CN116806153A - 用于预防或治疗神经发育障碍、神经系统疾病或精神疾病的包含源自藤黄微球菌的细胞外囊泡的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种来源于藤黄微球菌的细胞外囊泡及其用途，更具体地说，涉及一种用于缓解、预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的组合物，包括作为活性成分的来源于藤黄微球菌的囊泡，能够有效治疗由于神经发生功能障碍或神经炎症而发生的诸如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症、亨廷顿病等疾病、癫痫、多发性硬化症、慢性炎症性脱髓鞘多发性神经病、糖尿病神经病、自闭症谱系障碍、注意缺陷多动综合征、重度抑郁症、双相情感障碍、焦虑症、精神分裂症、强迫症、创伤后应激障碍、分离性障碍、饮食障碍、药物使用障碍、以及人格障碍。

Description

用于预防或治疗神经发育障碍、神经系统疾病或精神疾病的 包含源自藤黄微球菌的细胞外囊泡的组合物

技术领域

本发明涉及来源于藤黄微球菌(Mcrococcus luteus)的细胞外囊泡及其用途，更具体地说，涉及一种用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神病的组合物，该组合物包括来源自藤黄微球菌的细胞外囊泡作为活性成分。

本申请要求获得分别于2020年12月28日和2021年11月12日在韩国知识产权局提交的第10-2020-0184337号和第10-2021-0156079号韩国专利申请的优先权和权益，该申请的说明书和附图中公开的所有内容均纳入本申请。

背景技术

随着21世纪的到来，过去被认为是传染病的急性传染病的重要性已经下降，而由我们身体主要器官的免疫或代谢紊乱引起的慢性炎症性疾病已经改变了疾病的模式，成为降低生活质量和决定人类寿命的主要疾病。近年来，研究集中于这样一个事实：一种难治性疾病的发生是因为人与微生物组之间的不和谐导致免疫和代谢功能的异常，从而导致慢性炎症和异常细胞死亡。特别是，作为21世纪老龄化社会的一种难治性疾病，包括认知功能障碍如阿尔茨海默氏病和运动功能障碍如帕金森氏病和卢伽雷氏病；神经发育障碍如自闭症和注意力缺陷多动症；精神疾病如焦虑症、抑郁症和精神分裂症等，作为决定人类生活质量的主要疾病，已成为国民健康的主要问题。

神经细胞(神经元)的变性，由于神经细胞的异常死亡，导致脑-神经组织的结构和功能异常。神经系统疾病，如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症、亨廷顿病、癫痫、多发性硬化症、慢性炎症性脱髓鞘多发性神经病和糖尿病神经病，是由于神经细胞变性或神经炎症的结果而发生。此外，神经系统疾病，如Keams-Sayre综合征(KSS)、慢性进行性外眼病(CPEO)、线粒体脑肌病伴乳酸中毒和中风样发作(MELAS)、肌阵挛癫痫伴锯齿状红色纤维(MERRF)、神经源性无力伴共济失调和视网膜色素变性(NARP)、Leigh综合征(LS)和线粒体隐性共济失调综合征也是由神经细胞的退行性改变引起的。

最近，人们发现，抑郁症、自闭症和精神分裂症等精神疾病与腹痛密切相关。腹痛伴随着腹泻和便秘，反复出现时导致肠易激综合征，这已被证明与肠道微生物失调有关。有报道称，当不良食物、抗生素使用等导致肠道细菌失衡时，有害的肠道微生物会使健康的大肠防御膜出现裂缝，造成肠漏，然后有害细菌衍生的毒素被全身吸收，引起或加重抑郁症[Pharmacotherapy.2015Oct；35(10)：910-6]。

随着最近对神经发育疾病、神经系统疾病和精神疾病的发病机制的许多研究结果的公布，人们发现这些疾病的关键途径在分子水平上存在问题。发现并恢复与一种疾病发病机制相关的关键病因机制，给许多疾病的治疗带来了希望。细胞衰老是在细胞反复暴露在各种压力下时发生的，当细胞的免疫和代谢功能在这个过程中受损时，细胞会发生异常的凋亡。也就是说，神经系统疾病、神经发育疾病和精神疾病的关键病理生理学是由于神经干细胞的异常死亡或神经元间的完整性紊乱而发生的。

能量代谢创造出执行细胞功能所需的能量，并产生各种材料，从而通过线粒体产生的ATP从内质网(ER)制造蛋白质和脂质，并将蛋白质和脂质供应给所需区域。细胞从形成的那一刻起就面临着各种压力，生物、化学、物理或心理压力会诱发细胞中的内质网(ER)压力、线粒体功能障碍、溶酶体损伤等，从而在细胞中产生异常物质，细胞通过识别异常物质作为危险信号诱发炎症反应。

免疫是一种针对生物、化学、物理和精神压力的细胞防御机制，并通过先天免疫和适应性免疫发生。最近，人们发现，与免疫功能失调引起的炎症性疾病的病因有关，细胞内氧化应激产生的危险信号被细胞质中的核苷酸结合寡聚结构域(NLRP)识别，这是一种模式识别受体(PRR)，其中，NLRP3蛋白形成炎症小体，引起炎症反应和异常细胞死亡。特别是，由NLRP3炎症小体激活引起的炎症已被称为各种神经发育、神经系统和精神疾病的关键病理机制。

众所周知，在人体中共存的微生物数量达到100万亿，约为人体细胞的10倍，而微生物的基因数量是人类的100倍。微生物群或微生物组是指存在于特定栖息地的微生物群落，包括细菌、古细菌和真核生物。

共存于我们体内的细菌和存在于周围环境中的细菌会分泌出纳米级的囊泡，与其他细胞交换信息，如基因、低分子化合物和蛋白质。粘膜形成了一个物理防御膜，具有200纳米(nm)或更大尺寸的颗粒不能通过，因此，共存于粘膜中的细菌不能通过粘膜，但细菌衍生的囊泡具有200纳米或更小的尺寸，因此相对自由地通过粘膜上皮细胞，被我们的身体吸收。如上所述，虽然菌源性囊泡是从细菌中分泌出来的，但它们的成分、在体内的吸收率和副作用的风险都与细菌不同，因此，使用菌源性囊泡与使用活细胞完全不同，或有很大影响。

局部分泌的菌源性囊泡通过粘膜上皮细胞吸收，诱发局部炎症反应，而通过上皮细胞的囊泡则通过淋巴管被全身吸收，分布到各个器官，并调节分布器官的免疫和炎症反应。例如，源自致病性革兰氏阴性细菌(如大肠杆菌)的囊泡是致病性纳米粒子，会引起局部结肠炎，被血管内皮细胞吸收后，通过诱导炎症反应促进全身炎症反应和血液凝固，也会在肌肉细胞中被吸收，胰岛素在肌肉细胞中发挥作用，引起胰岛素抵抗和糖尿病。相反，来自有益细菌的囊泡可以通过调节由致病性囊泡引起的免疫和代谢功能障碍来调节疾病。

藤黄微球菌是指属于微球菌属的革兰氏阳性细菌，广泛分布在自然界中，如水、灰尘和土壤。众所周知，这些细菌在有毒的有机污染物(如吡啶)中生长时可产生核黄素，并通过叶黄素色素吸收紫外线。众所周知，这些细菌还可以从乳制品和啤酒中分离出来，在干燥环境或高盐环境中生长，并在冷藏温度下(例如在冰箱中)存活很长时间，尽管不会形成孢子。

然而，到目前为止，还没有关于从藤黄微球菌中提取的囊泡被应用于治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神病的报道。

发明内容

技术问题

本发明人为解决常规问题进行了认真的研究，证实当用来自于藤黄微球菌的囊泡处理细胞时，囊泡不仅能显著抑制致病因子分泌的炎症介质，还能有效抑制生物致病因子分泌的异常免疫功能。进一步说，本发明人证实，源自藤黄微球菌的囊泡通过抑制与各种疾病病因有关的一种NLRP3蛋白的表达以及NLRP3炎症小体的形成对炎症介质的分泌来调节免疫功能。此外，本发明人证实，该囊泡通过激活内皮NO合成酶(eNOS)来增强稳态，而NO合成酶是细胞稳态的一个重要信号。此外，本发明人证实，当用该囊泡治疗通过过度诱导神经细胞死亡而导致认知功能障碍的脑部疾病小鼠模型时，不仅与认知功能有关的行为障碍得到抑制，而且异常的蛋白质沉积也得到抑制。此外，本发明人证实，在脑部疾病小鼠模型中，来自藤黄微球菌的囊泡通过增强神经干细胞的增殖和分化，以及神经元间的完整性，对神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病表现出治疗效果。此外，本发明人证实，源自藤黄微球菌的囊泡作用于神经细胞，以增强诱导神经发生的脑源性神经营养因子(BDNF)和防止压力引起的细胞衰老的sirtuin蛋白的表达，因此，发生了由神经发生的治疗效果，从而完成了基于此的本发明。

因此，本发明的一个目的是提供一种用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物组合物，该组合物包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明的另一个目的是提供一种用于预防或缓解神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的食品组合物，其中包括源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明的另一个目的是提供一种用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的吸入剂组合物，其中包括源自藤黄微球菌的囊泡作为一种活性成分。

