CN116710066A - 包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡的用于预防或治疗神经系统疾病或精神疾病的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于预防和治疗神经系统疾病或精神疾病的用途，包括来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡。本发明的发明人证实了，当从细菌的培养基中分离囊泡并口服施用时，囊泡被递送到脑中，并且当将囊泡被施用于脑疾病动物模型时，不仅神经发生增加，而且神经元间的连接性也增加，并且还证实了这种治疗效果是通过增加神经营养因子和受体基因的表达、同时增加抑制细胞衰老的Sirt1、Sirt5和Sirt7基因的表达来诱导的。此外，已经证实来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡抑制由神经系统疾病或致病因子引起的炎性细胞分泌炎性介质。因此，当将根据本发明的来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡施用于脑疾病小鼠模型时，可改善由脑损伤引起的症状，例如记忆能力和空间感知能力，因此，预期可有效用在用于预防、减轻或治疗神经系统疾病或精神疾病的组合物中。

Description

包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡的用于预防或治疗神 经系统疾病或精神疾病的组合物

技术领域

本发明涉及一种用于预防或治疗神经系统疾病或精神疾病的组合物，包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡，更具体地，涉及一种使用来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡预防、减轻或治疗神经系统疾病或精神疾病的组合物。

本申请要求分别于2020年12月8日和2021年11月15日向韩国知识产权局提交的韩国专利申请号10-2020-0170221和10-2021-0156952的优先权和权益，这些申请的说明书及附图所公开的全部内容均并入在本申请中。

背景技术

自21世纪开始，过去被认为是可传染性疾病的急性感染性疾病的重要性已经下降，而由我们身体主要器官的免疫或代谢障碍引起的慢性炎症性疾病已经改变了疾病格局，成为降低生活质量和决定人类预期寿命的重大疾病。近年来，研究集中于以下事实：难治性疾病的发生是因为人体与微生物组之间的不协调导致免疫和代谢功能异常，从而导致慢性炎症和异常细胞死亡。特别是，作为21世纪老龄化社会的顽固性疾病，神经退行性疾病，包括认知功能障碍如阿尔茨海默病和运动功能障碍如帕金森病和卢伽雷氏病；神经发育疾病如自闭症和注意力缺陷多动障碍；精神疾病如焦虑症、抑郁症和精神分裂症等，作为决定人类生活质量的重大疾病，已成为国民健康的重大问题。

重复性应激导致神经细胞(神经元)受损，随后神经细胞的异常死亡导致脑神经组织结构和功能异常。神经系统疾病，例如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症、亨廷顿病、癫痫、多发性硬化症、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病和糖尿病性神经病，是由神经细胞的神经变性或神经炎症引起的。此外，诸如卡恩斯-赛尔综合征(KSS)、慢性进行性外眼肌麻痹(CPEO)、线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作(MELAS)、肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维综合征(MERRF)、神经源性无力伴共济失调和视网膜色素变性(NARP)、Leigh综合征(LS)和线粒体隐性共济失调综合征的疾病也是由神经细胞的退行性改变引起的。

最近，已经表明，精神障碍如自闭症、情绪障碍和精神分裂症与腹痛密切相关。腹痛伴有腹泻和便秘，并且在反复发作时会导致肠易激综合征，这与肠道微生物失调有关。特别是据报道，当因不良食物、使用抗生素等导致肠道细菌失衡时，有害肠道微生物会导致健康的大肠防御膜破裂，导致肠漏，然后来源于有害细菌的毒素被全身吸收，导致或加剧抑郁症。

此外，最近发表了很多关于神经系统疾病和精神疾病发病机制的研究结果，揭示了这些疾病的关键通路在分子水平上存在问题。发现和恢复与疾病发病机制相关的关键病因学机制为可以同时治疗多种疾病带来了希望。细胞衰老是在细胞反复暴露于各种应激条件下发生的，在此过程中当细胞的免疫和代谢功能受损时，细胞就会发生异常凋亡。也就是说，神经退行性疾病、神经发育疾病和精神疾病的关键病理生理是由于神经干细胞的异常死亡或神经元间完整性障碍而发生的。

能量代谢产生执行细胞功能所需的能量并产生各种物质，从而通过线粒体产生的ATP从内质网(ER)制造蛋白质和脂质，并将物质供应到所需区域。细胞从形成的那一刻起就面临着多种应激，生物、化学、生理或心理应激会在细胞中诱发内质网应激、线粒体功能障碍、溶酶体损伤等，从而导致细胞死亡。特别是，由于应激，线粒体DNA(mtDNA)突变的积累和活性氧(ROS)的过量产生会促进神经元细胞衰老。

免疫是一种针对生物、化学、生理和心理应激的细胞防御机制，最近，已知与免疫功能异常引起的炎症性疾病的发病机制相关，细胞内氧化应激产生的危险信号被核苷酸结合寡聚化结构域(NLRP)(其为存在于细胞质中的模式识别受体)识别，从而形成炎性体以引起炎症反应和异常细胞死亡。

同时，已知在人体内共存的微生物数量达到100万亿个，比人体细胞的数量还要多，并且微生物的基因数量是人类的100倍。微生物群或微生物组是指存在于特定栖息地的微生物群落，包括细菌、古细菌和真核生物。

共存于我们体内的细菌和存在于周围环境中的细菌会分泌纳米尺寸的囊泡，以与其它细胞交换信息，例如基因、低分子化合物和蛋白质。粘膜形成物理防御膜，尺寸为200纳米(nm)或更大的粒子不能通过该物理防御膜，因此共存于粘膜中的细菌不能通过粘膜，但细菌来源的细胞外囊泡的尺寸为约20至200纳米，从而相对自由地经粘膜而通过上皮细胞被吸收到我们体内。局部分泌的细菌来源的囊泡通过粘膜上皮细胞被吸收而引起局部炎症反应，通过上皮细胞的囊泡被全身吸收而分布到各个器官，调节所分布器官的免疫和炎症反应。例如，来源于病原性革兰氏阴性菌如大肠杆菌(Escherichia coli)的囊泡在局部引起炎症反应和癌症，并且在被吸收到血管中后通过血管内皮细胞炎症反应促进全身炎症反应和血液凝固。此外，这些囊泡被吸收到胰岛素作用的肌肉细胞等中，导致胰岛素抵抗和糖尿病。相反，来自有益细菌的囊泡可能被吸收到各个器官的特定细胞中，通过调节核心免疫功能和代谢功能障碍来抑制疾病的爆发。

鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)细菌是专性需氧革兰氏阴性菌，广泛存在于诸如水、土壤和植物根系等自然系统中。虽然大多数革兰氏阴性菌的外膜中具有脂多糖(LPS)，但鞘氨醇单胞菌属细菌的外膜中具有鞘脂而不是LPS，因此它们比携带LPS的细菌对脂质更友好。此外，鞘氨醇单胞菌属细菌可以通过细菌外膜中存在的泛醌10传递电子，以类似于线粒体产生能量。鞘氨醇单胞菌属细菌由鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、鞘脂菌属(Sphingobium)、新鞘脂菌属(Novospingobium)、Sphingosinicella和Sphingopyxis的属的细菌组成。

然而，迄今为止，还没有将来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡应用于神经系统疾病或精神疾病的治疗的报道。

发明内容

[技术问题]

作为解决相关领域中上述问题的深入研究的结果，本发明人证实了，当培养鞘氨醇单胞菌属细菌，从培养液中分离囊泡，并用囊泡处理细胞时，致病因子引起的炎性介质分泌会被显著抑制。此外，本发明人证实了，当用囊泡治疗由异常蛋白质产生诱发的脑疾病的疾病模型时，不仅与认知功能相关的行为障碍而且异常蛋白质沉积也受到抑制。此外，本发明人证实了，在疾病模型中，来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡通过增强神经干细胞的增殖和分化以及神经元间的完整性而表现出治疗效果。此外，本发明人证实了，来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作用于神经细胞以增加作为诱导神经发生的神经营养因子的脑源性神经营养因子(BDNF)和防止由应激引起的细胞衰老的去乙酰化酶蛋白的表达，结果通过神经发生产生治疗效果，由此完成本发明。

因此，本发明的一个目的是提供一种用于预防或治疗神经系统疾病或精神疾病的药物组合物，包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作为活性成分。

本发明的另一个目的是提供一种用于预防或减轻神经系统疾病或精神疾病的食品组合物，包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作为活性成分。

本发明的又一个目的是提供一种用于预防或减轻神经系统疾病或精神疾病的吸入组合物，包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作为活性成分。

然而，本发明所要解决的技术问题并不限于上述问题，本领域技术人员从以下描述中可以清楚地理解未提及的其它问题。

[技术方案]

为实现本发明的上述目的，本发明提供了一种用于预防或治疗神经系统疾病或精神疾病的药物组合物，包含鞘氨醇单胞菌属细菌来源的囊泡作为活性成分。

在本发明的一个示例性实施方案中，所述神经系统疾病可以是选自由以下组成的组中的一种或多种：阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿病、癫痫、黄斑变性、青光眼、卡恩斯-赛尔综合征(KSS)、慢性进行性外眼肌麻痹(CPEO)、线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作(MELAS)、肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维综合征(MERRF)、神经源性无力伴共济失调和视网膜色素变性(NARP)、Leigh综合征(LS)、线粒体隐性共济失调综合征(MIRAS)、多发性硬化症、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、嗅觉障碍、耳聋、糖尿病性视网膜病变和糖尿病性神经病变，但不限于此。

在本发明的另一个示例性实施方案中，精神疾病可以是选自由以下组成的组中的一种或多种：注意力缺陷多动综合征、双相障碍、焦虑障碍、精神分裂症、强迫症、创伤后应激障碍、解离性障碍、进食障碍、物质使用障碍和人格障碍，但不限于此。

在本发明的又一个示例性实施方案中，神经系统疾病或精神疾病可以是由神经营养蛋白介导的疾病，但不限于此。

在本发明的又一示例性实施方案中，神经营养蛋白可以是脑源性神经营养因子(BDNF)或神经生长因子(NGF)，但不限于此。

在本发明的又一个示例性实施方案中，来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡可增加选自由去乙酰化酶1(Sirt1)、Sit5和Sirt7组成的组中的一种或多种的表达，但不限于此。

