CN109893487B

CN109893487B - 一种大米玫瑰发酵原浆及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN109893487B
Application number: CN201910367274.7A
Authority: CN
Inventors: 芦艳荣; 马凤燕; 方国忠
Original assignee: Shanghai Qianjiao Biotechnology Co ltd
Current assignee: Shanghai Biotruly Biotechnology Co ltd
Priority date: 2019-04-30
Filing date: 2019-04-30
Publication date: 2022-07-08
Anticipated expiration: 2039-04-30
Also published as: CN109893487A

Abstract

本发明涉及一种大米玫瑰发酵原浆及其制备方法与应用，所述大米玫瑰发酵原浆由费比恩毕赤酵母Pichia fabianii.同时发酵培养大米干粉与玫瑰干粉，所得发酵液经灭菌、离心取上清液得到。本发明提供的大米玫瑰发酵原浆选用优选的菌种发酵培养大米干粉与玫瑰干粉得到，安全无刺激，可以直接作为面膜或精华液或爽肤水等护肤产品使用，而且更易让皮肤充分吸收，具有良好的保湿、美白、抗衰老功效。其制备方法不需要添加酶等外来物质，不仅节约生产成本，而且最大化地简化了生产步骤，能够实现大量生产、工业化生产，并能够充分保证产品质量的稳定性。

Description

一种大米玫瑰发酵原浆及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，涉及一种大米玫瑰发酵原浆及其制备方法与应用。

背景技术

大米是我国的主要粮食作物之一，具有悠久的种植历史。大米可提供丰富维生素、谷维素、蛋白质、花青素等营养成分，具有补中益气、健脾养胃、益精强志、和五脏、通血脉、聪耳明目、止烦、止渴、止泻的功效，此外，大米还可用于护肤，大米提取液(其富含y-谷维素、稻糠甾醇、原花青素等成分)性质温和安全，具有较强的润白功效，并可补充肌肤所缺失水分，使肌肤光滑细腻，充满弹性。随着稻米栽培业迅速发展及应用范围逐渐拓宽，对稻米活性物质的提取工艺也不断完善，目前提取方法主要以酶法提取、碱法提取和超声波提取为主。

玫瑰，蔷薇科蔷薇属落叶丛生灌木，一般用来提炼精油和色素。玫瑰花成分复杂，含有多酚类、黄酮类等多种化学成分。这些化学成分有减少消除自由基、抗氧化活性、抗血栓、抗癌、抗炎、抑菌、免疫调节作用、降血脂和预防心脏病等生理活性。随着我国在玫瑰营养成分及在医疗保健作用方面研究的逐步深入，对玫瑰活性物质的提取工艺也不断完善，目前提取方法主要以闪式提取法、水提法为主。

大米和玫瑰提取物在美容护肤中的应用已经有了很多，大米对于皮肤的功效主要是润肤美白等方面。玫瑰对于皮肤的功效主要是抗衰老、美白、抗炎等方面。但由于大米提取物的成本限制，在护肤品中的添加量很低，因此在护肤品中能起到的作用微乎其微。

随着技术的进步，人们逐渐认识到益生菌的食用有益身体健康，当前使用微生物发酵谷物、植物制作发酵型饮料、食品的发明居多，但是利用微生物发酵大米和玫瑰制备化妆品的相关报道不多。这主要是由于对植物发酵制品对皮肤的益处认识尚浅。微生物法又可称为发酵法，是以细菌、霉菌等微生物为体系对外源底物进行结构修饰的化学反应，微生物转化不需要添加其它催化剂，只需先培养出大量的微生物菌种，然后加入底物进行能实现的反应，所以微生物法比化学试剂的反应法更专一、更有效；反应条件温和，微生物发酵一般都是在常温和pH为7左右的条件下进行催化反应，不需要高温、高压等苛刻的条件；设备的运行操作也比较简单、安全，产生的公害较少，一般不会造成环境污染，后处理也相对简单；筛选不同的菌种与优化反应条件可提高转化率，对同一底物进行微生物转化的菌种可能有多种，通过筛选选出最佳菌种，可以保证较高的转化率。当今国内外许多研究者采用生物法生产多糖，即微生物法、酶法、植物细胞组织培养等多种生物转化法结合，已经呈现出明显优势。因为绝大多数的发酵过程所需条件非常温和，而且反应产物单纯，能耗少，是一个对环境友善的绿色化学过程。随着基因工程、细胞工程、酶工程技术的不断发展和完善，微生物发酵技术有了突飞猛进的发展，在天然活性物质的研究开发中发挥着越来越重要的作用。当前微生物发酵植物制作护肤品多采用筛选某种适宜的菌来发酵某种植物来提取，成分和高效相对单一。

