而制备展开液的情况下的结果表示于表4-1~3。
表4-1(a)涂布了4μg鸡蛋的情况
(结果)
根据表4-1可知,在涂布了4μg鸡蛋的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%哪个浓度下都不能检查。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)和0.5%(+)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2时,在哪个浓度下都不能检查,确认了添加Tween20的展开液在4μg鸡蛋的检测中不适用。
表4-2(b)涂布了4μg牛奶的情况
(结果)
根据表4-2可知,在涂布了4μg牛奶的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+w)、0.1%(+w)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的哪个浓度下都不能检查。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2时,在哪个浓度下都不能检查,确认了添加Tween20的展开液在4μg牛奶的检测中不适用。
表4-3(c)涂布了4μg小麦的情况
(结果)
根据表4-3可知,在涂布小麦4μg的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的哪个浓度下都不能检查。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2时,哪个浓度下都不能检查,确认了添加Tween20的展开液在4μg小麦的检测中不适用。
(PBS+TritonX-100)
在检测面分别涂布2μg以下所示的各食物过敏原蛋白质,将在PBS中添加0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%的TritonX-100而制备展开液的情况下的结果表示于表5-1~3。
表5-1(a)涂布了2μg鸡蛋的情况
(结果)
根据表5-1可知,在涂布2μg鸡蛋的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+w)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测2μg鸡蛋时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测;在为E1和PE2时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测。
表5-2(b)涂布了2μg牛奶的情况
(结果)
根据表5-2可知,在涂布2μg牛奶的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+-)、0.1%(+-)和0.5%(+-)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+-)和0.1%(+-)的浓度下为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+-)和0.1%(+w)的浓度下为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+-)、0.05%(+-)、0.1%(+-)和0.5%(+-)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测2μg的牛奶时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.01%、0.05%、0.1%和0.5%的情况下能够检测;在为PE1和PE2时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.05%和0.1%的情况下能够检测。
表5-3(c)涂布了2μg小麦的情况
根据表5-3可知,在涂布2μg小麦的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测2μg的小麦时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测;在为PE1和PE2时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测。
(PBS+SDS)
在检测面分别涂布2μg以下所示的各食物过敏原蛋白质,将在PBS中添加0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%的SDS而制备展开液的情况下的结果表示于表6-1~3。
表6-1(a)涂布了2μg鸡蛋的情况
(结果)
根据表6-1可知,在涂布了2μg鸡蛋的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+-)的浓度下为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测2μg鸡蛋时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测;在为PE1和PE2时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测。
表6-2(b)涂布了2μg牛奶的情况
(结果)
根据表6-2可知,在涂布了2μg牛奶的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)和0.05%(+w)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+w)时为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+)和0.1%(+)时为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+)和0.05%(+)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测2μg牛奶时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.01%和0.05%的情况下能够检测;在为PE1时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.05%的情况下能够检测;在为PE2时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.05%和0.1%的情况下能够检测。
表6-3(c)涂布了2μg小麦的情况
根据表6-3可知,在涂布了2μg小麦的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测2μg的小麦时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测;在为PE1和PE2时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测。
