CN116809131A - 用于分析生物样本的单列微板系统和载体 - Google Patents

Abstract

本申请公开一种用于分析生物样本的单列微板系统和载体。用于保持液体样本的多井微板及其使用方法。多井微板包括框架，该框架限定呈单列设置的多个井，每个井包括具有长度l₁的开口。沟槽设置在多个井周围。多个壁横跨沟槽，壁限定多个隔室，每个隔室的长度l₂选自大于l₁且小于6l₁的范围。多井微板载体包括限定多个区域的主体，多个区域构造成平行地保持多个多井微板，每个多井微板限定单列井，并且每个区域限定多个开口，该多个开口适于与单列井配合。

Description

用于分析生物样本的单列微板系统和载体

本申请是安捷伦科技有限公司于2015年6月2日提交的、题目为“用于分析生物样本的单列微板系统和载体”的中国专利申请201580029700.6的分案申请。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2014年6月2日递交的美国临时申请No.62/006,593的优先权，该临时申请的全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明大体涉及测量容器内的流体性质的装置，并且具体地涉及盛放测试流体的微板和载体。

背景技术

在细胞分析领域中，通常将细胞置于多井微板中，以用于在单个实验中测试多个条件和副本。标准微板(诸如24井板和96井板等)为二维阵列的井。这样的阵列包括位于阵列的边界或边缘(即，在第一行、第一列、最后一行、或最后一列)的一些井。边界井和非边界井可能经历不同的条件；这通常被称为“边缘效应”。由于这些测定通常在哺乳动物体温(37℃)下进行，并且边界井更容易暴露于外部环境，因此边界井内的环境可能与非边界井的环境显著不同。来自邻近板的边界的井中的液体的蒸发以高于非边界井的速率发生。由于蒸发冷却这引起边界井中的温度下降，从而导致液体中的溶质浓度增加。在这些类型的测定中，温度差和浓度差两者有助于使数据不一致。由于测定的动态性质和活动的灵敏性，活细胞测定对这些效应特别敏感，代谢活性细胞对被测量时所处的环境条件特别敏感。这些类型的测定的示例包括FLIPR钙流量测定、Corning EPIC无标记测定和某些高含量成像测定。

若干解决方案已被提出并应用于这种标准微板以解决该问题。一种解决方法是在测定中牺牲边缘井的使用。通过简单地将流体填充到与测定井相同的高度处，边界井提供湿度缓冲区。这种方法具有严重的缺点，即，微板的容量显著减少，并且在24井板的情况下，牺牲多于一半的井。随着微板中井阵列的尺寸减小，更大比例的井成为边界井。在极端情况下，在一维阵列中，每个井均具有高蒸发速率。

另一种解决方法是通过用油覆盖测定井或者用塑料石蜡膜(诸如可从毕玛时有限公司(Bemis Company,Inc.)购买的Parafilm膜)或类似的材料包裹覆盖板来密封井或板。这些方法的缺点之一是减少了气体交换。代谢活性细胞需要氧；因此，限制氧的供应可能对细胞有害并引起测定结果变化。

对该问题的现有解决方案包括修改仪器或细胞生长容器，即，微板和盖。一些仪器制造商试图通过将湿度控制器放在放置微板的测量室中来减轻这些影响。然而，通常，由于高湿度水平可能引起仪器电子装置出现问题，所以这些选项较少见。

对细胞生长容器的修改可以包括改变微板和盖的设计。对顶盖的改变包括在顶盖上增加保湿层。然而，在需要于测定过程期间添加试剂的活细胞测定的情况下，不能使用盖子或盖。

将外周井或边界井添加到微板在测定井与环境实验室条件之间提供了环境缓冲区。例如，板可以具有围绕井阵列的大边缘槽，例如，四个槽。流体可以放置在每个槽中，从而提供环境缓冲区。这种设计的潜在缺点在于每个槽的体积较大。由于井板较浅，因此当板绕着实验室来回倾斜或运动时，边界流体可能会晃动。此外，与井的深度相同的槽的深度可能需要将大量的流体(大于测定井的体积的10倍)添加到每个槽中。因此，操作者可能需要使用不同的工具(诸如不同体积的移液管等)来填充边界槽和测定井。