本发明利用发酵工程技术，通过菌种筛选和优化，对大米与玫瑰的活性物质同时进行发酵提取，避免了上述问题，获得的大米玫瑰发酵原浆含有两种植物的发酵产物，并且两种植物的发酵产物相互促进产生协同作用，具有更高的保湿、美白和抗衰老活性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的上述不足，提供一种大米玫瑰发酵原浆及其制备方法与应用，本发明选用特定的菌种，利用发酵法制备得到具有安全无刺激、抗衰、美白、保湿功效的大米玫瑰发酵原浆。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种大米玫瑰发酵原浆，其由费比恩毕赤酵母Pichia fabianii.同时发酵培养大米干粉与玫瑰干粉，所得发酵液经灭菌、离心取上清液得到。

按上述方案，所述费比恩毕赤酵母Pichia fabianii.以菌株或其培养液或其悬浮液的形式加入。

按上述方案，所述大米干粉由大米经粉碎机粉碎、过筛得到，目数为20-50目，优选为50目。

按上述方案，所述玫瑰干粉由玫瑰花瓣经真空冷冻机冻干后由粉碎机粉碎、过筛得到，目数为20-50目，优选为50目。

按上述方案，所述费比恩毕赤酵母Pichia fabianii.菌种总量与大米干粉、玫瑰干粉的配比为10⁶-10¹⁰CFU∶3-5g∶5-10g。在此比例下获得的发酵原浆小分子活性成分含量更高，功效更佳。

按上述方案，所述发酵培养条件为：pH值为6.5-7.5，发酵培养的温度23-35℃，发酵培养的时间为18-36h。在此条件下发酵获得的发酵原浆功效更佳。

本发明还提供上述大米玫瑰发酵原浆的制备方法，具体步骤如下：

1)菌种的活化：挑取费比恩毕赤酵母Pichia fabianii菌落一环于麦芽汁液体培养基中，放入摇床中将菌种活化，得到活化后的费比恩毕赤酵母菌液；

2)菌种的纯化：将步骤1)所得活化后的费比恩毕赤酵母菌液梯度稀释铺板，以便获取单菌落，得到纯化后的费比恩毕赤酵母菌种；

3)菌种的扩大培养：将步骤2)所得纯化后的费比恩毕赤酵母菌种接种到麦芽汁培养基中，在30℃的摇床中培养，当OD值＝1.0时，得到发酵菌菌液；

4)制备大米玫瑰发酵原浆：将步骤3)所得发酵菌菌液按比例接种到大米干粉、玫瑰干粉和水中，得到发酵体系，然后将发酵体系置于摇床中发酵得到发酵产物，再将发酵产物灭菌、离心，收集上清液得到大米玫瑰发酵原浆。

按上述方案，步骤1)放入摇床中将菌种活化的条件为：180rpm，28℃下培养24h。

按上述方案，步骤3)所述麦芽汁培养基中pH值为6.5-7.5。

按上述方案，步骤3)所述发酵菌菌液浓度为10⁶-10¹⁰CFU/ml。

按上述方案，步骤4)所述大米干粉、玫瑰干粉与水的质量体积比为3-5g∶5-10g∶500mL。

按上述方案，步骤4)所述灭菌条件为：压力0.15～0.25MPa，温度110～130℃下灭菌15～30min。

按上述方案，步骤4)所述离心条件为：转速为3000～8000r/min，离心时间为10～40min。

本发明还提供上述大米玫瑰发酵原浆在化妆品方面的应用。采用该大米玫瑰发酵原浆制备得到的化妆品富含多种小分子活性成分，如多糖、蛋白、黄酮、多酚等，具有保湿、美白、抗衰老的功效。

