CN116606385B - 莪术多糖及其制备方法和应用 - Google Patents

莪术多糖及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种莪术多糖及其制备方法和应用。该方法包括如下步骤：(1)预处理：将干燥后的莪术粉脱脂；(2)粗提取：将脱脂后的莪术粉用水浸提；(3)除色素：用大孔弱碱性阴离子交换树脂脱色；(4)除蛋白：用大孔弱碱性阴离子交换树脂除蛋白。该方法操作简单、成本较低，提取时间较短，获得的莪术多糖的总糖含量高，纯度高，蛋白质含量低至3.85％，总糖含量高达36.69％。另外，本发明发现本发明所制备的莪术多糖具有良好的抗凝血效果，同时无明显的毒性作用，可作为抗凝药物用于治疗心血管等疾病。

Description

莪术多糖及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于医药领域，特别是涉及一种莪术多糖及其制备方法和应用。
背景技术
血液凝固和血小板凝集是局部缺血性疾病发病的最重要的原因，诱发心血管和脑血管甚至全身各处的相关疾病。肝素类物质已被广泛应用于相关疾病的治疗，作用效果显著但副作用较大。例如：传统抗凝药物肝素需注射使用，长期使用依从性难以保障并可导致骨质疏松等副作用。因此，研发新型抗凝血药物具有重要意义。
莪术作为传统的中药，传统功效为行气破血、消积止痛和活血化瘀等，具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、保肝、抑菌等药理作用。目前对莪术活性成分的研究主要集中在姜黄素类化合物和挥发油类物质，对莪术多糖的提取和纯化及其作用的研究非常少。
发明内容
基于此，本发明提供了一种莪术多糖的制备方法，并且发现所得莪术多糖具有抗凝血的作用。
一方面，本发明提供了一种莪术多糖的制备方法，包括如下步骤：
(1)预处理：将干燥后的莪术粉脱脂；
(2)粗提取：将脱脂后的莪术粉用水浸提，将所得提取液浓缩，在所得浓缩液中加入乙醇水溶液，静置，离心，洗涤所得沉淀，得莪术粗多糖；
(3)除色素：将所述莪术粗多糖溶解于水中得到莪术粗多糖水溶液，在所述莪术粗多糖水溶液中加入活化后的大孔弱碱性阴离子交换树脂，在搅拌条件下脱色，得到脱色后的多糖溶液；
(4)除蛋白：取所述脱色后的多糖溶液，加入活化后的大孔弱碱性阴离子交换树脂，在搅拌条件下除蛋白，过滤，取吸附有多糖的大孔弱碱性阴离子交换树脂用饱和NaCl溶液洗脱，透析，冻干，即得莪术多糖。
在其中一些实施例中，步骤(1)所述将干燥后的莪术粉脱脂包括如下步骤：在莪术粉中加入无水乙醇，加热回流1h-2h，重复1-3次。
在其中一些实施例中，步骤(1)所述莪术粉和无水乙醇的配比为1g:8mL-12mL。
在其中一些实施例中，步骤(2)所述脱脂后的莪术粉和水的配比为1g:8mL-12mL。
在其中一些实施例中，步骤(2)所述浸提的温度为90℃-100℃，时间为2h-10h。
在其中一些实施例中，步骤(2)所述浸提的温度为95℃-100℃，时间为5h-7h。
在其中一些实施例中，步骤(2)所述浸提的温度为98℃-100℃，时间为6h-7h。
在其中一些实施例中，步骤(2)所述浓缩为浓缩至浓缩液的体积为原体积的15-25％。
在其中一些实施例中，步骤(2)所述浓缩液和乙醇水溶液的体积比为1：0.7-0.8。
在其中一些实施例中，步骤(2)所述乙醇水溶液的体积浓度为70-80％。
在其中一些实施例中，步骤(2)所述静置的温度为0℃-8℃，时间为12h-24h。
在其中一些实施例中，步骤(2)所述静置的温度为0℃-8℃，时间为15h-20h。
在其中一些实施例中，步骤(2)所述离心的转速为7000r/min-9000r/min。
