CN212646713U - 一种新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本实用新型涉及一种新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒,包括用于检测非血液样本的新型冠状病毒N蛋白检测试纸条、用于检测血液样本的新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条及卡壳;所述卡壳包括相互底槽和上盖,所述新型冠状病毒N蛋白检测试纸条和新型冠状病毒IgM检测试纸条分别设置在所述底槽上;所述上盖在对应新型冠状病毒N蛋白检测试纸条和新型冠状病毒IgM检测试纸条的位置分别设置有加样孔。本实用新型所提供的新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒能够同时进行新型冠状病毒N蛋白和新型冠状病毒IgM检测,操作简单,适用于基层医疗机构。
Description
技术领域
本实用新型属于体外诊断领域,涉及一种可同时检测新型冠状病毒N蛋白和新型冠状病毒IgM抗体的新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒。
背景技术
目前已审批的新型冠状病毒核酸检测试剂均基于核酸检测方式,单个样品采用核酸荧光PCR法需要3个小时给出检测结果,采用核酸测序法需要6个小时给出检测结果,更重要的是由于基因扩增对实验室环境要求极高导致检测通量称为最大制约因素,是极大制约了新型冠状病毒快速检测服务的供给能力,不足以全面满足疫情防控需要。为了满足疫情防控需要,提升便捷程度,提高检测准确度,实现疑似患者的快速诊断和密切接触人群的现场筛查,开发能够进行抗原、抗体快速检测的试剂盒显得尤为重要。
实用新型内容
有鉴于此,本实用新型的主要目的在于提供一种新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒。
为了实现上述目的,本实用新型提供了如下技术方案:
一种新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒,包括用于检测非血液样本的新型冠状病毒 N蛋白检测试纸条、用于检测血液样本的新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条及卡壳;所述卡壳包括相互卡合的底槽和上盖,
所述新型冠状病毒N蛋白检测试纸条和新型冠状病毒IgM检测试纸条分别设置在所述底槽上;
所述上盖在对应新型冠状病毒N蛋白检测试纸条和新型冠状病毒IgM检测试纸条的位置分别设置有加样孔。
在本实用新型的一个具体方案中,其中所述非血液样本选自鼻拭子、咽拭子、空腔拭子、痰液、唾液或肺泡灌洗液。
在本实用新型的一个具体方案中,其中所述血液样本为血清、血浆或全血。
在本实用新型的一个具体方案中,其中所述新型冠状病毒N蛋白检测试纸条和新型冠状病毒IgM检测试纸条均包括PVC板,所述PVC板上固定有依次连接的样品垫、标记物垫、包被垫及吸水垫;
所述包被垫靠近检测线的一端连接有标记物垫,靠近质控线的一端连接有吸水垫;
所述包被垫上依次设有检测线及质控线,所述样品垫和标记物垫连接为一体。
在本实用新型的一个具体方案中,其中所述上盖对应所述新型冠状病毒N蛋白检测试纸条的样品垫和新型冠状病毒IgM检测试纸条的样品垫的位置分别设置有加样孔。
在本实用新型的一个具体方案中,其中所述上盖在对应所述新型冠状病毒N蛋白检测试纸条和新型冠状病毒IgM检测试纸条的检测线和质控线的位置分别设置有用于检测线和质控线数据采集的观察窗。
在本实用新型的一个具体方案中,其中所述新型冠状病毒N蛋白检测试纸条的检测线上包被有一株抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体;所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体;
所述标记物垫上包被有标记物标记的另一株抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体和标记物标记的兔IgG。
在本实用新型的一个具体方案中,其中所述新型冠状病毒IgM检测试纸条的检测线上包被有一株新型冠状病毒N蛋白;所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体;所述标记物垫上包被有标记物标记的一株鼠抗人新型冠状病毒IgM单克隆抗体和标记物标记的兔IgG。