此外，本发明的另一个目的是提供一种用于递送治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物的组合物，包括源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明的另一个目的是提供一种抗衰老药物组合物，包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明的另一个目的是提供一种抗衰老的食品组合物，包括源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明的另一个目的是提供一种用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物组合物，包括源自微球菌属的菌种的囊泡作为活性成分。

然而，本发明要实现的一个技术问题并不限于上述问题，没有提到的其他问题可由本领域的技术人员从以下描述中清楚地了解。

技术方案

为了实现上述本发明的目的，本发明提供了一种用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物组合物，其中包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明提供了一种用于预防或缓解神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的食品组合物，其中包括源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明提供了一种用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的吸入剂组合物，包括源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明提供了一种用于递送治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物的组合物，其中包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明提供了一种抗衰老药物组合物，包括源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明提供了一种抗衰老的食品组合物，包括源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明提供了一种用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物组合物，包括源自微球菌属细菌的囊泡作为活性成分。

作为本发明的一个示例性实施方案，神经系统疾病可以是退行性神经系统疾病或炎症性神经系统疾病，但本发明不限于此。

作为本发明的另一个示例性实施方案，退行性神经系统疾病可以是一种或多种选自阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症、亨廷顿病、癫痫、Keams-Sayre综合征(KSS)、慢性进行性外眼角膜病(CPEO)的疾病、线粒体脑肌病伴乳酸中毒和卒中样发作(MELAS)、肌阵挛癫痫伴锯齿状红色纤维(MERRF)、神经源性无力伴共济失调和视网膜色素变性(NARP)、Leigh综合征(LS)和线粒体隐性共济失调综合征，但本发明不限于此。

作为本发明的另一个示例性实施方案，炎症性神经疾病可以是一种或多种选自多发性硬化症、慢性炎症性脱髓鞘多发性神经病和糖尿病神经病的疾病，但本发明不限于此。

作为本发明的另一个示例性实施方案，精神疾病可以是一种或多种选自重度抑郁症、双相情感障碍、焦虑症、精神分裂症、强迫症、创伤后应激障碍、分离性障碍、饮食障碍、物质使用障碍和人格障碍的疾病，但本发明不限于此。

作为本发明的另一个示例性实施方案，焦虑症可以是一种或多种选自恐慌症、社交焦虑症、广泛性焦虑症和特定恐惧症的焦虑症，但本发明不限于此。

作为本发明的另一个示例性实施方案，人格障碍可以是一种或多种选自偏执型人格障碍、反社会型人格障碍、边缘型人格障碍、自恋型人格障碍、回避型人格障碍和依赖型人格障碍的人格障碍，但本发明不限于此。

作为本发明的另一个示例性实施方案，神经发育疾病可以是选自智力障碍、交流障碍、自闭症谱系障碍、注意缺陷多动障碍、特定学习障碍和运动障碍的一个或多个组，但本发明不限于此。

作为本发明的另一个示例性实施方案，神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病可能是由于神经发生功能障碍，但不限于此。

作为本发明的另一个示例性实施方案，神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病可由NLR家族含吡啶域3炎症小体(NLR family pyrin domain containing3inflammasome，NLRP3炎症小体)介导，但不限于此。

作为本发明的另一个示例性实施方案，该组合物可抑制NLRP3炎症小体的形成，但不限于此。

作为本发明的另一个示例性实施方案，囊泡的平均直径可以是10至200nm，但本发明不限于此。

作为本发明的另一个示例性实施方案，囊泡可以是自然分泌的，也可以是人工产生的，但本发明不限于此。

作为本发明的另一个示例性实施方案，该组合物可抑制脑或神经细胞的老化，但不限于此。

此外，本发明提供了一种预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物。

此外，本发明提供了一种包含源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的用途。

此外，本发明提供了一种来源于藤黄微球菌的囊泡用于制备治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物的用途。

此外，本发明提供了一种递送治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含源自藤黄微球菌的囊泡的组合物，该组合物含有治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物作为活性成分。

此外，本发明还提供了一种包含源自藤黄微球菌的囊泡的组合物作为活性成分递送治疗神经发育性疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物的用途。

有益效果

本发明人证实，当口服来自藤黄微球菌的囊泡时，该囊泡被吸收到血管中并分布在脑组织中。此外，本发明人证实，当上皮细胞和炎症细胞用该囊泡处理时，致病因子分泌的炎症介质被明显抑制，当细胞用该囊泡处理时，NLRP3蛋白表达和致病因子诱导的NF-kB(p65)信号被抑制。此外，本发明人证实，当用囊泡处理细胞时，被致病因素抑制的eNOS信号被增加。此外，本发明人证实，当用囊泡处理神经细胞时，被致病因素抑制的一种BDNF基因的表达得到恢复。此外，本发明人证实，当神经细胞用囊泡处理时，被致病因素抑制的sirtuin1和sirtuin7基因的表达得到了恢复。此外，本发明人证实，当囊泡被给予神经疾病小鼠模型时，认知功能得到了明显恢复。此外，本发明人证实，当对神经病小鼠模型施用囊泡时，神经发生得到了明显的恢复，因此，根据本发明从藤黄微球菌中提取的囊泡可被有效地用于开发药物、健康功能食品等，用于预防神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病，如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症、亨廷顿氏病、癫痫、多发性硬化症、慢性炎症性脱髓鞘多发性神经病、糖尿病神经病、自闭症谱系障碍、注意力缺失多动综合征、重度抑郁症、双相情感障碍、焦虑症、精神分裂症、强迫症、创伤后应激障碍、分离性障碍、饮食障碍、药物使用障碍和人格障碍，减轻其症状，或治疗这些障碍，并能有效地用作治疗神经发育疾病、神经疾病或精神病的药物输送系统。

附图说明

图1显示了在对小鼠口服源自藤黄微球菌的囊泡后，随着时间的推移，通过去除器官来测量每个器官的荧光强度的结果。

图2是说明对小鼠口服来自藤黄微球菌的囊泡后，随着时间的推移，囊泡在脑组织中的分布模式的视图。

图3是视图，说明通过向上皮细胞施用源自藤黄微球菌的囊泡(MDH-101EV)或阳性对照药物地塞米松(Dex)来评价抑制由源自大肠杆菌的囊泡(E.coli EV)的炎症介质分泌的效果，这种炎症介质是一种炎症致病因子。

图4A和4B是说明来源于藤黄微球菌的囊泡用于抑制大肠杆菌衍生的囊泡(E.coli)分泌炎症介质IL-8的剂量依赖性(A)和比较与对照药物地塞米松疗效的实验结果(B)的视图，通过将来源于藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)给予上皮细胞。

图5是说明通过向作为炎症细胞的巨噬细胞施用来自藤黄微球菌的囊泡(M.luteus EV)来评估抑制由源自大肠杆菌的囊泡(E.coli EV)的炎症介质分泌的效果的实验方案的视图，该囊泡是一种炎症致病因子。

图6A和6B是说明通过向巨噬细胞施用来源于大肠杆菌的囊泡(大肠杆菌EV)，确认对炎症介质TNF-a(A)和IL-6(B)的分泌抑制作用的视图。

图7是说明为了评估由藤黄微球菌衍生的囊泡(MlEV)调节免疫功能的效果，在从施用脂多糖(LPS)(是一种炎症致病因子)的小鼠分离出来的组织中确认免疫功能调节蛋白NLRP3、T-bet和ROR-γ t的表达模式的结果视图。

图8是说明通过向巨噬细胞施用来自藤黄微球菌的囊泡(M.luteus EV)，确认LPS对炎症介质IL-1β的分泌抑制作用的结果的视图。

图9是评估JNK和NF-kB(p65)的激活程度的视图，这些信号是与先天性免疫有关的，在从施用LPS的小鼠中分离出来的组织中，LPS是一种炎症致病因子，为了评估由来自藤黄微球菌的囊泡(MlEV)调节先天性免疫功能的效果。

图10是一组说明与神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的病因有关的3型先天性淋巴细胞(ILC3)的数量的视图，这些细胞分离自施用LPS的小鼠，LPS是一种炎症致病因子，以评估调节先天性免疫细胞产生的来自藤黄微球菌的囊泡(MlEV)的效果。

图11是说明通过向细胞施用来源于藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)或阳性对照药物地塞米松，以评价由源自大肠杆菌的囊泡(E.coli EV)(是一种炎症致病因子)的炎症介质抑制的eNOS信号的影响的视图，该信号对于细胞的稳态很重要。

图12是说明通过向细胞施用来源于藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)和Aβ，评估对由致病因子β-淀粉样蛋白(Aβ)抑制的sirtuin基因表达的影响结果的视图，以评估来源于藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)对sirtuin基因表达的影响，这对细胞稳态很重要。

图13是说明通过向细胞施用来源自藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)和Aβ，评估对神经营养素和受体基因表达的影响的结果视图，从而评估来源自藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)对神经营养素和受体基因表达的影响，其对神经发生很重要。

图14是说明在脑病小鼠模型(Tg-APP/PS1小鼠)中口服源自藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)(WT+veh：正常小鼠组，Tg+veh：脑病小鼠组，Tg+MDH-101：脑病小鼠模型口服源自藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)得到的小鼠组，下同。)的实验视图。

