JP2960780B2 - 汚染防止上の改良が為された生物的分析装置 - Google Patents

汚染防止上の改良が為された生物的分析装置

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Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の属する技術分野〕 本発明は一般に、生物的分析、詳しくは、細胞培養物
のような生細胞に関する試験管内プロセス並びに、引き
続く、細胞機能を評価する分析評価を実施するための装
置に関する。更に詳しくは、本発明はウェルの各々がそ
の底部を透過性膜でもってシールされてなるマルチ−ウ
ェル付きの細胞培養プレートに関する。
〔従来の技術〕
生物工学工業に関する技術上の伸延に伴い、生物的研
究を支えるための色々な皿、フラスコ、管、プレートに
対する需要の最も大きい“バイオテックウェア”工業が
成長している。生物分子に関わる多くの実験では、でき
るかぎり無菌状態を維持するための厳しい条件がある。
これは、生細胞に関する試験管内プロセスを実施する場
合に特に言えることである。
生細胞の試験管内成長と、引き続く分析に関連して使
用する装置は、A/S Nncu and Corning社のような数多く
の製造業者から入手することができる。そうした装置
は、生細胞を培養或は分析するための媒体及び或は試薬
を付加するところのプラスチックの大きな破片から、細
胞培養媒体或は生物的試薬がその内部で個別のウェルに
付加されるところの自蔵式の、複数の不透性のプラスチ
ックウェル(6−、12−或は24−ウェルヴァージョンの
ものが通常入手され得る)を有するプレートに至る様々
な形態のものを入手することができる。
細胞成長媒体内に透過性の微孔質膜を懸架させること
が、細胞の成長及び研究に確実に有益であることが示さ
れた。通常、微孔質膜はプラスチック製の円筒の一端に
シールされ、この円筒が、培養基と共に培養プレートの
ウェル内に配置される。細胞は微孔質膜の上方の、また
しばしば下方のチャンバー内に配置される。微孔質膜は
イオンや分子が自由に拡散できるようにするので、細胞
の成長条件は、中実の不透性のプラスチック表面上にお
けるよりも生体内でのそれに一層近くなる。微孔質膜
は、細胞の両側に液体が接近できるようにしそれによ
り、細胞の分化を改善すると共に、細胞の移送性及び透
過性のみならず、細胞間の相互作用の各研究を容易化す
る。
最近では、細胞研究のための膜ウェルを提供するため
の概念は、底部を開放した列状のウェルと、各ウェルの
底部にシールした微孔質膜とを有するマルチウェル型の
プレート(今後、“マイクロウェル膜プレート”とも称
する)を提供することに拡がって来ている。マイクロウ
ェル膜プレートは、端部を閉じたウェルが合致する模様
に配列されたトレーに挿入されるようになっている。微
孔質膜の上下に組織培養基及び或は試薬を配置し、同時
に多数の研究を行うための所望に応じて細胞を追加する
ことができる。ミアポア社の販売するマルチスクリーン
(商標名)型のフィルタープレート要素はそうしたマイ
クロウェル膜プレートの一例である。
細胞の生物的研究を行う前の数日間、細胞を微孔質膜
の表面上で成長させることが、付着依存性の細胞が膜上
に集合層を形成し、またそうした細胞の、完全に分化さ
れた、解剖学的機能及び生理学的機能を発現させる上で
望ましい。端部を閉じたウェルが合致する模様に配列さ
れた、先に説明した形式のマルチウェル型のトレーは、
細胞成長期間中にマイクロウェル膜プレートと共に使用
することができる。しかし、成長する細胞の取り込む養
分を補給するために培養基をしばしば交換する必要があ
る。この初期成長期間中に、マイクロウェル膜プレート
のろ過ウェル全部を受容する幾つかの大きいリザーバ或
は単一の大型リザーバを有するトレーを使用するのが有
益である。大型のリザーバを有するトレーでは、1ウェ
ル当りに提供される培養基容量は、単一のろ過ウェルの
みを受容するリザーバでのそれよりも大きくなるので、
培養基を頻繁に取り替えなくとも良くなる。しかも、1
つの大きなリザーバ内での培養基の交換は、トレー当り
96個もの小さいウェルを交換するよりもずっと簡単であ
る。
使用する装置の形式に関わらず、生細胞に関与する実
験では無菌状態に対する配慮が必要となる。生細胞を取
り扱う場合、微生物汚染は常に重要な関心事項である。
しかしながらこの点、細胞から出るガスを外部環境に交
換する、またその逆が必要であるから、成長する細胞を
