CN115825434B

CN115825434B - 一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡及其检测方法

Info

Publication number: CN115825434B
Application number: CN202211212246.6A
Authority: CN
Inventors: 孙晓笛; 马珊; 陈金树; 陆维克; 路晓楠
Original assignee: Hangzhou Ruishi Biotechnology Co ltd
Current assignee: Hangzhou Ruishi Biotechnology Co ltd
Priority date: 2022-09-30
Filing date: 2022-09-30
Publication date: 2023-08-22
Anticipated expiration: 2042-09-30
Also published as: CN115825434A

Abstract

本发明涉及猫艾滋检测技术领域，为解决现有技术下猫艾滋病毒的检测试纸条灵敏度不佳，易出现漏检，并且试纸条不具备凝集猫红细胞能力导致膜面偏红从而影响结果判读的问题，公开了一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡，所述试剂卡包括用于检测猫艾滋抗原的抗原试剂条和检测猫艾滋抗体的抗体试剂条。试剂卡可同时检测猫艾滋的抗原和抗体，大大提高了临床上的检出率，并且试纸条的样品垫中预先添加了能有效凝集猫红细胞的成分，能够在样品垫中捕获猫全血样品中的猫红细胞，使之不会进入金标结合垫，避免出现观察窗口中的膜面变红影响结果判读的情况。本发明还提供了一种猫艾滋检测试剂卡的制备方法。

Description

一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡及其检测方法

技术领域

本发明涉及猫艾滋检测技术领域，尤其涉及一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡及其检测方法。

背景技术

获得性免疫缺陷症又称为猫艾滋病，是由猫获得性免疫缺陷症病毒(FelineImmunodeficiency Virus，FIV)引起的危害猫类的慢性接触性传染病。FIV感染的潜状期较长，一般3年，产生临床症状的平均年龄是10岁，而从感染到慢性死亡的期限可长达5年或更长。该病是一种发病率低但致死率极高的病症，现阶段还没有可以有效治疗的疫苗，主要是控制继发感染和缓解临床症状。因此，建立一种快速、高灵敏度检测猫艾滋病毒的方法尤为重要，可为临床诊断和继后治疗提供技术支持。

目前针对猫艾滋研发的检测试纸主要以猫艾滋病毒抗原为检测指标，而FIV感染临床上可分为5个时期，即第一期急性期、第二期无症状带毒期、第三期持续全身性淋巴腺炎期 (PGL)、第四期AIDS关联期(ARC)和第五期获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。在感染初期(第一期)和末期(第四、五期)，从血液中分离到猫艾滋病毒相对较容易，而感染中期(第二、三期)时病毒主要集中在骨髓和腹膜巨噬细胞中，此时收集血液检测猫艾滋病毒比较困难，所以如果收集血液检测猫艾滋病毒，感染的一期、四期、五期比较准确，如果收集的是二期和三期的血液样本，则存在漏检的风险，这个时候通过对猫艾滋抗体的检测，可以减少漏检的发生，提高猫咪的生存率和改善其生活质量。同时猫艾滋检测样本类型多为血清、血浆和全血，对于新鲜全血样本的检测，普通样品垫往往不具备凝集猫红细胞的能力，容易造成猫红细胞冲板问题，致使检测试剂膜面变红从而影响结果判读。

例如，在中国专利文献上公开的公告号为CN213843281U的“一种用荧光免疫层析技术检测猫艾滋病毒的试纸条”，包括连接板，连接板的中部开设有储液孔，储液孔的两侧内壁均开设有通孔，储液孔的上端内壁开设有加液口，加液口的开口端设置为漏斗状，连接板的一侧面固定连接有多个呈等间距分布的试纸层，试纸层的一端开设有海绵孔，其中试纸层的标记物垫含有荧光微球标记的猫艾滋病毒检测抗体。又例如在中国专利文献上公开的公告号为CN217033644U的“一种猫艾滋检测试纸”，包括壳体，所述壳体上设有外吸水层与透明板，所述外吸水层位于所述透明板外围，所述透明板与所述壳体固定连接，所述透明板与所述壳体上开设有通孔，所述通孔用于穿设取样针，所述外吸水层上设有试纸条本体。上述专利通过检测猫艾滋病毒抗原判断猫是否得猫艾滋，存在一定的漏检情况，同时使用上述试纸条检测时会因取血量较多，导致膜面偏红，进而影响结果的判读。