(PBS+Tween20)
在检测面分别涂布2μg以下所示的各食物过敏原蛋白质,将在PBS中添加0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%的Tween20而制备展开液的情况下的结果表示于表7-1~3。
表7-1(a)涂布了2μg鸡蛋的情况
(结果)
根据表7-1可知,在涂布了2μg鸡蛋的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的哪个浓度下均不能检查。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2时,在哪个浓度下都不能检查,确认了添加Tween20的展开液在2μg鸡蛋的检测中不适用。
表7-2(b)涂布了2μg牛奶的情况
/>
(结果)
根据表7-2可知,在涂布了2μg牛奶的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+-)、0.1%(+-)、0.5%(+)和1.0%(+-)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的哪个浓度下都不能检查。
在PVA的情况下,在0.5%(+w)和1.0%(+-)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2时,在哪个浓度下都不能检查,确认了添加Tween20的展开液在2μg牛奶的检测中不适用。
表7-3(c)涂布了2μg小麦的情况
(结果)
根据表7-3可知,在涂布了小麦2μg的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的哪个浓度下都不能检查。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2时,在哪个浓度下都不能检查,确认了添加Tween20的展开液在2μg小麦的检测中不适用。
(PBS+TritonX-100)
在检测面分别涂布1μg以下所示的各食物过敏原蛋白质,将在PBS中添加0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%的TritonX-100而制备展开液的情况下的结果表示于表8-1~3。
表8-1(a)涂布了1μg鸡蛋的情况
(结果)
根据表8-1可知,在涂布了1μg鸡蛋的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+-)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.1%(+)和0.5%(+-)时为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+w)时为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+-)、0.05%(+)、0.1%(+)和0.5%(+)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测1μg的鸡蛋时的展开液,在为PES时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测;在为PE1时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.1%和0.5%的情况下能够检测;在为PE2时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测;在为PVA时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.01%、0.05%、0.1%和0.5%的情况下能够检测。
表8-2(b)涂布了1μg牛奶的情况
(结果)
根据表8-2可知,在涂布了1μg牛奶的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+-)、0.1%(+w)和0.5%(+-)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+-)和0.1%(+-)时为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+-)时为阳性。
在PVA的情况下,在0.05%(+-)和0.1%(+-)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测1μg的牛奶时的展开液,在为PES时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.01%、0.05%、0.1%和0.5%的情况下能够检测;在为PE1时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.05%和0.1%的情况下能够检测;在为PE2时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.05%的情况下能够检测;在为PVA时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.05%和0.1%的情况下能够检测。
表8-3(c)涂布了1μg小麦的情况
根据表8-3可知,在涂布了1μg小麦的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测1μg的小麦时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测;在为PE1和PE2时,在PBS中添加的TritonX-100的浓度为0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测。
(PBS+SDS)
在检测面分别涂布1μg以下所示的各食物过敏原蛋白质,将在PBS中添加0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%的SDS而制备展开液的情况下的结果表示于表9-1~3。
表9-1(a)涂布了1μg鸡蛋的情况
(结果)
根据表9-1可知,在涂布了1μg鸡蛋的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+w)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+w)时为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+-)时为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测1μg的鸡蛋时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测;在为PE1和PE2时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测。
表9-2(b)涂布了1μg牛奶的情况
(结果)