本发明还提供上述大米玫瑰发酵原浆制备得到的化妆品，包括面膜，精华液，爽肤水。

本发明的大米玫瑰发酵原浆指标如下：大米玫瑰发酵原浆经活性炭脱色、去味后外观为粘稠液体，粘度200-500cP，颜色为淡白色至淡黄色，pH值5.6-6.8，可溶性固含物含量3-4％，菌落总数小于50CFU/ml，无致病菌检出，符合化妆品质量要求。

本发明的原理在于：本发明利用发酵工程技术，使用费比恩毕赤酵母对大米和玫瑰同时进行发酵，由于大米可提供丰富的碳源、氮源，而玫瑰提供的维生素、微量元素等生长因子，为费比恩毕赤酵母的生长提供了良好的环境，菌量能够快速扩增，与此同时，菌量的快速扩增能够更好地分解植物底物，从而释放活性物质于发酵液中，获得的大米玫瑰发酵原浆含有两种植物的发酵产物，小分子活性成分含量高，具有更高的保湿、美白和抗衰老活性。

本发明的有益效果在于：1、本发明提供的大米玫瑰发酵原浆选用优选的菌种发酵培养大米干粉与玫瑰干粉得到，小分子活性成分含量高，含蛋白质5.94g/kg，粗多糖12.37g/kg，总黄酮0.057g/kg(以芦丁计)，总酚0.094g/kg，更易让皮肤充分吸收，具有良好的保湿、美白、抗衰老功效，不含任何化学成分，不会给肌肤造成任何负作用，安全无刺激，可以直接作为面膜或精华液或爽肤水等护肤产品使用，并且保存期长，高压灭菌后保存6个月无变质问题；2、本发明提供的制备方法不需要添加酶等外来物质，不仅节约生产成本，而且最大化地简化了生产步骤，能够实现大量生产、工业化生产，并能够充分保证产品质量的稳定性。

附图说明

图1为本发明实施例1所制备的大米玫瑰发酵原浆不同浓度下对成纤维细胞内相对荧光强度对比图；

图2为实施例1制备的大米玫瑰发酵原浆不同浓度下对谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响结果示意图；

图3为实施例1所制备的大米玫瑰发酵原浆不同浓度下对胶原蛋白I相对表达量影响的结果示意图；

图4为实施例1所制备的大米玫瑰发酵原浆不同浓度下对B16细胞内黑色素含量影响的结果示意图；

图5为相同浓度下的大米玫瑰发酵原浆、大米发酵原浆和玫瑰发酵原浆对成纤维细胞内相对荧光强度对比图；

图6为相同浓度下的大米玫瑰发酵原浆、大米发酵原浆和玫瑰发酵原浆对谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响结果示意图；

图7为相同浓度下的大米玫瑰发酵原浆、大米发酵原浆和玫瑰发酵原浆对胶原蛋白I相对表达量影响的结果示意图；

图8为相同浓度下的大米玫瑰发酵原浆、大米发酵原浆和玫瑰发酵原浆对B16细胞内黑色素含量影响的结果示意图。

具体实施方式

为使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中的YPD培养基由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其在液体培养基中的浓度为：麦芽汁100％(质量分数)，pH值为7.0。

下述实施例中的稻米大米、玫瑰来自市面销售。

下述实施例中的费比恩毕赤酵母Pichia fabianii的CICC编号为1040，公众可从中国工业微生物菌种保藏管理中心获得。

实施例1

一种大米玫瑰发酵原浆的制备方法，具体步骤如下：

1、菌种的活化

挑取费比恩毕赤酵母Pichia fabianii菌落一环于液体培养基中，放入摇床中将菌种活化，得到活化后费比恩毕赤酵母菌液(OD值在0.8～1.2之间)；

2、菌种的纯化

将步骤1得到的活化后的菌液梯度稀释铺板，以便获取单菌落，得到纯化后费比恩毕赤酵母；

3、菌种的扩大培养

将步骤2得到的纯化后的菌种接种到麦芽汁培养基(PH值为7.0)中，在30℃的摇床中培养，当OD值＝1.0时，得到发酵菌菌液(菌种处在对数期，浓度为1×10⁸CFU/ml)；

