CN116333945A

CN116333945A - 一种抗幽门螺杆菌的鼠李糖乳酪杆菌puk09及其应用、产品及方法

Info

Publication number: CN116333945A
Application number: CN202310532704.2A
Authority: CN
Inventors: 薛洋; 何巧林
Original assignee: Chengdu Hairuo Health Technology Co ltd
Current assignee: Chengdu Hairuo Health Technology Co ltd
Priority date: 2023-05-12
Filing date: 2023-05-12
Publication date: 2023-06-27
Anticipated expiration: 2043-05-12
Also published as: CN116333945B

Abstract

本发明“一种抗幽门螺杆菌的鼠李糖乳酪杆菌PUK09及其应用、产品及方法”属于微生物技术领域。本发明的鼠李糖乳酪杆菌菌株PUK09的保藏编号为CGMCC NO.26374。本发明还提供菌株PUK09在体外抑制副流感嗜血杆菌、幽门螺杆菌等有害菌和/或制备抑菌产品和/或制备抗幽门螺杆菌感染药物方面的用途。本发明发现的鼠李糖乳酪杆菌PUK09抗菌新用途可全面、高效地拮抗产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌、小肠结肠炎耶氏菌、幽门螺杆菌，并具备制备抗幽门螺杆菌感染药物的应用价值。

Description

一种抗幽门螺杆菌的鼠李糖乳酪杆菌PUK09及其应用、产品及方法

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一种抗幽门螺杆菌的鼠李糖乳酪杆菌PUK09及其应用、产品及方法。

背景技术

鼠李糖乳酪杆菌，又称鼠李糖乳杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus），多存在于人和动物的肠道内，细菌分类学属于乳杆菌属，鼠李糖亚种，是厌氧耐酸、不产芽孢的一种革兰氏阳性益生菌。

幽门螺杆菌是一种定植于胃肠粘膜的革兰氏阴性菌株，幽门螺杆菌产生的尿素酶可以很好的提升幽门螺杆菌周围环境中的pH值，并以这种方式抵抗胃部酸性环境。目前临床上主要是三联抗生素/四联抗生素+铋剂疗法，虽然治疗方式可多种选择，但治疗未果的案例也越来越多。多联抗生素的使用导致耐药性的幽门螺杆菌增多，同时抗生素的使用导致肠道菌群失调，胃肠道功能紊乱等不利影响。

鼠李糖乳杆菌拮抗幽门螺杆菌的报道也多有出现，但都比较单一。尚未见到在鼠李糖乳杆菌可同时抑制产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌、小肠结肠炎耶氏菌、幽门螺杆菌等有害菌的报道。

发明内容

出于本领域现有技术的上述不足和需求，本发明目的在于提供一株具有高活性、宽抑菌谱的鼠李糖乳酪杆菌PUK09及其应用，该鼠李糖乳酪杆菌PUK09可有效抑制幽门螺杆菌的生长并显著缓解幽门螺杆菌感染。

本发明的技术方案如下：

一种抗幽门螺杆菌的鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09，其特征在于，其保藏编号为CGMCC NO.26374。

保藏编号为CGMCC NO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09在体外抑菌和/或制备抑菌产品和/或制备抗幽门螺杆菌感染药物方面的用途，其特征在于，所述抑菌指：抑制产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌、小肠结肠炎耶氏菌、幽门螺杆菌中的任意一种或两种或三种以上。

抗幽门螺杆菌感染指：抑制幽门螺杆菌、和/或，抑制幽门螺杆菌尿素酶活性、和/或，抑制幽门螺杆菌黏附AGS人胃腺癌细胞、和/或，改善幽门螺杆菌引起的炎症；

优选地，改善幽门螺杆菌引起的炎症指：降低幽门螺杆菌升高的促炎因子水平；

优选地，所述幽门螺杆菌选自：幽门螺杆菌SS1和/或幽门螺杆菌ATCC43504。

菌株PUK09抑制产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌、小肠结肠炎耶氏菌；

优选地，浓度1×10⁸CFU/mL的菌株PUK09抑制浓度1×10⁸CFU/mL-1×10⁹CFU/mL的幽门螺杆菌的抑菌圈直径为23.5mm-34mm；

优选地，浓度1×10⁸CFU/mL的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的产肠毒素大肠杆菌的抑菌圈直径为30mm；

优选地，浓度1×10⁸CFU/mL的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的空肠弯曲杆菌的抑菌圈直径为28.5mm；

优选地，浓度1×10⁸CFU/mL的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的阪崎肠杆菌的抑菌圈直径为20.5mm；

优选地，浓度1×10⁸CFU/mL的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的绿脓杆菌的抑菌圈直径为22mm；

优选地，浓度1×10⁸CFU/mL的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的副猪嗜血杆菌的抑菌圈直径为17.5mm；

优选地，浓度1×10⁸CFU/mL的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的小肠结肠炎耶氏菌的抑菌圈直径为15.5mm；

优选地，浓度1×10⁸CFU/mL的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的产气荚膜梭菌的抑菌圈直径为38mm；

优选地，浓度1×10⁸CFU/mL的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的艰难梭菌的抑菌圈直径为27.5mm；

优选地，所述促炎因子选自由IL-1β、IL-8、TNF-α组成的组。

一种抑菌产品，包括：抑菌活性成分；抑菌活性成分包括：保藏编号为CGMCCNO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09。

所述的一种抑菌产品，还包括：辅料。

一种抗幽门螺杆菌感染药物，包括：药效活性成分；药效活性成分包括：保藏编号为CGMCC NO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09。

