CN116785426A - 用于治疗病毒性肺炎的C5a抑制剂 - Google Patents

用于治疗病毒性肺炎的C5a抑制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN116785426A
CN116785426A CN202310453303.8A CN202310453303A CN116785426A CN 116785426 A CN116785426 A CN 116785426A CN 202310453303 A CN202310453303 A CN 202310453303A CN 116785426 A CN116785426 A CN 116785426A
Authority
CN
China
Prior art keywords
amino acid
seq
antibody
antibodies
binding
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310453303.8A
Other languages
English (en)
Inventor
郭仁峰
尼尔斯·克里斯托弗·里德曼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
InflaRx GmbH
Original Assignee
InflaRx GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=50342223&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN116785426(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by InflaRx GmbH filed Critical InflaRx GmbH
Publication of CN116785426A publication Critical patent/CN116785426A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/472—Complement proteins, e.g. anaphylatoxin, C3a, C5a
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本申请涉及用于治疗病毒性肺炎的C5a抑制剂。本发明涉及用于治疗肺炎尤其是病毒性肺炎的C5a抑制剂。本发明还涉及C5a抑制剂在制备用于治疗肺炎尤其是病毒性肺炎之药物组合物中的用途。本发明还涉及用于治疗肺炎尤其是病毒性肺炎的方法，其包括向有此需要的对象施用治疗量的C5a抑制剂的步骤。