发明内容

本发明为了克服现有技术下猫艾滋病毒的检测试纸条灵敏度不佳，易出现漏检，并且试纸条不具备凝集猫红细胞能力导致膜面偏红从而影响结果判读的问题，提供一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡，该试剂卡可对猫咪血样进行抗原抗体联检，检测准确率高，该试剂卡还可将待检血样中的猫红细胞截留在样品垫上，避免了猫红细胞直接冲板造成测试试剂膜面变红，使用者可用肉眼清晰判读测试结果。本发明还提供了一种使用抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡的检测方法，该方法操作简便，检测灵敏。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡，所述试剂卡包括抗原试剂条和抗体试剂条；

抗原试剂条包括底板、在底板上依次叠加的第一样品垫、第一金标结合垫、第一硝酸纤维素膜和第一吸水垫，第一金标结合垫固相化有猫艾滋病毒单克隆抗体胶体金偶联物、羊抗鼠IgG 胶体金偶联物的组合物，第一硝酸纤维素膜包被有猫艾滋病毒单克隆抗体的检测线T1和羊抗鼠IgG抗体的质控线C1；

抗体试剂条包括底板、在底板上依次叠加的第二样品垫、第二金标结合垫、第二硝酸纤维素膜和第二吸水垫，第二金标结合垫固相化有猫艾滋抗原胶体金偶联物、羊抗鼠IgG胶体金偶联物的组合物，第二硝酸纤维素膜包被有猫艾滋病毒抗原的检测线T2和羊抗鼠IgG抗体的质控线C2。

本发明可对猫艾滋抗原抗体进行联检。其中猫艾滋抗原检测的原理为在该抗原试剂条上，第一金标结合垫上包被有猫艾滋抗体的紫红色物质，当样品中有相应的猫艾滋抗原时，会与第一金标结合垫上的猫艾滋抗体胶体金偶联物结合，形成猫艾滋抗原-猫艾滋抗体胶体金偶联物复合物，该抗原抗体复合物通过毛细效应在第一硝酸纤维素膜上向上迁移，并与包被在第一硝酸纤维素膜上的猫艾滋抗体发生结合反应，因此，检测线T1区域将出现一条紫红色的条带，表明结果阳性，反之，如果样品中不含猫艾滋抗原，那么在检测线T1区域不会出现紫红色的条带，表明结果为阴性。在质控线C1区域始终会出现一条紫红色条带，质控线C1 区域内所显现的紫红色条带是判定是否有足够样品、层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂条的内控标准。猫艾滋抗体的检测原理与猫艾滋抗原检测的原理相近，在抗体试剂条上，第二金标结合垫上包被有猫艾滋抗原的紫红色物质，当样品中有相应的猫艾滋抗体时，会与第二金标结合垫上的猫艾滋抗原胶体金偶联物结合，形成猫艾滋抗体-猫艾滋抗原胶体金偶联物复合物，该抗原抗体复合物与包被在硝酸纤维素膜上的猫艾滋抗原发生结合反应，因此，检测线T2为紫红色时，表明结果阳性；反之，如果样品中不含猫艾滋抗体，那么在检测线 T2不会出现紫红色。

作为优选，所述第一样品垫和第二样品垫由玻璃纤维膜或聚酯纤维膜经处理液喷洒后烘干得到，处理液包括8-15g/L Tris、5-10g/L BSA、9-18g/L酪蛋白、4-8g/L季酮酸、2-10g/L Tween 20、5-15g/L聚乙烯吡咯烷酮、0.3-1g/L改性红细胞凝集素及0.01-0.02％Proclin300，处理液的pH为7.5-8.5。