所述的一种抗幽门螺杆菌感染药物，还包括：药学上可接受的辅料。

一种体外抑菌方法，采用保藏编号为CGMCC NO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09抑菌。

所述抑菌指：抑制产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌、小肠结肠炎耶氏菌、幽门螺杆菌中的任意一种或两种或三种以上；

优选地，浓度1×10⁸CFU/mL的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的艰难梭菌的抑菌圈直径为27.5mm。

本发明筛选得到一株抑菌性能优秀、活性较高的鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09，其保藏编号为CGMCC NO.26374。该鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09能显著抑制包括产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌、小肠结肠炎耶氏菌、幽门螺杆菌在内的多种有害菌，同时兼具高效抗幽门螺杆菌感染的性能。本发明经实验证实，本发明的鼠李糖乳酪杆菌PUK09具有极高的AGS细胞黏附能力（图1），可有效降低幽门螺杆菌尿素酶活性、降低幽门螺杆菌对AGS细胞的黏附率，同时可通过降低炎症因子水平来显著缓解幽门螺杆菌导致的炎症，起到治疗或改善幽门螺杆菌感染的作用。

本发明的鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09的保藏信息如下：

菌株名称：PUK09；

保藏号：CGMCC NO.26374；

分类命名：鼠李糖乳酪杆菌Lacticaseibacillus rhamnosus；

保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；

保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；

保藏日期：2023年01月03号。

附图说明

图1为本发明实验例7的鼠李糖乳酪杆菌对AGS细胞的黏附率。

图2为本发明实验例8的鼠李糖乳酪杆菌PUK09抑制幽门螺杆菌黏附AGS人胃腺癌细胞。

具体实施方式

下面结合具体实施例和实验例对本发明的详细内容做进一步具体描述，但并不以此限制本发明的保护范围。

生物材料来源

AGS细胞购自武汉大学培养物保藏中心；

幽门螺杆菌H.pylori（ATCC43504）、幽门螺杆菌H.pylori SS1、产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌和小肠结肠炎耶氏菌购自广东微生物菌种保藏中心；副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌来自ATCC。鼠李糖乳杆菌LGG菌株可以商购获得。

本文中的“以上”、“以下”都包括本数。

本文中的PUK09菌株、菌株PUK09、鼠李糖乳酪杆菌PUK09、PUK09、鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09、鼠李糖乳酪杆菌菌株PUK09均指：保藏编号为CGMCC NO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09。

第1组实施例、本发明的PUK09菌株

本组实施例提供一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09，其保藏编号为CGMCC NO.26374。

任何培养、扩繁、发酵、富集、生产、制备、使用、接种、扩增、转化、修饰、改造、销售、许诺销售保藏编号为CGMCC NO.26374的一株鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09的行为，和/或，将保藏编号为CGMCC NO.26374的一株鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09与其他益生菌联用的行为，和/或，用保藏编号为CGMCC NO.26374的一株鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09抑制产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌、小肠结肠炎耶氏菌、幽门螺杆菌等致病菌的抑制作用、和/或黏附AGS细胞、和/或抑幽门螺杆菌黏附、和/或调节胃部炎症、和/或制备抗幽门螺杆菌产品的行为均落在本发明的保护范围。

所述其他益生菌包括但不限于：植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、德氏乳杆菌乳酸亚种、瑞士乳杆菌、干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、约氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、酿酒酵母属、德尔布有孢圆酵母属、假丝酵母属、威克汉姆酵母属、毕赤酵母属、布拉氏酵母属、白球拟酵母属、薛瓦酵母属、深红酵母属、粟酒裂殖酵母属、鲍氏酵母属、苏云金芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、固氮芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、丁酸梭状芽孢杆菌、青春双歧杆菌、角双歧杆菌、动物双歧杆菌、星状双歧杆菌、两歧双歧杆菌、牛双歧杆菌、短双歧杆菌、齿双歧杆菌、婴儿双歧杆菌（即，长双歧杆菌婴儿亚种）、乳双歧杆菌（即，动物双歧乳亚种）、长双歧杆菌、假小链双歧杆菌以及嗜热双歧杆菌和嗜酸热双歧杆菌。

本领域技术人员可根据实际生产需要，结合药品领域生产工艺的常规技术手段或基本常识（例如，《制剂技术百科全书》、《药物制剂技术》等），对药用辅料进行常规选择或调整，进而将保藏编号为CGMCC NO.26374的一株鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09制成不同剂型、不同存储条件、不同保质期的产品，这对于本领域技术人员而言无技术障碍，是可以并容易做到的。

第2组实施例、本发明的PUK09菌株的用途

本组实施例提供保藏编号为CGMCC NO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09在体外抑菌和/或制备抑菌产品和/或制备抗幽门螺杆菌感染药物方面的用途。本组所有的实施例都具备如下共同特征：所述抑菌指：抑制产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌、小肠结肠炎耶氏菌、幽门螺杆菌中的任意一种或两种或三种以上。

在具体的实施例中，抗幽门螺杆菌感染指：抑制幽门螺杆菌、和/或，抑制幽门螺杆菌尿素酶活性、和/或，抑制幽门螺杆菌黏附AGS人胃腺癌细胞、和/或，改善幽门螺杆菌引起的炎症；

在一些实施例中，菌株PUK09抑制产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌、小肠结肠炎耶氏菌；

优选地，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁸CFU/mL-1×10⁹CFU/mL的幽门螺杆菌的抑菌圈直径为23.5mm-34mm；