Description

用于治疗病毒性肺炎的C5a抑制剂
本申请是申请号为201580014552.0的发明名称为“用于治疗病毒性肺炎的C5a抑制剂”的中国专利申请的分案申请，原申请是2015年03月20日提交的PCT国际申请PCT/EP2015/055947于2016年09月18日进入中国国家阶段的申请。
技术领域
本发明涉及用于治疗肺炎，尤其是病毒性肺炎的C5a抑制剂。本发明还涉及C5a抑制剂在制备用于治疗肺炎，尤其是病毒性肺炎之药物组合物中的用途。本发明还涉及用于治疗肺炎，尤其是病毒性肺炎的方法，其包括向有此需要的对象施用治疗量的C5a抑制剂的步骤。
背景技术
C5a
C5a在补体激活后从C5裂解。在补体激活产物中，C5a是最有效的炎性肽之一，具有多种功能(Guo RF和Ward PA.2005.Annu.Rev.Immunol.23:821-852)。C5a是存在于健康人血液中的糖蛋白，分子量为11.2kDa。C5a的多肽部分含有74个氨基酸，占8.2kDa的分子量，而糖部分占约3kDa。C5a通过高亲和力C5a受体(C5aR和C5L2)发挥其作用(WardPA.2009.J.Mol.Med.87(4):375-378)。C5aR属于具有7个跨膜区段的G蛋白偶联受体的视紫红质型家族；C5L2类似但不是G蛋白偶联的。目前认为C5a主要通过C5a-C5aR相互作用发挥其生物学功能，因为很少发现C5a-C5L2相互作用的生物学响应。C5aR在髓系细胞(包括嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和单核细胞)中，以及在许多器官(尤其是肺和肝)的非髓系细胞中广泛表达，表明了C5a/C5aR信号转导的重要性。C5a具有多种生物学功能(Guo和Ward,2005，同上)。C5a是嗜中性粒细胞的强化学引诱物，也对单核细胞和巨噬细胞具有趋化活性。C5a引起嗜中性粒细胞中的氧化爆发(oxidative burst)(O2消耗)，增强吞噬作用并且释放颗粒酶。C5a还被发现是血管扩张剂。还发现C5a参与调节多种细胞类型中细胞因子的表达，以增强嗜中性粒细胞上粘附分子的表达。发现当C5a在疾病状态下过量产生时，C5a变得非常有害，因为其是炎性应答的强诱导物和增强剂，作用于炎性反应链的上游。高剂量C5a可能导致嗜中性粒细胞的非特异性趋化“脱敏”，从而造成多种功能障碍(Huber-Lang M等2001.J.Immunol.166(2):1193-1199)。
已经报道C5a发挥多种促炎应答。例如，C5a刺激促炎细胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)的合成以及从人白细胞释放(Hopken U等1996.EurJ Immunol 26(5):1103-1109；Riedemann NC等2004.J Immunol 173(2):1355-1359；Strieter RM等1992.Am J Pathol 141(2):397-407)。在肺泡上皮细胞中之TNF-α、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-2、细胞因子诱导的嗜中性粒细胞化学诱导物(CINC)-1和IL-1β的产生中，C5a与LPS产生强协同效应(Riedemann NC等2002.J.Immunol.168(4):1919-1925；Rittirsch D等2008.Nat Rev Immunol 8(10):776-787)。
已经证明了C5a的阻滞在败血症的实验模型以及炎症的许多其他模型如在多种物种中的缺血/再灌注损伤、肾病、移植物排斥、疟疾、类风湿性关节炎、传染性肠病、炎性肺病、狼疮样自身免疫疾病、神经退行性疾病等中的保护作用，如以下部分综述的：Klos A.等(Klos A.等2009.Mol Immunol 46(14):2753-2766)和Allegretti M.等(Allegretti M等2005.Curr Med Chem 12(2):217-236)。此外，最近发现，C5a的阻滞在小鼠的肿瘤模型中表现出强治疗益处(Markiewski MM等2008.Nat Immunol 9(11):1225-1235)。
禽流感
2013年2月，在中国出现了一种新的禽流感H7N9病毒，截止2013年11月，确认了总共139位患者，其中45个致死病例(WHO.Human infection with avian influenza A(H7N9)virus–update.http://www.who.int/csr/don/2013_11_06/en/index.html(2013年11月6日访问))。大部分感染有H7N9病毒感染的严重病例表现出具有急性肺损伤(acute lunginjury，ALI)的病毒性肺炎，然后发展成严重的呼吸衰竭和急性呼吸窘迫综合征(acuterespiratory distress syndrome，ARDS)，其类似于感染有HPAI(highly pathogenicavian influenza，高致病性禽流感)H5N1病毒或严重急性呼吸综合征(severe acuterespiratory syndrome，SARS)病毒的患者中的发病机理(Beigel JH等2005.N Engl JMed353:1374–1385；Ip WK等.2005.J Infect Dis 191:1697–1704)。迄今为止，尚未发现有效治疗这些疾病的治疗策略。累计研究表明补体激活发生在流感病毒感染的严重患者中并且与促炎介质和肺损伤的水平密切相关。已经报道了具有严重pdmH1NI(大流行流感H1N1)病毒感染的患者具有强的全身性补体激活和提高的促炎介质的产生(Berdal JE等2011.J.Infect.63(4):308-16；Ohta R等2011.Microbiol.Immunol.55(3):191-8)。此外，我们之前的研究表明，在H5N1感染的小鼠模型中肺组织切片和血浆样品中的补体激活产物极大增加，并且ALI的发病机理至少部分地可归因于补体激活和相关激活产物，例如C3a和C5a(Sun,S.等2013.Am J Respir Cell Mol Biol 49:221–230)。
在对抗病原体入侵和清除潜在的损伤细胞碎片的宿主防御中，补体系统是免疫系统的中心部分。但是，过度的补体激活可能是有害的，因为其可能造成不受控制的炎性应答并导致组织损伤(Daniel Ricklin&John DLambris.2013J Immunol 190(8):3831-8)。补体已经成为用于治疗多种临床疾病如缺血/再灌注(I/R)损伤、移植和自身免疫疾病的有吸引力和有前景的靶标(Lu F.等2013.Cardiovasc.Pathol.22:75–80；Tillou,X.等2010.Kidney Int.78:152–159；Manderson AP,等2004.Annu Rev Immunol 22:431-456)。由于病原体生物学特征(包括繁殖和致病性)的多样性以及补体激活在病原体驱动的免疫应答中潜在的“双重作用”，补体激活在病原体诱导的疾病结果中的作用可能更复杂，因此，对用于治疗病原体相关的炎性病症的补体抑制剂的开发，重要的是考虑保留病原体清除功能同时抑制炎症和组织损伤。
补体激活产物C5a在许多疾病模型中发挥突出的促炎活性并且介导强的促炎和调节信号(Klos A.等2009,同上)。迄今，已经在临床前模型中测试了许多靶向C5a或C5aR的治疗性化合物，例如C5a抑制剂C5aIP，C5aR拮抗剂PMX53和CCX168，其在移植、败血症、关节炎、肾血管炎和癌症中具有有前景的治疗益处(Woodruff,T.M.等2011.Mol.Immunol.48:1631-1642；Okada,N.等2012.Clin.Exp.Pharmacol.2:114；Tokodai,K.等2010.Transplantation90:1358-1365；J.2006.Curr.Opin.Mol.Ther.8:529–538)。还证明C5a或C5a受体的抗体阻滞消除了伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)ANKA(PbA)感染的小鼠模型中的过度免疫应答(Patel,S.N.等2008.J.Exp.Med.205:1133-1143)。类似地，我们之前使用HPAI H5N1病毒性肺炎的小鼠模型的研究显示，抗C5a治疗显著减弱了肺损伤并且提高存活率(Sun,S.等2013,同上)。由于膜攻击复合物(membrane attack complex，MAC)在对抗入侵病原体的固有宿主防御中具有重要作用，似乎有利的是使用C5a阻滞策略抑制病原体感染导致的炎性应答，同时保留完整的MAC形成臂。
本发明所要解决的技术问题
本发明所要解决的一个问题是提供用于治疗病毒性肺炎，特别是用于治疗由新禽流感H7N9病毒引起的病毒性肺炎的治疗方法。
迄今尚未研究抗C5a治疗在治疗由新禽流感病毒H7N9引起的病毒性肺炎中是否有效。之前的研究集中在其他禽流感病毒(H5N1；参见Sun,S.等2013,同上)并且仅使用小鼠模型研究由禽流感病毒引起的病毒性肺炎。来自小鼠模型的阳性结果可能并不总能够转变成人患者的实际治疗。
本申请的发明人已经在H7N9病毒感染的猴模型中使用IFX-1(目前处于临床开发的抗人C5a的高效中和mAb)来探究补体抑制在治疗H7N9病毒诱导的严重肺炎中的治疗潜力。据我们所知，这是首次在猴模型中研究病毒性肺炎的抗C5a治疗。
下文所示实验部分的数据证明H7N9感染中发生过度补体激活，并且其可归因于ALI(急性肺损伤)和系统性炎症的出现。
本发明发现，当与未治疗的被感染非洲绿猴(African green monkey)相比时，H7N9感染的猴中的抗C5a治疗大幅减弱了ALI并导致强烈降低的肺组织病理学损伤得分以及降低的肺巨噬细胞和嗜中性粒细胞浸润。此外，IFX-1治疗明显降低了H7N9引起的感染性SIRS(systemic inflammatory response syndrome，全身炎性应答综合征)的强度，如通过体温增加和炎性介质血浆水平二者的显著降低证明。IFX-1治疗出乎意料地降低了AGM的被感染肺中的病毒效价。这是非常出人意料的，因为没有已知机制表明C5a参与病毒复制。
该结果表明补体抑制是用于辅助治疗严重病毒性肺炎的非常有前景的策略。与施用C5a抑制剂有关的治疗效果非常优异，以至于甚至基于C5a抑制剂的病毒性肺炎单一治疗似乎也是可行的。
以上综述未必描述了与本发明有关的所有优点以及本发明解决的所有问题。
发明内容
在第一个方面，本发明涉及C5a抑制剂，其用于在患有病毒性肺炎的对象中降低病毒载量和/或减轻急性肺损伤(ALI)。
在第二个方面，本发明涉及C5a抑制剂，其用于治疗对象中的肺炎(优选病毒性肺炎)，其中所述抑制剂用作单一治疗。
在第三个方面，本发明涉及C5a抑制剂，其用于治疗对象中的病毒性肺炎，其中所述对象中的所述病毒性肺炎由H7N9病毒引起。
在第四个方面，本发明涉及C5a抑制剂，其用于治疗对象中的肺炎优选病毒性肺炎)，其中所述对象是灵长类动物，优选猿，更优选人。
本发明的概述不必描述本发明的全部特征。
以下附图和实施例仅举例说明本发明，而无论如何不应解释为限制由所附权利要求指出的本发明的范围。
附图说明
图1.IFX-1生物学特征
图1A和1B:在ZAP-CD11b测定中测试IFX-1对人(图1A)和猴(图1B)eC5a的阻断活性。数据代表使用不同供体的3个独立实验。
图1C:在感染并且抗体施用后0、1、3、5和7天(第0、1、3天n＝4；第5、7天n＝2)，在来自猴的血浆样品中测量IFX-1浓度。
图2.H7N9病毒感染后AGM肺中的补体激活。
图2A、2B和2C:在感染后第3天，对从所有肺叶收集的18个(A/H7N9组)和6个(模拟物组)样品进行C3aR(图2A)、C5aR(图2B)和MASP2(图2C)的定量RT-PCR分析。示出的数据是与模拟物相比的倍数变化(平均值±SEM)。
图2D、2E和2F：通过定量ELISA测量A/H7N9感染的AGM血浆中的C3a(图2D)、C5a(图2E)和C5b-9(图2F)浓度。数据表示为指定时间点的平均值±SEM(第0、1和3天n＝6；第5天n＝3)。***意指相比于第0天P＜0.001。
图3.A/H7N9病毒感染并且抗C5a抗体治疗后减轻的ALI。
图3A:第3天的半定量组织病理学分析揭示了与仅接受A/H7N9感染的AGM相比，IFX-1治疗的AGM中减轻的肺损伤(每个时间点IFX-1治疗组中2个AGM，对照组3个AGM)。
图3B:A/H7N9感染后指定时间点的体温变化(平均值±SEM)。通过减去第0天测量的温度计算示出的数据(在感染后第0天和第3天，A/H7N9组中6个AMG，A/H7N9+IFX-1组中4个AMG；在第5和7天时，各组中留下3个和2个AMG)。*意指相比于A/H7N9组P＜0.05。
图3C:在由所有肺叶收集的均化样品中测定感染后第3天的肺病毒效价(在来自三个AMG的A/H7N9组中n＝18，在来自2个AMG的A/H7N9+IFX-1组中n＝12)。数据表示为每克肺组织的TCID50(平均值±SEM)，虚线指示检测极限。
图4.在H7N9病毒感染并且抗C5a抗体治疗后，AGM中降低的炎性应答。
图4A至4F:进行定量ELISA以测量AGM血清样品中的IL-1β(图4A)、IL-6(图4B)、IP-10(图4C)、IFN-γ(图4D)、TNF-α(图4E)和MCP-1(图4F)浓度。示出的数据是指定时间点细胞因子和趋化因子的浓度(平均值±SEM)，感染后第0、1和3天时A/H7N9组(实心圆)中n＝6，A/H7N9+IFX-1组中n＝4(空心圆)，第5天时各组留下3个和2个AMG。*和***分别意指相比于A/H7N9组P＜0.05和P＜0.001。
图4G和4H:感染后第3天时肺中巨噬细胞(图4G)和嗜中性粒细胞(图4H)计数的半定量分析(A/H7N9组中n＝3，A/H7N9+IFX-1组中n＝2)。
具体实施方式
定义
在下文详细描述本发明之前，应理解的是，本发明不限于本文描述的具体方法、方案和试剂，因为其可以变化。还应理解的是，本文使用的术语仅为了描述具体实施方案的目的，而并未旨在限制本发明的范围，本发明的范围仅由所附权利要求限制。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解相同的含义。
优选地，本文使用的术语如以下中所述来定义："A multilingual glossary ofbiotechnological terms:(IUPAC Recommendations)",Leuenberger,H.G.W,Nagel,B.和H.编辑(1995),Helvetica Chimica Acta,CH-4010Basel,Switzerland)。
贯穿本说明书及所附权利要求书，除非上下文另外要求，否则词语“包括”及变化形式如“包含”和“含有”应理解为指包括所指出的整体或步骤或者整体或步骤的组，但是不排除任何其他整体或步骤或者整体或步骤的组。
贯穿本说明书上下文引用了多个文献(例如，专利、专利申请、科学出版物、制造商说明书、说明、GenBank登记号序列提交等)。本文中没有内容解释为承认本发明不能凭借在先发明而早于这些公开内容。本文引用的一些文献具有“通过引用并入”的特征。在这些并入的文献的定义或教导与本说明书记载的定义或教导矛盾的情况下，以本说明书上下文为准。
序列：本文提到的所有序列均公开在所附序列表中，所述序列表的整个内容和公开内容是本说明书的一部分。
本文使用的“人C5a”是指以下74个氨基酸的肽：
本文使用的术语“人C5a”是指该74个氨基酸肽的糖基化形式和去糖基化形式。“人C5a”和“hC5a”在本文中可互换使用。
本文使用的术语“C5a抑制剂”是指抑制C5a生物学活性的化合物。术语“C5a抑制剂”特别是指干扰C5a与C5a受体(C5aR和C5L2)结合的化合物；尤其是干扰C5a与C5aR结合的化合物。因此，术语“C5a抑制剂”涵盖特异性与C5a结合并且抑制C5a与C5aR结合的化合物，以及特异性与C5aR结合并且抑制C5a与C5aR结合的化合物。示例性C5a抑制剂包括C5a抑制肽(C5aIP)、选择性C5a受体拮抗剂PMX53和CCX168，以及WO 2011/063980 A1(也公开为US2012/0231008 A1)中公开的抗C5a抗体。术语“C5a的抑制剂”和“C5a抑制剂”在本文中可互换使用。
本文中使用的术语“结合部分”是指可与靶分子或靶表位特异性结合的任何分子或分子的部分。在本申请上下文中优选的结合部分是(a)抗体或其抗原结合片段；(b)寡核苷酸；(c)抗体样蛋白质；或(d)拟肽(peptidomimetic)。特别好地适于实施本发明的示例性“结合部分”能够与由两个氨基酸序列NDETCEQRA(SEQ ID NO:2)和SHKDMQL(SEQ ID NO:3)形成的人C5a构象表位结合。另一些特别好地适于实施本发明的示例性“结合部分”能够与由两个氨基酸序列DETCEQR(SEQ ID NO:4)和HKDMQ(SEQ ID NO:5)形成的人C5a构象表位结合。
如本文使用的，在以下情况下认为第一化合物(例如，抗体)与第二化合物(例如，抗原，如靶蛋白)结合，如果所述第一化合物与所述第二化合物的解离常数Kd为1mM或更小，优选100μM或更小，优选50μM或更小，优选30μM或更小，优选20μM或更小，优选10μM或更小，优选5μM或更小，更优选1μM或更小，更优选900nM或更小，更优选800nM或更小，更优选700nM或更小，更优选600nM或更小，更优选500nM或更小，更优选400nM或更小，更优选300nM或更小，更优选200nM或更小，甚至更优选100nM或更小，甚至更优选90nM或更小，甚至更优选80nM或更小，甚至更优选70nM或更小，甚至更优选60nM或更小，甚至更优选50nM或更小，甚至更优选40nM或更小，甚至更优选30nM或更小，甚至更优选20nM或更小，以及甚至更优选10nM或更小。
根据本发明的术语“结合”优选地涉及特异性结合。“特异性结合”意指与其他靶标的结合相比，结合部分(例如，抗体)与其特异性靶标(例如，表位)更强地结合。如果结合部分与第一靶标结合的解离常数(Kd)小于与第二靶标的解离常数，则与所述第二靶标相比，结合部分与所述第一靶标而更强地结合。优选地，结合部分特异性结合之靶标的解离常数(Kd)比结合部分不特异性结合之靶标的解离常数(Kd)小超过10倍，优选地超过20倍，更优选超过50倍，甚至更优选超过100倍、200倍、500倍或1000倍。
本文使用的术语“Kd”(通常以“mol/L”测量，有时候缩写成“M”)意指结合部分(例如，抗体或其片段)与靶分子(例如，抗原或其表位)之间的特异性相互作用的解离平衡常数。在本申请的上下文中，“Kd”值由室温(25℃)下的表面等离子体共振光谱法(BiacoreTM)确定。
“表位”也称为抗原决定簇，是大分子的一部分，其被免疫系统，尤其是被抗体、B细胞或T细胞识别。本文使用的“表位”是大分子能够与本文所述结合部分(例如，抗体或其抗原结合片段)结合的部分。在本文的上下文中，术语“结合”优选地涉及特异性结合。表位通常由分子的化学活性表面基团(例如，氨基酸或糖侧链)组成，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。构象表位和非构象表位可如下区分：在变性溶剂的存在下，与前者的结合丧失而与后者的结合不丧失。
