CN111557298A - 一种新型冠状病毒n蛋白提取保存液及其制备方法和应用 - Google Patents
一种新型冠状病毒n蛋白提取保存液及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111557298A CN111557298A CN202010251209.0A CN202010251209A CN111557298A CN 111557298 A CN111557298 A CN 111557298A CN 202010251209 A CN202010251209 A CN 202010251209A CN 111557298 A CN111557298 A CN 111557298A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- novel coronavirus
- extraction
- sample
- solution
- preservation solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 title claims abstract description 40
- 108700002099 Coronavirus Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 39
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 26
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 12
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims abstract description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- -1 ethyl phenyl Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 17
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 15
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 15
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 claims description 6
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 5
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 2
- 229940125717 barbiturate Drugs 0.000 claims description 2
- HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N barbituric acid Chemical compound O=C1CC(=O)NC(=O)N1 HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims description 2
- OTNVGWMVOULBFZ-UHFFFAOYSA-N sodium;hydrochloride Chemical compound [Na].Cl OTNVGWMVOULBFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 44
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 abstract description 25
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 7
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 abstract description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 abstract description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 9
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 6
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 6
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 4
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 3
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 3
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/38—Diluting, dispersing or mixing samples
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种新型冠状病毒N蛋白提取保存液及其制备方法和应用,1L所述新型冠状病毒N蛋白提取保存液包括以下各组分:酪蛋白1.2~2.4g;抗生素0.58~4.67g;牛血清白蛋白12~20g;乙基苯基聚乙二醇1~15g;抗红细胞单克隆抗体0.03~0.36g;ProClin300 0.4~3.2g;余量为缓冲液。本发明所提供的新型冠状病毒提取保存液,其对鼻拭子、咽拭子、口腔拭子、肺泡灌洗液、痰液、唾液等不同样本具有较好的兼容性,为病毒样本提供了一个合适稳定的缓冲环境,利于样本检测和保存;并且样本加入该提取保存液中,无需将样本洗涤和重新提取,直接可用于检测。
Description
技术领域
本发明属于体外诊断领域,涉及一种新型冠状病毒N蛋白提取保存液及其制备方法和应用。
背景技术
为了满足疫情防控需要,提升便捷程度,提高检测准确度,实现疑似患者的快速诊断和密切接触人群的现场筛查,需要快速进行核酸、抗体和抗原的快速检测试剂的开发,同时为提高检测的准确性,样本提取的后处理及保存显得尤为重要。
发明内容
有鉴于此,本发明的主要目的在于提供一种新型冠状病毒N蛋白提取保存液及其制备方法和应用。
为了实现上述目的,本发明提供了一种新型冠状病毒N蛋白提取保存液, 1L新型冠状病毒N蛋白提取保存液包括以下各组分:
余量为缓冲液。
在本发明的一个具体方案中,其中所述缓冲液选自Tris-HCl缓冲液、PB缓冲液和巴比妥钠-盐酸缓冲液中的一种。
在本发明的一个具体方案中,其中所述缓冲溶液的浓度范围为0.005~0.1M。
在本发明的一个具体方案中,其中所述缓冲溶液的浓度范围为0.01~0.05M,通过该浓度的缓冲溶液处理后,大部分病毒细胞发生破裂,新冠病毒细胞内部N 蛋白裸露程度增加。
在本发明的一个具体方案中,其中所述缓冲溶液的浓度为0.02M,通过该浓度的缓冲溶液处理后,病毒细胞发生破裂几乎全部破裂,新冠病毒细胞内部N 蛋白裸露程度增加,提高检测结果的准确度。
为了实现上述目的,本发明还提供了一种新型冠状病毒N蛋白提取保存液的制备方法,包括以下步骤:将配方量的酪蛋白、抗生素、牛血清白蛋白、乙基苯基聚乙二醇、抗红细胞单克隆抗体、生物防腐剂和缓冲液混合均匀,即得所述新型冠状病毒N蛋白提取保存液。
为了实现上述目的,本发明还提供了一种新型冠状病毒N蛋白提取保存液的使用方法,包括以下步骤:在塑料软管、样品杯或试剂杯中加入0.2~2mL提取保存液,将采集的样本加入到上述提取保存液中,混合均匀后,将含有样本的提取保存液在2~8℃下保存或者直接取30~100μL用于免疫检测。
在本发明的一个具体方案中,其中所述样本选自鼻拭子、咽拭子、口腔拭子、唾液、痰液或肺泡灌洗液中的一种。
在本发明的一个具体方案中,其中所述免疫检测选自化学发光、酶联免疫、免疫层析、磁微粒化学发光、电化学免疫和质谱免疫中的一种。
本发明的有益效果为:
1、本发明所提供的新型冠状病毒提取保存液,其对鼻拭子、咽拭子、口腔拭子、肺泡灌洗液、痰液、唾液等不同样本具有较好的兼容性,为病毒样本提供了一个合适稳定的缓冲环境,利于样本检测和保存;并且样本加入该提取保存液中,无需将样本洗涤和重新提取,直接可用于检测。
2、本发明所提供的新型冠状病毒提取保存液,其能够降低检测过程中的非特异性吸附,进而提高检测灵敏度和特异性。
3、本发明所提供的新型冠状病毒提取保存液,其通过利用渗透压使新型冠状病毒细胞吸水肿胀破裂,以将新型冠状病毒N蛋白从细胞内充分暴露出来,进而可以通过检测个体样本中新型冠状病毒N蛋白的含量进行新型冠状病毒肺炎诊断,并能进一步提高检测结果的灵敏度和准确性。。
附图说明
图1为本发明所提供的快速检测新型冠状病毒N蛋白的免疫层析试纸条示意图;
图2A为本发明所提供的快速检测新型冠状病毒N蛋白的免疫层析检测卡中一种上盖的内部结构示意图;
图2B为本发明所提供的快速检测新型冠状病毒N蛋白的免疫层析检测卡中一种底槽的内部结构示意图;
其中,1-包被垫,2-标记物垫,3-吸水垫,4-质控线,5-检测线,6-标记物结合处,7-样品垫,8-上盖,9-底槽,10-加样孔,11-观察窗,12-试纸条放置区域,13-定位柱,14-定位孔,15-第一限定部,16-第二限定部,17-第三限定部。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
以下材料或试剂,除非特别说明,均为市售。
实施例1新型冠状病毒N蛋白提取保存液的配制
几种1L新型冠状病毒N蛋白提取保存液的配制如表1所示。
牛血清白蛋白
表1
0.2M Na2HPO4缓冲溶液和0.2M NaH2PO4缓冲溶液的配制如下表2所示。
表2
0.01M PB缓冲溶液的配制如下表3所示。
表3
0.02M PB缓冲溶液的配制如下表4所示。
表4
0.05MPB缓冲溶液的配制如下表5所示。
表5
0.1M PB缓冲溶液的配制如下下表6所示。
表6
0.15M PB缓冲溶液配制如下表7所示。
表7
实施例2新型冠状病毒N蛋白免疫层析检测试剂盒的制备
1)采用荧光微球标记另一株鼠抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体
取0.5mL荧光微球加入1mg碳化二亚胺(EDC),1mg N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS),于室温,120r/min的转速下搅拌3h,然后加入100μL另一株鼠抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体,于室温,120r/min的转速下搅拌1h,再加入 10mg BSA封闭液,继续以120r/min的转速搅拌1h。在2~8℃下,按照12000 r/min的转速离心20min,除去上清液。最后,用0.2M的磷酸盐缓冲液(pH=7.4) 将离心后获得的固体沉淀物复溶至1mL,再加入1μL的Proclin300在4℃下保存待用。