在本发明的又一个示例性实施方案中，鞘氨醇单胞菌属细菌可以是选自由以下组成的组的属中的一种或多种细菌：鞘氨醇单胞菌属、鞘脂菌属、新鞘脂菌属、Sphingosinicella和Sphingopyxis，但不限于此。

在本发明的又一个示例性实施方案中，鞘氨醇单胞菌属细菌可以是选自由以下组成的组中的一种或多种：Sphingomonas abaci、粘连鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasadhaesiva)、气生鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas aerolata)、嗜气鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas aerophila)、七叶鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas aestuarii)、阿拉斯加鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas alaskensis)、高山鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas alpina)、水生鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas aquatilis)、噬香鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasaromaticivorans)、不解糖鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas asaccharolytica)、产虾青素鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas astaxanthinifaciens)、橙色鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasaurantiaca)、固氮鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas azotifigens)、Sphingomonasbaekryungensis、荚膜鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas capsulate)、加拿大鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas Canadensis)、长白鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas changbaiensis)、氯酚鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas chlorophenolica)、Sphingomonas chungbukensis、Sphingomonas cloacae、Sphingomonas cynarae、大涌鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasdaechungensis)、Sphingomonas desiccabilis、独岛鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasdokdonensis)、海胆鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas echinoides)、Sphingomonas elodea、Sphingomonas endophytica、干草鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas faeni)、芬兰鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas fennica)、黄色鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas flava)、福尔摩森鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas formosensis)、Sphingomonas gei、广微所鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas gimensis)、人参土鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas ginsengisoli)、转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas ginsenosidimutans)、冰川鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas glacialis)、广东鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas guangdongensis)、嗜卤芳香族物鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas haloaromaticamans)、韩泰鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas hankookensis)、食除草剂鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasherbicidovorans)、溶组氨酸鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas histidinilytica)、印度氨酸鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas indica)、Sphingomonas insulae、日本氨酸鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas japonica)、Sphingomonas jaspsi、Sphingomonas jejuensis、Sphingomonas jinjuensis、凯斯特鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas kaistensis)、韩国鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas koreensis)、Sphingomonas kyeonggiensis、Sphingomonaskyungheensis、Sphingomonas lacus、Sphingomonas laterariae、莱迪氏鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas leidyi)、解聚乙二醇鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas macrogoltabidus)、苹果鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas mali)、瓜类鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas melonis)、Sphingomonas molluscorum、诺丽鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas morindae)、粘膜鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas mucosissima)、Sphingomonas naasensis、Sphingomonas natatoria、寡噬香鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas oligoaromativorans)、寡酚鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas oligophenolica)、Sphingomonas oryziterrae、潘尼鞘脂单胞菌(Sphingomonas panni)、类少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas parapaucimobilis)、少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)、叶际鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasphyllosphaerae)、Sphingomonas pituitosa、多噬香鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaspolyaromaticivorans)、李鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas pruni)、伪血鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas pseudosanguinis)、橘黄嗜冷鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaspsychrolutea)、玫瑰鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas rosa)、玫瑰黄鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas roseiflava)、红色鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas rubra)、血红鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sanguinis)、胞外多聚物鞘氨醇单胞菌(Sphingomonassanxanigenens)、栖沉积物鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sediminicola)、土壤鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas soli)、Sphingomonas starnbergensis、Sphingomonas stygia、Sphingomonas subarctica、Sphingomonas suberifaciens、Sphingomonas subterranea、Sphingomonas taejonensis、土生鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas terrae)、Sphingomonastrueperi、Sphingomonas ursincola、Sphingomonas vulcanisoli、维氏鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas wittichii)、食异源物鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas xenophaga)、新疆鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas xinjiangensis)、Sphingomonas yabuuchiae、盐亭鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas yantingensis)、矢野氏鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas yanoikuyae)、云南鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas yunnanensis)和玉米鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaszeae)，但不限于此

作为本发明的又一个示例性实施方案，囊泡的平均直径可以为10至1000nm，但平均直径不限于此。

在本发明的又一个示例性实施方案中，囊泡可以分离自鞘氨醇单胞菌属细菌的培养液，但不限于此。

作为本发明的又一个示例性实施方案，囊泡可以由鞘氨醇单胞菌属细菌天然或人工分泌，但不限于此。

此外，本发明提供了一种用于预防或减轻神经系统疾病或精神疾病的食品组合物，包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明提供了一种用于预防或减轻神经系统疾病或精神疾病的吸入组合物，包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明提供了一种用于预防或治疗神经系统疾病或精神疾病的方法，所述方法包括将包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作为活性成分的组合物施用于受试者。

此外，本发明提供了包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作为活性成分的组合物在预防或治疗神经系统疾病或精神疾病中的用途。

此外，本发明提供了来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡在生产用于预防或治疗神经系统疾病或精神疾病的药物中的用途。

[有益效果]

本发明人证实了，当口服施用来源于外膜中具有LPS的革兰氏阴性菌的囊泡时，脑中没有囊泡分布，但是当口服施用来源于外膜中具有鞘脂的鞘氨醇单胞菌属细菌的少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)的囊泡时，囊泡被递送至脑。此外，本发明人证实了，当将来源于少动鞘氨醇单胞菌的囊泡口服施用于脑疾病小鼠模型时，不仅与认知功能相关的行为障碍而且异常蛋白质沉积都受到抑制。此外，本发明人证实了，在疾病模型中，来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡不仅通过增强神经干细胞的增殖和分化，而且通过增强神经元间的完整性而表现出治疗效果。此外，本发明人证实了，来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作用于神经细胞以增加作为诱导神经发生的神经营养因子的BDNF和防止因应激引起的细胞衰老的去乙酰化酶蛋白的表达，结果，通过神经发生产生治疗效果。

因此，预期根据本发明的来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡可用作预防、减轻或治疗神经系统疾病或精神疾病的药物。

附图说明

图1a是在向小鼠口服施用来源于革兰氏阴性菌少动鞘氨醇单胞菌的囊泡后随时间拍摄的囊泡的分布模式的一组照片，图1b显示了在口服施用后随时间分布在脑中的来源于少动鞘氨醇单胞菌的囊泡的荧光强度图。

图2a是在向小鼠口服施用来源于革兰氏阴性菌鲍曼不动杆菌(Acinetobactorbaumannii)的囊泡后随时间在各器官中拍摄的囊泡的分布模式的一组照片，图2b显示了口服施用后随时间在各器官中来源于鲍曼不动杆菌的囊泡的分布模式图。

图3是通过在过表达异常蛋白质(淀粉样前体蛋白(APP)和早老素-1(PSS1))诱导的转化的脑疾病小鼠模型中口服施用来源于少动鞘氨醇单胞菌的囊泡来评估治疗效果的实验方案。WT-CON是指正常小鼠组，Tg-CON是指脑疾病小鼠模型组，并且Tg-MDH-204是指对脑疾病小鼠模型口服施用来源于少动鞘氨醇单胞菌的囊泡的组。

图4显示了使用新物体/位置识别测试在根据本发明的一个示例性实施方案的APP/PS1转化的脑疾病小鼠模型中评估少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡(MDH-204)对认知功能的治疗功效的结果。

图5a至5c显示了使用水迷宫测试在根据本发明的一个示例性实施方案的APP/PS1转化的脑疾病小鼠模型中评估少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡(MDH-204)对学习能力的治疗功效的结果。

图6显示了使用被动回避测试在根据本发明的一个示例性实施方案的APP/PS1转化的脑疾病小鼠模型中评估少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡(MDH-204)对记忆能力的治疗功效的结果。

图7a至7c显示了在根据本发明的一个示例性实施方案的APP/PS1转化的脑疾病小鼠模型中评估少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡(MDH-204)对脑组织中的异常蛋白质β淀粉样蛋白的沉积的治疗功效的结果。

图8a和8b示出了在根据本发明的一个示例性实施方案的APP/PS1转化的脑疾病小鼠模型中使用荧光染色图像和定量数据显示各组脑中早期神经发生的标志物Ki-67的表达的结果，图8a示出了作为比率显示与正常小鼠组(WT-CON)相比神经系统疾病或精神疾病小鼠模型组(Tg-CON)和施用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的组(Tg+MDH-204)中被Ki-67染色的细胞数的结果，图8b显示了每组的一组代表性Ki-67染色照片。

图9a和9b示出了在根据本发明的一个示例性实施方案的APP/PS1转化的脑疾病小鼠模型中使用荧光染色图像和定量数据显示各组脑中神经细胞迁移和分化的标志物双皮质素(DCX)的表达的结果，图9a示出了显示与正常小鼠组(WT-CON)相比脑疾病小鼠模型组(Tg-CON)和施用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的组(Tg+MDH-204)中在显微镜下观察到的每个切片被DCX染色的平均细胞数的结果，图9b显示了每组的一组代表性DCX染色照片。

图10a至10c示出了在根据本发明的一个示例性实施方案的APP/PS1转化的脑疾病小鼠模型中使用荧光染色图像和定量数据显示各组脑中神经元树突标志物微管相关蛋白2(MAP2)的表达的结果，图10a是染色的脑区的图示，图10b是每组的一组代表性MAP2染色照片，图10c示出了作为比率显示与正常小鼠组(WT-CON)相比脑疾病小鼠模式组(Tg-CONA)和施用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的组(Tg+MDH-204)中MAP2表达的结果。

图11示出了根据本发明的一个示例性实施方案的评估少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡(MDH-204)对神经细胞中神经发生和生长相关的神经营养因子以及异常蛋白质β-淀粉样蛋白引起的受体表达的治疗效果的结果。

图12示出了根据本发明的一个示例性实施方案的评估少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡(MDH-204)对神经细胞中异常蛋白质β-淀粉样蛋白引起的细胞衰老相关基因表达的治疗效果的结果。