本文使用的“构象表位”是指线性大分子(例如，多肽)的由所述大分子的三维结构形成的表位。在本申请的上下文中，“构象表位”是“不连续表位”，即大分子(例如，多肽)上由该大分子的一级序列(例如，多肽的氨基酸序列)的至少两个独立区域形成的构象表位。换言之，如果表位由一级序列中本发明的结合部分(例如，抗体或其抗原结合片段)同时结合的至少两个独立区域组成，则认为该表位是本发明上下文中的“构象表位”，其中这些至少两个独立区域由一级序列中本发明结合部分不结合的一个或更多个区域间断。优选地，这样的“构象表位”存在于多肽上，并且一级序列中的两个独立区域是本发明结合部分(例如，抗体或其抗原结合片段)结合的两个独立氨基酸序列，其中这些至少两个独立氨基酸序列由一级序列中本发明结合部分不结合的一个或更多个氨基酸序列间断。优选地，间断氨基酸序列是包含结合部分不结合的两个或更多个氨基酸的连续氨基酸序列。本发明结合部分所结合的至少两个独立氨基酸序列对于其长度没有特别限制。这样的独立氨基酸序列可以仅由一个氨基酸组成，只要所述至少两个独立氨基酸序列内的氨基酸总数足够大以实现结合部分与构象表位之间的特异性结合即可。
“互补位”是抗体与表位结合的部分。在本发明上下文中，“互补位”是本文所述结合部分(例如，抗体或其结合片段)与表位结合的部分。
术语“抗体”通常是指包含通过二硫键互相连接的至少两个重(H)链和两个轻(L)链的糖蛋白或者其抗原结合部分。术语“抗体”还包括抗体的所有重组形式，特别是本文所述的抗体，例如原核生物中表达的抗体、未糖基化抗体、真核生物(例如，CHO细胞)中表达的抗体、糖基化抗体以及下文所述的任何抗原结合抗体片段和衍生物。每个重链由重链可变区(本文中缩写为VH或VH)和重链恒定区(本文中缩写为CH或CH)构成。重链恒定区可以进一步分成三个部分，称为CH1、CH2和CH3(或者CH1、CH2和CH3)。每个轻链由轻链可变区(本文中缩写为VL或VL)和轻链恒定区(本文中缩写为CL或CL)构成。VH和VL区可进一步分为被称为互补决定区(CDR)的高变区，和散布的被称为框架区(FR)的更保守区域。VH和VL各自由三个CDR和四个FR构成，从氨基端到羧基端以如下顺序排布：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的多种细胞(例如，效应物细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。
本文使用的术语抗体的“抗原结合片段”(或简单地“结合部分”)是指保持了与抗原特异性结合之能力的抗体的一个或更多个片段。已经表明抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段执行。术语抗体的“抗原结合片段”涵盖的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH结构域组成的单价片段；(ii)F(ab′)2片段，包含由铰链区的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，由VH和CH结构域组成；(iv)Fv片段，由抗体单臂的VL和VH结构域组成，(v)dAb片段(Ward等,(1989)Nature 341:544-546)，其由VH结构域组成；(vi)分离的互补决定区(CDR)，以及(vii)两个或更多个分离的CDR的组合，其可以任选地通过合成接头连接。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由独立的基因编码，它们可以使用重组方法通过合成接头连接，所述合成接头能够使其制备成其中VL区和VH区配对以形成单价分子的单个蛋白质链(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird等(1988)Science 242:423-426；以及Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)。这样的单链抗体也旨在包括在术语抗体的“抗原结合片段”之内。另一个实例是结合结构域免疫球蛋白融合蛋白，其包含(i)与免疫球蛋白铰链区多肽融合的结合结构域多肽，(ii)与铰链区融合的免疫球蛋白重链CH2恒定区，和(iii)与CH2恒定区融合的免疫球蛋白重链CH3恒定区。结合结构域多肽可以是重链可变区或轻链可变区。结合结构域免疫球蛋白融合蛋白还公开于US2003/0118592和US 2003/0133939中。本领域技术人员已知使用常规技术获得这些抗体片段，并且以与完整抗体相同的方式筛选片段的实用性。“抗原结合片段”的另一些实例称为微抗体(microantibody)，其来源于单个CDR。例如，Heap等,2005,描述了一种17个氨基酸残基的微抗体，其来源于针对HIV-1之gp120包膜糖蛋白的抗体的重链CDR3(Heap C.J.等(2005)Analysis of a 17-amino acid residue,virus-neutralizingmicroantibody.J.Gen.Virol.86:1791-1800)。其他实例包括小抗体模拟物，其包含两个或更多个彼此融合的CDR区，优选地通过同源框架区融合。这样的包含通过同源VH FR2连接的VH CDR1和VL CDR3的小抗体模拟物由Qiu等,2007描述(Qiu X.-Q.等(2007)Small antibodymimetics comprising two complementary-determining regions and a frameworkregion for tumor targeting.Nature biotechnology 25(8):921-929)。
因此，本文使用的术语“抗体或其抗原结合片段”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即，包含免疫特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。还包括通过技术(包括如噬菌体展示)选择的与靶分子或靶表位特异性结合的免疫球蛋白样蛋白质，例如与通过根据SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的氨基酸序列形成的人C5a的构象表位特异性结合；或者与通过氨基酸序列DETCEQR(SEQ ID NO:4)和HKDMQ(SEQ ID NO:5)形成的人C5a的构象表位特异性结合。本发明的免疫球蛋白分子可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类(例如，IgG1，IgG2优选IgG2a和IgG2b，IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类的免疫球蛋白分子。
可用于本发明的抗体及其抗原结合片段可以来自任何动物来源，包括鸟类和哺乳动物。优选地，抗体或片段来自人、黑猩猩、啮齿类动物(例如，小鼠、大鼠、豚鼠或兔)、鸡、火鸡、猪、绵羊、山羊、骆驼、牛、马、驴、猫或狗来源。特别优选的是，抗体是人或鼠来源的。本发明的抗体还包括嵌合分子，其中来源于一种物种(优选人)的抗体恒定区与来源于另一种物种(例如，小鼠)的抗原结合位点组合。此外，本发明的抗体包括人源化分子，其中来源于非人物种(例如，来源于小鼠)的抗体的抗原结合位点与人来源的恒定区和框架区组合。
如本文示例的，本发明的抗体可以直接由表达抗体的杂交瘤获得，或者可以在宿主细胞(例如，CHO细胞或淋巴细胞)中克隆和重组表达。宿主细胞的另一些实例是微生物(例如大肠杆菌(E.coli))和真菌(例如酵母)。或者，其可以在转基因的非人动物或植物中重组产生。
术语“嵌合抗体”是指这样的抗体，其中重链和轻链的每个氨基酸序列的一部分与来源于特定物种或属于特定类的抗体中的相应序列同源，而链的其余区段与另一物种或类的相应序列同源。通常，轻链和重链二者的可变区模拟来源于一个哺乳动物物种的抗体的可变区，而恒定区与来源于另一个物种的抗体的序列同源。这种嵌合形式的一个明显的优点是可以容易地使用来自非人宿主生物体的现有B细胞或杂交瘤由目前已知的来源方便地获得可变区，并且与来源于例如人细胞制备物的恒定区组合。尽管可变区具有易于制备的优点并且特异性不受来源的影响，但是当注射抗体时，与来自非人来源的恒定区相比人恒定区不太可能引起人对象中的免疫应答。然而，定义不限于于该具体实例。
术语“人源化抗体”是指具有基本上来源于来自非人物种之免疫球蛋白的抗原结合位点的分子，其中分子的其余免疫球蛋白结构基于人免疫球蛋白的结构和/或序列。抗原结合位点可以包含融合在恒定结构域上的完整可变结构域，或者仅接枝在可变结构域中合适的框架区上的互补决定区(CDR)。抗原结合位点可以是野生型的或通过一个或更多个氨基酸取代修饰的，例如被修饰以更加类似于人免疫球蛋白。一些人源化抗体形式保留了全部CDR序列(例如，包含来自小鼠抗体的全部六个CDR的人源化小鼠抗体)。其他形式具有相对于原始抗体变化的一个或更多个CDR。
用于人源化抗体的不同方法是技术人员已知的，如Almagro&Fransson,2008,Frontiers in Bioscience,13:1619-1633中的综述，其内容整体通过引用并入本文。US2012/0231008 A1中简单总结了Almagro&Fransson的综述文章，所述专利是国际专利申请WO 2011/063980 A1的进入国家阶段。US 2012/0231008 A1和WO 2011/063980 A1的内容整体通过引用并入本文。
本文使用的“人抗体”包括具有来自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本发明的人抗体可以包含不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外的随机诱变或位点特异性诱变或者通过体内体细胞突变引入的突变)。本发明的人抗体包括由人免疫球蛋白文库分离或由一种或更多种人免疫球蛋白的转基因动物分离的抗体，并且其不表达内源免疫球蛋白，如例如Kucherlapati&Jakobovits的美国专利No.5,939,598中所述。
本文使用的术语“单克隆抗体”是指单分子组成的抗体分子的制备物。单克隆抗体表现出对于特定表位的单结合特异性和亲和力。在一个实施方案中，单克隆抗体由杂交瘤产生，所述杂交瘤包含与无限增殖化细胞融合的由非人动物(例如，小鼠)获得的B细胞。
本文使用的术语“重组抗体”包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有抗体，例如(a)由对于免疫球蛋白基因的转基因或转染色体动物(例如小鼠)或者由其制备的杂交瘤分离的抗体，(b)由转化以表达抗体的宿主细胞分离的抗体，例如来自转染瘤(transfectoma)，(c)由重组、组合抗体文库分离的抗体，和(d)通过包括将免疫球蛋白基因剪接至其他DNA序列的任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体。
本文使用的术语“转染瘤”包括表达抗体的重组真核宿主细胞，例如CHO细胞、NS/0细胞、HEK293细胞、HEK293T细胞、植物细胞或真菌(包括酵母细胞)。
本文使用的“异源抗体”以涉及产生所述抗体的转基因生物体定义。该术语是指具有在不是由转基因生物体组成的生物体中发现的，并且通常来自转基因生物体以外物种之氨基酸序列或对应于其的编码核酸序列的抗体。
本文使用的“异杂合抗体(heterohybrid antibody)”是指具有不同生物来源的轻链和重链的抗体。例如，具有与鼠轻链缔合之人重链的抗体是异杂合抗体。
因此，适用于本发明的“抗体及其抗原结合片段”包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、单价抗体、双特异性抗体、异缀合抗体、多特异性抗体、重组抗体、异源抗体、异杂合抗体、嵌合抗体、人源化(特别是CDR接枝的)抗体、去免疫化抗体或人抗体，Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、由Fab表达文库产生的片段、Fd、Fv、二硫化物连接的Fv(dsFv)、单链抗体(例如，scFv)、双抗体或四抗体(Holliger P.等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90(14),6444-6448)、纳米抗体(也称为单结构域抗体)、抗独特型(抗Id)抗体(包括例如，本发明抗体的抗Id抗体)和上述的任何表位结合片段。
本文所述抗体优选是分离的。本文使用的“分离的抗体”意指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，与C5a特异性结合的分离的抗体基本上不含与C5a以外的抗原特异性结合的抗体)。但是，与人C5a的表位、同工型或变体特异性结合的分离的抗体可以具有对例如来自其他物种的其他相关抗原(例如，C5a物种同源物，例如大鼠C5a)的交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化学物质。在本发明的一个实施方案中，“分离的”单克隆抗体的组合涉及具有不同特异性并且与明确定义的组合物组合的抗体。
本文应用于物体(object)所使用的术语“天然存在”是指这样的事实，可以在自然界中发现物体。例如，存在于可以从天然来源分离的生物体(包括病毒)中并且未经实验室人员故意修饰的多肽或多核苷酸序列是天然存在的。
本文使用的术语“核酸适配体”是指通过重复的体外选择轮或SELEX(通过指数富集的配体系统进化)改造以与靶分子结合的核酸分子(综述参见：Brody E.N.和Gold L.(2000),Aptamers as therapeutic and diagnostic agents.J.Biotechnol.74(1):5-13)。核酸适配体可以是DNA或RNA分子。适配体可以包含修饰，例如经修饰的核苷酸，例如2’-氟取代的嘧啶。
本文使用的术语“抗体样蛋白质”是指被改造(例如，通过环的诱变)以与靶分子特异性结合的蛋白质。通常，这样的抗体样蛋白质包含连接在蛋白质骨架两端的至少一个可变肽环。这种双重结构限制将抗体样蛋白质的结合亲和力极大提高至与抗体相当的水平。可变肽环的长度通常为10至20个氨基酸。骨架蛋白质可以是具有良好溶解度特性的任何蛋白质。优选地，骨架蛋白是小的球蛋白。抗体样蛋白质包括但不限于亲和体(affibody)、anticalin和经设计的锚蛋白重复蛋白质(综述参见：Binz H.K.等(2005)Engineeringnovel binding proteins from nonimmunoglobulin domains.Nat.Biotechnol.23(10):1257-1268)。抗体样蛋白质可以来源于大的突变体文库，例如，从大的噬菌体展示文库淘选(pan)并且可以类比于常规抗体进行分离。另外，抗体样结合蛋白可以通过球蛋白的表面暴露残基的组合诱变获得。抗体样蛋白质有时候称为“肽适配体”。
本文使用的“拟肽”是被设计来模拟肽的小蛋白质样链。拟肽通常由现有肽的修饰得到，以改变分子的特性。例如，其可以由修饰得到，以改变分子的稳定性或生物学活性。这在由现有肽开发药物样化合物中可能具有作用。这些修饰包括对非天然存在的肽的改变(例如，改变的骨架以及并入非天然氨基酸)。
可以在例如所涉及氨基酸的极性、电荷、大小、溶解度、疏水性、亲水性和/或两亲性性质之相似性的基础上进行“保守替换”。氨基酸可以被分为以下六个标准氨基酸组：
(1)疏水性：Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)碱性：His、Lys、Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；以及
(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
本文使用的“保守替换”定义为通过上述六个标准氨基酸组的同一组内所列的另一个氨基酸交换氨基酸。例如，通过Glu交换Asp在经这样修饰的多肽中保留了一个负电荷。此外，甘氨酸和脯氨酸可以基于其破坏α螺旋的能力彼此替换。上述六个组内的一些优选保守替换是以下亚组内的交换：(i)Ala、Val、Leu和Ile；(ii)Ser和Thr；(iii)Asn和Gln；(iv)Lys和Arg；以及(v)Tyr和Phe。考虑到已知的遗传密码以及重组和合成DNA技术，技术人员可容易地构建编码保守氨基酸变体的DNA。
本文使用的“非保守替换”或“非保守氨基酸交换”定义为通过上述六个标准氨基酸组(1)至(6)中的不同组中列出的另一个氨基酸交换氨基酸。
本文使用的表述“包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加”应理解为这样修饰的氨基酸序列包含不超过3个氨基酸交换(优选保守氨基酸交换)、不超过3个氨基酸缺失和不超过3个氨基酸添加。因此，这样表征的氨基酸序列具有最多9个氨基酸修饰(3个交换+3个缺失+3个添加)。因此，虽然术语“包含”在其他语境中被理解为开放式表达，但是前述表达是封闭式表达。
本文使用的“生物学活性”是指多肽可以表现的任何活性，包括但不限于：酶促活性；与另一化合物的结合活性(例如，与另一肽结合，特别是与受体结合，或者与核酸结合)；抑制活性(例如，酶抑制活性)；活化活性(例如，酶活化活性)；或毒性作用。对于多肽的变体和衍生物，不需要变体或衍生物表现出与亲本多肽相同程度的活性。如果变体表现出亲本多肽活性的至少10％(例如，至少20％、至少30％、至少40％或至少50％)程度的相对活性，则认为该变体是本申请上下文中的变体。同样地，如果衍生物表现出亲本多肽活性的至少10％程度的相对生物学活性，则认为该衍生物是本申请上下文中的衍生物。本发明上下文中的特定相关“生物学活性”是与由根据SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的氨基酸序列形成的人C5a之构象表位的结合活性。优选地，本发明上下文中的相关“生物学活性”是与由氨基酸序列DETCEQR(SEQ ID NO:4)和KDM形成的人C5a之构象表位的结合活性。用于确定结合活性的测定是本领域普通技术人员已知的，包括ELISA和表面等离子体共振测定。
本文使用的“患者”意指可以从用本文所述C5a抑制剂的治疗中受益的任何哺乳动物或鸟类。优选地，“患者”选自实验动物(例如小鼠或大鼠)、家养动物(包括例如豚鼠、兔、鸡、火鸡、猪、绵羊、山羊、骆驼、牛、马、驴、猫或狗)，或灵长类动物，包括猴(例如，非洲绿猴、黑猩猩、倭黑猩猩、大猩猩)和人类。特别优选地“患者”是人类。术语“患者”和“待治疗对象”(或仅仅“对象”)在本文中可互换使用。
如果上下文没有另外说明的话，则本文使用的术语“猴”是指非人灵长类哺乳动物。例如，在下文的“实施例”部分中，术语“猴”通常用作“非洲绿猴”的简称。
本文使用的术语“猿”是指属于生物学“人猿(Hominoidea)”总科的旧世界类人猿哺乳动物，因此包括长臂猿(长臂猿科(Hilobatidae))、猩猩(猩猩属(Pongo))、大猩猩(大猩猩属(Gorilla))、黑猩猩(黑猩猩属(pan)和人(人属(Homo))。
本文使用的疾病或病症的“治疗”意指实现以下的一个或更多个：(a)降低病症的严重程度和/或持续时间；(b)限制或阻止被治疗病症的症状特征的发展；(c)抑制被治疗病症的症状特征的恶化；(d)限制或预防之前患有病症的患者中病症的复发；以及(e)限制或预防之前具有病症症状的患者中症状的复发。
本文使用的疾病或病症的“预防”意指在一段时间中预防病症在对象中出现。例如，如果以预防疾病或病症为目的向对象施用本文所述的C5a抑制剂(例如，抗C5a抗体或其抗原结合片段)，将在至少施用的那天，优选地还在施用之日后的一天或更多天(例如，1至30天；或2至38天；或3至21天；或4至14天；或5至10天)防止所述疾病或病症出现。
本文使用的“施用”包括体内施用以及直接向组织离体施用，例如静脉移植物。
根据本发明的“药物组合物”可以以组合物的形式存在，其中不同的活性成分和稀释剂和/或载体彼此混合，或者可以采取组合的制剂的形式，其中活性成分以部分或完全不同的形式存在。这样的重组或组合的制剂的一个实例是套装(kit-of-parts)。
