CN116508744A - 用于新冠病毒抗原检测的样本保存液及其制备方法 - Google Patents
用于新冠病毒抗原检测的样本保存液及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明描述了一种新冠病毒抗原检测的样本保存液及其制备方法，样本保存液包括：缓冲液、细胞通透剂、保护剂、以及蛋白酶抑制剂，其中，在样本保存液中：缓冲液的摩尔浓度为0.01～0.05mol/L；细胞通透剂包括曲拉通X‑100，细胞通透剂的体积分数为0.1～0.5％；保护剂包括酪蛋白钠，保护剂的质量分数为0.5％～5％；蛋白酶抑制剂的浓度为5000～20000U/mL。根据本发明，能够提供一种可减少蛋白降解、提高抗原检测灵敏度的样本保存液及其制备方法。
Description
技术领域
本发明大体涉及抗原检测领域，具体涉及一种用于新冠病毒抗原检测的样本保存液及其制备方法。
背景技术
较多病毒已严重干扰公共卫生安全，例如近些年流行的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)，其由RNA核酸和蛋白等组成，目前，新型冠状病毒诊断产品有多种，主要以核酸检测和抗原检测为主。核酸检测具有灵敏度高、可大规模检测的优点，但检测周期长、操作环境要求高，不适合日常推广使用。抗原检测的方法有胶体金法、乳胶法、荧光免疫层析法等，主要检测样本中新型冠状病毒核蛋白抗原，能够快速出结果、操作简便，非常适合日常个人检测。
抗原检测试剂盒通常包括检测试纸条、鼻拭子和采样管，采样管中有样本保存液，使用时，将采样后的鼻拭子置于采样管的样本保存液中浸泡旋转混匀，使样本洗脱于样本保存液中，再将采样管中的液体滴加至检测试纸条，等待一定时间后进行结果判读。样本保存液通常用于使细胞裂解并释放细胞内的病毒颗粒、以及对病毒蛋白进行保存，不同的样本保存液的性能有差别，对于检测的灵敏度也具有影响。
因此，提供一种能够提高检测灵敏度的样本保存液极其重要。
发明内容
本发明是有鉴于上述现有技术的状况而提出的，其目的在于提供一种能够减少蛋白降解、提高抗原检测灵敏度的样本保存液及其制备方法。
为此，本发明第一方面提供了一种用于新冠病毒抗原检测的样本保存液，包括：缓冲液、细胞通透剂、保护剂、以及蛋白酶抑制剂，其中，在所述样本保存液中：所述缓冲液的浓度为0.01～0.05mol/L；所述细胞通透剂包括曲拉通X-100(TritonX-100)，所述细胞通透剂的体积分数为0.1～0.5％；所述保护剂包括酪蛋白钠，所述保护剂的质量分数为0.5％～5％；所述蛋白酶抑制剂的浓度为5000U/mL至20000U/mL。
在本发明的样本保存液中，使用的缓冲液的摩尔浓度为0.01～0.05mol/L，此浓度范围的缓冲液pH在7.4左右，当向样本保存液中加入待测样本时，能够起到良好的缓冲酸碱度的作用，减少样本滴加到新冠抗原检测试纸后对测试效果的影响；此浓度范围的缓冲液的pH值与人体体液的pH值相近，能够尽量减少破坏样本中的待检成分。本发明使用细胞通透剂曲拉通X-100能够使细胞裂解从而使细胞中的病毒颗粒被释放出来，有利于抗原的检测，且曲拉通X-100能够使其他微生物被裂解从而能够具有防腐的作用，提高样品的保存时间。细胞通透剂的体积百分数为0.1～0.5％，在这种情况下，能够使样本保存液具有合适的裂解细胞和防腐的作用。本发明使用酪蛋白钠作为保护剂，能够对新冠病毒的核衣壳蛋白进行保护，凭借空间位阻效应，可占据样品中的一部分空间，从而减少蛋白与其他分子之间的接触，降低蛋白质的受损程度，此外，酪蛋白钠表面带有部分亲水性基团，能够吸附水分子，形成水合层，进一步保护蛋白质，并且酪蛋白钠具有良好的缓冲作用，能够稳定样品的pH值，当样品中的pH值变化时，能够吸收或释放氢离子以调节pH值，并避免对蛋白质的影响，最后，酪蛋白钠还具有一定的化学惰性和还原性，能够减少样品中的蛋白质免受氧化或其他化学反应的影响。保护剂的质量分数为0.5～5％，在这种情况下，能够使样本保存液具有良好的蛋白保护效果。