标准微板设计包括顶盖或盖，其中，盖的边缘或裙部可高达板自身的高度的一半并且伸出板的壁之外1-2毫米(“mm”)。由于这需要一些灵巧性来一致地从表面拾取板和盖，例如以避免意外地仅拾取盖并因此暴露板的内容物，因此，这在处理这些板时可能存在问题。当处理必须保持处在无菌条件下的细胞培养物时，当前的板和盖组件设计对培养物的完整性带来相当大的风险。类似的风险也适用于必须使井的内容物免受环境光的测定。

标准微板设计具有固定的高度和占地面积，使得井的体积随着排列在板中的井的数量而变化。例如，标准384井板的井是标准96井板的井的4倍，但是每个井的体积大约是四分之一。同样，当井密度(即，每个板的井)下降时，每个井的体积增加。虽然便于保持标准占地面积，但是这种设计要求研究人员在使用较低密度的板时每个井使用更多的细胞和试剂。此外，井之间的间距改变，这在将试剂添加到测定板时可能是不方便的。

目前，没有市售微板来用于在较少数量的井上进行测定，同时保持标准体积和井至井的间距。保持这些特征并减少井的数量可能需要减小占地面积。然而，由于许多标准实验室工作流程和仪器被设计为该标准，因此需要某种适配器或载体。接收标准占地面积的微板的仪器的例子包括读板器、高含量成像系统、离心机、和自动板处理机器人。

显微镜载玻片在实验室中遵循不同的标准，并且存在桥接微板和载玻片形式的一些产品。一些市售载玻片包括融合到玻璃显微镜载玻片上的测定井，为测定井提供了设计用于在显微镜上进行高分辨率成像的玻璃底部。虽然它们提供了井，但是井的尺寸可以改变并且无论是针对井至井的间距还是针对长度和宽度尺寸都不是标准的。

符合实验室自动化和筛选协会(“SLAS”)的微板占地面积和高度标准的、用于显微镜载玻片的市售载体被设计用于成像应用，但是载玻片放置在载体中允许井位置发生一些变化，这可能对自动化分析带来挑战。

发明内容

在一个方面，本发明的实施例可以包括用于保持液体样本的多井微板。该多井微板包括框架，该框架限定：多个井，其呈单列设置，每个井包括具有长度l₁的开口；沟槽，其设置在多个井周围；以及横跨沟槽的多个壁。壁限定多个隔室，每个隔室的长度l₂选自大于l₁且小于6l₁的范围。

可以包括以下特征中的一者或多者。井长度l₁可以选自1mm至9mm(0.04至0.35in)的范围。多个井可以包括八个井。沟槽可以包括八个隔室。

设置在单列井的相对侧的两个隔室可以经由均衡器通道流体连通。经由均衡器通道连通的两个隔室的深度可以小于与其相邻的隔室的深度。

至少一个隔室的深度可以小于井中的一者的深度。例如，至少一个隔室的深度可以高达井中的一者的深度的50％。靠近框架的端部的隔室的深度可以小于设置在框架的中心部分的隔室的深度。所有隔室可以具有基本相等的长度。

提升片可以限定在框架的端部。至少一个井可以是不透明的白色或不透明的黑色。框架可以限定位于其下边缘的凹口。

在另一方面，本发明的实施例可以包括多井微板载体，该多井微板载体包括限定多个区域的主体，该多个区域被构造为平行地保持多个多井微板，每个多井微板限定单列井，并且区域中的每一者限定适于与单列井配合的多个开口。

可以包括以下特征中的一者或多者。主体可以具有外部尺寸为约5英寸乘3.4英寸的基部占地面积。每个区域可以限定八个开口。主体可以限定被构造为分别保持三个多井微板或四个多井微板的三个区域和四个区域。

