CN116731162A - 人免疫球蛋白生产工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种人免疫球蛋白生产工艺及试剂，属于蛋白生产技术领域。所述的生产工艺中包括去除血浆中的Ⅷ因子、纤维蛋白原和人血白蛋白，再通过低温乙醇法获得沉淀物，还包括：沉淀物使用3‑3.5g/L的醋酸钠溶液复溶，调节pH后加入终浓度为12％‑15％的冷乙醇，降温至‑5到‑6℃后，反应液中加入硅藻土和玻化微珠进行压滤收集滤液；所述的硅藻土和玻化微珠的用量比为2‑4：1‑2。本发明的生产工艺制备得到的免疫球蛋白成品，热稳定性好，收率高，且产品受原料储存条件的影响较小，具有较高的实用性。
Description
技术领域
本发明属于蛋白生产技术领域，具体涉及人免疫球蛋白生产工艺及试剂。
背景技术
人免疫球蛋白临床上主要用于预防麻疹和甲型肝炎等病毒性感染，其作用机制有两种：一种是“被动免疫”，注射剂量大，使受者得到完全保护而不被感染；另一种是“被动-自动免疫”，注射剂量小，受者得到部分保护并产生自动免疫。
人免疫球蛋白系可以采用健康人血浆或血清分离、纯化、并经灭活、去除病毒等步骤加工制备而成。从血液中提取免疫球蛋白，常用的有盐析法、有机溶剂沉淀法、有机聚合物沉淀法、变性沉淀法等。各类提取方法中使用的试剂以及过程参数对提取效果都将产生影响，特别是所获产品的稳定性等性质。此外，由于一些原因导致不能及时对样本进行处理，仅能使用储存样本进行人免疫球蛋白的制备，这种情况下，由于储存条件(温度、时间等)对样本的影响，血浆中的一些非蛋白成分可能发生变化，导致不再适用已有提取技术，最终产品收率或性能发生较大变化，这也是目前需要解决的问题。
申请号为CN201480037548.1的中国专利中公开了：在纯化过程中从包含IgG、其它免疫球蛋白和/或其它蛋白质污染物的溶液增加IgG收率的方法，包括(a)提供包含IgG、其它免疫球蛋白和/或其它蛋白质污染物的酸性溶液，所述酸性溶液具有3.5至5.2的pH和至少10g/L的总蛋白质浓度；(b)将溶液调节至5.2至6.2的pH，同时保持低于1.5mS/cm的电导率；(c)将所述溶液温育至少15分钟；和(d)除去任何沉淀物。但该方法重点关注的为收率，对产品的其他性能的影响未知。
申请号为CN202011408376.8的中国专利中公开了：一种快速从血浆提取人免疫球蛋白的方法。以血浆为原料，采用特定浓度的辛酸直接进行沉淀，减少组分反应步骤，最终产品质量好、收率高，基本不含活化凝血因子Ⅺ等杂质，能有效避免产品使用过程中产生致栓性风险，降低产品发生血栓不良反应。生产方法简单，工艺周期短，不需要进行血浆低温乙醇工艺中组分反应步骤，能够快速制备免疫球蛋白，尤其适用突发性大规模疫情感染特异性免疫球蛋白的制备，为患者快速提供高效价、高安全性的特异性免疫抗体制剂。但对于产品稳定性效果的提升仍未涉及。
发明内容
为了解决上述问题，本发明通过优化人免疫球蛋白提取过程中的试剂用量和整体操作流程，调整了实验中的pH、离子条件、过滤条件等，提高了人免疫球蛋白的收率和产品稳定性，有利于实际生产和科研用途。
一方面，本发明提供了一种人免疫球蛋白生产工艺。
所述的生产工艺中包括去除血浆中的Ⅷ因子、纤维蛋白原和人血白蛋白，再通过低温乙醇法获得沉淀物。
所述的生产工艺中还包括：沉淀物使用3-3.5g/L的醋酸钠溶液复溶，调节pH后加入终浓度为12％-15％的冷乙醇，降温至-5到-6℃后，反应液中加入硅藻土和玻化微珠进行压滤收集滤液；所述的硅藻土和玻化微珠的用量比为2-4：1-2。
进一步，所述生产工艺中还包括：滤液中加入终浓度为4-5g/L的NaCl，调节pH至中性后加入终浓度为18％-20％的冷乙醇，再按照与反应液以1：80-100的体积比加入包括浓度为3-4g/L的醋酸钠和1-2g/L的NaHCO3的混合液，降温至-5到-6℃，反应液中加入硅藻土和玻化微珠进行压滤收集；所述的硅藻土和玻化微珠的用量比为2-4：1-2。
