RU2819806C1 - Композиция для предотвращения или лечения неврологических или психических нарушений, содержащая внеклеточные везикулы, полученные из lactobacillus paracasei - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к композиции для предотвращения, улучшения или лечения неврологического нарушения или психического расстройства, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента. В результате исследований было установлено, что при введении везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, трансгенным животным с моделью неврологического нарушения эффективно подавляются нарушения нервно-мозговой функции, а также при введении везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, животным с моделью психического расстройства вследствие нервно-психического стресса эффективно подавляются нарушения психической функции вследствие стресса и сопутствующие поведенческие нарушения. Таким образом, согласно настоящему изобретению везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, могут эффективно применяться для создания фармацевтической или функциональной оздоровительной продукции для лечения и предупреждения дегенеративных заболеваний, выбранных из группы, состоящей из легких когнитивных нарушений, деменции и болезни Альцгеймера или нервно-психического стресса. 8 н. и 9 з.п. ф-лы, 16 ил., 11 пр.

Description

Область техники

Настоящее изобретение имеет отношение к композиции для предотвращения, улучшения или лечения неврологического нарушения или психического расстройства, содержащей внеклеточные везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента и тому подобное.

Эта заявка заявляет приоритет и преимущество Корейских патентных заявок № 10-2020-0072685 и 10-2020-0169167, поданных в Ведомство по интеллектуальной собственности Республики Корея 16 июня 2020 и 7 декабря 2020, соответственно, при этом содержание, раскрытое в подробном описании и чертежах данных заявок, включается в эту заявку.

Уровень техники

С начала 21-ого века острые инфекционные заболевания, в прошлом признаваемые эпидемическими болезнями, становятся менее важными, в то время как хронические заболевания, сопровождаемые дисфункцией иммунной системы, вызванной дисгармонией между человеком и микробиомом, изменяют клиническую картину болезни как основные заболевания, определяющие качество и продолжительность жизни человека. В частности, дегенеративные заболевания мозга, такие как деменция, болезнь Паркинсона, заболевания аутического спектра и болезнь Лу Геринга, психические расстройства, такие как стрессовое расстройство и депрессия, и тому подобные как, например, с трудом поддающиеся лечению хронические заболевания в стареющем возрастном обществе 21-ого века, становятся существенной проблемой для здоровья людей в качестве основных болезней, которые определяют качество и продолжительность жизни человека.

Разрушение нервных клеток (нейронов) приводит к патологическим изменениям в структуре и функционировании нервной ткани мозга вследствие смерти нервных клеток. Многие нейродегенеративные болезни, такие как амиотрофический латеральный склероз (болезнь Лу Геринга), болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, фатальная семейная бессонница и болезнь Хантингтона возникают в результате нейродегенеративного процесса. Кроме того, такие болезни как синдром Кернса-Сейра (KSS), хроническая прогрессирующая внешняя офтальмоплегия (CPEO), митохондриальная энцефаломиопатия с лактоацидозом и инсультоподобными эпизодами (MELAS), миоклоническая эпилепсия с разорванными красными волокнами (MERRF), слабость нервного происхождения с атаксией и пигментной дистрофией сетчатки (NARP), синдром Лейга (LS) и синдром митохондриальной рецессивной атаксии также возникают в результате дегенеративных изменений в нервных клетках. Такие болезни являются неизлечимыми и таким образом, приводят к прогрессирующей дегенерации и/или смерти нервных клеток.

Поскольку исследования механизма патогенеза этих заболеваний делают успехи, было обнаружено много схожего для понимания таких болезней на субклеточном уровне. Обнаружение такого сходства внушает надежду на развитие таких способов лечения, которые могут одновременно исправлять многие заболевания. Было обнаружено, что в развитии различных дегенеративных неврологических нарушений важную роль играют вырабатываемые аномальные белки, приводящие к апоптозу. В тканях мозга пациента с дегенеративным неврологическим нарушением за счет накопления аутофагосом повышается аутофагия, которая играет важную роль в устранении неправильно свернутых белков, аномально образующиеся в ходе развития дегенеративного неврологического нарушения. Недавно, в рамках исследований патогенеза клеточного старения был подтвержден тот факт, что клеточное старение вызывается различными стрессами, и в частности, что AMPK сигналы, активированные метаболическим стрессом, препятствуют клеточному старению путем увеличения аутофагии.

Известно, что накопление мутаций в митохондриальной ДНК (mtДНК) и чрезмерное продуцирование активных форм кислорода (ROS) способствуют старению нервных клеток. Соответствующая выработка активных форм кислорода подавляет клеточное старение путем постоянного активирования AMPK сигналов, однако чрезмерное продуцирование избыточных активных форм кислорода вызывает нарушения митохондриальных функций, тем самым приводя к клеточной смерти. Такие болезни, как синдром Кернса-Сейра (KSS), хроническая прогрессирующая внешняя офтальмоплегия (CPEO), митохондриальная энцефаломиопатия с лактоацидозом и инсультоподобными эпизодами (MELAS), миоклоническая эпилепсия с разорванными красными волокнами (MERRF), слабость нервного происхождения с атаксией и пигментной дистрофией сетчатки (NARP), синдром Лейга (LS) и синдром митохондриальной рецессивной атаксии, вероятно, возникают вследствие мутаций в митохондриальной ДНК, вызванных активными формами кислорода, которые вырабатываются в митохондриях, приводя к митохондриальной дисфункции и клеточному старению, что является причиной дегенеративных нервных заболеваний.

Вместе с тем, депрессия является расстройством, при котором функция мозга, регулирующая эмоции, изменена, при этом проявляются отрицательные эмоции, и это заболевание поражает 300 миллионов людей по всему миру или больше. Депрессия связана с химическим дисбалансом нейромедиаторов, таких как дофамин, серотонин и норэпинефрин. Из их числа серотонин является нейромедиатором, найденным в спинномозговой жидкости, он циркулирует в мозге и функционирует как нейромедиатор. Серотонин тесно связан с выражением эмоций, при этом недостаток серотонина может стать причиной эмоциональной нестабильности, что приводит к увеличению чувства страха и беспокойства и появлению импульсивных стремлений. В связи с этим, из числа фармацевтических средств, используемых в настоящее время в качестве терапевтических средств при депрессии, многие фармацевтические препараты подавляют обратное всасывание серотонина с тем, чтобы серотонин оставался в мозге в течение длительного времени.

Недавно было обнаружено, что психические нарушения, такие как депрессия, аутизм и шизофрения, тесно связаны с болью в области живота. Боль в животе сопровождается диареей и запором и при повторении ведет к синдрому раздраженного кишечника, который, как было установлено, связан с дисбактериозом в кишечнике. Сообщалось, что в случае, когда дисбаланс бактерий в кишечнике появляется в результате применения некачественных продуктов, антибиотиков и тому подобного, вредные кишечные микроорганизмы проникают через защитные мембраны здоровой толстой кишки, вызывая «подтекание» кишечника, и тогда токсины, происходящие от вредных бактерий, поглощаются и попадают в системный кровоток, вызывая или усиливая депрессию [Pharmacotherapy. 2015 Oct; 35(10): 910-6].

Известно, что число микроорганизмов, которые сосуществуют в организме человека, достигает 100 триллионов, что составляет примерно в 10 раз больше, чем число человеческих клеток, а количество генов микроорганизмов в 100-раз больше, чем человеческих. Микробиота и микробиом относится к сообществу микроорганизмов, включая бактерий, архей и эукариотов, присутствующих в данном месте обитания.

Бактерии, сосуществующие с нашим организмом, и бактерии, существующие в окружающей среде, секретируют наноразмерные везикулы для того, чтобы обмениваться информацией, такой как гены, низкомолекулярные соединения и белки, с другими клетками. Слизистая оболочка создает естественную защитную мембрану, через которую не могут проходить частицы, имеющие размер 200 нанометров (нм) или более, так что бактерии, сосуществующие в слизистой оболочке не могут проходить через слизистую, однако, производимые бактериями внеклеточные везикулы имеют размер приблизительно от 20 до 200 нанометров, и таким образом, относительно свободно «просеиваются» через эпителиальные клетки слизистой оболочки, чтобы абсорбироваться в нашем организме. Местносекретируемые бактериями внеклеточные везикулы абсорбируются через эпителиальные клетки слизистой оболочки, чтобы индуцировать местный воспалительный ответ, и везикулы, прошедшие через эпителиальные клетки, попадают в системный кровоток и разносятся в соответствующие органы, чтобы регулировать иммунные и воспалительные ответы в этих органах. Например, внеклеточные везикулы, происходящие от патогенных грамотрицательных бактерий, таких как Eshcherichia coli, вызывают местный воспалительный ответ и рак, и способствуют системному воспалительному ответу и свертыванию крови вследствие воспалительного ответа васкулярных эндотелиальных клеток при абсорбции в кровеносные сосуды. Кроме того, такие везикулы абсорбируются в мышечные клетки, на которые оказывает действие инсулин, и тому подобные, вызывая резистентность к инсулину и диабет. В противоположность этому, внеклеточные везикулы, происходящие от полезных бактерий, могут абсорбироваться в специфических клетках соответствующих органов, чтобы подавить начало болезни путем регулирования основных иммунных функций и метаболической дисфункции.