在其中一些实施例中，步骤(2)所述洗涤所得沉淀包括：(a)用无水乙醇洗涤沉淀，抽滤抽干，接着用乙醚、丙酮洗涤，抽滤抽干；重复(a)1-3次。
在其中一些实施例中，步骤(3)和步骤(4)中所述大孔弱碱性阴离子交换树脂为D301-R。
在其中一些实施例中，步骤(3)所述莪术粗多糖水溶液的浓度为4mg/mL-6mg/mL。
在其中一些实施例中，步骤(3)所述莪术粗多糖和活化后的大孔弱碱性阴离子交换树脂的质量比为1：15-25。
在其中一些实施例中，步骤(3)所述脱色的温度为45℃-55℃，时间为1h-3h。
在其中一些实施例中，步骤(3)所述活化后的大孔弱碱性阴离子交换树脂的活化方法包括如下步骤：取大孔弱碱性阴离子交换树脂以饱和氯化钠水溶液浸泡6h-12h，水洗，再用4-6％的HCl溶液浸泡3h-5h，水洗，再用4-6％的NaOH溶液浸泡3h-5h，水洗，即得。
在其中一些实施例中，步骤(4)所述脱色后的多糖溶液与所述大孔弱碱性阴离子交换树脂的配比为4mL-6mL：1g。
在其中一些实施例中，步骤(4)所述除蛋白的温度为45℃-55℃，时间为1h-3h。
在其中一些实施例中，步骤(4)所述饱和NaCl溶液与所述脱色后的多糖溶液的体积比为1：1-1.5。
在其中一些实施例中，步骤(4)所述透析包括：用规格为MD8000-14000的透析袋在纯水中透析42-54h，每6h-8h换一次纯水。
在其中一些实施例中，步骤(4)所述冻干的条件包括：温度为-70℃～-90℃，压力为10Pa-30Pa。
另一方面，本发明提供了一种莪术多糖，由上述制备方法制备得到。
在其中一些实施例中，所述莪术多糖中的总糖含量为35-37％。
另一方面，本发明还提供了所述莪术多糖的应用，包括如下技术方案。
所述莪术多糖在制备抗凝血药物中的应用。
本发明用热水提取法从莪术粉中提取出莪术粗多糖，再采用大孔弱碱性阴离子交换树脂去除莪术粗多糖中的色素，对于多糖里面的蛋白质，采用大孔弱碱性阴离子交换树脂除去，从而得到一种绿色高效的莪术多糖提取纯化方法。该方法操作简单、成本较低，提取时间较短。
进一步地，通过对各步条件的优化，可以进一步提高制备得到的莪术多糖的总糖含量和纯度，以本发明制备方法获得的莪术多糖的总糖含量高，纯度高，蛋白质含量低至3.85％，总糖含量高达36.69％。
获得较纯的莪术多糖后，采用实验兔的去血小板血浆，利用活化部分凝血活酶时间APTT检测试剂盒进行抗凝血实验，发现本发明所制备的莪术多糖具有良好的抗凝血效果。并通过RAW264.7细胞毒性实验，发现莪术多糖对RAW264.7细胞均无明显抑制作用，没有明显的毒性作用，从而可作为抗凝药物用于治疗心血管等疾病。
附图说明
图1为实施例1制备的莪术粗多糖。
图2为实施例1制备的纯化后的莪术多糖。
图3为莪术多糖的红外光谱图。
图4为不同提取时间下莪术多糖的提取率。
图5为不同脱色方法的多糖保留率和脱色率。
图6为不同除蛋白方法的蛋白除去率和多糖保留率。
图7为血浆出现的纤维蛋白丝。
图8为莪术多糖的抗凝血活性实验结果。
图9为莪术多糖的细胞毒性实验结果。
具体实施方式
下面通过具体实施例来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。
本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。
在本发明中提及的“多个”是指两个或两个以上。“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
以下实施例中主要试剂与材料如表1所示。
表1
实施例1莪术多糖的制备、纯度鉴定与结构分析
1、材料预处理