优选地，所述的醋酸钠溶液相对沉淀物的用量为50-80：1V/w。进一步优选地，所述的醋酸钠溶液相对沉淀物的用量为80：1V/w。
优选地，所述的硅藻土的用量为8-10g/L反应液，所述的玻化微珠的用量为4-5g/L反应液。
优选地，所述的玻化微珠粒径为20目。
优选地，所述的硅藻土和玻化微珠的用量比为2：1。
具体地，所述的生产工艺可以选择性包括所述的沉淀物的制备方法：
(1)原料血浆0-4℃离心分离沉淀，去除沉淀得血浆1；
(2)血浆1控制温度在0-1℃，调节pH值为中性，添加＜-10℃且体积分数为40-50％的乙醇至与血浆1的体积比浓度为8-10％，离心得沉淀1和上清液1；
(3)上清液1调节pH值为6.80-6.85，添加＜-15℃且体积分数为95％的乙醇至与上清液1体积比浓度为20-23％，调pH为6.80-7.00，搅拌后静置，压滤后得沉淀2和上清液2；沉淀2即所述的沉淀物。
具体地，所述的生产工艺至少包括或者还包括：
(4)沉淀2使用0-4℃的浓度为3-3.5g/L的醋酸钠溶液复溶，醋酸钠溶液用量相对于沉淀2为50-80：1V/w，搅拌1-2小时，搅拌完成后，使用醋酸缓冲液调整pH值至5.0-5.2，调节pH后加入终浓度为12％-15％的冷乙醇，降温至-5到-6℃后，按每升反应液加入8-10g硅藻土和4-5g玻化微珠进行压滤，收集滤液3；
(5)向上清液3中加入终浓度为4-5g/L的NaCl，氢氧化钠溶液调节pH至中性，在调节pH后的溶液中加入终浓度为18％-20％的冷乙醇，并按照与反应液以1：80-100的体积比加入包括浓度为3-4g/L的醋酸钠和1-2g/L的NaHCO3的混合液，完全加入后温度降至-5到-6℃，然后按每升反应液加入8-10g硅藻土和4-5g玻化微珠进行压滤，收集沉淀3；
(6)沉淀3使用包括3-4g/L的醋酸钠和1-2g/L的NaHCO3的混合液以40-50:1V/w用量溶解，调pH至5.1-5.2，在调节pH后的溶液中加入终浓度为14％-15％的冷乙醇，静置2-3h，上清液进行压滤收集滤液4即人免疫球蛋白溶液。
优选地，所述的制备工艺还可以选择性包括：
(7)滤液4用2-8℃注射用水连续透析至蛋白浓度至少80g/L，调pH至5.0。
(8)进行稀配和灭活，灭活后的蛋白液进行除病毒除菌，移至30-32℃孵放间孵育10-12天。
优选地，所述的步骤(5)和(6)的混合液中醋酸钠的浓度为4g/L，所述的NaHCO3的浓度为2g/L，混合液用量为1:100。
优选地，所述的步骤(4)和(5)中硅藻土用量为每升反应液10g，玻化微珠的用量为每升反应液5g。
在一些实施例中，所述的生产工艺包括以下步骤：
(1)将原料血浆融浆，温度控制在0-4℃之间，2000r，5min离心分离沉淀，去除沉淀得血浆1；
(2)血浆1控制温度在0-1℃，滴加pH为4.0的醋酸缓冲液调节pH值为中性，添加-15℃且体积分数为50％的低温乙醇至乙醇与血浆1的体积比浓度为10％，添加乙醇的流速为1升/分钟，添加乙醇后温度控制在-1至-3℃，加完乙醇后进行离心(3000r，3min)，离心得沉淀1和上清液1；
(3)上清液1滴加pH为4.0的醋酸缓冲液调节pH值为6.70-6.90，添加-15℃且体积分数为95％的低温乙醇至乙醇与上清液1体积比浓度为20％，添加乙醇的流速为1.0-1.2升/分钟，添加乙醇后温度控制在-4到-6℃，加完乙醇后，pH为6.80-7.00，搅拌后静置，再开启搅拌，然后进行压滤，压滤后得沉淀2和滤液2，记录沉淀2的重量，沉淀2用于制备人免疫球蛋白；
(4)将沉淀2用0-4℃的醋酸钠溶液(3-3.5g/L)复溶，醋酸钠溶液用量相对于沉淀2为50-80：1V/w，搅拌1-2小时，搅拌完成后，滴加pH为4.0的醋酸缓冲液调整pH值至5.0-5.2；在调节pH后的溶液中加入-15℃的95％乙醇，加入过程中搅拌2小时，95％乙醇终浓度为12％-15％，完全加入后温度降至-5到-6℃，pH值为5.10-5.30，然后按每升反应液加入8-10g硅藻土+4-5g玻化微珠(20目)进行压滤，收集滤液3；