Lactobacillus paracasei - это грамположительная бацилла, хорошо растущая не только в анаэробной окружающей среде, но и в аэробных условиях, и известна как полезная бактерия, сосуществующая с нашим организмом. Бактерия секретирует внеклеточные везикулы (EVs), имеющие двухслойную структуру, во внеклеточную окружающую среду для межклеточного обмена белками, липидами, генами и тому подобным. Внеклеточные везикулы, происходящие от грамположительной бактерии, такой как Lactobacillus paracasei, включают пептидогликан и липотейхоевую кислоту, которые являются компонентами бактериальных клеточных стенок, в дополнение к производимым бактериями белкам и нуклеиновым кислотам.

Однако еще не было случая, когда везикулы, секретируемые Lactobacillus paracasei, применялись для предотвращения или лечения неврологического нарушения или психического расстройства.

Раскрытие изобретения

Техническая проблема

В результате интенсивных исследований с целью решения вышеупомянутых проблем в предшествующем уровне техники, настоящие изобретатели установили, что выделенные из Lactobacillus paracasei везикулы, введенные перорально, доставлялись в мозг, причем, когда везикулы вводили перорально животным с моделью дегенеративного заболевания мозга, наблюдалось улучшение когнитивных функций, таких как память и способность к обучению, и подавлялось образование амилоидной бляшки, которая представляет собой аномальный белок, при этом механизм вышеупомянутой эффективности связан с увеличением пролиферации нервных клеток и формированием дендритов нервных клеток. Более того, для того, чтобы оценить, были ли эффективными везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в отношении психического расстройства вследствие нервно-психического стресса, настоящие изобретатели установили, что антистрессовое и антидепрессантное действие в случае введения везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, животному с моделью психического расстройства вследствие нервно-психического стресса было почти такое же, как и действие антидепрессанта имипрамина в отношении психического расстройства, тем самым изобретатели завершили настоящее изобретение.

Таким образом, целью настоящего изобретения является предоставление фармацевтической композиции для предотвращения или лечения неврологического нарушения или психического расстройства, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

В дополнение к этому, другой целью настоящего изобретения является предоставление пищевой композиции для предотвращения или улучшения неврологического нарушения или психического расстройства, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

Кроме того, еще одной целью настоящего изобретения является предоставление композиции для ингаляции, предназначенной для предотвращения или лечения неврологического нарушения или психического расстройства, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

Более того, еще одной целью настоящего изобретения является предоставление фармацевтической композиции для предотвращения или лечения старения, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

Вместе с тем, техническая задача, которая может достигаться с помощью настоящего изобретения, не ограничивается упомянутыми выше задачами, и другие проблемы, которые не упомянуты, могут быть отчетливо поняты специалистом в данной области техники из последующего описания.

Техническое решение

Для достижения описанной выше цели настоящего изобретения, настоящее изобретение предоставляет фармацевтическую композицию для предотвращения или лечения неврологического нарушения или психического расстройства, содержащую везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение предоставляет пищевую композицию для предотвращения или улучшения неврологического нарушения или психического расстройства, содержащую везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение предоставляет композицию, применяемую для ингаляции, для предотвращения или лечения неврологического нарушения или психического расстройства, содержащую везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение предоставляет фармацевтическую композицию для предотвращения или лечения старения, содержащую везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

В качестве иллюстративного варианта осуществления настоящего изобретения, неврологическое нарушение может быть одним или более из нарушений, выбранных из группы, состоящей из умеренного когнитивного нарушения, деменции, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона, амиотрофического латерального склероза (ALS), болезни Баттена, синдрома Кернса-Сейра (KSS), хронической прогрессирующей внешней офтальмоплегии (CPEO), митохондриальной энцефаломиопатии с лактоацидозом и инсультоподобными эпизодами (MELAS), миоклонической эпилепсии с разорванными красными волокнами (MERRF), слабости нервного происхождения с атаксией и пигментной дистрофией сетчатки (NARP).

В качестве другого иллюстративного варианта осуществления настоящего изобретения, психическое расстройство может быть одним или более нарушением, выбранным из группы, состоящей из тревожного расстройства, посттравматического стрессового расстройства (PTSD), панического расстройства, депрессии, расстройства аутического спектра, расстройства дефицита внимания с гиперактивностью (ADHD) и шизофрении, но без ограничения.

В качестве еще одного иллюстративного варианта осуществления настоящего изобретения везикулы могут иметь средний диаметр от 10 до 1000 нм, однако средний диаметр не ограничивается этим.

В качестве еще одного иллюстративного варианта осуществления настоящего изобретения везикулы могут быть выделены из культуральной среды Lactobacillus paracasei, но без ограничения.

В качестве еще одного иллюстративного варианта осуществления настоящего изобретения везикулы можно получить, используя везикулы, изолированные из пищи, приготовленной путем добавления Lactobacillus paracasei, но без ограничения.

В качестве еще одного иллюстративного варианта осуществления настоящего изобретения везикулы могут естественным путем или искусственно секретироваться из Lactobacillus paracasei, но без ограничения.

В качестве еще одного иллюстративного варианта осуществления настоящего изобретения старение может быть старением мозга или старением нервной клетки, но без ограничения.

Кроме того, настоящее изобретение предоставляет способ для предотвращения или лечения неврологического нарушения или психического расстройства, способ, включающий введение данной композиции индивидууму.

Кроме того, настоящее изобретение предоставляет применение везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, для предотвращения или лечения неврологического нарушения или психического расстройства.

Более того, настоящее изобретение предоставляет применение везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, для приготовления лекарственного средства для предотвращения или лечения неврологического нарушения или психического расстройства.

Кроме того, настоящее изобретение предоставляет способ для предотвращения, лечения или корректирования старения, способ, включающий введение индивидууму композиции, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

В дополнение к этому, настоящее изобретение обеспечивает применение композиции, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента для предотвращения, лечения или корректирования старения.

Более того, настоящее изобретение обеспечивает применение везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, для приготовления лекарственного средства для предотвращения или лечения старения.

Полезные эффекты

Настоящие изобретатели подтвердили, что везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, при пероральном введении доставлялись в мозг, а также подтвердили, что когда везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, вводили перорально животным с моделью дегенеративного неврологического нарушения, отмечалось улучшение памяти и способности к обучению до нормальных уровней, отложение амилоидных бляшек в тканях мозга подавлялось, пролиферация стволовых клеток в гиппокампе повышалась до нормальных уровней, и образование дендритов нервных клеток восстанавливалось до нормальных уровней. Таким образом, как ожидается, настоящее изобретение может применяться в качестве композиции для предотвращения, улучшения или лечения неврологического нарушения или психического расстройства, содержащей везикулы, происходящие от Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

Кроме того, настоящие изобретатели подтвердили, что когда везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, вводили животным с моделью психического расстройства, наблюдалось эффективное подавление наступления ментальной дисфункции вследствие стресса, так что везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, согласно настоящему изобретению также могут успешно применяться для создания фармацевтической или функциональной оздоровительной продукции для предотвращения психического расстройства, улучшения его симптомов или лечения психического расстройства.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 - фотографии примеров распределения везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, которая является грамположительной бактерией, сделанных спустя некоторое время после того, как везикулы были перорально введены мышам (A), результаты, показывающие картину распределения по органам полученных из Lactobacillus paracasei везикул, в различных извлеченных органах в течение определенного времени после перорального введения, график (B), и результаты, показывающие интенсивность флуоресценции полученных из Lactobacillus paracasei везикул, распределенных в мозге в течение некоторого времени, график (C).

Фиг. 2 – фотографии примеров распределения везикул, полученных из Acinetobacter baumannii, которая является грамотрицательной бактерией, сделанных спустя некоторое время после того, как везикулы были перорально введены мышам (A), результаты, показывающие картину распределения по органам полученных из Acinetobacter baumannii везикул, в различных извлеченных органах в течение определенного времени после перорального введения, график (B), и результаты, показывающие интенсивность флуоресценции полученных из Acinetobacter baumannii везикул, распределенных в жизненно важных органах в течение времени, график (C).

Фиг. 3 показывает период введения и схематическое изображение дизайна эксперимента с применением мышиной модели дегенеративного заболевания мозга. WT-CON относится к группе нормальных мышей, Tg-CON относится к группе мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга и Tg-LP EVs относится к группе мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга, которым перорально вводили внеклеточные везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei (MDH-001.

