CN116672290A - 一种具有抗蓝光、抗衰老的茶发酵组合物及其产品和应用 - Google Patents

一种具有抗蓝光、抗衰老的茶发酵组合物及其产品和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种具有抗蓝光、抗衰老的茶发酵组合物及其产品和应用。本发明提供的茶发酵组合物由茶叶、紫松果菊、海岸松树皮、发酵菌复配后进行发酵所得，将各组分复配使用具有显著的协同增效作用，比单一组分或任一两种组分的效果更佳。同时，本发明提供一种抗蓝光、抗衰老的产品，由纳米微晶化处理后的茶发酵组合物产物，经过聚乳酸，环糊精包覆得到，进行微晶化和双包覆后的茶发酵组合物，能避免天然植物中活性成分在光催化下降解并产生自由基，减小对皮肤的刺激性，并且进行微晶化双包覆处理能够稳定各组分性能，进一步延长茶发酵组合物的效果及作用时间，从而增强抗蓝光效果。

Description

一种具有抗蓝光、抗衰老的茶发酵组合物及其产品和应用
技术领域
本发明属于医学美容护肤产品技术领域，涉及一种具有抗蓝光、抗衰老的茶发酵组合物及其产品和应用。
背景技术
紫外辐射一般是指波长范围在200～400nm的电磁辐射，划分为3个区域：波长为320～400nm的UVA，波长为280～320nm的UVB，波长为200～280nm的UVC。UVC可被大气臭氧层吸收，并不会对皮肤健康构成直接威胁；UVB波长较短，能量较高，可渗透皮肤的角质层，引起皮肤晒伤，长期暴露容易引起皮肤癌变；UVA虽然能量相对较低，但是其波长较长，深入真皮层容易引起角质形成细胞以及其他免疫细胞免疫抑制，UVA也会刺激活性氧自由基的产生，引起皮肤损伤。
随着对天然产物研究的不断深入，研究者们发现许多植物源天然产物具有一定的防晒以及缓解紫外辐射损伤的作用，如木质素、氨基酸、咖啡碱等。这些天然产物是由糖类、蛋白质等初级产物衍生出来的一类次级代谢产物，来源广泛、种类繁多，还具有抗氧化、抗炎、抑菌等多种生物活性。天然来源防晒成分一般通过以下几点达到防紫外线、缓解光老化的作用：具有苯环或共轭体系的高度不饱和结构，可吸收UVA和UVB波长范围的紫外线；抗氧化作用，抑制细胞和细胞外基质中紫外线诱导的自由基反应，激活内源性抗氧化系统；减弱皮肤晒伤后细胞的炎症反应。
植物源天然产物虽然成分安全，但部分活性成分物质受环境影响，如光催化作用，极易降解氧化，产生自由基，会渗入皮肤引起光过敏和光毒性反应，刺激皮肤，也会增大紫外线诱导活性氧自由基在皮肤的浓度，不仅对皮肤有强的刺激性，还会加速皮肤老化；且天然植物来源的产物成分如黄酮类成分有较好的效果，但其稳定性也较差，添加使用后其效果反而会降低，进一步限制了植物源天然产物的应用。而新型纳米运载体系在防晒化妆品中使用可以起到隔离皮肤与防晒效果，降低皮肤刺激性，控制释放和有效保护生物活性物质免受外界条件的影响，呈现低毒性和优异的生物降解能力，并且可以增强光稳性，通过新型纳米运载体系进行包覆，可以有效解决或减少防晒剂的不良影响。目前还少有采用新型纳米运载体系包覆植物源天然产物的产品，用于抗蓝光、抗衰老等化妆品领域中。
发明内容
本发明针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种具有抗蓝光、抗衰老的茶发酵组合物及其产品和应用。
本发明的第一个目的在于提供一种抗蓝光、抗衰老的茶发酵组合物。
本发明的第二个目的在于提供所述茶发酵组合物的应用。
本发明的第三个目的在于提供一种抗蓝光、抗衰老的产品。