4、大米玫瑰发酵原浆的获得

将20mL步骤3得到的发酵菌菌液接种到5g的大米干粉(由大米经粉碎机粉碎、过筛得到，目数为50目)、5g玫瑰干粉(由玫瑰花瓣经真空冷冻机冻干后由粉碎机粉碎、过筛得到，目数为50目)和500g的水中，得到发酵体系；将发酵体系在30℃摇床中发酵24小时，得到发酵产物；将发酵产物于121℃、0.25MPa条件下高压灭菌20min，使菌失活，得到灭菌后的发酵产物；将灭菌后的发酵产物在6000r/min、离心半径为9cm的条件下离心30min，弃沉淀，收集上清液，即为大米玫瑰发酵原浆。

本实施例制备的大米玫瑰发酵原浆室温放置6个月后无沉淀、变色现象，经检测无变质问题。

实施例2

大米玫瑰发酵原浆作为化妆品的应用

一、大米玫瑰发酵原浆化妆品的性质

将实施例1制备所得的大米玫瑰发酵原浆经活性炭脱色、去味后，制得大米玫瑰发酵原浆化妆品，其外观为粘稠液体，粘度200-500cP，颜色为淡白色至淡黄色，pH值5.6-6.8，可溶性固含物含量3-4％，菌落总数小于50CFU/ml，无致病菌检出，符合化妆品质量要求。

对该大米玫瑰发酵原浆化妆品进行成分分析，蛋白质检测方法参照GB5009.5-2010；粗多糖检测方法参照GB/T 5009.8-2008；黄酮检测方法参照GB/T 5009.124-2003；总酚检测方法参照GB/T 8313-2008所得结果如下：

实施例1制得的大米玫瑰发酵原浆化妆品含蛋白质5.94g/kg、粗多糖12.37g/kg、总黄酮0.057g/kg(以芦丁计)、总酚0.094g/kg。

二、大米玫瑰发酵原浆的安全性检测

人体斑贴试验主要是用于检测化妆品终产品或原料的刺激性。本发明对实施例1中获得的大米玫瑰发酵原浆进行人体封闭式斑贴试验，旨在对其潜在皮肤刺激性进行评估。

1、试验对象

选择合适的志愿者30人，年龄范围在18-60岁随机选择。

2、试验方法

将大米玫瑰发酵原浆0.2mL滴加在滤纸片上，再将滤纸片置于斑试器内。每个样品均设置空白对照，在对照斑试器孔内加入与样品等量的样品溶剂，如蒸馏水或橄榄油。

试验部位选为人体背部，利用无刺激性的胶带将斑试器固定贴敷于受试者背部。测试周期持续24h。为了试验结果的准确、可信和科学，在测试期间志愿者按照要求，不能摘掉斑试器，亦不可使受试部位接触水，24h后去除斑试器，静置30min后，等待压痕消失，观察皮肤的反应。如果试验结果为阴性，则需要在斑贴试验后24h和48h分别再观察一次。

3、试验结果

斑贴试验结果如表1所示：″-″＝阴性反应；″±″＝可疑反应：仅有微弱红斑；″+″＝弱阳性反应(红斑反应)：红斑、浸润、水肿、可有丘疹；″++″＝强阳性反应(疱疹反应)；红斑、浸润、水肿、丘疹、疱疹；反应可超出受试区；″+++″＝极强阳性反应(融合性疱疹反应)；明显红斑、严重浸润、水肿、融合性疱疹；反应超出受试区。从表中可以看出：实施例1得到的大米玫瑰发酵原浆无可疑反应，说明本发明提供的稻米发酵物均具有安全性，不会给人体带来不良反应。

表1、实施例1获得的大米玫瑰发酵原浆的斑贴试验结果

三、大米玫瑰发酵原浆的抗衰老功效检测

(1)活性氧检测

活性氧含量检测采用碧云天的活性氧检测试剂盒(S0033)。取2.5％、5％、10％的大米玫瑰发酵原浆和1％EGCG经0.22μm无菌滤膜过滤，加入到培养有成纤维细胞的96孔板中，培养24h后，装载DCFH探针，于37℃孵育20min，用无血清培养基洗涤细胞三次后于488nm激发波长，525nm发射波长处观察各测试孔荧光强度。