在本实用新型的一个具体方案中,所述标记物选自荧光微球、胶体金、胶体硒、彩色乳胶或磁性微球。
本实用新型的有益效果为:
1、本实用新型所提供的新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒能够同时进行新型冠状病毒N蛋白和新型冠状病毒IgM检测,其中新型冠状病毒N蛋白检测试纸条能够进行鼻咽拭子、口咽拭子、肺泡灌洗液、口腔拭子、唾液等样本进行检测,新型冠状病毒IgM 检测试纸条能够进行血清、血浆、全血检测,检测速度快,配合荧光免疫层析仪使用,操作简单,适用于基层医疗机构。
2、本实用新型所提供的新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒能够改善PCR对仪器操作、人员、环境等的专业性要求限制,以及检测抗体无法在早期进行筛查的缺陷,能够加速疫情一线疑似病例筛查,快速进行确诊人员隔离,有效降低社会恐慌情绪。
附图说明
图1为本实用新型所提供的新型冠状病毒N蛋白检测试纸条或新型冠状病毒IgM检测试纸条的结构示意图;
图2A为本实用新型所提供的新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒中一种卡壳上盖的内部结构示意图;
图2B为本实用新型所提供的型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒中一种卡壳底槽的内部结构示意图;
1-第一包被垫,2-第一标记物垫,3-第一吸水垫,4-第一检测线,5-第一质控线,6-第一标记物结合处,7-第一样品垫,8-第二包被垫,9-第二标记物垫,10-第二吸水垫, 11-第二检测线,12-第二质控线,13-第二标记物结合处,14-第二样品垫,15-底槽,16- 上盖,17-新型冠状病毒N蛋白检测试纸条放置区域,18-新型冠状病毒IgM检测试纸条放置区域,19-第一限定部,20-第二限定部,21-第三限定部,22-第四限定部,23-第五限定部,24-第六限定部,25-第一加样孔,26-第二加样孔,27-第一观察窗,28-第二观察窗,29-定位柱,30-定位孔。
具体实施方式
为了进一步理解本实用新型,下面结合实施例对本实用新型优选实施方案进行描述,但是应当理解,这些描述只是为进一步说明本实用新型的特征和优点,而不是对本实用新型权利要求的限制。
以下材料或试剂,除非特别说明,均为市售。
实施例1新型冠状病毒N蛋白检测试纸条的制备
1、采用荧光微球标记另一株鼠抗冠状病毒N蛋白单克隆抗体
取0.5mL荧光微球加入1mg碳化二亚胺(EDC),1mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),于室温,120r/min的转速下搅拌3h,然后加入100μL另一株鼠抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体,于室温,120r/min的转速下搅拌1h,再加入10mg BSA封闭液,继续以120r/min的转速搅拌1h。在2~8℃下,按照12000r/min的转速离心20min,除去上清液。最后,用0.2M的磷酸盐缓冲液(pH=7.4)将离心后获得的固体沉淀物复溶至 1mL,再加入1μL的Proclin300在4℃下保存待用。
2、采用荧光微球标记兔IgG多克隆抗体
取0.5mL荧光微球加入1mg碳化二亚胺(EDC),1mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),于室温,120r/min的转速下搅拌3h,然后加入100μL mg羊兔IgG多克隆抗体,于室温,120r/min的转速下搅拌1h,再加入10mg BSA封闭液,继续以120r/min的转速搅拌1h。在2~8℃下,按照11000r/min的转速离心30min,除去上清液。最后,用 0.2M的磷酸盐缓冲液(pH=7.4)将固体沉淀物复溶至1mL,再加入1μL的Proclin300 在4℃下保存待用。
3、包被垫的制备
将一株鼠抗冠状病毒N蛋白单克隆抗体和羊抗兔多克隆抗体分别用0.2M的磷酸盐缓冲液(pH=7.4)稀释成1mg/mL,用划膜喷金仪在硝酸纤维素膜(NC膜)上进行划膜。含有一株鼠抗冠状病毒N蛋白单克隆抗体的作为第一检测线(T线)4,含有羊抗兔多克隆抗体的作为第一质控线(C线)5,然后在37℃,湿度<30%的环境下干燥4h 制成第一包被垫1。
4、标记物垫的制备
①将玻璃纤维素膜在0.2M的磷酸盐缓冲液(pH=7.4)中浸泡6h,然后在35℃下干燥8h,备用。