将莪术粉放进50℃的电热恒温干燥箱烘3h，得到干燥的莪术粉末，密封备用。
准确称取60g莪术粉末倒进三口烧瓶，按固液比＝1:10(m/v，g/mL)加入600mL无水乙醇，用磁力搅拌电热套加热脱脂，在80℃条件下加热回流1.5h，重复两次。脱脂后抽滤，取滤渣，在50℃的电热恒温干燥箱中烘干，备用。
2、莪术多糖粗提取
按固液比(m/v，g/mL)＝1:10，把上述脱脂后的莪术粉末加进三口烧瓶，加入纯水，在100℃条件下水浴回流浸提6h，用离心机离心，取上清液。用旋转蒸发仪浓缩，最后滤液需浓缩至原体积的20％左右，得浓缩液。
向上述浓缩液中以浓缩液：乙醇＝1mL:0.75mL的比例缓慢加入体积浓度为75％的乙醇水溶液，然后放4℃冰箱静置18h。第二天用离心机在8000r/min的条件下离心，得到凝胶状沉淀物。
用无水乙醇洗涤沉淀，抽滤抽干，接着用乙醚、丙酮洗涤，抽滤抽干。重复上述顺序操作两次，挥干有机溶剂，干燥后得到淡棕色莪术粗多糖，如图1所示。
3、除色素
取大孔弱碱性阴离子交换树脂通过如下方法活化：以饱和氯化钠水溶液浸泡8h；去离子水清洗；5％HCl溶液浸泡4h；水洗；5％NaOH溶液浸泡4h；水洗5遍。
取1g莪术粗多糖，以纯水溶解，稀释至200mL，过滤不溶杂质，加入20g活化后的大孔弱碱性阴离子交换树脂，在50℃，磁力搅拌条件下脱色2h，过滤除去大孔弱碱性阴离子交换树脂，得到脱色后的多糖溶液。
4、除蛋白
取大孔弱碱性阴离子交换树脂通过如下方法活化：以饱和氯化钠水溶液浸泡8h；去离子水清洗；5％HCl溶液浸泡4h；水洗；5％NaOH溶液浸泡4h；水洗5遍。
取上述脱色后的多糖溶液100mL，加入20g活化后的大孔弱碱性阴离子交换树脂，在50℃，磁力搅拌条件下除蛋白2h。过滤，取吸附有多糖的大孔弱碱性阴离子交换树脂用100mL饱和NaCl溶液洗脱多糖，用规格为MD8000-14000的透析袋在纯水中透析48h，每6h-8h换一次纯水，在-80℃、20Pa条件下冻干，即得莪术多糖，如图2所示，为冻干后的莪术多糖。
5、莪术多糖的红外光谱分析
莪术多糖官能团的鉴定采用红外光谱分析的方法：精确称取莪术多糖1～2mg，与干燥KBr在玛瑙研钵中碾碎混匀，压制成1.0mm药片，然后采用红外光谱仪做红外光谱检测:扫描范围4000～400cm-1。
莪术多糖的红外光谱图如图3所示。多糖样品具有明显的特征吸收峰:一个是在3389cm-1处振动较强的峰，其峰较宽，是由于O-H的伸缩振动形成的；另一个特征峰就是在2934cm-1处振动弱的吸收峰，其峰相对比较窄，是C-H的伸缩振动产生的，莪术多糖具有多糖的典型特征峰，表明纯化出来的莪术多糖是糖类化合物。
6、莪术多糖的总糖含量测定
准确称量1mg纯化后的莪术多糖，完全溶于1mL的纯水中，得到1mg/mL的莪术多糖溶液。用苯酚-硫酸法，以D-葡萄糖为标准品绘制标准曲线，并根据浓度与吸光度之间的线性关系，计算得样品莪术多糖溶液中总糖的浓度和总糖含量。苯酚-硫酸比色法测定总糖含量的测定原理是：多糖或寡糖被浓硫酸在适当高温下水解，产生单糖，并迅速脱水成糠醛衍生物，该衍生物在强酸条件下与苯酚起显色反应，生成橙色物质，在波长490nm处和一定浓度范围内，其吸光度A值与糖浓度C呈线性关系，从而可用比色法测定其含量。
测试结果显示，莪术多糖的总糖含量为36.69％。
7、莪术多糖的蛋白含量测定
准确称量1mg纯化后的莪术多糖，完全溶于1mL的纯水中，得到1mg/mL的莪术多糖溶液。用考马斯亮蓝G-250法测定莪术多糖溶液的蛋白含量。考马斯亮蓝G-250法是染料结合法的一种。其原理为：考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈棕红色，吸收峰波长在488nm。当它的阴离子与蛋白质上的酰胺结合后变为青蓝色，在595nm波长下有最大吸收，吸收值与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质含量测定。以标准牛血清白蛋白溶液绘制标准曲线，并根据浓度与吸光度之间的线性关系，计算得样品莪术多糖溶液中蛋白的浓度和蛋白含量。