本发明的第四个目的在于提供所述抗蓝光、抗衰老的产品的制备方法。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
本发明提供一种抗蓝光、抗衰老的茶发酵组合物，包括以下质量份数的原料组分发酵而成：茶叶1～5份、紫松果菊1～5份、海岸松树皮1～5份，发酵菌0.02～0.05份。
茶叶含有的茶多酚、儿茶素、叶绿素、咖啡碱、氨基酸、维生素、木质素等营养成分。具有抗蓝光、防衰老、防癌、抗癌、杀菌、消炎等作用。茶叶中所富含的木质素具有良好的抗紫外线防护性能，其作为添加剂在化妆品防晒领域具有良好的应用潜力，但极易在光催化下氧化降解，性质不稳定，影响其功效。
紫松果菊(Echinacea purpurea)是菊科松果菊属多年生草本植物，具有增强免疫、补充营养、抗菌消炎等作用。紫松果菊提取物具有抗氧化与抗刺激作用，可通过增强皮肤细胞对压力的耐受性延长细胞寿命，可以增强由UVB所诱导的DNA损伤的修复，改善细胞的排毒过程，有效抑制由UVB照射引起的炎症。
海岸松(Pinus pinaster Aiton)是松科松属的乔木，生长在比较恶劣的环境中，天然合成了大量的活性物质，浓缩于树皮，保护自身。而海岸松的树皮提取物的主要成分为“碧萝芷”，由多种生物类黄酮和酚类果酸自然形成恒定比例的天然复合物，具有抗衰老、抗氧化、抗炎、消除色斑等作用，服用碧萝芷能够降低肌肤遭受紫外线辐射和氧化作用的危害。
本发明提供的茶发酵组合物，由天然植物原料茶叶、紫松果菊、海岸松树皮，经过发酵菌发酵而得；将各组分复配使用具有显著的协同增效作用，比单一组分或任意两种组分的效果更佳，具有较好的抗蓝光、抗衰老作用，同时还能祛皱、增强皮肤弹性。本发明通过发酵提高了各组分的活性物质的成分及含量，利用微生物细胞或细胞内的酶催化反应体系对植物原料中的活性物进行结构修饰和改造，从而获得了新的发酵产物，经微生物转化后的分子量更小，抗蓝光防衰老的效果更佳。
优选地，所述发酵菌为枯草芽孢杆菌，浓度为106～108CFU/mL，pH值调整为6.5～7.5。
本发明提供上述茶发酵组合物在制备抗蓝光、抗衰老的产品中的应用。
本发明提供一种抗蓝光、抗衰老的产品，含上述茶发酵组合物。
优选地，所述产品为纳米脂质体、环糊精双包覆茶发酵纳米微晶。
本发明提供的抗蓝光、抗衰老的产品由纳米微晶化处理后的茶发酵组合物产物，经过聚乳酸，环糊精包覆得到，进行微晶化和双包覆后的茶发酵组合物，能避免天然植物中活性成分在光催化下降解并产生自由基，减小对皮肤的刺激性，并且进行微晶化双包覆处理能够稳定各组分性能，进一步延长茶发酵组合物的效果及作用时间，从而增强抗蓝光效果。
其中，采用的聚乳酸(PLA)属于可降解纳米结构脂质载体，能保护被包裹的组合物不受环境影响易降解，控制释放、精确靶向，有助于提高有组合物的效性和生物利用度。环糊精(β-CD)是具有中空截锥形状的环状寡糖，具有亲水性外缘和疏水性内腔的特殊结构，可以通过疏水相互作用、范德华力、氢键或主客体相互作用包合多种客体分子，可以保护组合物的活性物质免受温度、酸碱度、光照等外界环境的影响，延长保存时间。
另外，本发明还提供纳米脂质体、环糊精双包覆茶发酵纳米微晶的制备方法，包含以下步骤：
S1、分别取茶叶、紫松果菊、海岸松树皮除杂，干燥，混合，灭菌，接入发酵菌，进行发酵，发酵结束后灭菌，干燥，再进行脱色处理，得茶发酵组合物；
S2、将茶发酵组合物进行纳米微晶化处理，得到茶发酵组合物纳米微粒，再采用聚乳酸进行包覆，得到茶发酵组合物纳米微晶；
S3、采用环糊精对茶发酵组合物纳米微晶进行包覆，即得纳米脂质体、环糊精双包覆茶发酵纳米微晶。