除抗原抗体联检外，对检测结果能做到清晰判读也是提高猫艾滋检测的准确率极其重要的一环。本发明将改性红细胞凝集素处理到第一样品垫和第二样品垫里，当猫全血样品滴加到第一样品垫和第二样品垫的样品区中时，样品垫中的改性红细胞凝集素能捕获猫红细胞，将其截留在样品垫上，避免了猫红细胞直接冲板造成硝酸纤维素膜的膜面变红，使得检测线和质控线变色程度无法清晰判辨的问题。

作为优选，所述改性红细胞凝集素由如下步骤制备得到：

A、将红细胞凝集素溶于溶剂中得到红细胞凝集素溶液；

B、向红细胞凝集素溶液加入N-羟基琥珀酰亚胺酯，15-35℃下搅拌反应1-2h即可。

猫正常的红细胞体积仅为39-52fL，相比于体积为80-100fL的人红细胞、66-69fL的兔红细胞以及60-74fL的犬红细胞，猫红细胞体积较小不易被样品垫截留。使用N-羟基琥珀酰亚胺酯可将红细胞凝集素连接起来，进而增大猫红细胞形成凝集物的体积，使得其无法通过样品垫纤维之间的空隙。

作为优选，所述红细胞凝集素为接骨木凝集素或怀槐凝集素。

与人红细胞表面的血型抗原决定簇结构不同，猫红细胞表面抗原包括N-羟乙酰神经氨酸(NeuGc)和N-乙酰神经氨酸(NeuAc)，其中猫的A型糖蛋白为[NeuGc]₂G_D3和 NeuAc-NeuGc-G_Ds，B型为[NeuAc]₂G_D3，AB型既有[NeuGc]₂G_D3、NeuAc-NeuGc-G_Ds，也有 [NeuAc]₂G_D3。因此，接骨木凝集素和怀槐凝集素对猫红细胞的凝集效果好。

作为优选，所述溶剂为MES缓冲液或PBS缓冲液。

作为优选，所述红细胞凝集素溶液的浓度为2-10mg/mL，N-羟基琥珀酰亚胺酯的加入量为红细胞凝集素质量的0.5-1％。

作为优选，所述第一金标结合垫由如下步骤制备得到：在94-96℃氯金酸水溶液中加入柠檬酸三钠水溶液，获得胶体金，保持94-96℃用K₂CO₃溶液调节获得的胶体金pH至6-10，再依次加入待标记猫艾滋病毒抗体、BSA、PEG20000，搅拌10-20min后降温，在2-8℃、9000-14000rpm的条件下离心10-20min，取沉淀物，稀释后处理在玻璃纤维膜上，冷冻干燥2-4h。

作为优选，所述第二金标结合垫由如下步骤制备得到：在94-96℃的氯金酸水溶液中加入柠檬酸三钠水溶液，获得胶体金，保持94-96℃用K₂CO₃溶液调节获得的胶体金pH至6-10，再依次加入待标记猫艾滋抗原、BSA、PEG20000，搅拌10-20min后降温，在2-8℃，9000-14000rpm条件下离心10-20min，取沉淀物，稀释后喷点于聚酯纤维膜，30-40℃干燥20-24h。

作为优选，所述试剂卡还包括用于固定底板的外壳，外壳包括上壳和下壳，上壳设有与第一样品垫对应的第一缓冲孔和第一样品孔、与第一硝酸纤维素膜对应的抗原观察窗口、与第二样品垫对应的第二缓冲孔和第二样品孔、与第二硝酸纤维素膜对应的抗体观察窗口。

本发明将缓冲液的滴加处和样品液的滴加处分开设置，使先滴加的样品液不易因为后滴加的缓冲液的冲击而溢出。

作为优选，第一缓冲孔、第一样品孔、抗原观察窗口、第二缓冲孔、第二样品孔及抗体观察窗口周边均呈“倒喇叭”口形状。

“倒喇叭”口形状一方面能够对所滴加的样品液和缓冲液起到较好的引流作用，将液体方向性的引导到试纸条表面；另一方面，当所加入的液滴来不及扩散的时候也能防止液体外溢，避免对周围环境造成污染，也避免了液滴外溢流失而造成检测结果不准确。