图15是一组视图，说明通过新的物体/位置识别测试，源自藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)对Tg-APP/PS1脑病小鼠模型的认知功能的治疗效果。

图16说明了通过使用源自藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)在Tg-APP/PS 1脑病小鼠模型中进行水迷宫试验，评价源自藤黄微球菌的囊泡对学习能力的疗效、(A)是说明水迷宫试验方案的视图，(B)是说明在5天的学习期间找到隐藏平台的时间的结果的视图，(C)是说明小鼠在水瓶的每个部分停留的时间的视图。

图17说明了通过被动回避试验评价来源于藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)对Tg-APP/PS1脑病小鼠模型的记忆能力改善的疗效，(A)是说明被动回避试验方案的视图、(B)是测量受电击的小鼠进入暗室后重新进入暗室所需时间的视图，以及(C)是说明小鼠受电击后的冷冻时间的视图。

图18说明了比较Tg-APP/PS1脑病小鼠模型的顶叶皮层、海马和针状皮层区域的淀粉样β(Aβ)斑块荧光染色图像和定量数据的结果，是说明(A)Aβ斑块染色照片，(B)单位面积的Aβ斑块数量，和(C)Tg+veh组(TG)和Tg+MDH-101组的顶叶皮层、海马和针状皮层中单位面积的Aβ斑块面积的视图。

图19说明了通过染色Ki-67(是大脑中初始神经发生的一个标志物)的表达，证实了源自藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)对Tg-APP/PS1脑病小鼠模型海马区神经干细胞增殖的疗效的结果，左侧是说明Ki-67染色结果的视图，右侧是说明Tg+veh组和Tg+MDH-101组被Ki-67染色的细胞数相对于正常小鼠组(WT+veh)的比率(WT CON：正常小鼠组，和Tg组：脑小鼠组，下同。)。

图20说明了通过用双皮质素(DCX)(是一个与神经干细胞分化和迁移有关的标志物)染色，评估源自藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)在Tg-APP/PS1脑病小鼠模型海马区对神经干细胞的分化和迁移的疗效的结果，左边是说明DCX染色结果的视图，右边是说明DCX染色的平均细胞数的视图；和

图21说明了通过用MAP2对脑组织神经细胞进行染色，评估来源于藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)在Tg-APP/PS1脑病小鼠模型海马区对神经细胞树突形成的疗效的结果，左边是说明用MAP2染色结果的视图，右边是说明MAP2表达水平的视图。

具体实施方式

本发明涉及来源于藤黄微球菌的囊泡及其用途。

下文将详细描述本发明。

本发明人证实，当小鼠口服来自藤黄微球菌的囊泡时，该囊泡被系统地吸收到血管中并分布在脑组织中(见实施例2)。

此外，本发明人证实，当上皮细胞和巨噬细胞用该囊泡处理时，炎症因子的炎症介质IL-8、TNF-α和IL-6的分泌受到明显的抑制(见实施例3和4)。

此外，本发明人证实，在神经发育疾病、神经系统疾病和精神疾病的病因中，NLRP3蛋白的表达(NLRP3是一种关键的信号元素)和由NLRP3炎症小体引起的IL-1β的分泌被源自藤黄微球菌的囊泡明显抑制(见实例5)。

此外，本发明人证实，JNK(一种引发NLRP3炎症小体形成的信号)和NF-kB(p65)信号通路被来自藤黄微球菌的囊泡有效抑制(见实施例6)。

此外，本发明人证实，eNOS(是细胞稳态的一个重要信号)的激活，它被炎症因子抑制，但被来自藤黄微球菌的囊泡恢复(见实施例7)。

此外，本发明人证实，当脑病小鼠模型口服来自藤黄微球菌的囊泡时，认知功能、学习能力和记忆能力都恢复到正常水平，而且异常的蛋白质沉积也被抑制(见实施例11至14)。

此外，本发明人证实，在脑病小鼠模型中，当口服来自藤黄微球菌的囊泡时，神经干细胞的增殖、迁移和分化恢复到正常水平，对神经元间整合很重要的树突形成也恢复到正常水平(见实例15和16)。

此外，本发明人证实，当向神经细胞施用异常蛋白时，被异常蛋白减少的神经生成介质--BDNF基因的表达恢复到正常水平，与细胞平衡有关的介质--sirtuin1和sirtuin7基因的表达也恢复到正常水平(见实例9和10)。

因此，本发明提供了一种用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物组合物，其中包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明可提供一种抗衰老药物组合物，其中包括源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

如本文所用，术语″胞外囊泡″或″囊泡″是指由各种细菌分泌的纳米大小的膜形成的结构，包括例如来自革兰氏阴性细菌如E.coli，它具有内毒素(脂多糖)、有毒蛋白质以及细菌的DNA和RNA；或来自革兰氏阳性细菌的囊泡，如微球菌属Micrococcus的细菌，它具有外膜囊泡(OMV)、蛋白质和核酸以及细菌细胞壁的成分，如肽聚糖和脂藻酸。

在本发明中，胞外囊泡或囊泡包括所有从藤黄微球菌自然分泌的结构，或由人工生产的膜形成的结构，在本发明中，胞外囊泡或囊泡可由MDH-101、MDH-101EVs、MluteusEVs或MlEVs表示。

囊泡可通过热处理或在藤黄微球菌培养过程中的高压灭菌来分离，或使用选自离心、超速离心、高压灭菌、挤压、超声处理、细胞裂解、均质化、冷冻-解冻、电穿孔、机械降解、化学处理、用过滤器过滤、凝胶过滤色谱、预流电泳和细胞培养基的毛细管电泳中的一种或多种方法。此外，对于分离，可进一步进行洗涤以去除杂质，并对获得的囊泡进行浓缩。

在本发明中，通过该方法分离的囊泡为球体形式，其平均直径可为10至200nm、10至190nm、10至180nm、10至170nm、10至160nm、10至150nm、10至140nm、10至130nm、10至120nm、10至110nm、10至100nm，10至90nm，10至80nm，10至70nm，10至60nm，10至50nm，20至200nm，20至180nm，20至160nm，20至140nm，20至120nm，20至100nm，或20至80nm，最好是20至200nm，但平均直径不限于此。

如本文所用，本文所用的术语″包括作为活性成分″是指包括足够的量以实现藤黄微球菌衍生的囊泡的功效或活性。

如本文所用，术语″神经发育性疾病″是指与发育迟缓或包括大脑在内的中枢神经系统受损有关的所有发育性疾病，神经发育性疾病被称为由大脑发育性疾病而非社会心理问题引起的疾病，其例子可包括例如智力障碍、交流障碍、自闭症谱系障碍、注意缺陷多动障碍、特定学习障碍、运动障碍等等。

如本文所用，术语″神经系统疾病″是指由神经系统，即大脑、脊髓、神经等的异常引起的疾病，在本发明中，神经系统疾病可以是退行性神经系统疾病或炎症性神经系统疾病，任何由神经细胞损伤引起的疾病或病理状况都可以包括在内，不受限制。

如本文所用，术语″退行性神经疾病″是指随着年龄增长而发生在大脑中的退行性疾病，其例子可包括阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症、亨廷顿病、癫痫、Kearns-Sayre综合症(KSS)、慢性进行性外眼球麻痹症(CPEO)、线粒体脑肌病伴乳酸中毒和卒中样发作(MELAS)、肌阵挛癫痫伴锯齿状红色纤维(MERRF)、神经源性无力伴共济失调和视网膜色素变性(NARP)、Leigh综合征(LS)、线粒体隐性共济失调综合征，等等。

如本文所用，术语″炎症性神经疾病″是指由发生在中枢神经系统的神经炎症影响所引起的疾病，其例子可包括多发性硬化症、慢性炎症性脱髓鞘多发性神经病、糖尿病性神经病等。

如本文所用，术语″精神疾病″是指影响人的思想、情感和行为等事物的病理精神状态，是精神功能受损状态的总称，其例子可包括重度抑郁症、双相情感障碍、焦虑症、精神分裂症、强迫症、创伤后应激障碍、分离性障碍、饮食障碍、物质使用障碍、人格障碍等。

如本文所用，术语″焦虑症″是指一个人无缘无故感到焦虑或过度焦虑的精神障碍，其例子可包括恐慌症、社交焦虑症、广泛性焦虑症、特定恐惧症等。

如本文所用，术语″人格障碍″是指个人的病态情绪、思想和行为模式，这些情绪、思想和行为模式从幼年开始逐渐发展，并在青少年或成年早期变得更加强烈，其例子可能包括偏执型人格障碍、反社会型人格障碍、边缘型人格障碍、自恋型人格障碍、回避型人格障碍、依赖型人格障碍等。

在本发明中，神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病可以是由神经发生功能障碍引起的疾病，更具体地说，可以是由各种压力引起的线粒体功能障碍，或由NLRP3炎症小体介导的神经细胞损伤、神经炎症和/或神经退化引起的神经发生功能障碍。