本发明使用了蛋白酶抑制剂，蛋白酶抑制剂能够抑制蛋白酶的活性，减少样本中的蛋白被蛋白酶分解的可能，蛋白酶抑制剂的浓度为5000～20000U/mL，在这种情况下，能够使样本保存液具有良好的抑制蛋白酶活性、保护蛋白质的效果。此外，缓冲液、细胞通透剂、保护剂、以及蛋白酶抑制剂协同发挥作用，进一步保护样本保存液中的蛋白质，以及减少对检测的影响。综上，本发明通过选择特定的成分作为样本保存液的成分，并使用适当的配比，且各成分之间协同发挥作用，使样本保存液的性状合适、减少对检测结果影响、且能够增加病毒颗粒的释放和减少蛋白的降解，减少抗原抗体的非特异性结合，增加对新冠病毒抗原检测的灵敏度。
在本发明所涉及的样本保存液中，可选地，所述蛋白酶抑制剂为抑肽酶Aprotinin。由此，能够抑制样本保存液中的蛋白酶的活性，减少蛋白的降解。
在本发明所涉及的样本保存液中，可选地，还包括保湿剂，所述保湿剂包括甘油、蔗糖和海藻糖的至少一种，在所述样本保存液中，所述保湿剂的浓度为0.1～5％。在这种情况下，保湿剂能够使蛋白质表面保持湿润，减少蛋白质因失水而失活的情况，甘油、蔗糖和海藻糖的至少一种作为保湿剂的含量过低则达不到预期的保湿效果，若保湿剂的含量过高，由于甘油、蔗糖或海藻糖能够为微生物生长的提供营养，含量过高则容易腐败变质，不利于样本保存液自身的储存，并且保湿剂含量过高会使样本保存液的性状变粘稠，不利于后续使用新冠抗原检测试纸进行检测时的层析的进行，从而影响检测结果。本发明的样本保存液使用合适的保湿剂及其含量，能够对蛋白质起到保护作用，且能够减少对抗原检测的影响。
在本发明所涉及的样本保存液中，可选地，还包括螯合剂，所述螯合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA)，在所述样本保存液中，所述螯合剂的质量分数为0.1％～1％。在这种情况下，金属离子通常会使蛋白质变性或者使其易于降解，EDTA作为螯合剂能够与一些金属离子(如Ca2+、Mg2+)形成稳定的络合物，从而能够降低金属离子对蛋白质的影响，进而保护蛋白质。螯合剂的浓度过高会影响样本保存液的pH值，影响样本的保存，并且过高浓度的EDTA对人的皮肤、粘膜有一定的刺激作用，增加了样本保存液的使用安全隐患；浓度过低则会达不到预期的螯合金属离子的效果。本发明的样本保存液使用合适的螯合剂及其含量，能够对蛋白质起到保护作用，有利于提高抗原检测的灵敏度。
在本发明所涉及的样本保存液中，可选地，还包括表面活性剂，所述表面活性剂包括吐温-20和乙基苯基聚乙二醇(NP40)的至少一种，在所述样本保存液中，所述表面活性剂的体积分数为0.1％～0.5％。在这种情况下，选择吐温-20、NP-40的至少一种作为表面活性剂能够改变样本保存液的表面张力、减少挂壁现象从而减少样本的损失，此外表面活性剂能够增加蛋白质的溶解度、促进蛋白质从采样器材(聚酯纤维或棉质采样拭子)中洗脱至样本保存液，表面活性剂还具有消泡作用，能够减少样本保存液中具有起泡作用的成分对样本保存液的影响。本发明的样本保存液使用合适的表面活性剂及其含量，能够有利于提升检测的灵敏度。
在本发明所涉及的样本保存液中，可选地，还包括防腐剂，所述防腐剂包括Proclin-300，在所述样本保存液中，所述防腐剂的质量分数为0.01～0.5％。在这种情况下，Proclin-300作为防腐剂能够进一步抑制样品保存液中的其他微生物的增殖，防腐剂的浓度过高则对防腐的效果提升不明显，提高试剂生产成本，并且会使样本保存液发黄、起泡，影响观感和使用，浓度过低则不能达到预期的抑菌防腐效果。
在本发明所涉及的样本保存液中，可选地，所述样本保存液的pH值为7.0～8.0。这种情况下，样本保存液的pH值和人体体液的pH值相近，能够减少从患者采集的样本在样本保存液中因为pH差距过大而导致蛋白质失活现象。本发明的样本保存液，通过合适的pH，能够减少样本保存液对检测靶标蛋白质的影响。