在本发明的又一方面，本发明的实施例可以包括用于与权利要求1的多井微板配合的盒体。该盒体包括基本平坦的表面，其具有多个区域，多个区域与板中的井的多个相应开口相对应。适于分析井中的成分的传感器或传感器的一部分和/或适于容纳传感器的孔洞还位于盒体的多个相应区域中。至少一个端口可以形成在盒体中，该端口适于将测试流体输送至板的相应井中。多井微板可以包括八个井，并且盒体可以包括八个区域。

在本发明的又一方面，本发明的实施例包括用于制备液体分析样本的方法。该方法包括将分析样本输送至由多井微板的框架限定的井中的步骤。将流体输送至由框架限定的沟槽中。框架限定呈单列设置的多个井，每个井包括具有长度l₁的开口。沟槽设置在多个井周围。多个壁横跨沟槽，壁限定多个隔室，每个隔室的长度l₂选自大于l₁且小于6l₁的范围。

可以包括以下特征中的一者或多者。将分析样本输送至井中的步骤可以包括使用移液器的步骤。将流体输送至沟槽中的步骤可以包括使用移液器的步骤。

附图说明

图1a和图1b(分别)是根据本发明的一个实施例的多井微板的直立和倒置立体图；

图1c是根据本发明的实施例的多井微板的俯视图和侧视图的机械制图，其中，图1c1是俯视图并且图1c2是侧视图；

图1d是根据本发明的一个实施例的多井微板的各种视图的机械制图，其中，图1d1-1d2分别是浅沟槽和深沟槽的俯视图，图1d3是多井微板的俯视图，图1d4-1d6是图1d3的多井微板的剖视图，图1d7是多井微板的立体图，并且图1d8-1d9是图1d7的多井微板的剖视图；

图2a和图2b(分别)是根据本发明的一个实施例的适于与图1a和图1b的多井微板配合的盒体的直立和倒置立体图；

图2c是根据本发明的一个实施例的盒体的俯视图和侧视图的机械制图，其中，图2c1是俯视图并且图2c2是侧视图；

图3是根据本发明的实施例的与多井微板配合的盒体的立体图；

图4是根据本发明的实施例的用于图3的多井微板和盒体的盖的立体图；

图5a是根据本发明的实施例的载体托盘的立体图；

图5b是根据本发明的实施例的与三个多井微板和盖相结合的载体托盘的立体图；

图6是示出根据本发明的实施例的在具有沟槽的微板中对流体损失的影响的条形图；

图7是示出根据本发明的实施例的测量对温度变化的灵敏度的图表，温度变化可能是因未受流体填充的沟槽保护的测定井中的蒸发速率的变化而产生，在具有和不具有沟槽的情况下培养基运行；

图8a-8d是根据本发明的实施例的在若干条件下测量以测试填充或清空的微板的沟槽的效果的C2C12细胞的基础代谢率(OCR和ECAR)的条形图；并且

图9a和9b是示出根据本发明的实施例的多井微板中背景OCR信号随时间的井间和井内的变化度(variability)的图形，mito应力测试，在填充和不填充沟槽的情况下运行。

具体实施方式

多井微板的外周井中的蒸发可能对包括细胞接种、细胞板培养和运行测定在内的各种分析步骤带来负面影响。具体而言，具有粘附细胞的基于细胞的测定(“CBA”)易受来自细胞接种和细胞板培养的边缘效应的影响。活细胞测定(诸如无标记和细胞外通量(“XF”)测量等)在测定运行期间也易受边缘效应的影响。根据本发明的实施例，在多井板的边缘处和/或附近包括具有保持水合流体(例如，水或细胞培养基(media))的隔室的沟槽的多井板设计通过在井上方的空气与板的外周外部的干燥空气之间提供加湿缓冲区来有助于减少这种边缘效应，从而减少井中的流体的蒸发。

参照图1a和图1b，根据本发明的实施例的多井微板100由限定单列井120的框架110形成。板中的井120的数量可以从两个变化到数千个，优选最多128个(与具有1536个井的井板的工业标准相对应，其中，单列具有128个井)。在一些实施例中，多井微板可以具有四个、六个或十二个井的列。在特定的实施例中，多井微板具有八个井120。具有八个井的构造可能是特别有利的，这是由于其允许多达两种条件(诸如疾病/正常、药物治疗/天然、或者遗传敲除对野生型)的四次副本，同时保持较小的占地面积。此外，许多分析仪器被构造为盛放具有八个井的列的井板，诸如96井板(8×12)等。