优选地，步骤S1中以质量份计采用茶叶1～5份、紫松果菊1～5份、海岸松树皮1～5份，发酵菌0.02～0.05份。
优选地，步骤S1中脱色处理采用双氧水及活性炭进行脱色。
优选地，步骤S2中纳米微晶化处理的具体方法为：将脱色后得发酵组合物粉碎，通过氧化物还原法，制备得到中粗产物，再进行超声，匀质，得纳米微粒。特别地，本发明进行纳米微晶化处理主要是将发酵产物制备成为微晶颗粒，便于后续包覆，因此纳米微晶化处理步骤并不限于本发明提供的方法，可采用本领域常规方法进行处理。
优选地，步骤S2中茶发酵组合物纳米微粒与聚乳酸的质量比为1～2：2～6。
更优选地，步骤S2中茶发酵组合物纳米微粒与聚乳酸的质量比为1：2。
优选地，步骤S2中采用聚乳酸进行包覆方法为：将溶解在丙酮中的聚乳酸与纳米微粒混合后，并加入1％w/v PVA水溶液中，搅拌，离心，回收上清液。
优选地，步骤S3中环糊精与茶发酵组合物纳米脂质体微晶的质量比为1～3：1～5.5。
更优选地，步骤S3中环糊精与茶发酵组合物纳米脂质体微晶的质量比为1：1。
作为最优选的实施方案，本发明提供纳米脂质体、环糊精双包覆茶发酵纳米微晶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将茶叶、紫松果菊、海岸松树皮进行清洗，去除污泥和灰尘、杂质，用烘干机或烘箱在90℃下干燥1h，去除水分，得到干燥后的各组分，按质量比将茶叶、紫松果菊、海岸松树皮进行混合得到组合物，再加入纯水的量为组合物质量的8-10倍，浸泡2h，通入121℃蒸汽灭菌，然后降至室温，得到无菌组合物；
(2)在无菌组合物中接入纯水体积2％的发酵菌菌液，37℃恒温搅拌72h，搅拌转速为120rpm/min，进行发酵；发酵结束后通入蒸汽121℃灭菌，降至室温；过滤，得到组合物发酵产物；
(3)用烘干机进行烘干，得到干燥的发酵组合物，并就进行脱色处理；取适量的发酵组合物，加入质量比1：6的纯水搅拌混合均匀后加入0.6倍体积的过氧化氢溶液及同质量比的活性炭，进行脱色，加热至40℃，磁力搅拌吸附30min，用高速离心机进行差速离心，6000rpm转速离心5min，弃上清后9500rpm转速离心15min，弃上清，得脱色产物。
(4)将脱色产物进行粉碎，取颗粒大小为60～80目的粉碎物，在75℃水浴中，进行5次1％亚氯酸钠的酸处理，并用冰醋酸调节pH值为4～5，得到粗产物；在90℃水浴锅中，进行2％、5％氢氧化钾的梯度碱处理，得到纯化产物；将纯化产物中加入100mL 0.3mol/mL的盐酸，放入80℃的恒温水浴锅中加热，反应2h后用蒸馏水反复冲洗至溶液呈中性；
(5)利用溶剂溶液法调配出所需的不同浓度的发酵物溶液，置于超声波细胞粉碎机中，输出功率设为1200W，冰水浴环境下超声处理20min。将超声波处理后的发酵物悬浊液放入高压匀质机中，一级匀质阀的压强设为8～10MPa，二级匀质阀的压强设为35～40MPa。匀质时间5～30min梯度设置，得纳米微粒；
(6)将聚乳酸溶解在等体积的丙酮中，然后与纳米微粒混合并注入1％w/v的PVA水溶液中，将乳状液在250rpm的磁力搅拌下搅拌10min，然后在90rpm的摇床中搅拌，以蒸发溶剂；在10℃下，以17000rpm/min的速度进行20min的初始离心，弃沉淀，将上清液回收并储存在深色容器中；将纳米颗粒沉淀物重新悬浮在去离子水中，在相同条件下离心，回收并储存上清液，将得到的液体重新分散在双蒸馏水中并储存在4℃中；
(6)称取环糊精(β-CD)于烧杯中，加入去离子水溶解；另称取纳米脂质体微晶，加无水乙醇溶解；于搅拌速度600rpm/min下以1.5mL/min的速度将该溶液加入β-CD水溶液中，于30℃下搅拌3h后过滤，滤液于-4℃静置冷却12h；