収納するプレートを周囲環境に対して密封することはで
きない。かくして、そうしたプレートと共に使用するカ
バーは、細胞を収納する容器との間に空間を提供するも
のでなければならない。そうした細胞分析装置を取り扱
う時、使用する液体溶液がこぼれると、こぼれた液体溶
液はカバーと容器との間の空間に残る。これが、汚染物
を容器に侵入させる通路を提供する。
“こぼれ”に関する前述の問題は、先に述べたマルチ
スクリーン(商標名)のようなマイクロウェル膜プレー
トを、細胞を収納する全ウェルと、膜を介して相互作用
する媒体のための単一のリザーバとを持つトレーと共に
使用する場合には大きな問題となる。この場合、トレー
のリザーバは比較的大きく且つ殆どそのリムの部分まで
液体で充填される。トレーをプレートに(或はプレート
のためのカバーに)シールすることができないために、
取り扱い中にトレー及びプレートを傾ける或は揺すると
液体はこぼれる。かくして、液体はトレーとプレートと
の間に容易に漏れ出してそこに止まり、汚染物の通路を
創出する。こうした汚染物の通路は細胞に、或は引き続
いて行う分析に悪影響を及ぼしかねない。
〔解決しようとする課題〕
前述の問題を解決する分析装置を提供することであ
る。
〔課題を解決するための手段〕
本発明によれば、周囲環境の微生物学的な汚染物がそ
こを通して装置内部に侵入し得るところの汚染液体によ
る通路を、毛管力を使用することで排除してなる改良さ
れた生物学的分析装置が提供され、前述の問題が解決さ
れる。好ましい実施例では、細胞分析のためのマイクロ
ウェル膜プレートが、細胞の成長及び分析に使用する適
宜の液体を保持する単一の大型のリザーバを形成する、
矩形の、側壁の高い浅いトレーに挿入されるようになっ
ている。各マイクロウェル膜プレートはリザーバ内に嵌
入し、細胞試薬に対して相当する膜を露呈する。トレー
の側面には、トレーの全周囲に沿って隆起するリッジが
伸延される。このリッジに形成された、高さが一様の一
連の段部が、マイクロウェル膜プレートをトレーに挿入
した場合に、このマイクロウェル膜プレートに対する支
持体として作用すると共に、マイクロウェル膜プレート
とトレーとの間に、狭幅の、毛管用の第1の間隙を創出
する。
本発明の上記実施例では、リッジはトレーの最も内部
の縁部(即ち、リザーバに最も近い位置)に沿って突出
し、リッジの底部からは棚状部分が横方向に伸延し、こ
の棚状部分が、マイクロウェル膜プレートをトレーに挿
入した場合に幅広の第2の間隙を形成する。第2の間隙
は、マイクロウェル膜プレート及びトレーの組み合わせ
体の最も外側の縁部を一様に伸延し、また第1の間隙と
関連して、リザーバ内の細胞と外部環境との間でのガス
交換のための通路を形成する。本発明の重要な様相に従
えば、第1の間隙の高さは、装置の外側に伸延する空間
の帯域内に形成された第2の間隙の高さ未満である。こ
のように、トレー及びマイクロウェル膜プレートを、取
り扱いに際して揺する時のように傾けると、リザーバを
出た液体は第1の間隙の形成する空間内に優先的に止ま
るようになる。第2の間隙にこぼれた液体は装置を水平
にするとリザーバに戻る。
〔図面の簡単な説明〕
図1は、本発明の好ましい実施例に従う、マイクロウ
ェル膜プレートと、リザーバを含むトレーの分解斜視図
である。
図2は、マイクロウェル膜プレートをトレーに挿入し
た状態での図1の側面図である。
図3は図2の状態での装置の、マイクロウェル膜プレ
ートをトレーに挿入する際の間隙及び空間の詳細を部分
的に破除して示す部分拡大断面図である。
図4は、別態様での実施例の部分拡大断面図である。
〔発明の実施の形態〕
図1には、細胞培養のために使用する装置10の好まし
い実施例が示される。本実施例では装置10は細胞培養に
関して説明されるが、装置は、細胞機能を分析するため
の分析評価を実施するための如き、試験管内での生細胞
研究のための多くの方法で使用することができる。
装置10は、プラスチック製の96個の独立したウェル12
を有するマイクロウェル膜プレート11(以下、単にプレ
ート11とも称する)を含み、各ウェル12は開放端部12A
と、ウェルの底部にシールされた透過性膜13とを有して
いる。プレート11はポリスチレンのような好適な材料か
ら形成され、膜はセルロースエステル、ポリビニリデン
フルオライド(PVDF)その他任意の好適な材料から作製
した微孔質膜である。装置10の膜の孔寸法は0.1乃至20
ミクロンの範囲であり得る。限外ろ過膜を必要とするそ
の他の用途のために使用するためには装置の孔寸法は0.