在一个实施例中，多井微板100包括一维图案的井，其相关部分符合微板的图案和尺寸，如标准美国国家标准学会以及实验室自动化和筛选标准协会所述，其包括微板的高度尺寸(ANSI/SLAS 2-2005，10/13/2011)；微板的井位置(ANSI/SLAS 4/2004，10/13/2011)；和微板的占用尺寸(ANSI/SLAS 1-2004，10/12/2011)，所有这些通过引用并入本文。

多井微板可以由模制塑料(诸如聚苯乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯或其他合适的材料等)形成。井的底部可以是透明的，并且侧面着黑色以减少从一个井至另一个井的光学串扰。在一些实施例中，例如，为了与发光测量一起使用，井可以是白色的。在一些实施例中，例如，为了在高分辨率成像应用中使用，板可以由玻璃和塑料聚合物形成，其中，玻璃用作井的底部并且塑料聚合物形成板的侧面和井的壁。

每个井可以包括顶部和底部并且可以包括锥形侧壁，其中，顶部包括具有长度l₁的开口，底部可以是圆柱形或正方形。可以提供座表面以用作限位阻挡部(positivestop)，该限位阻挡部用于设置在屏障(barrier)上的传感器(参见针对图2a和图2b的盒体的讨论)。该座表面使得能够产生体积局部减小的培养基，如美国专利No.7,276,351中所讨论的，该专利通过引用并入本文。在实施例中，座表面可以由井的底表面上的多个凸起点(例如，三个点)来限定。井长度l₁可以是任意尺寸并且可以优选地选自1至9mm的范围，例如6mm。优选地，这些井彼此等间距，例如，当从井的中心到中心测量时，为3-18mm，更优选为9mm。微板中的每个井可以具有基本相同的尺寸，包括相同的井长度l₁和与长度相等的宽度。然而，在一些实施例中，井可以具有可变的尺寸，包括不同的井长度l₁。井的深度可以在从1至16mm以上的范围内，优选为约15mm。

沟槽130在井的周围延伸。多个壁140横跨沟槽，壁140限定多个隔室150。壁140优选足够厚以为微板提供刚性，同时足够薄以在不变形的情况下注塑成型。因此，壁的厚度可以在从0.5至1.5mm的范围内，优选为约1mm。隔室各者均具有长度l₂，该长度l₂优选为l₁的若干倍并小于6l₁(优选为约2l₁)并且不小于6mm。例如，如果井开口的长度l₁为9mm，则邻接的隔室可以具有18mm的2l₁的长度。长度小于6mm(井至井的间距为9mm)可使得对填充隔室造成挑战。所有隔室可以具有基本相等的纵向长度，即，从一个端壁到相对端壁的长度变化不超过25％。

在优选实施例中，沟槽具有八个隔室和八个井，其中，一个或多个隔室的长度约等于大约两个井开口的长度加上限定井开口的一个或多个壁的厚度的总和。

设置在单列井的相对侧的两个隔室可以经由均衡器通道160流体连通。沟槽可以包括两个均衡器通道160，多井微板的每个端部具有一个。为了使沟槽的隔室的体积相等，经由均衡器通道连通的两个隔室的深度可以小于与其相邻的隔室的深度。在一个优选实施例中，均衡器通道设置在多井微板的端部处，并且为0.08英寸宽和0.25英寸深。均衡器通道的尺寸优选足够小以减小通道宽度对整个板尺寸做出的贡献，但是足够宽以克服表面张力并允许所选择的流体填充通道。在优选实施例中，通道具有特征结构165(例如，如图1d所示的表面张力破坏器165)，该特征结构破坏流体的表面张力，以允许流体在较小的体积下自填充。由于尖角破坏流体的表面张力以刺激流体流过均衡器通道的窄口，因此可以包括一个或多个尖边缘。