优选地，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的产肠毒素大肠杆菌的抑菌圈直径为30mm；

优选地，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的空肠弯曲杆菌的抑菌圈直径为28.5mm；

优选地，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的阪崎肠杆菌的抑菌圈直径为20.5mm；

优选地，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的绿脓杆菌的抑菌圈直径为22mm；

优选地，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的副猪嗜血杆菌的抑菌圈直径为17.5mm；

优选地，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的小肠结肠炎耶氏菌的抑菌圈直径为15.5mm；

优选地，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的产气荚膜梭菌的抑菌圈直径为38mm；

优选地，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的艰难梭菌的抑菌圈直径为27.5mm。

优选地，所述促炎因子选自由IL-1β、IL-8、TNF-α组成的组。

在一些实施例中，抗幽门螺杆菌感染药物以CCTCC NO: M 2023093的鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09为抗幽门螺杆菌药效活性成分。

第3组实施例、本发明的抑菌产品

本组实施例提供一种抑菌产品。本组所有的实施例都具备如下共同特征：所述一种抑菌产品包括：抑菌活性成分；抑菌活性成分包括：保藏编号为CGMCC NO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09。

在进一步的实施例中，所述的一种抑菌产品，还包括：辅料。

在具体的实施例中，所述辅料选自：溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂等。

根据本发明的内容，出于实际生产应用中的不同需求，再结合制剂制备领域的常规技术手段（例如，《制剂技术百科全书》、《药物制剂技术》等），本领域技术人员可对上述药用辅料进行选择和调配，并将CCTCC NO: M 2023093的鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09制成不同的剂型，例如粉剂、片剂、注射剂、口服液等。

第4组实施例、本发明的抗幽门螺杆菌感染药物

本组实施例提供一种抗幽门螺杆菌感染药物。本组所有的实施例都具备如下共同特征：所述一种抗幽门螺杆菌感染药物包括：药效活性成分；药效活性成分包括：保藏编号为CGMCC NO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09。

在进一步的实施例中，所述的一种抗幽门螺杆菌感染药物，还包括：药学上可接受的辅料。

在具体的实施例中，所述药学上可接受的辅料选自：溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂等。

根据本发明的内容，出于实际生产应用中的不同需求，再结合药物制备领域的常规技术手段（例如，《制剂技术百科全书》、《药物制剂技术》等），本领域技术人员可对上述药用辅料进行选择和调配，并将CCTCC NO: M 2023093的鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09制成不同的剂型，例如粉剂、片剂、注射剂、口服液、栓剂、凝胶剂、敷贴剂、喷雾剂、洗剂、颗粒剂等。

在具体的实施例中，所述药物的剂型选自：粉剂、片剂、液体剂、胶囊剂中的一种或一种以上。

第5组实施例、本发明的体外抑菌方法

本组实施例提供一种体外抑菌方法。本组所有的实施例都具备如下共同特征：采用保藏编号为CGMCC NO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09抑菌。

在具体的实施例中，所述抑菌指：抑制产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌、小肠结肠炎耶氏菌、幽门螺杆菌中的任意一种或两种或三种以上；

本发明实验例中所用培养基和试剂如下：

MRS培养基：蛋白胨10g/L、牛肉浸粉5g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖20g/L、无水乙酸钠5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、吐温-80 1g/L、K₂HPO₄2g/L、MgSO₄0.2g/L、MnSO₄0.05g/L，pH=6.80±0.20，121℃，灭菌20min；

L-MRS培养基：葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，牛肉浸粉5g/L，酵母浸粉5g/L，无水乙酸钠5g/L，吐温-80 1g/L，柠檬酸氢二铵2g/L，七水硫酸镁0.58g/L，一水硫酸锰0.19g/L，L-半胱氨酸盐酸盐1g/L；pH=6.80±0.20，121℃，灭菌20min;

哥伦比亚血琼脂培养基：脑心浸液粉9.6g/L，哥伦比亚琼脂23.4g/L，蒸馏水780mL，40mL脱纤维羊血；pH=7.40±0.20，121℃，灭菌20min；

幽门螺杆菌选择性培养基：䏡蛋白胨10.0g/L、牛脑浸出粉10.0g/L、牛心浸出粉9.0g/L、氯化钠5.0g/L、葡萄糖2.0g/L、磷酸氢二钠2.5g/L；5-7mL脱纤维羊血；HP抑制剂（含萘啶酮酸1mg/L、TMP 0.5mg/L、万古霉素0.3mg/L、两性霉素B 0.2mg/L）；

BHI血琼脂培养基、强化梭菌培养基（RCM）：购自海博生物科技有限公司；

PBS缓冲液：十二水磷酸氢二钠3.5g/L，磷酸二氢钾0.24g/L，氯化钠8g/L，氯化钾0.2g/L；pH=7.40±0.20，121℃，灭菌20min；

鼠李糖乳酪杆菌PUK09菌株培养：菌株从-80℃取出，按照2%（体积分数）的接种量种L-MRS或改良MRS液体培养基中，37℃静置培养，得到一代鼠李糖乳酪杆菌PUK09菌液；再按2%（体积分数）的接种量于的L-MRS液体培养基中，37℃静置培养16h，得到二代鼠李糖乳酪杆菌PUK09菌液备用；

鼠李糖乳酪杆菌PUK09菌悬液制备：将培养好的鼠李糖乳酪杆菌菌液离心，10000r/min，1min，倒出上清液，用等体积PBS洗涤两次菌体后，用同体积的PBS重悬，得到鼠李糖乳酪杆菌菌悬液备用；