Фиг. 4 иллюстрирует результаты проведенных тестов на способность распознавать объекты и их местоположение в группе нормальных мышей (WT-CON), группе мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга (Tg-CON) и группе (Tg+MDH001), которой перорально вводили полученные из Lactobacillus paracasei везикулы (MDH-001), и затем сравнение результатов тестов, при этом результат (A) показывает время, необходимое мышам для нахождения двух объектов, результат (B) показывает время, которое требуется мышам для нахождения нового объекта через 2 часа, результат (C) показывает время, которое требуется мышам для нахождения объекта, положение которого было изменено, через 15 минут, и результат (D) показывает время, которое требуется мышам для нахождения нового объекта через 24 часа.

Фиг. 5 иллюстрирует результаты оценки способности к обучению в группе нормальных мышей (WT-CON), в группе мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга (Tg-CON) и группе мышей (Tg+MDH001), которым перорально вводили везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei (MDH-001), при этом результат (A) показывает время, необходимое мышам в трех группах для нахождения скрытой платформы в течение периода обучения 5 дней, результат (B) показывает время, которое проводят мыши в каждой части водяного баллона в ходе проверки на способность к обучению, и результат (C) показывает время, необходимое мышам в каждой группе для нахождения видимой платформы.

Фиг. 6 иллюстрирует результаты оценки способности к запоминанию в группе нормальных мышей (WT-CON), в группе мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга (Tg-CON) и группе мышей (Tg+MDH001), которым перорально вводили везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei (MDH-001), при этом результат (A) – время, которое требуется мышам в каждой группе, получившим удар током во время входа в темную камеру, для того, чтобы войти в темную камеру, и результат (B) – время «застывания» мышей в каждой группе, получивших удар электрическим током.

Фиг. 7 представляет результаты для сравнения флуоресцентно окрашенных изображений и количества бляшек бета-амилоида (Aβ) в мозге каждой группы животных с моделью дегенеративного заболевания мозга, которые показывают типичное окрашивание Aβ бляшек (A) для каждой группы, количество (B) Aβ бляшек на единицу площади и площадь (C) Aβ бляшек на единицу площади.

Фиг. 8 показывает с помощью флуоресцентного окрашивания экспрессию Ki-67, который является маркером первоначального нейрогенеза, в мозге каждой группы животных с моделью дегенеративного заболевания мозга, а также количественные данные, а именно фотографии типичного Ki-67 окрашивания (A) для каждой группы, при этом результат (B) иллюстрирует отношения количества клеток, окрашенных Ki-67 в группе мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга (Tg-CON) и группе (Tg+MDH001), которой вводили везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei (MDH-001), относительно группы нормальных мышей (WT-CON).

Фиг. 9 иллюстрирует с помощью флуоресцентного окрашивания экспрессию даблкортина (DCX), который является маркером нейрогенеза в метафазе или после, в мозге для каждой группы животных с моделью дегенеративного заболевания мозга, а также количественные данные в виде характерных фотографий при окрашивании даблкортином (A) для каждой группы, и результат (B) показывает среднее количество клеток, окрашенных даблкортином, в каждом срезе, наблюдаемом под микроскопом на мышах с моделью дегенеративного заболевания мозга (Tg-CON) и в группе (Tg+MDH001), которой вводили везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei (MDH-001), по сравнению с группой нормальных мышей (WT-CON).

Фиг. 10 показывает с помощью флуоресцентного окрашивания экспрессию ассоциированного с микротрубочками белка 2 (MAP2), который является нейрон-специфическим белком цитоскелета в мозге, для каждой группы животных с моделью дегенеративного заболевания мозга и количественные данные, которые представляют собой характерные фотографии MAP2-окрашивания (A) для каждой группы, и результат (B) иллюстрирует отношение экспрессии MAP2 в группе мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга (Tg-CON) и группе (Tg+MDH001), которой вводили везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei (MDH-001), относительно показателей в группе нормальных мышей (WT-CON).

Фиг. 11 иллюстрирует экспериментальный протокол для оценки терапевтического эффекта везикул, полученных из Lactobacillus paracasei (EVs), на ментальную функцию животных с моделью психического расстройства, вызванного нервно-психическим стрессом [CON или CON+Veh: группа нормальных мышей с введением физраствора (контроль, контроль с введением физраствора), CON+MDH-001: группа нормальных мышей с введением везикул от Lactobacillus paracasei, RST+Veh: подвергнутая стрессу группа с введением физраствора, RST+MDH-001: подвергнутая стрессу группа с введением везикул от Lactobacillus paracasei].

Фиг. 12 иллюстрирует результаты оценки теста социального взаимодействия (A) и социальные индексы (B и C) для каждой группы мышей, для того чтобы оценить терапевтический эффект везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, на эмоциональную функцию с 14 по 16 дни после создания стресса у животных с моделью психического расстройства, вызванного нервно-психическим стрессом.

Фиг. 13 иллюстрирует результаты проведения теста подвешивания за хвост (TST) (A) и теста принудительного плавания (FST) (B), соответственно, для каждой группы мышей, для того, чтобы оценить терапевтические эффекты везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, на эмоциональную функцию с 14 по 16 дни после создания стресса у животных с моделью психического расстройства, вызванного нервно-психическим стрессом.

Фиг. 14 иллюстрирует результаты оценки протокола теста социального взаимодействия (A) и социальные индексы (B и C) для каждой группы мышей, для того, чтобы оценить терапевтические эффекты везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, на депрессию в дни с 28 по 30 после создания стресса у животных с моделью психического расстройства, вызванного нервно-психическим стрессом.

Фиг. 15 иллюстрирует результаты проведения теста подвешивания за хвост (TST) для каждой группы мышей, для того, чтобы оценить терапевтические эффекты везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, на депрессию в дни с 28 по 30 после создания стресса у животных с моделью психического расстройства, вызванного нервно-психическим стрессом.

Фиг. 16 иллюстрирует результаты оценки активации AMPK через 60 минут после введения инсулина, способствующего старению в клетках ex vivo, метформина, который является контрольным средством, подавляющим старение, и полученных из Lactobacillus paracasei везикул (MDH-00) в разных концентрациях для оценки механизма терапевтического действия в отношении клеточного старения в результате различных видов стресса.

Способы осуществления изобретения

Настоящее изобретение имеет отношение к везикулам, полученным из бактерий Lactobacillus paracasei, и их применению.

В дальнейшем настоящее изобретение будет описано подробно.

Настоящие изобретатели установили, что когда везикулы, полученные из грамотрицательных бактерий, имеющих липополисахарид (LPS) во внешней клеточной мембране, вводятся перорально, везикулы не распространяются в мозг, однако когда везикулы полученные из Lactobacillus paracasei, которая является грамположительной бактерией, вводятся перорально, везикулы доставлялись в мозг. Кроме того, когда полученные из Lactobacillus paracasei везикулы вводили перорально APP и PS1 трансгенным мышам с заболеванием мозга, способность к обучению и память трансгенных мышей улучшались до нормальных уровней, и отложение амилоидных бляшек в ткани мозга подавлялось. Кроме того, было подтверждено, что пролиферация стволовых клеток в гиппокампе улучшалась до нормальных уровней, и образование дендритов нервных клеток восстанавливалась до нормальных уровней. Более того, в результате интенсивных исследований с целью изучения связи между полученными из Lactobacillus paracasei везикулами и психическим расстройством, настоящие изобретатели обнаружили, что введение везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, животным с моделью психического расстройства, вызванного нервно-психическим стрессом, продемонстрировало воздействие на ментальную дисфункцию, такую как эмоциональное расстройство, тем самым завершив настоящее изобретение на этой основе.

Таким образом, настоящее изобретение предоставляет композицию для предотвращения, улучшения или лечения неврологического нарушения или психического расстройства, содержащую везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

Композиция включает фармацевтическую композицию, пищевую композицию и композицию для ингаляции.

Примененный в описании термин «неврологическое нарушение» относится к нарушению, вызванному повреждением и старением нервных клеток, возникающим в результате нарушений митохондриальной функции вследствие различных стрессов, и включает умеренное когнитивное расстройство, деменцию, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, амиотрофический боковой склероз (ALS), болезнь Баттена, синдром Кернса-Сейра (KSS), хроническую прогрессирующую внешнюю офтальмоплегию (CPEO), митохондриальную энцефаломиопатию с лактоацидозом и инсультоподобными эпизодами (MELAS), миоклоническую эпилепсию с разорванными красными волокнами (MERRF), слабость нервного происхождения с атаксией и пигментной дистрофией сетчатки (NARP), синдром Лейга (LS) и синдром митохондриальной рецессивной атаксии, и тому подобное, но без ограничения.

Примененный в описании термин «психическое расстройство» относится к патологическому психическому состоянию, которое затрагивает мышление, эмоции, поведение человека и тому подобное, и обобщенно относится к состоянию, при котором нарушена ментальная функция. В настоящем изобретении психическое расстройство включает тревожные расстройства, посттравматическое стрессовое расстройство (PTSD), паническое расстройство, депрессию, расстройство аутического спектра, расстройство дефицита внимания с гиперактивностью (ADHD) и шизофрению.