(5)向上清液3中加入终浓度为4-5g/L的NaCl，使用pH为10的氢氧化钠溶液调节pH至中性，在调节pH后的溶液中加入-15℃的95％乙醇，加入过程中搅拌1小时，95％乙醇终浓度为18％-20％，与反应液以1：80-100的体积比加入-15℃的浓度为3-4g/L的醋酸钠+1-2g/L的NaHCO3的混合液，搅拌0.5-1h，完全加入后温度降至-5到-6℃，然后按每升反应液加入8-10g硅藻土+4-5g玻化微珠(20目)进行压滤，收集沉淀3；
(6)沉淀3使用3-4g/L的醋酸钠+1-2g/L的NaHCO3的混合液以40-50:1V/w用量溶解，调pH至5.1-5.2，在调节pH后的溶液中加入-15℃的95％乙醇，95％乙醇终浓度为14％-15％，加入终浓度为4-5g/L的氯化钠，静置2-3h，上清液进行压滤收集滤液4即目标溶液。
(7)滤液4用2-8℃注射用水连续透析至蛋白浓度约80g/L，再用0.5mol/LHCl或0.5mol/L NaOH调pH至5.0。
(8)进行稀配和灭活，将灭活后的蛋白液用20nm纳米膜进行除病毒过滤，按要求除菌灌装，将灌装后制品移至30-32℃孵放间孵育10-12天。
本发明的有益效果：
本发明的生产工艺制备得到的免疫球蛋白成品纯度均能达到>99％，且热稳定性好，收率高，制备的成品受原料储存条件的影响较小，具有较高的实用性。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
参照以下步骤制备人免疫球蛋白：
(1)将原料血浆(500份以上不同来源混合，排除样本差异)融浆，温度控制在0-4℃之间，2000r，5min离心分离沉淀，去除沉淀得血浆1；
(2)血浆1控制温度在0-1℃，滴加pH为4.0的醋酸缓冲液调节pH值为中性，添加-15℃且体积分数为50％的低温乙醇至乙醇与血浆1的体积比浓度为10％，添加乙醇的流速为1升/分钟，添加乙醇后温度控制在-1至-3℃，加完乙醇后进行离心(3000r，3min)，离心得沉淀1和上清液1；
(3)上清液1滴加pH为4.0的醋酸缓冲液调节pH值为6.80，添加-15℃且体积分数为95％的低温乙醇至乙醇与上清液1体积比浓度为20％，添加乙醇的流速为1.2升/分钟，添加乙醇后温度控制在-4到-6℃，加完乙醇后，pH为6.80，搅拌后静置1h，再开启搅拌，然后进行压滤，压滤后得沉淀2和滤液2，记录沉淀2的重量，沉淀2用于制备人免疫球蛋白；
(4)将沉淀2用0℃的醋酸钠溶液(3.5g/L)复溶，醋酸钠溶液用量相对于沉淀2为80：1V/w，搅拌1小时，搅拌完成后，滴加pH为4.0的醋酸缓冲液调整pH值至5.0；在调节pH后的溶液中加入-15℃的95％乙醇，加入过程中搅拌2小时，95％乙醇终浓度为15％，完全加入后温度降至-5到-6℃，pH值为5.10，然后按每升反应液加入10g硅藻土+5g玻化微珠(20目)进行压滤，收集滤液3；
(5)向上清液3中加入终浓度为4g/L的NaCl，使用pH为10的氢氧化钠溶液调节pH至中性，在调节pH后的溶液中加入-15℃的95％乙醇，加入过程中搅拌1小时，95％乙醇终浓度为20％，与反应液以1：100的体积比加入-15℃的浓度为4g/L的醋酸钠+2g/L的NaHCO3的混合液，搅拌0.5-1h，完全加入后温度降至-5到-6℃，然后按每升反应液加入10g硅藻土+5g玻化微珠(20目)进行压滤，收集沉淀3；
(6)沉淀3使用4g/L的醋酸钠+2g/L的NaHCO3的混合液以50:1V/w用量溶解，调pH至5.2，在调节pH后的溶液中加入-15℃的95％乙醇，95％乙醇终浓度为15％，加入终浓度为5g/L的氯化钠，静置2-3h，上清液进行压滤收集滤液4即目标溶液。