(7)再于60℃下减压浓缩，并在40℃下真空干燥，将上述所得包埋物产品均用少量冷无水乙醇进行快速冲洗并减压抽滤，以除去未包埋的微晶，即得纳米脂质体、环糊精双包覆茶发酵纳米微晶。
作为优选，所属步骤(2)中的发酵菌为枯草芽孢杆菌；更进一步，发酵菌菌液的制备方法是：挑取菌落一环于液体培养基中，放入摇床中将菌种活化，得到活化后菌液；将活化后的菌液梯度稀释铺板，以便获取单菌落，得到纯化后菌种；将纯化后的菌种接种到BS培养基(pH为7.0)中，在37℃的培养箱中静置培养，当OD值＝0.6-1.0时，得到发酵菌菌液，菌种处在对数期，浓度为106～108CFU/mL；配再制浓度为106～108CFU/mL的发酵菌菌液，pH值调整为6.5～7.5。
本发明提供的产品还包括复合植物油，能够帮助茶发酵组合无扩散进入皮肤，有效地补充皮肤脂质，因而使水分容易扩散通过表面内的相继皮层，具有滋润皮肤的作用。复合植物油选自乳木果油、大豆卵磷脂、葡萄籽油、柠檬籽油、燕麦仁油、杏仁油、霍霍巴籽油、甜扁桃油、大麻籽油、生育酚的一种或两种以上，产品中复合植物油的质量份数为0.001～10份。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供一种具有抗蓝光、抗衰老作用的茶发酵组合物，该组合物由茶叶、紫松果菊、海岸松树皮、发酵菌复配后进行发酵所得，将各组分复配使用具有显著的协同增效作用，比单一组分或任一两种组分的效果更佳，具有较好的抗蓝光、抗衰老作用，同时还能祛皱、增强皮肤弹性。本发明通过发酵提高了各组分的活性物质的成分及含量，利用微生物细胞或细胞内的酶催化反应体系对植物原料中的活性物进行结构修饰和改造，从而获得了新的发酵产物，经微生物转化后的分子量更小，抗蓝光防衰老的效果更佳。
同时，本发明提供一种抗蓝光、抗衰老的产品，由纳米微晶化处理后的茶发酵组合物产物，经过聚乳酸，环糊精包覆得到，进行微晶化和双包覆后的茶发酵组合物，能避免天然植物中活性成分在光催化下降解并产生自由基，减小对皮肤的刺激性，并且进行微晶化双包覆处理能够稳定各组分性能，进一步延长茶发酵组合物的效果及作用时间，从而增强抗蓝光效果。
另外，本发明还提供抗蓝光、抗衰老的产品的制备方法，其提取率高，有效简化生产工艺，使反应过程在温和的条件下进行，经过发酵提取法还可以改变原料成分分子结构，提升原料功效，降低毒性和刺激性，优化色泽、味道等优势，是一种较理想的中药提取新工艺，有利于推广应用。
附图说明
图1为细胞活力测定结构图；
图2为UVA/UVB防晒效果图；
图3为紫外线诱导的ROS生成测定结果；
图4为基质金属蛋白酶(MMPs)介导MMP-1表达结果图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
茶叶、紫松果菊、海岸松树皮市购得到，枯草芽孢杆菌购自于汇邦生物。
实施例1双包覆茶发酵组合物的制备
1、植物组合物制备
将茶叶、紫松果菊、海岸松树皮进行清洗，去除污泥和灰尘、杂质，用烘干机或烘箱在90℃下干燥1h，去除水分，得到干燥后的各组分，取质量份数为5份茶叶、5份紫松果菊、5份海岸松树皮进行混合得到组合物，再加入纯水的量为组合物质量的8-10倍，浸泡2h，通入121℃蒸汽灭菌，然后降至室温，得到无菌组合物。
2、发酵菌菌液制备
(1)菌种活化：挑取枯草芽孢杆菌的菌落一环于液体培养基中，放入摇床中将菌种活化，得到活化后菌液；
(2)菌种纯化：将活化后的菌液梯度稀释铺板，以便获取单菌落，得到纯化后菌种；