Примененный в описании термин везикула или внеклеточная везикула относится к структуре, сформировавшейся из наноразмерной мембраны и секретированной из различных бактерий, и в настоящем изобретении данный термин обобщенно относится ко всем структурам, сформированным из мембраны и естественным образом секретированным из Lactobacillus paracasei или полученным искусственно. Везикулы могут быть изолированы из культуральной среды, содержащей бактериальные клетки Lactobacillus paracasei, при помощи одного или более способов, выбранных из группы, состоящей из термической обработки, центрифугирования, центрифугирования со сверхвысокой скоростью, обработки высоким давлением, экструзии, обработки ультразвуком, клеточного лизиса, гомогенизации, метода замораживания-оттаивания, электропорации, механического разложения, химической обработки, фильтрования с помощью фильтра, гельфильтрационной хроматографии, электрофореза в свободном потоке или капиллярного электрофореза. Кроме того, может быть дополнительно включен такой процесс, как отмывка с целью удаления примесей и концентрирования полученных везикул.

Везикулы настоящего изобретения могут быть изолированы из культуральной среды Lactobacillus paracasei или продукта, приготовленного путем добавления Lactobacillus paracasei, и везикулы могут естественным или искусственным образом секретироваться из Lactobacillus paracasei, но без ограничения.

Способ изолирования везикул из культуральной среды или ферментированного продукта Lactobacillus paracasei настоящего изобретения не ограничивается особым образом, при условии, что везикулы включаются. Например, везикулы могут быть выделены с помощью такого метода, как центрифугирование, центрифугирование со сверхвысокой скоростью, фильтрование с помощью фильтра, гельфильтрационная хроматография, электрофорез в свободном потоке или капиллярный электрофорез и их сочетания, и кроме того, может быть дополнительно включен такой процесс, как отмывка с целью удаления примесей и концентрирования полученных везикул.

В настоящем изобретении везикулы, изолированные данным методом, могут иметь средний диаметр от 10 до 1000 нм, от 10 до 900 нм, от 10 до 800 нм, от 10 до 700 нм, от 10 до 600 нм, от 10 до 500 нм, от 10 до 400 нм, от 10 до 300 нм, от 10 до 200 нм, от 10 до 100 нм, от 10 до 90 нм, от 10 до 80 нм, от 10 до 70 нм, от 10 до 60 нм, от 10 до 50 нм, от 10 до 40 нм или от 20 до 40 нм, однако средний диаметр этим не ограничивается.

Количество везикул в композиции настоящего изобретения может быть соответствующим образом отрегулировано в зависимости от симптомов болезни, степени прогрессирования симптомов, состояния пациента и тому подобного, и может находиться в пределах, например, от 0,0001 вес.% до 99,9 вес.% или от 0,001 вес.% до 50 вес.% относительно общего веса композиции, однако настоящее изобретение не ограничивается этим. Количественное отношение - это значение на основе количества высушенного продукта, из которого удален растворитель.

Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно включать подходящий носитель, эксципиент и разбавитель, которые обычно используются при приготовлении фармацевтических композиций. Эксципиентом может быть, например, что-либо одно или более, выбранное из группы, состоящей из разбавителя, связующего вещества, дезинтегрирующего вещества, смазывающего вещества, адсорбирующего вещества, увлажняющего вещества, пленкообразующего покрывающего материала и добавки, контролирующей высвобождение.

Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может применяться, будучи создана, в соответствии с широко используемыми методами, в такой форме как порошки, гранулы, гранулы с замедленным высвобождением, кишечнорастворимые гранулы, жидкости, глазные капли, эликсиры, суспензии, спиртовые растворы, пастилки, ароматная вода, лимонады, таблетки, таблетки с замедленным высвобождением, энтеросолюбильные таблетки, подъязычные таблетки, твердые капсулы, мягкие капсулы, капсулы с пролонгированным высвобождением, кишечнорастворимые капсулы, пилюли, настойки, густые экстракты, сухие экстракты, жидкие экстракты, инъекционные препараты, капсулы, перфузируемые жидкости или препараты для наружного применения, такие как пластыри, лосьоны, пасты, спреи, ингаляторы, накладки, стерильные растворы для инъекций или аэрозоли. Препараты для наружного применения могут иметь форму кремов, гелей, пластырей, спреев, мазей, накладок, лосьонов, растирок, паст или припарок.

В качестве носителя, эксципиента и разбавителя, которые могут включаться в фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению, можно применять лактозу, декстрозу, сахарозу, олигосахариды, сорбитол, маннитол, ксилитол, эритритол, мальтит, крахмал, гуммиарабик, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метил целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метил гидроксибензоат, пропил гидроксибензоат, тальк, стеарат магния и минеральное масло.

Для включения в композицию используются обычные разбавители или эксципиенты, такие как наполнители, загустители, связующие вещества, увлажняющие вещества, разрыхлители и поверхностно-активные вещества.

В качестве добавок в таблетки, порошки, гранулы, капсулы, пилюли и пастилки согласно настоящему изобретению, могут применяться такие эксципиенты, как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, пшеничный крахмал, лактоза, белый сахар, глюкоза, фруктоза, D-маннитол, осажденный карбонат кальция, синтетический силикат алюминия, двузамещенный фосфат кальция, сульфат кальция, хлорид натрия, бикарбонат натрия, очищенный ланолин, микрокристаллическая целлюлоза, декстрин, альгинат натрия, метилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза, каолин, мочевина, коллоидный силикагель, гидроксипропил крахмал, гидроксипропил метилцеллюлоза (HPMC) 1928, HPMC 2208, HPMC 2906, HPMC 2910, пропиленгликоль, казеин, лактат кальция и Primojel®; и могут применяться связывающие вещества, такие как желатин, гуммиарабик, этанол, порошкообразный агар, ацетофталат целлюлозы, карбоксиметилцеллюлоза, кальций карбоксиметилцеллюлоза, глюкоза, очищенная вода, казеинат натрия, глицерин, стеариновая кислота, натрий карбоксиметилцеллюлоза, натрий метилцеллюлоза, метилцеллюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, декстрин, гидроксицеллюлоза, гидроксипропил крахмал, гидроксиметилцеллюлоза, очищенный шеллак, крахмал, гидроксипропил целлюлоза, гидроксипропил метилцеллюлоза, поливиниловый спирт и поливинилпирролидон, и могут применяться разрыхлители, такие как гидроксипропил метилцеллюлоза, кукурузный крахмал, порошкообразный агар, метилцеллюлоза, бентонит, гидроксипропил крахмал, натрий карбоксиметилцеллюлоза, альгинат натрия, кальций карбоксиметилцеллюлоза, цитрат кальция, лаурилсульфат натрия, двуокись кремния, 1-гидроксипропилцеллюлоза, декстран, ионообменная смола, поливинилацетат, обработанный формальдегидом казеин и желатин, альгиновая кислота, амилоза, гуаровая камедь, бикарбонат натрия, поливинилпирролидон, фосфат кальция, желатинизированный крахмал, гуммиарабик, амилопектин, пектин, полифосфат натрия, этилцеллюлоза, белый сахар, алюмосиликат магния, раствор дисорбитола и легкая безводная кремниевая кислота; и могут применяться смазывающие вещества, такие как стеарат кальция, стеарат магния, стеариновая кислота, гидрогенезированное растительное масло, тальк, ликоподий, каолин, вазелин, стеарат натрия, какао-масло, салицилат натрия, салицилат магния, полиэтиленгликоль (PEG) 4000, PEG 6000, жидкий парафин, гидрогенезированное соевое масло (Lubri wax), стеарат алюминия, стеарат цинка, лаурилсульфат натрия, окись магния, макрогол, синтетический силикат алюминия, двуокись кремния, высшие жирные кислоты, высшие спирты, силиконовое масло, парафиновое масло, полиэтиленгликолевые эфиры жирных кислот, крахмал, хлорид натрия, ацетат натрия, олеиновокислый натрий, dl-лейцин, и легкая безводная кремниевая кислота.

В качестве дополнительных компонентов жидких лекарственных форм согласно настоящему изобретению может применяться вода, слабая соляная кислота, слабая серная кислота, цитрат натрия, эфир сахарозы моностеариновой кислоты, сахароза, сложные эфиры полиоксиэтиленсорбита и жирных кислот (двойные сложные эфиры), полиоксиэтилен моноалкиловые эфиры, простые эфиры ланолина, сложные эфиры ланолина, уксусная кислота, соляная кислота, водный раствор аммиака, карбонат аммония, гидроксид калия, гидроксид натрия, проламин, поливинилпирролидон, этилцеллюлоза и натрий карбоксиметилцеллюлоза.

В сиропах согласно настоящему изобретению может применяться раствор белого сахара, другие сахара или подсластители и тому подобные, и при необходимости, может применяться ароматическая добавка, красящее вещество, консервирующее вещество, стабилизирующее вещество, суспендирующее вещество, эмульгирующее вещество, вещество, придающее вязкость, и тому подобное.