经荧光酶标仪检测，细胞内荧光强度与活性氧含量成正比。如图1所示为0％(空白样)、2.5％、5％以及10％浓度的大米玫瑰发酵原浆以及1％EGCG作用下成纤维细胞内相对荧光强度对比图，可知，在2.5％、5％以及10％浓度的大米玫瑰发酵原浆作用下，成纤维细胞中活性氧含量显著均低于空白细胞。大米玫瑰发酵原浆对活性氧的抑制作用可减少体内自由基的生成，从而减缓衰老。

(2)大米玫瑰发酵原浆增强谷胱甘肽光氧化物酶活性检测

使用碧云天S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒进行检测。

谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)是生物机体内重要的抗氧化酶之一，它可以消除机体内的过氧化氢及脂质过氧化物，阻断活性氧自由基对机体的进一步损伤，是生物体内重要的活性氧自由基清除剂。如图2所示为实施例1制备的大米玫瑰发酵原浆不同浓度下对谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响结果示意图(图中阳性对照为抗坏血酸葡萄糖苷，浓度为86μg/m1)，可以看出，大米玫瑰发酵原浆对成纤维细胞中的谷胱甘肽光氧化物酶活性有促进作用，2.5～10％浓度范围内的大米玫瑰发酵原浆作用下时，谷胱甘肽过氧化物酶活性逐渐增强。

(3)大米玫瑰发酵原浆促进胶原蛋白I合成检测

取实施例1制备的大米玫瑰发酵原浆，稀释为适当浓度的样品，作用于成纤维细胞24h后，使用无菌管收集细胞培养液，2000-3000rpm，离心20min，保存上清液。采用南京建成生产的人I型胶原(COL I)酶联免疫检测试剂盒进行检测。实施例1所制备的大米玫瑰发酵原浆不同浓度下对胶原蛋白I相对表达量影响的结果示意图如图3所示(阳性对照为抗坏血酸葡萄糖苷，浓度为86μg/m1)，可见，2.5～10％浓度大米玫瑰发酵原浆均对胶原蛋白合成有促进作用，10％浓度大米玫瑰发酵原浆作用下胶原蛋白合成为空白的对照的125％。

四、大米玫瑰发酵原浆的美白功效分析

黑色素合成抑制实验

取对数生长期状态良好的R16细胞计数并接种于T25培养瓶中，置于培养箱37℃，5％CO₂环境中培养过夜；更换培养基，分别加入实施例1大米玫瑰发酵原浆稀释得到的不同浓度的样品，并以33mM熊果苷为阴性对照组，未作处理的空白样为空白对照组，培养48小时后吸弃培养基，使用PBS(磷酸盐缓冲液)洗涤后加入裂解液，刮取细胞并收集于离心管中；80℃水浴30min；振荡混匀，吸取至96孔板于475nm读取吸光度值。黑色素含量变化＝(测定孔OD值-空白对照OD值)/(细胞对照组OD值-空白对照OD值)。

如图4所示为实施例1所制备的大米玫瑰发酵原浆不同浓度下对B16细胞内黑色素含量影响的结果示意图，实验证明10％大米玫瑰发酵原浆对黑色素含量的抑制率为65.2％，33mM的熊果苷对酪氨酸酶活性的抑制率78.3％，即10％大米玫瑰发酵原浆的美白效果优于33mM的熊果苷的效果，具有较强的美白功效。

五、大米玫瑰发酵原浆保湿功效测试

将实施例1制备的大米玫瑰发酵原浆作为面膜或精华液或爽肤水等化妆品直接对皮肤进行涂抹，并通过皮肤含水量测试试验对其保湿性能进行检测，具体步骤如下：

1、试验对象

随机选取24名健康的志愿受试者，所有受试者均无任何皮肤和系统性疾患史，且受试部位(前臂内侧)的皮肤无异常，也不涂抹任何外用药物和化妆品等其他外用制剂。

2、试验方法

将测试物(实施例1的实验组获得的大米玫瑰发酵原浆)对受试者的前臂内侧的皮肤进行涂抹(涂抹的量为0.08-0.1ml)，并以未涂抹任何样品的皮肤作为对照组(BL)。