(3)菌种扩大培养：将纯化后的菌种接种到BS培养基(pH值为7.0)中，在37℃的培养箱中静置培养，当OD值＝0.6-1.0时，菌种处在对数期浓度为106～108CFU/mL，得到发酵菌菌液，最后配制浓度为106～108CFU/mL的发酵菌菌液，pH值调整为6.5～7.5。
3、发酵组合物纳米微晶化处理
(1)在无菌组合物中，按质量份数接入0.02～0.05份的发酵菌菌液，37℃恒温搅拌72h，搅拌转速为120rpm/min；发酵结束后，通入蒸汽121℃灭菌，降至室温；过滤，得到组合物发酵产物；随后将组合物发酵产物进行烘干，得到干燥的发酵组合物；
(2)取适量的发酵组合物，加入质量比1：6的纯水搅拌混合均匀后加入0.6倍体积的过氧化氢溶液及同质量比的活性炭，进行脱色，加热至40℃，磁力搅拌吸附30min，用高速离心机进行差速离心，6000rpm转速离心5min，弃上清后9500rpm转速离心15min，弃上清，得脱色产物。
(2)将脱色产物进行粉碎，取颗粒大小为60～80目的粉碎物，在75℃水浴中，进行5次1％亚氯酸钠的酸处理，并用冰醋酸调节pH值为4～5，得到粗产物；
(3)在90℃水浴锅中，进行2％、5％氢氧化钾的梯度碱处理，得到纯化产物；将纯化产物中加入100mL 0.3mol/mL的盐酸，放入80℃的恒温水浴锅中加热，反应2h后用蒸馏水反复冲洗至溶液呈中性；
(4)利用溶剂溶液法调配出所需的不同浓度的发酵物溶液，置于超声波细胞粉碎机中，输出功率设为1200W，冰水浴环境下超声处理20min。将超声波处理后的发酵物悬浊液放入高压匀质机中，一级匀质阀的压强设为8～10MPa，二级匀质阀的压强设为35～40MPa。匀质时间5～30min梯度设置，得纳米微粒。
4、PLA包覆
取上述制备到的1份质量份数的纳米微粒，将同质量份数的聚乳酸(PLA)溶解在等体积的丙酮中，然后与纳米微粒混合后，并将其注入1％w/v的聚乙烯醇(PVA)水溶液中，形成乳状液，在250rpm的磁力搅拌下搅拌10min，然后在90rpm的摇床中搅拌，以蒸发溶剂；随后在10℃下，以17000rpm/min的速度进行20min的初始离心，弃沉淀，将上清液回收并储存在深色容器中；再将纳米颗粒沉淀物重新悬浮在去离子水中，在相同条件下离心，回收并储存上清液，将得到的液体重新分散在双蒸馏水中，得到纳米脂质体微晶，并储存在4℃中。
5、环糊精包覆
随后称取与纳米脂质体微晶质量份数比1：1的环状糊精(β-cyclodextrin简称β-CD)于烧杯中，加入10份质量份数的去离子水溶解，得β-CD水溶液；另称取1份质量份数的纳米脂质体微晶，加50份质量份数无水乙醇溶解；并于搅拌速度600rpm/min下，以1.5mL/min的速度，将该溶液加入β-CD水溶液中，于30℃下搅拌3h后过滤，滤液于-4℃静置冷却12h；再于60℃下减压浓缩，并在40℃下真空干燥，并将所得产物用少量冷无水乙醇进行快速冲洗并减压抽滤，以除去未包埋的微晶，得到纳米脂质体环糊精微晶发酵物，即为纳米脂质体、环糊精双包覆茶发酵纳米微晶。
进一步地，上述制备得到的纳米脂质体环糊精微晶发酵物能与复合植物油进行混合使用，能够帮助茶发酵组合物更好地扩散进入皮肤，有效地补充皮肤脂质，因而使水分容易扩散通过表面内的相继皮层，具有滋润皮肤的作用。作为优选地方案，采用的复合植物油选自乳木果油、大豆卵磷脂、葡萄籽油、柠檬籽油、燕麦仁油、杏仁油、霍霍巴籽油、甜扁桃油、大麻籽油、生育酚的一种或两种以上，产品中复合植物油的质量份数为0.001～10份。
实施例2双包覆茶发酵组合物的制备