至少一个隔室的深度可以小于一个井的深度，例如，至少一个隔室的深度可以是一个井的深度的50％或更小。

靠近框架的端部的隔室的深度可以小于靠近框架的中心部分设置的隔室的深度。在一个优选实施例中，为了在所有隔室中保持恒定的流体高度，其中，在通过均衡器通道连接的端部隔室中保持800μl并且在内部隔室中保持400μl，内部隔室可以比外部隔室深0.055英寸。

沟槽的宽度可以为至少0.2英寸并且不超过0.5英寸，优选为约0.265英寸。太窄的沟槽可以使在井与干燥的外部空气之间具有水合屏障的益处最小化；而太宽的沟槽可能引起测定井晃动和污染的风险。

所有隔室可以具有基本相等的长度，例如，变化不超过25％。

沟槽的各种特征有助于其填充有用于生物分子筛选(“SBS”)标准微板的多通道移液器设计。合适的多通道移液器包括Eppendorf3122000051和Mettler-Toledo L8-200XLS+，其分别可从艾本德股份公司(Eppendorf AG)和梅特勒-托利多国际有限公司(Mettler-Toledor International Inc.)购得。限定隔室的壁被定位成不干扰多通道移液器上的移液管末端。这种多通道移液器的末端之间的标准间距为9mm，因此沟槽的隔室优选允许相等数量的移液管末端进入每个隔室。端部处的均衡器通道允许流体从侧部隔室中抽出，从而使得水合流体能够围绕端部井。隔室的长度优选大于一个井并且小于六个井，以减少液体溅出微板或者水合液体污染测定井。最后，沟槽深度优选为井深度的50％或更小，以减少所需的水合液体的体积并且允许使用与细胞移液器相同尺寸的移液器。

提升片170可以被限定在框架的一个或两个端部。提升片的长度l₃可以为0.3至0.55英寸，例如，0.435英寸。提升片有助于在不移除盖或盒体的情况下提升多井微板和盖或者微板和盒体。

框架的下边缘可以限定一个或多个凹口180。凹口可以位于框架的端部和/或侧面。当定位在载体托盘中时，并入一个或多个凹口为框架提供稳定性。此外，在没有凹口的情况下，框架在载体中位置较高，这可能阻碍其在不同的仪器中使用。在没有载体的情况下，一个多井微板的高度优选为约0.5至0.9英寸，更优选为0.685英寸(17.4mm)。例如，侧面装载的读板器(plate reader)的板入口高度为16mm至28mm。凹口允许以最小的增加高度(0至0.05英寸，即，0至1mm)将板放置在载体中。在一个优选实施例中，载体使板的高度增加了小于0.001英寸。

隔室和井中的流体的相对表面积与沟槽对减少井中的蒸发的影响有关。如果隔室中的流体的表面积太小，则井中蒸发的减少可以忽略不计。如果隔室中的流体的表面积大于期望的影响所需的表面积，则多井微板可能不如所需的那么紧凑，并且可能对用相同的移液管填充隔室提出挑战，其中，该移液管用于填充井。

优选实施例可以提供流体被引入到井和隔室中时的表面积和体积，如表1中所示。本发明的实施例包括至少±25％和更大的优选值的范围；优选井和隔室的体积和表面积的比值基本等于指示值，即±50％。在一个优选实施例中，用于细胞培养和测定条件的隔室中的两个底部-顶部测量之间的差值为0.055英寸。该深度差导致所有隔室的流体高度相对于板的顶表面处于恒定的深度(即，0.180英寸)。该差值补偿均衡器通道。