本发明第二方面提供了一种用于新冠病毒抗原检测的样本保存液的制备方法，包括：准备缓冲液、细胞通透剂、保护剂、以及蛋白酶抑制剂，其中，所述缓冲液为磷酸缓冲液，所述细胞通透剂包括TritonX-100，所述保护剂包括牛血清白蛋白和酪蛋白钠的至少一种；将所述缓冲液、所述细胞通透剂、所述保护剂与所述蛋白酶抑制剂进行混合，得到所述样本保存液；在所述样本保存液中，所述缓冲液的摩尔浓度为0.01～0.05mol/L，所述细胞通透剂的体积分数为0.1～0.5％，所述保护剂的质量分数为0.5％～5％，所述蛋白酶抑制剂的浓度为5000U/mL至20000U/mL。
本发明的制备方法得到的样本保存液中，使用的缓冲液的摩尔浓度为0.01～0.05mol/L，此浓度范围的缓冲液pH在7.4左右，当向样本保存液中加入待测样本时，能够起到良好的缓冲酸碱度的作用，减少样本滴加到新冠抗原检测试纸后对测试效果的影响；此浓度范围的缓冲液的pH值与人体体液的pH值相近，能够尽量减少破坏样本中的待检成分。本发明使用细胞通透剂曲拉通X-100能够使细胞裂解从而使细胞中的病毒颗粒被释放出来，有利于抗原的检测，且曲拉通X-100能够使其他微生物被裂解从而能够具有防腐的作用，提高样品的保存时间。细胞通透剂的体积百分数为0.1～0.5％，在这种情况下，能够使样本保存液具有合适的裂解细胞和防腐的作用。本发明使用酪蛋白钠作为保护剂，能够对新冠病毒的核衣壳蛋白进行保护，凭借空间位阻效应，可占据样品中的一部分空间，从而减少蛋白与其他分子之间的接触，降低蛋白质的受损程度，此外，酪蛋白钠表面带有部分亲水性基团，能够吸附水分子，形成水合层，进一步保护蛋白质，并且酪蛋白钠具有良好的缓冲作用，能够稳定样品的pH值，当样品中的pH值变化时，能够吸收或释放氢离子以调节pH值，并避免对蛋白质的影响，最后，酪蛋白钠还具有一定的化学惰性和还原性，能够减少样品中的蛋白质免受氧化或其他化学反应的影响。保护剂的质量分数为0.5～5％，在这种情况下，能够使样本保存液具有良好的蛋白保护效果。本发明使用了蛋白酶抑制剂，蛋白酶抑制剂能够抑制蛋白酶的活性，减少样本中的蛋白被蛋白酶分解的可能，蛋白酶抑制剂的浓度为5000～20000U/mL，在这种情况下，能够使样本保存液具有良好的抑制蛋白酶活性、保护蛋白质的效果。此外，缓冲液、细胞通透剂、保护剂、以及蛋白酶抑制剂协同发挥作用，进一步保护样本保存液中的蛋白质，以及减少对检测的影响。综上，本发明通过选择特定的成分作为样本保存液的成分，并使用适当的配比，且各成分之间协同发挥作用，使样本保存液的性状合适、减少对检测结果影响、且能够增加病毒颗粒的释放和减少蛋白的降解，减少抗原抗体的非特异性结合，增加对新冠病毒抗原检测的灵敏度。
在本发明所涉及的制备方法中，可选地，所述蛋白酶抑制剂为抑肽酶。由此，能够抑制样本保存液中的蛋白酶的活性，减少蛋白的降解。
在本发明所涉及的制备方法中，可选地，将所述缓冲液、所述细胞通透剂、所述保护剂与所述蛋白酶抑制剂混合后调节pH值以使所述样本保存液的pH值为7.0～8.0。这种情况下，样本保存液的pH值和人体体液的pH值相近，能够减少从患者采集的样本在样本保存液中因为pH差距过大而导致蛋白质失活现象。本发明的样本保存液，通过合适的pH，能够减少样本保存液对检测靶标蛋白质的影响。
根据本发明，能够提供一种减少蛋白降解、提高抗原检测灵敏度的样本保存液及其制备方法。
附图说明
现在将仅通过参考附图的例子进一步详细地解释本发明，其中：
图1是示出了本实施方式所涉及的实施例1与对比例1的检测结果图。
图2是示出了本实施方式所涉及的实施例2与对比例2的检测结果图。
图3是示出了本实施方式所涉及的实施例2与对比例3的检测结果图。
具体实施方式
以下，参考附图，详细地说明本发明的优选实施方式。在下面的说明中，对于相同的部件赋予相同的符号，省略重复的说明。另外，附图只是示意性的图，部件相互之间的尺寸的比例或者部件的形状等可以与实际的不同。
需要说明的是，本发明中的术语“包括”和“具有”以及它们的任何变形，例如所包括或所具有的一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可以包括或具有没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