2)采用荧光微球标记兔IgG多克隆抗体
取0.5mL荧光微球加入1mg碳化二亚胺(EDC),1mg N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS),于室温,120r/min的转速下搅拌3h,然后加入100μL mg羊兔IgG 多克隆抗体,于室温,120r/min的转速下搅拌1h,再加入10mg BSA封闭液,继续以120r/min的转速搅拌1h。在2~8℃下,按照11000r/min的转速离心30 min,除去上清液。最后,用0.2M的磷酸盐缓冲液(pH=7.4)将固体沉淀物复溶至1mL,再加入1μL的Proclin300在4℃下保存待用。
3)包被垫的制备
将一株鼠抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体和羊抗兔多克隆抗体分别用 0.2M的磷酸盐缓冲液(pH=7.4)稀释成1mg/mL,用划膜喷金仪在硝酸纤维素膜(NC膜)上进行划膜。含有一株鼠抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体的作为检测线(T线)5,含有羊抗兔多克隆抗体的作为质控线(C线)4,然后在37℃,湿度<30%的环境下干燥4h制成包被垫1。
4)标记物垫的制备
①将玻璃纤维素膜在0.2M的磷酸盐缓冲液(pH=7.4)中浸泡6h,然后在 35℃下干燥8h,备用。
②将摩尔比为1:1的荧光微球标记的一株鼠抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的兔IgG标记的荧光乳胶微球混合均匀后,按照10μL/cm的速度喷涂在玻璃纤维素膜上,然后放置在45℃下干燥2h制成标记物垫2。标记物垫2上包被有荧光微球标记的一株鼠抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的兔IgG的地方叫做标记物结合处6。
5)免疫层析检测试剂盒的组装
首先在PVC板(图中未示出)上粘接包被垫1,然后在靠近包被垫1上的质控线4的一端搭接吸水垫3,在靠近包被垫1的检测线5的一端搭接标记物垫 2及其连接的样品垫7,用切条机切成4mm±0.1mm的试纸条(见图1),将试纸条放入卡壳中制备成新型冠状病毒N蛋白免疫层析检测试剂盒。
所述卡壳选自现有技术,例如,所述卡壳(如图2所示)可以包括:底槽 12,其连接于所述PVC板;上盖8,其连接于所述底槽9,所述上盖8上设置有用于向所述样品垫7上加样的加样孔10;观察窗11,其设置于上盖8上,用于检测线5和质控线4的数据采集。
如图2B所示,所述底槽9包括:位于其内表面的对称分布的多个定位孔14,多个所述定位孔14之间设有多个用于限定试纸条横向移动的第一限定部15以及用于限定试纸条纵向移动的第二限定部16;对称设置的所述第一限定部15与所述第二限定部16围设成试纸条放置区域12(虚线区域),用于放置试纸条;
如图2A所示,所述上盖8包括:与多个所述定位孔14相配合的多个定位柱13,这样配合使用以将上盖8和底槽9固定在一起;所述上盖8还包括用于限定试纸条的上下移动的第三限定部17。
所述包被垫1的上方设有用于数据采集的观察窗11,以露出全部所述检测线5和质控线4,用于收集其检测结果;且所述观察窗11开设于所述上盖8上与试纸条放置区域12的中部相对应的位置。所述上盖8在与所述样品垫7相对应的位置处开设有加样孔10,以用于样品垫7上滴加样本。所述检测线5距离加样孔15-25mm。
实施例3检测
收集13例确诊新型冠状病毒肺炎患者的咽拭子样本,分别用实施例1中制备的A、B、C、D、E 5种新型冠状病毒N蛋白提取保存液处理样本,具体处理方式为:将采集咽拭子样本后的棉棒浸在提取保存液中并搅拌;用手指挤压塑料软管外侧多次,使提取保存液充分浸透棉棒,然后拔出棉棒,绞出(即将棉棒上采集的样本混合到提取保存液中)的液体即为待测样本。然后取60μL待测样本采用实施例2所述的新型冠状病毒N蛋白免疫层析试剂盒进行检测,将待测样本滴加到试剂盒加样孔处,静置15min,然后插入荧光免疫层析分析仪进行检测,仪器自动计算出样本T/C值,通过与正常值范围判断阴阳性;或者当在紫外灯照射下呈现出两条荧光条带时,即为阳性,检测结果如下表8中所示。
表8
从表8中可以看出,13例新型冠状病毒阳性患者的咽拭子样本经提取保存液A处理后,其中11例检测为阳性,阳性检出率为84.6%;13例新型冠状病毒阳性患者的咽拭子样本经提取保存液B处理后,其中11例检测为阳性,阳性检出率为84.6%;13例新型冠状病毒阳性患者的咽拭子样本经提取保存液C处理后,其中9例检测为阳性,阳性检出率为69.2%;13例新型冠状病毒阳性患者的咽拭子样本经提取保存液D处理后,其中6例检测为阳性,阳性检出率为46.1%; 13例新型冠状病毒阳性患者的咽拭子样本经提取保存液E处理后,其中1例检测为阳性,阳性检出率为7.6%。由此可以看出,通过逐渐降低缓冲液的摩尔浓度,使得检测的准确性逐渐提高。这是由于当新型冠状病毒细胞内渗透压大于外界环境时,缓冲溶液中的水会逐渐向细胞内部扩散,当超过细胞膜的最大承受能力时,会使细胞发生破裂,使得新型冠状病毒N蛋白从细胞内充分暴露出来,进而能够提高检测结果的准确性。从表8中测得T/C数据可以看出,当缓冲液浓度为0.15M时,T/C很低,说明此时病毒细胞内外渗透压相当,几乎不发生破裂;当缓冲液浓度为0.1M和0.05M时,T/C值逐渐增大,说明病毒细胞大部分发生破裂;当缓冲液浓度为0.02M和0.01M时,T/C值相当,说明病毒细胞已经完全破裂,新型冠状病毒N蛋白充分暴露出来,进而进一步提高检测结果的准确度准度。