在涂抹后的0.5、1、2、4h后使用仪器为Corneometer CM-825测量受试部位的皮肤含水量，测量结果通过设定的湿度测量值(Moi sture Measurement Value，MMV)来表示，MMV为0～150的数值。整个研究是在室内温度为22℃～24℃，湿度为50％～60％的良好皮肤非创伤性检查实验室内进行。

3、试验结果

测量结果如表2所示：表2为涂抹实施例1制备的大米玫瑰发酵原浆后皮肤含水量测试结果，从表2中可以看出，和对照组(BL)相比，受试者在涂抹实施例1获得的大米玫瑰发酵原浆0.5、1、2、4h后(分别记为T0.5、T1、T2、T4)，皮肤含水量均显著提高，且在涂抹4小时后仍有很高的保湿功能。说明本发明的大米玫瑰发酵原浆具有很好的保湿功能，可以直接作为面膜或精华液或爽肤水等化妆品用于提高皮肤的含水量。

表2皮肤含水量

时间点	BL	T0.5	T1	T2	T4
						平均值	28.121	58.985	51.357	50.871	44.407
％改变vs BL		109.753％	82.626％	80.899％	57.912％
						p值vs BL		0.000	0.000	0.000	0.001

表2中“％改变vs BL”表示含水量与对照组相比增加比例，“p值vs BL”表示显著性。

对比例1

大米发酵原浆的制备：

将20mL实施例1步骤3得到的发酵菌菌液接种到10g大米干粉(由大米经粉碎机粉碎、过筛得到，目数为50目)和500g的水中，得到发酵体系；将发酵体系在30℃摇床中发酵24小时，得到发酵产物；将发酵产物121℃高压灭菌20min，使菌失活，得到灭菌后的发酵产物；将灭菌后的发酵产物在6000r/min、离心半径为9cm的条件下离心30min，弃沉淀，收集上清液，即为大米发酵原浆。

对比例2

玫瑰发酵原浆的制备：

将20mL实施例1步骤3得到的发酵菌菌液接种到10g玫瑰干粉(由玫瑰花瓣经真空冷冻机冻干后由粉碎机粉碎、过筛得到，目数为50目)和500g的水中，得到发酵体系；将发酵体系在30℃摇床中发酵24小时，得到发酵产物；将发酵产物121℃高压灭菌20min，使菌失活，得到灭菌后的发酵产物；将灭菌后的发酵产物在6000r/min、离心半径为9cm的条件下离心30min，弃沉淀，收集上清液，即为玫瑰发酵原浆。

对比实施例1制备的大米玫瑰发酵原浆、对比例1制备的大米发酵原浆和对比例2制备的玫瑰发酵原浆的功效，测试结果如下：

一、活性氧检测

采用实施例2中活性氧检测方法，取相同浓度(10％)的大米玫瑰发酵原浆、大米发酵原浆和玫瑰发酵原浆进行测试，并以1％EGCG和空白样作对比，相对荧光强度结果见图5，可见，相同浓度下，大米玫瑰发酵原浆对活性氧的抑制作用明显优于单一的大米发酵原浆或玫瑰发酵原浆，抗衰老效果接近1％EGCG。

二、发酵原浆增强谷胱甘肽光氧化物酶活性检测

采用实施例2中大米玫瑰发酵原浆增强谷胱甘肽光氧化物酶活性检测方法，取相同浓度(10％)的大米玫瑰发酵原浆、大米发酵原浆和玫瑰发酵原浆进行测试，并以阳性对照(抗坏血酸葡萄糖苷，浓度为86μg/m1)和空白样作对比，3种发酵原浆相同浓度下对谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响结果示意图见图6，可以看出，大米玫瑰发酵原浆对成纤维细胞中的谷胱甘肽光氧化物酶活性有促进作用，效果明显优于单一的大米发酵原浆或玫瑰发酵原浆。

三、发酵原浆促进胶原蛋白I合成检测

采用实施例2中大米玫瑰发酵原浆促进胶原蛋白I合成检测方法，取相同浓度(10％)的大米玫瑰发酵原浆、大米发酵原浆和玫瑰发酵原浆进行测试，并以阳性对照(抗坏血酸葡萄糖苷，浓度为86μg/ml)和空白样作对比，3种发酵原浆相同浓度下对胶原蛋白I相对表达量影响的结果示意图如图7所示，可以看出，大米玫瑰原浆对胶原蛋白合成有促进作用，而单一的大米发酵原浆或玫瑰发酵原浆并没有促进效果。