另外，在本发明的下面描述中涉及的小标题等并不是为了限制本发明的内容或范围，其仅仅是作为阅读的提示作用。这样的小标题既不能理解为用于分割文章的内容，也不应将小标题下的内容仅仅限制在小标题的范围内。
本实施方式涉及一种用于新冠病毒抗原检测的样本保存液，下面可以简称为“样本保存液”。本实施方式的样本保存液也可以称为保存液、样本稀释液，可以应用于抗原检测中，例如新型冠状病毒的抗原检测中。在一些示例中，本实施方式的样本保存液也可以用于其他需要裂解细胞并释放病毒颗粒的病毒的抗原检测中。
在一些示例中，样本保存液可以包括缓冲液、细胞通透剂、保护剂、以及蛋白酶抑制剂。
在一些示例中，样本保存液可以包括缓冲液。在一些示例中，缓冲液可以为磷酸缓冲液。在一些示例中，缓冲液可以包括磷酸二氢钠和/或磷酸二氢钾。由此能够给样本保存液提供缓冲作用。在一些示例中，缓冲液还可以包括氯化钠和/或氯化钾。由此能够为样本保存液提供合适的渗透压。
在一些示例中，在样本保存液中，缓冲液的摩尔浓度可以为0.01～0.05mol/L。例如，缓冲液的浓度可以为0.01、0.02、0.03、0.04或0.05mol/L。当向样本保存液中加入待测样本时，能够起到良好的缓冲酸碱度的作用，减少样本滴加到新冠抗原检测试纸后对测试效果的影响；此浓度范围的缓冲液的pH值与人体体液的pH值相近，能够尽量减少破坏样本中的待检成分。若缓冲液浓度过高，高浓度的盐离子不利于新冠抗原检测试纸中显色物质胶体金的稳定性，并且会影响检测抗体和待测抗原之间的结合效果，从而影响新冠抗原检测的结果；若缓冲液浓度过低，则缓冲酸碱度的效果较差。优选地，在一些示例中，在样本保存液中，缓冲液的摩尔浓度可以为0.02mol/L。由此，能够起到合适的缓冲效果。
在一些示例中，样本保存液可以包括细胞通透剂。在一些示例中，细胞通透剂可以包括曲拉通X-100。在一些示例中，细胞通透剂可以为曲拉通X-100。曲拉通X-100能够使细胞裂解从而使细胞中的病毒颗粒被释放出来，有利于抗原的检测，且曲拉通X-100能够使其他微生物被裂解从而能够具有防腐的作用，提高样品的保存时间。
在一些示例中，在样本保存液中，细胞通透剂的体积分数可以为0.1～0.5％。例如，细胞通透剂的体积分数可以为0.01％、0.02％、0.03％、0.04％或0.05％。过高浓度会导致样本保存液的性状粘稠且容易起泡，不利于后续分装至小规格的(例如0.5mL装量)样本提取管，并且性状粘稠会不利于后续使用新冠抗原检测试纸进行检测时的层析的进行，从而影响检测结果，泡沫会影响后续滴加至新冠抗原检测试纸的检测效果；过低浓度则达不到预期的裂解细胞释放病毒颗粒的效果，从而影响检测的灵敏度。优选地，在一些示例中，细胞通透剂的体积分数可以为0.2％。由此，能够起到良好的裂解细胞的效果以及不使样本缓冲液的性状过于黏稠。
在一些示例中，样本保存液可以包括保护剂。在一些示例中，保护剂可以包括酪蛋白钠。在一些示例中，保护剂可以为酪蛋白钠。在这种情况下，使用酪蛋白钠作为保护剂，能够对新冠病毒的核衣壳蛋白进行保护，凭借空间位阻效应，可占据样品中的一部分空间，从而减少蛋白与其他分子之间的接触，降低蛋白质的受损程度，此外，酪蛋白钠表面带有一些亲水性基团，能够吸附水分子，形成水合层，进一步保护蛋白质，并且酪蛋白钠具有良好的缓冲作用，能够稳定样品的pH值，当样品中的pH值变化时，能够吸收或释放氢离子以调节pH值，并避免对蛋白质的影响，最后，酪蛋白钠还具有一定的化学惰性和还原性，能够减少样品中的蛋白质受氧化或其他化学反应的影响。
在一些示例中，在样本保存液中，保护剂的质量分数可以为0.5％～5％。例如，保护剂的质量分数可以为0.5％、0.8％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％或5％。保护剂的含量过低则不能起到良好的对蛋白的保护效果，含量过高则对于样本中蛋白质的保护效果提升不大且提高了试剂生产成本。优选地，在一些示例中，保护剂的质量分数可以为0.8％。由此，能够起到良好的蛋白保护作用。