鼠李糖乳酪杆菌PUK09上清液的制备：将培养好的鼠李糖乳酪杆菌菌液离心，10000r/min，1min，倒出上清液，用0.22μm微孔滤膜过滤除菌体，得到鼠李糖乳酪杆菌无菌体上清液，备用；

致病菌的培养及相关菌悬液制备：

幽门螺杆菌菌株培养：将指示菌幽门螺杆菌（ATCC43504）和幽门螺杆菌悉尼株SS1接种于哥伦比亚血琼脂培养基平板，在37℃三气培养箱（5％氧气、10％二氧化碳、85％氮气）培养72～96h，得到幽门螺旋杆菌血平板；

幽门螺杆菌（ATCC43504）和幽门螺杆菌悉尼株SS1悬液制备：收集幽门螺杆菌（ATCC43504）和幽门螺杆菌悉尼株SS1菌体，用PBS缓冲液洗2次，用BHI重悬调节菌体浓度为1×10⁷CFU/mL，得到幽门螺杆菌（ATCC43504）和幽门螺杆菌悉尼株SS1菌悬液。

产气荚膜梭菌菌株培养：将指示菌产气荚膜梭菌接种在TSC厌氧管中，在37℃厌氧过夜培养，得到产气荚膜梭菌菌液。

产气荚膜梭菌菌悬液制备：收集产气荚膜梭菌菌体，用PBS缓冲液洗2次，调节菌体浓度为1×10⁷CFU/mL，得到产气荚膜梭菌菌悬液。

艰难梭菌菌株培养：将指示菌艰难梭菌接种在强化梭菌培养基（RCM）中，在37℃过夜，得到艰难梭菌菌液。

艰难梭菌菌悬液制备：收集艰难梭菌菌体，用PBS缓冲液洗2次，调节菌体浓度为1×10⁷CFU/mL，得到艰梭菌菌悬液。

产肠毒素大肠杆菌菌株培养：将指示菌产肠毒素大肠杆菌接种在LB培养基中，在37℃过夜培养，得到产肠毒素大肠杆菌菌液。

产肠毒素大肠杆菌菌悬液制备：收集产肠毒素大肠杆菌菌体，用PBS缓冲液洗2次，调节菌体浓度为1×10⁷CFU/mL，得到产肠毒素大肠杆菌悬液。

空肠弯曲杆菌菌株培养：将指示菌空肠弯曲杆菌接种在布氏琼脂培养基中，在37℃过夜培养，得到空肠弯曲杆菌菌菌体。

空肠弯曲杆菌菌悬液制备：收集空肠弯曲杆菌菌体，用PBS缓冲液洗2次，调节菌体浓度为1×10⁷CFU/mL，得到空肠弯曲杆菌悬液。

阪崎肠杆菌菌株培养：将指示菌阪崎肠杆菌接种在普通肉汤培养基中，在37℃过夜培养，得到阪崎肠杆菌菌液。

阪崎肠杆菌菌悬液制备：收集阪崎肠杆菌菌体，用PBS缓冲液洗2次，调节菌体浓度为1×10⁷CFU/mL，得到阪崎肠杆菌菌悬液。

绿脓杆菌菌株培养：将指示菌绿脓杆菌接种在普通肉汤培养基中，在37℃过夜培养，得到绿脓杆菌菌液。

绿脓杆菌菌悬液制备：收集绿脓杆菌菌体，用PBS缓冲液洗2次，调节菌体浓度为1×10⁷CFU/mL，得到绿脓杆菌悬液。

副流感嗜血杆菌菌株培养：将指示菌副流感嗜血杆菌接种在HAE培养基中，在37℃过夜培养，得到副流感嗜血杆菌菌液。

副流感嗜血杆菌菌悬液制备：收集副流感嗜血杆菌菌体，用PBS缓冲液洗2次，调节菌体浓度为1×10⁷CFU/mL，得到副流感嗜血杆菌菌悬液。

副猪嗜血杆菌菌株培养：将指示菌副流感嗜血杆菌接种在2.5% NAD（1%辅酶I）、5%血清TSA琼脂培养基中，在37℃过夜培养，得到副流感嗜血杆菌。

副猪嗜血杆菌菌悬液制备：收集副猪嗜血杆菌菌体，用PBS缓冲液洗2次，调节菌体浓度为1×10⁷CFU/mL，得到副猪嗜血杆菌悬液。

小肠结肠炎耶氏菌菌株培养：将指示菌小肠结肠炎耶氏菌接种在普通肉汤培养基中，在37℃过夜培养，得到小肠结肠炎耶氏菌液。

小肠结肠炎耶氏菌菌悬液制备：收集小肠结肠炎耶氏菌菌体，用PBS缓冲液洗2次，调节菌体浓度为1×10⁷CFU/mL，得到小肠结肠炎耶氏菌悬液。

实验例1、鼠李糖乳酪杆菌的分离筛选与鉴定

（1）菌株的分离筛选

采集18-20岁青年群体的粪便样品，采用无菌生理盐水稀释至合适梯度，涂布于MRS琼脂平板上，置于厌氧条件下37℃培养48h。挑选不透明乳白色、圆形有光泽、边缘整齐、表面凸起且湿润的单克隆菌落，在MRS固体培养基上进行反复划线纯化培养，通过光学显微镜观察个体形态，获得乳杆菌属菌株。