根据表9-2可知,在涂布了1μg牛奶的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+w)和0.05%(+-)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在哪个浓度下都不能检查或为阴性。
在PE2的情况下,在0.05%(+-)时为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+w)和0.05%(+-)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测1μg牛奶时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.01%和0.05%的情况下能够检测;在为PE2时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.05%的情况下能够检测。
但是,在为PE1时,在哪个浓度下都不能检查或为阴性。
表9-3(c)涂布了1μg小麦的情况
根据表9-3可知,在涂布了1μg小麦的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE2的情况下,在0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
因而确认了:作为检测1μg的小麦时的展开液,在为PES和PVA时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测;在为PE1和PE2时,在PBS中添加的SDS的浓度为0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的情况下能够检测。
(PBS+Tween20)
在检测面分别涂布1μg以下所示的各食物过敏原蛋白质,将在PBS中添加0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%的Tween20而制备展开液时的结果表示于表10-1~3。
表10-1(a)涂布了1μg鸡蛋的情况
(结果)
根据表10-1可知,在涂布了1μg鸡蛋的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+-)和1.0%(+-)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的哪个浓度下都不能检查。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+w)和1.0%(+-)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2时,在哪个浓度下都不能检查,确认了添加Tween20的展开液在1μg鸡蛋的检测中不适用。
表10-2(b)涂布了1μg牛奶的情况
(结果)
根据表10-2可知,在涂布了1μg牛奶的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+-)、0.05%(+-)、0.1%(+-)、0.5%(+)和1.0%(+w)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2的情况下,0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的哪个浓度下都不能检查。
在PVA的情况下,在0.5%(+-)和1.0%(+-)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2时,在哪个浓度下都不能检查,确认了添加Tween20的展开液在1μg牛奶的检测中不适用。
表10-3(c)涂布了1μg小麦的情况
(结果)
根据表10-3可知,在涂布了1μg小麦的情况下,在使用的树脂为PES的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2的情况下,在0.01%、0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的哪个浓度下都不能检查。
在PVA的情况下,在0.01%(+)、0.05%(+)、0.1%(+)、0.5%(+)和1.0%(+)的浓度下为阳性。
在PE1和PE2时,在哪个浓度下都不能检查,确认了添加Tween20的展开液在1μg小麦的检测中不适用。
[进行正式选择的工序的结果]
添加以上的进行正式选择的工序的结果,与预选择的结果一起,关注能否检测2μg/mL的水平的过敏原,实施选择适于本发明的过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的方法,将得到的结果表示如下。
(鸡蛋+PES+TritonX-100)
在预选择工序中确认了:以鸡蛋过敏原为检测对象,作为树脂选择PES、作为展开液选择添加有TritonX-100的PBS溶液的情况下的鸡蛋过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为95%以上。
在将鸡蛋过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,也在0.01%~1.0%的TritonX-100浓度下能够检测出过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择鸡蛋过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PES、作为展开液为添加了0.01%~1.0%的浓度的TritonX-100的PBS溶液的组合。
(鸡蛋+PES+SDS)
在预选择工序中确认了:以鸡蛋过敏原作为检测对象,作为树脂选择PES、作为展开液选择添加有SDS的PBS溶液的情况下的鸡蛋过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的SDS浓度下通过率全部为95%以上。
在将鸡蛋过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,也在0.01%~1.0%的SDS浓度下能够检测出过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择鸡蛋过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PES、作为展开液为添加了0.01%~1.0%的浓度的SDS的PBS溶液的组合。
(鸡蛋+PES+Tween20)
在预选择工序中确认了:以鸡蛋过敏原为检测对象,作为树脂选择PES、作为展开液选择添加有Tween20的PBS溶液的情况下的鸡蛋过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的Tween20浓度下通过率全部为95%以上。
在将鸡蛋过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,也在0.01%~1.0%的Tween20浓度下能够检测过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择鸡蛋过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PES、作为展开液为添加有0.01%~1.0%的浓度的Tween20的PBS溶液的组合。