在一些示例中，样本保存液可以包括蛋白酶抑制剂。在一些示例中，蛋白酶抑制剂为抑肽酶Aprotinin。由此，能够抑制样本保存液中的蛋白酶的活性，减少蛋白的降解。在一些示例中，在样本保存液中，蛋白酶抑制剂的浓度可以为5000U/mL～20000U/mL。例如，蛋白酶抑制剂的浓度可以为5000U/mL、8000U/mL、10000U/mL、15000U/mL或20000U/mL。蛋白酶抑制剂的浓度过低则起不到良好的抑制蛋白酶活性、保护蛋白质的效果，过高则对于蛋白酶的抑制效果提升不大且提高了试剂生产成本。优选地，在一些示例中，蛋白酶抑制剂的浓度可以为10000U/mL。由此，能够尽量满足抑制蛋白酶活性的作用。
在一些示例中，缓冲液、细胞通透剂、保护剂、以及蛋白酶抑制剂可以协同发挥作用，进一步保护样本保存液中的蛋白质，以及减少对检测的影响。
在一些示例中，样本保存液可以包括保湿剂。在一些示例中，保湿剂可以包括甘油、蔗糖和海藻糖中的至少一种。在这种情况下，甘油、蔗糖和海藻糖的至少一种作为保湿剂，能够使蛋白质表面保持湿润，减少蛋白质因失水而失活的情况。在一些示例中，在样本保存液中，保湿剂的浓度可以为0.1％～5％。例如，保湿剂的浓度可以为0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％或5％。保湿剂的含量过低则达不到预期的保湿效果，若保湿剂的含量过高，由于甘油、蔗糖或海藻糖能够为微生物生长的提供营养，含量过高则容易腐败变质，不利于样本保存液自身的储存，并且保湿剂含量过高会使样本保存液的性状变粘稠，不利于后续使用新冠抗原检测试纸进行检测时的层析的进行，从而影响检测结果。本发明的样本保存液使用合适的保湿剂及其含量，能够对蛋白质起到保护作用，且能够减少对抗原检测的影响。优选地，在一些示例中，在样本保存液中，甘油的体积分数为2％。优选地，在一些示例中，在样本保存液中，蔗糖的质量分数为1％。优选地，在一些示例中，在样本保存液中，海藻糖的质量分数为1％。由此，能够起到良好的蛋白保护作用以及不使样本保存液性状过于黏稠。
在一些示例中，样本保存液可以包括螯合剂。在一些示例中，螯合剂可以包括乙二胺四乙酸(EDTA)。在这种情况下，金属离子通常会使蛋白质变性或者使其易于降解，螯合剂能够与一些金属离子(如Ca2+、Mg2+)形成稳定的络合物，从而能够降低金属离子对蛋白质的影响，进而保护蛋白质。在一些示例中，在样本保存液中，螯合剂的质量分数可以为0.1％～1％。例如，保湿剂的质量分数可以为0.1％、0.2％、0.5％、0.8％或1％。螯合剂的浓度过高会影响样本保存液的pH值，影响样本的保存，并且过高浓度的EDTA对人的皮肤、粘膜有一定的刺激作用，增加了样本保存液的使用安全隐患；浓度过低则会达不到预期的螯合金属离子的效果。本发明的样本保存液使用合适的螯合剂及其含量，能够对蛋白质起到保护作用，有利于提高抗原检测的灵敏度。优选地，在一些示例中，在样本保存液中，螯合剂的质量分数为0.15％。由此，能够起到良好的蛋白保护作用。
在一些示例中，样本保存液可以包括表面活性剂。在一些示例中，表面活性剂可以包括吐温-20、乙基苯基聚乙二醇(NP40)的至少一种。在一些示例中，在样本保存液中，表面活性剂的体积分数可以为0.1％～0.5％。例如，表面活性剂的体积分数可以为0.01％、0.02％、0.03％、0.04％或0.05％。在这种情况下，选择吐温-20、NP-40的至少一种作为表面活性剂能够改变样本保存液的表面张力、减少挂壁现象从而减少样本的损失，此外表面活性剂能够增加蛋白质的溶解度、促进蛋白质从采样器材(聚酯纤维或棉质采样拭子)中洗脱至样本保存液，表面活性剂还具有消泡作用，能够减少样本保存液中具有起泡作用的成分对样本保存液的影响。本发明的样本保存液使用合适的表面活性剂及其含量，能够有利于提升检测的灵敏度。在一些示例中，优选地，在样本保存液中，吐温-20的体积分数为0.4％。在一些示例中，优选地，在样本保存液中，NP-20的体积分数为0.5％。