表1

盒体

参照图2a和图2b，盒体200被构造为与多井微板100配合。盒体200具有大致平坦的表面205，该表面包括例如由模制塑料(诸如聚苯乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯或其他合适的材料等)制成的盒体框架。平坦表面205限定了多个区域210，这些区域对应于(即，配准或配合)多井微板100中限定的多个井120的多个相应开口。在所示的实施例中，在这些区域210中的每一者内，平坦表面限定用作测试化合物储存器的第一、第二、第三和第四端口230以及用于套筒240的中心孔洞215。每个端口适于保持并根据需要将测试流体释放到其下方的相应井120中。端口230的大小和位置设置为使得四个端口的组合可以位于每个井120上方，并且来自四个端口中的任何一者的测试流体可以被输送至相应的井120中。在其他实施例中，每个区域中的端口数可以小于四个或大于四个。端口230和套筒240可以相对于多井微板100顺应性地安装，以便通过调整横向运动而允许它们嵌套在微板内。包括顺应区域的盒体的构造允许其制造具有更大的公差，并且允许盒体与具有略微不同的尺寸的微板一起使用。例如，顺应性可以通过使用弹性体聚合物形成平坦元件205来得以实现，以便允许框架200与每个区域中的套筒和端口之间的相对运动。

每个端口230可以呈圆柱形、圆锥形或立方体形状，在顶部的平坦表面205处开口，并且在底部处封闭，除了通常位于底表面中心的小孔(即，毛细孔)之外。毛细孔适于例如通过表面张力(例如，正压差力、负压差力或离心力)而无需外力就将测试流体保持在端口中。每个端口可以由不渗透测试化合物的聚合物材料或者由任何其他合适的固体材料(例如，铝)制成。当被构造为与多井微板100一起使用时，每个端口所包含的液体体积可以在从500μl到小至2μl的范围内，但是也可以利用在该范围之外的体积。

参照图2b，在盒体200的每个区域中，适于设置在相应井120中的浸入式传感器套筒240或屏障设置在一个或多个端口230之间并与一个或多个端口230相关联。传感器套筒240可以具有设置在其下表面255上用于插入到井120中的培养基内的一个或多个传感器250。用于该目的的传感器的一个示例是荧光指示器，诸如嵌入到透氧物质(诸如硅橡胶等)中的氧液熄荧光团(oxygen-quenched fluorophore)等。荧光团具有取决于井120中的成分的存在和/或浓度的荧光性质。可以使用其他类型的已知传感器，诸如电化学传感器、Clark电极等。传感器套筒240可以限定适于容纳传感器的孔洞和内部体积。

盒体200可以附接到传感器套筒，或者可以在没有附接的情况下靠近套筒定位，以允许独立地运动。盒体200可以包括化合物存储和输送端口的阵列，该阵列组装成单个单元并与类似的传感器套筒阵列相关联。

参考图3，盒体200的尺寸和形状设置为与多井微板100配合。因此，在微板具有八个井的实施例中，盒体具有八个套筒。

盖

参照图4，该装置还可以具有用于盒体200和/或用于多井微板100的可移除盖400。盖400可以被构造为装配在盒体200上，从而减少设置在盒体的端口230内的流体的可能的污染或蒸发。盖400还可被构造为直接装配在多井微板100上，以有助于在微板100未与盒体200接触或配合时保护井和隔室的内容物。

载体托盘

参照图5a和图5b，多井微板载体托盘500允许若干(例如，三个或四个)单列多井微板在仪器中放置和测量，该仪器设计用于符合标准ANSI/SLAS 1-2004的96井标准微板。因此，载体托盘可具有5.0299英寸±0.0098英寸乘3.3654英寸±0.0098英寸(即，约5×3英寸或约127mm×84mm)的外部尺寸。在其他实施例中，载体托盘的外部尺寸可以根据能够进行测量的仪器和单列微板中的井的数量来缩放。

在一个优选实施例中，载体具有限定多个开口520的三个区域510，该多个开口520构造为与每个多井微板100的井对准并配合。在一个优选实施例中，在使用中，多井微板的井列设置在与96井微板的列3、7和11相对应的位置处。由于所公开的多井微板的井位于由ANSI/SLAS标准限定的位置，因此不需要修改读板器。套环530在安装在盒体中时围绕每个微板井的底部区域。每个套环形成提供定位和光阻挡的圆形开口。套环可以着黑色以屏蔽来自井中的荧光信号分子的串扰光，或者可以是白色的以放大来自发光标记物的发射光。载体可以包括与多井微板上的凹口相对应的凹槽540。两个相邻微板的裙部可以装配到每个凹槽中。圆齿边缘(scalloped edge)550使得用户易于根据需要移除微板，同时为载体提供刚性。