（2）分子生物学鉴定

对筛选的目的菌株液体扩培，收集菌体，提取基因组DNA，采用通用引物27F和1492R扩增其16S rDNA片段，用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，并对PCR产物进行测序。通用引物27F和1492R的序列记载于中国发明专利申请CN114672445A中。所述PCR反应体系：10×buffer 10μL，10mM dNTP 2μL，上下引物各1μL，DNA模板2μL，Taq酶0.5μL，ddH₂O 34.5μL。95℃预变性10min；然后94℃30s、60℃30s、72℃1min共35个循环，结束后72℃延伸5min。将PCR产物通过凝胶电泳检测后送往武汉金开瑞生物工程有限公司测序。将鉴定的基因序列用BLAST工具在NCBI数据库中进行比对，根据分子生物学鉴定结果，确定该菌株为鼠李糖乳酪杆菌。将该菌株命名为PUK09，并送保藏，保藏信息如下：

菌株名称：PUK09；

保藏号：CGMCC NO.26374；

分类命名：鼠李糖乳酪杆菌Lacticaseibacillus rhamnosus；

保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；

保藏日期：2023年01月03号。

实验例2、鼠李糖乳酪杆菌PUK09对模拟胃肠液的耐受力

（1）试剂的配制：

人工胃液配制：配制0.5%生理盐水，加入0.3%胃蛋白酶，用稀盐酸1MHCl调节pH至2.5，充分溶解后用0.22μm微孔滤膜过滤除菌备用；

人工肠液配制：配制0.5%生理盐水，加入0.1%胰蛋白酶，0.3%的胆汁粉，充分溶解后用0.22μm微孔滤膜过滤除菌备用；

（2）耐人工胃肠液实验：取0.1mL菌悬液分别添加入0.9mL人工胃液、肠液中，在37℃培养3h；分别于0h和3h对培养液进行梯度稀释后涂布于L-MRS平板进行平板计数。根据公式计算存活率。

存活率＝(3h活菌数/0h活菌数)×100％

根据表1的实验结果显示，PUK09在人工胃液中处理3h后的存活率为101.39%，说明有很好的耐受性，表明鼠李糖乳酪杆菌PUK09在极端低酸的胃液环境中可以存活；同时，鼠李糖乳酪杆菌PUK09在人工肠液中处理3h后的存活率为99.12%，说明鼠李糖乳酪杆菌PUK09在胃肠道中都可以很好的存活。

实验例3、鼠李糖乳酪杆菌PUK09表面疏水性

将活化培养好的PUK09菌液以5000rmp离心5min收集菌体，菌体用等量 PBS缓冲液清洗两次，重悬于PBS缓冲液中，调整菌悬液OD₆₀₀值在1.0左右，同时测定菌悬液在600nm处的吸光度值（A₀）。取上述12mL菌悬液与4mL 二甲苯于试管中，充分混合，室温放置10min后，再漩涡混合，再于室温下放置20min分层，透明的下水层与含有细胞的上溶剂层，取下水相测定600nm处水相的吸光度值（A₁）。以缓冲液为空白对照。表面疏水性以细菌黏附有机溶剂的百分率来表示：

表面疏水性（%）=（1-A₁/A₀）×100%

表2的实验结果表示，PUK09的表面疏水性为43.09%，有研究表明，表面疏水性越强其黏附能力越强，此结果说明鼠李糖乳酪杆菌PUK09表现出很好的黏附能力的可能性。

实验例4、鼠李糖乳酪杆菌PUK09凝集能力

（1）鼠李糖乳酪杆菌自聚集能力

将培养好的鼠李糖乳酪杆菌PUK09菌液离心，用PBS重悬，调整活菌数标准大约为10⁸CFU/mL，取鼠李糖乳酪杆菌PUK09菌悬液40mL，到50mL离心管里，放37℃培养箱静置培养，分别测量2、5、21、24H上清液的OD值，并记录数据，每次测完再放回培养箱继续静置培养。每次测完再放回培养箱继续静置培养。

按照上段同样的操作对LGG菌株进行操作，只需将鼠李糖乳酪杆菌PUK09换成LGG，其他操作都一样。

分别按照下式计算菌株PUK09和LGG的自聚力，结果如表3所示：

自聚力%=1-（A_混/A_初始）×100%

上式中，A_混指静置培养2、5、21、24H上清液的OD值，A_初始指静置培养前的上清液的OD值。

（2）鼠李糖乳酪杆菌与幽门螺杆菌的共聚集能力

益生菌（LGG或PUK09）和病原菌（幽门螺杆菌H. pylori(ATCC43504)）活菌数分别调至大约为10⁸CFU/mL，充分震荡混匀，分别测定初始OD₆₀₀nm处的值Ax、Ay，乳酸细菌（LGG或PUK09）与病原菌（幽门螺杆菌H. pylori(ATCC43504)）各取20mL等体积至50mL离心管中混，涡旋震荡10S后37℃静置孵育，菌悬液孵育2H、5H、21H、24H时，分别小心吸取上层液体2.5mL，测定菌悬液在600nm处的吸光值(A)，计算菌株（LGG或PUK09）与病原菌（幽门螺杆菌H. pylori(ATCC43504)）的共聚力。

共聚力%=[(Ax+Ay)/2-A(x+y)]/[Ax+Ay/2]×100%

其中，x和y分别代表两种菌株，(x+y)代表混合物。

据表3、表4的实验结果表明，PUK09的自聚集能力、PUK09与HP（ATCC43504）共聚集能力随着时间的延长而增加；24h时PUK09的自聚集能力、PUK09与HP（ATCC43504）共聚集能力分别为56.27%、58.81%。这表明鼠李糖乳酪杆菌PUK09能够较好的与幽门螺杆菌发生聚集的物理作用，PUK09与幽门螺杆菌结合成团，从而将幽门螺杆菌排出体外。