1ミクロン未満とする。矩形のトレー14はグリコール改
質ポリエチレンテレフタレート(PETG)のような好適な
材料から作製され、高い側壁15を有し、この側壁が、ト
レーの基本的に全面積を占める浅いリザーバ16を画定す
る。リザーバの寸法形状は、細胞培養中にプレートとト
レーとを組み合わせた時、リザーバ内部に96個のウェル
が全て挿入されるようなものである。
トレー14は、リザーバ16に隣り合う最も内側の縁部に
沿って、トレーの全周囲に位置付けられた隆起するリッ
ジ17を含んでいる。このリッジの底部から横方向に伸延
する状態で、側壁15と実質的に直交する棚状部分18が配
設される。図2及び図3に最も良く示されるように、プ
レート11の外側縁部19は、プレートをトレーに挿入した
時、棚状部分18の幅と概略同じ幅で伸延する。
リッジ17上で、トレー14の各端部位置に一様な高さに
形成した4つの段部20が、プレート11に対する支持体と
して作用すると共に、リザーバ16に近い位置で、トレー
とプレートとの間に第1の間隙、即ち毛管間隙21をも創
出する。プレートをトレーに挿入することにより、プレ
ートの外側縁部19の近辺に、図示されるような、もっと
幅広の第2の間隙22もまた形成される。この位置でのト
レーとプレートとの間の空間が、周囲環境と装置10の内
部との間における外側界面を画定する。本発明の重要な
様相に従えば、毛管間隙21の高さは第2の間隙22のそれ
未満であり、また、毛管間隙21と装置10の外側との間の
帯域には、この毛管間隙21と同じように低い或はもっと
低い空間は存在しない。細胞培養中は図示しないカバー
が装置を覆って配置される。カバー、プレート、トレ
ー、そして毛管間隙21と第2の間隙22とが組み合わされ
ることにより狭く曲折した通路が形成され、この通路
が、細胞培養中の汚染の機会を最小化しつつも尚、必要
なガス交換を可能とする。
先に言及したように、無菌状態は細胞培養用途のため
の重要な考慮事項である。しかしながら、装置10を密封
することは、細胞と周囲環境との間でのCO2及びO2ガス
のための交換能力が失われることから望ましくない。か
くして、取り扱い中にこぼれる成長用媒体は微生物汚染
源となり得る。媒体が外部環境と接触する状態のままで
停滞すると、リザーバ16に直接達する連続する液体通路
が出現しそれにより、装置に微生物学的な汚染物が侵入
する通路が形成される。この問題を解決するために、毛
管間隙21の高さを、ガス交換を可能とするための必要性
と矛盾しない限りにおいてできるだけ低く維持する。0.