“神经发生”是指神经细胞由神经干细胞生成的过程，可包括成熟神经发生。

如本文所用，术语″由NLR家族含吡啶域3炎症小体(NLRP3炎症小体)介导″是指由NLR3炎症小体的过度形成通过各种信号通路诱导神经炎症反应而引起的神经损伤产生，并根据本发明的一个例子、由于源自藤黄微球菌的囊泡可通过抑制引动NLRP3炎症小体形成的信号通路来抑制NLRP3炎症小体的形成，因此通过抑制NLRP3炎症小体的形成，可有效预防、缓解或治疗由NLR家族含吡啶域3炎症小体(NLRP3炎症小体)介导的神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病。

如本文所用，术语″抗衰老″是指通过预防和抑制衰老来尽可能地延缓衰老，根据本发明的一个实施例，包含囊泡作为活性成分的组合物可通过抑制神经发生功能障碍来抑制大脑或神经细胞的衰老。

本发明组合物中的囊泡的量可以根据疾病的症状、症状的进展程度、病人的状况等进行适当的调整，相对于组合物的总重量，可以从例如0.0001wt％至99.9wt％或0.001wt％至50wt％，但本发明不限于此。该量比是基于去除溶剂的干燥产品的量的数值。

根据本发明的药物组合物可以进一步包括合适的载体、赋形剂和稀释剂，这些都是在制备药物组合物中常用的。例如，赋形剂可以是选自稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、吸附剂、保湿剂、薄膜涂层材料和控释添加剂的一个或多个组。

根据本发明的药物组合物可以按照常用方法配制成粉剂、颗粒剂、缓释型颗粒剂、肠溶颗粒剂、液体、滴眼剂、酏剂、乳剂、悬浮剂、烈酒、特罗凯、芳香水、柠檬水、片剂、缓释型片剂肠溶片、舌下片、硬胶囊、软胶囊、缓释型胶囊、肠溶胶囊、丸剂、酊剂、软提取物、干提取物、液体提取物、注射剂、胶囊、灌流液，或外用制剂，如膏剂、洗剂、糊剂、喷雾剂、吸入剂、贴片、无菌注射液或气雾剂。外用制剂可以有一个配方，如膏药、凝胶、贴片、喷雾、软膏、膏药、洗剂、麻药、糊剂或弹力胶。

作为可包括在根据本发明的药物组合物中的载体、赋形剂和稀释剂，乳糖、葡萄糖、蔗糖、低聚糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、槐树胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。

在配制时，可使用常用的稀释剂或辅料，如填料、增稠剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂和表面活性剂。

根据本发明，作为片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂和片剂的添加剂，辅料如玉米淀粉、马铃薯淀粉、小麦淀粉、乳糖、白糖、葡萄糖、果糖、D-甘露醇、沉淀碳酸钙、合成硅酸铝、二元磷酸钙、硫酸钙、氯化钠、碳酸氢钠、纯羊毛脂、微晶纤维素、糊精、海藻酸钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、高岭土、尿素、胶体硅胶、羟丙基淀粉、羟丙基甲基纤维素(HPMC)1928、HPMC2208、HPMC2906、HPMC2910、丙二醇、酪蛋白、乳酸钙以及和粘合剂，如明胶、阿拉伯胶、乙醇、琼脂粉、邻苯二甲酸醋酸纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、葡萄糖、纯水、酪蛋白酸钠、甘油、硬脂酸、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素钠、甲基纤维素、可使用微晶纤维素、糊精、羟纤维素、羟丙基淀粉、羟甲基纤维素、精制虫胶、淀粉、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮，以及崩解剂，如羟丙基甲基纤维素、玉米淀粉、琼脂粉、甲基纤维素、膨润土、羟丙基淀粉、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、羧甲基纤维素钙、柠檬酸钙、月桂醇硫酸钠、硅酸酐、1-羟丙基纤维素、葡聚糖、离子交换树脂、聚醋酸乙烯酯、经甲醛处理的酪蛋白和明胶、海藻酸、淀粉、瓜尔胶、碳酸氢钠、聚乙烯吡咯烷酮、磷酸钙、胶凝淀粉、阿拉伯胶、直链淀粉、果胶、聚磷酸钠、乙基纤维素、白糖、硅酸铝镁、二山梨醇溶液和无水硅酸；和润滑剂，如硬脂酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸、氢化植物油、滑石粉、狼毒粉、高岭土、凡士林、硬脂酸钠、可可脂、水杨酸钠、水杨酸镁、聚乙二醇4000、PEG6000、液体石蜡、氢化大豆油(Lubri蜡)、硬脂酸铝、硬脂酸铝、硬脂酸锌、月桂醇硫酸钠、氧化镁、Macrogol、合成硅酸铝、硅酸酐、高级脂肪酸、高级醇、硅油、石蜡油、聚乙二醇脂肪酸醚、淀粉、氯化钠、醋酸钠、油酸钠、DL-亮氨酸和轻度无水硅酸都可以使用。

作为根据本发明的液体添加剂，水、稀盐酸、稀硫酸、柠檬酸钠、单硬脂酸蔗糖、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯(双酯)、聚氧乙烯单烷基醚、羊毛脂醚、羊毛脂酯、乙酸、盐酸、氨水、碳酸铵、氢氧化钾、氢氧化钠、丙胺、聚乙烯吡咯烷酮、乙基纤维素和羧甲基纤维素钠都可以使用。

在根据本发明的糖浆中，可使用白糖溶液、其他糖或甜味剂等，必要时可使用香料、着色剂、防腐剂、稳定剂、悬浮剂、乳化剂、粘性剂等。

在根据本发明的乳剂中，可使用纯水，必要时可使用乳化剂、防腐剂、稳定剂、香料等。

在根据本发明的悬浮液中，可使用悬浮剂，如金合欢、三角梅、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、海藻酸钠、羟丙基甲基纤维素(HPMC)1828、HPMC2906、HPMC2910等，必要时可使用表面活性剂、防腐剂、稳定剂、着色剂和香料。

根据本发明的注射剂可包括：溶剂，如注射用蒸馏水、0.9％的氯化钠溶液、林格氏溶液、葡萄糖溶液、葡萄糖+氯化钠溶液、PEG、乳酸林格氏溶液、乙醇、丙二醇、非挥发性油-芝麻油、棉籽油、花生油、大豆油、玉米油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苯；助溶剂，如苯甲酸钠、水杨酸钠、乙酸钠、尿素、尿烷、单乙基乙酰胺、丁唑烷、丙二醇、吐温系列、烟酸酰胺、己胺和二甲基乙酰胺；缓冲剂，如弱酸及其盐类(乙酸和乙酸钠)、弱碱及其盐类(氨和乙酸铵)、有机化合物、蛋白质、白蛋白、蛋白胨和树胶；等渗剂，如氯化钠；稳定剂，如亚硫酸氢钠(NaHSO₃)二氧化碳气体、焦亚硫酸钠(Na₂S₂O₅)、亚硫酸钠(Na₂SO₃)、氮气(N₂)和乙二胺四乙酸；硫酸化剂，如0.1％亚硫酸氢钠、甲醛亚硫酸钠、硫脲、乙二胺四乙酸二钠和丙酮亚硫酸氢钠；止痛剂，如苯甲醇、氯丁醇、盐酸普鲁卡因、葡萄糖和葡萄糖酸钙；以及悬浮剂，如CMC钠、海藻酸钠、吐温80和单硬脂酸铝。

在根据本发明的栓剂中，基质如可可脂、羊毛脂、Witepsol、聚乙二醇、甘油凝胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸和油酸的混合物、Subanal，棉籽油，花生油，棕榈油，可可油+胆固醇，卵磷脂，lanette蜡，单硬脂酸甘油酯，吐温或斯潘，imhausen，monolan(丙二醇单硬脂酸酯)，甘油，混合脂肪酸甘油酯，buytyrum Tego-G，cebes Pharma 16，hexalidebase 95，cotomar，Hydrokote SP，S-70-XXA，S-70-XX75(S-70-XX95)，Hydrokote 25，Hydrokote 711，idropostal，massa estrarium(A,AS，B，C，D，E，I，T)，masa-MF，masupol，masupol-15，neosuppostal-N，paramount-B，supposiro OSI，OSIX，A，B，C，D，H，L，IV型栓剂AB，B，A，BC，BBG，E，BGF，C，D，299，suppostal N，Es，Wecoby W，R，S，M，Es，和tegester甘油三酯碱(TG-95，MA，57)都可以使用。

用于口服的固体制剂包括片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂等，这种固体制剂是通过将组合物与至少一种赋形剂，如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等混合配制而成。除了简单的赋形剂外，还可以使用润滑剂，如硬脂酸镁和滑石粉。

用于口服的液体制剂的例子包括悬浮液、内部使用的液体、乳剂、糖浆等，这些液体制剂除了简单的常用稀释剂，如水和液体石蜡外，还可包括各种类型的赋形剂，如润湿剂、甜味剂、香味剂、防腐剂等。用于肠外给药的制剂包括无菌水溶液、非水溶剂、悬浮液、乳剂、冻干制剂和栓剂。非水溶剂和悬浮液的非限制性例子包括丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油，以及可注射的酯如油酸乙酯。

