CN116420621A - 一种促进墨兰根状茎芽分化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及农业领域的种苗繁育技术，具体地说，涉及一种促进墨兰根状茎芽分化方法，将墨兰中间繁殖体根状茎接种于根状茎芽分化培养基进行分化培养，所述的根状茎芽分化培养基含一种称为“烟素”的丁香醛，即3,5‑二甲氧基‑4‑羟基苯甲醛，在丁香醛与外源激素协同作用使墨兰根状茎内源激素含量的发生变化，从而促进根状茎芽的分化，提高墨兰根状茎植株再生的效率。本发明技术简单易操作，成本低，应用价值高。
Description
技术领域
本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种促进墨兰根状茎芽分化方法。
背景技术
兰花既可以做盆花，也可以做切花，其叶姿优美、花型奇特、花色高洁、花香素雅，深受各国人民喜爱，具有极高的观赏、经济和文化价值，是世界知名的高档花卉。我国是兰花栽培历史最悠久，原生种数量最多的国家。不同类型兰花的生态类型多样，组培快繁特性各异。附生兰中间繁殖体(Intermediate propagule)多为类原球茎，易工厂化繁殖；地生兰中间繁殖体为根状茎，不易工厂化繁殖。
种苗工厂化生产是我国优势种业领域，也是兰花产业的核心技术之一，直接影响兰花育种以及种苗生产的效益。兰花种苗工厂化繁殖始于大花蕙兰，且早在20世纪60年代就形成了“兰花工业”。但是，以墨兰为代表的国兰仍然是目前最难工厂化繁殖的兰花种类之一，迄今未能从根本上解决国兰根状茎芽分化难的问题，国兰根国兰种苗生产仍以分株繁殖为主，这严重制约了国兰产业化发展。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种促进墨兰根状茎芽分化方法。
本发明是通过以下技术方案实现：一种促进墨兰根状茎芽分化方法，将墨兰中间繁殖体根状茎接种于含有一种称为“烟素”的丁香醛(即3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲醛，其CAS号为134-96-3)根状茎芽分化培养基进行分化培养。
所述的根状茎芽分化培养基每升含有丁香醛10-50微摩尔、6-苄氨基嘌呤(6-BA)0.5-1.0毫克、1-萘乙酸(NAA)0.1-0.5毫克、蔗糖20-30克、琼脂粉5-7克，余量为MS培养基，pH值为5.4-6.0。
所述的丁香醛配制方法是：先用二甲基亚砜(DMSO)将丁香醛配制成浓度为10微摩尔升毫的母液，过滤灭菌后分装于无菌的1.5毫升塑料离心管(简称PE管)中，于-20℃冰箱保存备用。
所述根状茎分化培养基除丁香醛以外的成分经灭菌后于无菌操作台中添加经过滤灭菌的丁香醛。在一个实施例中，所述的丁香醛添加方法是：根状茎分化培养基其余成分经高温蒸汽灭菌，即121℃灭菌20分钟，待培养至冷却至50-60℃后于无菌操作台中添加经过滤灭菌的丁香醛。
所述的分化培养方式为：将墨兰根状茎接种在根状茎分化培养基中后，首先在培养温度为25～28℃进行全暗培养7-14天，然后转至培养温度为25-28℃，光照强度为2000-3000lx培养20-30天。
所述的墨兰根状茎是指墨兰品种‘企剑白墨墨兰’长度为1-1.5厘米、具有茎尖的根状茎。
本发明将丁香醛即3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲醛)应用于墨兰根状茎芽分化培养，能显著地促进墨兰根状茎芽的分化，提高墨兰根状茎植株再生的效率，初步解决国兰根状茎芽分化难的问题。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
所述的MS为国际通用的培养基，其成分和配制方法可参考文献(谭文澄、戴策刚主编.观赏植物组织培养技术.北京：中国林业出版社，1991)。
实施例1
将长度为1-1.5厘米、有茎尖的墨兰品种‘企剑白墨墨兰’根状茎分别接种在根状茎分化培养基A和B中，首先在培养温度为25℃进行全暗培养7天，然后转至培养温度为25℃，光照强度为2000lx培养条件下培养20天后，在根状茎分化培养基A培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎分化率达到73.5％，而在根状茎分化培养基B培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎不分化。其中，根状茎分化培养基A的培养基成分为MS+10μmol/L丁香醛+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+20g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.4；根状茎分化培养基B的培养基成分为MS+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+20g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.4。
实施例2