在一些示例中，样本保存液可以包括防腐剂。在一些示例中，防腐剂可以包括Proclin-300。在一些示例中，在样本保存液中，防腐剂的质量分数可以为0.1％～0.5％。例如，防腐剂的质量分数可以为0.01％、0.02％、0.03％、0.04％或0.05％。在这种情况下，Proclin-300作为防腐剂能够进一步抑制样品保存液中的其他微生物的增殖，防腐剂的浓度过高则对防腐的效果提升不明显，提高试剂生产成本，并且会使样本保存液发黄、起泡，影响观感和使用，浓度过低则不能达到预期的抑菌防腐效果。在一些示例中，优选地，在样本保存液中，防腐剂的质量分数为0.4％。由此，能够起到良好的防腐作用。
在一些示例中，样本保存液可以由缓冲液、细胞通透剂、保护剂、蛋白酶抑制剂、保湿剂、螯合剂、表面活性剂以及防腐剂组成。由此，样本保存液能够减少蛋白降解、提高抗原检测灵敏度。
在一些示例中，缓冲液、细胞通透剂、保护剂、蛋白酶抑制剂、保湿剂、螯合剂、表面活性剂以及防腐剂可以协同发挥作用，进一步保护样本保存液中的蛋白质，以及减少对检测的影响。
在一些示例中，样本保存液的pH值可以为7.0～8.0。这种情况下，样本保存液的pH值和人体体液的pH值相近，能够减少从患者采集的样本在样本保存液中因为pH差距过大而导致蛋白质失活现象。本发明的样本保存液，通过合适的pH，能够减少样本保存液对检测靶标蛋白质的影响。在一些示例中，优选地，样本保存液的pH值为7.4。
本实施方式还涉及一种用于新冠病毒抗原检测的样本保存液的制备方法，下面有时简称为“制备方法”。需要说明的是，前述的“样本保存液”部分与接下来的“制备方法”的内容可以相通，因而下面对于部分内容可能不再赘述。
在一些示例中，制备方法可以包括准备原料试剂，将原料试剂溶解于纯水或蒸馏水，得到样本保存液。其中，将原料试剂溶解于纯水或蒸馏水后还可以进行pH值调节，由此，能够得到样本保存液。
在一些示例中，原料试剂可以包括缓冲液、细胞通透剂、保护剂、以及蛋白酶抑制剂。
在一些示例中，缓冲液可以为磷酸缓冲液。在一些示例中，缓冲液可以包括磷酸二氢钠和/或磷酸二氢钾。由此能够给样本保存液提供缓冲作用。在一些示例中，缓冲液还可以包括氯化钠和/或氯化钾。由此能够为样本保存液提供合适的渗透压。在一些示例中，在样本保存液中，缓冲液的摩尔浓度可以为0.01～0.05mol/L。
在一些示例中，细胞通透剂可以包括曲拉通X-100。在一些示例中，细胞通透剂可以为曲拉通X-100。曲拉通X-100能够使细胞裂解从而使细胞中的病毒颗粒被释放出来，有利于抗原的检测，且曲拉通X-100能够使其他微生物被裂解从而能够具有防腐的作用，提高样品的保存时间。在一些示例中，在样本保存液中，细胞通透剂的体积分数可以为0.1％～0.5％。
在一些示例中，保护剂可以包括酪蛋白钠。在一些示例中，保护剂可以为酪蛋白钠。在这种情况下，使用酪蛋白钠作为保护剂，能够对新冠病毒的核衣壳蛋白进行保护，凭借空间位阻效应，可占据样品中的一部分空间，从而减少蛋白与其他分子之间的接触，降低蛋白质的受损程度，此外，酪蛋白钠表面带有一些亲水性基团，能够吸附水分子，形成水合层，进一步保护蛋白质，并且酪蛋白钠具有良好的缓冲作用，能够稳定样品的pH值，当样品中的pH值变化时，能够吸收或释放氢离子以调节pH值，并避免对蛋白质的影响，最后，酪蛋白钠还具有一定的化学惰性和还原性，能够减少样品中的蛋白质免受氧化或其他化学反应的影响。在一些示例中，在样本保存液中，保护剂的质量分数可以为0.5％～5％。
在一些示例中，蛋白酶抑制剂为抑肽酶Aprotinin。由此，能够抑制样本保存液中的蛋白酶的活性，减少蛋白的降解。在一些示例中，在样本保存液中，蛋白酶抑制剂的浓度可以为5000U/mL～20000U/mL。
在一些示例中，原料试剂可以包括保湿剂。在一些示例中，保湿剂可以包括甘油、蔗糖和海藻糖的至少一种。在这种情况下，保湿剂能够使蛋白质表面保持湿润，减少蛋白质因失水而失活的情况。在一些示例中，在样本保存液中，保湿剂的浓度可以为0.1％～5％。