(7)滤液4用4℃注射用水连续透析至蛋白浓度约80g/L，再用0.5mol/L HCl或0.5mol/L NaOH调pH至5.0。
(8)进行稀配和灭活，将灭活后的蛋白液用0.02μm的除病毒滤芯进行除病毒过滤，按要求除菌灌装，将灌装后制品移至30-32℃孵放间孵育10-12天。
实施例2
(1)将原料血浆(500份以上不同来源混合，排除样本差异)融浆，温度控制在0-4℃之间，2000r，5min离心分离沉淀，去除沉淀得血浆1；
(2)血浆1控制温度在0-1℃，滴加pH为4.0的醋酸缓冲液调节pH值为中性，添加-15℃且体积分数为50％的低温乙醇至乙醇与血浆1的体积比浓度为10％，添加乙醇的流速为1升/分钟，添加乙醇后温度控制在-1至-3℃，加完乙醇后进行离心(3000r，3min)，离心得沉淀1和上清液1；
(3)上清液1滴加pH为4.0的醋酸缓冲液调节pH值为6.90，添加-15℃且体积分数为95％的低温乙醇至乙醇与上清液1体积比浓度为20％，添加乙醇的流速为1.0升/分钟，添加乙醇后温度控制在-4到-6℃，加完乙醇后，pH为7.00，搅拌后静置1h，再开启搅拌，然后进行压滤，压滤后得沉淀2和滤液2，记录沉淀2的重量，沉淀2用于制备人免疫球蛋白；
(4)将沉淀2用4℃的醋酸钠溶液(3g/L)复溶，醋酸钠溶液用量相对于沉淀2为50：1V/w，搅拌2小时，搅拌完成后，滴加pH为4.0的醋酸缓冲液调整pH值至5.2；在调节pH后的溶液中加入-15℃的95％乙醇，加入过程中搅拌2小时，95％乙醇终浓度为12％，完全加入后温度降至-5到-6℃，pH值为5.30，然后按每升反应液加入8g硅藻土+4g玻化微珠(20目)进行压滤，收集滤液3；
(5)向上清液3中加入终浓度为5g/L的NaCl，使用pH为10的氢氧化钠溶液调节pH至中性，在调节pH后的溶液中加入-15℃的95％乙醇，加入过程中搅拌1小时，95％乙醇终浓度为18％，与反应液以1：80的体积比加入-15℃的浓度为3g/L的醋酸钠+1g/L的NaHCO3的混合液，搅拌0.5-1h，完全加入后温度降至-5到-6℃，然后按每升反应液加入8g硅藻土+4g玻化微珠(20目)进行压滤，收集沉淀3；
(6)沉淀3使用3g/L的醋酸钠+1g/L的NaHCO3的混合液以40:1V/w用量溶解，调pH至5.1，在调节pH后的溶液中加入-15℃的95％乙醇，95％乙醇终浓度为14％，加入终浓度为4g/L的氯化钠，静置2-3h，上清液进行压滤收集滤液4即目标溶液。
(7)滤液4用2℃注射用水连续透析至蛋白浓度约80g/L，再用0.5mol/L HCl或0.5mol/L NaOH调pH至5.0。
(8)进行稀配和灭活，将灭活后的蛋白液用0.02μm的除病毒滤芯进行除病毒过滤，按要求除菌灌装，将灌装后制品移至30-32℃孵放间孵育10-12天。
实施例3
(1)将原料血浆融浆，温度控制在0-4℃之间，2000r，5min离心分离沉淀，去除沉淀得血浆1；
(2)血浆1控制温度在0-1℃，滴加pH为4.0的醋酸缓冲液调节pH值为中性，添加-15℃且体积分数为50％的低温乙醇至乙醇与血浆1的体积比浓度为10％，添加乙醇的流速为1升/分钟，添加乙醇后温度控制在-1至-3℃，加完乙醇后进行离心(3000r，3min)，离心得沉淀1和上清液1；
(3)上清液1滴加pH为4.0的醋酸缓冲液调节pH值为6.70-6.90，添加-15℃且体积分数为95％的低温乙醇至乙醇与上清液1体积比浓度为20％，添加乙醇的流速为1.0升/分钟，添加乙醇后温度控制在-4到-6℃，加完乙醇后，pH为6.80，搅拌后静置，再开启搅拌，然后进行压滤，压滤后得沉淀2和滤液2，记录沉淀2的重量，沉淀2用于制备人免疫球蛋白；
(4)将沉淀2用0-4℃的醋酸钠溶液(3.5g/L)复溶，醋酸钠溶液用量相对于沉淀2为60：1V/w，搅拌1-2小时，搅拌完成后，滴加pH为4.0的醋酸缓冲液调整pH值至5.0；在调节pH后的溶液中加入-15℃的95％乙醇，加入过程中搅拌2小时，95％乙醇终浓度为14％，完全加入后温度降至-5到-6℃，pH值为5.10，然后按每升反应液加入9g硅藻土+4.5g玻化微珠(20目)进行压滤，收集滤液3；