В эмульсиях согласно настоящему изобретению может применяться очищенная вода и, при необходимости, может применяться эмульгирующее вещество, консервирующее вещество, стабилизирующее вещество, ароматическая добавка или тому подобное.

В суспензиях согласно настоящему изобретению могут применяться суспендирующие вещества, такие как гуммиарабик, трагакантовая камедь, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, альгинат натрия, гидроксипропил метилцеллюлоза (HPMC) 1828, HPMC 2906, HPMC 2910, и тому подобное, и при необходимости, может также применяться поверхностно-активное вещество, консервирующее вещество, стабилизирующее вещество, красящее вещество и ароматическое вещество.

Инъекционные препараты согласно настоящему изобретению могут включать: растворители, такие как дистиллированная вода для инъекций, 0,9% раствор хлорида натрия, раствор Рингера, раствор декстрозы, раствор декстрозы+хлорида натрия, PEG, лактированный раствор Рингера, этанол, пропиленгликоль, нелетучий нефтепродукт, сезамовое масло, хлопковое масло, арахисовое масло, соевое масло, кукурузное масло, этилолеат, изопропил меристат и бензол бензоат; сорастворители, такие как бензоат натрия, салицилат натрия, ацетат натрия, мочевина, уретан, моноэтилацетамид, бутазолидин, пропиленгликоль, серия Твинов, амид никотинат, гексамин и диметилацетамид; буферные вещества, такие как слабые кислоты и их соли (уксусная кислота и ацетат натрия), слабые основания и их соли (аммиак и ацетат аммония), органические соединения, протеины, альбумин, пептон и камеди; изотонические агенты, такие как хлорид натрия; стабилизирующие вещества, такие как бисульфит натрия (NaHSO₃) углекислый газ, натрия метабисульфит (Na₂S₂O₅), сульфит натрия (Na₂SO₃), газообразный азот (N₂) и этилендиаминтетрауксусная кислота; сульфатирующие агенты, такие как 0,1% бисульфит натрия, натрия формальдегидсульфоксилат, тиомочевина, двунатриевый этилендиаминтетраацетат и ацетон бисульфит натрия; обезболивающие средства, такие как бензиловый спирт, хлорбутанол, прокаин-гидрохлорид, глюкоза и глюконат кальция; и суспендирующие вещества, такие как натрий CMC, альгинат натрия, Твин 80 и алюминия моностеарат.

В суппозиториях согласно настоящему изобретению могут применяться такие основы как масло какао, ланолин, витепсол, полиэтиленгликоль, глицерожелатин, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, смесь стеариновой и олеиновой кислот, субанал, хлопковое масло, арахисовое масло, пальмовое масло, масло какао + холестерин, лецитин, парафин «ленетт», глицеролмоностеарат, Твин или спен, имхаузен, монолан (пропилен гликольмоностеарат), глицерин, твердый жир, масло Tego-G, cebes Pharma 16, hexalide base 95, cotomar, Hydrokote SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), HydroKote 25, HydroKote 711, идропостал, massa estrarium (A, AS, B, C, D, E, I, T), masa-MF, лазупол, лазупол-15, неосуппостал-N, paramount-B, supposiro OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L, суппозиторная основа IV типов AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299, suppostal N, Es, Wecoby W, R, S, M, Fs и триглицеридная основа tegester triglyceride matter (TG-95, MA, 57).

Твердые препараты для перорального приема включают таблетки, пилюли, порошки, гранулы, капсулы и тому подобное, причем такие твердые препараты приготавливают путем смешивания композиции, по меньшей мере, с одним эксципиентом, например, крахмалом, карбонатом кальция, сахарозой, лактозой, желатином и тому подобным. В дополнение к простым эксципиентам могут применяться смазывающие вещества, такие как стеарат магния и тальк.

Примеры жидких препаратов для перорального приема включают суспензии, жидкие лекарственные формы для приема внутрь, эмульсии, сиропы и тому подобное, и эти жидкие препараты могут включать в дополнение к простым обычно используемым разбавителям, таким как вода и жидкий парафин, различные типы эксципиентов, например, увлажняющие вещества, подсластители, ароматические добавки, консервирующие вещества и тому подобное. Препараты для парентерального введения включают водный стерильный раствор, неводный растворитель, суспензию, эмульсию, лиофилизированный препарат и суппозиторий. Неограничивающие примеры неводного растворителя и суспензии включают пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительное мало, например, оливковое масло, и инъецируемый сложный эфир, такой как этилолеат.

Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению вводится в фармацевтически эффективном количестве. В настоящем изобретении «фармацевтически эффективное количество» имеет отношение к количеству, достаточному для лечения заболеваний при обоснованно необходимом соотношении польза/риск, применимом к медицинскому лечению, при этом уровень эффективной дозы может быть определен в соответствии с факторами, включая типы заболеваний у пациентов, тяжесть болезни, активность лекарственных средств, чувствительность к лекарственным средствам, время введения, способ введения, скорость экскреции, период лечения и одновременно используемые лекарственные средства, и других факторов, хорошо известных в области медицины.

Композиция согласно настоящему изобретению может вводиться в качестве отдельного терапевтического средства или в комбинации с другими терапевтическими средствами, может вводиться последовательно или одновременно с терапевтическими средствами и может вводиться в виде однократной дозы или множества доз. Важно вводить композицию в минимальном количестве, которое может обеспечить максимальный эффект без каких-либо побочных эффектов, принимая во внимание все вышеупомянутые факторы, и это может легко определено специалистом в данной области техники.

Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может вводиться индивидууму различными путями. Все способы введения могут быть заранее определены, и фармацевтическая композиция может вводиться, например, пероральным путем, с помощью подкожной инъекции, внутрибрюшинного введения, внутривенной инъекции, внутримышечной инъекции, интратекальной (пространство вокруг спинного мозга) инъекции, подъязычного введения, введения через слизистую оболочку щеки, ректального пути введения, внутривагинального пути введения, окулярного введения, внутриушного введения, интраназального введения, ингаляции, распыления через рот или нос, трансдермального введения, чрескожного введения или тому подобного.

Фармацевтическая композиция настоящего изобретения определяется в зависимости от типа лекарственного средства, который является активным ингредиентом, наряду с различными родственными факторами, такими как заболевание, подлежащее лечению, способ введения, возраст, пол и вес тела пациента, и тяжесть заболевания. Конкретнее, эффективное количество композиции согласно настоящему изобретению может варьировать в зависимости от возраста пациента, пола и веса тела, и в общем от 0,001 до 150 мг композиции и предпочтительно от 0,01 до 100 мг композиции на 1 кг веса тела может быть введено ежедневно или через день или может вводиться от одного до трех раз в день. Однако, поскольку эффективное количество может быть увеличено или уменьшено в зависимости от способа введения, степени ожирения, пола, веса тела, возраста и тому подобного, данная дозировка не предназначается для ограничения объема настоящего изобретения каким-либо образом.

При применении в описании «субъект» имеет отношение к субъекту, нуждающемуся в лечении болезни, и конкретнее, относится к млекопитающему, такому как человек или примат, не являющийся человеком, мышь, крыса, собака, кошка, лошадь и корова, однако настоящее изобретение не ограничивается этим.

При применении в описании «введение» относится к обеспечению субъекта предопределенной композицией настоящего изобретения путем применения произвольно выбранного соответствующего метода.

Примененный в описании термин «предотвращение» означает все действия, которые ингибируют или задерживают начало целевого заболевания. Примененный в описании термин «лечение» означает все действия, которые облегчают или благотворно изменяют целевое заболевание и ненормальные метаболические симптомы, вызванные заболеванием, путем введения фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению. Примененный в описании термин «улучшение» означает все действия, которые уменьшают выраженность параметров, связанных с целевой болезнью, например, симптомов, путем введения композиции согласно настоящему изобретению.

Кроме того, настоящее изобретение предоставляет пищевую композицию для предотвращения или улучшения неврологического нарушения или психического расстройства, содержащую везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

Пищевая композиция может быть функциональным оздоровительным продуктом, однако, без ограничения.

Везикулы согласно настоящему изобретению могут применяться путем добавления активного ингредиента «как есть» в пищу или могут применяться вместе с другими пищевыми продуктами или пищевыми ингредиентами, однако могут соответствующим образом применяться согласно типичному методу. Смешанное количество активного ингредиента может быть соответствующим образом определено в зависимости от цели его применения (для предотвращения или облегчения). В общем, при приготовлении продукта или напитка композиция настоящего изобретения добавляется в количестве 15 вес.% или менее, предпочтительно 10 вес.% или менее, исходя из сырых материалов. Однако, для продолжительного потребления с целью оздоровления и гигиены или с целью контроля над состоянием здоровья, количество может быть меньше, чем указанный выше диапазон, причем отсутствуют проблемы, связанные со стабильностью везикул, так что активный ингредиент может применяться в количестве большем, чем указанный диапазон.