一种使用抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂条的猫艾滋检测方法，包括如下步骤：

1)分别在第一样品孔和第二样品孔中滴加20-25μL的血清、血浆或全血，然后将缓冲液分别滴加至第一缓冲孔和第二缓冲孔中，静置10-15min；

2)通过抗原观察窗口和抗体观察窗口观察检测结果。

本发明的试剂卡的检测方法采用了猫艾滋抗原抗体联检的双读数窗口，其检测过程中样品液与缓冲液分开加样，检测过程中样品液先分别通过第一样品孔、第二样品孔加到第一样品垫和第二样品垫的样品区中，预先与第一金标结合垫、第二金标结合垫中胶体金偶联物充分结合，然后将缓冲液通过第一缓冲孔、第二缓冲孔加到第一样品垫和第二样品垫的缓冲液区中辅助免疫层析进行，这种双窗口加样区的设置能提高产品性能，不仅可避免样品液因缓冲液的冲击而溢出，同时也防止样品液因量太少在样品垫和金标结合垫上过多扩散而无法充分跑板到硝酸纤维素膜上，造成硝酸纤维素膜层析不彻底，最终导致检测结果不准确。

作为优选，所述步骤1)中缓冲液的pH为7.3-7.5，缓冲液包括4-10g/L磷酸氢二钠、6-10g/L氯化钠、3-7g/L酪蛋白钠盐及0.01-0.02％的液体生物防腐剂。

作为优选，第一缓冲孔和第二缓冲孔中缓冲液的滴加体积各为0.1-0.15mL。

因此，本发明具有以下有益效果：(1)提供了一种猫艾滋抗原和抗体双联检试剂，通过抗原和抗体的联合使用大大提高了临床上猫艾滋病的检出率，并且通过抗原和抗体的检测结果可辅助诊断艾滋病感染猫咪的发病阶段；(2)该检测试纸条的样品垫中预先添加了能有效凝集猫红细胞的成分，能够在样品垫中捕获猫全血样品中的猫红细胞，使之不会进入金标结合垫，避免出现观察窗口中的膜面变红影响结果判读的情况；(3)本发明采用了双窗口双孔加样试剂模式，先在样品区加入样品液，随后在缓冲液区加入缓冲液，分开加样，不会出现样品被冲跑或溢出的情况，检测灵敏度更高。

附图说明

图1为本发明试剂条结构示意图，其中1-样本信息记录区，2-抗原观察窗口，3-抗体观察窗口，4-第一加样孔，5-第二加样孔，6-第一缓冲孔，7-第二缓冲孔。

具体实施方式

下面结合附图与具体实施方法对本发明做进一步的描述。

实施例1

一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡，其结构如图1所示，包括上壳、下壳、位于上壳和下壳之间PVC底板以及并排粘贴在底板上的抗原试剂条和抗体试剂条；抗原试剂条包括第一样品垫、第一金标结合垫、第一硝酸纤维素膜以及第一吸水垫，第一样品垫设有样品区和缓冲液区，第一硝酸纤维素膜位于底板中间段，第一硝酸纤维素膜两端分别搭接有第一金标结合垫和第一吸水垫的一端，第一金标结合垫和第一吸水垫的另一端底侧分别与底板连接，第一金标结合垫与底板连接一端的上侧与第一样品垫一端底侧搭接，第一样品垫另一端底侧与底板连接，第一硝酸纤维素膜的非搭接段从金标结合垫一侧开始依次设有包被猫艾滋病毒单克隆抗体的检测线T1和包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C1；抗体试剂条包括第二样品垫、第二金标结合垫、第二硝酸纤维素膜以及第二吸水垫，第二样品垫设有样品区和缓冲液区，第二硝酸纤维素膜位于底板中间段，第二硝酸纤维素膜两端分别搭接有第二金标结合垫和第二吸水垫的一端，第二金标结合垫和第二吸水垫的另一端底侧分别与底板连接，第二金标结合垫与底板连接一端的上侧与第二样品垫一端底侧搭接，第二样品垫另一端底侧与底板连接，第二硝酸纤维素膜的非搭接段从金标结合垫一侧开始依次设有包被猫艾滋抗原的检测线T2和包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C2；所述上壳上侧设有与第一样品垫的缓冲液区位置对应的第一缓冲孔6、与第一样品垫的样品区位置对应的第一加样孔4、与第一硝酸纤维素膜上检测线T1和质控线C1对应的抗原观察窗口2、与第二样品垫的缓冲液区位置对应的第二缓冲孔7、与第二样品垫的样品区位置对应的第二加样孔5、与第二硝酸纤维素膜上检测线T2和质控线C2对应的抗体观察窗口3，抗原观察窗口和抗体观察窗口之上还设有样本信息记录区1；第一缓冲孔6、第一加样孔4、第二缓冲孔7、第二加样孔5、抗原观察窗口2和抗体观察窗口3周边均呈“倒喇叭”口形状；第一缓冲孔6和第二缓冲孔7为椭圆形状，第一加样孔4和第二加样孔5为矩形状，抗原观察窗口2和抗体观察窗口3呈长条矩形状。