在一个优选实施例中，载体开口允许微板以与板不在载体中的高度相同的高度位于载体中，即，板的高度等于板和载体组件的高度。

盒体200和盖400可以放置在微板100上，如上所述。多井微板和盒体通常可以如美国专利No.7,276,351和No.8,658,349中所述的那样使用，这些专利通过引用并入本文。此外，单独的井、屏障和端口可以具有这些专利中所述的井、屏障和端口的任何特性和特征。

在使用中，可通过将分析样本输送至由多井微板100的框架限定的井中并将流体输送到由框架限定的沟槽130中来制备液体分析样本。分析样本可以是例如培养基中的细胞。流体可以是相同的培养基或另一种液体，诸如水等。分析样本和流体两者均可以通过移液器输送；在一些实施例中，样本和流体可以通过同一移液器输送。

示例

示例1

进行培养箱蒸发实验，以比较沟槽中具有水合流体与不具有该流体的被覆盖的多井微板中的蒸发。对于六个板中的每一者，将80微升的液体放置在每个井中，并且对于这些板中的三者，将400微升的液体放置在沟槽的每个隔室中。在37℃下，在10％CO₂的气氛中，具有盖子但沟槽中没有液体(“干”)的三个多井微板以及具有盖子并且沟槽中含有液体的三个多井微板在加湿培养箱中培养过夜。测量每个井中剩余的液体体积，并判定以下值：

10％CO₂培养箱测试

示例2

在细胞外通量分析仪器中进行模拟测定(～90分钟)后，测量未被覆盖的微板中的井内的液体的蒸发。参照图6，在沟槽被填充的微板中损失的流体的平均％为3.75％，而在沟槽被清空的微板中损失约15.8％的流体。优选减少蒸发，这是因为由于细胞培养基的温度和离子强度的改变蒸发会引起测定数据的变化。

示例3

参照图7，在沟槽中含有水合流体和没有水合流体的情况下，观察设置在培养基中的细胞。在每个井中监测耗氧率(OCR)和细胞外酸化速率(ECAR)的关键代谢参数。具有干沟槽的板中的井至井的变化度(CV 60-95％)显著高于针对具有填充的沟槽的板中的测定井所观察到的变化度(20-65％)。良好的测定性能需要OCR和ECAR信号两者的井至井的变化度较低。OCR测量对温度变化特别敏感，温度变化可以由不受流体填充的沟槽保护的测定井中的蒸发速率的变化引起。

示例4

参照图8a-图8d，在若干条件下测量以相等密度接种的C2C12细胞的基础代谢率(OCR和ECAR)，以测试被填充或清空的沟槽的效果。在图8a和图8b中，在细胞接种时，按规定填充沟槽(每个隔室400μl)。对于由离散条表示的板，在XF仪器中进行测定之前，清空沟槽。在图8c和图8d中，在未将流体放置在沟槽中的情况下，对细胞接种并培育过夜。在由实心条表示的C板和D板中，在进行实验之前将流体添加到沟槽中。测量所有板的OCR和ECAR。为了在OCR测量中评估接种时沟槽中的流体存在的影响，将图8a与图8c进行比较。在沟槽中含有流体的板中接种的细胞的OCR值在80-120的范围内，而在具有干沟槽的板中接种的细胞的OCR值在0-60的范围内。OCR是细胞代谢健康的量度。低OCR值表明细胞不具有代谢活性。当针对ECAR测量而比较图8b和8d时，看到类似的结果。当在板中接种并且沟槽未被填充时，通过ECAR测量的代谢速率也非常低，表明细胞健康不良。因此，表明在单列微板中，在细胞接种和过夜培养时沟槽中的流体的存在是细胞健康良好的重要要求。