四、黑色素合成抑制实验

采用实施例2中黑色素合成抑制实验方法，取相同浓度(10％)的大米玫瑰发酵原浆、大米发酵原浆和玫瑰发酵原浆进行测试，并以33mM熊果苷为阴性对照组，未作处理的空白样为空白对照组，3种发酵原浆相同浓度下对B16细胞内黑色素含量影响的结果示意图如图8所示，可见10％大米玫瑰发酵原浆的美白效果优于单一的大米发酵原浆或玫瑰发酵原浆。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的实例，而并非对实施方式的限制。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而因此所引申的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。

通过上述的描述，本发明的实施例提供了以下的方案，但不限于此：

方案1.一种大米玫瑰发酵原浆，其由费比恩毕赤酵母Pichia fabianii.同时发酵培养大米干粉与玫瑰干粉，所得发酵液经灭菌、离心取上清液得到。

方案2.如方案1所述的大米玫瑰发酵原浆，其中，所述费比恩毕赤酵母Pichiafabianii.以菌株的形式加入。

方案3.如方案1所述的大米玫瑰发酵原浆，其中，所述费比恩毕赤酵母Pichiafabianii.以菌株的培养液的形式加入。

方案4.如方案1所述的大米玫瑰发酵原浆，其中，所述费比恩毕赤酵母Pichiafabianii.以菌株的悬浮液的形式加入。

方案5.如方案1所述的大米玫瑰发酵原浆，其中，所述大米干粉由大米经粉碎机粉碎、过筛得到，目数为20-50目。

方案6.如方案1所述的大米玫瑰发酵原浆，其中，所述大米干粉目数为50目。

方案7.如方案1所述的大米玫瑰发酵原浆，其中，所述玫瑰干粉由玫瑰花瓣经真空冷冻机冻干后由粉碎机粉碎、过筛得到，目数为20-50目。

方案8.如方案1所述的大米玫瑰发酵原浆，其中，所述玫瑰干粉目数为50目。

方案9.如方案1所述的大米玫瑰发酵原浆，其中，所述费比恩毕赤酵母Pichiafabianii.菌种总量与大米干粉、玫瑰干粉的配比为10⁶-10¹⁰CFU∶3-5g∶5-10g。

方案10.如方案1所述的大米玫瑰发酵原浆，其中，所述发酵培养条件为：pH值为6.5-7.5，发酵培养的温度23-35℃，发酵培养的时间为18-36h。

方案11.一种大米玫瑰发酵原浆的制备方法，具体步骤如下：

方案12.如方案11所述的大米玫瑰发酵原浆的制备方法，其中，步骤1)放入摇床中将菌种活化的条件为：180rpm，28℃下培养24h。

方案13.如方案11所述的大米玫瑰发酵原浆的制备方法，其中，步骤3)所述麦芽汁培养基中pH值为6.5-7.5。

方案14.如方案11所述的大米玫瑰发酵原浆的制备方法，其中，步骤3)所述发酵菌菌液浓度为10⁶-10¹⁰CFU/ml。

方案15.如方案11所述的大米玫瑰发酵原浆的制备方法，其中，步骤4)所述大米干粉、玫瑰干粉与水的质量体积比为3-5g∶5-10g∶500mL。

方案16.如方案11所述的大米玫瑰发酵原浆的制备方法，其中，步骤4)所述灭菌条件为：压力0.15～0.25MPa，温度110～130℃下灭菌15～30min。

方案17.如方案11所述的大米玫瑰发酵原浆的制备方法，其中，步骤4)所述离心条件为：转速为3000～8000r/min，离心时间为10～40min。

方案18.一种大米玫瑰发酵原浆在化妆品方面的应用。

方案19.一种大米玫瑰发酵原浆制备得到的化妆品。

方案20.一种大米玫瑰发酵原浆制备得到的面膜。

方案21.一种大米玫瑰发酵原浆制备得到的精华液。

方案22.一种大米玫瑰发酵原浆制备得到的爽肤水。

Claims

1.一种大米玫瑰发酵原浆，其特征在于，其由费比恩毕赤酵母Pichia fabianii.同时发酵培养大米干粉与玫瑰干粉，所得发酵液经灭菌、离心取上清液得到；所述费比恩毕赤酵母Pichia fabianii.菌种总量与大米干粉、玫瑰干粉的配比为10⁶-10¹⁰CFU：3-5g：5-10g。