试剂卡由如下步骤制备得到：

1)第一样品垫和第二样品垫的制备：取12g/L Tris、10g/L BSA、15g/L酪蛋白、8g/L季酮酸、5g/L Tween 20、10g/L PVP 10、0.7g/L改性红细胞凝集素及0.02％Proclin300溶解于纯化水中，调节pH为8.0，喷洒在Millpore 8964#玻璃纤维膜上，37℃烘干12h；改性红细胞凝集素由接骨木凝集素溶于1x PBS中得到浓度为2g/L的红细胞凝集素溶液，再加入质量为接骨木凝集素0.5％的N-羟基琥珀酰亚胺酯，在室温下搅拌反应2h得到；

2)第一金标结合垫制备：整个过程在95℃恒温加热系统中进行，在0.01％氯金酸水溶液中加入1％柠檬酸三钠水溶液，获得胶体金，用1％K₂CO₃溶液调节获得的胶体金pH至8，依次加入待标记猫艾滋病毒抗体、BSA、PEG20000，混合后猫艾滋病毒抗体的浓度为20μg/mL， BSA的质量分数为10％，PEG20000的质量分数为10％，搅拌10min后，5℃、11000rpm离心15min，取沉淀物，稀释至OD1.5后处理在8964#玻璃纤维膜上，-50℃下干燥2h；

3)第二金标结合垫制备：整个过程在95℃恒温加热系统中进行，在0.01％氯金酸水溶液中加入1％柠檬酸三钠水溶液，获得胶体金，用1％K₂CO₃溶液调节获得的胶体金pH至8，依次加入猫艾滋抗原、BSA、PEG20000，混合后猫艾滋抗原的浓度为18μg/mL，BSA的质量分数为10％，PEG20000的质量分数为10％，搅拌10min后，5℃、11000rpm离心15min，取沉淀物，稀释至OD40后处理在1#聚酯膜上，37℃干燥22h；

3)第一硝酸纤维素膜和第二硝酸纤维素膜的制备：将猫艾滋病毒单克隆抗体用1xPBS稀释至浓度为0.8mg/mL，按0.8μL/cm喷量喷点在硝酸纤维素膜上得到检测线T1，将羊抗鼠IgG 抗体用1x PBS稀释至浓度为1.5mg/mL，按0.8μL/cm喷量喷点在硝酸纤维素膜上得到质控线C1，55℃烘干2h制得第一硝酸纤维素膜；将猫艾滋抗原用1x PBS稀释至浓度为1.8mg/mL，按0.8μL/cm喷量喷点在硝酸纤维素膜上得到检测线T2，将羊抗鼠IgG抗体用1xPBS稀释至浓度为1.5mg/mL，按0.8μL/cm喷量喷点在硝酸纤维素膜上得到质控线C2，37℃烘干12h 制得第二硝酸纤维素膜；