图13示出了根据本发明的一个示例性实施方案的评估少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡(MDH-204)对致病因子引起的炎性细胞中分泌炎性介质的治疗效果的结果。

具体实施方式

本发明涉及包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡的用于预防和治疗神经系统疾病或精神疾病的用途。

以下，对本发明进行详细说明。

本发明人证实了，当口服施用来源于在外膜中具有脂多糖(LPS)的革兰氏阴性菌的囊泡时，脑中没有囊泡分布，但是当口服施用来源于在外膜中具有鞘脂的鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡时，囊泡被递送至脑。

此外，本发明人证实了，当将来源于少动鞘氨醇单胞菌的囊泡口服施用于患有异常蛋白质APP和PS1过表达的脑疾病的转基因小鼠时，不仅诸如认知功能、学习能力和记忆能力的行为障碍而且异常蛋白质沉积被抑制。

此外，本发明人证实了，在脑疾病小鼠模型中，来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡不仅通过增强神经干细胞的增殖和分化而且通过增强神经间的完整性而表现出治疗效果。

此外，本发明人证实了，对神经发生和神经间整合的治疗效果是由于来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡对神经细胞的作用，增加了作为神经营养因子的脑源性神经营养因子(BDNF)和防止细胞衰老的去乙酰化酶蛋白的表达。

此外，本发明人证实了，来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡以剂量依赖性方式抑制炎性细胞分泌炎性介质。

因此，根据本发明的来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡可以有用地用作预防、减轻或治疗神经系统疾病或精神疾病等的组合物。

因此，本发明提供一种用于预防、减轻或治疗神经系统疾病或精神疾病的药物组合物，包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作为活性成分。

该组合物包括药物组合物、食品组合物和吸入组合物。

如本文所用，术语“神经系统疾病或精神疾病”是指神经干细胞和神经细胞因各种应激而损伤和衰老所引起的疾病。

在本发明中，所述神经系统疾病包括选自由以下组成的组中的一种或多种：阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿病、癫痫、黄斑变性、青光眼、卡恩斯-赛尔综合征(KSS)、慢性进行性外眼肌麻痹(CPEO)、线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作(MELAS)、肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维综合征(MERRF)、神经源性无力伴共济失调和视网膜色素变性(NARP)、Leigh综合征(LS)、线粒体隐性共济失调综合征、多发性硬化症、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、嗅觉障碍、耳聋、糖尿病性视网膜病变和糖尿病性神经病变，但不限于此。

在本发明中，精神疾病是指影响人的思想、情感、行为等的病理性精神状态，是指精神功能受损的状态的统称。所述精神疾病包括选自由以下组成的组中的一种或多种：注意力缺陷多动综合征、双相障碍、焦虑障碍、精神分裂症、强迫症、创伤后应激障碍、解离性障碍、进食障碍、物质使用障碍和人格障碍，但不限于此。

在本发明中，神经系统疾病或精神疾病可以是由神经营养蛋白介导的疾病，但不限于此。在本发明中，神经营养蛋白可以是脑源性神经营养因子(BDNF)或神经生长因子(NGF)，但不限于此。

在本发明中，来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡可增加选自由去乙酰化酶1(Sirt1)、Sit5和Sirt7组成的组中的一种或多种的表达，但不限于此。

在本发明中，来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡可具有增强认知功能的作用，但不限于此。

如本文所用，术语“认知”是指从脑接受和储存一定信息，以及搜索和使用所储存信息的所有过程，包括我们在生活中思考、说话、记忆、判断和实践的所有过程。认知功能是指脑在接受和储存信息以及搜索和使用所储存信息的所有过程中进行记忆、思考、判断和实践的能力。此类认知功能可大致分为注意力、语言、时空、记忆和执行功能(或管理功能)。本发明的认知功能包括学习能力、记忆能力或专注能力。

本发明的“增强”综合指进一步改善认知功能，可以包括提高与认知功能相关的能力，优选学习能力、记忆能力或专注能力，并且包括因神经系统疾病或精神疾病引起的症状如认知功能恶化或退化的缓解、治愈或巩固，但不限于此。

如本文所用，术语“鞘氨醇单胞菌属细菌”是指广泛存在于自然系统如水、土壤和植物根系中的专性需氧革兰氏阴性菌，并且包括选自由以下组成的组的属中的一种或多种细菌：鞘氨醇单胞菌属、鞘脂菌属、新鞘脂菌属、Sphingosinicella和Sphingopyxis，但不限于此。

在本发明中，鞘氨醇单胞菌属细菌包括选自由以下组成的组中的一种或多种：Sphingomonas abaci、粘连鞘氨醇单胞菌、气生鞘氨醇单胞菌、嗜气鞘氨醇单胞菌、七叶鞘氨醇单胞菌、阿拉斯加鞘氨醇单胞菌、高山鞘氨醇单胞菌、水生鞘氨醇单胞菌、噬香鞘氨醇单胞菌、不解糖鞘氨醇单胞菌、产虾青素鞘氨醇单胞菌、橙色鞘氨醇单胞菌、固氮鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas baekryungensis、荚膜鞘氨醇单胞菌、加拿大鞘氨醇单胞菌、长白鞘氨醇单胞菌、氯酚鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas chungbukensis、Sphingomonas cloacae、Sphingomonas cynarae、大涌鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas desiccabilis、独岛鞘氨醇单胞菌、海胆鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas elodea、Sphingomonas endophytica、干草鞘氨醇单胞菌、芬兰鞘氨醇单胞菌、黄色鞘氨醇单胞菌、福尔摩森鞘氨醇单胞菌、Sphingomonasgei、广微所鞘氨醇单胞菌、人参土鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas ginsenosidimutans、冰川鞘氨醇单胞菌、广东鞘氨醇单胞菌、嗜卤芳香族物鞘氨醇单胞菌、韩泰鞘氨醇单胞菌、食除草剂鞘氨醇单胞菌、溶组氨酸鞘氨醇单胞菌、印度氨酸鞘氨醇单胞菌、Sphingomonasinsulae、日本氨酸鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas jaspsi、Sphingomonas jejuensis、Sphingomonas jinjuensis、凯斯特鞘氨醇单胞菌、韩国鞘氨醇单胞菌、Sphingomonaskyeonggiensis、Sphingomonas kyungheensis、Sphingomonas lacus、Sphingomonaslaterariae、莱迪氏鞘氨醇单胞菌、解聚乙二醇鞘氨醇单胞菌、苹果鞘氨醇单胞菌、瓜类鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas molluscorum、诺丽鞘氨醇单胞菌、粘膜鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas naasensis、Sphingomonas natatoria、寡噬香鞘氨醇单胞菌、寡酚鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas oryziterrae、潘尼鞘脂单胞菌、类少动鞘氨醇单胞菌、少动鞘氨醇单胞菌、叶际鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas pituitosa、多噬香鞘氨醇单胞菌、李鞘氨醇单胞菌、伪血鞘氨醇单胞菌、橘黄嗜冷鞘氨醇单胞菌、玫瑰鞘氨醇单胞菌、玫瑰黄鞘氨醇单胞菌、红色鞘氨醇单胞菌、血红鞘氨醇单胞菌、胞外多聚物鞘氨醇单胞菌、栖沉积物鞘氨醇单胞菌、土壤鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas starnbergensis、Sphingomonas stygia、Sphingomonas subarctica、Sphingomonas suberifaciens、Sphingomonas subterranea、Sphingomonas taejonensis、土生鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas trueperi、Sphingomonasursincola、Sphingomonas vulcanisoli、维氏鞘氨醇单胞菌、食异源物鞘氨醇单胞菌、新疆鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas yabuuchiae、盐亭鞘氨醇单胞菌、矢野氏鞘氨醇单胞菌、云南鞘氨醇单胞菌和玉米鞘氨醇单胞菌，但不限于此。

如本文所用，术语“细胞外囊泡”或“囊泡”是指由各种细菌分泌的纳米尺寸的膜形成的结构。来源于革兰氏阴性菌的囊泡或外膜囊泡(OMV)也具有内毒素(脂多糖)或糖鞘脂、有毒蛋白质以及细菌DNA和RNA，而来源于革兰氏阳性菌的囊泡除了蛋白质和核酸外，还具有肽聚糖和脂磷壁酸，它们是细菌的细胞壁成分。在本发明中，囊泡可以是鞘氨醇单胞菌属细菌天然分泌的，或由细菌通过热处理、加压处理等人工方式产生的，但不限于此。

在本发明中，鞘氨醇单胞菌属细菌的外膜可以包含鞘脂，但不限于此。此外，来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡可以包含鞘脂，但不限于此。此外，与来源于其它革兰氏阴性菌的囊泡不同，来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡可以不包含LPS，但不限于此。

可以在鞘氨醇单胞菌属细菌培养过程中通过细胞培养物的热处理或高压灭菌，或使用选自由对细胞培养物进行离心、超速离心、高压灭菌、挤压、超声处理、细胞裂解、均质化、冻融、电穿孔、机械降解、化学处理、用过滤器过滤、凝胶过滤层析、预流动电泳和毛细管电泳组成的组中的一种或多种方法来分离囊泡。此外，为了分离，可以进一步进行用于去除杂质的洗涤和浓缩所获得的囊泡。

本发明的囊泡可以分离自鞘氨醇单胞菌属细菌培养液或通过添加鞘氨醇单胞菌属细菌而制备的食品，并且囊泡可以是鞘氨醇单胞菌属细菌天然或人工分泌的，但不限于此。

在本发明中，通过该方法分离的囊泡呈球形，并且平均直径可以为10至1000nm、10至900nm、10至800nm、10至700nm、10至600nm、10至500nm、10至400nm、10至300nm、10至200nm、10至190nm、10至180nm、10至170nm、10至160nm、10至150nm、10至140nm、10至130nm、10至120nm、10至110nm、10至100nm、10至90nm、10至80nm、10至70nm、10至60nm、10至50nm、20至200nm、20至180nm、20至160nm、20至140nm、20至120nm、20至100nm、或20至80nm，优选20至200nm，但平均直径不限于此。