②将摩尔比为1:1的荧光微球标记的另一株鼠抗冠状病毒N蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的兔IgG标记的荧光乳胶微球混合均匀后,按照10μL/cm的速度喷涂在玻璃纤维素膜上,然后放置在45℃下干燥2h制成第二标记物垫2。第二标记物垫2上包被有荧光微球标记的另一株鼠抗冠状病毒N蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的兔IgG的地方叫做第一标记物结合处6。
设置第一标记物结合处6的目的在于:将待测样本滴加到第一样品垫7上,在第一吸水垫3的作用下,待测样本向前层析,在第一标记物结合处6待测样本中的新型冠状病毒N蛋白与标记物结合处包被的荧光微球标记的另一株鼠抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体反应,反应后的免疫复合物、未参加反应的荧光微球标记的另一株鼠抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体、兔IgG标记的乳胶荧光微球微随着样本继续层析,在检测线处反应后的免疫复合物与检测线包被的一株鼠抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体反应而停留在检测线,在质控线处兔IgG标记的乳胶荧光微球与质控线包被的羊抗兔多克隆抗体反应而停留在质控线,其他物质继续层析,最后通过荧光免疫层析仪分别采集检测线的荧光微球的信号(记作T)和质控线的荧光微球的信号(记作C),计算T/C值,通过与正常值范围判断阴阳性。另外当在紫外光照射下呈现出两条荧光条带时,即为阳性。
5、试纸条组装
首先在PVC板(图中未示出)上粘接第一包被垫1,然后在靠近第一包被垫1上的第一质控线5的一端搭接第一吸水垫3,在靠近第一包被垫1的第一检测线4的一端搭接第一标记物垫2及与其连接的第一样品垫7,用切条机切成4mm±0.1mm的试纸条(见图1),将试纸条放入卡壳中制备成新型冠状病毒N蛋白检测试纸条。
实施例2新型冠状病毒IgM检测试纸条的制备
1、采用荧光微球标记一株鼠抗人新型冠状病毒IgM单克隆抗体
取0.5mL荧光微球加入1mg碳化二亚胺(EDC),1mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),于室温,120r/min的转速下搅拌3h,然后加入100μL一株鼠抗人新型冠状病毒IgM 单克隆抗体,于室温,120r/min的转速下搅拌1h,再加入10mg BSA封闭液,继续以 120r/min的转速搅拌1h。在2~8℃下,按照12000r/min的转速离心20min,除去上清液。最后,用0.2M的磷酸盐缓冲液(pH=7.4)将离心后获得的固体沉淀物复溶至1mL,再加入1μL的Proclin300在4℃下保存待用。
2、采用荧光微球标记兔IgG多克隆抗体
取0.5mL荧光微球加入1mg碳化二亚胺(EDC),1mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),于室温,120r/min的转速下搅拌3h,然后加入100μL mg羊兔IgG多克隆抗体,于室温,120r/min的转速下搅拌1h,再加入10mg BSA封闭液,继续以120r/min的转速搅拌1h。在2~8℃下,按照11000r/min的转速离心30min,除去上清液。最后,用 0.2M的磷酸盐缓冲液(pH=7.4)将固体沉淀物复溶至1mL,再加入1μL的Proclin300 在4℃下保存待用。
3、包被垫的制备
将一株新型冠状病毒N蛋白和羊抗兔多克隆抗体分别用0.2M的磷酸盐缓冲液 (pH=7.4)稀释成1mg/mL,用划膜喷金仪在硝酸纤维素膜(NC膜)上进行划膜。含有一株新型冠状病毒N蛋白的作为第二检测线(T线)11,含有羊抗兔多克隆抗体的作为第二质控线(C线)12,然后在37℃,湿度<30%的环境下干燥4h制成第二包被垫8。
4、标记物垫的制备
①将玻璃纤维素膜在0.2M的磷酸盐缓冲液(pH=7.4)中浸泡6h,然后在35℃下干燥8h,备用。
②将摩尔比为1:1的荧光微球标记的一株鼠抗人新型冠状病毒IgM单克隆抗体和荧光微球标记的兔IgG标记的荧光乳胶微球混合均匀后,按照10μL/cm的速度喷涂在玻璃纤维素膜上,然后放置在45℃下干燥2h制成第二标记物垫9。第二标记物垫9上包被有荧光微球标记的一株鼠抗人新型冠状病毒IgM单克隆抗体和荧光微球标记的兔IgG的地方叫做第二标记物结合处13。