“有效量”是足以实现预期目的的治疗剂的量。给定治疗剂的有效量将随着因素变化，例如药剂的性质、施用途径、接受治疗剂的对象的大小和物种，以及施用目的。每个个体情况下的有效量可以由技术人员根据本领域中已确定的方法凭经验确定。
本文使用的术语“辅助治疗(adjunctive therapy)”是指其中向患者施用至少两种不同药物的联合治疗。这两种不同药物可以配制成含有这两种药物的一种单个药物组合物。或者，每一种药物可以配制成独立的药物组合物并且分别向患者施用所述药物组合物(例如，在不同时间点和/或通过不同施用途径)。在后一种选择中，所述(至少)两种不同药物可以以套装存在。本公开内容特别涉及利用C5a抑制剂作为用抗病毒剂之抗病毒治疗的辅助治疗的治疗。
本文使用的术语“抗病毒剂”包括但不限于神经氨酸酶抑制剂(例如，经口吸入的扎那米韦或经口的奥司他韦)和病毒特异性抗体。
“可药用”意指经联邦或州政府的管理机构批准或者列举在美国药典或其他通常认可的用于动物，更特别是人的药典中。
本文使用的术语“载体”是指与治疗剂一起施用的稀释剂、助剂、赋形剂或载剂。这样的药物载体可以是无菌液体，例如水和油中的盐水溶液，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当药物组合物经静脉内施用时，盐水溶液是优选的载体。盐水溶液以及葡萄糖和甘油水溶液也可以用作液体载体，特别是用于可注射溶液。合适的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米粉、白垩、硅胶、硬质酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂乳粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。如果需要，组合物还可以包含少量润湿或乳化剂，或pH缓冲剂。这些组合物可以采取溶液剂、混悬剂、乳剂、片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、缓释制剂等形式。组合物可以利用常规粘合剂和载体(如甘油三酯)配制成栓剂。本发明化合物可以配制成中性或盐形式。可药用盐包括利用游离氨基形成的那些，例如来源于盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的那些，以及利用游离羧基形成的那些，例如来源于氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等的那些。合适的药物载体的实例描述在E.W.Martin的"Remington's Pharmaceutical Sciences"中。这样的组合物将包含治疗有效量的化合物(优选纯化形式)以及适量的载体以提供适于向患者施用的形式。制剂应适合于施用方式。
分子生物学、细胞生物学、蛋白质化学和抗体技术领域中通常已知并且经实践的方法充分描述在不断更新的出版物中：“Molecular Cloning:ALaboratory Manual”,(Sambrook等,Cold Spring Harbor)；Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel等编辑,Wiley&Sons)；Current Protocols in Protein Science(J.E.Colligan等编辑,Wiley&Sons)；Current Protocols in Cell Biology(J.S.Bonifacino等,Wiley&Sons)和Current Protocols in Immunology(J.E.Colligan等编辑,Wiley&Sons)。涉及细胞培养和培养基的已知技术描述在“Large Scale MammalianCell Culture(D.Hu等,Curr.Opin.Biotechnol.8:148-153,1997)；“Serum free Media”(K.Kitano,Biotechnol.17:73-106,1991)；和“Suspension Culture of MammalianCells”(J.R.Birch等Bioprocess Technol.10:251-270,1990)中。
发明的实施方案
现在将进一步描述本发明。在以下段落中，更详细地限定了本发明的不同方面。以下限定的每个方面可以与任意其他方面组合，除非明确指出相反情况。特别的，任何被指出为优选或有利的特征可以与任何其他被指出为优选或有利的特征组合。
本发明的第一个方面涉及C5a抑制剂，其用于在患有病毒性肺炎，尤其是HxNx介导的病毒性肺炎的对象中降低病毒载量和/或减轻急性肺损伤(ALI)。
换言之，本发明的第一个方面涉及C5a抑制剂在制备用于在患有病毒性肺炎，尤其是HxNx介导的病毒性肺炎的对象中降低病毒载量和/或减轻急性肺损伤(ALI)之药物组合物中的用途。
再换言之，本发明的第一个方面涉及用于在患有病毒性肺炎，尤其是HxNx介导的病毒性肺炎的对象中降低病毒载量和/或减轻急性肺损伤(ALI)的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗量的C5a抑制剂的步骤。
本发明的第二个方面涉及C5a抑制剂，其用于治疗对象中的肺炎(优选病毒性肺炎，尤其是HxNx介导的病毒性肺炎)，其中所述抑制剂用作单一治疗。
换言之，本发明的第二个方面涉及C5a抑制剂在制备用于治疗对象中的肺炎(优选病毒性肺炎，尤其是HxNx介导的病毒性肺炎)之药物组合物中的用途，其中所述药物组合物用作单一治疗。
再换言之，本发明的第二个方面涉及用于治疗肺炎(优选病毒性肺炎，尤其是HxNx介导的病毒性肺炎)的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用治疗量的C5a抑制剂的步骤，其中所述抑制剂作为单一治疗施用。
本发明的第三个方面涉及C5a抑制剂，其用于治疗对象中的病毒性肺炎，其中所述对象中的所述病毒性肺炎由H7N9病毒引起。
换言之，本发明的第三个方面涉及C5a抑制剂在制备用于治疗对象中的病毒性肺炎之药物组合物中的用途，其中所述对象中的所述病毒性肺炎由H7N9病毒引起。
再换言之，本发明的第三个方面涉及用于治疗病毒性肺炎的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用治疗量的C5a抑制剂的步骤，其中所述对象中的所述病毒性肺炎由H7N9病毒引起。
本发明的第四个方面涉及C5a抑制剂，其用于治疗对象中的肺炎(优选病毒性肺炎，尤其是HxNx介导的病毒性肺炎)，其中所述对象是灵长类动物，优选猿，更优选人。
换言之，本发明的第四个方面涉及C5a抑制剂在制备用于治疗对象中的肺炎(优选病毒性肺炎，尤其是HxNx介导的病毒性肺炎)之药物组合物中的用途，其中所述对象是灵长类动物，优选猿，更优选人。
再换言之，本发明的第四个方面涉及用于治疗肺炎(优选病毒性肺炎，尤其是HxNx介导的病毒性肺炎)的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用治疗量的C5a抑制剂的步骤，其中所述对象是灵长类动物，优选猿，更优选人。
在本发明第二、第三或第四个方面的一个实施方案中，C5a抑制剂用于在患有病毒性肺炎的对象中降低病毒载量和/或减轻急性肺损伤(ALI)，或者换言之，药物组合物用于在患有病毒性肺炎的对象中降低病毒载量和/或减轻急性肺损伤(ALI)，或者再换言之，方法用于在患有病毒性肺炎的对象中降低病毒载量和/或减轻急性肺损伤(ALI)。
在本发明第一、第三或第四个方面的一个实施方案中，C5a抑制剂用作单一治疗，或者换言之，药物组合物用作单一治疗，或者再换言之，C5a抑制作为单一治疗施用。
在本发明第一、第三或第四个方面的另一个实施方案中，C5a抑制剂用于具有抗病毒剂的辅助治疗，或者换言之，药物组合物用于具有抗病毒剂的辅助治疗，或者再换言之，方法还包括向所述对象施用治疗量的抗病毒剂的步骤。适用于这样的辅助治疗的抗病毒剂包括但不限于：神经氨酸酶抑制剂(例如，经口吸入的扎那米韦或经口的奥司他韦)和病毒特异性抗体。
在本发明第一、第二或第四个方面的一个实施方案中，对象中的肺炎由HxNx病毒引起。在一些实施方案中，HxNx病毒选自H1N1、H1N3、H2N2、H3N2、H5N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2、H10N7和H10N8。在本发明第一、第二或第四个方面的一些特定实施方案中，HxNx病毒是H7N9。
在本发明第一、第二或第三个方面的一个实施方案中，对象是灵长类动物，优选猿，更优选人。
本发明还提供了上文限定的四个方面的组合。例如，在一个实施方案中，本发明第一、第二和第三个方面的特征可以组合。在另一个实施方案中，本发明第一、第二和第四个方面的特征可以组合。在另一个实施方案中，本发明第一、第三和第四个方面的特征可以组合。在另一个实施方案中，本发明第二、第三和第四个方面的特征可以组合。在又一个实施方案中，本发明第一、第二、第三和第四个方面的特征可以组合。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一个实施方案中，C5a抑制剂选自：(i)与C5a特异性结合并且抑制C5a与C5aR结合的化合物(结合部分)；以及与(ii)C5aR特异性结合并且抑制C5a与C5aR结合的化合物(结合部分)。与C5a特异性结合的示例性化合物包括C5a抑制肽(C5aIP)和抗C5a抗体，例如WO 2011/063980 A1(也公开为US 2012/0231008A1)中公开的抗C5a抗体。与C5aR特异性结合的示例性化合物包括选择性C5a受体拮抗剂PMX53和CCX168。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一个实施方案中，C5a抑制剂是与人C5a特异性结合的结合部分。在另一个实施方案中，所述结合部分选自：
(a)抗体或其抗原结合片段；
(b)寡核苷酸；
(c)抗体样蛋白质；和
(d)拟肽。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一个实施方案中，结合部分与由人C5a的氨基酸序列NDETCEQRA(SEQ ID NO:2)和SHKDMQL(SEQ ID NO:3)形成的构象表位特异性结合。与由根据SEQ ID NO:2和3的氨基酸序列形成的构象的结合意味着结合部分与根据SEQ ID NO:2的氨基酸序列内的至少一个氨基酸以及根据SEQ ID NO:3的氨基酸序列内的至少一个氨基酸结合。SEQ ID NO:2对应于人C5a的30-38位氨基酸。SEQ ID NO:3对应于人C5a的66-72位氨基酸。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，结合部分与根据DETCEQR(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列内的至少一个氨基酸结合。SEQ ID NO:4对应于人C5a的31-37位氨基酸。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的另一些优选实施方案中，结合部分与根据HKDMQ(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列内的至少一个氨基酸结合，更优选地与氨基酸序列KDM内的至少一个氨基酸结合。SEQ ID NO:5对应于人C5a的67-71位氨基酸；序列KDM对应于人C5a的68-70位氨基酸。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，结合部分与氨基酸序列DETCEQR(SEQ ID NO:4)内的至少一个氨基酸以及氨基酸序列HKDMQ(SEQ ID NO:5)内的至少一个氨基酸结合。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些特别优选实施方案中，结合部分与氨基酸序列DETCEQR(SEQ ID NO:4)内的至少一个氨基酸以及氨基酸序列KDM内的至少一个氨基酸结合。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，形成构象表位的两个序列(例如，根据SEQ ID NO:2和3；SEQ ID NO:4和5；或SEQ ID NO:4和序列KDM的序列对)被不参与和本发明结合部分结合的1-50个连续氨基酸分开。在下文中，这些不参与和本发明结合部分结合的氨基酸被称为“非结合氨基酸”。形成构象表位的两个序列优选地被6-45个连续的非结合氨基酸分开，更优选地被12-40个连续的非结合氨基酸分开，更优选地被18-35个连续的非结合氨基酸分开，更优选地被24-30个连续的非结合氨基酸分开，更优选地被25-29个连续的非结合氨基酸分开，甚至更优选地被26-28个连续的非结合氨基酸分开，并且最优选地被27个连续的非结合氨基酸分开。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，结合部分对于人C5a具有以下Kd值的结合常数：10nM或更小、优选9nM或更小、更优选8nM或更小、更优选7nM或更小、更优选6nM或更小、更优选5nM或更小、更优选4nM或更小、更优选3nM或更小、更优选2nM或更小、以及甚至更优选1nM或更小。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，结合部分与人C5a之间的解离常数Kd为1pM(皮摩尔)至5nM(纳摩尔)、更优选2pM至4nM、更优选5pM至3nM、更优选10pM至2nM、更优选50pM至1nM、更优选100pM至900pM、更优选200pM至800pM、更优选300pM至700pM、以及甚至更优选400pM至600pM。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，对于由一种分子C5a(特别是人C5a)诱导的生物学效应，一个结合部分表现出至少75％阻断活性、优选至少80％阻断活性、更优选至少85％阻断活性、更优选至少90％阻断活性、更优选至少95％阻断活性。这些优选的阻断活性是指这样的实施方案，其中结合部分包含与C5a(特别人C5a)结合的单个互补位。在一些实施方案中，其中结合部分包含两个或更多个C5a特异性互补位，当一个结合部分分子与等于结合部分中存在的C5a特异性互补位数目之数目的C5a分子接触时，实现至少75％、优选至少80％、更优选至少85％等的所述阻断活性。换言之，当本文所述结合部分中的互补位与C5a以等摩尔浓度存在时，结合部分对于由C5a诱导的生物学效应表现出至少75％阻断活性、优选至少80％阻断活性、更优选至少85％阻断活性、更优选至少90％阻断活性、并且更优选地至少95％阻断活性。待阻断的一种优选生物学效应是C5a诱导的由人全血细胞释放的溶菌酶。用于确定这种C5a诱导的溶菌酶释放及其阻断的测定描述在例如WO 2011/063980 A1中。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，结合部分不抑制人血浆中的CH50活性。用于确定CH50活性的测定是技术人员已知的，并且描述在例如WO2011/063980 A1中。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，结合部分不对至少一种C5b诱导的生物学效应表现出阻断活性；优选地结合部分不对任何C5b诱导的生物学效应表现出阻断活性。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，结合部分能够降低人全血中大肠杆菌诱导的IL-8产生。用于测量全血中IL-8产生的测定是技术人员已知的，并且描述在例如WO 2011/063980 A1中。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，结合部分是抗体，所述抗体选自多克隆抗体、单克隆抗体、单价抗体、双特异性抗体、异缀合抗体、多特异性抗体、去免疫化抗体、嵌合抗体、人源化(特别是CDR接枝的)抗体和人抗体。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，结合部分是抗体的抗原结合片段，所述片段选自：Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、二硫化物连接的Fv(dsFv)、单结构域抗体(也称为纳米抗体)和单链Fv(scFv)抗体。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一个实施方案中，结合部分是抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)如SEQ ID NO:6所示的重链CDR3序列；或
(ii)如SEQ ID NO:7所示的重链CDR3序列；
其中所述重链CDR3序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一个实施方案中，结合部分是抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(iii)如SEQ ID NO:8所示的轻链CDR3序列；或
(iv)如SEQ ID NO:9所示的轻链CDR3序列；
其中所述轻链CDR3序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些实施方案中，结合部分是抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)如SEQ ID NO:6所示的重链CDR3序列和如SEQ ID NO:8所示的轻链CDR3序列；或
(ii)如SEQ ID NO:7所示的重链CDR3序列和如SEQ ID NO:9所示的轻链CDR3序列；
其中所述重链CDR3序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加；并且
其中所述轻链CDR3序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一个实施方案中，结合部分是抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含以下序列中的至少一个：
(v)根据SEQ ID NO:10的重链CDR2序列；
(vi)根据SEQ ID NO:11的重链CDR2序列；
(vii)根据SEQ ID NO:12的轻链CDR2序列；
(viii)根据SEQ ID NO:13的轻链CDR2序列；
(ix)根据SEQ ID NO:14的重链CDR1序列；
(x)根据SEQ ID NO:15的重链CDR1序列；
(xi)根据SEQ ID NO:16的轻链CDR1序列；或
(xii)根据SEQ ID NO:17的轻链CDR1序列；
其中所述重链CDR2序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加；
其中所述轻链CDR2序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加；
其中所述重链CDR1序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加；并且
其中所述轻链CDR1序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加。
优选地，根据SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16和SEQ IDNO:17的每个氨基酸序列中上述这些任选变化的总数，即每个序列中交换、缺失和添加的总数，为1或2。