实施例4
1、1L新型冠状病毒N蛋白提取保存液的配制如表9所示。
表9
2、收集9例确诊新型冠状病毒肺炎患者的鼻拭子样本,分别用实施例4步骤1 中制备的提取保存液处理样本,具体处理方式为:将采集鼻拭子样本后的棉棒浸在提取保存液中并搅拌;用手指挤压塑料软管外侧多次,使提取保存液充分浸透棉棒,然后拔出棉棒,绞出(即将棉棒上采集的样本混合到提取保存液中)的液体即为待测样本。然后取60μL待测样本采用实施例2所述的新型冠状病毒N 蛋白免疫层析试剂盒进行检测,将待测样本滴加到试剂盒加样孔处,静置15min,然后插入荧光免疫层析分析仪进行检测,仪器自动计算出样本T/C值,通过与正常值范围判断阴阳性;或者当在紫外灯照射下呈现出两条荧光条带时,即为阳性,检测结果如下表10中所示。
表10
从表10的临床检测数据可以看出,9例新型冠状病毒阳性样本经样本提取液处理后5例检测为阳性,4例检测为阴性,阳性检出率为55%;9例新型冠状病毒阳性样本经0.05MPB缓冲溶液处理后3例检测为阳性,6例检测为阴性,阳性检出率为33%,表明经样本提取液处理后能够提高检测结果的准确性。
实施例5
1、1L新型冠状病毒N蛋白提取保存液的配制如表11所示。
表11
2、收集9例确诊新型冠状病毒肺炎患者的咽拭子样本,分别用实施例4步骤1 中制备的提取保存液处理样本,具体处理方式为:将采集咽拭子样本后的棉棒浸在提取保存液中并搅拌;用手指挤压塑料软管外侧多次,使提取保存液充分浸透棉棒,然后拔出棉棒,绞出(即将棉棒上采集的样本混合到提取保存液中)的液体即为待测样本。然后取60μL待测样本采用实施例2所述的新型冠状病毒N 蛋白免疫层析试剂盒进行检测,将待测样本滴加到试剂盒加样孔处,静置15min,然后插入荧光免疫层析分析仪进行检测,仪器自动计算出样本T/C值,通过与正常值范围判断阴阳性;或者当在紫外灯照射下呈现出两条荧光条带时,即为阳性,检测结果如下表12中所示。
表12
从表12的临床检测数据可以看出,9例新型冠状病毒阳性样本经样本提取液处理后6例检测为阳性,3例检测为阴性,阳性检出率为67%;9例新型冠状病毒阳性样本经样本提取液处理后4例检测为阳性,5例检测为阴性,阳性检出率为44%,表明经样本提取液处理后能够提高检测结果的准确性。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的实施例,本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换,均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。
Claims (9)
2.如权利要求1所述的新型冠状病毒N蛋白提取保存液,其特征在于,所述缓冲液选自Tris-HCl缓冲液、PB缓冲液和巴比妥钠-盐酸缓冲液中的一种。
3.如权利要求2所述的新型冠状病毒N蛋白提取保存液,其特征在于,所述缓冲溶液的浓度范围为0.005~0.1M。
4.如权利要求3所述的新型冠状病毒N蛋白提取保存液,其特征在于,所述缓冲溶液的浓度范围为0.01~0.05M。
5.如权利要求4所述的新型冠状病毒N蛋白提取保存液,其特征在于,所述缓冲溶液的浓度范围为0.02M。
6.一种权利要求1-5任一项所述的新型冠状病毒N蛋白提取保存液的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:将配方量的酪蛋白、抗生素、牛血清白蛋白、乙基苯基聚乙二醇、抗红细胞单克隆抗体、生物防腐剂和缓冲液混合均匀,即得所述新型冠状病毒N蛋白提取保存液。
7.一种权利要求1-5任一项所述的新型冠状病毒N蛋白提取保存液的使用方法,其特征在于,包括以下步骤:在塑料软管、样品杯或试剂杯中加入0.2~2mL提取保存液,将采集的样本加入到上述提取保存液中,混合均匀后,将含有样本的提取保存液在2~8℃下保存或者直接取30~100μL用于免疫检测。
8.如权利要求7所述的使用方法,其特征在于,所述样本选自鼻拭子、咽拭子、口腔拭子、唾液、痰液或肺泡灌洗液中的一种。
9.如权利要求7所述的使用方法,其特征在于,所述免疫检测选自化学发光、酶联免疫、免疫层析、磁微粒化学发光、电化学免疫和质谱免疫中的一种。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010251209.0A CN111557298B (zh) | 2020-04-01 | 2020-04-01 | 一种新型冠状病毒n蛋白提取保存液及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010251209.0A CN111557298B (zh) | 2020-04-01 | 2020-04-01 | 一种新型冠状病毒n蛋白提取保存液及其制备方法和应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN111557298A true CN111557298A (zh) | 2020-08-21 |
CN111557298B CN111557298B (zh) | 2021-04-09 |
Family
ID=72068932