根据本发明的药物组合物是以药学有效量给药的。在本发明中，″药学有效量″是指足以以适用于医学治疗的合理效益/风险比治疗疾病的量，有效剂量水平可根据包括患者的疾病类型、疾病的严重程度、药物的活性、对药物的敏感性、给药时间、给药途径、排泄率、治疗期和同时使用的药物等因素以及其他医学领域众所周知的因素确定。

根据本发明的组合物可以作为单独的治疗剂或与其他治疗剂联合给药，可以与相关技术中的治疗剂依次或同时给药，并且可以单剂量或多剂量给药。重要的是，考虑到所有上述因素，以能够获得最大效果且无任何副作用的最小量施用该组合物，本领域的普通技术人员可以很容易地确定这一点。

本发明的药物组合物可以通过各种途径给个人服用。所有的给药方法都可以预测，药物组合物可以通过例如口服给药、皮下注射、腹腔注射、静脉注射、肌肉注射、鞘内(脊髓周围空间)注射、舌下给药、经口腔粘膜给药、直肠内插入、阴道内插入、眼部给药、耳内给药、鼻内给药、吸入、经口或鼻喷洒、经皮给药、经皮给药或类似方法。

本发明的药物组合物的确定取决于药物的类型，即活性成分，以及各种相关因素，如要治疗的疾病、给药途径、病人的年龄、性别和体重，以及疾病的严重程度。具体来说，根据本发明的组合物的有效量可根据病人的年龄、性别和体重而变化，一般来说，每1kg体重可服用0.001至150mg的组合物，最好是0.01至100mg的组合物，可每天或每隔一天服用一次，或每天服用一次至三次。然而，由于有效量可根据给药途径、肥胖的严重程度、性别、体重、年龄等因素而增加或减少，所以剂量并不打算以任何方式限制本发明的范围。

此外，本发明提供了一种预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的方法，该方法包括向有需要的受试者施用一种包含源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物。

此外，本发明提供了一种包含源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的用途。

此外，本发明还提供了一种来源于藤黄微球菌的囊泡用于制备治疗神经发育性疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物的用途。

如本文所用，″受试者″是指需要治疗疾病的受试者，更具体地说，是指哺乳动物，如人或非人灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、马和牛，但本发明不限于此。

如本文所用，″给药″是指通过使用任意适当的方法向受试者提供本发明的预定成分。

本文所用的术语″预防″是指抑制或推迟目标疾病的发生的所有行动。本文所用的术语″治疗″是指通过施用根据本发明的药物组合物缓解或有益地改变目标疾病和由此引起的异常代谢症状的所有行动。本文所用的术语″改善″是指通过施用根据本发明的组合物降低与目标疾病相关的参数程度，例如症状的所有行动。

此外，本发明提供了一种用于预防或缓解神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的食品组合物，其中包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

此外，本发明可提供一种抗衰老的食品组合物，包括源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

该食品组合物可以是一种健康功能食品组合物，但不限于此。

根据本发明的囊泡可以通过将活性成分原封不动地添加到食品中使用，也可以与其他食品或食品成分一起使用，但可以按照典型方法适当使用。活性成分的混合量可根据其使用目的(用于预防或缓解)适当地确定。一般来说，当制备食品或饮料时，本发明的组合物的添加量为15wt％或更少，最好是基于原料的10wt％或更少。然而，为了健康和卫生的目的或为了健康控制的目的而长期摄入时，用量可以小于上述范围，而且囊泡在稳定性方面没有问题，所以活性成分的使用量可以大于上述范围。

食物的类型没有特别限制。可以添加该材料的食物的例子包括肉类、香肠、面包、巧克力、糖果、零食、糖果、比萨、方便面、其他面条、口香糖、乳制品包括冰淇淋、各种汤、饮料、茶、饮料、酒精饮料、复合维生素等，并包括典型意义上的所有健康功能食品。

根据本发明的健康饮料组合物可以包含各种风味或天然碳水化合物等，作为典型饮料的附加成分。上述天然碳水化合物可以是单糖，如葡萄糖和果糖，二糖，如麦芽糖和蔗糖，多糖，如糊精和环糊精，以及糖醇，如木糖醇、山梨醇和赤藓糖醇。作为甜味剂，可以使用天然甜味剂，如泰妙菌素和甜叶菊提取物，合成甜味剂，如糖精和阿斯巴甜，等等。天然碳水化合物的比例一般为每100ml本发明的组合物约0.01至0.20g，或约0.04至0.10g。

除上述成分外，本发明组合物还可含有各种营养素、维生素、电解质、香料、着色剂、果胶酸及其盐类、藻酸及其盐类、有机酸、保护性胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇类、碳酸饮料中使用的碳酸剂等。此外，本发明的组合物可包含用于制备天然果汁、果汁饮料和蔬菜饮料的果肉。这些成分可以单独使用，也可以组合使用。这些添加剂的比例并不明显重要，但一般在每100份本发明组合物的重量为0.01至0.20份的范围内选择。

此外，本发明提供了一种用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的吸入剂组合物，其中包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

在吸入剂组合物的情况下，该化合物可根据本领域已知的方法配制，并可通过使用合适的推进剂，例如二氯氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体，方便地以气溶胶喷雾的形式从加压包或雾化器输送。在加压气雾剂的情况下，可以通过提供一个用于传输计量数量的阀门来确定剂量单位。例如，用于吸入器或充气器的明胶胶囊和药筒可以被配制成含有化合物和合适的粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。

此外，本发明提供了一种用于递送治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物的组合物，其中包括来自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

如本文所用，术语″药物递送″是指根据本发明将药物如蛋白质、抗体、高分子化合物、低分子量化合物、siRNA和寡核苷酸装载和递送到囊泡以将药物递送到特定器官、组织、细胞或细胞器的所有手段或行为。

在本发明中，用于递送药物的组合物可将药物递送至选自胃、小肠、大肠、肺、肝、肾和大脑的一个或多个器官，最好可将药物递送至大脑，但不限于此。

进一步地，本发明提供了一种递送治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含源自藤黄微球菌的囊泡的组合物，该组合物含有治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物，作为活性成分靶向治疗。

此外，本发明还提供了一种包含源自藤黄微球菌的囊泡的组合物作为活性成分递送治疗神经发育性疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物的用途。

此外，本发明提供了一种用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物组合物，其中包括来自微球菌属的细菌的囊泡作为活性成分。

发明方式

下面，将提出用于帮助理解本发明的优选实施例。然而，提供以下实施例只是为了更容易理解本发明，本发明的内容不受以下实施例的限制。

实施例

实施例1.从藤黄微球菌培养基中分离囊泡

培养藤黄微球菌菌株后，对其囊泡进行了分离、分析和定性。藤黄微球菌在德曼-罗戈萨和夏普(MRS)培养基中培养，直到吸光度(OD600)在37℃有氧室中变为1.0至1.5，然后再进行培养。随后，回收含有菌种的培养基上清液，在10,000g和4℃下离心20分钟，取出菌种，然后用0.22μm的过滤器进行过滤。并使用100kDa Pellicon 2Cassette滤膜(MerckMillipore，美国)和MasterFlex泵系统(Cole-Parmer，美国)通过微滤将过滤后的上清液浓缩至50mL。然后，使用0.22μm的过滤器再次过滤浓缩的上清液。随后，用BCA检测法对蛋白质进行定量，并对获得的囊泡进行了以下实验。

实施例2.源自藤黄微球菌的囊泡的药代动力学特性的评价

为了研究来源于藤黄微球菌的囊泡在口服期间的药代动力学特征，通过给小鼠口服用荧光染色试剂染色的来源于藤黄微球菌的囊泡，测量从给药前不久到给药后48小时在体内和各器官中表达的荧光。

如图1所示，当用图像确认来源于藤黄微球菌的荧光染色囊泡随时间的长期分布时，可以确认这些囊泡分布在几个器官中。此外，如图2所示，可以确认囊泡在口服后1小时内分布在脑组织中，并持续分布在脑组织中达24小时。

实施例3.来自藤黄微球菌的囊泡在上皮细胞中抗炎作用的评价

如图3所示，上皮细胞用来源于藤黄微球菌的囊泡(MDH-101EV)和阳性对照药物地塞米松进行预处理，用来源于大肠杆菌的囊泡(E.coli EVs)处理诱导炎症后，用酶联免疫吸附试验(ELISA，R&D Systems)测量炎症细胞因子如IL-8的分泌水平。具体来说，用不同浓度(1、10和100μg/mL)的来源于藤黄微球菌的囊泡预处理上皮细胞24小时，然后用浓度为1纳克/毫升的来源于大肠杆菌的囊泡处理24小时，接着测量分泌到介质中的IL-8。

结果，如图4A所示，证实IL-8的分泌被来源于藤黄微球菌的囊泡以剂量依赖的方式抑制了。此外，如图4B所示，证实了与对照药物地塞米松相比，囊泡抑制IL-8分泌的效果优于对照药物，当囊泡经过热处理后，抑制IL-8分泌的效果消失了。从上述结果可以看出，与代表性的抗炎药地塞米松相比，来源于藤黄微球菌的囊泡具有更优异的抗炎作用，来源于藤黄微球菌的囊泡经热处理后介导的抗炎作用消失，说明抗炎作用是由细胞外囊泡中的一种蛋白介导的。