本实施制备方法同实施例1，唯一区别在于，植物组合物制备按质量份数采用5份茶叶、3份紫松果菊、1份海岸松树皮进行制备，其他制备方法条件参数等均按照实施例1进行发酵、脱色、纳米微晶化处理、PLA包覆、环糊精包覆等处理，制备纳米脂质体环糊精微晶发酵物。
实施例3双包覆茶发酵组合物的制备
本实施制备方法同实施例1，唯一区别在于，植物组合物制备按质量份数采用5份茶叶、1份紫松果菊、3份海岸松树皮进行制备(质量份数比为5：1：5)，其他制备方法条件参数等均按照实施例1进行发酵、脱色、纳米微晶化处理、PLA包覆、环糊精包覆等处理，制备纳米脂质体环糊精微晶发酵物。
实施例4不同组分发酵产物的制备
本发明同时研究并制备了多种不同组分的组合物用于后续检测研究，设置对比例1～6，其主要的区别在于植物组合物的成分不同。具体组分及其含量如下表1所示，其植物组合物皆在发酵前加入，其他制备方法条件参数等均按照实施例1进行发酵、脱色、纳米微晶化处理、PLA包覆、环糊精包覆等处理，制备不同的纳米脂质体环糊精微晶发酵物。
表1不同组份的组合物
案例 组合物成分 质量份数
对比例1 茶叶 5
对比例2 紫松果菊 5
对比例3 海岸松树皮 5
对比例4 茶叶+紫松果菊 5：5
对比例5 茶叶+海岸松树皮 5：5
对比例6 紫松果菊+海岸松树皮 5：5
本发明同时研究并制备了多种不同组分的组合物用于后续检测研究，设置了对比例7～18，其主要区别在于组合物的包覆方式不同。具体组分与包覆方式如下表2所示，其中对比例7～15中各组分的质量份数均为5份，对比例16～18同实施例1质量份数一致，前面植物组合物、发酵、脱色、纳米微晶化处理的方法同实施例1，在纳米微晶化处理后进行不同包覆处理，制备不同的纳米脂质体环糊精微晶发酵物。
表2不同包覆方式
案例 组分 包覆方式
对比例7 茶叶+紫松果菊 -
对比例8 茶叶+紫松果菊 纳米脂质载体包覆
对比例9 茶叶+紫松果菊 环糊精包覆
对比例10 茶叶+海岸松树皮 -
对比例11 茶叶+海岸松树皮 纳米脂质载体包覆
对比例12 茶叶+海岸松树皮 环糊精包覆
对比例13 紫松果菊+海岸松树皮 -
对比例14 紫松果菊+海岸松树皮 纳米脂质载体包覆
对比例15 紫松果菊+海岸松树皮 环糊精包覆
对比例16 茶叶+紫松果菊+海岸松树皮 -
对比例17 茶叶+紫松果菊+海岸松树皮 纳米脂质载体包覆
对比例18 茶叶+紫松果菊+海岸松树皮 环糊精包覆
试验例1稳定性测试
将上述实施例1～3，以及对比例1～18制备得到的不同纳米脂质体环糊精微晶发酵物，取相同质量以及浓度的不同纳米脂质体环糊精微晶发酵物在15℃下贮存30天，观察是否出现絮凝、沉淀、挂壁、分层等现象，其中，将未出现絮凝、沉淀、挂壁、分层的作为1级，出现少量絮凝、挂壁作的为2级，絮凝、挂壁一般作为3级，出现分层作为4级，进行统计。
结果见如表3所示，显示经过双包覆的茶发酵物组合物的稳定性高于单包覆的茶发酵物组合物；其中，由于包覆组分的不同，含茶叶成分的组合物稳定性要高于其他组合物，在茶叶中所含的木质素会有一定的保护能力；而由于包覆形式的不同，光降解的保护能力不同，包覆方式和组合方式不同的情况下，稳定性会有影响。显示，进行微晶化和双包覆能够稳定各组分性能，避免天然植物中活性成分在光催化下降解并产生自由基，降低其刺激性，还能进一步延长茶发酵组合物的效果及作用时间。
表3稳定性测试
试验例2对细胞活力的影响