示例5

参照图9a和图9b，在沟槽中没有流体以及沟槽中含有流体的情况下，比较背景OCR信号随时间的井间和井内变化度。对于每个被测试的板，将培养基放置在每个井中，允许板在仪器中均衡15分钟，然后进行测量30分钟。在沟槽中没有流体的板中，背景OCR信号在井间显著变化，其中，在30分钟的时段，范围从-37变化到+5(42的范围)并且上升了10-20个单位。当沟槽被填充时，信号更稳定，其中，在整个时间段，总范围为-14至+7(21的范围)并且上升了约7个单位。因此，表明在该测定中稳定的背景水平需要沟槽内的流体的存在。

在不脱离本发明的精神或其本质特性的情况下，本发明可以以其他具体形式实施。因此，前述实施例在所有方面都被认为是对本文所述的本发明的例示。不同实施例的各种特征和元件可以以不同的组合和排列使用，这对本领域的技术人员将是显而易见的。因此，本发明的范围由所附权利要求书而非前述描述来指明，并且因此，落入权利要求书的等同表述的含义和范围内的所有改变意在包括于本文中。

Claims (17)

1.一种适于保持在具有多个区域的多井微板载体的一个区域中、用于保持液体样本的多井微板，所述多井微板包括：

框架，其限定

多个井，其呈单列设置，每个井包括具有长度l1的开口；

沟槽，其设置在所述多个井周围，包括多个隔室和在所述多井微板的每个端部处的均衡器通道；以及

多个壁，其横跨所述沟槽，所述壁限定所述沟槽的所述多个隔室，每个隔室的长度l2选自大于l1且小于6l1的范围，

其中，设置在所述单列井的相对侧的两个隔室经由所述均衡器通道流体连通，并且所述均衡器通道连接设置在所述单列井的相对侧的所述两个隔室，

其中，经由所述均衡器通道连通的所述两个隔室的深度小于与其相邻的隔室的深度，

其中，所述均衡器通道具有破坏流体的表面张力的特征。

2.根据权利要求1所述的多井微板，其中，所述井的长度l1选自1mm至9mm的范围。

3.根据权利要求1所述的多井微板，其中，所述多个井包括八个井。

4.根据权利要求1所述的多井微板，其中，所述沟槽包括八个隔室。

5.根据权利要求1所述的多井微板，其中，至少一个隔室的深度小于所述井中的一者的深度。

6.根据权利要求5所述的多井微板，其中，所述至少一个隔室的深度深达所述井中的一者的深度的50％。

7.根据权利要求1所述的多井微板，其中，靠近所述框架的端部的隔室的深度小于设置在所述框架的中心部分的隔室的深度。

8.根据权利要求1所述的多井微板，其中，所有隔室具有基本相等的长度。

9.根据权利要求1所述的多井微板，还包括限定在所述框架的端部上的提升片。

10.根据权利要求1所述的多井微板，其中，至少一个井是不透明的白色。

11.根据权利要求1所述的多井微板，其中，至少一个井是不透明的黑色。

12.根据权利要求1所述的多井微板，所述框架还包括位于其下边缘的凹口。

13.一种用于与权利要求1所述的多井微板配合的盒体，所述盒体包括：

基本平坦的表面，其具有多个区域，所述多个区域与所述板中的井的多个相应开口相对应；

位于所述盒体的多个相应区域中的下列项中的至少一者

适于分析井中的成分的传感器或传感器的一部分，和

适于容纳传感器的孔洞，以及

形成在所述盒体中的至少一个端口，所述端口适于将测试流体输送至所述板的相应井中。

14.根据权利要求13所述的盒体，其中，所述多井微板包括八个井，并且所述盒体包括八个区域。

15.一种用于制备液体分析样本的方法，所述方法包括以下步骤：

将所述分析样本输送至由根据权利要求1-12中任一项所述的多井微板的框架限定的井中；以及

将流体输送至由根据权利要求1-12中任一项所述的多井微板的所述框架限定的沟槽中。

16.根据权利要求15所述的方法，其中，将所述分析样本输送至所述井中的步骤包括使用移液器的步骤。

17.根据权利要求15所述的方法，其中，将所述流体输送至所述沟槽中的步骤包括使用移液器的步骤。