(鸡蛋+PE+TritonX-100)
在预选择工序中确认了:以鸡蛋过敏原作为检测对象,作为树脂选择PE、作为展开液选择添加有TritonX-100的PBS溶液的情况下的鸡蛋过敏原的通过率,在0.05%~1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为95%以上。
但是,将鸡蛋过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,确认了在将鸡蛋过敏原在检测面上涂布4μg时,在1.0%的TritonX-100浓度下,用平均气孔径100μm的聚乙烯树脂(PE1)不能检测出过敏原。
此外确认了:在涂布1μg时,在0.05%和1.0%的TritonX-100浓度下,用平均气孔径100μm的聚乙烯树脂(PE1)不能检测出过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择鸡蛋过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为平均气孔径100μm的聚乙烯树脂、作为展开液为添加有0.1%~0.5%的浓度的TritonX-100的PBS溶液的组合。
另一方面,确认了:在选择平均气孔径200μm的聚乙烯树脂时,作为展开液可以选择添加有0.05%~1.0%的浓度的TritonX-100的PBS溶液的组合。
(鸡蛋+PE+SDS)
在预选择工序中确认了:以鸡蛋过敏原作为检测对象,作为树脂选择PE、作为展开液选择添加有SDS的PBS溶液的情况下的鸡蛋过敏原的通过率,在0.05%~1.0%的SDS浓度下通过率全部为95%以上。
将鸡蛋过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,也在0.05%~1.0%的SDS浓度下能够检测过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择鸡蛋过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PE、作为展开液为添加有0.05%~1.0%的浓度的SDS的PBS溶液的组合。
(鸡蛋+PE+Tween20)
在预选择工序中确认了:以鸡蛋过敏原作为检测对象,作为树脂选择PE、作为展开液选择添加有Tween20的PBS溶液的情况下的鸡蛋过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的Tween20浓度下通过率全部为0%(未通过);在正式选择工序中,也在全部浓度下都不能检查。
(鸡蛋+PVA+TritonX-100)
在预选择工序中确认了:以鸡蛋过敏原作为检测对象,作为树脂选择PVA、作为展开液选择添加有TritonX-100的PBS溶液时的鸡蛋过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为95%以上。
但是确认了:在将鸡蛋过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,在将鸡蛋过敏原在检测面涂布1μg时,在1.0%的TritonX-100浓度下,用PVA不能检测出过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择鸡蛋过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PVA、作为展开液为添加有0.01%~0.5%的浓度的TritonX-100的PBS溶液的组合。
(鸡蛋+PVA+SDS)
在预选择工序中确认了:以鸡蛋过敏原作为检测对象,作为树脂选择PVA、作为展开液选择添加有SDS的PBS溶液的情况下的鸡蛋过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的SDS浓度下通过率全部为90%以上。
在将鸡蛋过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,也在0.01%~1.0%的SDS浓度下能够检测过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择鸡蛋过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PVA、作为展开液为添加有0.01%~1.0%的浓度的SDS的PBS溶液的组合。
(鸡蛋+PVA+Tween20)
在预选择工序中确认了:以鸡蛋过敏原作为检测对象,作为树脂选择PVA、作为展开液选择添加有Tween20的PBS溶液的情况下的鸡蛋过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的Tween20浓度下通过率全部为90%以上。
但是确认了:在实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,在将鸡蛋过敏原在检测面涂布4μg时,在1.0%的Tween20浓度下,用PVA不能检测出过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:选择鸡蛋过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PVA、作为展开液为添加有0.01%~0.5%的浓度的Tween20的PBS溶液的组合。
(牛奶+PES+TritonX-100)
在预选择工序中确认了:以牛奶过敏原为检测对象,作为树脂选择PES、作为展开液选择添加有TritonX-100的PBS溶液的情况下的牛奶过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为85%以上。
但是确认了:在将牛奶过敏原在检测面上涂布4μg、2μg和1μg时,在1.0%的TritonX-100浓度下,用PES无法检测出过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择牛奶过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PES、作为展开液为添加有0.01%~0.5%的浓度的TritonX-100的PBS溶液的组合。
(牛奶+PES+SDS)
在预选择工序中确认了:以牛奶过敏原为检测对象,作为树脂选择PES、作为展开液选择添加有SDS的PBS溶液的情况下的牛奶过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的SDS浓度下通过率全部为95%以上。
但是确认了:在将牛奶过敏原在检测面上涂布4μg、2μg和1μg时,在0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下,用PES无法检测出过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择牛奶过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PES、作为展开液为添加有0.01%~0.05%的浓度的SDS的PBS溶液的组合。