在一些示例中，原料试剂可以包括螯合剂。在一些示例中，螯合剂可以包括乙二胺四乙酸(EDTA)。在这种情况下，金属离子通常会使蛋白质变性或者使其易于降解，螯合剂能够与一些金属离子(如Ca2+、Mg2+)形成稳定的络合物，从而能够降低金属离子对蛋白质的影响，进而保护蛋白质。在一些示例中，在样本保存液中，螯合剂的浓度可以为0.1％～1％。
在一些示例中，原料试剂可以包括表面活性剂。在一些示例中，表面活性剂可以包括吐温-20、乙基苯基聚乙二醇(NP40)的至少一种。在一些示例中，在样本保存液中，表面活性剂的体积分数可以为0.1％～0.5％。
在一些示例中，原料试剂可以包括防腐剂。在一些示例中，防腐剂可以包括Proclin-300。在一些示例中，在样本保存液中，防腐剂的体积分数可以为0.1％～0.5％。
在一些示例中，可以使用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节pH值，得到样本保存液。盐酸溶液的浓度可以为1mol/L，氢氧化钠溶液的浓度可以为1mol/L。在一些示例中，可以使样本保存液的最终pH值为7.0～8.0。
本实施方式的样本保存液及其制备方法，能够减少蛋白降解、提高抗原检测灵敏度。
下面，通过实施例和对比例对本发明进行详细描述。但下述实施例或对比例只是为了具体说明本发明而提供的例子，并不限定或限制本申请中公开的发明的范围。
作为本公开的实施例和对比例，样本保存液的制备方法包括以下步骤：
根据下表1准备好缓冲液原料、细胞通透剂、保护剂、蛋白酶抑制剂、保湿剂、螯合剂、表面活性剂和防腐剂；
将各原料或试剂使用纯水或蒸馏水溶解，并充分搅拌至溶解；
采用1mol/L的盐酸溶液或者氢氧化钠溶液调节pH值至7.2，使用纯化水或蒸馏水定容至1L，得到样本保存液；
得到的样本保存液标，根据需要分装至相应容器中备用。
其中，在实施例1、实施例2、对比例1和对比例2的样本保存液中，各组分及其含量如下表1所示，对比例3为购买的市售新冠抗原试剂盒的样本保存液(深圳市锦瑞生物科技股份有限公司，备案号：粤深械备20211177号)。
表1
将购买的灭活新冠病毒培养液(奥密克戎株)分别用实施例1、实施例2、对比例1、对比例2和对比例3得到的样本保存液进行稀释，得到高浓度(4000TCID50/mL)、中浓度(2000TCID50/mL)和低浓度(1000TCID50/mL)的样品，使用相同批次的新冠抗原检测试纸(申请人自产的检测卡)进行检测，结果如图1至图3所示。图1为实施例1和对比例1在高、中、低浓度下的检测结果图，图2为实施例2和对比例2在高、中、低浓度下的检测结果图，图3为实施例2和对比例3在高、中、低浓度下的检测结果图。
通过图1可知，经过实施例1和对比例1的样本稀释液处理后的样品，在高浓度样品(4000TCID50/mL)中，T线(检测线)和C线(质控线)显色度区别均不大；在中浓度样品(2000TCID50/mL)和低浓度样品(1000TCID50/mL)中，实施例1的检测T线着色较对比例1着色深。说明实施例1通过添加蛋白酶抑制剂，能够更有利于保护病毒的蛋白，能够提高检测的灵敏度。尤其在检测中、低浓度样本中能有效地提升新冠病毒抗原检测试纸的检测T线的显色强度，有利于抗原的检出。
通过图2可知，经过实施例2和对比例2的样本稀释液处理后的样品，在高浓度样品(4000TCID50/mL)中，检测T线、质控C线显色度差别不大；在中浓度样品(2000TCID50/mL)和低浓度样品(1000TCID50/mL)中，经本发明中实施例2配方样本保存液的处理结果，检测T线显色较对比例2显色强。说明实施例2通过添加保护剂酪蛋白钠，能够更有利于保护病毒的蛋白，能够提高检测的灵敏度。尤其在检测中、低浓度样本中能有效地提升新冠病毒抗原检测试纸的检测T线的显色强度，有利于抗原的检出。