实验例5、鼠李糖乳酪杆菌PUK09抑制病原菌的能力

产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌、小肠结肠炎耶氏菌经过活化后，各自在抑菌圈实验中的菌浓度分别为1×10⁷CFU/mL。移取2mL菌悬液到强化梭菌培养基中，用无菌打孔器在平板上固定，倾注20mL混有不同病原菌对应培养基，待培养基凝固后，用镊子小心挑出打孔器以做成圆孔，往孔中注入150μL益生菌菌液（用量是1×10⁸CFU），37℃条件下培养72h，测定抑菌圈大小，每个处理分别重复3次。

实验例6、鼠李糖乳酪杆菌PUK09抑制不同幽门螺杆菌的生长能力

幽门螺杆菌经过活化后，制备菌悬液浓度分别调整为1×10⁸CFU/mL、1×10⁹CFU/mL。移取2mL幽门螺杆菌菌悬液到BHI血琼脂培养基中。用无菌打孔器在平板上固定，倾注20mL混有幽门螺杆菌H. pylori SS1和幽门螺杆菌H. pylori（ATCC43504）的BHI血琼脂培养基，待培养基凝固后，用镊子小心挑出打孔器以做成圆孔，往孔中注入150μL益生菌菌液（浓度是1×10⁸CFU/m），37℃微氧条件下培养72h，测定抑菌圈大小，每个处理分别重复3次。

由表6实验结果表明，PUK09对不同的幽门螺杆菌菌株均表现出较强的抑制作用；PUK09对相同幽门螺杆菌的不同浓度均表现出随着浓度的降低，抑菌能力增强；PUK09对幽门螺杆菌H. pylori(ATCC43504)(1×10⁹CFU/mL)和幽门螺杆菌H. pylori SS1(1×10⁹CFU/mL)的抑菌圈直径分别为25.00mm、23.50mm。PUK09对幽门螺杆菌H. pylori(ATCC43504)(1×10⁸CFU/mL)和幽门螺杆菌H. pylori SS1(1×10⁸CFU/mL)的抑菌圈直径分别为33.00mm、34.00mm表明鼠李糖乳酪杆菌PUK09对幽门螺杆菌表现出较强的拮抗作用，能够很好的抑制不同幽门螺杆菌的生长。

实验例7、鼠李糖乳酪杆菌PUK09抑制幽门螺杆菌尿素酶活性

幽门螺杆菌H. pylori（ATCC43504）经过活化后，制备菌悬液浓度为1×10⁷CFU/mL。取40μL幽门螺杆菌H. pylori（ATCC43504）和10μL乳酸菌上清液（浓度是1×10⁸CFU/mL）混匀后置于孔板中，放入三气培养箱中共培养24h。然后取出加入150μL尿素酶测试液，振荡后用550nm的酶标仪测定吸光值，即是尿素酶试剂液测定的结果；对照是BHI代替上清液测定。尿素酶指示剂配方：0.9% NaCl，20mmol/L尿素，14μg/mL苯酚红。用HCl调pH至6.8，分光光度计550nm测定其密度。

表7实验结果显示，PUK09上清液对H. pylori（ATCC43504）尿素酶活性的抑制率高达90.12%；幽门螺杆菌可以代谢产生尿素酶，进而水解胃液环境的尿素，将其分解成氨和二氧化碳进而中和幽门螺杆菌周围环境中的酸，使其维持一个中性环境。鼠李糖乳酪杆菌PUK09上清液对H. pylori（ATCC43504）尿素酶活性有较高的抑制率，破环其耐生存的环境，从而抑制幽门螺杆菌的生长。

实验例8、鼠李糖乳酪杆菌PUK09对AGS(人胃腺癌细胞)黏附率

人胃腺癌细胞AGS细胞系的培养：从液氮罐中取出AGS细胞进行复苏后，用含有1%非必需氨基酸、1%青链霉素和10%胎牛血清的FK-12完全培养液放置在37℃，5% CO₂的恒温培养箱中进行培养；隔天换液一次，隔两天传代一次。将在细胞培养瓶中长势良好的AGS细胞，用无菌PBS洗涤两次。加入0.5 mL胰酶进行消化，离心弃上清，用FK-12完全培养液。调整细胞浓度至2.4×10⁴个/mL，用12孔组织培养板进行铺板，待细胞长至单层，弃去组织培养板中各孔的培养液，用无菌PBS缓冲液洗两遍板，以洗掉未贴壁的细胞，备用；与此同时，取已培养好的目标菌株菌液，10000r/min室温离心1min收集菌体，并用无菌 PBS洗涤两次，最后重悬于FK-12完全培养液使菌悬液浓度为1×10⁸CFU/mL。

将新鲜乳酸菌离心洗涤后得到的菌泥，用不含双抗的FK-12完全培养液重悬（细胞浓度是2.4×10⁴个/mL），向每孔中加入新鲜乳酸菌重悬菌液（浓度是1×10⁸CFU/mL），于含5% CO₂的培养箱中，37℃孵育2h。弃去组织培养板中各孔的混合液，用无菌PBS洗涤3次，以除去未黏附的乳酸菌。加入0.5mL胰酶进行消化至贴壁细胞完全脱落，然后加入0.5mL不含双抗的细胞培养液终止消化。收集混合液，进行梯度稀释平板计数计算黏附的细菌数，并计算黏附率。

注：*表示同一指标与鼠李糖乳酪杆菌LGG相比存在显著性差异（p<0.05）

表8和图1的实验结果显示，PUK09对AGS细胞的黏附率为6.69%，显著高于对比例菌株LGG，表明鼠李糖乳酪杆菌PUK09能够在人胃腺癌细胞（AGS）上很好的黏附，为其与幽门螺杆菌竞争性黏附提供了很好的条件。