采用角质细胞(购于中国科学院上海细胞库，SCSP-5091)培养24h后，取1.0～5.0×104cells/mL接种于6孔板内，当孔内细胞贴壁并全部长至40％后，分别加入与培养基质量份数比为1：10的实施例1～3、对比例1～18制备的纳米脂质体环糊精微晶发酵物(简称为发酵组合物，每个处理组的浓度相同)与细胞共培养，24h后对细胞采用20J/cm2的UVA照射。空白组采用等体积的PBS替代发酵组合物。使用细胞活力检测试剂盒(MTT法)(购于GenviewInc，GK3605-250T)检测细胞活力，记录实验IOD值，对比不同发酵组合物处理后的细胞活力。
表4不同发酵组合物处理后的细胞活力
结果如图1与表4所示，通过试验例及对比例的组间对比，显示以茶叶、紫松果菊、海岸松树皮为主要成分的发酵组合物能有效的提高细胞活力，其中含有茶叶成分及采用双包覆的效果更为明显；经过各组分复配使用，具有显著的协同增效作用，比单一组分或任一两种组分的效果更佳。同时，显示本发明采用的植物发酵组合物具有良好的安全性，采用了双包覆方式的组合物，可以有效的保护组合物在UV的照射下组合物光降解，并通过双包覆方式可以有效的提高组合物的稳定性及提高其载药量，以此达到更佳的效果。
试验例3UVA/UVB防晒效果评价
分别称取的实施例1～3，对比例1～18样品约50g，分别溶解于纯水中控制其个各组样品的浓度相同，取与纯水浓度1：1的组合物混合液，均匀涂抹于5cm×5cm毛面之聚甲基丙烯酸甲酯板上2mg/cm2。另精密称取等量上述样品作为无辐照空白对照品。
在365nm(UVA)、297nm(UVB)及白炽光源照射，空白对照品置于无光源环境；每隔2h置光谱仪测定透光率，绘制15h内透光率随时间的变化曲线并进行分析。UVA/UVB照射灯辐照强度为2530μW/cm2。
结果如图2所示，显示不同组分之间对UV的阻隔有一定的效果，各组分复配使用具有显著的协同增效作用，其中加入茶叶及海岸松树皮组份后结果更为明显，这可能与茶叶与海岸松树皮中所含木质素有关。通过实验数据对比得知，不同包覆方式能在一定程度上也具有阻隔UV的能力，但未包覆和纳米载体包覆效果不如β-CD环糊精包覆效果，β-CD环糊精能在一定程度上延长包覆组合物的光分解时间。
试验例4抑制UV诱导的ROS
采用实施例1～3、对比例1～18的制备的纳米脂质体环糊精微晶发酵物作为处理样本(简称为发酵组合物)，处理角质细胞培养24h后(培养条件同试验例1)，控制每个处理组样本使用浓度和用量一致，使用PBS洗涤细胞两次，将细胞暴露在紫外线环境中，12h后按照ROS检测试剂盒(购于碧云天生物技术有限公司，No.S0033S)说明书步骤，加入使用完全培养基稀释的探针500μL，37℃、5.0％CO2培养箱中孵育20min，再使用酶标仪检测荧光强度，使用完全培养基洗涤三次，显微镜观察并拍照。取用与发酵组合物等体积的PBS溶液作为空白对照组。
结果如图3所示，显示在暴露在紫外线环境中，紫外线能诱导细胞中ROS大量生成。通过实施例及对比例发酵组合物组间对比，可以得出以茶叶、紫松果菊、海岸松树皮为主要成分的组合物能明显降低紫外线诱导的ROS生成，各组分复配使用具有显著的协同增效作用，比单一组分或任一两种组分的效果更佳，其中含有茶叶成分的效果更为明显。
试验例5对MMP-1生成的影响
将成纤维细胞(购于中国科学院上海细胞库，GNM25)培养24h后，将细胞采用12J/cm2UVA诱导后，弃孔内培养基，阴性对照组每孔加入500μL完全培养基，阳性组加入含0.1％FGF(成纤维细胞生长因子)的500μL完全培养基溶液，样品组加入含1％的实施例1～3、对比例1～18的制备的纳米脂质体环糊精微晶发酵物(经前期研究显示本发明的组合物对成纤维细胞的最大安全浓度为1％，每个样品组采用的浓度相同)的500μL完全培养基溶液，24孔板放置在37℃、5.0％CO2培养箱中培养24h。收集上清，依据试剂盒说明书检测MMP-1含量。