实施例4.评价来源于藤黄微球菌的囊泡在炎症细胞中的抗炎作用

如图5所示，巨噬细胞(RAW 264.7细胞)用来自于藤黄微球菌的囊泡(M.luteusEVs)进行预处理，然后用来自于大肠杆菌的囊泡(E.coli EVs)诱导炎症，接着通过ELISA(R&D Systems)测量如TNF-α和IL-6的炎症细胞因子的水平。具体来说，用不同浓度(1、10和100μg/mL)的藤黄微球菌衍生的囊泡预处理巨噬细胞24小时后，用浓度为1纳克/毫升的大肠杆菌衍生的囊泡处理巨噬细胞24小时，测量分泌到介质中的TNF-α和IL-6的分泌量。

结果，如图6A和6B所示，证实当巨噬细胞用源自藤黄微球菌的囊泡预处理时，来自大肠杆菌的囊泡分泌的炎症致病因子TNF-α(图6A)和IL-6(图6B)以源自藤黄微球菌的囊泡的剂量依赖方式得到抑制。这意味着在诱发神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的炎症细胞中，源自藤黄微球菌的囊泡有效地抑制了炎症致病因子的炎症介质的分泌。

实施例5.源自藤黄微球菌的囊泡对炎症致病因子引起的免疫功能紊乱的调节作用

众所周知，对各种压力的免疫反应在神经系统疾病或精神疾病的发病机制中非常重要。特别是，存在于细胞质中的NLRP3蛋白被认为是神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病发病过程中的一个关键信号通路。为了评估来自藤黄微球菌的囊泡对免疫功能的调节作用，通过给小鼠注射脂多糖(LPS)，通过Western blotting确认了NLR家族含吡啶结构域3(NLRP3)、T细胞中表达的t-box蛋白(t-bet)和网状酸受体相关的孤儿核受体γ(ROR-γt)在组织中的表达，LPS是诱发小鼠免疫功能障碍的代表性致病因子。为了测量每个蛋白质的表达水平，使用50μg的蛋白质，在给地塞米松(Dex)或来自藤黄微球菌的囊泡的小鼠组的肺部组织中，确认了蛋白质的表达。

结果，如图7所示，证实在施用LPS的组(LPS)中，与阴性对照组相比，NLRP3蛋白的表达明显增加，而在向施用LPS的小鼠施用源自藤黄微球菌的囊泡的组(LPS+MlEV)的组织中，NLRP3蛋白的表达明显受到抑制，与施用地塞米松的组(LPS+Dex)类似。此外，与阴性对照组相比，施用LPS的组别中t-bet和ROR-γt蛋白的表达明显增加，而施用源自藤黄微球菌的囊泡的组别(LPS+M1EV)，与施用地塞米松的组别(LPS+Dex)相比，t-bet和ROR-γt蛋白的表达被抑制。这意味着源自藤黄微球菌的囊泡有效地抑制了炎症致病因子的先天免疫功能失调。

此外，用实施例4中的方法对巨噬细胞进行预处理后，通过用LPS处理巨噬细胞来评估对IL-1β的分泌的功效。如图8所示，证实在用囊泡预处理的情况下，炎症因子LPS对IL-1β的分泌以剂量依赖的方式被源自藤黄微球菌的囊泡(M.luteus EV)所抑制。这意味着在诱发神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的炎症细胞中，源自藤黄微球菌的囊泡有效地抑制了IL-1β的分泌，而IL-1β是由NLRP3炎症小体分泌的一种炎症介质。

实施例6.来自藤黄微球菌的囊泡对炎症因子的先天免疫功能障碍的调节作用

众所周知，对各种压力的先天免疫功能失调在神经系统疾病或精神疾病的发病机制中非常重要。最近发现，在免疫性疾病的病因中，Th1和Th17对特定抗原的获得性免疫反应是免疫功能紊乱的关键，而在神经发育性疾病、神经系统疾病或精神病的病因中，各种危险因素(危险信号)诱导先天性免疫形成NLRP3炎症小体，从而引起疾病。此外，为了使危险因素形成NLP3炎症小体，一个引爆过程很重要，在这个过程中，NLPR3蛋白的表达被炎症因子如LPS和TNF-α所诱导。

为了评估源自藤黄微球菌的囊泡在NLRP3炎症小体形成所必需的NLRP3引爆过程中的功效，通过实施例5中的方法，从给予LPS的小鼠身上取出组织，通过Western blotting评估JNK和NF-kB(p65)的激活程度，这是与先天免疫功能有关的信号。用50μg的蛋白质来测量每种蛋白质的表达量，并对施用地塞米松(Dex)或来自藤黄微球菌的囊泡的小鼠组的组织中的蛋白质表达进行评估。

结果，如图9所示，在施用LPS的组(LPS)中，与阴性对照组相比，JNK和p65蛋白的磷酸化增加，而地塞米松(Dex)和源自藤黄微球菌的囊泡(MIEV)抑制了这种磷酸化。这意味着来自藤黄微球菌的囊泡通过有效地抑制JNK和NF-kB(p65)的信号通路引出NLRP3炎症小体的形成来调节先天免疫功能紊乱。

实施例7.来自藤黄微球菌的囊泡对炎症因子产生的先天免疫细胞的调节作用

最近发现，ILC3免疫细胞通过ROR-γt信号传导在神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的病因中具有重要作用，该细胞通过分泌IL-17等参与了疾病的病因。特别是，已经发现ILC3免疫细胞在多发性硬化症的病因中起着核心作用，而多发性硬化症是一种代表性的炎症性神经系统疾病。为了评价来源于藤黄微球菌的囊泡对ILC3免疫细胞产生的影响，通过实施例5中的方法给小鼠注射LPS，用流式细胞仪方法评价组织中免疫细胞的数量。

结果，如图10所示，证实在施用LPS的组中，与阴性对照组相比，分泌IL-17的ILC3细胞明显增加，由LPS增加的ILC3细胞数量被地塞米松(Dex)和源自藤黄微球菌的囊泡(MIEVs)抑制，在施用囊泡的情况下，抑制程度比施用地塞米松的情况更显著。这意味着NLRP3炎症小体诱导的先天性免疫细胞的产生被源自藤黄微球菌的囊泡有效抑制。

实施例8.源自藤黄微球菌的囊泡在氧化压力下调节细胞平衡的功效评估

当细胞反复暴露在各种压力下时，会在细胞内转化为氧化压力，导致细胞衰老和死亡，从而导致神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病。在神经发育疾病、神经系统疾病和精神疾病的病因中，由内皮细胞NO合成酶(eNOS)信号产生的一氧化氮(NO)抑制了活性氧(ROS)的作用，而活性氧是氧化应激的主要原因，通过诱导增强细胞稳态的物质，并抑制细胞死亡。

为了评价来源于藤黄微球菌的囊泡对细胞稳态对抗氧化应激的作用，用实施例3所述的方法用来源于藤黄微球菌的囊泡处理血管内皮细胞，然后评价eNOS信号的激活程度。作为评估信号蛋白表达的方法，用裂解缓冲液裂解细胞以提取蛋白，然后用BCA蛋白测定试剂盒(Thermo，USA)对蛋白进行定量。使用p-ERK、ERK、p-eNOS、eNOS和β-肌动蛋白(β-actin)的特异性抗体来评估蛋白质的激活程度。

结果，如图11所示，可以证实，细胞内ERK和eNOS的磷酸化被源自大肠杆菌的囊泡(一种炎症因子)所抑制，但被地塞米松(Dex)和源自藤黄微球菌的囊泡(MDH-101)所增加。此外，可以确认的是，源自藤黄微球菌的囊泡经热处理后，不会诱发eNOS的激活。从结果可以看出，源自藤黄微球菌的囊泡通过激活对血管内皮细胞稳态和血管健康很重要的eNOS和ERK信号来调节神经系统疾病或精神疾病的病理。

实施例9.源自藤黄微球菌的囊泡对神经细胞损伤的效果

当神经干细胞和神经细胞反复暴露在各种压力下时，氧化应激引起细胞的基因损伤，导致神经细胞的老化和神经细胞的异常死亡。组蛋白去乙酰化酶(HDAC)参与各种蛋白质(包括组蛋白)乙酰化赖氨酸残基的去乙酰化，不仅在染色质结构和功能调控的基因表达中发挥重要作用，而且在细胞内信号传导过程中也发挥重要作用。这些HDACs分为I类、II类、III类和IV类，属于III类的Sirtuin被称为在低卡路里压力情况下维持细胞平衡的信号蛋白。

在Sirtuin蛋白中，Sirtuin 1(Sirt1)是一种抗衰老蛋白，它存在于细胞核和细胞质中，作为一种去乙酰化酶抑制由代谢压力引起的炎症，并增加细胞的生存率；Sirtuin 5(Sirt5)是一种存在于线粒体中的蛋白质，具有脱丙二酰酶、脱琥珀酶和脱乙酰酶的功能，通过调节线粒体中的氨毒性来维持线粒体的功能；Sirtuin 7(Sirt7)是一种存在于细胞核中的核仁，具有脱乙酰酶的功能，从而修复rDNA的损伤，使核糖体正常产生蛋白质。