(牛奶+PES+Tween20)
在预选择工序中确认了:以牛奶过敏原为检测对象,作为树脂选择PES、作为展开液选择添加有Tween20的PBS溶液的情况下的牛奶过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的Tween20浓度下通过率全部为75%以上。
在将牛奶过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,也在0.01%~1.0%的Tween20浓度下能够检测过敏原。
将量上述结果加入考,在正式选择工序中也确认了:在选择牛奶过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PES、作为展开液为添加有0.01%~1.0%的浓度的Tween20的PBS溶液的组合。
(牛奶+PE+TritonX-100)
在预选择工序中确认了:以牛奶过敏原为检测对象,作为树脂选择PE、作为展开液选择添加有TritonX-100的PBS溶液的情况下的牛奶过敏原的通过率,在0.05%~1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为90%以上。
但是确认了:在将牛奶过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,用平均气孔径100μm的聚乙烯树脂(PE1)时,在将牛奶过敏原在检测面上涂布4μg、2μg和1μg时,在0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下无法检测出过敏原。
此外确认了:在用平均气孔径200μm的聚乙烯树脂(PE2)时,在将牛奶过敏原在检测面涂布4μg时,在1.0%的TritonX-100浓度下无法检测出过敏原;在将牛奶过敏原在检测面涂布2μg时,在0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下无法检测出过敏原;在将牛奶过敏原在检测面涂布1μg时,在0.1%、0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下无法检测出过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择牛奶过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为平均气孔径100μm的聚乙烯树脂、作为展开液为添加有0.05%~0.1%的浓度的TritonX-100的PBS溶液的组合。此外确认了:优选的是选择作为树脂为平均气孔径200μm的聚乙烯树脂、作为展开液为添加有0.05%的浓度的TritonX-100的PBS溶液的组合。
(牛奶+PE+SDS)
在预选择工序中确认了:以牛奶过敏原为检测对象,作为树脂选择PE、作为展开液选择添加有SDS的PBS溶液的情况下的牛奶过敏原的通过率,在0.05%~1.0%的SDS浓度下通过率全部为95%以上。
但是确认了:在用平均气孔径100μm的聚乙烯树脂(PE1)时,在将牛奶过敏原在检测面涂布4μg时,在1.0%的SDS浓度下无法检测出过敏原;在将牛奶过敏原在检测面涂布2μg时,在0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下无法检测出过敏原;在将牛奶过敏原在检测面涂布1μg时,在0.05%、0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下无法检测出过敏原。
此外确认了:在用平均气孔径200μm的聚乙烯树脂(PE2)时,在将牛奶过敏原在检测面涂布4μg和2μg时,在0.5%和1.0%的SDS浓度下无法检测出过敏原;在将牛奶过敏原在检测面涂布1μg时,在0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下无法检测出过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择牛奶过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为平均气孔径200μm的聚乙烯树脂、作为展开液为添加有0.05%的浓度的SDS的PBS溶液的组合。
(牛奶+PE+Tween20)
在预选择工序中确认了:以牛奶过敏原为检测对象,作为树脂选择PE、作为展开液选择添加有Tween20的PBS溶液的情况下的牛奶过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的Tween20浓度下通过率全部为0%(未通过);在正式选择工序中也在全部浓度下都不能检查。
(牛奶+PVA+TritonX-100)
在预选择工序中确认了:以牛奶过敏原为检测对象,作为树脂选择PVA、作为展开液选择添加有TritonX-100的PBS溶液的情况下的牛奶过敏原的通过率,在0.05%~1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为85%以上。
但是确认了:在将牛奶过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,在将牛奶过敏原在检测面涂布4μg和2μg时,在1.0%的TritonX-100浓度下无法检测出过敏原;在将牛奶过敏原在检测面涂布1μg时,在0.5%和1.0%的TritonX-100浓度下,用PVA无法检测出过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择牛奶过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PVA、作为展开液为添加有0.05%~0.1%的浓度的TritonX-100的PBS溶液的组合。
(牛奶+PVA+SDS)
在预选择工序中确认了:以牛奶过敏原为检测对象,作为树脂选择PVA、作为展开液选择添加有SDS的PBS溶液的情况下的牛奶过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的SDS浓度下通过率全部为85%以上。
但是确认了:在将牛奶过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,在将牛奶过敏原在检测面涂布4μg、2μg和1μg时,在0.1%、0.5%和1.0%的SDS浓度下,用PVA无法检测出过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择牛奶过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PVA、作为展开液为添加有0.01%~0.05%的浓度的SDS的PBS溶液的组合。
(牛奶+PVA+Tween20)
在预选择工序中确认了:以牛奶过敏原为检测对象,作为树脂选择PVA、作为展开液选择添加有Tween20的PBS溶液的情况下的牛奶过敏原的通过率,在0.5%~1.0%的Tween20浓度下通过率为75%以上。