Тип продукта не ограничивается каким-либо специальным образом. Примеры продукта, к которому может быть добавлен данный материал, включают мясо, сосиски, хлеб, шоколад, конфеты, снеки, кондитерские изделия, пиццу, лапшу быстрого приготовления, другие виды лапши, леденцы, молочные продукты, включая мороженое, различные супы, напитки, чай, алкогольные напитки, витаминные комплексы и тому подобное, и включают всю функциональную оздоровительную продукцию в обычном смысле.

Композиция для оздоровительного напитка согласно настоящему изобретению может содержать различные вкусоароматические добавки или природные углеводы и тому подобное в качестве дополнительных ингредиентов, как в обычном напитке. Упомянутые выше природные углеводы могут быть моносахаридами, такими как глюкоза и фруктоза, дисахаридами, такими как мальтоза и сахароза, полисахаридами, такими как декстрин и циклодекстрин, и сахарными спиртами, такими как ксилит, сорбитол и эритритол. В качестве подсластителей могут применяться натуральные подсластители, такие как тауматин и экстракт стевии, искусственный подсластитель, такой как сахарин и аспартам и тому подобное. Пропорция натуральных углеводов в большинстве случаев составляет примерно от 0,01 до 0,20 г, или примерно от 0,04 до 0,10 г на 100 мл композиции настоящего изобретения.

В дополнение к вышеперечисленным ингредиентам композиция настоящего изобретения может содержать различные питательные вещества, витамины, электролиты, ароматизирующие вещества, красящие вещества, пектиновые кислоты и их соли, альгиновую кислоту и ее соли, органические кислоты, защитные коллоидные сгустители, регуляторы pH, стабилизирующие вещества, консервирующие вещества, глицерин, спирты, карбонизирующие вещества, используемые в газированных напитках, и тому подобное. В дополнение к этому композиция настоящего изобретения может содержать субстанцию для приготовления натурального фруктового сока, напитков на основе фруктовых соков и овощных напитков. Эти ингредиенты могут применяться или по отдельности или в сочетаниях. Пропорции этих дополнительных добавок не имеют большого значения, однако, их выбирают в диапазоне от 0,01 до 0,20 части по весу на 100 частей по весу композиции настоящего изобретения.

Кроме того, настоящее изобретение может предоставляться в форме состава для ингаляции, содержащего везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

В случае препарата для ингаляции соединение может быть заключено в состав в соответствии с методом, известным в данной области техники, и может с удобством доставляться в форме распыляемого аэрозоля из аэрозольного баллона или небулайзера при помощи подходящего газа-вытеснителя (пропеллента), например, дихлорфторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана, двуокиси углерода или других подходящих газов. В случае подаваемого под давлением аэрозоля единица дозирования может определяться обеспечением клапана для подачи дозированного количества. Например, желатиновая капсула и картридж для применения в ингаляторе или инсуффляторе может быть создана таким образом, чтобы в ней содержалась порошкообразная смесь соединения и подходящей порошкообразной основы, такой как лактоза или крахмал.

Кроме того, настоящее изобретение предоставляет композицию для предотвращения или лечения старения или связанных со старением болезней, содержащую везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

В настоящем изобретении старение в обобщенном смысле относится ко всем физиологическим изменениям в организме, происходящим с течением времени, и относится к биологическому явлению, которое происходит по-разному вследствие ряда факторов, зависящих от индивидуума. Если говорить конкретнее о феномене старения, функциональные изменения в каждом отдельном органе и ткани и старение индивидуума в конечном счете обуславливаются старением клеток, из которых состоит индивидуум.

В настоящем изобретении старение может быть старением мозга или нейронов, но не ограничивается этим.

Далее будут предложены предпочтительные примеры для облегчения понимания настоящего изобретения. Однако, следующие примеры предоставляются только для лучшего понимания настоящего изобретения, при этом содержание настоящего изобретения не ограничивается следующими примерами.

Примеры

Пример 1. Выделение везикул, полученных из Lactobacillus paracasei

Для того, чтобы изолировать полученные из Lactobacillus paracasei внеклеточные везикулы (EV), Lactobacillus paracasei инокулировали в среду Де Мана, Рогоза и Шарпа (MRS), культивировали при 37°C и 200 об/мин до оптической плотности (OD_{600 nm}) от 1,0 до 1,5 и затем Lactobacillus paracasei повторно инокулировали в среду Луриа-Бертани (LB) и культивировали. Затем, был получен супернатант, из которого были удалены бактериальные клетки, путем восстановления культуральной среды, содержащей бактериальные клетки, и проводили центрифугирование при 4°C и 10,000 g в течение 20 минут. Полученный супернатант вновь фильтровали, используя фильтр 0,22 мкм, и профильтрованный супернатант концентрировали до объема 50 мл или меньше, используя кассетный фильтр 100 kDa Pellicon 2 (Merck Millipore) и насосную систему MasterFlex (Cole-Parmer). Везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei (MDH-001), изолировали, фильтруя концентрированный супернатант с применением фильтра 0,22 мкм. В следующих примерах эксперименты проводили, используя изолированные везикулы.

Пример 2. Оценка фармакокинетических характеристик везикул, полученных из бактерий Lactobacillus paracasei

Для того, чтобы изучить фармакокинетические характеристики везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, во время перорального введения, флуоресценцию в организме и каждом органе измеряли непосредственно перед введением и до 72 часов после введения, используя перорально введенные мышам везикулы, окрашенные флуоресцентным красителем.

Как показано на фиг. 1 A и B, было подтверждено, что флуоресцентно окрашенные везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, постепенно распространяются в организме с течением времени. При исследовании каждого органа в отдельности сигнал флуоресценции везикул Lactobacillus paracasei, наблюдался в желудке через 1 час после перорального введения, и сигнал флуоресценции наблюдался в тонком кишечнике, толстом кишечнике и легких через 3 часа. Кроме того, было подтверждено, что сигнал флуоресценции в желудке, тонком кишечнике, толстом кишечнике и легких сохранялся вплоть до 56 часов.

Кроме того, как показано на фиг. 1 С, сигнал флуоресценции в частности наблюдался в мозге через 3 часа после введения и обнаруживался вплоть до 48 часов.

Для того, чтобы исследовать, являются ли фармакокинетические характеристики везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, штамм-специфичными или явлением, специфичным для грамотрицательных бактерий, флуоресценцию измеряли тем же способом посредством перорального введения мышам окрашенных флуоресцентным красителем везикул, полученных из грамотрицательных бактерий Acinetobacter baumannii.

Как показано на фиг. 2 А, было обнаружено, что самый сильный сигнал флуоресценции наблюдался в желудке через 3 часа после перорального введения везикул, полученных из Acinetobacter baumannii, и сигнал флуоресценции в желудке уменьшался с течением времени.

Кроме того, как показано на фиг. 2 B и C, в случае везикул, полученных из Acinetobacter baumannii, сигнал флуоресценции не был отмечен в мозге. Благодаря этим результатам, было подтверждено, что фармакокинетические характеристики везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, были штамм-специфичным явлением.

Пример 3. Оценка эффективности воздействия полученных из Lactobacillus paracasei везикул на когнитивную функцию на мышиной модели неврологического нарушения

Мышь Tg-APP/PS1 представляет собой мышиную модель характерного дегенеративного заболевания мозга. Эта модель демонстрирует отложение гистологически обнаружимых бляшек с 6,5 месяцев, при этом когнитивная дисфункция устойчиво обнаруживается в возрасте 7-8 месяцев. Поведенческие и гистологические исследования были проведены с применением данной мышиной модели после деления мышей на группы: группу нормальных мышей (WT-CON), группу мышей с дегенеративным заболеванием мозга (Tg-CON) и группу мышей с дегенеративным заболеванием мозга (Tg-Lp EV, MDH-001), которым перорально вводили полученные из Lactobacillus paracasei везикулы в дозе 50 мкг/мышь, как показано на фиг. 3.

Для оценки когнитивной функции при введении полученных из Lactobacillus paracasei везикул мышам с моделью дегенеративного заболевания мозга измеряли время, необходимое мышам каждой группы WT-CON, Tg-CON и Tg+MDH-001 для обнаружения нового объекта или объекта, положение которого было изменено, в течение периода времени 10 минут, как показано на фиг. 4.

В результате, как показано на фиг. 4 B и D, было установлено, что в тесте на распознавание новых объектов (NOR) измеренное через 2 или 24 часа время до обнаружения нового объекта было длиннее в группах WT-CON и Tg+MDH-001, но не было изменено в группе Tg-CON.

Как показано на фиг. 4 С, было установлено, что даже в тесте на установление нового местоположения (NLR) время до обнаружения объекта, местоположение которого было изменено, было длиннее в группах WT-CON и Tg+MDH-001, но не было изменено в группе Tg-CON. Эти результаты означают, что полученные из Lactobacillus paracasei везикулы подавляют прогрессирование кратковременного и долговременного снижения когнитивных функций у мышей с дегенеративным заболеванием мозга.