为了评价来源于藤黄微球菌的囊泡对神经细胞平衡的影响，用实施例3所述的方法用来源于藤黄微球菌的囊泡处理神经细胞，然后评价sirtuin基因的表达模式，并以PBS作为阴性对照。具体来说，用裂解缓冲液裂解细胞，提取基因，用RT-PCR对基因的表达进行定量。使用下表1所示的HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、Sirt1、Sirt5和Sirt7基因的mRNA的特异性引物来评估基因的表达程度。

[表1]

结果，如图12所示，当用异常蛋白β-淀粉样蛋白(Aβ)处理神经细胞时，与阴性对照相比，HDAC2和HDAC5基因的表达明显增加，而与阴性对照相比，Sirt1、Sirt5和Sirt7基因的表达下降。进一步说，当处理来自藤黄微球菌的囊泡时，通过Aβ蛋白增加表达的HDAC5基因的表达明显减少，而通过Aβ蛋白减少表达的Sirt1和Sirt7基因的表达在处理囊泡时则明显增加。从结果可以看出，来源于藤黄微球菌的囊泡通过Sirt1和Sirt7基因的表达，增加了神经细胞的稳态，从而抑制了代谢压力引起的炎症和细胞死亡。

实施例10.源自藤黄微球菌的囊泡在抑制神经发生方面的功效

当神经干细胞和神经细胞反复暴露在各种压力下时，它们的神经发生能力会恶化。神经营养素是一组生长因子蛋白，在神经干细胞的发育以及分化的神经细胞的生存和功能方面发挥着关键作用。包括人类在内的大多数哺乳动物的大脑在胎儿期就会产生神经细胞，但神经干细胞存在于海马区，因此，即使在出生后也会发生成人神经生成。一种脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养素-3(NT3)、NT4/5和一种神经生长因子(NGF)是与神经干细胞和神经细胞的生存和功能相关的代表性神经营养素。其中，BDNF是一种存在于中枢和外周神经系统的蛋白质，它不仅通过TrkB受体增加存在于大脑和外周神经系统的神经细胞的生存和突触形成，而且还能诱导神经干细胞的增殖和分化。

为了评估来源于藤黄微球菌的囊泡对神经干细胞和神经细胞对抗氧化应激的生存和功能的影响，通过实施例3所述的方法用来源于藤黄微球菌的囊泡处理神经细胞，然后评估一种神经营养素和作为其受体的TrkB基因的表达模式，并使用PBS作为阴性对照。具体来说，使用裂解缓冲液裂解细胞，提取基因，并使用RT-PCR对该基因的表达进行量化。使用下表2所示的BDNF、NT3、NT4/5、NGF和TrkB基因的mRNA的特异性引物来评估基因的表达程度。

[表2]

结果，如图13所示，当用异常蛋白β-淀粉样蛋白(Aβ)处理神经细胞时，与阴性对照相比，BDNF、NT3、NT45和NGF基因的表达明显减少，其中，当用源自于藤黄微球菌的囊泡处理BDNF基因时，BDNF基因的表达恢复到与阴性对照相同的程度。此外，作为BDNF受体的TrkB基因的表达被Aβ蛋白所抑制，但被囊泡恢复到阴性对照的水平。从结果可以看出，从源自藤黄微球菌的囊泡通过增加BDNF和TrkB受体基因的表达，增加了神经干细胞的分化和分化的神经细胞的生存和功能。

实施例11.来自藤黄微球菌的囊泡对脑病小鼠模型的认知功能改善作用

Tg-APP/PS1小鼠是一种通过过量表达异常的淀粉样前体蛋白(APP)和PS1(presenilin 1)蛋白而诱发脑部疾病的小鼠模型，是一种从6.5个月大开始就表现出可通过组织学检测的异常蛋白斑块沉积的动物模型，在7至8个月大时可可靠地检测到认知功能障碍。为了评估图14中所示的来源于藤黄微球菌的囊泡对认知功能的改善作用，使用小鼠模型，通过将小鼠分为正常小鼠组(WT+veh)、假治疗脑病小鼠组(Tg+veh)和脑病小鼠组(Tg+MDH-101)，其中对脑病小鼠模型口服50μg/mouse的来源于藤黄微球菌的囊泡，进行行为测试和组织学测试。

为了评估来自藤黄微球菌的囊泡对认知功能的改善作用，如图15所示，将WT+veh、Tg+veh和Tg+MDH-101各组暴露于一个重新定位的物体或一个新物体，并在10分钟内测量寻找该物体的时间。结果，如图15所示，证实在2或24小时后测量的新物体识别测试中，WT+veh和Tg+MDH-101组需要很长时间才能找到新物体，但在Tg+veh组没有变化。此外，证实即使在新的位置识别测试中，WT+veh和Tg+MDH-101组也需要很长时间才能找到重新定位的物体，但在Tg+veh组中没有变化。这意味着从藤黄微球菌中提取的囊泡抑制了由异常蛋白的产生而诱发的脑病小鼠短期和长期认知功能障碍的进展。

实施例12.源自藤黄微球菌的囊泡在脑病小鼠模型中的学习能力改善效果

为了评价实施例11中的脑病小鼠模型中由源自藤黄微球菌的囊泡的学习能力改善功效，如图16A所示，在训练小鼠在水瓶中寻找隐藏平台5天后，进行了寻找隐藏平台的评价。

结果，如图16B所示，在5天的训练期间，WT+veh组找到隐藏平台的时间最快，而Tg+MDH-101组施用来自藤黄微球菌的囊泡，显示出与WT+veh组类似的学习能力，但Tg-veh组显示出最慢的学习时间。此外，如图16C所示，在找到隐藏平台和停留的时间方面，WT+veh组在平台位置停留的时间较长，而Tg+MDH-101组施用源自藤黄微球菌的囊泡在平台位置停留的时间明显比Tg-veh组长。从上述结果可以看出，来源于藤黄微球菌的囊泡对脑病小鼠的空间知觉学习和记忆能力的恢复有治疗作用。

实施例13.源自藤黄微球菌的囊泡对脑病小鼠模型的记忆能力改善作用

为了评价实施例11中的脑病小鼠模型中来源于藤黄微球菌的囊泡的记忆能力改善效果，如图17A所示，通过在小鼠进入暗室时对小鼠的爪子施加电击，使小鼠学习与暗室环境相关的恐惧和焦虑，在24、72和120小时的长时间内，进行试验以确认小鼠是否记住了相关的恐惧/焦虑。

结果，如图17B所示，可以确认WT+veh组和Tg+MDH-101组的小鼠在24、72和120小时的时间点的实验中，直到300秒后才进入暗室，而Tg+veh组的小鼠进入暗室的速度越来越快。此外，如图17C所示，可以确认，当小鼠进入暗室，受到电击，并离开暗室时，就因电击而导致的冷冻时间而言，WT+veh组的小鼠的冷冻时间明显长于Tg+veh组的小鼠，而Tg+MDH-101组的小鼠在施用来自藤黄微球菌的囊泡后，与Tg+veh组的小鼠有明显区别。从结果可以看出，源自藤黄微球菌的囊泡具有抑制异常蛋白引起的记忆能力下降的作用。

实施例14.衍生自藤黄微球菌的囊泡对脑病小鼠模型中异常斑块形成的疗效评估

淀粉样β(Aβ)斑块是一种在阿尔茨海默病患者大脑中发现的具有代表性的蛋白质，在Tg-APP/PS1模型中，已知Aβ斑块开始在小鼠大脑中积累并诱发阿尔茨海默病症状。通过用硫黄素-S染料对实施例11中的小鼠模型的大脑切片进行荧光染色，分析沉积在大脑组织中的Aβ斑块。

结果，如图18A所示，可以确认在大脑顶叶皮层、海马和针状皮层区域形成的Aβ斑块在Tg+veh组和Tg+MDH-101组之间有差异，Tg+veh组施用的源自藤黄微球菌的囊泡。此外，如图18B和18C所示，可以确认的是，与Tg+veh组相比，Tg+MDH-101组施用源自藤黄微球菌的囊泡后，顶叶皮层和海马区每单位面积沉积的Aβ斑块数量(图18B)和面积(图18C)明显减少。从结果可以看出，源自藤黄微球菌的囊泡具有抑制异常蛋白过表达引起的脑部疾病小鼠模型中异常蛋白斑块形成的作用。

实施例15.在脑病小鼠模型中评价源自藤黄微球菌的囊泡的成熟神经生成效果

基于上述例子，为了阐明抑制脑病小鼠模型中显示的神经功能恶化的机制，对来源于藤黄微球菌的囊泡进行了评估。

如图19所示，通过对被称为神经干细胞增殖标志物的Ki-67的荧光染色确认细胞数量，可以确认与WT+veh组相比，Tg+veh组中被Ki-67染色的细胞数量明显减少。相反，可以证实，与Tg+veh组相比，给Tg+MDH-101组注射了来自藤黄微球菌的囊泡后，被Ki-67染色的细胞数量明显增加，而且恢复程度与WT+veh组相似。