结果如图4所示，显示在紫外线诱导下，基质金属蛋白酶(MMPs)介导MMP-1表达上调，此现象可导致胶原蛋白降解增加。在加入不同发酵组合物后可明显使MMP-1表达量降低，其中在双包覆多组分组合物效果明显，各组分复配使用具有显著的协同增效作用，比单一组分或任一两种组分的效果更佳。表明发明提供的茶发酵组合物具有修复紫外线造成的真皮老化损伤的潜力。
实施例5双包覆发酵组合物的制备
本实施制备方法同实施例1，唯一区别在于，植物组合物制备按质量份数采用3份茶叶、1份紫松果菊、1份海岸松树皮进行制备，其他制备方法条件参数等均按照实施例1进行发酵、脱色、纳米微晶化处理、PLA包覆、环糊精包覆等处理，制备纳米脂质体环糊精微晶发酵物。
同时，本实施例还对纳米微晶化处理、PLA包覆、环糊精包覆等处理中的用量进行优化，显示制备时采用茶发酵组合物纳米微粒与聚乳酸的质量比为1～2：2～6，环糊精与茶发酵组合物纳米脂质体微晶的质量比为1～3：1～5.5时制备的纳米脂质体环糊精微晶发酵物均具有较好的效果，与实施例1～3效果差异不显著，也能用于本发明制备纳米脂质体环糊精微晶发酵物。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种抗蓝光、抗衰老的茶发酵组合物，其特征在于，所述茶发酵组合物包括以下质量份数的原料组分发酵而成：茶叶1～5份、紫松果菊1～5份、海岸松树皮1～5份，发酵菌0.02～0.05份。
2.根据权利要求1所述茶发酵组合物，其特征在于，所述发酵菌为枯草芽孢杆菌，浓度为106～108CFU/mL。
3.权利要求1或2所述茶发酵组合物在制备抗蓝光、抗衰老的产品中的应用。
4.一种抗蓝光、抗衰老的产品，其特征在于，含权利要求1或2所述茶发酵组合物。
5.根据权利要求4所述产品，其特征在于，所述产品为纳米脂质体、环糊精双包覆茶发酵纳米微晶。
6.根据权利要求5所述产品，其特征在于，所述纳米脂质体、环糊精双包覆茶发酵纳米微晶由纳米微晶化处理后的权利要求1或2所述茶发酵组合物产物，经过聚乳酸，环糊精包覆得到。
7.权利要求5所述产品的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
S1、分别取茶叶、紫松果菊、海岸松树皮除杂，干燥，混合，灭菌，接入发酵菌，进行发酵，发酵结束后灭菌，干燥，再进行脱色处理，得茶发酵组合物；
S2、将茶发酵组合物进行纳米微晶化处理，得到茶发酵组合物纳米微粒，再采用聚乳酸进行包覆，得到茶发酵组合物纳米微晶；
S3、采用环糊精对茶发酵组合物纳米微晶进行包覆，即得纳米脂质体、环糊精双包覆茶发酵纳米微晶。
8.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，步骤S2中茶发酵组合物纳米微粒与聚乳酸的质量比为1～2：2～6。
9.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，步骤S3中环糊精与茶发酵组合物纳米脂质体微晶的质量比为1～3：1～5.5。
10.根据权利要求4所述产品，其特征在于，所述产品中还包含复合植物油，选自乳木果油、大豆卵磷脂、葡萄籽油、柠檬籽油、燕麦仁油、杏仁油、霍霍巴籽油、甜扁桃油、大麻籽油、生育酚的一种或两种，所述产品中复合植物油的质量份数为0.001～10份。
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