本发明的组合物中囊泡的量可以根据疾病的症状、症状的进展程度、患者的状态等适当调整，并且相对于组合物的总重量，范围可以为例如0.0001wt％至99.9wt％或0.001wt％至50wt％，但本发明不限于此。量比率是基于除去溶剂的干燥产物的量的值。

根据本发明的药物组合物可以还包含通常用于制备药物组合物的合适的载体、辅料和稀释剂。辅料可以是例如选自由以下组成的组中的一种或多种：稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、吸附剂、保湿剂、薄膜包衣材料和控释添加剂。

根据本发明的药物组合物可以通过根据常用的方法制成形式来使用，例如散剂、颗粒剂、缓释型颗粒剂、肠溶颗粒剂、液体剂、滴眼剂、酏剂、乳剂、混悬剂、醑剂、锭剂、芳香水、柠檬水、片剂、缓释型片剂、肠溶片剂、舌下含片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、缓释型胶囊剂、肠溶胶囊剂、丸剂、酊剂、软浸膏剂、干浸膏剂、流浸膏剂、注射剂、胶囊剂、灌注剂或外用制剂，例如硬膏剂、洗剂、糊剂、喷雾剂、吸入剂、贴剂、无菌注射液或气雾剂。外用制剂可以具有诸如霜剂、凝胶剂、贴剂、喷雾剂、软膏剂、硬膏剂、洗剂、搽剂、糊剂或巴布剂的制剂。

作为可以包含在根据本发明的药物组合物中的载体、辅料和稀释剂，可以使用乳糖、右旋糖、蔗糖、低聚糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁和矿物油。

对于制剂，使用常用的稀释剂或辅料，例如填充剂、增稠剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂和表面活性剂。

作为根据本发明的片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂和锭剂的添加剂，可以使用辅料，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、小麦淀粉、乳糖、白糖、葡萄糖、果糖、D-甘露糖醇、沉淀碳酸钙、合成硅酸铝、磷酸氢钙、硫酸钙、氯化钠、碳酸氢钠、纯羊毛脂、微晶纤维素、糊精、海藻酸钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、高岭土、尿素、胶体硅胶、羟丙基淀粉、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、HPMC 1928、HPMC 2208、HPMC 2906、HPMC 2910、丙二醇、酪蛋白、乳酸钙和以及粘合剂，例如明胶、阿拉伯胶、乙醇、琼脂粉、乙酸邻苯二甲酸纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、葡萄糖、纯净水、酪蛋白酸钠、甘油、硬脂酸、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素钠、甲基纤维素、微晶纤维素、糊精、羟基纤维素、羟丙基淀粉、羟甲基纤维素、纯化虫胶、淀粉、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮，以及可以使用崩解剂，例如羟丙基甲基纤维素、玉米淀粉、琼脂粉、甲基纤维素、膨润土、羟丙基淀粉、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、羧甲基纤维素钙、柠檬酸钙、月桂基硫酸钠、硅酸酐、1-羟丙基纤维素、葡聚糖、离子交换树脂、聚乙酸乙烯酯、甲醛处理的酪蛋白和明胶、海藻酸、直链淀粉、瓜尔胶、碳酸氢钠、聚乙烯吡咯烷酮、磷酸钙、凝胶淀粉、阿拉伯胶、支链淀粉、果胶、聚磷酸钠、乙基纤维素、白糖、硅酸镁铝、二山梨糖醇溶液和轻质无水硅酸；以及润滑剂，例如硬脂酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸、氢化植物油、滑石粉、石松粉、高岭土、凡士林、硬脂酸钠、可可脂、水杨酸钠、水杨酸镁、聚乙二醇(PEG)4000、PEG 6000、液体石蜡、氢化大豆油(Lubri蜡)、硬脂酸铝、硬脂酸锌、月桂基硫酸钠、氧化镁、Macrogol、合成硅酸铝、硅酸酐、高级脂肪酸、高级醇、硅油、石蜡油、聚乙二醇脂肪酸醚、淀粉、氯化钠、乙酸钠、油酸钠、dl-亮氨酸和轻质无水硅酸。

作为根据本发明的液体剂的添加剂，可以使用水、稀盐酸、稀硫酸、柠檬酸钠、单硬脂酸蔗糖、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯(双酯)、聚氧乙烯单烷基醚、羊毛脂醚、羊毛脂酯、乙酸、盐酸、氨水、碳酸铵、氢氧化钾、氢氧化钠、谷醇溶蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、乙基纤维素和羧甲基纤维素钠。

在根据本发明的糖浆剂中，可以使用白糖溶液、其它糖类或甜味剂等，并且根据需要，可以使用芳香剂、着色剂、防腐剂、稳定剂、混悬剂、乳化剂、粘性剂等。

在根据本发明的乳剂中，可以使用纯净水，并且根据需要，可以使用乳化剂、防腐剂、稳定剂、芳香剂等。

在根据本发明的混悬剂中，可以使用混悬剂，例如阿拉伯胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、海藻酸钠、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、HPMC1828、HPMC 2906、HPMC 2910等，并且根据需要，可以使用表面活性剂、防腐剂、稳定剂、着色剂和芳香剂。

根据本发明的注射剂可以包含：溶剂，例如注射用蒸馏水、0.9％氯化钠溶液、林格氏溶液、葡萄糖溶液、葡萄糖+氯化钠溶液、PEG、乳酸林格氏溶液、乙醇、丙二醇、非挥发油——芝麻油、棉籽油、花生油、大豆油、玉米油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苯酯；助溶剂，例如苯甲酸钠、水杨酸钠、乙酸钠、尿素、氨基甲酸乙酯、单乙基乙酰胺、苯基丁氮酮、丙二醇、Tween系列、烟酸酰胺、乌洛托品和二甲基乙酰胺；缓冲剂，例如弱酸及其盐(乙酸和乙酸钠)、弱碱及其盐(氨水和乙酸铵)、有机化合物、蛋白质、白蛋白、蛋白胨和树胶；等渗剂，例如氯化钠；稳定剂，例如亚硫酸氢钠(NaHSO₃)、二氧化碳气、焦亚硫酸钠(Na₂S₂O₅)、亚硫酸钠(Na₂SO₃)、氮气(N₂)和乙二胺四乙酸；硫酸化剂，例如0.1％二硫化钠、甲醛次硫酸氢钠、硫脲、乙二胺四乙酸二钠和丙酮亚硫酸氢钠；镇痛剂，例如苯甲醇、氯丁醇、盐酸普鲁卡因、葡萄糖和葡萄糖酸钙；以及混悬剂，例如CMC钠、海藻酸钠、Tween 80和单硬脂酸铝。

在根据本发明的栓剂中，可以使用基质，例如可可脂、羊毛脂、Witepsol、聚乙二醇、甘油明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸和油酸的混合物、Subanal、棉籽油、花生油、棕榈油、可可脂+胆固醇、卵磷脂、lanette蜡、单硬脂酸甘油酯、Tween或span、imhausen、monolan(丙二醇单硬脂酸酯)、甘油、Adeps solidus、buytyrum Tego-G、cebes Pharma 16、hexalide base 95、cotomar、Hydrokote SP、S-70-XXA、S-70-XX75(S-70-XX95)、Hydrokote25、Hydrokote711、idropostal、massa estrarium(A、AS、B、C、D、E、I、T)、masa-MF、masupol、masupol-15、neosuppostal-N、paramount-B、supposiro(OSI、OSIX、A、B、C、D、H、L)、栓剂基质IV型(AB、B、A、BC、BBG、E、BGF、C、D、299)、suppostal(N、Es)、Wecoby(W、R、S、M、Fs)和teg酯甘油三酯物质(TG-95、MA、57)。

用于口服施用的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，此类固体制剂是通过将组合物与至少一种辅料例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等混合配制的。除了简单的辅料外，还使用润滑剂，例如硬脂酸镁和滑石粉。

用于口服施用的液体制剂的实例包括混悬剂、内服液体剂、乳剂、糖浆剂等，这些液体制剂除了简单常用的稀释剂如水和液体石蜡外，可以还包含各种类型的辅料，例如润湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等。用于肠胃外施用的制剂包括无菌水溶液、非水溶剂、混悬剂、乳剂、冻干制剂和栓剂。非水溶剂和混悬剂的非限制性实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油和可注射酯如油酸乙酯。

根据本发明的药物组合物以药学有效量施用。在本发明中，“药学有效量”是指足以在适用于医学治疗的合理收益/风险比下治疗疾病的量，并且有效剂量水平可以根据包括患者的疾病类型、疾病的严重程度、药物的活性、对药物的敏感性、施用时间、施用途径、排泄率、治疗周期、同时使用的药物的因素以及其它医学领域众所周知的因素来确定。

根据本发明的组合物可以作为单独的治疗剂施用或与其它治疗剂组合施用，可以与相关领域的治疗剂顺序或同时施用，并且可以以单剂量或多剂量施用。考虑到所有上述因素，重要的是以可以以获得最大效果而没有任何副作用的最小量施用组合物，并且这可以由本领域普通技术人员容易地确定。

本发明的药物组合物可以通过多种途径施用于受试者。所有的施用方法都是可以预见的，药物组合物可以通过例如口服施用、皮下注射、腹膜内注射、静脉内注射、肌肉内注射、鞘内(脊髓周围间隙)注射、舌下施用、经颊粘膜施用、直肠内插入、阴道内插入、眼部施用、耳内施用、鼻内施用、吸入、经口或鼻喷洒、透皮施用、经皮施用等来施用。

本发明的药物组合物根据作为活性成分的药物的种类，连同诸如待治疗的疾病、施用途径、患者的年龄、性别和体重以及疾病的严重程度等各种相关因素来决定。具体地，根据本发明的组合物的有效量可以根据患者的年龄、性别和体重而变化，并且通常，每1kg体重可以每天或每隔一天施用0.001至150mg组合物，优选地，0.01至100mg组合物，或者可以一天施用一次至三次。然而，由于有效量可能根据施用途径、肥胖的严重程度、性别、体重、年龄等而增加或减少，因此该剂量不旨在以任何方式限制本发明的范围。