测试结果显示，莪术多糖的蛋白质含量为3.85％，说明经过除蛋白后蛋白质含量已经很低了。
实施例2不同提取时间对莪术粗多糖提取率的影响
莪术多糖粗提取的步骤中，提取时间分别为2.5h、4h、6h，其他步骤和条件均与实施例1相同。
测试不同提取时间下莪术粗多糖的提取率：提取得到莪术粗多糖后，干燥后称量莪术粗多糖的质量，计算不同提取时间下莪术粗多糖的提取率。
M1：干燥的脱脂前的莪术粉质量
M2：干燥后的莪术粗多糖的质量
结果如图4所示：提取时间为2.5h、4h、6h的莪术粗多糖提取率分别为3.42％、3.90％、6.02％，可知莪术粗多糖产率随着热水提取的时间延长而增大，在成本可接受范围内，热水提取时间越长越好。
实施例3不同除色方法制备莪术多糖
本实施例与实施例1的区别仅仅在于除色素的方法不同，其他步骤和条件均与实施例1相同。
其中，除色素的方法分别如下：
1、离子交换树脂法
方法同实施例1。
2、活性炭脱色法
取1g莪术粗多糖，以纯水溶解，稀释至200ml，过滤不溶杂质，加入2g活性炭粉末，在50℃，磁力搅拌条件下脱色2h。
3、聚酰胺脱色法
取1g莪术粗多糖，以纯水溶解，稀释至200ml，过滤不溶杂质，加入4g聚酰胺粉末，在50℃，磁力搅拌条件下脱色2h。
本实施例以色素去除率、多糖保留率为指标，评测三种方法的优劣。
1、脱色率测定及计算：
将莪术粗多糖配成5mg/mL的水溶液，在200-600nm范围内扫描，最后以420nm波长为代表，测定莪术多糖溶液脱色前后的吸光值，以计算脱色率。
脱色率＝(OD1-OD2)/OD1
OD1：脱色前吸光值
OD2：脱色后吸光值
2、多糖保留率计算
采用苯酚-硫酸法，以D-葡萄糖为标准品绘制标准曲线，并根据浓度与吸光度之间的线性关系，计算得样品莪术多糖溶液中总糖的浓度。测得脱色前后的总糖浓度可计算多糖保留率。计算多糖保留率所用到的公式如下：
多糖保留率＝C2/C1
C1：脱色前溶液总糖浓度
C2：脱色后溶液总糖浓度
测试结果如图5所示：活性炭的色素除去率最高，但其多糖保留率非常低，树脂的脱色率虽然较活性炭稍低，但其多糖保留率远远高于活性炭和聚酰胺，树脂的综合效果更好。
实施例4不同除蛋白方法制备莪术多糖
本实施例与实施例1的区别仅仅在于除蛋白的方法不同，其他步骤和条件均与实施例1相同。
其中，除蛋白的方法分别如下：
1、大孔树脂法除蛋白
方法同实施例1。
2、Sevag法除蛋白
量取脱色后的莪术多糖溶液100ml，以多糖溶液：Sevag试剂(v/v)＝5:1的比例除蛋白。Sevag试剂配制：氯仿:正丁醇(v/v)＝4:1,充分混匀即得。
将莪术多糖溶液和Sevag试剂置于分液漏斗中，在通风橱中抽风条件下充分振摇，振摇后排气、静置分层。溶液分层后弃去白色沉淀层、弃去sevag试剂层。重复上述操作多次，直至没有明显的沉淀生成，即完成除蛋白操作。
本实施例以蛋白去除率、多糖保留率为指标，评测两种方法的优劣。
1、蛋白去除率的计算
以考马斯亮蓝G-250法，以标准牛血清白蛋白溶液绘制标准曲线，计算样品除蛋白前后多糖溶液中的蛋白质含量。
蛋白质去除率＝C3-C4/C3
C3：除蛋白前溶液中的蛋白浓度
C4：除蛋白后溶液中的蛋白浓度
2、多糖保留率计算同实施例3。
测试结果如图6所示：从蛋白除去率和多糖保留率来看，树脂的效果都优于Sevag法。
实施例5莪术多糖的抗凝血活性实验