优选地，抗体或其抗原结合片段中存在的所有CDR中之交换、缺失和添加的总数加起来为1至5(例如1、2、3、4或5)。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含下表1中列出的重链CDR3、重链CDR2和重链CDR1序列组中的一个，
其中每个重链CDR3序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加；
其中每个重链CDR2序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加；并且
其中每个重链CDR1序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加：
表1：适用于本发明抗体或其片段的重链CDR序列组
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含下表2中列出的轻链CDR3、轻链CDR2和轻链CDR1序列组中的一个，
其中每个轻链CDR3序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加；
其中每个轻链CDR2序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加；并且
其中每个轻链CDR1序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加：表2：适用于本发明抗体或其片段的轻链CDR序列组
由于抗体IFX-1的CDR2轻链序列(SEQ ID NO:12)与抗体INab708的CDR2轻链序列(SEQ ID NO：13)相同，因此包含SEQ ID NO：13的组相对于包含SEQ ID NO：12的组是多余的。因此，该表仅列出了4组轻链CDR序列。
轻链组的编号 CDR3序列 CDR2序列 CDR1序列
I SEQ ID NO：8 SEQ ID NO：12 SEQ ID NO：16
II SEQ ID NO：8 SEQ ID NO：12 SEQ ID NO：17
III SEQ ID NO：9 SEQ ID NO：12 SEQ ID NO：16
IV SEQ ID NO：9 SEQ ID NO：12 SEQ ID NO：17
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含上表1中列出的重链CDR组A-H中的一个以及上表2中列出的轻链CDR组I-IV中的一个，即下列组的组合中一个：A-I、A-II、A-III、A-IV、B-I、B-II、B-III、B-IV、C-I、C-II、C-III、C-IV、D-I、D-II、D-III、D-IV、E-I、E-II、E-III、E-IV、F-I、F-II、F-III、F-IV、G-I、G-II、G-III、G-IV、H-I、H-II、H-III或H-IV(其中尤其优选组合A-I和H-IV)，
其中每个重链CDR3序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加：
其中每个重链CDR2序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加：
其中每个重链CDR1序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加：
其中每个轻链CDR3序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加：
其中每个轻链CDR2序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加；并且
其中每个轻链CDR1序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含VH结构域，所述VH结构域包含以下，基本上由以下组成或由以下组成：(i)IFX-1的VH结构域，或(ii)INab708的VH结构域。
下表3中示出了限定IFX-1和INab708的VH结构域的FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4序列。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含VL结构域，所述VL结构域包含以下，基本上由以下组成或由以下组成：(i)IFX-1的VL结构域，或(ii)INab708的VL结构域。
下表3中示出了限定IFX-1和INab708的VL结构域的FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4序列。
表3：抗体IFX-1和INab708的CDR和FR序列(Chothia分类模式)
如下文“实施例”部分中将进一步解释的，IFX-1是由德国InflaRx GmbH开发的嵌合人/小鼠单克隆IgG4抗体。IFX-1来源于WO 2011/063980A1中所述的小鼠单克隆抗体INab308。IFX-1与INab308具有相同的重链可变区和相同的轻链可变区。INab708是与INab308和IFX-1靶向基本上相同的构象表位的小鼠单克隆抗体，也描述在WO 2011/063980A1中。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的另一些优选实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含VH结构域和VL结构域，其中
(i)所述VH结构域包含IFX-1的VH结构域、基本上由其组成或由其组成，并且所述VL结构域包含IFX-1的VL结构域、基本上由其组成或由其组成；或者
(ii)所述VH结构域包含INab708的VH结构域、基本上由其组成或由其组成，并且所述VL结构域包含INab708的VL结构域、基本上由其组成或由其组成。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些优选实施方案中，包含本文所述一个或更多个CDR、CDR的组或者CDR组之组合的抗体或其抗原结合片段包含人抗体框架中的所述CDR。
本文提到抗体对于其重链包含特定链、或者特定区域或序列时优选地涉及其中所述抗体的所有重链包含所述特定链、区域或序列的情况。这相应地适用于抗体的轻链。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些实施方案中，结合部分是寡核苷酸。在这些实施方案中，还优选的是寡核苷酸是核酸适配体，例如DNA适配体或RNA适配体或者包含DNA核苷酸和RNA核苷酸的混合适配体。在一些实施方案中，一个或更多个核苷酸可以被经修饰的核苷酸(例如2’-氟取代的嘧啶)替代。核酸适配体还可与荧光报告分子、亲和标签和/或大分子缀合。例如，适配体与聚乙二醇(PEG)或者与相当的大分子缀合将提高适配体的生物半衰期。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些实施方案中，结合部分是抗体样蛋白质，例如上文在“定义”部分中示例的抗体样蛋白质。
在本发明第一、第二、第三或第四个方面的一些实施方案中，结合部分是拟肽。适合于实施本发明的拟肽优选地基于上述抗体样蛋白质。
本文对于特定核酸和氨基酸序列(例如，序列表中示出的那些)给出的教导应这样解释，以使得还涉及所述特定序列的修饰，从而得到在功能上与所述特定序列等同的序列，例如与特定氨基酸序列表现出相同或类似特性的氨基酸序列，以及编码与由特定核酸序列编码的氨基酸序列表现出相同或类似特性之氨基酸序列的核酸序列。一种重要的特性是保持抗体与其靶标的结合或者维持抗体的效应物功能。优选地，对于特定序列的序列修饰，当其替代抗体中的特定序列时，保持了所述抗体与C5a，特别是与本文鉴定的C5a的构象表位的结合，并且优选地保持了本文所述的所述抗体功能，例如阻断C5a诱导的从人全血细胞释放溶菌酶和/或降低人全血中大肠杆菌诱导的IL-8产生。
本领域技术人员将理解，特别地，CDR高变区和可变区的序列可以被修饰而不丧失结合C5a的能力。例如，CDR区域与本文指定的区域相同或高度同源。通过“高度同源”，预期CDR中可能进行了1至5个、优选地1至4个、例如1至3个或者1或2个交换(特别是保守交换)、缺失和/或添加。此外，高变区和可变区可以被修饰，以使得其与本文特别公开的区域表现出实质同源性。
另外，根据本发明，可能期望的是修饰本文所述的氨基酸序列，特别是人重链恒定区的那些，以使序列适于期望的同种异型，例如高加索人群(Caucasian population)或华人人群(Chinese population)中发现的同种异型。
本发明还包括这样的抗体，其中在Fc区域中进行改变以改变抗体的功能或药代动力学特性。这样的改变可能导致C1q结合和CDC或者FcγR结合和ADCC(抗体依赖性细胞毒性)的降低或提高。例如，可以对重链恒定区的一个或更多个氨基酸残基进行替换，从而引起效应物功能的改变，同时与经修饰的抗体相比保持与抗原结合的能力，参见美国专利No.5,624,821和美国专利No.5,648,260。
通过对Ig恒定结构域或Ig样恒定结构域的补救受体表位进行修饰以使得分子不包含完整CH2结构域或完整Ig Fc区域，可以改善抗体的体内半衰期，参见美国专利No.6,121,022和美国专利No.6,194,551。通过在Fc区中进行突变，例如通过将第252位的苏氨酸替换成亮氨酸，通过将第254位的苏氨酸替换成丝氨酸，或者通过将第256位的苏氨酸替换成苯丙氨酸，可以进一步提高体内半衰期，参见美国专利No.6,277,375。
此外，可以对抗体的糖基化模式进行修饰以改变抗体的效应物功能。例如，可以在转染瘤中表达抗体，其不添加通常连接在Fc区域第297位的Asn的岩藻糖单位，以提高Fc区域对于Fc受体的亲和力，这继而导致在NK细胞的存在下抗体的ADCC(抗体依赖性细胞毒性)提高，参见Shield等(2002)J.Biol.Chem.,277:26733-40。另外，可以进行半乳糖基化修饰以改变CDC(补体依赖性细胞毒性)。
或者，在另一个实施方案中，可以沿着抗C5a抗体编码序列的全部或一部分随机引入突变，例如通过饱和诱变，并且可以筛选所得经修饰的抗C5a抗体的结合活性。
在本发明任何方面的实践中，可以通过本领域中建立的在患者中提供足够水平之C5a抑制剂的任何途径向患者施用本文所述药物组合物或C5a抑制剂(例如，本文所述与C5a，尤其是与hC5a特异性结合的结合部分)。可以全身性施用或局部施用。这样的施用可以是胃肠外、经黏膜，例如经口、鼻、直肠、阴道内、舌下、黏膜下、经皮或通过吸入。优选地，施用是胃肠外，例如通过静脉内或腹膜内注射，并且还包括但不限于动脉内、肌内、皮内和皮下施用。如果本发明的药物组合物经局部施用，其可以直接注射到待治疗器官或组织中。
适于经口施用的药物组合物可如下提供：作为胶囊剂或片剂；作为散剂或颗粒剂；作为溶液剂、糖浆剂或混悬剂(在水性或非水性液体中)；作为可食用泡沫(foam)或甜点(whip)；或者作为乳剂。片剂或硬明胶胶囊剂可以包含乳糖、淀粉或其衍生物、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁、硬脂酸或其盐。软明胶胶囊剂可以包含植物油、蜡、脂肪、半固体或液体多元醇等。溶液剂和糖浆剂可以包含水、多元醇和糖。
旨在用于经口施用的活性剂可以用延迟活性剂在胃肠道中崩解和/或吸收的材料(例如，可以使用单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯)包衣或混合。因此，可以实现活性剂数小时的缓释，并且如果需要，可以保护活性剂在胃中不被降解。用于经口施用的药物组合物可以配制成有助于活性剂由于特定pH或酶促条件而在特定胃肠道位置释放。
适于经皮施用的药物组合物可以作为离散贴剂提供，旨在保持与接受者的表皮紧密接触延长的时间段。适于表面施用的药物组合物可以作为软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、散剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂提供。对于皮肤、口腔、眼或其他外部组织的表面施用，优选使用表面软膏剂或乳膏剂。当配制成软膏剂时，活性成分可以与石蜡或水混溶性软膏基质一起使用。或者，活性成分可以利用水包油基质或油包水基质配制成乳膏剂。适于向眼表面施用的药物组合物包括滴眼剂。在这些实施方案中，活性成分可以溶解或混悬在合适的载体中，例如水溶剂中。适于在口腔中表面施用的药物组合物包括锭剂、软锭剂和漱口水。
适于经鼻施用的药物组合物可以包含固体载体，例如粉末(优选具有粒径为20至500微米的粉末)。粉末可以以使用鼻吸药(snuff)的方式施用，即，从靠近鼻的容纳粉末的容器中经过鼻迅速吸入。或者，适于经鼻施用的组合物可以包含液体载体，例如喷鼻剂或滴鼻剂。这些组合物可以包含活性成分的水或油溶液。用于通过吸入施用的组合物可以在特别适用的装置中提供，所述装置包括但不限于增压喷雾器、雾化器或吹入器，其可以经构建以提供预定剂量的活性成分。在一个优选实施方案中，本发明的药物组合物通过鼻腔向肺施用。
适于胃肠外施用的药物组合物包括水性和非水性无菌可注射溶液剂或混悬剂，其可以包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂以及赋予组合物与预期接受者的血液基本上等张的溶质。这样的组合物中可以存在的其他组分包括例如水、醇、多元醇、甘油和植物油。适于胃肠外施用的组合物可以存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶中，并且可以储存在冷冻干燥(冻干)条件下，仅需要在临使用前添加无菌液体载体，例如注射用无菌盐水溶液。临时注射溶液和混悬液可以由无菌粉末、颗粒和片剂制备。
在一个优选实施方案中，根据常规程序将组合物配制成适于向人类静脉内施用的药物组合物。通常，用于静脉内施用的组合物是无菌等张水性缓冲液中的溶液。必要时，组合物还可以包含增溶剂和局部麻醉剂如利多卡因，以减轻注射部位的疼痛。通常，成分单独提供或者在单位剂型中混合在一起，例如，作为指出活性剂的量的气密密封容器(例如，安瓿或小药囊(sachette))中干燥的冻干粉末或者无水浓缩物。当组合物待通过输注施用时，可以用含有无菌药物级水或盐水的输液瓶将其分散。当组合物通过注射施用时，可以提供无菌盐水的安瓿以使得成分在施用前混合。
在另一个实施方案中，例如，药物如本文所述的C5a抑制剂可以在控释系统中递送。例如，可以使用静脉内输注、可植入式渗透泵、经皮贴剂、脂质体或其他施用方式来施用抑制剂。在一个实施方案中，可以使用泵(参见，Sefton(1987)CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.14:201-240；Buchwald等(1980)Surgery 88:507-516；Saudek等(1989)N.Eng.J.Med.321:574-579)。在另一个实施方案中，化合物可以在囊泡，特别是在脂质体中递送(参见R.Langer(1990)Science 249:1527-1533；Treat等(1989)于Liposomesin the Therapy of Infectious Disease and Cancer,Lopez-Berestein和Fidler(编辑),Liss,N.Y.,353-365；WO 91/04014；U.S.4,704,355)。在另一个实施方案中，可以使用聚合物材料(参见，Medical Applications of Controlled Release(1974)Langer和Wise(编辑),CRC Press:Boca Raton,Fla.；Controlled Drug Bioavailability,Drug ProductDesign and Performance,(1984)Smolen和Ball(编辑),Wiley:N.Y.；Ranger和Peppas(1953)J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61；还参见Levy等(1985)Science 228:190；During等(1989)Ann.Neurol.25:351；Howard等(1989)J.Neurosurg.71:105)。
在另一个实施方案中，控释系统可以放置在治疗靶标(即，靶细胞、组织或器官)附近，因此仅需要全身剂量的一部分(参见，例如Goodson(1984)115-138于MedicalApplications of Controlled Release,vol.2)。其他控释系统在Langer(1990,Science249:1527-1533)的综述中讨论。
在一个特定实施方案中，可能期望向需要治疗的区域局部施用本发明的药物组合物或C5a抑制剂；这可以通过例如但不限于以下手段实现：在手术期间局部输注、表面施加(例如在手术后与伤口敷料一起)、通过注射、通过导管、通过栓剂、或通过植入物，所述植入物是多孔的、无孔的或者凝胶状材料，包括膜(例如硅橡胶膜)或纤维。
技术人员将在考虑多种因素后确定优选有效剂量的选择，所述因素是本领域普通技术人员已知的。这样的因素包括药物组合物的特定形式，例如肽或载体(vector)，及其药代动力学参数，例如生物利用度、代谢、半衰期等，其在获得管理部门对药物化合物的批准时通常使用的常规开发程序中已经确定。考虑剂量时的其他因素包括待预防和/或治疗的病症或疾病或者正常个体中待实现的益处，患者的体重，患者年龄，施用途径，施用是急性还是长期，伴随药物，以及公知影响所施用药剂效力的其他因素。因此，将根据从业者的判断和每个患者的情况(例如基于个体患者的病症和免疫状态)，并且根据标准临床技术确定精确剂量。
实施例
1.材料和方法
1.1伦理学声明
涉及动物的所有程序都经军事医学科学院微生物流行病研究所IACUC，病原体和生物安全国家重点实验室，实验动物中心(Laboratory Animal Center,State KeyLaboratory of Pathogen and Biosecurity,Beijing Institute of Microbiology andEpidemiology IACUC’s)的批准(批准号BIME 2013-15)。动物研究严格按照实验动物护理和使用指南的建议进行。
1.2H7N9病毒感染的非洲绿猴模型
本研究使用12只2-4岁大的成年非洲绿猴(African Green Monkey，AGM)，操作活病毒以及具有潜在的活病毒污染的生物样品的所有实验在生物安全水平3实验室中进行。在通过腹膜内(i.p.)注射氯胺酮(5mg/kg)麻醉后，向10只AGM气管内接种A/Anhui/1/2013(H7N9)病毒(106TCID50)，2只AGM气管内接种相同体积的PBS作为阴性对照。接种病毒的10只AGM中的4只在病毒接种后30分钟用静脉内抗C5a单克隆抗体(IFX-1；5mg/kg)治疗(H7N9+抗C5a Ab组)。10只AGM中的6只用PBS作为对照治疗(H7N9+PBS组)。分别在感染后第3天和第7天收集来自H7N9+PBS组的3只猴的样品和来自H7N9+抗C5a抗体组的2只猴的样品。在第3天收集正常对照的样品。在第0、1、3、5、7天从所有动物收集肝素血浆和血清并且储存在-70℃直至分析，用于评估补体激活产物或细胞因子的水平。