此外，为了评估来自藤黄微球菌的囊泡对神经干细胞分化和迁移的功效，对神经干细胞进行了双皮质蛋白(DCX)的荧光染色，这是一种与神经干细胞分化和迁移有关的标记。结果，如图20所示，可以证实，与WT+veh组相比，Tg+veh组中DCX阳性细胞的数量明显减少，而在Tg+MDH-101组中，施用来自藤黄微球菌的囊泡后，DCX阳性细胞的数量明显恢复。从结果可以看出，来自藤黄微球菌的囊泡可以诱导神经发生，并通过在脑病小鼠模型中产生神经发生，表现出治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的效果。

实施例16.源自藤黄微球菌的囊泡在脑病小鼠模型中产生神经细胞树突的能力评价

基于上述例子，为了阐明在退行性脑病小鼠模型中显示的神经功能的改善的作用机制，对来源于藤黄微球菌的囊泡进行了评估，评估了神经细胞形成树突的能力(树突过程)。由于树突的形态和数量的变化对神经细胞之间的信号传递很重要，所以用微管相关蛋白2(MAP2)的表达来评价这种变化，MAP2是众所周知的神经细胞特异性细胞骨架蛋白。

结果，如图21所示，可以确认，与WT+veh组相比，Tg+veh组中MAP2的表达明显下降，而在Tg+MDH-101组中，施用来自藤黄微球菌的囊泡后，MAP2的表达明显恢复。从结果可以看出，来自藤黄微球菌的囊泡通过形成神经细胞树突增加神经元间的完整性，从而调节神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的发病或过程。

从结果可以看出，从本发明的藤黄微球菌中提取的囊泡有效地抑制了神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的发病或病程。特别是可以看到，该囊泡通过调节NLRP3炎症小体的形成来抑制神经干细胞和神经细胞的异常死亡，NLRP3炎症小体是一种与免疫有关的信号物质，对神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病至关重要。此外，可以看出，该囊泡可以通过激活eNOS信号，诱导产生NO，而NO是细胞平衡的关键信号材料；通过恢复被氧化应激抑制的sirtuin1和sirtuin7的表达，增强神经干细胞和神经细胞的平衡；通过不仅增加神经干细胞的增殖和分化，而且增加神经细胞的生存和神经元间的完整性，有效治疗神经发育疾病、神经系统疾病和精神疾病。

因此，从本发明的藤黄微球菌中提取的囊泡有望能够用于缓解、预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病。

上述对本发明的描述是为说明目的而提供的，本发明所涉及的领域的普通技术人员将理解，本发明可以很容易地修改成其他具体形式，而不改变本发明的技术精神或基本特征。因此，应该理解的是，上述实施例只是在所有方面进行说明，而不是限制性的。

工业适用性

本发明人证实，当口服源自藤黄微球菌的囊泡时，该囊泡被吸收到血管中并分布在脑组织中。此外，本发明人证实，当上皮细胞和炎症细胞用该囊泡处理时，致病因子分泌的炎症介质被明显抑制，当细胞用该囊泡处理时，致病因子诱导的NLRP3蛋白表达和NF-kB(p65)信号被抑制。此外，本发明人证实，当用囊泡处理细胞时，被致病因素抑制的eNOS信号被增加。此外，本发明人证实，当用囊泡处理神经细胞时，被致病因素抑制的一种BDNF基因的表达得到恢复。此外，本发明人证实，当神经细胞用囊泡处理时，被致病因素抑制的sirtuin1和sirtuin7基因的表达得到了恢复。此外，本发明人证实，当囊泡被给予神经疾病小鼠模型时，认知功能得到了明显恢复。此外，本发明人还证实，当对神经疾病小鼠模型施用囊泡时，神经发生得到了明显的恢复，因此，根据本发明源自藤黄微球菌的囊泡可被有效地用于开发药物、健康功能食品、或类似物，用于预防神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病，减轻其症状或治疗这些疾病，并能够有效地用作治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物输送系统。

<110> MD保健株式会社

<120> 用于预防或治疗神经发育障碍、神经系统疾病或精神疾病的包含源自藤黄微球菌的细胞外囊泡的组合物

<130> MPO21-133CN

<150> KR 10-2020-0184337

<151> 2020-12-28

<150> KR 10-2021-0156079

<151> 2021-11-12

<160> 26

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC1_F

<400> 1

cagtgtggct cagattccct 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC1_R

<400> 2

gggcagctca ttagggatct 20

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC2_F

<400> 3

gggacaggct tggttgtttc 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC2_R

<400> 4

gagcatcagc aatggcaagt 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC3_F

<400> 5

agagaggtcc cgaggagaac 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC3_R

<400> 6

actcttgggg acacagcatc 20

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC4_F

<400> 7

caatcccaca gtctccgtgt 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC4_R

<400> 8

cagcacccca ctaaggttca 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC5_F

<400> 9

tgtcaccgcc agatgttttg 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HDAC5_R

<400> 10

tgagcagagc cgagacacag 20

<210> 11

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Sirt1_F

<400> 11

gatccttcag tgtcatggtt c 21

<210> 12

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Sirt1_R

<400> 12

atggcaagtg gctcatca 18

<210> 13

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Sirt5_F

<400> 13

atcgcaaggc tggcaccaag aa 22

<210> 14

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Sirt5_R

<400> 14

ctaaagctgg gcagatcgga ct 22

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Sirt7_F

<400> 15

gagagcgagg atctggtgac 20

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Sirt7_R

<400> 16

cgtgtagaca accaagtgcc 20

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> tBDNF_F

<400> 17

tggctgacac ttttgagcac 20

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> tBDNF_R

<400> 18

gtttgcggca tccaggtaat 20

<210> 19

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NT3_F

<400> 19

tactacggca acagagacg 19

<210> 20

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NT3_R

<400> 20

gttgcccaca taatcctcc 19

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NT4/5_F

<400> 21

ggctccatcc tgaacatcat 20

<210> 22

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NT4/5_R

<400> 22

gccatgatct acctgcctgt 20

<210> 23

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NGF_F

<400> 23

agcattccct tgacacag 18

<210> 24

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NGF_R

<400> 24

ggtctacagt gatgttgc 18

<210> 25

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TrkB_F

<400> 25

aaggactttc atcgggaagc tg 22

<210> 26

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TrkB_R

<400> 26

tcgccctcca cacagacac 19

Claims (25)

1.一种用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物组合物，其包括源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述神经系统疾病是退行性神经系统疾病或炎症性神经系统疾病。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述退行性神经系统疾病是选自以下的一种或多种疾病：阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症、亨廷顿病、癫痫、Keams-Sayre综合征(KSS)、慢性进行性外眼球麻痹症(CPEO)、线粒体脑肌病伴乳酸中毒和卒中样发作(MELAS)、肌阵挛癫痫伴锯齿状红色纤维(MERRF)、神经源性无力伴共济失调和视网膜色素变性(NARP)、Leigh综合征(LS)、线粒体隐性共济失调综合征。

4.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述的炎症性神经系统疾病是选自多发性硬化症、慢性炎症性脱髓鞘多发性神经病和糖尿病性神经病的一种或多种疾病。

5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述精神疾病是选自由重度抑郁症、双相情感障碍、焦虑症、精神分裂症、强迫症、创伤后应激障碍、分离性障碍、饮食障碍、药物使用障碍和人格障碍组成的群组的一种或多种疾病。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述焦虑症是选自由恐慌症、社交焦虑症、广泛性焦虑症和特定恐惧症组成的群组的一种或多种焦虑症。

7.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述人格障碍是选自由偏执型人格障碍、反社会型人格障碍、边缘型人格障碍、自恋型人格障碍、回避型人格障碍和依赖型人格障碍组成的群组的一种或多种人格障碍。

8.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述的神经发育疾病是选自由智力障碍、交流障碍、自闭症谱系障碍、注意缺陷多动障碍、特定学习障碍和运动障碍组成的群组的一个或多个。

9.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述的神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病是由于神经发生功能障碍。

10.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述的神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病是由NLR家族含吡啶域3炎症小体(NLRP3炎症小体)介导的。

11.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物抑制NLRP3炎症小体的形成。

12.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述囊泡的平均直径为10至200nm。

13.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述囊泡是由藤黄微球菌自然分泌的或人工产生的。

14.一种用于预防或缓解神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的食品组合物，其包括源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

15.一种用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的吸入剂组合物，其包括源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

16.一种用于递送治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物的组合物，其包括源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

17.一种抗衰老药物组合物，其包括源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

18.一种抗衰老的食品组合物，其包括源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。

19.根据权利要求18的食品组合物，其中所述组合物抑制所述脑或神经细胞的老化。

20.一种用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物组合物，其包括源自微球菌属细菌的囊泡作为活性成分。

21.一种预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用包含源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物。

22.包含源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物用于预防或治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的用途。

23.源自藤黄微球菌的囊泡用于制备治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物的用途。

24.一种递送治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含源自藤黄微球菌的囊泡的组合物，该组合物含有治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物，以作为活性成分。

25.一种包含源自藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物用于递送治疗神经发育疾病、神经系统疾病或精神疾病的药物的用途。