01mmから1.0mmの間の高さが特に有益であることが分か
った、一方、第2の間隙22の高さは毛管間隙21の高さよ
りもずっと高く、例えば0.1mmから5.0mmの間とする。第
2の間隙22の高さは毛管間隙21の高さの数倍とすること
ができる。つまり、毛管間隙が0.2mmであれば第2の間
隙は1.0mm或はその前後である。かくして、装置10が傾
くことによりリザーバ16からこぼれた液体は、優先的に
毛管間隙21に止まる。第2の間隙22には液体が存在しな
いことから、こぼれた液体は、これを汚染する外部環境
から隔絶される。
先に説明した液体バリヤーの創出に影響するその他の
考慮事項には、細胞培養液に対する適宜の表面濡れ特性
を有する材料を選択することが含まれる。プレート11と
トレー14とを共に、細胞培養液によっては濡れない材料
から作製するのが好ましい。つまり液体は、プレート11
とトレー14とによる2表面に対する接触角度が90゜より
も大きいと、幾分かの圧力が加えられた場合を除き、毛
管間隙21には入らない。しかしながらそうした濡れ特性
を有する材料は別の理由からしばしば受け入れ難いもの
となる。装置10は、プレート11とトレー14とが、細胞培
養液で濡れてもその濡れが広がらない材料から形成され
たものであれば、やはり細胞培養液の汚染を防止するも
のとなる。細胞培養液は、中実の表面と90゜未満の、し
かし0゜よりも大きい角度で接触するのであれば、それ
らの表面上では広がらない。この条件では細胞培養液は
毛管間隙21を越えて第2の間隙22に入り込む。しかしな
がら、この第2の間隙22に止まる細胞培養液は装置を水
平に戻すとリザーバ16に戻る。ある用途のためには、毛
管間隙21と第2の間隙22との界面位置に鋭角の縁部30を
設けることで、液体バリヤの性能が高められる。
図4は装置10の別態様を示すものであり、リッジは異
なる構造を有している。本実施例ではリッジ40は、テー
バの付いた棚状部分41と、この棚状部分41と直交する側
壁42とにより画定される2つのスローブ間に形成され
る。棚状部分41はプレート11に関する狭幅部分の高さか
ら、トレーの最も外側の縁部位置の幅広部分の高さにか
けてテーパが付けられている。本実施例では幅広部分の
端部が狭幅部分の端部よりも幅広い必要はない。棚状部
分を、毛管間隙21よりも高さの低い空間が創出されない
限りにおいて反対側に向けてテーパーさせることもでき
る。
以上本発明を具体例を参照して説明したが、本発明の
内で多くの変更を成し得ることを理解されたい。

Claims (9)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】生物学的分析を行うための装置であって、 液体溶液を保持するための少なくとも1つのリザーバを
    画定する底部表面及び連続する側方表面を有するトレー
    と、 リザーバの周囲に沿って伸延する棚状部分と、 リザーバの内部とトレーとの間で棚状部分上にリッジを
    画定する手段と、 少なくとも前記リッジ及び棚状部分に接近する位置でリ
    ザーバの開口部を覆うようになっているサンプル容器支
    持手段と、 サンプル容器支持手段をリッジから離間させ、その間部
    分に、リザーバの周囲に沿って伸延し、装置外部からリ
    ザーバ内部への、またその逆のガス交換を可能とする第
    1の毛管空間を創出するための手段と、 を含み、 棚状部分とサンプル容器支持手段とが、第1の毛管空間
    に隣り合う第2の空間を創出し、第1の毛管空間の高さ
    が第2の空間の高さ未満でありそれにより、リザーバ内
    の液体溶液がリザーバからこぼれ出した場合に第1の毛
    管空間内に優先的に止まるようにしてなる、生物学的分
    析を行うための装置。
  2. 【請求項2】サンプル容器支持手段が少なくとも1つの
    収納手段を含み、該収納手段が、該収納手段にシール状
    態で付設された透過性の膜を有し、該膜が、リザーバ内
    部の液体溶液と接触するべく位置決めされている請求項
    1に記載の生物学的分析を行うための装置。
  3. 【請求項3】収納手段が細胞培養のための生細胞を含ん
    でいる請求項2に記載の生物学的分析を行うための装
    置。
  4. 【請求項4】第1の毛管空間を画定する表面と第2の空
    間を画定する表面との少なくとも一方が、液体溶液が該
    少なくとも一方の表面と90゜未満の、しかし0゜よりも
    大きい角度で接触するような表面特性を有してなる請求
    項1、2、或は3の何れかに記載の生物学的分析を行う
    ための装置。
  5. 【請求項5】第1の毛管空間の高さが0.01mm及び1mmの
    間である請求項1、2、或は3の何れかに記載の生物学
    的分析を行うための装置。
  6. 【請求項6】第2の空間の高さが、0.01mm及び5mmの間
    である請求項1、2、或は3の何れかに記載の生物学的
    分析を行うための装置。
  7. 【請求項7】第1の毛管空間から第2の空間への移行部
    分が鋭角の縁部である請求項1、2、或は3の何れかに
    記載の生物学的分析を行うための装置。
  8. 【請求項8】第2の空間の高さが、第1の毛管空間から
    の距離と共に高くなる請求項1、2、或は3の何れかに
    記載の生物学的分析を行うための装置。
  9. 【請求項9】第2の空間の高さが第1の毛管空間からの
    距離と共に減少する請求項1、2、或は3の何れかに記
    載の生物学的分析を行うための装置。
JP8521844A 1995-01-05 1996-01-02 汚染防止上の改良が為された生物的分析装置 Expired - Fee Related JP2960780B2 (ja)

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DE (1) DE69615655T2 (ja)
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