在感染后3天通过在氯胺酮麻醉下放血对动物实施安乐死。麻醉后，监测AGM的体温，采集鼻和咽拭子并且放置在补充有100IU青霉素/ml和100μg链霉素/ml的1ml Dulbecco改进Eagle培养基中。拭子储存在-70℃，直至进行TCID50分析。根据标准方案进行尸体剖检。对于宏观病理学(gross pathology)的半定量评估，通过每个肺叶中固结和暗红色变色的面积计算每个肺叶尸体剖检时受影响的肺组织的百分比，以确定宏观病理学得分。对于逆转录(RT)-PCR，样品储存在4℃的RNA储存液(Tiangen Biotech Co.,Ltd)中过夜，然后储存在-70℃直至进行RT-PCR分析。对于组织病理学研究，将气管，来自前叶、中叶和后叶的肺组织，肝、脾、肾、肠、脑和淋巴结混悬在10％中性缓冲的福尔马林中过夜并且包埋在石蜡中，切成4μm并且用苏木精和伊红(H&E)染色用于免疫组织化学。
1.3肺损伤的组织病理学分析
收集肺并且以标准程序从肺的前叶、中叶和后叶取样。用苏木精和伊红(H&E)对4μm厚的切片染色并且通过光学显微术检查。根据变性上皮和黏膜下膜中炎性细胞浸润的程度评估气管和支气管损伤。根据变性上皮、肺泡肺细胞的退化和坏死、炎性细胞的浸润和实质壁的扩张、出血和间质性水肿分析实质的损伤(Sun,S.等2011,Am J Respir Cell MolBiol；18:834–842)。退化或炎症的尺寸和严重性的累积得分提供了每只动物的总得分，取平均值作为该组的总得分。
1.4巨噬细胞和嗜中性粒细胞的免疫组织化学染色
将福尔马林固定、石蜡包埋的肺切片用二甲苯脱石蜡并且使用分级醇水合。使用以下抗体评估巨噬细胞、嗜中性粒细胞和T淋巴细胞的浸润：CD68和髓过氧化物酶(MPO)(北京中山生物技术有限公司，中国，Beijing Zhongshan Biotechnology Co.,Ltd.,China)。使用标准链霉亲和素-生物素检测系统(北京中山生物技术有限公司，中国)根据制造商的说明书检测抗体。
对于巨噬细胞和嗜中性粒细胞浸润的半定量评估，以盲性方式通过光学显微术检查每个肺切片中肺实质的30-50个任意选择的40×物镜视野中巨噬细胞或嗜中性粒细胞的存在。每只动物的累积得分表示为每100个视野中阳性视野的数目(％)(Sun,S.2013,同上)。
1.5IFX-1浓度的测量和CD11b测定
通过德国InflaRx GmbH提供的标准酶联免疫吸附测定(ELISA)测量猴血浆样品中的IFX-1水平。使用CD11b测定评估人和猴中IFX-1的阻断效率。简言之，用血浆或酵母聚糖活化的血浆(zymosan-activated plasma，ZAP；含内源C5a–eC5a)刺激人或猴血液。在没有抗体和eC5a的任何预孵育的情况下，将不同浓度的IFX-1和对照人IgG4抗体(Sigma,WI,USA)添加到测定中以确定IFX-1阻断活性，并且通过德国InflaRx GmbH提供的ELISA试剂盒测量eC5a水平。刺激后，添加抗小鼠CD11b:FITC或同种型对照mAb(BD Bioscience,NJ,USA)并且孵育。在红细胞裂解步骤之后立即通过BD FACSCantoTM II流式细胞仪分析设门(gate)的粒细胞上的CD11b表达。使用FITC标记的粒细胞的平均荧光强度(MFI)检查CD11b表达的水平。
1.6血浆中炎性细胞因子和C3a、C5a、C5b-9的测量
在指定时间点收集被感染的AGM的血清或血浆样品并在测量前储存在-70℃。使用来自U-CyTech biosciences或Uscn life science Inc.的猴ELISA试剂盒测量IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α、MCP-1和IP-10的细胞因子水平。使用来自BD biosciences的人ELISA试剂盒测量C3a和C5b-9水平，并且由德国耶拿的InflaRx GmbH提供C5a ELISA。简言之，将100μl稀释的AGM血清或血浆添加至预包被有对各AGM细胞因子MPO、C3a、C5a和C5b-9具有特异性之抗体的板，并且在4℃孵育过夜。在洗涤后，添加酶联特异性抗体并且在37℃下孵育1小时。洗涤板后，添加底物溶液并且在37℃下孵育30分钟。使用TMB对测定进行显色，并且通过添加1N H2SO4终止反应。通过ELISA读板器(Synergy 2,Bio Tek)测量450nm处的吸光度，并且通过测量中获得的标准曲线确定AGM细胞因子或C3a、C5a和C5b-9的量。
1.7C3aR mRNA、C5aR mRNA和MASP2表达的检测
从AGM的前叶、中叶和后叶的肺组织中分离总RNA并且进行相对定量实时RT-PCR。使用2-△△C T法(Livak,K.J.&Schmittgen T.D.2001.Methods 25:402-408)分析相对C3aR、C5aR和甘露糖结合蛋白相关丝氨酸蛋白酶2(mannose-binding protein-associatedserine protease 2MASP2)表达的数据。
1.8组织中的病毒效价
在指定时间分别从每个被感染的AGM收获右肺和左肺的来自前叶、中叶和后叶的六个肺组织部分样品以及小支气管，并且在最小必需培养基(MEM)加抗生素中使用OMNIBEAD RUPTOR 24组织研磨机(OMNI International,INC.)均化，以得到10％(w/v)混悬液。如所述(Zhao,G.等2010.Virology Journal,7:151-156)通过50％组织培养感染剂量(TCID50)确定组织中的病毒效价。简言之，一式四份地用AGM器官均浆的十倍系列稀释物接种单层MDCK细胞。孵育后2小时，除去上清液并且替换成MEM加抗生素和2μg/ml TPCK-胰蛋白酶(Sigma)。在观察病毒致细胞病变效应(cytopathic effect，CPE)3天后，使用0.5％火鸡红细胞通过血细胞凝集活性指示细胞的感染。通过Reed和Muench方法计算组织病毒效价并且表示为Log10TCID50/g组织。
1.9统计学分析
学生t检验和Welch校正用于RT-PCR分析、半定量组织病理学分析、肺病毒效价检测以及巨噬细胞和嗜中性粒细胞计数的半定量分析中数据的比较。使用单因素ANOVA和Dunnett事后检验比较C3a、C5a和C5b-9的血浆浓度以及IFX-1对于人eC5a的阻断活性的数据。使用双因素ANOVA和Bonferroni事后检验比较指定时间点的组间温度变化以及炎性细胞因子和趋化因子的差异。小于0.05的P值被认为是统计学显著的。数据表示为平均值±s.e.m.。所有分析在Graphpad Prism 5.01版本中进行。
2.结果
2.1IFX-1及其生物学活性
IFX-1是由德国InflaRx GmbH开发的嵌合人/小鼠单克隆IgG4抗体。所述抗体是由CHO(中国仓鼠卵巢)细胞系产生的IgG4κ抗体，并由鼠重链和κ轻链可变(VH和VL)区和人γ4重链和κ轻链恒定区组成。如InflaRx GmbH公开的，已经在猴毒理学研究和人I期试验中测试了IFX-1，并且证明了用于进一步临床试验的良好安全特性。
使用来自8个不同供体的人ZAP样品产生的内源C5a(eC5a)通过CD11b测定测试了IFX-1阻断活性。如图1A中所示，在0.5:1的Ab:Ag摩尔比下，IFX-1使人粒细胞上的CD11b表达显著降低超过80％。当应用1:1和2:1的Ab:Ag比时，IFX-1对eC5a诱导的CD11b上调的阻断活性达到多至98％。
还使用猴ZAP和猴全血通过ZAP-CD11b测定测试了对猴C5a的阻断活性。IFX-1能够100％阻断猴粒细胞上ZAP驱动的CD11b上调(图1B)，表明IFX-1是猴eC5a的全功能阻断抗体。
在H7N9病毒感染的猴模型中，静脉内施加5mg/kg剂量的IFX-1以治疗四只被感染的猴，然后通过药代动力学测定监测其水平。治疗后1天，在4只经治疗的猴中发现约40μg/ml的IFX-1，在第7天时在留下的两只猴中IFX-1的水平降低至约10μg/ml(图1C)。这些数据表明，IFX-1对于阻断猴eC5a是全功能的并且治疗所施加的剂量在该模型中是足够的。
2.2H7N9病毒感染的非洲绿猴(AGM)中的发病机理
为了探究H7N9病毒的发病机理以及对于病毒感染的宿主免疫应答，用H7N9病毒(AH1/H7N9)感染8只AGM，并用模拟物处理两只AGM。在第3天对三只动物实施安乐死，在第7天对另外三只动物实施安乐死，剩下两只动物在感染后第14天实施安乐死。从H7N9病毒感染的AGM取得肺、气管、心脏、肝、肾、脾、脑和肠并且均化以用于病毒分离。在感染后第3天，可以从肺和气管中分离到病毒，但是不能从其他组织均浆中分离到病毒(表4)。在第7天和第14天，没有从任何收集的组织分离到病毒。在感染后7天，检测AGM血清血细胞凝集抑制(HI)效价，并且在第14天时HI效价为1:80至1:160(表4)。病毒学和血清学测试证明，H7N9病毒有效地感染AGM。
表4.组织病毒分离和血清HI效价
在进一步显微观察(数据未示出)中，在H7N9病毒感染后第3天观察到肺的峰值损伤，并且随后逐渐恢复。在第3天，当与用PBS接种的对照组比较时，在感染的肺中观察到多灶性气管-支气管淋巴炎(brochoadenitis)，其特征在于变性上皮以及气管粘膜下膜中的淋巴细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和偶尔嗜酸性粒细胞的中度浸润。H7N9病毒感染的肺中发现的损伤是急性渗出性弥散性肺损伤，其特征在于细支气管和末端细支气管中变性和萎缩的上皮，弥散的和增厚的肺泡隔膜以及淋巴细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞的浸润，变性和萎缩的肺细胞，以及肺间质中的多灶性出血、渗出物和严重水肿。内皮变性，并且具有大量炎性细胞粘附和受损的基底膜。亚显微结构观察示出变性的肺上皮细胞，以及肿胀的线粒体和变性的内质网，受损的血气屏障和细胞碎片脱落至肺泡空间，以及间质水肿中的炎性细胞浸润(数据未示出)。
在包括脑、心脏、肠、脾和肾的所有其他检测的器官中，脾是H7N9病毒感染后唯一表现出一定水平的组织病理学变化的器官，具有脾的红髓和动脉套囊(artery cuff)中中度升高的巨噬细胞数目以及红髓中的充血和病灶性出血(数据未示出)。在其他器官如脑、肠和肾中未发现损伤。2.3H7N9病毒感染后肺中的补体激活
尽管补体激活在防御病原体入侵中具有关键作用，但是累积的研究表明过量的补体激活与多种自身免疫和炎性疾病有关(Klos,A.等2009,同上)。在本研究中，实时RT-PCR分析表明，在H7N9病毒感染的第1天，C3aR、C5aR和MASP2表达的转录水平显著上调(图2A、B和C)。此外，来自AGM的血浆样品中主要补体激活产物C3a、C5a和C5b-9水平在H7N9病毒感染后显著升高。C3a和C5b-9在1至5天的所有时间点保持高水平，而C5a水平在第1天和第3天时显著提高，在第5天时返回到接近背景水平(图2D、E和F)。此外，在H7N9病毒感染后通过免疫组织化学染色证明了，肺切片中，尤其是具有严重炎症的细支气管上皮和组织中C3aR和C5aR的蛋白质表达增加(数据未示出)。补体激活的另一个指示C3c染色也表现为在H7N9病毒感染后3天AGM肺中的沉积增加(数据未示出)。这些数据表明，H7N9感染后补体系统在循环和肺中被广泛激活。
2.4抗C5a抗体治疗减轻H7N9病毒感染诱导的ALI的临床征兆
为了研究补体激活在H7N9病毒感染诱导的肺损伤之发病机理中的作用，在病毒感染后立即将抗C5a抗体IFX-1(5mg/kg)静脉内注射到感染的AGM中。宏观病理学表明AGM的被感染的肺表现出多灶性固结和暗红色脱色，其在肺的背表面最普遍，而来自抗C5a治疗的被感染AGM的肺表现出几乎正常的外观，只有很小的暗红色脱色(数据未示出)。组织病理学分析证明，所有被感染的AGM发生一定程度的肺损伤和轻微或多灶性支气管间质肺炎。然而，在来自抗C5a治疗的被感染AGM的肺中，肺病理学明显改善。在感染后第3天，未治疗的AGM表现出大的多灶性肺损伤，以及细支气管上皮细胞脱落、肺泡上皮变性和坏死、大量间质水肿、多灶性出血和强炎性浸润，而在抗C5a治疗的被感染AGM中存在轻度至中度的实质壁扩大，以及减少的间质水肿、数目少得多的炎性细胞浸润和明显较低程度的肺损伤(数据未示出)。尽管在治疗组和未治疗组二者中第7天的肺损伤似乎比第3天时的更轻，但是与第7天的经治疗AGM相比，未治疗的AGM中细支气管上皮细胞和肺细胞的变性、间质(尤其是血管周围)的水肿更严重(数据未示出)。感染后3天获得的AGM肺的半定量组织学分析表明，IFX-1治疗使肺组织病理学损伤得分显著降低(图3A)。
与未治疗的AGM相比，IFX-1抗体治疗的AGM在H7N9病毒感染后表现出更小的体温波动(图3B)。出乎意料地，均化的肺组织中病毒效价的结果表明，经治疗AGM中的平均肺病毒效价比未治疗AGM中的低约1.8log(p＜0.01)(图3C)，这表明在抗C5a抗体治疗后病毒复制某种程度的降低。
2.5抗C5a抗体治疗降低了AGM中H7N9病毒感染引起的炎性应答
为了进一步确定补体激活对于AGM中H7N9病毒感染引起的炎性应答的作用，在具有或不具有IFX-1抗体治疗的H7N9病毒感染的AGM中评估炎性细胞因子和趋化因子以及巨噬细胞和嗜中性粒细胞的浸润。如图4所示，本研究中研究的所有炎性介质在感染后均显著升高。IL-1β、IP-10和MCP-1早在感染后1天就达到峰值表达，而IL-6、TNF-ɑ和IFN-γ在第3天表现出峰值表达，所有介质的水平在第5天下降。这些炎性介质的整体表达水平在抗C5a治疗的猴中似乎被显著抑制。
通过在感染后第3天制备的AGM肺组织切片中CD68和MPO表达的免疫组织化学染色测量巨噬细胞和嗜中性粒细胞的浸润(数据未示出)。数据表明在感染的肺中嗜中性粒细胞和巨噬细胞二者均明显增加，并且浸润程度与肺损伤正相关。然而，与未治疗的AGM相比，IFX-1治疗的猴的肺中炎性浸润物尤其是嗜中性粒细胞的数目显著降低(图4G、H)。总之，该数据确认了抗5a治疗对于H7N9病毒感染引起的ALI和全身炎症具有有效的治疗作用。
序列表自由文本信息
SEQ ID NO:6IFX-1 CDR3重链
SEQ ID NO:7INab708 CDR3重链
SEQ ID NO:8IFX-1 CDR3轻链
SEQ ID NO:9INab708 CDR3轻链
SEQ ID NO:10IFX-1 CDR2重链
SEQ ID NO:11INab708 CDR2重链
SEQ ID NO:12IFX-1 CDR2轻链
SEQ ID NO:13INab708 CDR2轻链
SEQ ID NO:14IFX-1 CDR1重链
SEQ ID NO:15INab708 CDR1重链
SEQ ID NO:16IFX-1 CDR1轻链
SEQ ID NO:17INab708 CDR1轻链
SEQ ID NO:18IFX-1 FR1重链
SEQ ID NO:19IFX-1 FR2重链
SEQ ID NO:20IFX-1 FR3重链
SEQ ID NO:21IFX-1 FR4重链
SEQ ID NO:22IFX-1 FR1轻链
SEQ ID NO:23IFX-1 FR2轻链
SEQ ID NO:24IFX-1 FR3轻链
SEQ ID NO:25IFX-1 FR4轻链
SEQ ID NO:26INab708 FR1重链
SEQ ID NO:27INab708 FR2重链
SEQ ID NO:28INab708 FR3重链
SEQ ID NO:29INab708 FR4重链
SEQ ID NO:30INab708 FR1轻链
SEQ ID NO:31 INab708 FR2轻链
SEQ ID NO:32 INab708 FR3轻链
SEQ ID NO:33 INab708 FR4轻链
本申请母案的原始权利要求在此作为说明书的一部分并入本文。
1.C5a抑制剂，其用于在患有病毒性肺炎的对象中降低病毒载量和/或减轻急性肺损伤(ALI)，
其中所述C5a抑制剂是与人C5a特异性结合的结合部分，其中所述结合部分选自：
(a)抗体或其抗原结合片段；
(b)寡核苷酸；
(c)抗体样蛋白质；和
(d)拟肽。
2.C5a抑制剂，其用于治疗对象中的肺炎(优选病毒性肺炎)，其中所述抑制剂用作单一治疗。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的C5a抑制剂，其中所述对象中的所述肺炎由HxNx病毒引起。
4.根据权利要求3所述的C5a抑制剂，其中所述HxNx病毒选自H1N1、H1N3、H2N2、H3N2、H5N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2、H10N7和H10N8。
5.C5a抑制剂，其用于治疗对象中的病毒性肺炎，其中所述对象中的所述病毒性肺炎由H7N9病毒引起。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的C5a抑制剂，其中所述对象是灵长类动物，优选猿，更优选人。
7.C5a抑制剂，其用于治疗对象中的肺炎(优选病毒性肺炎)，其中所述对象是灵长类动物，优选猿，更优选人。
8.根据权利要求7所述的C5a抑制剂，其中所述对象中的所述肺炎由HxNx病毒引起。
9.根据权利要求8所述的C5a抑制剂，其中所述HxNx病毒选自H1N1、H1N3、H2N2、H3N2、H5N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2、H10N7和H10N8。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的C5a抑制剂，
其中所述结合部分与由人C5a的氨基酸序列NDETCEORA(SEQ ID NO:2)和SHKDMQL(SEQ ID NO:3)形成的构象表位特异性结合，并且
其中所述结合部分与根据SEQ ID NO:2的氨基酸序列内的至少一个氨基酸以及根据SEQ ID NO:3的氨基酸序列内的至少一个氨基酸结合。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的C5a抑制剂，其中所述结合部分是抗体或其抗原结合片段，
其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)如SEQ ID NO:6所示的重链CDR3序列；或
(ii)如SEQ ID NO:7所示的重链CDR3序列；
其中所述重链CDR3序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的C5a抑制剂，其中所述结合部分是抗体或其抗原结合片段，
其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(iii)如SEQ ID NO:8所示的轻链CDR3序列；或
(iv)如SEQ ID NO:9所示的轻链CDR3序列；
其中所述轻链CDR3序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的C5a抑制剂，其中所述结合部分是抗体或其抗原结合片段，
其中所述抗体或其抗原结合片段包含以下序列中的至少一个：
(v)根据SEQ ID NO:10的重链CDR2序列；
(vi)根据SEQ ID NO:11的重链CDR2序列；
(vii)根据SEQ ID NO:12的轻链CDR2序列；
(viii)根据SEQ ID NO:13的轻链CDR2序列；
(ix)根据SEQ ID NO:14的重链CDR1序列；
(x)根据SEQ ID NO:15的重链CDR1序列；
(xi)根据SEQ ID NO:16的轻链CDR1序列；或
(xii)根据SEQ ID NO:17的轻链CDR1序列；
其中所述重链CDR2序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加；
其中所述轻链CDR2序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加；
其中所述重链CDR1序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加；并且
其中所述轻链CDR1序列任选地包含1、2或3个氨基酸交换，优选保守氨基酸交换，1、2或3个氨基酸缺失，和/或1、2或3个氨基酸添加。