设置第二标记物结合处13的目的在于:将待测样本滴加到第二样品垫14上,在第二吸水垫10的作用下,待测样本向前层析,在第二标记物结合处13的待测样本中的新型冠状病毒IgM与标记物结合处包被的荧光微球标记的一株鼠抗人新型冠状病毒 IgM单克隆抗体反应,反应后的免疫复合物、未参加反应的荧光微球标记的一株鼠抗人新型冠状病毒IgM单克隆抗体、兔IgG标记的乳胶荧光微球微随着样本继续层析,在检测线处反应后的免疫复合物与检测线包被的一株鼠抗新型冠状病毒N蛋白反应而停留在检测线,在质控线处兔IgG标记的乳胶荧光微球与质控线包被的羊抗兔多克隆抗体反应而停留在质控线,其他物质继续层析,最后通过荧光免疫层析仪分别采集检测线的荧光微球的信号(记作T)和质控线的荧光微球的信号(记作C),计算T/C值,通过与正常值范围判断阴阳性。另外当在紫外光照射下呈现出两条荧光条带时,即为阳性。
5、试纸条组装
首先在PVC板(图中未示出)上粘接第二包被垫8,然后在靠近第二包被垫8上的第二质控线12的一端搭接第二吸水垫10,在靠近第二包被垫8的第二检测线11的一端搭接第二标记物垫9及与其连接的第二样品垫14,用切条机切成4mm±0.1mm的试纸条(见图1),将试纸条放入卡壳中制备成新型冠状病毒IgM检测试纸条。
实施例3新型冠状病毒联合检测试剂盒的组装
将实施例1中制备的新型冠状病毒N蛋白检测试纸条和实施例2制备的新型冠状病毒IgM检测试纸条插入到卡壳中制备成新型冠状病毒联合检测试剂盒。
所述卡壳(如图2所示)可以包括:底槽15,其连接于所述PVC板;上盖16,其连接于所述底槽15,
如图2B所示,所述底槽15包括:位于其内表面的对称分布的多个定位孔30,多个所述定位孔30之间设有多个用于限定新型冠状病毒N蛋白检测试纸条横向移动的第一限定部19以及用于限定试纸条纵向移动的第二限定部20;对称设置的所述第一限定部19与所述第二限定部20围设成新型冠状病毒N蛋白检测试纸条放置区域17(虚线区域),用于放置新型冠状病毒N蛋白检测试纸条;
多个所述定位孔30之间还设有多个用于限定新型冠状病毒IgM检测试纸条横向移动的第四限定部22以及用于限定试纸条纵向移动的第五限定部23;对称设置的所述第四限定部22与所述第五限定部23围设成新型冠状病毒IgM检测试纸条放置区域18(虚线区域),用于放置新型冠状病毒IgM检测试纸条;
如图2A所示,所述上盖16包括:与多个所述定位孔30相配合的多个定位柱29,这样配合使用以将上盖16和底槽15固定在一起;所述上盖16还包括用于限定新型冠状病毒N蛋白检测试纸条上下移动的第三限定部21和用于限定新型冠状病毒IgM检测试纸条上下移动的第六限定部24。
所述上盖16上设置有用于向所述新型冠状病毒N蛋白检测试纸条的第一样品垫7上加样的第一加样孔25和用于向新型冠状病毒IgM检测试纸条的第二样品垫14上加样的第二加样孔26;
第一观察窗27,其设置于上盖16上,用于新型冠状病毒N蛋白检测试纸条的第一包被垫1上的第一检测线4和第一质控线5的数据采集;第二观察窗28,其设置于上盖 16上,用于新型冠状病毒IgM检测试纸条的第二包被垫8上的第二检测线11和第二质控线12的数据采集;
所述第一观察窗27开设于所述上盖16上与新型冠状病毒N蛋白检测试纸条放置区域17的中部相对应的位置;所述第二观察窗28开设于所述上盖16上与新型冠状病毒 IgM检测试纸条放置区域18的中部相对应的位置。
所述上盖16在与所述新型冠状病毒N蛋白检测试纸条的第一样品垫7相对应的位置处开设有第一加样孔25;所述上盖16在与所述新型冠状病毒IgM检测试纸条的第二样品垫14相对应的位置处开设有第二加样孔26,以用于向新型冠状病毒N蛋白检测试纸条的第一样品垫7和新型冠状病毒IgM检测试纸条的第二样品垫14上分别滴加样本。所述检测线距离加样孔15-25mm。
4、检测
采用实施例3制备的新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒进行样本检测,其中新型冠状病毒N蛋白检测试纸条用于鼻拭子、咽拭子、空腔拭子、痰液、唾液或肺泡灌洗液样本检测;新型冠状病毒IgM检测试纸条用于全血、血清、血浆样本检测。
以咽拭子和血清样本检测为例。
将采集的咽拭子样本经样本保存液进行样本前处理,处理方式:在塑料软管中加入 0.5mL样本保存液,随后将采集样本后的棉棒浸在样本保存液中并搅拌。用手指挤压塑料软管外侧数次,使样本保存液充分浸透棉棒,然后拔出棉棒,绞出(即将棉棒上采集的样本混合到样本保存液中)的液体即为待测样本。随后取60μL处理好的待测样本滴加到新型冠状病毒N蛋白检测试纸条的第一样品垫的第一加样孔25处;
同时将采集的血清样本经样本稀释液进行样本前处理,处理方式:取100μL血清样本加入到0.5mL样本稀释液中进行稀释,混合均匀后的液体即为待测样本,取60μL 处理好的待测样本滴加到新型冠状病毒IgM检测试纸条的第二样品垫对应的的第二加样孔26处;
