CN116622515A - 一种香菇菌株及其用途 - Google Patents

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丁建
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王勇
韩宝康
樊玉萍
张晶
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Abstract

本发明属于食用菌培育技术领域，涉及一种香菇菌株及其筛选方法和用途。该香菇菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.23883。本发明选育的香菇菌株，不经人工催花处理便可形成花菇，子实体单生兼具大中菇比例高、菇质硬耐储存、产量高、抗杂能力强、商品性好等特点。

Description

一种香菇菌株及其用途
技术领域
本发明涉及一种香菇菌株及其用途，属于食用菌培育技术领域。
背景技术
香菇Lentinula edodes(Berk.)Pegler，又称为香蕈、香蘑、香菰、椎茸，隶属于真菌界Fungi、担子菌门Basidiomycota、伞菌纲Agaricomycetes、伞菌目Agaricales、光茸菌科Omphalotaceae、香菇属Lentinula。由于它味道鲜美，菌肉肥厚，香味浓郁，口感纯正，营养丰富，且具有抗菌、抗病毒、降血压、降血脂、降胆固醇、提高免疫力等功效，故有“菇中之王”、“蘑菇皇后”、“蔬菜之冠”的美称。
香菇是世界第二大食用菌，中国也是世界上栽培香菇最早的国家之一。野生香菇子实体较小，菌盖呈现扁平的球形，菌盖表面呈现褐色(浅褐色、深褐色)，菌肉细密、稍厚，呈白色，菌褶呈白色。主要生长在我国东南部热带、亚热带地区，北部分布在甘肃、西藏南部、陕西等地。随着食用菌产业的迅猛发展以及育种水平和栽培技术的提高，香菇已成为我国栽培面积最广且产量最大的食用菌种类，深受生产者和消费者的喜爱，市场需求量大。
目前生产中使用的香菇品种多而杂，且由于栽培过程不规范导致出现产量下降、病虫害严重、畸形菇多、抗逆性差等菌种退化现象，严重影响香菇品质，因此，香菇新菌株的选育势在必行。本研究旨在为香菇生产提供优良菌株，促进香菇产业的可持续发展。
发明内容
针对现有香菇品种产量相对低、抗逆性差等问题，本发明提供一种香菇菌株及其用途。
为达到上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
本发明第一个目的是提供一种香菇菌株，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.23883。
本发明第二个目的是提供一种所述香菇菌株在培育香菇中的用途。
本发明第三个目的是提供一种所述香菇菌株在制备香菇子实体、香菇菌丝体和/或香菇孢子中的用途。
本发明第四个目的是提供一种由所述香菇菌株制备的原生质体。
本发明第五个目的是提供一种所述香菇菌株产生的孢子。
本发明第六个目的是提供一种所述香菇菌株产生的菌丝体。
本发明第七个目的是提供一种所述香菇菌株生产的香菇。
优选地，所述香菇通过其部分子实体的组织分离增殖。
优选地，所述部分子实体的组织分离自菌盖和菌柄交界处。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：
本发明选育的香菇菌株与传统的香菇品种相比，不用经过人工催花处理，自然条件便可形成花菇，子实体单生兼具大中菇比例高、菇质硬耐储存、产量高、抗杂能力强、商品性好等特点，可以作为优质香菇菌株在全国推广种植。
生物保藏信息：
香菇菌株，为野生采集得到，其属香菇(Lentinulaedodes)，菌株编号：L18-1，命名为安香2号，于2021年11月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.23883，保藏地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
附图说明
图1是筛选得到的菌株L18-1的菌落形态；
图2是菌株L18-1的菌盖图；A、单个菌菇，B、多菌菇；
图3是菌株L18-1的菌柄图；A、单个菌菇，B、多菌菇；
图4是菌株L18-1的出菇表现图；A、多菌菇，B、单个菌菇；
图5是菌株L18-1培育的成品菇；
图6是菌株L18-1的出菇结菇数表现图；A、侧视图；B、俯视图；
图7是菌株L18-1的最大单菇重量、最大单菇菌盖直径图：A、最大单菇重量，B、最大单菇菌盖直径；
图8是菌株ITS扩增产物琼脂糖凝胶电泳图；
图9是系统发育树。
具体实施方式
本发明结合实施例和相应附图做进一步阐释说明，以下实施例仅用于说明目的，不用于限制本发明范围。
香菇菌株的选育
1.1材料
香菇样本：2017年10月在安康市汉阴县蒲溪镇公星村采集香菇。
母种培养基：马铃薯200g/L、葡萄糖10g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸镁1g/L、琼脂12g/L。
栽培种培养基按质量配比：栎木屑78％、麸皮20％、石膏1％、石灰1％，含水率55％-60％。
1.2工具
超净工作台、手术刀、高压灭菌锅、镊子、接种针、无菌水、培养箱、培养皿。
1.3方法
以采集的野生香菇(2017年10月在安康市汉阴县蒲溪镇公星村采集)作为亲本材料，用酒精轻擦香菇表面后，将其置于超净工作台内，将手术刀在酒精灯火焰上进行表面消毒，用手术刀取菌盖和菌柄交界处组织接种于母种培养基上，置于23±2℃的培养箱中培养，待菌丝萌发生长后进行转接纯化。观察统计菌丝长势、菌丝生长速率，保留50个新菌株进行下一步试验。
1.4菌株优化
将筛选得到的50个新菌株接种到母种培养基上，观察菌丝生长速率、菌丝长势评分(优良、较好、中等、次等、较差)、菌落形态(疏松型、致密型、贴生不均匀型、贴生均匀型)等，挑选出菌丝生长速率快、颜色洁白、爬壁能力强、菌落形态致密的菌株3株，分别标记为L18-1、L18-16、L18-35。
1.5新菌株观察试验
将L18-1、L18-16、L18-35进行菌种扩繁，制备栽培种。采用代栽模式，袋子规格：17cm×58cm×0.006cm的耐高温聚乙烯塑料袋，每袋装干料1.2kg，每个试验重复200袋。采用高压蒸汽法灭菌后冷却。采用打孔接种法，每袋单面顺长打4孔(孔径3-4cm、孔深3cm)后接种。接种方法：将菌种掰成条块，按入接种孔内，并将菌种按实，紧贴料面。将接种后的菌袋移入培养室，进行发菌培养。培养室温度22±2℃，空气相对湿度60％～65％，遮光培养。待菌丝长满完成刺孔后移至出菇棚层架式出菇，采收四潮菇。观察不同香菇菌株特征特性、农艺性状，并统计产量。
表1不同香菇菌株农艺性状及产量比较
菌株编号 L18-1 L18-16 L18-35
菌盖直径(/mm) 66.51 59.93 55.03
平均结菇数(N个/袋) 25.5 26.03 27.96
最大单菇鲜重/g 112.7 86.7 73.3
大中菇比率/％ 85.6 82.4 75.8
菇柄平均长度/mm 56.16 52.42 50.36
菇柄平均直径/mm 18.98 17.65 17.48
菌盖平均厚度/mm 29.08 25.64 22.25
产量(袋/kg) 1.02 0.95 0.92
生物学效率/％ 85.0 79.2 77.7
杂菌污染率/％ 0.75 1.2 1.1
结合3个菌株不同农艺性状表现(表1)，可见L18-1农艺性状表现最好，因此确定L18-1为最优菌株。
1.6、品比试验
以筛选的L18-1为参试菌株，以当地主栽品种808、9608为对照品种开展品比试验。采用代栽模式，袋子规格为17cm×58cm×0.006cm的耐高温聚乙烯塑料袋，每袋装干料约1.2kg，每个重复1000袋。采用高压蒸汽法灭菌后冷却。采用打孔接种法，每袋单面顺长打4孔(孔径3-4cm、孔深3cm)后接种。接种方法：将菌种掰成条块，按入接种孔内，并将菌种按实，紧贴料面。将接种后的菌袋移入培养室，进行发菌培养。培养室温度22±2℃，空气相对湿度60％～65％，遮光培养。待菌丝长满后移至出菇棚，刺孔上架，随机区组排列。观察记录菇型、菌肉组织致密度、产量等指标，并计算大中菇比率及生物学效率。
表2新菌株L18-1与9608、808品种比较研究
品种 袋均产量/kg 生物学效率/％ 大中菇比率/％ 菌肉致密度 花菇率/％
L18-1 1.03aA 85.8aA 82.6aA 致密 92aA
9608 0.94bB 78.3bB 78.3bB 松软 59cC