Claims (9)

1.C5a抑制剂在制备用于在患有病毒性肺炎的对象中降低病毒载量的药物中的用途，
其中所述C5a抑制剂是特异性结合人C5a的结合部分，
其中所述结合部分是抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
根据SEQ ID NO:14的重链CDR1序列、根据SEQ ID NO:10的重链CDR2序列、根据SEQ IDNO:6的重链CDR3序列；根据SEQ ID NO:16的轻链CDR1序列、根据SEQ ID NO:12的轻链CDR2序列和根据SEQ ID NO:8的轻链CDR3序列。
2.根据权利要求1所述的C5a抑制剂在制备用于在患有病毒性肺炎的对象中降低病毒载量的药物中的用途，其中所述抑制剂用作单一治疗。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的用途，其中所述对象中的肺炎是由HxNx病毒引起的。
4.根据权利要求3所述的用途，其中所述HxNx病毒选自H1N1、H1N3、H2N2、H3N2、H5N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2、H10N7和H10N8。
5.根据权利要求1所述的C5a抑制剂在制备用于在患有病毒性肺炎的对象中降低病毒载量的药物中的用途，其中所述对象的病毒性肺炎是由H7N9病毒引起的。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的用途，其中所述对象是灵长类动物，优选猿，更优选人。
7.根据权利要求1所述的C5a抑制剂在制备用于在患有病毒性肺炎的对象中降低病毒载量的药物中的用途，其中所述对象是灵长类动物，优选猿，更优选人。
8.根据权利要求7所述的用途，其中所述对象的肺炎是由HxNx病毒引起的。
9.根据权利要求8所述的用途，其中所述HxNx病毒选自H1N1、H1N3、H2N2、H3N2、H5N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2、H10N7和H10N8。
CN202310453303.8A 2014-03-20 2015-03-20 用于治疗病毒性肺炎的C5a抑制剂 Pending CN116785426A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14160947.9 2014-03-20
EP14160947 2014-03-20
PCT/EP2015/055947 WO2015140304A1 (en) 2014-03-20 2015-03-20 Inhibitors of c5a for the treatment of viral pneumonia
CN201580014552.0A CN106132982A (zh) 2014-03-20 2015-03-20 用于治疗病毒性肺炎的C5a抑制剂