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202010251209.0A Active CN111557298B (zh) | 2020-04-01 | 2020-04-01 | 一种新型冠状病毒n蛋白提取保存液及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN111557298B (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114993796A (zh) * | 2022-08-01 | 2022-09-02 | 易凯医疗建筑设计(深圳)有限公司 | 基于机械臂的存样方法、装置、电子设备和存储介质 |
CN116508744A (zh) * | 2023-03-31 | 2023-08-01 | 深圳联合医学科技有限公司 | 用于新冠病毒抗原检测的样本保存液及其制备方法 |
-
2020
- 2020-04-01 CN CN202010251209.0A patent/CN111557298B/zh active Active
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114993796A (zh) * | 2022-08-01 | 2022-09-02 | 易凯医疗建筑设计(深圳)有限公司 | 基于机械臂的存样方法、装置、电子设备和存储介质 |
CN116508744A (zh) * | 2023-03-31 | 2023-08-01 | 深圳联合医学科技有限公司 | 用于新冠病毒抗原检测的样本保存液及其制备方法 |
CN116508744B (zh) * | 2023-03-31 | 2024-05-17 | 深圳联合医学科技有限公司 | 用于新冠病毒抗原检测的样本保存液及其制备方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN111557298B (zh) | 2021-04-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111398583A (zh) | 一种检测新型冠状病毒n蛋白的试剂盒及其应用 | |
CN111398589A (zh) | 一种快速检测新型冠状病毒n蛋白的免疫层析试剂盒及其制备方法和应用 | |
CN111454913A (zh) | 一种新型冠状病毒SARS-Cov-2保存液及其制备方法和应用 | |
DK160108C (da) | Fremgangsmåde og udstyr til direkte eller indirekte påvisning af reaktion mellem et specifikt bindingsmiddel og den tilsvarende acceptorsubstans | |
EP0890103B1 (en) | Quantitative immunochromatographic assays | |
CN107255726B (zh) | 定量检测人甲状旁腺激素的荧光免疫层析试纸及其制备方法 | |
EP1381864B1 (en) | Detection of candida | |
CN111557298B (zh) | 一种新型冠状病毒n蛋白提取保存液及其制备方法和应用 | |
US20120308444A1 (en) | Lateral Flow Immunoassay for Detecting Cardiac Troponin I and Myoglobin | |
WO2021159703A1 (zh) | 一种快速检测新型冠状病毒n蛋白的免疫层析试剂盒及其制备方法和应用 | |
JP5767362B1 (ja) | 免疫クロマト分析装置、免疫クロマト分析方法及び免疫クロマト分析キット | |
CN111398593A (zh) | 一种快速联合检测卡及其制备方法和应用 | |
CN111610335A (zh) | 时间分辨荧光免疫层析试纸条、包含其的试剂盒及其应用 | |
CN109061189A (zh) | 一种肌钙蛋白i检测试剂盒及其制备方法 | |
EP0013032B1 (en) | Method for determining human chorionic gonadotropin in the urine | |
CN111983229A (zh) | 胶体金定量检测幽门螺杆菌抗体试剂条及检测方法 | |
CN112034170A (zh) | 荧光层析定量检测幽门螺杆菌抗体试剂卡及检测方法 | |
CN109655608A (zh) | 一种用于骨肉瘤诊断的外泌体蛋白及其即时检测方法 | |
CA2570383C (en) | Filter device, the method, kit and use thereof | |
CN112098656A (zh) | 用于检测人SARS-CoV-2的HRP免疫层析试剂条及其制备方法 | |
CN212646713U (zh) | 一种新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒 | |
EP3792630A1 (en) | Lateral flow immunoassay device for detection of candida infection | |
CN207816989U (zh) | 一种多功能胶体金试剂盒 | |
CN108089013A (zh) | 一种犬降钙素原检测试剂盒和该检测试剂盒中荧光试剂的制备方法 | |
CN115825434B (zh) | 一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡及其检测方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |