CN116410746A - 用于β-胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法 - Google Patents
用于β-胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116410746A CN116410746A CN202310345495.0A CN202310345495A CN116410746A CN 116410746 A CN116410746 A CN 116410746A CN 202310345495 A CN202310345495 A CN 202310345495A CN 116410746 A CN116410746 A CN 116410746A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fluorescent probe
- solution
- carotene
- beta
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 title claims abstract description 103
- OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N all-trans beta-carotene Natural products CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N 0.000 title claims abstract description 66
- 235000013734 beta-carotene Nutrition 0.000 title claims abstract description 66
- 239000011648 beta-carotene Substances 0.000 title claims abstract description 66
- TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N beta-carotene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=CCCCC2(C)C TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N 0.000 title claims abstract description 66
- 229960002747 betacarotene Drugs 0.000 title claims abstract description 66
- OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N β-Carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N 0.000 title claims abstract description 66
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 73
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 26
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims abstract description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims abstract description 13
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 claims abstract description 11
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- KQSABULTKYLFEV-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1,5-diamine Chemical compound C1=CC=C2C(N)=CC=CC2=C1N KQSABULTKYLFEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000001132 ultrasonic dispersion Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 13
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 12
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- -1 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 claims description 5
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 claims description 5
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 claims description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 5
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 claims description 4
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 claims description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 abstract description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 abstract description 4
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 abstract description 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 16
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 5
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 3
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 3
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UPYKUZBSLRQECL-UKMVMLAPSA-N Lycopene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1C(=C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=C)CCCC2(C)C UPYKUZBSLRQECL-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 2
- JEVVKJMRZMXFBT-XWDZUXABSA-N Lycophyll Natural products OC/C(=C/CC/C(=C\C=C\C(=C/C=C/C(=C\C=C\C=C(/C=C/C=C(\C=C\C=C(/CC/C=C(/CO)\C)\C)/C)\C)/C)\C)/C)/C JEVVKJMRZMXFBT-XWDZUXABSA-N 0.000 description 2
- 238000000026 X-ray photoelectron spectrum Methods 0.000 description 2
- ANVAOWXLWRTKGA-XHGAXZNDSA-N all-trans-alpha-carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1C(C)=CCCC1(C)C ANVAOWXLWRTKGA-XHGAXZNDSA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000000024 high-resolution transmission electron micrograph Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 235000012661 lycopene Nutrition 0.000 description 2
- 239000001751 lycopene Substances 0.000 description 2
- OAIJSZIZWZSQBC-GYZMGTAESA-N lycopene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)CCC=C(C)C OAIJSZIZWZSQBC-GYZMGTAESA-N 0.000 description 2
- 229960004999 lycopene Drugs 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-N peroxynitrous acid Chemical compound OON=O CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 2
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- ZCIHMQAPACOQHT-ZGMPDRQDSA-N trans-isorenieratene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/c1c(C)ccc(C)c1C)C=CC=C(/C)C=Cc2c(C)ccc(C)c2C ZCIHMQAPACOQHT-ZGMPDRQDSA-N 0.000 description 2
- PFTAWBLQPZVEMU-ZFWWWQNUSA-N (+)-epicatechin Natural products C1([C@@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N (-)-epicatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 1
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 description 1
- 238000004833 X-ray photoelectron spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000011795 alpha-carotene Substances 0.000 description 1
- 235000003903 alpha-carotene Nutrition 0.000 description 1
- ANVAOWXLWRTKGA-HLLMEWEMSA-N alpha-carotene Natural products C(=C\C=C\C=C(/C=C/C=C(\C=C\C=1C(C)(C)CCCC=1C)/C)\C)(\C=C\C=C(/C=C/[C@H]1C(C)=CCCC1(C)C)\C)/C ANVAOWXLWRTKGA-HLLMEWEMSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000010226 confocal imaging Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- LPTRNLNOHUVQMS-UHFFFAOYSA-N epicatechin Natural products Cc1cc(O)cc2OC(C(O)Cc12)c1ccc(O)c(O)c1 LPTRNLNOHUVQMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012734 epicatechin Nutrition 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 235000012680 lutein Nutrition 0.000 description 1
- 239000001656 lutein Substances 0.000 description 1
- 229960005375 lutein Drugs 0.000 description 1
- KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N lutein Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\[C@H]1C(C)=C[C@H](O)CC1(C)C KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N 0.000 description 1
- ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000011897 real-time detection Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N trans-lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000002371 ultraviolet--visible spectrum Methods 0.000 description 1
- FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N xanthophyll Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C=C(C)C(O)CC2(C)C FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
- C09K11/08—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing inorganic luminescent materials
- C09K11/65—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing inorganic luminescent materials containing carbon
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y20/00—Nanooptics, e.g. quantum optics or photonic crystals
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y40/00—Manufacture or treatment of nanostructures
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01B—NON-METALLIC ELEMENTS; COMPOUNDS THEREOF; METALLOIDS OR COMPOUNDS THEREOF NOT COVERED BY SUBCLASS C01C
- C01B32/00—Carbon; Compounds thereof
- C01B32/15—Nano-sized carbon materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Manufacturing & Machinery (AREA)
- Condensed Matter Physics & Semiconductors (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于β‑胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法，该包括以下步骤：1)将1,5‑萘二胺溶解在无水乙醇，向得到的混合液中加入硝酸，搅拌，超声分散，得到前驱液；2)将所述前驱液转移至反应釜中，加热下反应；3)反应结束后冷却至室温，产物离心，去沉淀，取上清液，通过柱层析纯化，用洗脱液洗脱收集目标产物，所得产物旋转干燥，得到所述荧光探针。本发明提供的荧光探针具有合成方法简单，生物相容性良好，细胞毒性小的优点，并可实现规模化生产；本发明的荧光探针能够实现β‑胡萝卜素浓度的高灵敏度检测，且该检测方法操作简便快捷；本发明提供的荧光探针还能够用于细胞内溶酶体的靶向成像以及斑马鱼成像。
Description
技术领域
本发明涉及纳米材料领域，特别涉及一种用于β-胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法。
背景技术
天然或膳食产品中存在的许多分子(类胡萝卜素、多酚低聚物和表儿茶素)可以作为过氧亚硝酸盐的清除剂和中和剂，尽管其体内过氧亚硝酸中和活性较低。由于类胡萝卜素物质对于人体的潜在有益效果，对类胡萝卜素的准确检测具有研究意义。人类和动物皮肤中有几种类胡萝卜素，包括α-胡萝卜素、β-胡萝卜素，叶黄素、番茄红素等，但其中最丰富的类胡萝卜素是β-胡萝卜素和番茄红素。用于检测β-胡萝卜素的金标准是高效液相色谱法(HPLC)。该技术的局限性在于成本高，因此，需要一种替代的分析方法，快速且具有高灵敏度和特异性。荧光分析方法由于其操作简单、原位、无损和实时检测模式，是生物小分子物质检测中的一种重要手段。因此，荧光分光光度法是检测β-胡萝卜素一种更为合适且经济的方法。所以，结合荧光分光光度法开发更多的β-胡萝卜素检测手段将具有重要意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种用于β-胡萝卜素检测的荧光探针、其制备方法及应用。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：提供一种用于β-胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
1)将1,5-萘二胺溶解在无水乙醇，向得到的混合液中加入硝酸，搅拌，超声分散，得到前驱液；
2)将所述前驱液转移至反应釜中，加热下反应；
3)反应结束后冷却至室温，产物离心，去沉淀，取上清液，通过柱层析纯化，用洗脱液洗脱收集目标产物，所得产物旋转干燥，得到所述荧光探针。
优选的是，所述的用于β-胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法包括以下步骤：
1)将1,5-萘二胺溶解在无水乙醇，向得到的混合液中加入硝酸，搅拌，超声分散5-20分钟，得到前驱液；
2)将所述前驱液转移至聚四氟乙烯为内衬的反应釜中，180-220℃反应1-4小时；
3)反应结束后冷却至室温，产物以8000-14000rpm/min离心2-10分钟，去沉淀，取上清液，通过柱层析纯化，用洗脱液洗脱收集目标产物，所得产物旋转干燥，得到所述荧光探针；所述洗脱液为二氯甲烷和甲醇的混合物。
优选的是，所述的用于β-胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法包括以下步骤：
1)将0.22g1,5-萘二胺溶解在30mL无水乙醇，向得到的混合液中加入500μL质量浓度为65％的浓硝酸，搅拌，超声分散10分钟，得到前驱液；
2)将所述前驱液转移至聚四氟乙烯为内衬的反应釜中，180-220℃反应1-4小时；
3)反应结束后冷却至室温，产物以10000rpm/min离心5分钟，去沉淀，取上清液，通过柱层析纯化，用洗脱液洗脱收集目标产物，所得产物旋转干燥，得到所述荧光探针；所述洗脱液为二氯甲烷和甲醇的混合物，且二氯甲烷：甲醇的体积比为100:1。
本发明还提供一种用于β-胡萝卜素检测的荧光探针，其通过如上所述的方法制备得到。
本发明还提供一种如上所述的荧光探针的应用，其用于β-胡萝卜素的检测。
优选的是，所述荧光探针用于β-胡萝卜素检测的方法包括以下步骤：
S1、利用由所述荧光探针配制的已知浓度的荧光探针溶液和已知浓度的β-胡萝卜素溶液构建用于β-胡萝卜素检测的标准曲线，该标准曲线能表征β-胡萝卜素的浓度与荧光强度之间的关系；
S2、对未知浓度的β-胡萝卜素样品溶液进行检测：
将所述荧光探针配制成已知浓度的荧光探针溶液，然后取已知体积的荧光探针溶液加入到已知体积的β-胡萝卜素样品溶液中，测定所得混合溶液在470nm激发波长下，590nm处的荧光强度，最后对照标准曲线，计算得到样品溶液中β-胡萝卜素的浓度。
优选的是，所述步骤S1具体为：
将所述荧光探针加入乙醇中，配制成已知浓度的荧光探针溶液，均分为若干份，按一定的浓度梯度向每份荧光探针溶液中分别加入不同浓度、等体积的β-胡萝卜素溶液，测试得到的每份混合溶液以及空白荧光探针溶液在470nm激发波长下，590nm处的荧光强度，混合溶液的荧光强度记为F，空白荧光探针溶液的荧光强度记为F0，将F/F0-1的值作为y轴，对应的β-胡萝卜素的浓度作为x轴，拟合得到标准曲线。
优选的是，所述步骤S2具体为：
将所述荧光探针配制成已知浓度的荧光探针溶液，测定该荧光探针溶液在470nm激发波长下，590nm处的荧光强度F0′；
然后取已知体积的荧光探针溶液加入到已知体积的β-胡萝卜素样品溶液中，测定所得混合溶液在470nm激发波长下，590nm处的荧光强度F′，计算F′/F0′-1的值，最后对照标准曲线，计算得到样品溶液中β-胡萝卜素的浓度。
本发明还提供一种如上所述的荧光探针的应用，其用于于斑马鱼的成像，具体方法为：
将所述荧光探针溶于DMSO中，得到荧光探针溶液，将该荧光探针溶液加入斑马鱼的培养液中，15-60分钟后吸出荧光探针溶液，更换新的培养液，将斑马鱼固定后用共聚焦显微镜进行成像。
本发明还提供一种如上所述的荧光探针的应用，其用于溶酶体的靶向成像，具体方法为：
将所述荧光探针溶于DMSO中，得到荧光探针溶液；
将细胞接种到玻璃底培养皿中，在37℃恒温培养箱中孵育24小时后，将培养皿中的培养基替换为含50μg/mL的荧光探针溶液的1640培养基，继续培养30min；用PBS清洗3次后，多聚甲醛固定15min，用PBS清洗3次后，使用共聚焦显微镜进行细胞内溶酶体的靶向成像。
本发明的有益效果是：
本发明提供的荧光探针具有合成方法简单，生物相容性良好，细胞毒性小的优点，并可实现规模化生产；β-胡萝卜素可以通过内滤效应引起本发明的荧光探针的荧光强度的变化，随着β-胡萝卜素的浓度升高，荧光探针的荧光强度显著下降，使得本发明的荧光探针能够实现β-胡萝卜素浓度的高灵敏度检测，且该检测方法操作简便快捷；
本发明提供的荧光探针还能够用于细胞内溶酶体的靶向成像以及斑马鱼成像。
附图说明
图1为实施例1制备的荧光探针(碳点)的TEM和HRTEM图像；
图2为实施例1制备的碳点的粒径分布直方图；
图3为实施例1制备的碳点的紫外-可见吸收光谱图；
图4为实施例1制备的碳点的荧光发射和吸收光谱；
图5为实施例1制备的碳点的红外图谱；
图6为实施例1制备的碳点的X射线光电子能谱；
图7为实施例1制备的碳点的细胞毒性测试结果；
图8为实施例1制备的碳点对不同浓度β-胡萝卜素的响应结果；
图9为实施例1制备的碳点的荧光强度与β-胡萝卜素浓度的线性关系；
图10为实施例1制备的碳点对HeLa细胞的溶酶体靶向成像结果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
下列实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法。下列实施例中所用的材料试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下列实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或者制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
本发明提供一种用于β-胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
1)将0.22g1,5-萘二胺溶解在30mL无水乙醇，向得到的混合液中加入500μL质量浓度为65％的浓硝酸，搅拌，超声分散10分钟，充分溶解得到前驱液；
2)将前驱液转移至聚四氟乙烯为内衬的反应釜中，200℃反应2小时；
3)反应结束后冷却至室温，产物以10000rpm/min离心5分钟，去沉淀，取上清液，通过柱层析纯化，用洗脱液洗脱收集目标产物(鲜艳的橙红色液体)，所得产物用旋转蒸发仪进行干燥，得到荧光探针(以下可称为碳点)；洗脱液为二氯甲烷和甲醇的混合物，且二氯甲烷：甲醇的体积比为100:1。荧光探针可溶解在无水乙醇或DMSO中，避光保存以备后续使用。
参照图1，为实施例1制备的荧光探针(碳点)的TEM(左图)和HRTEM图像(右图)，图2是碳点的粒径分布直方图。从图1可以看出，该碳点呈球形，分散性良好，具有0.21nm的晶格间距。随机测量多个碳点粒径，并绘制直方图，如图2，可以看出碳点粒径分布较均一，平均粒径约为3.10nm。
参照图3，为实施例1制备的碳点的紫外-可见吸收光谱图，从图中可以看出，在200-400nm处存在一个宽吸收峰，该吸收峰是由n-π*跃迁所导致。图4为荧光发射和吸收光谱，可以看出，碳点在470nm处有最佳吸收，最大发射为590nm。
参照图5，为实施例1制备的碳点的红外图谱，揭示了碳点的基团特征：位于3326和2985cm-1左右的特征吸收谱带是由于N-H和C-H基团的伸缩振动导致的；位于1605cm-1的吸收峰是由于C＝C键伸缩振动导致的；位于1732cm-1以及1038cm-1的峰是由于C和O之间的键的伸缩振动导致的，分别是C＝O和C-O。红外光谱表明合成的碳点表面具有N-H、C-H基团，此外还包含了醚键等特殊基团，表明了碳点的成功制备。
参照图6，为实施例1制备的碳点的X射线光电子能谱，得知碳点由四种元素组成，分别是碳元素、氧元素以及氮元素，它们所占的比例分别为51.83％、43.98％以及4.19％。X射线光电子能谱表明碳点的主要元素，也能证明碳点的成功制备。
参照图7，为实施例1制备的碳点的细胞毒性测试结果。碳点的细胞毒性的评估采用WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测的方法，在加入碳点浓度为0至60μg/mL的浓度时，细胞存活率均在80％以上。细胞毒性测试的结果表明，合成的碳点的毒性较低，生物相容性较好。
参照图8，为实施例1制备的碳点对不同浓度β-胡萝卜素的响应结果，图9为碳点的荧光强度与β-胡萝卜素浓度的线性关系。将不同浓度的β-胡萝卜素加入到碳点溶液中，由于β-胡萝卜素与碳点的竞争吸收激发光，导致碳点溶液的荧光强度下降。图8显示了碳点对不同浓度β-胡萝卜素的荧光响应，在500μg/mL的碳点乙醇溶液中，体系中加入β-胡萝卜素达到277.43μM时，碳点的荧光强度显著下降，荧光强度被抑制到空白组的30％。图9表明，β-胡萝卜素浓度在0-277.43μM区间，β-胡萝卜素浓度与碳点的荧光减弱呈线性关系，相关系数R2达到0.998，这表明该碳点能够应用于β-胡萝卜素的检测。