2.根据权利要求1所述的大米玫瑰发酵原浆，其中，所述费比恩毕赤酵母Pichia fabianii.以菌株的形式加入。

3.根据权利要求1所述的大米玫瑰发酵原浆，其特征在于，所述费比恩毕赤酵母Pichia fabianii.以菌株或其培养液或其悬浮液的形式加入。

4.根据权利要求1所述的大米玫瑰发酵原浆，其特征在于，所述大米干粉由大米经粉碎机粉碎、过筛得到，目数为20-50目。

5.根据权利要求1所述的大米玫瑰发酵原浆，其中，所述大米干粉目数为50 目。

6.根据权利要求1所述的大米玫瑰发酵原浆，其特征在于，所述玫瑰干粉由玫瑰花瓣经真空冷冻机冻干后由粉碎机粉碎、过筛得到，目数为 20-50目。

7.根据权利要求1所述的大米玫瑰发酵原浆，其中，所述玫瑰干粉目数为 50 目。

8.根据权利要求1所述的大米玫瑰发酵原浆，其中，所述发酵培养条件为：pH 值为6.5-7.5，发酵培养的温度23-35℃，发酵培养的时间为18-36h。

9.一种权利要求1-8中任一所述的大米玫瑰发酵原浆的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

1）菌种的活化：挑取费比恩毕赤酵母Pichia fabianii菌落一环于液体培养基中，放入摇床中将菌种活化，得到活化后的费比恩毕赤酵母菌液；

2）菌种的纯化：将步骤1）所得活化后的费比恩毕赤酵母菌液梯度稀释铺板，以便获取单菌落，得到纯化后的费比恩毕赤酵母菌种；

3）菌种的扩大培养：将步骤2）所得纯化后的费比恩毕赤酵母菌种接种到麦芽汁培养基中，在30℃的摇床中培养，当OD值=1.0时，得到发酵菌菌液；

4）制备大米玫瑰发酵原浆：将步骤3）所得发酵菌菌液按比例接种到大米干粉、玫瑰干粉和水中，得到发酵体系，然后将发酵体系置于摇床中发酵得到发酵产物，再将发酵产物灭菌、离心，收集上清液得到大米玫瑰发酵原浆。

10.根据权利要求9所述的大米玫瑰发酵原浆的制备方法，其中，步骤 1）放入摇床中将菌种活化的条件为：180rpm，28℃下培养24h。

11.根据权利要求9所述的大米玫瑰发酵原浆的制备方法，其中，步骤 3）所述麦芽汁培养基中 pH 值为6.5-7.5。

12.根据权利要求9所述的大米玫瑰发酵原浆的制备方法，其中，步骤 3）所述发酵菌菌液浓度为10⁶-10¹⁰CFU/ml。

13.根据权利要求9所述的大米玫瑰发酵原浆的制备方法，其中，步骤 4）所述大米干粉、玫瑰干粉与水的质量体积比为3-5g：5-10g：500mL。

14.根据权利要求9所述的大米玫瑰发酵原浆的制备方法，其特征在于，步骤 4）所述灭菌条件为：压力0.15~0.25MPa，温度110~130℃下灭菌15~30min。

15.根据权利要求9所述的大米玫瑰发酵原浆的制备方法，其特征在于，步骤 4）所述离心条件为：转速为 3000~8000r/min，离心时间为10~40min。

16.一种权利要求1-8中任一所述的大米玫瑰发酵原浆在制备化妆品方面的应用。

17.一种根据权利要求1-8中任一所述的大米玫瑰发酵原浆制备得到的化妆品。

18.一种根据权利要求1-8中任一所述的大米玫瑰发酵原浆制备得到的面膜。

19.一种根据权利要求1-8中任一所述的大米玫瑰发酵原浆制备得到的精华液。

20.一种根据权利要求1-8中任一所述的大米玫瑰发酵原浆制备得到的爽肤水。