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580014552.0A Division CN106132982A (zh) 2014-03-20 2015-03-20 用于治疗病毒性肺炎的C5a抑制剂

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116785426A true CN116785426A (zh) 2023-09-22

Family

ID=50342223

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580014552.0A Pending CN106132982A (zh) 2014-03-20 2015-03-20 用于治疗病毒性肺炎的C5a抑制剂
CN202310453303.8A Pending CN116785426A (zh) 2014-03-20 2015-03-20 用于治疗病毒性肺炎的C5a抑制剂

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580014552.0A Pending CN106132982A (zh) 2014-03-20 2015-03-20 用于治疗病毒性肺炎的C5a抑制剂

Country Status (15)

Country Link
US (2) US10227397B2 (zh)
EP (1) EP3119802B1 (zh)
JP (2) JP6718379B2 (zh)
KR (1) KR20160127042A (zh)
CN (2) CN106132982A (zh)
AU (1) AU2015233380A1 (zh)
BR (1) BR112016021629A2 (zh)
CA (1) CA2940319A1 (zh)
CL (1) CL2016002255A1 (zh)
EA (1) EA201691481A1 (zh)
IL (1) IL247364A0 (zh)
MX (1) MX2016011862A (zh)
PH (1) PH12016501830A1 (zh)
SG (1) SG11201607740TA (zh)
WO (1) WO2015140304A1 (zh)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2016141088A (ru) 2014-03-20 2018-04-25 СЭМЬЮМЕД, ЭлЭлСи 5-замещённые индазол-3-карбоксамиды и их получение и применение
US10227397B2 (en) 2014-03-20 2019-03-12 Inflarx Gmbh Inhibitors of C5a for the treatment of viral pneumonia
EP3628680B1 (en) 2014-06-12 2021-09-08 RA Pharmaceuticals, Inc. Modulation of complement activity
RS62630B9 (sr) 2015-01-28 2022-04-29 Ra Pharmaceuticals Inc Modulatori aktivnosti komplementa
EP3389692B1 (en) 2015-12-16 2020-03-04 RA Pharmaceuticals, Inc. Modulators of complement activity
EP3463460A1 (en) 2016-06-07 2019-04-10 Novartis AG An anti-c5 antibody dosing regimen
AU2017283470B2 (en) 2016-06-14 2024-03-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-C5 antibodies and uses thereof
BR112019011053A2 (pt) 2016-12-07 2019-10-15 Ra Pharmaceuticals Inc moduladores da atividade do complemento
US10376595B2 (en) * 2017-04-03 2019-08-13 Inflarx Gmbh Treatment of inflammatory diseases with inhibitors of C5a activity
EP4272821A3 (en) 2017-04-03 2024-01-03 InflaRx GmbH Treatment of inflammatory diseases with inhibitors of c5a activity
CA3066689C (en) * 2017-06-23 2024-01-16 Inflarx Gmbh Treatment of inflammatory diseases with inhibitors of c5a activity
JP2021506241A (ja) 2017-12-13 2021-02-22 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 抗ｃ５抗体組み合わせ物およびその使用
JOP20220030A1 (ar) 2019-08-16 2023-01-30 Regeneron Pharma صيغ مضادة لـ c5 عالية التركيز
AU2020438234A1 (en) 2020-03-27 2022-09-29 Inflarx Gmbh Inhibitors of C5a for the treatment of corona virus infection
TW202208427A (zh) 2020-05-06 2022-03-01 德商因夫萊亞斯有限公司 人源化抗ｃ５ａ抗體
WO2023077053A2 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for knocking out c5

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7432356B2 (en) * 2001-08-17 2008-10-07 Genentech, Inc. Complement pathway inhibitors binding to C5 and C5a without preventing formation of C5b
EP1476469B1 (en) * 2002-01-25 2015-11-18 Novo Nordisk A/S Monoclonal antibodies against extracellular loops of c5ar
EP2327725A1 (en) * 2009-11-26 2011-06-01 InflaRx GmbH Anti-C5a binding moieties with high blocking activity
JP5840623B2 (ja) * 2010-01-08 2016-01-06 ヴォリューション イミュノ ファーマシューティカルズ エスエイ 気道のウイルス感染症の治療に用いるｅｖ５７６
US9011852B2 (en) 2010-04-30 2015-04-21 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-C5a antibodies
KR101849738B1 (ko) * 2010-06-17 2018-04-17 트렐리스 바이오싸이언스 인코포레이티드 수동 인플루엔자 면역에 유용한 항체
US10227397B2 (en) 2014-03-20 2019-03-12 Inflarx Gmbh Inhibitors of C5a for the treatment of viral pneumonia

Also Published As

Publication number Publication date
EP3119802B1 (en) 2019-12-04
US10227397B2 (en) 2019-03-12
EA201691481A1 (ru) 2017-02-28
MX2016011862A (es) 2016-12-05
AU2015233380A1 (en) 2016-09-08
KR20160127042A (ko) 2016-11-02
JP7041708B2 (ja) 2022-03-24
JP2017514791A (ja) 2017-06-08
CL2016002255A1 (es) 2017-08-25
WO2015140304A1 (en) 2015-09-24
BR112016021629A2 (pt) 2018-07-10
US10858421B2 (en) 2020-12-08
US20170137499A1 (en) 2017-05-18
PH12016501830A1 (en) 2016-11-21
CA2940319A1 (en) 2015-09-24
JP6718379B2 (ja) 2020-07-08
IL247364A0 (en) 2016-11-30
EP3119802A1 (en) 2017-01-25
JP2020125324A (ja) 2020-08-20
US20190202900A1 (en) 2019-07-04
SG11201607740TA (en) 2016-10-28
CN106132982A (zh) 2016-11-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7041708B2 (ja) ウイルス性肺炎治療のためのＣ５ａの阻害剤
JP7171809B2 (ja) Ｂ型肝炎ウイルスを強力に中和する抗体及びその使用
JP4881874B2 (ja) インフルエンザｍ２タンパク質に対するヒトモノクローナル抗体及びその生産方法及びその使用
JP6800828B2 (ja) 新規のｈａ結合剤
TWI628190B (zh) 可結合及中和ｂ型流感病毒之人類結合分子及其用途
JP4976376B2 (ja) 哺乳動物メタニューモウイルスに対する抗体
WO2021249548A1 (zh) 一种新型冠状病毒抗体的药物组合物及其用途
US20220226470A1 (en) Antibodies and methods for treatment of influenza a infection
US20230158060A1 (en) Inhibitors of C5a for the Treatment of Corona Virus Infection
TW202144406A (zh) ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗體及其應用
KR20140012131A (ko) 인플루엔자의 치료 및 진단을 위한 조성물 및 방법
WO2014115893A1 (ja) ヒト・メタニューモウイルスに特異的なヒト抗体もしくはその抗原結合性断片
JP2023553888A (ja) Ａ型インフルエンザ感染の治療のための抗体及び方法
KR20230029781A (ko) 폴리오마바이러스 중화 항체의 투여
CN116096402A (zh) 与抗人冠状病毒的中和抗体相关的方法和组合物
WO2023035016A1 (en) Human neutralizing antibodies against sars-cov-2 spike s2 domain and uses thereof

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40095812

Country of ref document: HK