参照图10，为实施例1制备的碳点对HeLa细胞的溶酶体靶向成像结果。使用50μg/mL的O-CDs(即实施例1制备的碳点)对HeLa细胞孵育30min后，再分别使用Dapi和Lyso-Tracker Green对HeLa细胞进行孵育，用4％多聚甲醛固定后进行共聚焦成像；如图10Merged图像显示，O-CDs的荧光区域主要存在于细胞质部分，O-CDs与Lyso-TrackerGreen的荧光区域几乎完全重合，O-CDs对HeLa细胞溶酶体具有高度靶向性。因此，所制备的橙色碳点具备代替商业染料Lyso-Tracker Green进行溶酶体靶向的潜力。
实施例2
本实施例提供一种实施例1制备的的荧光探针的应用，其用于β-胡萝卜素的检测，具体包括以下步骤：
S1、利用由荧光探针配制的已知浓度的荧光探针溶液和已知浓度的β-胡萝卜素溶液构建用于β-胡萝卜素检测的标准曲线，该标准曲线能表征β-胡萝卜素的浓度与荧光强度之间的关系：
将荧光探针加入乙醇中，配制成浓度为500μg/mL的荧光探针溶液，均分为若干份，每份为3mL，按一定的浓度梯度向每份荧光探针溶液中分别加入不同浓度(1，2，3，9，39，48，57，66，84，114，149μg/mL)、体积均为5mL的β-胡萝卜素溶液，测试得到的每份混合溶液以及空白荧光探针溶液在470nm激发波长下，590nm处的荧光强度，混合溶液的荧光强度记为F，空白荧光探针溶液的荧光强度记为F0，将F/F0-1的值作为y轴，对应的β-胡萝卜素的浓度作为x轴，做出散点图，线性拟合，得到标准曲线，如图9。
S2、对未知浓度的β-胡萝卜素样品溶液进行检测：
将荧光探针加入乙醇中，配制成浓度为500μg/mL的荧光探针溶液；
在石英皿中加入3mL荧光探针溶液，测定该荧光探针溶液在470nm激发波长下，590nm处的荧光强度F0′；
向石英皿加入5mL待测的β-胡萝卜素样品溶液中，测定所得混合溶液在470nm激发波长下，590nm处的荧光强度F′，计算F′/F0′-1的值，最后对照标准曲线，计算得到样品溶液中β-胡萝卜素的浓度。
若以上步骤所测得的荧光强度高于标准曲线的范围，计算的F/F0-1的值为负值，则应适当稀释未知溶液的浓度再测；若以上步骤所测得的荧光强度低于标准曲线范围，F/F0-1的值过大，表明未知溶液的茶多酚浓度过低，超出本检测方法的限度。
实施例3
本实施例提供一种实施例1制备的的荧光探针的应用，其用于于斑马鱼的成像，具体方法为：
将荧光探针溶于DMSO中，得到荧光探针溶液，将该荧光探针溶液加入斑马鱼的培养液中，15-60分钟后吸出荧光探针溶液，更换新的培养液，将斑马鱼固定后用共聚焦显微镜进行成像。
实施例4
本实施例提供一种实施例1制备的的荧光探针的应用，其用于细胞内溶酶体的靶向成像，具体方法为：
将荧光探针溶于DMSO中，得到荧光探针溶液；
将细胞接种到35mm玻璃底培养皿中(每皿105个细胞)，在37℃恒温培养箱中孵育24小时后，培养皿中的培养基被50μg/mL O-CDs的1640培养基替换，继续培养30min。用PBS清洗3次后，细胞被4％多聚甲醛固定15min，用PBS清洗3次后，使用共聚焦显微镜进行细胞内溶酶体的靶向成像。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (10)
1.一种用于β-胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将1,5-萘二胺溶解在无水乙醇，向得到的混合液中加入硝酸，搅拌，超声分散，得到前驱液；
2)将所述前驱液转移至反应釜中，加热下反应；
3)反应结束后冷却至室温，产物离心，去沉淀，取上清液，通过柱层析纯化，用洗脱液洗脱收集目标产物，所得产物旋转干燥，得到所述荧光探针。
2.根据权利要求1所述的用于β-胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将1,5-萘二胺溶解在无水乙醇，向得到的混合液中加入硝酸，搅拌，超声分散5-20分钟，得到前驱液；
2)将所述前驱液转移至聚四氟乙烯为内衬的反应釜中，180-220℃反应1-4小时；
3)反应结束后冷却至室温，产物以8000-14000rpm/min离心2-10分钟，去沉淀，取上清液，通过柱层析纯化，用洗脱液洗脱收集目标产物，所得产物旋转干燥，得到所述荧光探针；所述洗脱液为二氯甲烷和甲醇的混合物。
3.根据权利要求2所述的用于β-胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将0.22g1,5-萘二胺溶解在30mL无水乙醇，向得到的混合液中加入500μL质量浓度为65％的浓硝酸，搅拌，超声分散10分钟，得到前驱液；
2)将所述前驱液转移至聚四氟乙烯为内衬的反应釜中，200℃反应2小时；
3)反应结束后冷却至室温，产物以10000rpm/min离心5分钟，去沉淀，取上清液，通过柱层析纯化，用洗脱液洗脱收集目标产物，所得产物旋转干燥，得到所述荧光探针；所述洗脱液为二氯甲烷和甲醇的混合物，且二氯甲烷：甲醇的体积比为100:1。
4.一种用于β-胡萝卜素检测的荧光探针，其特征在于，其通过如权利要求1-3中任意一项所述的方法制备得到。
5.一种如权利要求4所述的荧光探针的应用，其特征在于，其用于β-胡萝卜素的检测。
6.根据权利要求5所述的荧光探针的应用，其特征在于，所述荧光探针用于β-胡萝卜素检测的方法包括以下步骤：