通过图3可知，经过实施例2和对比例3的样本稀释液处理后的样品，在高浓度样品(4000TCID50/mL)中，实施例2的检测T线显色略强于对比例3、质控C线显色度差别不大；在中浓度样品(2000TCID50/mL)和低浓度样品(1000TCID50/mL)中，经本发明中实施例2配方样本保存液的处理结果，质控T线显色较对比例3显色有明显的增强，尤其是在检测低浓度样本(1000TCID50/ml)时，使用实施例2的样本保存液时，T线显色强度虽弱，但是仍清晰可见，但使用对比例3的样本保存液时，检测T线几乎不显色，会造成假阴性的结果。说明实施例2的样本保存液相较于对比例3的样本保存液，能够更有利于保护病毒的蛋白，能够提高新冠病毒抗原检测的灵敏度。
综上，本公开的样本保存液，相较于其他的样本保存液，能够提高检测灵敏度。本发明的样本保存液，通过选择特定的成分作为样本保存液的成分，并使用适当的配比，且各成分之间协同发挥作用，能够增加对新冠病毒抗原检测的灵敏度。
虽然以上结合附图和实施例对本公开进行了具体说明，但是可以理解，上述说明不以任何形式限制本公开。本领域技术人员在不偏离本公开的实质精神和范围的情况下可以根据需要对本公开进行变形和变化，这些变形和变化均落入本公开的范围内。
Claims (10)
1.一种用于新冠病毒抗原检测的样本保存液，其特征在于，包括：
缓冲液、细胞通透剂、保护剂、以及蛋白酶抑制剂，
其中，在所述样本保存液中：
所述缓冲液的浓度为0.01～0.05mol/L；
所述细胞通透剂包括曲拉通X-100，所述细胞通透剂的体积分数为0.1～0.5％；
所述保护剂包括酪蛋白钠，所述保护剂的质量分数为0.5％～5％；
所述蛋白酶抑制剂的浓度为5000～20000U/mL。
2.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，所述蛋白酶抑制剂为抑肽酶。
3.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，还包括保湿剂，所述保湿剂包括甘油、蔗糖和海藻糖中的至少一种，在所述样本保存液中，所述保湿剂的浓度为0.1％～5％。
4.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，还包括螯合剂，所述螯合剂包括乙二胺四乙酸，在所述样本保存液中，所述螯合剂的质量分数为0.1％～1％。
5.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，还包括表面活性剂，所述表面活性剂包括吐温-20、乙基苯基聚乙二醇的至少一种，在所述样本保存液中，所述表面活性剂的体积分数为0.1％～0.5％。
6.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，还包括防腐剂，所述防腐剂包括Proclin-300，在所述样本保存液中，所述防腐剂的质量分数为0.1～0.5％。
7.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，所述样本保存液的pH值为7.0～8.0。
8.一种用于新冠病毒抗原检测的样本保存液的制备方法，其特征在于，包括：
准备缓冲液、细胞通透剂、保护剂、以及蛋白酶抑制剂，其中，所述缓冲液为磷酸缓冲液，所述细胞通透剂包括TritonX-100，所述保护剂包括酪蛋白钠；
将所述缓冲液、所述细胞通透剂、所述保护剂与所述蛋白酶抑制剂进行混合，得到所述样本保存液；
在所述样本保存液中，所述缓冲液的摩尔浓度为0.01～0.05mol/L，所述细胞通透剂的体积分数为0.1～0.5％，所述保护剂的质量分数为0.5％～5％，所述蛋白酶抑制剂的浓度为5000～20000U/mL。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶抑制剂为抑肽酶。
10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，将所述缓冲液、所述细胞通透剂、所述保护剂与所述蛋白酶抑制剂混合后调节pH值以使所述样本保存液的pH值为7.0～8.0。
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