Пример 4. Оценка эффективности действия полученных из Lactobacillus paracasei везикул на способность к обучению на мышиной модели неврологического нарушения

На основании вышеизложенного для оценки способности к обучению мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга при введении везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, проводили тест на поиск скрытой платформы после обучения мышей в течение 5 дней находить скрытую платформу в баллоне с водой, как проиллюстрировано на фиг. 5.

В результате, как показано на фиг. 5 A, группа нормальных мышей (WT-CON) показала самое быстрое время до обнаружения скрытой платформы в течение тренировочного периода 5 дней, группа мышей (Tg+MDH-001), которым перорально вводили полученные из Lactobacillus paracasei везикулы, с моделью дегенеративного заболевания мозга показала время обучения, сходное с группой WT-CON, а группа с моделью дегенеративного заболевания мозга (Tg-CON), которая является положительным контролем, продемонстрировала самое медленное время обучения.

Как показано на фиг. 5 B, было показано, что WT-CON группа оставалась в местоположении платформы в течение длительного времени даже в течение времени поиска и остановки в положении скрытой платформы, и Tg+MDH-001 группа также продемонстрировала время, сходное с временем WT-CON группы, однако группа Tg-CON провела самое короткое время в местоположении платформы, при этом «бродя» около мест, исключающих платформу. Эти результаты подтверждают, что полученные из Lactobacillus paracasei везикулы оказывают воздействие на восстановление пространственного перцептивного обучения и на восстановление пространственной перцептивной памяти у мышей с дегенеративным заболеванием мозга.

Пример 5. Оценка эффективности воздействия полученных из Lactobacillus paracasei везикул на способность к запоминанию на мышах с моделью неврологического нарушения

Для того, чтобы подвергнуть переоценке способность к запоминанию при введении полученных из Lactobacillus paracasei везикул у мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга, на основе приведенных выше примеров, как показано на фиг. 6, был проведен тест, свидетельствующий о том, что мыши помнят свой страх/беспокойство, связанные с камерой и получением удара электрическим током по лапам, в тот момент, когда мыши входили в темную камеру, в течение длительного периода времени 24, 72 и 120 часов.

В результате, как показано на фиг. 6 A, мыши из группы нормальных мышей (WT-CON) и мыши из группы с моделью дегенеративного заболевания мозга (Tg+MDH-001), которым были введены полученные из Lactobacillus paracasei везикулы, не входили в темную камеру даже через 300 секунд, когда эксперимент проводился на момент времени 24, 72 и 120 часов, однако время вхождения в темную камеру у мышей из группы с дегенеративным заболеванием мозга (Tg-CON) постепенно убыстрялось.

Кроме того, как показано на фиг. 6 B, было установлено, что в том случае, когда мышь входила в темную камеру и выходила из темной камеры после получения удара электрическим током, мыши в группах WT-CON и Tg+MDH-001 имели сходное высокое время «застывания» в результате удара, а у мышей из группы Tg-CON было отмечено время «застывания» меньше, чем в группах WT-CON и Tg+MDH-001. Данные результаты означают, что полученные из Lactobacillus paracasei везикулы также оказывают действие на восстановление способности к запоминанию у мышей с дегенеративным заболеванием мозга.

Пример 6. Оценка действия полученных из Lactobacillus paracasei везикул на образование бляшек бета-амилоида у мышей с неврологическим нарушением

Бета-амилоидная бляшка (Aβ) - это характерный белок, который обнаруживается в мозге пациента с болезнью Альцгеймера и у мышей с моделью Tg-APP/PS1. Известно, что отложения Aβ бляшек начинают накапливаться в мозге мыши и вызывают симптомы болезни Альцгеймера. Отложенные Aβ бляшки исследовали с помощью флуоресцентного окрашивания срезов мозга мыши с помощью красителя Тиофлавин-S.

В результате, как показано на фиг. 7 А, было установлено, что Aβ бляшки, расположенные в теменной коре, гиппокампе и области пириформной коры мозга мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга (Tg + MDH-001), которым были введены полученные из Lactobacillus paracasei везикулы, имели отличие от группы мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга (Tg-CON).

Кроме того, как показано на фиг. 7 B и C, было установлено, что количество Aβ бляшек и площадь Aβ бляшек на единицу площади, расположенных в области теменной коры и области пириформной коры мозга в группе Tg+MDH-001 понижено по сравнению с группой Tg-CON. Приведенные выше результаты означают, что везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, оказывают подавляющее действие на накопление Aβ бляшек у мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга.

Пример 7. Оценка способности везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, восстанавливать нервные клетки на мышиной модели неврологического нарушения

На основе приведенных выше примеров для того, чтобы объяснить механизм, подавляющий деградацию нервной функции, у мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга, которым вводили полученные из Lactobacillus paracasei везикулы, сначала оценили нейрогенез.

Как показано на фиг. 8, с помощью флуоресцентного окрашивания клеток Ki-67, известным маркером нейрональной дифференцировки, было установлено, что количество клеток, окрашенных Ki-67, в группе мышей с дегенеративным заболеванием мозга (Tg-CON) было понижено по сравнению с группой нормальных мышей (WT-CON).

Кроме того, было обнаружено, что число клеток, окрашенных Ki-67, в группе мышей (Tg+MDH-001), которым вводили везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, было повышено по сравнению с Tg-CON группой, и было также установлено, что количество было восстановлено до уровня WT-CON.

Даблкортин (DCX), экспрессированный в нейрональных стволовых клетках, также был проанализирован как маркер пролиферации нейрональных стволовых клеток (нейрогенеза).

Как показано на фиг. 9, было установлено, что число клеток, окрашенных даблкортином, в группе Tg-CON понижено по сравнению с группой WT-CON, и было подтверждено, что число клеток, окрашенных даблкортином в группе Tg+MDH-001, обработанной полученными из Lactobacillus paracasei везикулами, было повышено по сравнению с группой Tg-CON и восстановилось до уровня WT-CON. На основе этих результатов можно видеть, что полученные из Lactobacillus paracasei везикулы индуцировали нейрогенез у мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга, и было подтверждено, что улучшение нервной функции мозга везикулами, полученными из Lactobacillus paracasei, было связано с нейрогенезом нервных клеток мозга.

Пример 8. Оценка способности везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, индуцировать образование дендритов нервных клеток у мыши с моделью неврологического нарушения

Исходя из приведенных выше примеров, для того, чтобы объяснить механизм действия в отношении улучшения нервной функции, показанного на мышах с моделью дегенеративного заболевания мозга, которым были введены полученные из Lactobacillus paracasei везикулы, была оценена способность нервных клеток образовывать дендриты (процесс дендритного роста). Учитывая то, что изменения морфологии и количества дендритов могут влиять на восстановление памяти, была подтверждена экспрессия ассоциированного с микротрубочками белка 2 (MAP2), хорошо известного маркера нервов и нейроспецифического белка цитоскелета. В дополнение к этому MAP2 предназначен для того, чтобы определить форму дендритов во время развития мозга, стабилизировать рост и стабилизировать рост микротрубочек.

В результате, как показано на фиг. 10, было обнаружено, что экспрессия MAP2 в группе мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга (Tg-CON) понижалась по сравнению с группой нормальных мышей (WT-CON). Было установлено, что экспрессия MAP2 в группе мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга (Tg+MDH001), которым были введены полученные из Lactobacillus paracasei везикулы, была повышена по сравнению с Tg-CON группой, и восстанавливалась до уровня WT-CON. По результатам видно, что везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, оказывали воздействие на восстановление MAP2 у мышей с моделью дегенеративного заболевания мозга, причем везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, улучшали функцию нейронов, защищая микроструктуру дендритов и улучшая межклеточную целостность.

Пример 9. Терапевтический эффект везикул, полученных из Lactobacillus paracasei, на ментальную функцию с 14 по 16 дни после стимулирования нервно-психического стресса у мыши с моделью психического расстройства

Был проведен эксперимент на мышах с целью исследовать, было ли блокировано поведенческое возбуждение вследствие изменений эмоциональной функции в результате стресса в том случае, когда полученные из Lactobacillus paracasei везикулы вводили после стимулирования нервно-психического стресса. Для этой цели, в соответствии со схемой эксперимента, представленной на фиг. 11, были куплены самцы C57BL/6 мышей 7-недельного возраста, которых случайным образом разбили на четыре группы, то есть, группу нормальных мышей (CON или CON+Veh), которым вводили физраствор (0,9% физраствор, 100 мкл) в течение 14 дней, группу нормальных мышей (CON+MDH-001), которым вводили везикулы, полученные из Lactobacillus (2 мкг/мышь/100 мкл), группу (RST + Veh), которым вводили физраствор (0,9% физраствор, 100 мкл) и подвергали стрессу физического ограничения (RST) 2 часа ежедневно в течение 14 дней, и группу мышей (RST+MDH-001), которым вводили полученные из Lactobacillus paracasei везикулы (EV, 2 мкг/мышь/100 мкл) и которых подвергали стрессу физического ограничения 2 часа ежедневно в течение 14 дней. Эксперимент проводили в таком порядке тест U-BOX для определения коммуникабельности, тест подвешивания за хвост (TST) и тест принудительного плавания (FST), и оценивали терапевтическое действие на депрессию, вызванное введением внеклеточных везикул, на 14-16 дни после стимулирования стресса.