实验例9、鼠李糖乳酪杆菌PUK09抑制幽门螺杆菌黏附AGS人胃腺癌细胞

将人胃腺癌细胞AGS细胞接种于12孔板上，37℃条件下在含5% CO₂的培养箱中培养48h，将培养至单层的AGS细胞用PBS冲洗3次。将幽门螺杆菌H.pylori（ATCC43504）、益生菌PUK09分别用FK-12完全培养液重悬，并调整幽门螺杆菌浓度为1.0×10⁸CFU/mL，益生菌浓度为1.0×10⁷CFU/mL。空白组：在培养至单层的AGS细胞中加入FK-12完全培养液1mL。幽门螺杆菌组：在培养至单层的AGS细胞中加入FK-12完全培养液1mL，3h后用PBS清洗，加入0.05mL幽门螺杆菌菌液以及0.15mL FK-12完全培养液，37℃条件下在含5% CO₂的培养箱中培养2h。鼠李糖乳酪杆菌预处理组（PUK09预处理组或LGG预处理组）：在培养至单层的AGS细胞中加入鼠李糖乳酪杆菌（PUK09或LGG）菌体重悬液0.05mL以及FK-12完全培养液0.15mL，37℃条件下在含5% CO₂的培养箱中培养2h，然后用PBS液清洗3次，洗去未吸附的益生菌。再加入0.05mL幽门螺杆菌菌液以及0.15mL FK-12完全培养液，继续在37℃条件下在含5% CO₂的培养箱中培养2h。鼠李糖乳酪杆菌后处理组（PUK09后处理组或LGG后处理组）：在培养至单层的AGS细胞中加入0.05mL幽门螺杆菌菌液以及0.15mL FK-12完全培养液，37℃条件下在含5%CO₂的培养箱中培养2h，然后用PBS液清洗3次，洗去未吸附的幽门螺杆菌，再加入鼠李糖乳酪杆菌（PUK09或LGG）重悬液0.05mL以及FK-12完全培养液0.15mL，继续在37℃条件下在含5%CO₂的培养箱中培养2h。实验结束后各孔用PBS清洗3次，加入0.2mL尿素酚红试剂培养1h后，用酶标仪在550nm波长下测定吸光值。

A₀：空白组的吸光值；A₁：实验组（PUK09预处理组或LGG预处理组或PUK09后处理组或LGG后处理组）的吸光值；A₂：幽门螺杆菌组的吸光值。

计算幽门螺杆菌组的幽门螺杆菌黏附率时，上式中的A₁值与A₂值的取值相等。

图2的实验结果表明，设定幽门螺杆菌对胃上皮细胞粘附力为100％，在经过鼠李糖乳酪杆菌PUK09预处理后，PUK09预处理组的幽门螺杆菌粘附力显著下降，降至40.27％，在幽门螺杆菌完全占据细胞上皮位点后，再经过鼠李糖乳酪杆菌PUK09处理，PUK09后处理组的PUK09也可以通过竞争性粘附将幽门螺杆菌排出，使幽门螺杆菌粘附力下降至43.3％。

实验例10、鼠李糖乳酪杆菌PUK09抑制幽门螺杆菌诱导细胞分泌细胞因子的研究

将人胃上皮细胞AGS细胞加入6孔板中，待为单层细胞时，用PBS缓冲液冲洗3次，用移液枪向每孔细胞中加入1mL重悬于FK-12完全培养液的鼠李糖乳酪杆菌（浓度是1×10⁸CFU/mL），对照组为不含鼠李糖乳酪杆菌的FK-12完全培养液，在37℃厌氧培养1h，用PBS缓冲液洗去未粘附的鼠李糖乳酪杆菌，然后加入等量的幽门螺杆菌菌液（浓度是1×10⁸CFU/mL），在5% CO₂的培养箱中，37℃条件下共同孵育24h，将消化得到的混合液转移至离心管中，在8000 r/min条件下离心5min取上清液，空白组为不含鼠李糖乳酪杆菌的FK-12完全培养液以及幽门螺杆菌菌液。根据ELISA试剂盒使用说明书测定AGS细胞分泌的TNF-α、IL-1β、IL-8。

幽门螺杆菌感染会引起胃粘膜细胞分泌细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α。其中IL-8与幽门螺杆菌引发的胃炎相关，可导致黏膜中中性粒细胞持续激活，损伤胃粘膜屏障。幽门螺杆菌会促进促炎因子IL-1β、IL-8、TNF-α的分泌。由表9结果可得，感染幽门螺杆菌的AGS细胞分泌的IL-1β、IL-8、TNF-α显著增加，分别增加到213.23pg/mL、710.32pg/mL、179.42pg/mL；

经鼠李糖乳酪杆菌PUK09菌株处理后，AGS细胞的IL-1β、IL-8、TNF-α浓度分别减少到49.21pg/mL、181.37pg/mL、39.81pg/mL。该结果表明，鼠李糖乳酪杆菌PUK09可以显著抑制幽门螺杆菌对细胞的感染。