4)抗原试剂条和抗体试剂条的制备：将第一样品垫、第一金标结合垫、第一硝酸纤维素膜、第一吸水垫依次按顺序在PVC底板上进行连接组装、切割，即得抗原试剂条；将第二样品垫、第二金标结合垫、第二硝酸纤维素膜、第二吸水垫依次按顺序在PVC底板上进行连接组装、切割，即得抗体试剂条。

一种使用抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡的检测猫艾滋的方法： 1)将抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡放置在水平桌面，向第一加样孔和第二加样孔上各滴加25μL待检样品，然后向第一缓冲孔和第二缓冲孔上各滴加3滴缓冲液，静置10min，通过抗原观察窗口和抗体观察窗口观察测试结果；

缓冲液的制备过程为将7g/L磷酸氢二钠、8g/L氯化钠、5g/L酪蛋白钠盐及0.02％的液体生物防腐剂混合于水溶液中，调节混合液最终至pH＝7.4；

检测结果按如下步骤判定：观察质控线C1、C2，若C1、C2有一条不显紫红色则取新的试剂卡重新检测，若均为紫红色条带，则观察检测线T1、T2，在检测线T1、T2任意一处出现紫红色条带，则为阳性结果；在检测线T1、T2处均没有出现紫红色条带，则为阴性结果。

使用实施例1所得试纸卡分别检测经确认的猫艾滋抗原阴性全血样本(Ct＝0)、猫艾滋抗原阳性全血样本(Ct＝27.4)、猫艾滋抗体阴性全血样本(-)、猫艾滋抗体阳性全血样本 (++)、猫艾滋病毒培养液(1.57*10⁷TCID₅₀)和猫艾滋抗体(0.1μg/mL)，检测结果如表1所示。

表1.实施例1所得试纸卡的检测结果

由检测结果可知，本发明试纸卡可有效检出患猫艾滋的猫的血液样本，对猫艾滋的感染不同阶段能做到及时诊断不遗漏，从而提高临床上的检出率，并且试纸卡的样品垫有良好的凝集猫红细胞的效果，使猫红细胞不会进入抗原观察窗口和抗体观察窗口。

对比例1

与实施例1的不同之处在于，试剂卡第一样品垫和第二样品垫的制备过程为：取12g/L Tris、 10g/L BSA、15g/L酪蛋白、8g/L季酮酸、5g/L Tween 20、10g/L PVP 10及0.02％Proclin300 溶解于纯化水中，调节pH为8.0，喷洒在玻璃纤维膜上，37℃烘干12h。

使用对比例1所得试纸卡分别检测经确认的猫艾滋抗原阴性全血样本(Ct＝0)、猫艾滋抗原阳性全血样本(Ct＝27.4)、猫艾滋抗体阴性全血样本(-)、猫艾滋抗体阳性全血样本 (++)、猫艾滋病毒培养液(1.57*10⁷TCID₅₀)和猫艾滋抗体(0.1μg/mL)，检测结果如表2所示。

表2.对比例1所得试纸卡的检测结果

由表2可知，样品垫中缺少红细胞凝集素时，猫红细胞会污染观察窗口膜面，影响使用者肉眼对检测线颜色的判断，进而影响检测结果。

对比例2

第一样品垫和第二样品垫的制备：取12g/L Tris、10g/L BSA、15g/L酪蛋白、8g/L季酮酸、 5g/L Tween 20、10g/L PVP 10、0.7g/L大豆凝集素及0.02％Proclin300溶解于纯化水中，调节 pH为8.0，喷洒在玻璃纤维膜上，37℃烘干12h。

将猫全血样本滴加至对比例2所得试纸卡进行检测，在滴加缓冲液并静置了10min后，可看到观察窗口的膜面出现了浅红色，这表明添加了大豆凝集素的样品垫对猫红细胞的拦截效果较改性红细胞凝集素差。

Claims

1.一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡，其特征是，所述试剂卡包括底板、以及粘贴在底板上的抗原试剂条和抗体试剂条；