1、血浆制备：健康成年兔心脏取血，按1(8％柠檬酸钠):9(兔血)的体积比加入8％的柠檬酸钠溶液中，混合均匀，3000r/min离心15min，得血浆，-20℃保存，用前37℃水浴快速解冻，并离心除去下层沉淀。
2、待测样品用生理盐水溶解和稀释。阳性对照为0.01mg/mL和0.025mg/mL的肝素钠，阴性对照为0.9％的生理盐水。
3、试验中APTT试剂、CaCl2、均需在37℃水浴孵育。
4、混合血浆制备：取50μL血浆置于玻璃试管中，加入50μL不同浓度的样品，混合均匀，将玻璃试管放入37℃水浴孵育。
5、取100μL混合兔血浆于离心管中，离心管加入100μLAPTT试剂，37℃孵育5min，期间轻轻混匀数次。加入经温育至37℃的CaCl2(25mM)0.1ml，立刻计时，置于水浴中不断震荡，约30s时取出，观察出现纤维蛋白丝(如图7所示)的时间，即为APTT时间，重复2次取平均值。
图7为血浆出现的纤维蛋白丝，用出现纤维蛋白丝的时间长短来表示APTT时间的长短。与空白组相比延长至少7秒，才有实验意义，才可以说明具有延长凝血时间的作用。由图8结果可知，浓度在0.0156-0.25mg/mL的实验组的凝血时间都在50秒以上，且与空白组相比，延长凝血时间APTT在7秒以上，说明莪术多糖主要通过内源性途径影响凝血系统，莪术多糖具有抗凝血作用，但是在0.0156-0.25mg/mL浓度范围内，抗凝血时间无明显浓度依赖关系。浓度大于0.25mg/mL的实验组，抗凝血效果有所下降。而肝素钠的抗凝血时间随着浓度增高而延长，但浓度过高时抗凝血时间太长，可能会有出血的风险。
实施例6莪术多糖的细胞毒性实验
1、铺板
(1)将培养瓶中的RAW264.7细胞用移液枪轻轻地吹打下来，使其成细胞悬液，在1000r/min条件下离心3分钟后，用2mL DMEM完全培养基重悬。
(2)用细胞计数仪对细胞计数后，配成为每毫升8×104浓度的细胞悬液。
(3)用96孔板以每孔100μL进行铺板。
(4)将铺好的板轻放在二氧化碳恒温培养箱中，在37℃、5.2％CO2的条件下孵育，待细胞贴壁。
2、加样
(1)在电子显微镜下观察到96孔板中的细胞贴壁后，开始加样。
(2)样品组加入不同浓度的莪术多糖(300μg/mL、150μg/mL、75μg/mL、37.5μg/mL、18.75μg/mL、9.375μg/mL)，空白对照组加入DMEM完全培养基。
(3)放入培养箱中，在37℃、5.2％CO2的条件下孵育24h。
3、收样
(1)孵育24h后，每孔加入10μL的CCK-8溶液，以加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。在37℃、5.2％CO2的培养箱中孵育1h。
(2)在450nm测定吸光度。吸光度越高，细胞存活越好，药物的细胞毒性越小。
结果如图9所示，莪术多糖各处理浓度(300μg/mL、150μg/mL、75μg/mL、37.5μg/mL、18.75μg/mL、9.375μg/mL)对RAW264.7细胞均无明显抑制作用，没有明显的毒性作用，可以选择此范围内的浓度进行抗凝血实验。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种莪术多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)预处理：将干燥后的莪术粉脱脂；
(2)粗提取：将脱脂后的莪术粉用水浸提，将所得提取液浓缩，在所得浓缩液中加入乙醇水溶液，静置，离心，洗涤所得沉淀，得莪术粗多糖；
(3)除色素：将所述莪术粗多糖溶解于水中得到莪术粗多糖水溶液，在所述莪术粗多糖水溶液中加入活化后的大孔弱碱性阴离子交换树脂，在搅拌条件下脱色，得到脱色后的多糖溶液；