而且确认了:在将牛奶过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,在涂布2μg和1μg时,在0.01%、0.05%、0.1%的Tween20浓度下,用PVA无法检测出过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择牛奶过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PVA、作为展开液为添加有0.5%~1.0%的浓度的Tween20的PBS溶液的组合。
(小麦+PES+TritonX-100)
在预选择工序中确认了:以小麦过敏原为检测对象,作为树脂选择PES、作为展开液选择添加有TritonX-100的PBS溶液的情况下的小麦过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为95%以上。在将小麦过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,也在0.01%~1.0%的TritonX-100浓度下能够检测过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择小麦过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PES、作为展开液为添加有0.01%~1.0%的浓度的TritonX-100的PBS溶液的组合。
(小麦+PES+SDS)
在预选择工序中确认了:以小麦过敏原为检测对象,作为树脂选择PES、作为展开液选择添加有SDS的PBS溶液的情况下的小麦过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的SDS浓度下通过率全部为85%以上。
在将小麦过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,也在0.01%~1.0%的SDS浓度下能够检测过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择小麦过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PES、作为展开液为添加有0.01%~1.0%的浓度的SDS的PBS溶液的组合。
(小麦+PES+Tween20)
在预选择工序中确认了:以小麦过敏原为检测对象,作为树脂选择PES、作为展开液选择添加有Tween20的PBS溶液的情况下的小麦过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的Tween20浓度下通过率全部为85%以上。
在将小麦过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,将小麦过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,也在0.01%~1.0%的Tween20浓度下能够检测过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择小麦过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PES、作为展开液为添加有0.01%~1.0%的浓度的Tween20的PBS溶液的组合。
(小麦+PE+TritonX-100)
在预选择工序中确认了:以小麦过敏原为检测对象,作为树脂选择PE、作为展开液选择添加有TritonX-100的PBS溶液的情况下的小麦过敏原的通过率,在0.05%~1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为85%以上。
在将小麦过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施过敏原的检测确认测试的情况下,也在0.05%~1.0%的TritonX-100浓度下能够检测过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择小麦过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PE、作为展开液为添加有0.05%~1.0%的浓度的TritonX-100的PBS溶液的组合。
(小麦+PE+SDS)
在预选择工序中确认了:以小麦过敏原为检测对象,作为树脂选择PE、作为展开液选择添加有SDS的PBS溶液的情况下的小麦过敏原的通过率,在0.05%~1.0%的SDS浓度下通过率全部为95%以上。
在将小麦过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施过敏原的检测确认测试的情况下,也在0.05%~1.0%的SDS浓度下能够检测过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择小麦过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PES、作为展开液为添加有0.05%~1.0%的浓度的SDS的PBS溶液的组合。
(小麦+PE+Tween20)
在预选择工序中确认了:以小麦过敏原为检测对象,作为树脂选择PE、作为展开液选择添加有Tween20的PBS溶液的情况下的小麦过敏原的通过率,小麦过敏原的通过率在0.01%~1.0%的Tween20浓度下通过率全部为0%(未通过);在正式选择工序中也在全部浓度下都不能检查。
(小麦+PVA+TritonX-100)
在预选择工序中确认了:以小麦过敏原为检测对象,作为树脂选择PVA、作为展开液选择添加有TritonX-100的PBS溶液的情况下的小麦过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的TritonX-100浓度下通过率全部为85%以上。
在将小麦过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,也在0.01%~1.0%的TritonX-100浓度能够检测过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择小麦过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PVA、作为展开液为添加有0.01%~1.0%的浓度的TritonX-100的PBS溶液的组合。
(小麦+PVA+SDS)
在预选择工序中确认了:以小麦过敏原为检测对象,作为树脂选择PVA、作为展开液选择添加有SDS的PBS溶液的情况下的小麦过敏原的通过率,在0.05%~1.0%的SDS浓度下通过率全部为90%以上。
在将小麦过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,也在0.01%~1.0%的SDS浓度下能够检测过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择小麦过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PVA、作为展开液为添加有0.01%~1.0%的浓度的SDS的PBS溶液的组合。
(小麦+PVA+Tween20)