S1、利用由所述荧光探针配制的已知浓度的荧光探针溶液和已知浓度的β-胡萝卜素溶液构建用于β-胡萝卜素检测的标准曲线，该标准曲线能表征β-胡萝卜素的浓度与荧光强度之间的关系；
S2、对未知浓度的β-胡萝卜素样品溶液进行检测：
将所述荧光探针配制成已知浓度的荧光探针溶液，然后取已知体积的荧光探针溶液加入到已知体积的β-胡萝卜素样品溶液中，测定所得混合溶液在470nm激发波长下，590nm处的荧光强度，最后对照标准曲线，计算得到样品溶液中β-胡萝卜素的浓度。
7.根据权利要求6所述的荧光探针的应用，其特征在于，所述步骤S1具体为：
将所述荧光探针加入乙醇中，配制成已知浓度的荧光探针溶液，均分为若干份，按一定的浓度梯度向每份荧光探针溶液中分别加入不同浓度、等体积的β-胡萝卜素溶液，测试得到的每份混合溶液以及空白荧光探针溶液在470nm激发波长下，590nm处的荧光强度，混合溶液的荧光强度记为F，空白荧光探针溶液的荧光强度记为F0，将F/F0-1的值作为y轴，对应的β-胡萝卜素的浓度作为x轴，拟合得到标准曲线。
8.根据权利要求7所述的荧光探针的应用，其特征在于，所述步骤S2具体为：
将所述荧光探针配制成已知浓度的荧光探针溶液，测定该荧光探针溶液在470nm激发波长下，590nm处的荧光强度F0′；
然后取已知体积的荧光探针溶液加入到已知体积的β-胡萝卜素样品溶液中，测定所得混合溶液在470nm激发波长下，590nm处的荧光强度F′，计算F′/F0′-1的值，最后对照标准曲线，计算得到样品溶液中β-胡萝卜素的浓度。
9.一种如权利要求4所述的荧光探针的应用，其特征在于，其用于于斑马鱼的成像，具体方法为：
将所述荧光探针溶于DMSO中，得到荧光探针溶液，将该荧光探针溶液加入斑马鱼的培养液中，15-60分钟后吸出荧光探针溶液，更换新的培养液，将斑马鱼固定后用共聚焦显微镜进行成像。
10.一种如权利要求4所述的荧光探针的应用，其特征在于，其用于溶酶体的靶向成像，具体方法为：
将所述荧光探针溶于DMSO中，得到荧光探针溶液；
将细胞接种到玻璃底培养皿中，在37℃恒温培养箱中孵育24小时后，将培养皿中的培养基替换为含50μg/mL的荧光探针溶液的1640培养基，继续培养30min；用PBS清洗3次后，多聚甲醛固定15min，用PBS清洗3次后，使用共聚焦显微镜进行细胞内溶酶体的靶向成像。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310345495.0A CN116410746B (zh) | 2023-04-03 | 2023-04-03 | 用于β-胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310345495.0A CN116410746B (zh) | 2023-04-03 | 2023-04-03 | 用于β-胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116410746A true CN116410746A (zh) | 2023-07-11 |
| CN116410746B CN116410746B (zh) | 2024-03-22 |
Family
ID=87055908
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310345495.0A Active CN116410746B (zh) | 2023-04-03 | 2023-04-03 | 用于β-胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116410746B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103756675A (zh) * | 2014-01-17 | 2014-04-30 | 西安亚博生物技术有限公司 | 一种掺氮碳量子点及其制备方法和应用 |
| CN109504375A (zh) * | 2018-12-12 | 2019-03-22 | 北京工业大学 | 一种高色质荧光碳纳米点的制备及调控方法 |
| CN111748344A (zh) * | 2020-07-20 | 2020-10-09 | 西南大学 | 全色荧光碳点的合成方法及其产品和应用 |
| CN114426845A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-05-03 | 辽宁大学 | 一种荧光碳量子点基探针及其在检测有机溶剂中水含量的应用 |
| CN115015187A (zh) * | 2021-09-28 | 2022-09-06 | 昆明理工大学 | 硫氮掺杂疏水性碳点用于β-胡萝卜素荧光探针检测方法 |
| CN115125000A (zh) * | 2022-07-06 | 2022-09-30 | 重庆国科医创科技发展有限公司 | 红光发射碳量子点的制备方法及该碳量子点的应用 |
-
2023
- 2023-04-03 CN CN202310345495.0A patent/CN116410746B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103756675A (zh) * | 2014-01-17 | 2014-04-30 | 西安亚博生物技术有限公司 | 一种掺氮碳量子点及其制备方法和应用 |
| CN109504375A (zh) * | 2018-12-12 | 2019-03-22 | 北京工业大学 | 一种高色质荧光碳纳米点的制备及调控方法 |