(4)除蛋白：取所述脱色后的多糖溶液，加入活化后的大孔弱碱性阴离子交换树脂，在搅拌条件下除蛋白，过滤，取吸附有多糖的大孔弱碱性阴离子交换树脂用饱和NaCl溶液洗脱，透析，冻干，即得所述莪术多糖；
步骤(3)和步骤(4)中所述大孔弱碱性阴离子交换树脂为D301-R；
步骤(3)所述莪术粗多糖水溶液的浓度为4mg/mL-6mg/mL；
步骤(3)所述莪术粗多糖和活化后的大孔弱碱性阴离子交换树脂的质量比为1：15-25；
步骤(3)所述脱色的温度为45℃-55℃，时间为1h-3h；
步骤(4)所述脱色后的多糖溶液与所述大孔弱碱性阴离子交换树脂的配比为4mL-6mL：1g；
步骤(4)所述除蛋白的温度为45℃-55℃，时间为1h-3h。
2.根据权利要求1所述的莪术多糖的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述将干燥后的莪术粉脱脂包括如下步骤：在莪术粉中加入无水乙醇，加热回流1h-2h，重复1-3次；和/或，
步骤(1)所述莪术粉和无水乙醇的配比为1g:8mL-12mL。
3.根据权利要求1所述的莪术多糖的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述脱脂后的莪术粉和水的配比为1g:8mL-12mL；和/或，
步骤(2)所述浸提的温度为90℃-100℃，时间为2h-10h；和/或，
步骤(2)所述浓缩为浓缩至浓缩液的体积为原体积的15-25％；和/或，
步骤(2)所述浓缩液和乙醇水溶液的体积比为1：0.7-0.8；和/或，
步骤(2)所述乙醇水溶液的体积浓度为70-80％；和/或，
步骤(2)所述静置的温度为0℃-8℃，时间为12h-24h；和/或，
步骤(2)所述离心的转速为7000r/min-9000r/min；和/或，
步骤(2)所述洗涤所得沉淀包括：(a)用无水乙醇洗涤沉淀，抽滤抽干，接着用乙醚、丙酮洗涤，抽滤抽干；重复(a)1-3次。
4.根据权利要求3所述的莪术多糖的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述浸提的温度为95℃-100℃，时间为5h-7h。
5.根据权利要求4所述的莪术多糖的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述浸提的温度为100℃，时间为6h。
6.根据权利要求1所述的莪术多糖的制备方法，其特征在于，
步骤(3)和步骤(4)中所述活化后的大孔弱碱性阴离子交换树脂的活化方法包括如下步骤：取大孔弱碱性阴离子交换树脂以饱和氯化钠水溶液浸泡6h-12h，水洗，再用4-6％的HCl溶液浸泡3h-5h，水洗，再用4-6％的NaOH溶液浸泡3h-5h，水洗，即得。
7.根据权利要求1-6任一项所述的莪术多糖的制备方法，其特征在于，
步骤(4)所述饱和NaCl溶液与所述脱色后的多糖溶液的体积比为1：1-1.5；和/或，
步骤(4)所述透析包括：用规格为MD8000-14000的透析袋在纯水中透析42-54h，每6h-8h换一次纯水；和/或，
步骤(4)所述冻干的条件包括：温度为-70℃～-90℃，压力为10Pa-30Pa。
8.一种莪术多糖，其特征在于，由权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到。
9.根据权利要求8所述的莪术多糖，其特征在于，其总糖含量为35-37％。
10.权利要求8或9所述的莪术多糖在制备抗凝血药物中的应用。
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