在预选择工序中确认了:以小麦过敏原为检测对象,作为树脂选择PVA、作为展开液选择添加有Tween20的PBS溶液的情况下的小麦过敏原的通过率,在0.01%~1.0%的Tween20浓度下通过率全部为80%以上。
在将小麦过敏原在检测面上涂布4μg、2μg或1μg,实施上述过敏原的检测确认测试的情况下,也在0.01%~1.0%的Tween20浓度下能够检测过敏原。
将上述结果加入考量,在正式选择工序中也确认了:在选择小麦过敏原作为检测对象的情况下,优选的是选择作为树脂为PVA、作为展开液为添加有0.01%~1.0%的浓度的Tween20的PBS溶液的组合。
(总结)
综上所述可知,在进行本发明的方法时,通过将进行预选择、进行正式选择的结果加入考量,能够明确精度好、非常适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的范围。
工业实用性
能够迅速且高精度地检测在食品干燥的制造现场等的干燥部位处残留的过敏原的、本发明的过敏原的检测试剂盒在食品工业中特别有用。
标号说明
1主体盒
2盖体
3拭取部
4拭取面
5主体盒的远端部
6主体盒的近端部
7主体盒开放片
8盖体开放片
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Claims (14)
1.一种选择适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的方法,其包括以下的(a)和(b)的工序:
(a)预选择工序,在将各展开液500μL中含有5ppm的过敏原的测试用液滴加到顶面和底面的面积均为35mm2、高度为10mm的长方体的树脂体的顶面的情况下,预选择截至10分钟后通过了树脂体的底面的过敏原的通过率为75%以上的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,所述各展开液是在磷酸缓冲生理盐水中添加有表面活性剂的展开液,添加所述表面活性剂的浓度分别为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%;
(b)正式选择工序,实施该预选择的组合的过敏原的检测确认测试,正式选择能够检测出2μg/mL的水平的过敏原的适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合。
2.如权利要求1所述的方法,其中,
截至10分钟后通过了树脂体的底面的过敏原的通过率为85%以上。
3.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,
树脂为多孔质。
4.如权利要求1~3中任一项所述的方法,其特征在于,
树脂选自聚酯、聚乙烯和聚乙烯醇。
5.如权利要求1~4中任一项所述的方法,其特征在于,
表面活性剂为聚氧乙烯(10)辛基苯基醚、十二烷基硫酸钠或聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯。
6.如权利要求1~5中任一项所述的方法,其特征在于,
过敏原为食物过敏原。
7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,
食物过敏原为鸡蛋、牛奶或小麦。
8.一种用于过敏原检测试剂盒的、通过以下的(a)和(b)的工序选择的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,
(a)预选择工序,在将各展开液500μL中含有5ppm的过敏原的测试用液,滴加到顶面和底面的面积均为35mm2、高度为10mm的长方体的树脂体的顶面的情况下,预选择截至10分钟后通过了树脂体的底面的过敏原的通过率为75%以上的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,所述各展开液是在磷酸缓冲生理盐水中添加有表面活性剂的展开液,添加所述表面活性剂的浓度分别为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%;
(b)正式选择工序,实施该预选择的组合的过敏原的检测确认测试,正式选择能够检测出2μg/mL(ppm)的水平的过敏原的、适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合。
9.一种过敏原检测试剂盒,
具备:长条状的盒主体,在内部具有分别在规定的位置处固定有标记抗体和单克隆抗体的展开支承体,所述标记抗体在对于变性和未变性的过敏原均能够识别的单克隆抗体上结合有标记物,所述单克隆抗体对于变性和未变性的过敏原均能够识别,且识别与上述结合有标记物的标记抗体不同的表位;上述盒主体的盖体,在一端部卡止有由树脂构成的拭取部;以及展开液;
上述拭取部的底部位于上述展开支承体的一端上,其拭取面以将盒主体的盖体插通且突出到外方的状态配置于上述盖体上;
其特征在于,
使用由通过选择适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合的方法选择的树脂制成的拭取部和所选择的展开液,来检测过敏原;所述方法包括:
预选择工序,在将各展开液500μL中含有5ppm的过敏原的测试用液,滴加到顶面和底面的面积均为35mm2、高度为10mm的长方体的树脂体的顶面的情况下,预选择截至10分钟后通过了树脂体的底面的过敏原的通过率为75%以上的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合,所述各展开液是在磷酸缓冲生理盐水中添加有表面活性剂的展开液,添加所述表面活性剂的浓度分别为0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1.0%;以及正式选择工序,实施该预选择的组合的过敏原的检测确认测试,正式选择能够检测出2μg/mL的水平的过敏原的、适于过敏原检测试剂盒的过敏原的种类、树脂的种类和展开液的种类的组合。
10.一种过敏原检测试剂盒,
具备:长条状的盒主体,在内部具有分别在规定的位置处固定有标记抗体和单克隆抗体的展开支承体,所述标记抗体在对于变性和未变性的过敏原均能够识别的单克隆抗体上结合有标记物,所述单克隆抗体对于变性和未变性的过敏原均能够识别,且识别与上述结合有标记物的标记抗体不同的表位;上述盒主体的盖体,在一端部卡止有由树脂构成的拭取部;以及展开液;
上述拭取部的底部位于上述展开支承体的一端上,其拭取面以将盒主体的盖体插通且突出到外方的状态配置于上述盖体上;
其特征在于,
使用由通过权利要求1~7中任一项所述的方法选择的树脂构成的拭取部和所选择的展开液,检测所选择的过敏原。
11.如权利要求9或10的试剂盒,其特征在于,
树脂为多孔质。
12.如权利要求9~11中任一项所述的试剂盒,其特征在于,
树脂选自聚酯、聚乙烯和聚乙烯醇。
13.如权利要求9~12中任一项所述的试剂盒,其特征在于,
展开液包含聚氧乙烯(10)辛基苯基醚、十二烷基硫酸钠或聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯。
14.如权利要求9~13中任一项所述的试剂盒,其特征在于,
盒主体和盖体在距拭取部的远端部被卡合,通过在距离拭取部的近端部将盒主体和盖体开闭,能够将测定后的展开支承体取出。
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