实验例11、鼠李糖乳酪杆菌PUK09对感染幽门螺杆菌小鼠的改善作用

（1）分组：选取48只6-8周龄雄性SPF级Balb/c小鼠，随机分为4组，分别为空白组、HP模型组、PUK09干预HP组、LGG干预HP组，每组12只小鼠。

（2）造模：造模期间，空白组基于基础饮食，不做其他处理。其余小鼠灌胃H.pylori(ATCC43504)菌悬液（5×10⁷CFU/天），连续5天。

（3）分组：造模完成后对小鼠进行重新分组；分别分为鼠李糖乳酪杆菌PUK09干预HP组：再连续灌胃鼠李糖乳酪杆菌PUK09悬液（5×10⁹CFU/天）5天；LGG干预HP组：再连续灌胃LGG悬液（5×10⁹CFU/天）5天；H.pylori组：给予基础饲料喂食和水5天。

（4）对四组小鼠进行处死后，从心脏进行取血，利用ELISA试剂盒的方法测定IL-1β、IL-8、TNF-α、IL-10等炎症因子的情况；

由表10结果可知，与空白组相比，幽门螺杆菌感染组（H.pylori(ATCC43504)）小鼠胃粘膜炎症因子水平包括IL-1β、IL-8、TNF-α均显著增加，说明幽门螺杆菌感染引起小鼠胃粘膜炎症反应。而益生菌（PUK09或LGG）干预后，PUK09+HP组和LGG+HP组的小鼠胃粘膜炎症因子IL-1β、IL-8、TNF-α水平与幽门螺杆菌组（H.pylori(ATCC43504)）相比显著降低，除此之外，抗炎因子IL-10水平与幽门螺杆菌组H.pylori(ATCC43504)相比增加。说明鼠李糖乳酪杆菌PUK09具有很好的改善幽门螺杆菌引起的炎症反应。

实验例12、抗生素敏感性实验

采用滤纸片扩散法测定抗生素敏感性，将培养至对数期的菌悬液调整浓度为10⁸CFU/ml，取100μL菌悬液加在含有0.1%的L-半胱氨酸盐酸盐的MRS平板上，并用无菌棉签均匀涂布，贴上药敏片，以无抗生素纸片为空白对照。在37℃下，兼性厌氧培养，24h后用直尺测量菌株对抗生素敏感性直径。结果见表11。根据实验结果可知：鼠李糖乳酪杆菌PUK09对测试的抗生素均敏感。

注：S代表敏感，M代表中等敏感。

Claims

1.一种抗幽门螺杆菌的鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09，其特征在于，其保藏编号为CGMCC NO.26374。

2. 保藏编号为CGMCC NO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09在体外抑菌和/或制备抑菌产品和/或制备抗幽门螺杆菌感染药物方面的用途，其特征在于，所述抑菌指：抑制产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌、小肠结肠炎耶氏菌、幽门螺杆菌中的任意一种或两种以上。

3. 根据权利要求2所述的保藏编号为CGMCC NO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09在体外抑菌和/或制备抑菌产品和/或制备抗幽门螺杆菌感染药物方面的用途，其特征在于，抗幽门螺杆菌感染指：抑制幽门螺杆菌、和/或，抑制幽门螺杆菌尿素酶活性、和/或，抑制幽门螺杆菌黏附AGS人胃腺癌细胞、和/或，改善幽门螺杆菌引起的炎症；

和/或，改善幽门螺杆菌引起的炎症指：降低促炎因子水平；

和/或，所述幽门螺杆菌选自：幽门螺杆菌SS1和/或幽门螺杆菌ATCC43504。

4. 根据权利要求3所述的保藏编号为CGMCC NO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09在体外抑菌和/或制备抑菌产品和/或制备抗幽门螺杆菌感染药物方面的用途，其特征在于，菌株PUK09抑制产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌、小肠结肠炎耶氏菌；

和/或，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁸CFU/mL-1×10⁹CFU/mL的幽门螺杆菌的抑菌圈直径为23.5mm-34mm；

和/或，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的产肠毒素大肠杆菌的抑菌圈直径为30mm；

和/或，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的空肠弯曲杆菌的抑菌圈直径为28.5mm；

和/或，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的阪崎肠杆菌的抑菌圈直径为20.5mm；

和/或，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的绿脓杆菌的抑菌圈直径为22mm；

和/或，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的副猪嗜血杆菌的抑菌圈直径为17.5mm；

和/或，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的小肠结肠炎耶氏菌的抑菌圈直径为15.5mm；

和/或，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的产气荚膜梭菌的抑菌圈直径为38mm；

和/或，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的艰难梭菌的抑菌圈直径为27.5mm；

和/或，所述促炎因子选自IL-1β、IL-8、TNF-α的一种或两种以上。

5. 一种抑菌产品，包括：抑菌活性成分；其特征在于，抑菌活性成分包括：保藏编号为CGMCC NO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09。

6.根据权利要求5所述的一种抑菌产品，其特征在于，还包括：辅料。

7. 一种抗幽门螺杆菌感染药物，包括：药效活性成分；其特征在于，药效活性成分包括：保藏编号为CGMCC NO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09。

8.根据权利要求7所述的一种抗幽门螺杆菌感染药物，其特征在于，还包括：药学上可接受的辅料。

9. 一种体外抑菌方法，其特征在于，采用保藏编号为CGMCC NO.26374的一种鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）菌株PUK09抑菌。

10.根据权利要求9所述的一种体外抑菌方法，其特征在于，所述抑菌指：抑制产气荚膜梭菌、艰难梭菌、产肠毒素大肠杆菌、空肠弯曲杆菌、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、副流感嗜血杆菌、副猪嗜血杆菌、小肠结肠炎耶氏菌、幽门螺杆菌中的任意一种或两种以上；

和/或，用量1×10⁸CFU的菌株PUK09抑制浓度1×10⁷CFU/mL的艰难梭菌的抑菌圈直径为27.5mm。