808 0.89cC 74.2cC 75.8cC 紧实 72bB
注：表中小写字母表示5％显著水平；大写字母表示1％显著水平。
由表2可知，新菌株L18-1与当地栽培主要品种9608、808相比，各项指标表现均最好，具体表现为：袋均产量为1.03kg，生物学效率高达85.8％，花菇率最高，为92％；其次是9608，袋均产量为0.94kg，生物学效率为78.3％；808菇质紧实，花菇率居中，但产量偏低。经显著性差异分析表明，L18-1与9608、808在大中菇比率、袋均产量、生物学效率、花菇率四个方面均呈显著性差异。根据品比试验结果，表明新菌株L18-1为较优菌株，并命名为“安香2号”。
图1为菌株L18-1的菌落形态图。
图2～5分别为菌株L18-1的菌盖、菌柄、出菇表现及培育的成品菇的示意图。
图6为菌株L18-1的出菇结菇数表现图。
图7为菌株L18-1的最大单菇重量、最大单菇菌盖直径的示意图。
1.7、分子生物学鉴定(系统发育分析)
采用ITS法，收集L18-1菌丝，提取真菌基因组DNA，将菌株DNA溶解于50μl的TE中，-20℃保存。采用通用引物ITS1和ITS4进行扩增。ITS区扩增程序为：95℃预变性5min；95℃变性45s、52℃退火45s、72℃延伸1min，35个循环；72℃总延伸10min。PCR扩增所得片段，经生工生物工程(上海)股份有限公司进行序列测定。
所得片段序列如下：
TACCTGATTTGAGGTCAGCAAATAAGTTATATATAGTCAATCAAGACAGTTAGAAAGCGGAACTTCCCTTTTTCTCCAATGAATAGAACAGATTGAGCAAACTAAATGCAACAACCCAAACCAATAGAGCTTTATTATTGTAAGGTTCCACCAAAATGTAGATAATTATCACACCAAGGTTAGAACTAACAAAACAGGGTTCCCACTAATAAATTTAAGAGGAGCTGACAAACGCCTGCAAGCCTCCAACATCCAAGCTTTAATAAGTAAAAACTTATAAAGTTGAGAATTTAATGACACTCAAACAGGCATGCCCTCCGGAATACCAGAGGGCGCAAGGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGGGAGAGCCAAGAGATCCGTTGCTGAAAGTTGTATTAAGTTTAAAGGGTCAATAAAGTCCCAATAACAAGATCATTCTATAACATACTTCAATGGTTTATAAGAACATAGAAGCCTTGTCAACTAGTCTTTTCAAGTAACTCATAATGAGCACCTTCAAAAACCCGATGAAAGAACTCCTACAAAAAGTGCACAGGTGGATGAATAAAAATCGGAGGAGGATGTGCACATACCCAAAGGCCAGCAACAA。
该菌株ITS扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果显示(图8)，分离的菌株为真核生物类。
运用NCBI网站，将L18-1菌株序列与数据库中不同菌株的序列进行比对，选取相似性高的序列构建进化树。结果表明(图9)，该菌株为香菇。
实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (9)

1.一种香菇菌株，其特征在于，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.23883。
2.权利要求1所述香菇菌株在培育香菇中的用途。
3.权利要求1所述香菇菌株在制备香菇子实体、香菇菌丝体和/或香菇孢子中的用途。
4.一种由权利要求1所述的香菇菌株制备的原生质体。
5.一种权利要求1所述的香菇菌株产生的孢子。
6.一种权利要求1所述的香菇菌株产生的菌丝体。
7.一种权利要求1所述的香菇菌株生产的香菇。
8.根据权利要求7所述的香菇，其特征在于，所述香菇通过其部分子实体的组织分离增殖。
9.根据权利要求8所述的香菇，其特征在于，所述部分子实体的组织分离自菌盖和菌柄交界处。
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