将长度为1-1.5厘米、具有茎尖的墨兰品种‘企剑白墨墨兰’根状茎分别接种在根状茎分化培养基C和D中，首先在培养温度为26℃进行全暗培养10天，然后转至培养温度为26℃，光照强度为2700lx培养条件下培养26天后，在根状茎分化培养基C中培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎分化率达到83.1％，而在根状茎分化培养基D中培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎分化率低于2％。其中，根状茎分化培养基C的培养基成分为MS+30μmol/L丁香醛+0.7mg/L6-BA+0.3mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.7；根状茎分化培养基C的培养基成分为MS+0.7mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.7。
实施例3
将长度为1-1.5厘米、具有茎尖的墨兰品种‘企剑白墨墨兰’根状茎分别接种在根状茎分化培养基E和F中，首先在培养温度为28℃进行全暗培养14天，然后转至培养温度为28℃，光照强度为3000lx培养条件下培养30天后，在根状茎分化培养基E中培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎分化率达到88.6％，而在根状茎分化培养基F中培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎分化率低于3％。其中，根状茎分化培养基E的培养基成分为MS+50μmol/L丁香醛+1.0mg/L6-BA+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH值为6.0；根状茎分化培养基F的培养基成分为MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH值为6.0。
对比例1
将长度为1-1.5厘米、有茎尖的墨兰品种‘企剑白墨墨兰’根状茎分别接种在根状茎分化培养基中，首先在培养温度为25℃进行全暗培养7天，然后转至培养温度为25℃，光照强度为2000lx培养条件下培养20天后，在根状茎分化培养基培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎分化率达到49.6％。其中，根状茎分化培养基A的培养基成分为MS+5μmol/L丁香醛+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+20g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.4。
对比例2
将长度为1-1.5厘米、有茎尖的墨兰品种‘企剑白墨墨兰’根状茎分别接种在根状茎分化培养基中，首先在培养温度为25℃进行全暗培养7天，然后转至培养温度为25℃，光照强度为2000lx培养条件下培养20天后，在根状茎分化培养基培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎分化率达到54.1％。其中，根状茎分化培养基A的培养基成分为MS+55μmol/L丁香醛+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+20g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.4。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种促进墨兰根状茎芽分化方法，将墨兰中间繁殖体根状茎接种于根状茎芽分化培养基进行分化培养，其特征在于，所述的芽分化培养基含有丁香醛。
2.根据权利要求1所述的一种促进墨兰根状茎芽分化方法，其特征在于，所述的根状茎芽分化培养基每升含有丁香醛10-50微摩尔、6-苄氨基嘌呤0.5-1.0毫克、萘乙酸0.1-0.5毫克、蔗糖20-30克、琼脂粉5-7克，余量为MS培养基，pH值为5.4-6.0。
3.根据权利要求1所述的一种促进墨兰根状茎芽分化方法，其特征在于，所述的丁香醛配制方法是：先用二甲基亚砜将丁香醛配制成浓度为10微摩尔升毫的母液，过滤灭菌后分装于无菌的1.5毫升塑料离心管中，于-20℃冰箱保存备用。
4.根据权利要求1所述的一种促进墨兰根状茎芽分化方法，其特征在于，所述根状茎分化培养基除丁香醛以外的成分经灭菌后于无菌操作台中添加经过滤灭菌的丁香醛。
5.根据权利要求4所述的一种促进墨兰根状茎芽分化方法，其特征在于，所述灭菌采用高温灭菌，即在121℃灭菌20分钟，此时待所述根状茎分化培养基冷却至50-60℃后再于无菌操作台中添加经过滤灭菌的丁香醛。
6.根据权利要求1所述的一种促进墨兰根状茎芽分化方法，其特征在于，所述的分化培养方式为：将墨兰根状茎接种在根状茎分化培养基中后，首先在培养温度为25～28℃进行全暗培养7-14天，然后转至培养温度为25-28℃，光照强度为2000-3000lx培养20-30天。
7.根据权利要求1所述的一种促进墨兰根状茎芽分化方法，其特征在于，所述的墨兰根状茎是指墨兰品种‘企剑白墨墨兰’长度为1-1.5厘米、具有茎尖的根状茎。
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