如本文所用，“受试者”是指需要治疗疾病的受试者，更具体地，是指哺乳动物如人或非人灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、马和牛，但本发明不限于此。

如本文所用，“施用”是指通过使用任意适当的方法向受试者提供预定的本发明的组合物。

本文所用的术语“预防”是指抑制或延缓目标疾病发作的所有行为。本文所用的术语“治疗”是指通过施用根据本发明的药物组合物减轻或有益地改变目标疾病和由此引起的异常代谢症状的所有行为。本文所用的术语“改善”是指通过施用根据本发明的组合物降低与目标疾病相关的参数(例如症状)程度的所有行为。

此外，本发明提供了一种用于预防或减轻神经系统疾病或精神疾病的食品组合物，包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作为活性成分。

食品组合物可以是健康功能食品组合物，但不限于此。

根据本发明的囊泡可以通过将活性成分直接添加到食品中使用或者可以与其它食品或食品成分一起使用，但是可以根据典型的方法适当地使用。活性成分的混合量可以根据其使用目的(预防或减轻)适当确定。通常，当制备食品或饮料时，本发明组合物的添加量为基于原料的15wt％或更少、优选为10wt％或更少。然而，以健康卫生为目的或以健康管理为目的长期摄取时，该量可以小于上述范围，并且囊泡在稳定性方面没有问题，因此可以以大于上述范围的量使用活性成分。

食品的种类没有特别限制。可以添加该材料的食品的实例包括肉、香肠、面包、巧克力、糖果、点心、甜食、披萨、方便面、其它面条、口香糖、乳制品(包括冰淇淋)、各种汤、饮料、茶、饮品、酒精饮料、维生素复合物等，包括典型意义上的所有保健功能食品。

根据本发明的健康饮料组合物可以如典型饮料那样包含各种香料或天然碳水化合物等作为附加成分。上述天然碳水化合物可以是单糖如葡萄糖和果糖，二糖如麦芽糖和蔗糖，多糖如糊精和环糊精，以及糖醇如木糖醇、山梨糖醇和赤藓糖醇。作为甜味剂，可以使用天然甜味剂如奇异果甜蛋白和甜叶菊提取物，合成甜味剂如糖精和阿斯巴甜，等等。天然碳水化合物的比例通常为每100ml本发明的组合物约0.01至0.20g，或约0.04至0.10g。

除上述成分外，本发明的组合物可以还含有各种营养素、维生素、电解质、香料、着色剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、酒精、碳酸饮料中使用的碳酸化剂等。此外，本发明的组合物可以包含果肉以制备天然果汁、果汁饮料和植物饮料。这些成分可以单独使用或组合使用。这些添加剂的比例并不重要，但通常选择在每100重量份本发明组合物中0.01至0.20重量份的范围内。

此外，本发明可以以包含鞘氨醇单胞菌属细菌来源的囊泡作为活性成分的吸入组合物的形式提供。

在吸入制剂的情况下，化合物可以根据本领域已知的方法配制，并且可以通过使用合适的抛射剂(例如二氯氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体)从加压包装或喷雾器以气溶胶喷雾的形式方便地递送。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可以通过提供用于转移计量量的阀来确定。例如，可以配制用于在吸入器或吹入器中使用的明胶胶囊和药筒以包含化合物和合适的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。

[发明方式]

以下，将提出有助于理解本发明的优选实施例。然而，提供以下实施例仅为了更容易理解本发明，且本发明的内容不受以下实施例限制。

[实施例]

实施例1.从少动鞘氨醇单胞菌培养液中分离囊泡

在培养少动鞘氨醇单胞菌菌株后，对其囊泡进行分离、分析和表征。将该菌株在30℃培养箱中的营养肉汤(NB)培养基中培养至吸光度(OD 600)变为1.0至1.5，然后在Luria-Bertani(LB)培养基中进行传代培养。之后，通过回收包含该菌株的培养液并且以13,000g在4℃离心15分钟并且用0.22μm的滤器过滤残渣除去细菌细胞。将过滤的上清液使用具有100kDa Pellicon 2Cassette滤膜(Merck Millipore,US)的MasterFlex泵系统(Cole-Parmer,US)通过微滤浓缩至50ml或更少的体积。将浓缩的上清液再次用0.22μm滤器过滤后，使用二喹啉甲酸(BCA)测定法对蛋白质进行定量，并对获得的囊泡(MDH-204)进行以下实验。

实施例2.少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡经口服施用后的药代动力学特性的确认

为了研究少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡经口服施用后的药代动力学特性，通过将用荧光染色试剂染色的囊泡口服施用给小鼠，测量从即将施用前到施用后72小时的体内和各器官中表达的荧光。使用光学成像系统(Davinch-Invivo Fluoro Chemi(western)；Davinch-K)观察来自整只小鼠的荧光信号。此外，为了评估囊泡施用后作为主要器官的分布模式，收集脑、血液、心脏、肺、肝、胃、脾、小肠、大肠和肾，使用光学成像系统(Davinch-Invivo Fluoro Chemi(western)；Davinch-K)观察荧光信号。

如图1a所示，确认了荧光染色的少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡随时间逐渐在体内扩散。当分别观察各器官时，口服施用后1小时在胃中观察到少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的荧光信号，从3小时起在小肠、大肠、肺中观察到荧光信号。

此外，如图1b所示，确认了从24小时起在脑中特异地观察到荧光信号，并且直到32小时该信号都被强烈检测到并且在经过48和72小时后显示出逐渐减弱的趋势。

通过上述结果可以看出，少动鞘氨醇单胞菌在口服施用时，其分布于中枢神经系统，并且排出体外。

实施例3.鲍曼不动杆菌来源的囊泡经口服施用后的药代动力学特性的确认

为了研究少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的药代动力学特性是否对外膜具有鞘脂的细菌或革兰氏阴性菌具有特异性，通过相同的方法通过向小鼠口服施用荧光染色试剂染色的鲍曼不动杆菌来源的囊泡来测量表达的荧光，该囊泡是在外膜中具有LPS而不是鞘脂的革兰氏阴性菌的囊泡。

如图2a所示，确认了口服施用鲍曼不动杆菌来源的囊泡后3小时在胃中观察到最强的荧光信号，并且在胃中确认的荧光信号随时间减少。

此外，如图2b所示，在鲍曼不动杆菌来源的囊泡的情况下，在脑中没有测量到荧光信号。从以上结果可以看出，在外膜中具有LPS的革兰氏阴性菌来源的囊泡与在外膜中具有鞘脂的革兰氏阴性菌来源的囊泡在脑组织中的分布模式存在很大差异。

实施例4.异常蛋白质引起的脑疾病小鼠模型中少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的 认知功能改善作用的确认

淀粉样前体蛋白(APP)和早老素1(PS1)转基因小鼠是通过过表达这两种异常蛋白质诱导的脑疾病小鼠模型。脑疾病小鼠模型是一种动物模型，其中从6.5个月开始沉积了组织学可检测的异常蛋白质斑块，并且在7至8个月的时间段检测到认知功能障碍。在将小鼠分为正常小鼠组(WT-CON)、假治疗脑疾病小鼠组(Tg-CON)和以50μg/小鼠的剂量口服施用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的脑疾病小鼠组(Tg-MDH-204)后，使用小鼠模型进行了行为和组织学检查，如图3所示。

为了通过在脑疾病小鼠模型中施用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡来评估认知功能，通过将WT+CON、Tg+CON和Tg+MDH-204中的每组暴露于新物体或位置改变的物体，测量了10分钟内小鼠找到物体所花费的时间，如图4上部所示。

如图4所示，证实了在2或24小时后测量的新物体识别测试(NOR)中，在WT+CON和Tg+MDH-204中发现新物体的时间更长，但在Tg+CON中没有变化。此外，证实了即使在新位置识别测试中，WT+CON和Tg+MDH-204需要很长时间才能找到重新定位的物体，但Tg+CON没有变化。

结果表明，少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡抑制了由异常蛋白质的产生引起的脑疾病小鼠的短期和长期认知功能障碍的进展。

实施例5.异常蛋白质引起的脑疾病小鼠模型中少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的 学习能力改善作用的确认

为了评估在由异常蛋白质的产生引起的脑疾小鼠模型中施用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的学习能力功效，如图5a所示，进行了训练小鼠在水瓶中寻找隐藏平台5天后找到隐藏平台的评估。

结果，如图5b所示，正常小鼠组(WT+CON，灰色)在5天的训练期间找到隐藏平台的时间最快，其中将少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡口服施用于退行性脑疾病小鼠模型的组(Tg+MDH-204，天蓝色)也表现出与WT+CON组相似的学习能力，但假治疗退行性脑疾病小鼠模型组(Tg-CON，橙色)表现出最慢的学习时间。

此外，如图5c所示，证实了即使在找到隐藏平台并停留的时间方面，WT+CON组在平台位停留时间较长，Tg+MDH-204组在平台位停留时间也明显长于假治疗脑疾病小鼠组。

通过该结果证实了，少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡对脑疾病小鼠的空间感知学习和记忆能力恢复具有治疗作用。

实施例6.异常蛋白质引起的脑疾病小鼠模型中少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的 记忆能力改善作用的确认

为了评估在由异常蛋白质的产生引起的脑疾病小鼠模型中施用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡对记忆能力改善的功效，如图6顶部所示，通过在小鼠进入暗室时对小鼠的爪子施加电击使小鼠学习与室内环境相关的恐惧和焦虑后，评估了小鼠在24、72和120小时内记住与恐惧/焦虑相关的事物的能力。

结果，如图6所示，证实了正常小鼠组(WT+CON)和施用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的脑疾病小鼠(Tg+MDH-204)的小鼠即使在实验过去24、72和120小时的时间点，在300秒后仍未进入暗室，但假治疗脑疾病小鼠组(Tg+CON)进入暗室的时间逐渐变快。

此外，当小鼠进入黑暗空间并受到电击时，WT+CON组因电击而僵硬的时间也明显长于假治疗脑疾病组(Tg+CON)，但与施用囊泡的脑疾病组(Tg+MDH-204)没有显著差异。

通过该结果可以看出，少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡具有抑制由异常蛋白质引起的记忆能力丧失的作用。

实施例7.异常蛋白质引起的脑疾病小鼠模型中少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡对 组织中异常蛋白质斑块形成的功效评估

淀粉样蛋白β(Aβ)斑块是病理条件下沉积在组织中的代表性异常蛋白质，在Tg-APP/PS1模型中，已知Aβ斑块开始在小鼠脑中积累并诱发阿尔茨海默病症状。因此，为了通过施用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡分析沉积在脑组织中的Aβ斑块，使用硫磺素-S染料对小鼠脑切片进行荧光染色。具体来说，将小鼠用2.5％阿佛丁麻醉，然后用0.9％生理盐水灌注。此后，使用4％多聚甲醛(在0.1M磷酸盐缓冲液中，pH 7.4)将小鼠脑在4℃固定过夜。使用Vibratom(Leica VT 1000S,Leica instruments,Mussloch,Germany)将经固定的小鼠脑切成40μm的切片。将自由漂浮的脑切片用1X PBS(137mM NaCl、2.7mM KCl、10mM Na₂HPO₄和1.8mM KH₂PO₄)洗涤3次，置于载玻片上并干燥。此后，脑切片用1mM硫黄素S(ThS；T1892,Sigma-Aldrich)染色5分钟。经染色载玻片分别用100％、95％和50％乙醇洗涤30秒，然后用1X PBS洗涤两次。载玻片使用封固剂(S3023,DAKO,Carpinteria,CA,USA)永久封固，然后储存在-20℃直至进行定量分析。使用配备DP71相机的Olympus BX51显微镜对经染色的组织进行拍照，然后使用MetaMorph Microscopy Automation&Image Analysis软件(Moleculardevice)程序进行分析。

结果，如图7a所示，可以证实，对于沉积在脑的顶叶皮质、海马体和梨状皮质区域的Aβ斑块的形成，在少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡治疗的脑疾病小鼠组(Tg+MDH-204)和假治疗脑疾病小鼠组(Tg+CON)之间存在差异。

此外，如图7b和7c所示，证实了与假治疗脑疾病小鼠组(Tg+CON)相比，在囊泡治疗的脑疾病小鼠组(Tg+MDH-204)中，沉积在脑顶叶皮质中的单位面积的Aβ斑块数量和Aβ斑块面积均显著增加。

通过结果可以看出，少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡在脑疾病小鼠模型中具有抑制脑组织异常蛋白质沉积的作用。

实施例8.脑疾病小鼠模型中少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的神经发生功效的评 估

基于以上实施例，为了评估神经发生以研究施用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的脑疾病小鼠模型中出现的神经元功能改善的治疗机制，通过用被称为神经干细胞增殖标志物的Ki67对细胞进行荧光染色确认了用Ki67染色的细胞数量。

如图8a和8b所示，与正常组(WT+CON)相比，在假治疗脑疾病组(Tg+CON)中观察到被Ki-67染色的细胞数量显著减少。另一方面，与假治疗脑疾病组(Tg+CON)相比，少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡治疗的脑疾病组(Tg+MDH-204)中Ki-67染色的细胞数量显著增加，并恢复到与正常小鼠组相似的程度。

此外，为了评估少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡在神经干细胞分化和迁移中的功效，对神经干细胞进行双皮质素(DCX)荧光染色，DCX是与神经干细胞的分化和迁移相关的标志物。

结果，如图9a和9b所示，与正常小鼠组(WT+CON)相比，假施用的脑疾病小鼠组(Tg+CON)中DCX阳性细胞的数量显著减少，证实了在施用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的脑疾病小鼠组(Tg+MDH-204)中DCX阳性细胞的数量显著恢复。

通过该结果可以看出，少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡在脑疾病小鼠模型中诱导神经发生，并通过神经发生抑制由异常蛋白质产生引起的脑疾病的发作和病程。

实施例9.异常蛋白质引起的脑疾病小鼠模型中少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡对神经间完整性的功效的评估

基于上述实施例，为了评估神经间完整性对施用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的脑疾病小鼠模型中表现的神经功能改善的作用，评估了分化的神经细胞的树突形成(树突过程)。由于树突的形态和数量的变化对于神经细胞之间的信号传导很重要，因此使用微管相关蛋白2(MAP2)的表达来评估这些变化，MAP2是众所周知的神经细胞特异性细胞骨架蛋白。

结果，如图10b和10c所示，与正常小鼠组(WT+CON)相比，假施用的脑疾病小鼠组(Tg+CON)中MAP2的表达显著降低，表明在对脑疾病小鼠施用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的组(Tg+MDH-204)中MAP2的表达显著恢复。

通过这些结果，可以看出，少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡通过形成神经细胞树突来增加神经元间的完整性，从而调节脑疾病的发作或病程。

实施例10.少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡对异常蛋白质引起的神经营养因子表达 的治疗效果的确认

当神经干细胞和神经细胞暴露于各种应激时，神经发生的能力就会下降。神经营养蛋白是一组生长因子蛋白，其对神经干细胞的增殖以及经分化的神经细胞的存活和功能至关重要。包括人类在内的哺乳动物的脑在胎儿期产生神经细胞，但神经干细胞存在于海马体和纹状体区域，因此即使在出生后也会发生成体神经发生。脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养蛋白-3(NT-3)、NT4/5、神经生长因子(NGF)等是与神经干细胞和神经细胞的存活和功能相关的神经营养因子的代表。其中，BDNF是存在于中枢和周围神经系统中的一种蛋白质，不仅通过TrkB受体增加存在于脑和周围神经系统中的神经细胞的存活和突触形成，而且诱导神经干细胞的增殖和分化。

因此，为了评估少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡对异常蛋白质抑制的神经发生的治疗机制，用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡处理神经细胞，然后评估神经营养蛋白及其受体TrkB基因的表达模式。作为评估基因表达的方法，使用裂解缓冲液裂解细胞，提取基因，并使用RT-PCR定量基因表达。使用对BDNF、NT3、NT4/5、NGF和TrkB mRNA基因具有特异性的引物评估基因表达的程度。RT-PCR所用引物的具体序列如下表1所示。

[表1]

结果，如图11所示，当用异常蛋白质β-淀粉样蛋白(Aβ)处理神经细胞时，与PBS处理的阴性对照相比，BDNF和NGF基因的表达显著增加，并且当用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡进行处理时，这些基因的表达恢复到与阴性对照相同的程度。此外，被Aβ蛋白抑制的BDNF受体TrkB基因的表达也被囊泡恢复到等于或大于阴性对照的程度。

通过上述结果，证实了少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡通过增加BDNF、NGF及其受体TrkB基因的表达而增加了神经发生和神经元完整性。

实施例11.少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡对异常蛋白质引起的细胞衰老的治疗效 果的确认

当神经干细胞和神经细胞反复暴露于各种应激时，氧化应激会导致细胞内的基因损伤，导致神经细胞衰老和神经细胞异常死亡。去乙酰化酶是一种信号传导蛋白，在低热量、压力大的情况下维持细胞稳态。在去乙酰化酶蛋白中，去乙酰化酶1是一种存在于细胞核和细胞质中抗衰老蛋白，作为一种脱乙酰酶，抑制炎症并增加细胞在代谢应激时的存活率。去乙酰化酶5是一种存在于线粒体中的蛋白质，具有脱丙二酰酶、脱琥珀酰酶和脱乙酰酶功能，调节线粒体中的氨毒性以维持线粒体功能。去乙酰化酶7蛋白是一种存在于细胞核内核仁中的蛋白质，具有脱乙酰酶功能，从而修复rDNA损伤以在核糖体中正常产生蛋白质。

此外，HDAC2是调节记忆的基因的主要调节因子，在神经系统疾病或精神疾病的情况下HDAC2升高以阻断此类基因的表达，因此已知，当HDAC2的活性被阻断或HDAC2的浓度降低时，学习记忆所需的此类基因的表达阻断被阻止，表达得以恢复。

因此，为了评估少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡对氧化应激引起的神经细胞衰老的治疗效果，用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡处理神经细胞，然后评估HDAC选择性抑制或去乙酰化酶基因的表达模式。作为用于评估基因表达的方法，使用裂解缓冲液裂解细胞，提取基因，并使用RT-PCR定量基因表达。使用对HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、Sirt1、Sirt5和Sirt7具有特异性的引物来评估基因表达的程度。引物的具体序列如下表2所示。

[表2]

如图12所示，证实了当用异常蛋白质β-淀粉样蛋白(Aβ)处理神经细胞时，与PBS处理的阴性对照相比，HDAC2和HDAC5基因的表达显著增加，并且当用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡进行处理时，HDAC2的表达被选择性抑制。

此外，与PBS处理的阴性对照相比，β-淀粉样蛋白(Aβ)处理也降低了Sirt1、Sirt5和Sirt7基因的表达。另一方面，当用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡进行处理时，表达被Aβ蛋白降低的Sirt1、Sirt5和Sirt7基因的表达显著增加。

通过上述结果，证实了少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡不仅增加存在于细胞核、细胞质和线粒体中的Sirt1、Sirt5和Sirt7基因的表达，而且选择性地抑制HDAC2以抑制神经细胞的衰老。

实施例12.少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的抗炎作用的确认

基于这些结果，为了评估少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的抗炎作用，在将小鼠巨噬细胞用不同浓度(0.1、1和10μg/ml)的少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡预处理12小时后，用1μg/ml的大肠杆菌来源的囊泡处理细胞，该囊泡是引起炎症性疾病的致病性囊泡，并且12小时后，通过ELISA测量炎症性细胞因子的分泌。