| CN111748344A (zh) * | 2020-07-20 | 2020-10-09 | 西南大学 | 全色荧光碳点的合成方法及其产品和应用 |
| CN115015187A (zh) * | 2021-09-28 | 2022-09-06 | 昆明理工大学 | 硫氮掺杂疏水性碳点用于β-胡萝卜素荧光探针检测方法 |
| CN114426845A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-05-03 | 辽宁大学 | 一种荧光碳量子点基探针及其在检测有机溶剂中水含量的应用 |
| CN115125000A (zh) * | 2022-07-06 | 2022-09-30 | 重庆国科医创科技发展有限公司 | 红光发射碳量子点的制备方法及该碳量子点的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116410746B (zh) | 2024-03-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hu et al. | A strong blue fluorescent nanoprobe based on Mg/N co-doped carbon dots coupled with molecularly imprinted polymer for ultrasensitive and highly selective detection of tetracycline in animal-derived foods | |
| Han et al. | Key factors in FTIR spectroscopic analysis of DNA: the sampling technique, pretreatment temperature and sample concentration | |
| Kong et al. | Carbon dots for fluorescent detection of α-glucosidase activity using enzyme activated inner filter effect and its application to anti-diabetic drug discovery | |
| Wang et al. | A Hydrogen‐Bonded‐Supramolecular‐Polymer‐Based Nanoprobe for Ratiometric Oxygen Sensing in Living Cells | |
| CN107389636B (zh) | 一种可检测内源性谷胱甘肽的荧光传感器的制备及应用 | |
| CN113563876B (zh) | 一种增强型黄光碳点及其制备方法和应用 | |
| CN112745837B (zh) | 碳量子点及其应用 | |
| CN109395079B (zh) | 一种多功能纳米探针及其制备方法和应用 | |
| CN110408389A (zh) | 一种碳量子点及其制备方法和应用 | |
| CN110272734A (zh) | 一种用于no检测的高量子产率碳量子点制备方法及其应用 | |
| Xu et al. | Hydrothermal synthesis of polyethylenimine-protected high luminescent Pt-nanoclusters and their application to the detection of nitroimidazoles | |
| CN110511751B (zh) | 一种可调谐双发射荧光碳点、制备方法及应用 | |
| CN115125000B (zh) | 红光发射碳量子点的制备方法及该碳量子点的应用 | |
| CN114456806B (zh) | 可识别钯离子的近红外荧光纳米探针及其制备方法和应用 | |
| CN108069413B (zh) | 一种制备红绿光双发射碳点的方法及应用 | |
| CN113201336A (zh) | 基于氮磷掺杂碳量子点的制备方法及其在柠檬黄快速检测中的应用 | |
| CN110702655B (zh) | 一种荧光传感器及其制备方法和应用 | |
| Tian et al. | Preparation of sulphuric acid-mediated N, S-codoped red emissive carbon dots: Applications in food dyes detection, solid-state luminescence and cell imaging | |
| CN116410746B (zh) | 用于β-胡萝卜素检测的荧光探针的制备方法 | |
| CN108822833A (zh) | 双发光的硅纳米粒子/金纳米簇复合物比率荧光探针及其制备方法和应用 | |
| CN110372681B (zh) | 一种用于选择性检测人血清白蛋白的自组装纳米荧光探针的应用 | |
| CN107056827A (zh) | 一种基于bodipy类单线态氧荧光探针 | |
| CN110713829A (zh) | 橙光碳点的制备及其对Fe3+的检测 | |
| CN113943572B (zh) | 一种用于真菌检测的荧光素碳点染色试剂、染色方法和应用 | |
| CN109432420B (zh) | 一种纳米颗粒的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |