CN116369206A - 一种促进墨兰根状茎根分化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体地说，涉及一种促进墨兰根状茎根分化方法，将墨兰芽已分化的根状茎接种于根状茎根分化培养基进行生根培养，所述的根状茎根分化培养基含有一种小分子有机化合物，即3‑甲基‑3‑丁烯‑1‑醇。在Isoprenol、6‑苄氨基嘌呤和1‑萘乙酸协同作用下促进墨兰根状茎根的分化，初步解决了墨兰根状茎根难分化的问题，对推动国兰产业发展具有十分重要的应用意义。
Description
技术领域
本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种促进墨兰根状茎根分化方法。
背景技术
兰花既可以做盆花，也可以做切花，其叶姿优美、花型奇特、花色高洁、花香素雅，具有极高的观赏、经济和文化价值，是世界知名的高档花卉。商业化的兰花可分为大花蕙兰(一般由附生兰杂交产生)、杂交兰(由大花蕙兰和国兰杂交培育)和国兰(地生兰)三类。不同的兰花形态特征各异，组培快繁特性也各不相同，不同兰花组培快繁的难易对其产业的发展产生了重要影响。
根分化是组织培养快速繁殖中的一个关键阶段，直接影响到兰花组培快繁效率和试管苗的质量。很多兰花如墨兰等依然存在根难分化或不分化的问题，已成为其种苗工厂化繁殖的主要瓶颈。
发明内容
本发明的目的是克服墨兰根状茎根难分化的问题，提供一种促进墨兰根状茎芽分化方法。
本发明是通过以下技术方案实现：一种促进墨兰根状茎根分化方法，将墨兰根状茎接种于根状茎根分化培养基中进行生根培养，所述的根状茎根分化培养基含有3-甲基-3-丁烯-1-醇(Isoprenol，其CAS编号为763-32-6)。
所述的根状茎根分化培养基每升含有3-甲基-3-丁烯-1-醇5-10微摩尔、1-萘乙酸(NAA)1.0-2.0毫克、6-苄氨基嘌呤(6-BA)0.1-0.5毫克、蔗糖20-30克、琼脂粉5-7克，余量为1/2MS培养基，pH值为5.4-6.0。
所述根状茎分化培养基除3-甲基-3-丁烯-1-醇外的成分经灭菌后，再于无菌操作台中添加经过滤灭菌的3-甲基-3-丁烯-1-醇。本发明采用高温蒸汽灭菌，条件为121℃灭菌20分钟；待培养基冷却至70℃以下后于无菌操作台中添加经过滤灭菌的3-甲基-3-丁烯-1-醇。
所述的生根培养条件为：将墨兰根状茎接种在根状茎根分化培养基中后，首先在培养温度为25～28℃进行黑暗培养3-5天，然后转至培养温度为25-28℃，光照强度为2000-3000lx培养45-60天。
本发明的墨兰根状茎是指墨兰品种‘企剑白墨墨兰’芽已分化的根状茎。
萜类在自然界分布广泛、种类繁多大约有1万多种。萜类可保护植物细胞膜、产生多种内源激素、保护植物免受强光的伤害、萜类中的信号物质和化感物质在植物防御系统中起到关键作用。3-甲基-3-丁烯-1-醇(Isoprenol)在植物内相关酶的催化下可形成萜类化合物的通用前体物质焦磷酸异戊烯酯(IPP)，并进一步形成包括多种植物激素如赤霉素、油菜素内酯，脱落酸和独脚金内酯等在内萜类化合物。本发明在墨兰根状茎根分化培养基添加Isoprenol显著促进了根状茎根的分化，初步解决墨兰根状茎芽分化难的问题，对推动墨兰产业发展具有十分重要的应用意义。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
所述的MS为国际通用的培养基，其成分和配制方法可参考文献(谭文澄、戴策刚主编.观赏植物组织培养技术.北京：中国林业出版社，1991)；所述的1/2MS培养基是将MS基本培养基中的大量元素浓度减半，而其他成分浓度不变而形成的培养基。
实施例1
将芽已分化的墨兰品种‘企剑白墨墨兰’根状茎分别接种在根状茎根分化培养基A和B中，首先在培养温度为25℃进行黑暗培养3天，然后转至培养温度为25℃，光照强度为2000lx培养条件下培养45天后，在根状茎根分化培养基A培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎根分化率达到26.5％，而在根状茎根分化培养基B培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎根分化率低于5％。其中，根状茎分化培养基A的培养基成分为1/2MS+5μmol/L 3-甲基-3-丁烯-1-醇+0.1mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+20g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.4；根状茎根分化培养基B的培养基成分为1/2MS+0.1mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+20g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.4。
实施例2