对于ELISA分析，将捕获抗体在PBS中稀释，并将各50μl稀释的捕获抗体等分到适合工作浓度的96孔聚苯乙烯板中，并使其在4℃反应过夜。此后，在用100μl PBST(含0.05％Tween 20的PBS)溶液洗涤抗体2次后，等分100μl RD(含1％ BSA的PBST)溶液，并且在室温封闭1小时，然后在将抗体再次用100μl PBST洗涤2次后，将样品和标准品各50μl等分至适当浓度，并在室温反应2小时。再次用100μl PBST洗涤抗体2次后，以适合工作浓度的各50μl等分，并且在室温反应2小时。抗体再次用100μl PBST洗涤两次后，将Strpetavidin-HRP在RD中稀释至1/200，各50μl等分，并在室温反应30分钟。最后，在将抗体用100μl PBST洗涤3次后，等分50μl的TMB底物与0.04％过氧化氢的1:1混合溶液，然后，在等待显色的过程中，在5至20分钟后显色时，通过等分50μl的1M硫酸溶液停止反应，并使用Synergy^TM HT多检测酶标仪(BioTek,USA)在450nm处测量吸光度。

如图13所示，证实了在用少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡进行预处理时，大肠杆菌来源的囊泡诱导的TNF-α分泌受到抑制。特别是，确认了TNF-α的分泌抑制效果依赖于少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡的处理浓度。

这意味着少动鞘氨醇单胞菌来源的囊泡可以通过抑制致病因子引起的炎性细胞分泌的炎性介质的分泌，从而有效抑制炎症诱发的疾病。

提供本发明的上述描述是为了说明的目的，并且本发明所属领域的普通技术人员将理解，在不改变本发明的技术精神或本质特征的情况下，可以容易地将本发明修改为其它特定形式。因此，应当理解上述实施例在所有方面仅是说明性的而不是限制性的。

[产业适用性]

本发明人证实了，当口服施用来源于外膜中具有LPS的革兰氏阴性菌的囊泡时，脑中没有囊泡分布，但是当口服施用来源于外膜中具有鞘脂的鞘氨醇单胞菌属细菌的少动鞘氨醇单胞菌的囊泡时，囊泡被递送至脑。此外，本发明人证实了，当将来源于少动鞘氨醇单胞菌的囊泡口服施用于脑疾病小鼠模型时，不仅与认知功能相关的行为障碍而且异常蛋白质沉积都受到抑制。此外，本发明人证实了，在疾病模型中，来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡不仅通过增强神经干细胞的增殖和分化，而且通过增强神经元间的完整性而表现出治疗效果。此外，本发明人证实了，来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作用于神经细胞以增加作为诱导神经发生的神经营养因子的BDNF和防止因应激引起的细胞衰老的去乙酰化酶蛋白的表达，结果，通过神经发生产生治疗效果。

因此，根据本发明的来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡可用作预防、减轻或治疗神经系统疾病或精神疾病的药物，具有工业实用性。

序列表

<110> MD保健株式会社（MD HEALTHCARE INC.）

<120> 包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡的用于预防或治疗神经系统疾病或精神疾病的组合物

<130> MPO22-142CN

<150> KR 10-2020-0170221

<151> 2020-12-08

<150> KR 10-2021-0156952

<151> 2021-11-15

<160> 26

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 总Bdnf_F

<400> 1

tggctgacac ttttgagcac 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 总Bdnf_R

<400> 2

gtttgcggca tccaggtaat 20

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NT3_F

<400> 3

tactacggca acagagacg 19

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NT3_R

<400> 4

gttgcccaca taatcctcc 19

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NT4/5_F

<400> 5

ggctccatcc tgaacatcat 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NT4/5_R

<400> 6

gccatgatct acctgcctgt 20

<210> 7

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Ngf_F

<400> 7

agcattccct tgacacag 18

<210> 8

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Ngf_R

<400> 8

ggtctacagt gatgttgc 18

<210> 9

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TrkB_F

<400> 9

aaggactttc atcgggaagc tg 22

<210> 10

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TrkB_R

<400> 10

tcgccctcca cacagacac 19

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC1_F

<400> 11

cagtgtggct cagattccct 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC1_R

<400> 12

gggcagctca ttagggatct 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC2_F

<400> 13

gggacaggct tggttgtttc 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC2_R

<400> 14

gagcatcagc aatggcaagt 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC3_F

<400> 15

agagaggtcc cgaggagaac 20

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC3_R

<400> 16

actcttgggg acacagcatc 20

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC4_F

<400> 17

caatcccaca gtctccgtgt 20

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC4_R

<400> 18

cagcacccca ctaaggttca 20

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC5_F

<400> 19

tgtcaccgcc agatgttttg 20

<210> 20

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC5_R

<400> 20

tgagcagagc cgagacacag 20

<210> 21

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Sirt1_F

<400> 21

gatccttcag tgtcatggtt c 21

<210> 22

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Sirt1_R

<400> 22

atggcaagtg gctcatca 18

<210> 23

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Sirt5_F

<400> 23

atcgcaaggc tggcaccaag aa 22

<210> 24

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Sirt5_R

<400> 24

ctaaagctgg gcagatcgga ct 22

<210> 25

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Sirt7_F

<400> 25

gagagcgagg atctggtgac 20

<210> 26

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Sirt7_R

<400> 26

cgtgtagaca accaagtgcc 20

Claims (28)

1.一种用于预防或治疗神经系统疾病或精神疾病的药物组合物，包含来源于鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)细菌的囊泡作为活性成分。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述神经系统疾病是选自由以下组成的组中的一种或多种：阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿病、癫痫、黄斑变性、青光眼、卡恩斯-赛尔综合征(KSS)、慢性进行性外眼肌麻痹(CPEO)、线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作(MELAS)、肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维综合征(MERRF)、神经源性无力伴共济失调和视网膜色素变性(NARP)、Leigh综合征(LS)、线粒体隐性共济失调综合征(MIRAS)、多发性硬化症、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、嗅觉障碍、耳聋、糖尿病性视网膜病变和糖尿病性神经病变。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述精神疾病是选自由以下组成的组中的一种或多种：注意力缺陷多动综合征、双相障碍、焦虑障碍、精神分裂症、强迫症、创伤后应激障碍、解离性障碍、进食障碍、物质使用障碍和人格障碍。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述疾病是由神经营养蛋白介导的疾病。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中所述神经营养蛋白是脑源性神经营养因子(BDNF)或神经生长因子(NGF)。

6.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡增加选自由去乙酰化酶1(Sirt1)、Sit5和Sirt7组成的组中的一种或多种的表达。

7.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述鞘氨醇单胞菌属细菌是选自由以下组成的组的属中的一种或多种细菌：鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、鞘脂菌属(Sphingobium)、新鞘脂菌属(Novospingobium)、Sphingosinicella和Sphingopyxis。

8.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述鞘氨醇单胞菌属细菌是选自由以下组成的组中的一种或多种：Sphingomonas abaci、粘连鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasadhaesiva)、气生鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas aerolata)、嗜气鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas aerophila)、七叶鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas aestuarii)、阿拉斯加鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas alaskensis)、高山鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas alpina)、水生鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas aquatilis)、噬香鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasaromaticivorans)、不解糖鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas asaccharolytica)、产虾青素鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas astaxanthinifaciens)、橙色鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasaurantiaca)、固氮鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas azotifigens)、Sphingomonasbaekryungensis、荚膜鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas capsulate)、加拿大鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas Canadensis)、长白鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas changbaiensis)、氯酚鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas chlorophenolica)、Sphingomonas chungbukensis、Sphingomonas cloacae、Sphingomonas cynarae、大涌鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasdaechungensis)、Sphingomonas desiccabilis、独岛鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasdokdonensis)、海胆鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas echinoides)、Sphingomonas elodea、Sphingomonas endophytica、干草鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas faeni)、芬兰鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas fennica)、黄色鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas flava)、福尔摩森鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas formosensis)、Sphingomonas gei、广微所鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas gimensis)、人参土鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas ginsengisoli)、转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas ginsenosidimutans)、冰川鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas glacialis)、广东鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas guangdongensis)、嗜卤芳香族物鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas haloaromaticamans)、韩泰鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas hankookensis)、食除草剂鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasherbicidovorans)、溶组氨酸鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas histidinilytica)、印度氨酸鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas indica)、Sphingomonas insulae、日本氨酸鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas japonica)、Sphingomonas jaspsi、Sphingomonas jejuensis、Sphingomonas jinjuensis、凯斯特鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas kaistensis)、韩国鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas koreensis)、Sphingomonas kyeonggiensis、Sphingomonaskyungheensis、Sphingomonas lacus、Sphingomonas laterariae、莱迪氏鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas leidyi)、解聚乙二醇鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas macrogoltabidus)、苹果鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas mali)、瓜类鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas melonis)、Sphingomonas molluscorum、诺丽鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas morindae)、粘膜鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas mucosissima)、Sphingomonas naasensis、Sphingomonas natatoria、寡噬香鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas oligoaromativorans)、寡酚鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas oligophenolica)、Sphingomonas oryziterrae、潘尼鞘脂单胞菌(Sphingomonas panni)、类少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas parapaucimobilis)、少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)、叶际鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasphyllosphaerae)、Sphingomonas pituitosa、多噬香鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaspolyaromaticivorans)、李鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas pruni)、伪血鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas pseudosanguinis)、橘黄嗜冷鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaspsychrolutea)、玫瑰鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas rosa)、玫瑰黄鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas roseiflava)、红色鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas rubra)、血红鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sanguinis)、胞外多聚物鞘氨醇单胞菌(Sphingomonassanxanigenens)、栖沉积物鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sediminicola)、土壤鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas soli)、Sphingomonas starnbergensis、Sphingomonas stygia、Sphingomonas subarctica、Sphingomonas suberifaciens、Sphingomonas subterranea、Sphingomonas taejonensis、土生鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas terrae)、Sphingomonastrueperi、Sphingomonas ursincola、Sphingomonas vulcanisoli、维氏鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas wittichii)、食异源物鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas xenophaga)、新疆鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas xinjiangensis)、Sphingomonas yabuuchiae、盐亭鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas yantingensis)、矢野氏鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas yanoikuyae)、云南鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas yunnanensis)和玉米鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaszeae)。