静置15min,然后将新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒插入荧光免疫层析分析仪进行检测,仪器自动计算出样本T/C值,通过与正常值范围判断阴阳性。另外当在紫外光照射下呈现出两条荧光条带时,即为阳性。通过对新型冠状病毒N蛋白和新型冠状病毒 IgM进行联合检测综合判断患者是否患有新型冠状病毒肺炎。
附:所需溶液配置
(1)磷酸缓冲溶液
(3)样本保存液
以上所述实施例仅是为充分说明本实用新型而所举的实施例,本实用新型的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本实用新型基础上所作的等同替代或变换,均在本实用新型的保护范围之内。本实用新型的保护范围以权利要求书为准。
Claims (9)
1.一种新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒,其特征在于,包括用于检测非血液样本的新型冠状病毒N蛋白检测试纸条、用于检测血液样本的新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条及卡壳;所述卡壳包括相互卡合的底槽和上盖,
所述新型冠状病毒N蛋白检测试纸条和新型冠状病毒IgM检测试纸条分别设置在所述底槽上;
所述上盖在对应新型冠状病毒N蛋白检测试纸条和新型冠状病毒IgM检测试纸条的位置分别设置有加样孔。
2.如权利要求1所述的新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒,其特征在于,所述非血液样本选自鼻拭子、咽拭子、空腔拭子、痰液、唾液或肺泡灌洗液。
3.如权利要求1所述的新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒,其特征在于,所述血液样本为血清、血浆或全血。
4.如权利要求1所述的新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒,其特征在于,所述新型冠状病毒N蛋白检测试纸条和新型冠状病毒IgM检测试纸条均包括PVC板,所述PVC板上固定有依次连接的样品垫、标记物垫、包被垫及吸水垫;
所述包被垫靠近检测线的一端连接有标记物垫,靠近质控线的一端连接有吸水垫;
所述包被垫上依次设有检测线及质控线,所述样品垫和标记物垫连接为一体。
5.如权利要求4所述的新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒,其特征在于,所述上盖对应所述新型冠状病毒N蛋白检测试纸条的样品垫和新型冠状病毒IgM检测试纸条的样品垫的位置分别设置有加样孔。
6.如权利要求4所述的新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒,其特征在于,所述上盖在对应所述新型冠状病毒N蛋白检测试纸条和新型冠状病毒IgM检测试纸条的检测线和质控线的位置分别设置有用于检测线和质控线数据采集的观察窗。
7.如权利要求4所述的新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒,其特征在于,所述新型冠状病毒N蛋白检测试纸条的检测线上包被有一株抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体;所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体;
所述标记物垫上包被有标记物标记的另一株抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体和标记物标记的兔IgG。
8.如权利要求4所述的新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒,其特征在于,所述新型冠状病毒IgM检测试纸条的检测线上包被有一株新型冠状病毒N蛋白;所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体;所述标记物垫上包被有标记物标记的一株鼠抗人新型冠状病毒IgM单克隆抗体和标记物标记的兔IgG。
9.如权利要求7或8所述的新型冠状病毒肺炎联合检测试剂盒,其特征在于,所述标记物选自荧光微球、胶体金、胶体硒、彩色乳胶或磁性微球。
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