将芽已分化的墨兰品种‘企剑白墨墨兰’根状茎分别接种在根状茎根分化培养基C和D中，首先在培养温度为27℃进行黑暗培养4天，然后转至培养温度为27℃，光照强度为2500lx培养条件下培养55天后，在根状茎根分化培养基C培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎根分化率达到38.1％，而在根状茎根分化培养基D培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎根分化率低于5％。其中，根状茎分化培养基C的培养基成分为1/2MS+7μmol/L 3-甲基-3-丁烯-1-醇+0.3mg/L 6-BA+1.5mg/L NAA+25g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH值为5.8；根状茎根分化培养基D的培养基成分为1/2MS+0.3mg/L 6-BA+1.5mg/L NAA+25g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH值为5.8。
实施例3
将芽已分化的墨兰品种‘企剑白墨墨兰’根状茎分别接种在根状茎根分化培养基E和F中，首先在培养温度为28℃进行黑暗培养5天，然后转至培养温度为28℃，光照强度为3000lx培养条件下培养60天后，在根状茎根分化培养基E培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎根分化率达到46.7％，而在根状茎根分化培养基F培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎根分化率低于5％。其中，根状茎分化培养基E的培养基成分为1/2MS+10μmol/L 3-甲基-3-丁烯-1-醇+0.5mg/L 6-BA+2.0mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为6.0；根状茎根分化培养基F的培养基成分为1/2MS+0.5mg/L 6-BA+2.0mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为6.0。
对比例1
将芽已分化的墨兰品种‘企剑白墨墨兰’根状茎分别接种在根状茎根分化培养基中，首先在培养温度为25℃进行黑暗培养3天，然后转至培养温度为25℃，光照强度为2000lx培养条件下培养45天后，在根状茎根分化培养基培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎根分化率为9.8％。其中，根状茎分化培养基的培养基成分为1/2MS+1μmol/L 3-甲基-3-丁烯-1-醇+0.1mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+20g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.4。
对比例2
将芽已分化的墨兰品种‘企剑白墨墨兰’根状茎分别接种在根状茎根分化培养基中，首先在培养温度为25℃进行黑暗培养3天，然后转至培养温度为25℃，光照强度为2000lx培养条件下培养45天后，在根状茎根分化培养基培养的‘企剑白墨墨兰’根状茎根分化率为17.4％。其中，根状茎分化培养基的培养基成分为1/2MS+15μmol/L 3-甲基-3-丁烯-1-醇+0.1mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+20g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.4。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种促进墨兰根状茎根分化方法，将墨兰根状茎接种于根状茎根分化培养基中进行生根培养，其特征在于，所述的根状茎根分化培养基含有3-甲基-3-丁烯-1-醇。
2.根据权利要求1所述的一种促进墨兰根状茎根分化方法，其特征在于，所述的根状茎根分化培养基每升含有3-甲基-3-丁烯-1-醇5-10微摩尔、1-萘乙酸1.0-2.0毫克、6-苄氨基嘌呤0.1-0.5毫克、蔗糖20-30克、琼脂粉5-7克，余量为1/2MS培养基，pH值为5.4-6.0。
3.根据权利要求1所述的一种促进墨兰根状茎根分化方法，其特征在于，所述根状茎分化培养基除3-甲基-3-丁烯-1-醇外的成分经灭菌后，再于无菌操作台中添加经过滤灭菌的3-甲基-3-丁烯-1-醇。
4.根据权利要求1所述的一种促进墨兰根状茎根分化方法，其特征在于，所述的生根培养条件为：将墨兰根状茎接种在根状茎根分化培养基中后，首先在培养温度为25～28℃进行黑暗培养3-5天，然后转至培养温度为25-28℃，光照强度为2000-3000lx培养45-60天。
5.根据权利要求1所述的一种促进墨兰根状茎根分化方法，其特征在于，所述的墨兰根状茎是指墨兰品种‘企剑白墨墨兰’芽已分化的根状茎。
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