9.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述囊泡的平均直径为10至1000nm。

10.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述囊泡分离自鞘氨醇单胞菌属细菌的培养液。

11.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述囊泡由鞘氨醇单胞菌属细菌天然或人工分泌。

12.一种用于预防或减轻神经系统疾病或精神疾病的食品组合物，包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作为活性成分。

13.根据权利要求12所述的食品组合物，其中所述神经系统疾病是选自由以下组成的组中的一种或多种：阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿病、癫痫、黄斑变性、青光眼、卡恩斯-赛尔综合征(KSS)、慢性进行性外眼肌麻痹(CPEO)、线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作(MELAS)、肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维综合征(MERRF)、神经源性无力伴共济失调和视网膜色素变性(NARP)、Leigh综合征(LS)、线粒体隐性共济失调综合征(MIRAS)、多发性硬化症、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、嗅觉障碍、耳聋、糖尿病性视网膜病变和糖尿病性神经病变。

14.根据权利要求12所述的食品组合物，其中所述鞘氨醇单胞菌属细菌是选自由以下组成的组的属中的一种或多种细菌：鞘氨醇单胞菌属、鞘脂菌属、新鞘脂菌属、Sphingosinicella和Sphingopyxis。

15.根据权利要求12所述的食品组合物，其中所述鞘氨醇单胞菌属细菌是选自由以下组成的组中的一种或多种：Sphingomonas abaci、粘连鞘氨醇单胞菌、气生鞘氨醇单胞菌、嗜气鞘氨醇单胞菌、七叶鞘氨醇单胞菌、阿拉斯加鞘氨醇单胞菌、高山鞘氨醇单胞菌、水生鞘氨醇单胞菌、噬香鞘氨醇单胞菌、不解糖鞘氨醇单胞菌、产虾青素鞘氨醇单胞菌、橙色鞘氨醇单胞菌、固氮鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas baekryungensis、荚膜鞘氨醇单胞菌、加拿大鞘氨醇单胞菌、长白鞘氨醇单胞菌、氯酚鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas chungbukensis、Sphingomonas cloacae、Sphingomonas cynarae、大涌鞘氨醇单胞菌、Sphingomonasdesiccabilis、独岛鞘氨醇单胞菌、海胆鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas elodea、Sphingomonas endophytica、干草鞘氨醇单胞菌、芬兰鞘氨醇单胞菌、黄色鞘氨醇单胞菌、福尔摩森鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas gei、广微所鞘氨醇单胞菌、人参土鞘氨醇单胞菌、转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌、冰川鞘氨醇单胞菌、广东鞘氨醇单胞菌、嗜卤芳香族物鞘氨醇单胞菌、韩泰鞘氨醇单胞菌、食除草剂鞘氨醇单胞菌、溶组氨酸鞘氨醇单胞菌、印度氨酸鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas insulae、日本氨酸鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas jaspsi、Sphingomonas jejuensis、Sphingomonas jinjuensis、凯斯特鞘氨醇单胞菌、韩国鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas kyeonggiensis、Sphingomonas kyungheensis、Sphingomonaslacus、Sphingomonas laterariae、莱迪氏鞘氨醇单胞菌、解聚乙二醇鞘氨醇单胞菌、苹果鞘氨醇单胞菌、瓜类鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas molluscorum、诺丽鞘氨醇单胞菌、粘膜鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas naasensis、Sphingomonas natatoria、寡噬香鞘氨醇单胞菌、寡酚鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas oryziterrae、潘尼鞘脂单胞菌、类少动鞘氨醇单胞菌、少动鞘氨醇单胞菌、叶际鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas pituitosa、多噬香鞘氨醇单胞菌、李鞘氨醇单胞菌、伪血鞘氨醇单胞菌、橘黄嗜冷鞘氨醇单胞菌、玫瑰鞘氨醇单胞菌、玫瑰黄鞘氨醇单胞菌、红色鞘氨醇单胞菌、血红鞘氨醇单胞菌、胞外多聚物鞘氨醇单胞菌、栖沉积物鞘氨醇单胞菌、土壤鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas starnbergensis、Sphingomonasstygia、Sphingomonas subarctica、Sphingomonas suberifaciens、Sphingomonassubterranea、Sphingomonas taejonensis、土生鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas trueperi、Sphingomonas ursincola、Sphingomonas vulcanisoli、维氏鞘氨醇单胞菌、食异源物鞘氨醇单胞菌、新疆鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas yabuuchiae、盐亭鞘氨醇单胞菌、矢野氏鞘氨醇单胞菌、云南鞘氨醇单胞菌和玉米鞘氨醇单胞菌。

16.根据权利要求12所述的食品组合物，其中所述囊泡的平均直径为10至1000nm。

17.根据权利要求12所述的食品组合物，其中所述囊泡分离自鞘氨醇单胞菌属细菌的培养液。

18.根据权利要求12所述的食物组合物，其中所述囊泡由鞘氨醇单胞菌属细菌天然或人工分泌。

19.一种用于预防或减轻神经系统疾病或精神疾病的吸入组合物，包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作为活性成分。

20.根据权利要求19所述的吸入组合物，其中所述神经系统疾病是选自由以下组成的组中的一种或多种：阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿病、癫痫、黄斑变性、青光眼、卡恩斯-赛尔综合征(KSS)、慢性进行性外眼肌麻痹(CPEO)、线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作(MELAS)、肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维综合征(MERRF)、神经源性无力伴共济失调和视网膜色素变性(NARP)、Leigh综合征(LS)、线粒体隐性共济失调综合征(MIRAS)、多发性硬化症、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、嗅觉障碍、耳聋、糖尿病性视网膜病变和糖尿病性神经病变。

21.根据权利要求19所述的吸入组合物，其中所述鞘氨醇单胞菌属细菌是选自由以下组成的组的属中的一种或多种细菌：鞘氨醇单胞菌属、鞘脂菌属、新鞘脂菌属、Sphingosinicella和Sphingopyxis。

22.根据权利要求19所述的吸入组合物，其中所述鞘氨醇单胞菌属细菌是选自由以下组成的组中的一种或多种：Sphingomonas abaci、粘连鞘氨醇单胞菌、气生鞘氨醇单胞菌、嗜气鞘氨醇单胞菌、七叶鞘氨醇单胞菌、阿拉斯加鞘氨醇单胞菌、高山鞘氨醇单胞菌、水生鞘氨醇单胞菌、噬香鞘氨醇单胞菌、不解糖鞘氨醇单胞菌、产虾青素鞘氨醇单胞菌、橙色鞘氨醇单胞菌、固氮鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas baekryungensis、荚膜鞘氨醇单胞菌、加拿大鞘氨醇单胞菌、长白鞘氨醇单胞菌、氯酚鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas chungbukensis、Sphingomonas cloacae、Sphingomonas cynarae、大涌鞘氨醇单胞菌、Sphingomonasdesiccabilis、独岛鞘氨醇单胞菌、海胆鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas elodea、Sphingomonas endophytica、干草鞘氨醇单胞菌、芬兰鞘氨醇单胞菌、黄色鞘氨醇单胞菌、福尔摩森鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas gei、广微所鞘氨醇单胞菌、人参土鞘氨醇单胞菌、转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌、冰川鞘氨醇单胞菌、广东鞘氨醇单胞菌、嗜卤芳香族物鞘氨醇单胞菌、韩泰鞘氨醇单胞菌、食除草剂鞘氨醇单胞菌、溶组氨酸鞘氨醇单胞菌、印度氨酸鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas insulae、日本氨酸鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas jaspsi、Sphingomonas jejuensis、Sphingomonas jinjuensis、凯斯特鞘氨醇单胞菌、韩国鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas kyeonggiensis、Sphingomonas kyungheensis、Sphingomonaslacus、Sphingomonas laterariae、莱迪氏鞘氨醇单胞菌、解聚乙二醇鞘氨醇单胞菌、苹果鞘氨醇单胞菌、瓜类鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas molluscorum、诺丽鞘氨醇单胞菌、粘膜鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas naasensis、Sphingomonas natatoria、寡噬香鞘氨醇单胞菌、寡酚鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas oryziterrae、潘尼鞘脂单胞菌、类少动鞘氨醇单胞菌、少动鞘氨醇单胞菌、叶际鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas pituitosa、多噬香鞘氨醇单胞菌、李鞘氨醇单胞菌、伪血鞘氨醇单胞菌、橘黄嗜冷鞘氨醇单胞菌、玫瑰鞘氨醇单胞菌、玫瑰黄鞘氨醇单胞菌、红色鞘氨醇单胞菌、血红鞘氨醇单胞菌、胞外多聚物鞘氨醇单胞菌、栖沉积物鞘氨醇单胞菌、土壤鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas starnbergensis、Sphingomonasstygia、Sphingomonas subarctica、Sphingomonas suberifaciens、Sphingomonassubterranea、Sphingomonas taejonensis、土生鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas trueperi、Sphingomonas ursincola、Sphingomonas vulcanisoli、维氏鞘氨醇单胞菌、食异源物鞘氨醇单胞菌、新疆鞘氨醇单胞菌、Sphingomonas yabuuchiae、盐亭鞘氨醇单胞菌、矢野氏鞘氨醇单胞菌、云南鞘氨醇单胞菌和玉米鞘氨醇单胞菌。

23.根据权利要求19所述的吸入组合物，其中所述囊泡的平均直径为10至1000nm。

24.根据权利要求19所述的吸入组合物，其中所述囊泡分离自鞘氨醇单胞菌属细菌的培养液。

25.根据权利要求19所述的吸入组合物，其中所述囊泡由鞘氨醇单胞菌属细菌天然或人工分泌。

26.一种用于预防或治疗神经系统疾病或精神疾病的方法，所述方法包括将包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作为活性成分的组合物施用于受试者。

27.包含来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡作为活性成分的组合物在预防或治疗神经系统疾病或精神疾病中的用途。

28.来源于鞘氨醇单胞菌属细菌的囊泡在生产用于预防或治疗神经系统疾病或精神疾病的药物中的用途。