(5)向上清液3中加入终浓度为4g/L的NaCl，使用pH为10的氢氧化钠溶液调节pH至中性，在调节pH后的溶液中加入-15℃的95％乙醇，加入过程中搅拌1小时，95％乙醇终浓度为18％-20％，与反应液以1：80的体积比加入-15℃的浓度为3g/L的醋酸钠+1.5g/L的NaHCO3的混合液，搅拌0.5-1h，完全加入后温度降至-5到-6℃，然后按每升反应液加入8g硅藻土+4g玻化微珠(20目)进行压滤，收集沉淀3；
(6)沉淀3使用4g/L的醋酸钠+2g/L的NaHCO3的混合液以50:1V/w用量溶解，调pH至5.2，在调节pH后的溶液中加入-15℃的95％乙醇，95％乙醇终浓度为15％，加入终浓度为5g/L的氯化钠，静置2-3h，上清液进行压滤收集滤液4即目标溶液。
(7)滤液4用4℃注射用水连续透析至蛋白浓度约80g/L，再用0.5mol/L HCl或0.5mol/L NaOH调pH至5.0。
(8)进行稀配和灭活，将灭活后的蛋白液用0.02μm的除病毒滤芯进行除病毒过滤，按要求除菌灌装，将灌装后制品移至30-32℃孵放间孵育10-12天。
对比例1-5
参照实施例1设置对比例1-5，具体地，对比例1-5与实施例1相比具有以下区别：
对比例1：步骤(4)和步骤(5)中的玻化微珠替换为等量硅藻土；
对比例2：步骤(4)中沉淀2使用水进行复溶；
对比例3：步骤(5)中不添加醋酸钠和NaHCO3的混合液；
对比例4：步骤(6)沉淀3使用水溶解；
对比例5：步骤(5)醋酸钠和NaHCO3的混合液添加量为1:20。
实验例
1、对实施例1-3和对比例1-5制备的成品进行效果验证试验，参照中国药典2020版质量标准三部-人免疫球蛋白进行成品检定，结果如下：
(1)热稳定性
检测样品置60℃水浴中保温2、4、6、8小时后，用可见异物检查装置，肉眼观察应无凝胶化或絮状物。
| 样品 | 2h(有/无) | 4h(有/无) | 6h(有/无) | 8h(有/无) |
| 实施例1 | 无 | 无 | 无 | 有 |
| 实施例2 | 无 | 无 | 无 | 有 |
| 实施例3 | 无 | 无 | 无 | 有 |
| 对比例1 | 无 | 无 | 有 | 有 |
| 对比例2 | 无 | 无 | 有 | 有 |
| 对比例3 | 无 | 无 | 有 | 有 |
| 对比例4 | 无 | 有 | 有 | 有 |
| 对比例5 | 无 | 无 | 有 | 有 |
以上结果表明本发明的方法能够减少免疫球蛋白共沉淀或变性，增强了稳定性。
(2)收率
成品中取样使用试剂盒(酶连生物，ml025149)测定免疫球蛋白含量，根据取样比例计算实际收获免疫球蛋白的质量，收率以初始血浆体积作为分母进行计算。结果如下：
2、样品久置实验
对于同一批血浆样本，分别行以下方式储存：
(1)4℃保存5天；
(2)-22℃保存6-12个月。
参照实施例1的方法，对以上方式储存后的血浆样本进行免疫球蛋白提取，热稳定性结果显示与保存前性能无异，收率结果如下：
| 储存方式 | 具体时长 | 收率(g/L) |
| (1) | 5天 | 10.26 |
| (2) | 6个月 | 10.19 |
| (2) | 9个月 | 10.24 |
| (2) | 12个月 | 10.17 |
以上结果表明，本发明的制备工艺受样本保存条件的影响较小。
Claims (12)
1.一种人免疫球蛋白生产工艺，包括去除血浆中的Ⅷ因子、纤维蛋白原和人血白蛋白，再通过低温乙醇法获得沉淀物，其特征在于，还包括：沉淀物使用3-3.5g/L的醋酸钠溶液复溶，调节pH后加入终浓度为12％-15％的冷乙醇，降温至-5到-6℃后，反应液中加入硅藻土和玻化微珠进行压滤收集滤液；所述的硅藻土和玻化微珠的用量比为2-4：1-2。