Сначала тест U-BOX был проведен на мышах из четырех групп, описанных выше. Как показано на фиг. 12 A, в данном тесте было установлено, сколько времени длился контакт с целевой мышью путем помещения целевой мыши на проволочную сетку на одной стороне U-образного поля и помещения только проволочной сетки на противоположной стороне без целевой мыши.

В результате, как показано на фиг. 12 B, было показано, что в контроле (CON+Veh) и в группе контроля (CON+MDH-001), которой вводили везикулы, время, которое мышь проводила в целевом месте (мишень) было увеличено по сравнению с временем, которое мышь проводила в нецелевом месте, но в случае группы (RST+Veh), в которой мыши подвергались стрессу физического ограничения, мыши проводили меньше времени в целевом пространстве, чем другие группы.

В противоположность этому, как показано на фиг. 12 C, было установлено, что в группе (RST+MDH-001), которой одновременно вводили везикулы, время, проводимое с целевой мышью, было повышено до уровня, сходного с контролем.

Кроме того, как проиллюстрировано на фиг. 13, в результате проведения теста подвешивания за хвост (TST) и теста принудительного плавания (FST) было установлено, что неподвижность в группе (RST+Veh), подвергнутой стрессу физического ограничения, была повышена по сравнению с контролем (CON+Veh), в то время как в случае группы (RST+MDH-001), которой вводили везикулы, неподвижность была понижена.

Пример 10. Терапевтический эффект полученных из Lactobacillus paracasei везикул на ментальную функцию в дни с 28 по 30 после стимулирования нервно-психического стресса у мыши с моделью психического расстройства

После проведения эксперимента аналогичным образом, как в примере 9, в дни с 28 по 30 после стимулирования стресса был оценен терапевтический эффект полученных из Lactobacillus paracasei везикул на эмоциональное расстройство.

Во-первых, в результате теста U-BOX было установлено (фиг. 14), что при заданных условиях, время, которое контроль, подвергнутый стрессу (RST+Veh), проводил в целевом пространстве (мишень) было уменьшено по сравнению с контролем (CON+Veh). В противоположность этому, было установлено, что в группе, подвергнутой стрессу, и группе с введением внеклеточных везикул (RST+MDH-001), время, которое мыши проводили в целевом пространстве, восстанавливалось до уровня контроля.

Затем, в результате проведения теста подвешивания за хвост было установлено (фиг. 15), что в группе, подвергнутой стрессу (RST+Veh), неподвижность была значительно повышена по сравнению с контролем (CON+Veh), тогда как в группе, подвергнутой стрессу и с введением везикул (RST+MDH-001), время неподвижности было понижено до уровня контроля.

По результатам примеров 9 и 10, видно, что когда полученные из Lactobacillus paracasei везикулы вводили мышам после нервно-психического стресса, везикулы Lactobacillus paracasei эффективно подавляли ухудшение ментальной функции, которое наблюдается после стресса.

Пример 11. Оценка эффектов полученных из Lactobacillus paracasei везикул на активацию AMPK в клетках, культивируемых in vitro

Клеточное старение определяется как потеря способности клеток к делению в результате неоднократного физического, химического, биологического и нервно-психического стресса, при этом повторяющийся стресс вызывает нарушение способности клеток к регенерации наряду со старением клеток, приводя к болезням, связанным со старением. В недавнее время активация AMPK белка привлекла внимание в качестве внутриклеточного сигнального пути, подавляющего клеточное старение. Исходя из этой предпосылки, в этом примере, был проведен эксперимент с целью оценить эффект полученных из Lactobacillus paracasei везикул (MDH-001) на клеточное старение c помощью внутриклеточной активации AMPK.

Для того, чтобы оценить активность AMPK в зависимости от концентрации полученных из Lactobacillus paracasei везикул, клетки in vitro обрабатывали везикулами, полученными из Lactobacillus paracasei, при концентрации 0, 0.1, 1 и 10 мкг/мл в течение 1 часа. В качестве контролей применяли инсулин, способствующий старению, и метформин, подавляющий старение. После обработки клеток этими лекарственными средствами с помощью вестерн-блоттинга измеряли различия в количестве pAMPK, который является важным индексом в сигнальном пути AMPK.

В результате, как показано на фиг. 16, экспрессия pAMPK была повышена метформином, который является положительным контролем, и даже в том случае, когда клетки были также обработаны полученными из Lactobacillus paracasei везикулами, экспрессия pAMPK повышалась зависимым от концентрации везикул образом.

Приведенное выше описание настоящего изобретения предоставляется с иллюстративной целью, при этом специалистам в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение, будет понятно, что настоящее изобретение легко может быть модифицировано в другие конкретные формы без изменения технической сущности или основных признаков настоящего изобретения. Поэтому должно быть понятно, что описанные выше примеры являются исключительно иллюстративными во всех аспектах и не являются ограничивающими.

Промышленная применимость

Настоящие изобретатели установили, что везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, при пероральном введении доставлялись в мозг, а также подтвердили, что при пероральном введении полученных из Lactobacillus paracasei везикул животным с моделью дегенеративного неврологического нарушения способность к обучению и память у животных улучшалась до нормальных уровней, подавлялось отложение амилоидных бляшек в ткани мозга, улучшалась до нормальных уровней пролиферация стволовых клеток в гиппокампе, и восстанавливалось до нормальных уровней образование дендритов нервных клеток. Таким образом, настоящее изобретение может применяться в качестве композиции для предотвращения, улучшения или лечения неврологического нарушения или психического расстройства, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei в качестве активного ингредиента, и поэтому обладает промышленной применимостью.

Claims (17)

1. Применение фармацевтической композиции, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента для предотвращения или лечения дегенеративных заболеваний, выбранных из группы, состоящей из легких когнитивных нарушений, деменции и болезни Альцгеймера или нервно-психического стресса.

2. Применение по п. 1, в котором композиция дополнительно содержит один или несколько ингредиентов, выбранных из группы, включающей носитель, эксципиент и разбавитель.

3. Применение по п. 1, в котором везикулы имеют средний диаметр из 10 до 1000 нм.

4. Применение по п. 1 или 3, в котором везикулы изолируют из культуральной среды Lactobacillus paracasei.

5. Применение по п. 1 или 3, в котором везикулы выделяют из пищи, приготовленной путем добавления Lactobacillus paracasei.

6. Применение по п. 1 или 3, в котором везикулы естественным или искусственным образом секретируются из Lactobacillus paracasei.

7. Применение композиции, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента для ингаляции для предотвращения или лечения дегенеративных заболеваний, выбранных из группы, состоящей из легких когнитивных нарушений, деменции и болезни Альцгеймера или нервно-психического стресса.

8. Применение по п. 7, в котором композиция дополнительно содержит один или несколько ингредиентов, выбранных из группы, включающей пропеллент, порошковую смесь соединения и порошковую основу.

9. Применение фармацевтической композиции, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента для предотвращения или лечения старения, где композицию используют для активации передачи сигналов AMPK.

10. Применение по п. 9, в котором старение является старением мозга или нейронов.

11. Применение по п. 9 или 10, в котором композиция дополнительно содержит один или несколько ингредиентов, выбранных из группы, включающей носитель, эксципиент и разбавитель.

12. Применение пищевой композиции, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента, для предотвращения или улучшения состояния при легких когнитивных нарушениях, деменции и болезни Альцгеймера или нервно-психическом стрессе.

13. Способ предотвращения или лечения дегенеративных заболеваний, выбранных из группы, состоящей из легких когнитивных нарушений, деменции и болезни Альцгеймера или нервно-психического стресса, включающий пероральное введение индивидууму композиции, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента.

14. Применение композиции, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента для предотвращения или лечения дегенеративных заболеваний, выбранных из группы, состоящей из легких когнитивных нарушений, деменции и болезни Альцгеймера или нервно-психического стресса.

15. Применение по п. 14, в котором везикулы выделяют из пищи, приготовленной путем добавления Lactobacillus paracasei.

16. Способ предотвращения, лечения или корректирования старения, включающий пероральное введение индивидууму композиции, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента, и где композицию применяют для активации передачи сигналов AMPK.

17. Применение композиции, содержащей везикулы, полученные из Lactobacillus paracasei, в качестве активного ингредиента для предотвращения, лечения или корректировки старения, и где композицию применяют для активации передачи сигналов AMPK.