抗原试剂条包括依次叠加的第一样品垫、第一金标结合垫、第一硝酸纤维素膜和第一吸水垫，第一金标结合垫固相化有猫艾滋病毒单克隆抗体胶体金偶联物、羊抗鼠IgG胶体金偶联物的组合物，第一硝酸纤维素膜包被有猫艾滋病毒单克隆抗体的检测线T1和羊抗鼠IgG抗体的质控线C1；

抗体试剂条包括依次叠加的第二样品垫、第二金标结合垫、第二硝酸纤维素膜和第二吸水垫，第二金标结合垫固相化有猫艾滋抗原胶体金偶联物、羊抗鼠IgG胶体金偶联物的组合物，第二硝酸纤维素膜包被有猫艾滋病毒抗原的检测线T2和羊抗鼠IgG抗体的质控线C2；

所述第一样品垫和第二样品垫由玻璃纤维膜或聚酯纤维膜经处理液喷洒后烘干得到，处理液包括8-15 g/L Tris、5-10 g/L BSA、9-18 g/L酪蛋白、4-8 g/L季酮酸、2-10 g/LTween 20、5-15 g/L聚乙烯吡咯烷酮、0.3-1g/L改性红细胞凝集素及0.01-0.02%Proclin300，处理液的pH为7.5-8.5；

所述改性红细胞凝集素由如下步骤制备得到：

A、将红细胞凝集素溶于溶剂中得到红细胞凝集素溶液；

B、向红细胞凝集素溶液加入N-羟基琥珀酰亚胺酯，15-35℃下搅拌反应1-2h即可；

所述红细胞凝集素为接骨木凝集素或怀槐凝集素。

2.根据权利要求1所述的一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡，其特征是，所述红细胞凝集素溶液的浓度为2-10mg/mL，N-羟基琥珀酰亚胺酯的加入量为红细胞凝集素质量的0.5-1%。

3. 根据权利要求1所述的一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡，其特征是，所述第一金标结合垫由如下步骤制备得到：在94-96℃氯金酸水溶液中加入柠檬酸三钠水溶液，获得胶体金，保持94-96℃用K₂CO₃溶液调节获得的胶体金pH至6-10，再依次加入待标记猫艾滋病毒抗体、BSA、PEG20000，搅拌10-20 min后降温，在2-8℃、9000-14000rpm的条件下离心10-20min，取沉淀物，稀释后处理在玻璃纤维膜上，冷冻干燥2-4h。

4. 根据权利要求1所述的一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡，其特征是，所述第二金标结合垫由如下步骤制备得到：在94-96℃的氯金酸水溶液中加入柠檬酸三钠水溶液，获得胶体金，保持94-96℃用K₂CO₃溶液调节获得的胶体金pH至6-10，再依次加入待标记猫艾滋抗原、BSA、PEG20000，搅拌10-20 min后降温，在2-8℃，9000-14000rpm条件下离心10-20min，取沉淀物，稀释后喷点于聚酯纤维膜，30-40℃干燥20-24h。

5.根据权利要求1所述的一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡，其特征是，所述试剂卡还包括用于固定底板的外壳，外壳包括上壳和下壳，上壳设有与第一样品垫对应的第一缓冲孔和第一样品孔、与第一硝酸纤维素膜对应的抗原观察窗口、与第二样品垫对应的第二缓冲孔和第二样品孔、与第二硝酸纤维素膜对应的抗体观察窗口。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡，其特征是，所述猫艾滋检测试剂卡的使用方法包括如下步骤：

1）分别在第一样品孔和第二样品孔中滴加20-25μL的血清、血浆或全血，然后将缓冲液分别滴加至第一缓冲孔和第二缓冲孔中，静置10-15min；

2）通过抗原观察窗口和抗体观察窗口观察检测结果。

7. 根据权利要求6所述的一种抗原抗体联检的可凝集猫红细胞的猫艾滋检测试剂卡，其特征是，所述1）中缓冲液的pH为7.3-7.5，缓冲液包括4-10g/L磷酸氢二钠、6-10g/L氯化钠、3-7 g/L酪蛋白钠盐及0.01-0.02%的液体生物防腐剂。