2.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，还包括：滤液中加入终浓度为4-5g/L的NaCl，调节pH至中性后加入终浓度为18％-20％的冷乙醇，再按照与反应液以1：80-100的体积比加入包括浓度为3-4g/L的醋酸钠和1-2g/L的NaHCO3的混合液，降温至-5到-6℃，反应液中加入硅藻土和玻化微珠进行压滤收集；所述的硅藻土和玻化微珠的用量比为2-4：1-2。
3.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，所述的醋酸钠溶液相对沉淀物的用量为50-80：1V/w。
4.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，所述的硅藻土的用量为8-10g/L反应液。
5.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，所述的玻化微珠粒径为20目。
6.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，所述的硅藻土和玻化微珠的用量比为2：1。
7.根据权利要求3所述的生产工艺，其特征在于，所述的醋酸钠溶液相对沉淀物的用量为80：1V/w。
8.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，包括所述的沉淀物的制备方法：
(1)原料血浆0-4℃离心分离沉淀，去除沉淀得血浆1；
(2)血浆1控制温度在0-1℃，调节pH值为中性，添加＜-10℃且体积分数为40-50％的乙醇至与血浆1的体积比浓度为8-10％，离心得沉淀1和上清液1；
(3)上清液1调节pH值为6.80-6.85，添加＜-15℃且体积分数为95％的乙醇至与上清液1体积比浓度为20-23％，调pH为6.80-7.00，搅拌后静置，压滤后得沉淀2和上清液2；沉淀2即所述的沉淀物。
9.根据权利要求8所述的生产工艺，其特征在于，还包括：
(4)沉淀2使用0-4℃的浓度为3-3.5g/L的醋酸钠溶液复溶，醋酸钠溶液用量相对于沉淀2为50-80：1V/w，搅拌1-2小时，搅拌完成后，使用醋酸缓冲液调整pH值至5.0-5.2，调节pH后加入终浓度为12％-15％的冷乙醇，降温至-5到-6℃后，按每升反应液加入8-10g硅藻土和4-5g玻化微珠进行压滤，收集滤液3；
(5)向上清液3中加入终浓度为4-5g/L的NaCl，氢氧化钠溶液调节pH至中性，在调节pH后的溶液中加入终浓度为18％-20％的冷乙醇，并按照与反应液以1：80-100的体积比加入包括浓度为3-4g/L的醋酸钠和1-2g/L的NaHCO3的混合液，完全加入后温度降至-5到-6℃，然后按每升反应液加入8-10g硅藻土和4-5g玻化微珠进行压滤，收集沉淀3；
(6)沉淀3使用包括3-4g/L的醋酸钠和1-2g/L的NaHCO3的混合液以40-50:1V/w用量溶解，调pH至5.1-5.2，在调节pH后的溶液中加入终浓度为14％-15％的冷乙醇，静置2-3h，上清液进行压滤收集滤液4即人免疫球蛋白溶液。
10.根据权利要求9所述的生产工艺，其特征在于，还包括：
(7)滤液4用2-8℃注射用水连续透析至蛋白浓度至少80g/L，调pH至5.0；
(8)进行稀配和灭活，灭活后的蛋白液进行除病毒除菌，移至30-32℃孵放间孵育10-12天。
11.根据权利要求9所述的生产工艺，其特征在于，所述的步骤(5)和(6)的混合液中醋酸钠的浓度为4g/L，NaHCO3的浓度为2g/L，混合液用量为1:100。
12.根据权利要求9所述的生产工艺，其特征在于，所述的步骤(4)和(5)中硅藻土用量为每升反应液10g，玻化微珠的用量为每升反应液5g。
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