CN116298053B - 一种姜功胃安颗粒的质量控制方法 - Google Patents

一种姜功胃安颗粒的质量控制方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种姜功胃安颗粒的质量控制方法，具体涉及一种中药制剂的检测方法，该方法包括：姜功胃安颗粒中十大功劳、元胡、吴茱萸和陈皮四味药材的薄层鉴别；姜功胃安颗粒中盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷的含量测定。通过方法学考察，该检测方法具有专属性强、耐用性好、良好的回收率等效果，能有效的检测姜功胃安颗粒的质量情况，保证用药安全性，对于质量标准的提升具有重要意义。

Description

一种姜功胃安颗粒的质量控制方法
技术领域
本发明涉及医药中药制剂检测领域，具体涉及一种姜功胃安颗粒的质量控制方法。
背景技术
反流性食道炎(reflux esophagitis，RE)是胃食管反流病(GERD)的一种常见临床表现，约占胃食管反流病患者的48％～79％。据流行病学家调查，我国GERD发病率为5.77％，RE发病率为1.92％。RE是胃或十二指肠内容物反流入食管引起的症状或组织损害，临床表现主要为反酸、烧心、胸骨后疼痛，严重者有吞咽困难。西医治疗反流性食道炎的主要药物目前以各类质子泵抑制剂(PPI)为主流，虽然临床见效快、制酸效果好，但须长期服用，不能根治，治疗成本高，患者经济负担重，且若长期持续使用则会呈现出不容忽视的潜在危险因素。
研究表明：PPI可通过改变肠道正常菌群而影响肠道的生物屏障，使肠源性感染风险增加、应用PPI可使钙离子吸收障碍。有报道显示，2例长期应用PPI的患者发生消化道类癌瘤，经过分析得出结论为：PPI应用引起的高胃泌素症可能引起肠上皮样细胞样类癌瘤。
中医药治疗反流性食管炎具有有效率高及复发率低的良好临床疗效。如李国洪“猥胆汤治疗反流性食道炎50例临床研究”、杨丽萍“茱莲花汤治疗反流性食道炎120例临床观察”、李琼“胃安六合汤治疗胃腕痛18例”等等。中医治疗反流性食道炎既能解除患者长期质子泵制酸剂的痛苦，也可减轻患者经济负担，目前国内尚无治疗反流性食道炎的中药制剂，在临床有效经验方的基础上，开发对反流性食道炎有效的中药制剂，意义重大。
姜功胃安颗粒是我院长期用于临床治疗反流性食道炎的院内制剂，该制剂在我院使用已有6年历史，治疗患者已逾千余人，治疗效果明显。其制剂处方为：大果木姜子200g、十大功劳200g、元胡150g、隔山消150g、吴茱萸100g、陈皮100g。制成量为1000g,规格为每袋装10g，每次服用1袋，每天服用3次。
姜功胃安颗粒在临床上疗效确切，得到医生和患者充分肯定的事实充分说明姜功胃安颗粒是一款非常成功的院内制剂，具有广泛推广和利用的价值。产品要推广，质量是关键。然而，由于技术条件的限制，姜功胃安颗粒原始质量控制方法较为粗陋，只制定了制剂融化性、粒度、装量、水分等常规项目的质量控制指标，未建立处方中药味的鉴别及有效成分含量测定方法，难以反映姜功胃安颗粒真实质量状况，这对其推广和应用造成了阻碍。因此，有必要通过试验研究提升姜功胃安颗粒质量控制方法，建立姜功胃安颗粒的质量控制标准。
为了解决上述问题，有效的提高产品质量，提升姜功胃安颗粒的质量标准，本发明团队对姜功胃安颗粒原检测方法进行深入研发、考察，建立了一种姜功胃安颗粒的质量控制方法，该方法增加了姜功胃安颗粒中十大功劳、元胡、吴茱萸和陈皮四味药材的薄层鉴别；姜功胃安颗粒中盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷的含量测定，有效控制姜功胃安颗粒成品的质量标准，进而保证用药质量安全性。
发明内容
本发明的目的是提供一种姜功胃安颗粒的质量控制方法。
本发明技术方案是通过如下步骤实现的：
本发明所述一种姜功胃安颗粒的质量控制方法，包括：
姜功胃安颗粒中十大功劳、元胡、吴茱萸和陈皮四味药材的薄层鉴别；姜功胃安颗粒中盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷的含量测定。
本发明所述姜功胃安颗粒中十大功劳的薄层鉴别为：取本品3-8g，研细，加甲醇10-30ml，加热回流20-40min，滤过，滤液蒸干，残渣用0.1％氢氧化钠溶液15-30ml溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至4.5-5.5，用三氯甲烷20-30ml振摇提取，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣甲醇3-8ml使溶解，作为供试品溶液；另取十大功劳对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述3种溶液各1-3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为7:3:2:0.1-0.2的甲苯-乙酸乙酯-丙酮-水为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
优选的，本发明所述姜功胃安颗粒中十大功劳的薄层鉴别为：取本品5g，研细，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用0.1％氢氧化钠溶液20ml溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5，用三氯甲烷25ml振摇提取，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取十大功劳对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为7:3:2:0.1的甲苯-乙酸乙酯-丙酮-水为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
本发明所述姜功胃安颗粒中元胡的薄层鉴别为：取元胡对照药材1g，照上述“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述2种溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各3-8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5:0.8-1.2的三氯甲烷-异丙醇为展开剂，展开，取出，晾干，用碘蒸汽熏蒸1-3min后取出，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
优选的，本发明所述姜功胃安颗粒中元胡的薄层鉴别优选为：取元胡对照药材1g，照上述“十大功劳”薄层鉴别项下优选的供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述2种溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5:1的三氯甲烷-异丙醇为展开剂，展开，取出，晾干，用碘蒸汽熏蒸2min后取出，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
本发明所述姜功胃安颗粒中吴茱萸的薄层鉴别为：取吴茱萸次碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各3-8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8-12:3:1的正己烷-乙酸乙酯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5-10％硫酸乙醇溶液，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
优选的，本发明所述姜功胃安颗粒中吴茱萸的薄层鉴别优选为：取吴茱萸次碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下优选的供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10:3:1的正己烷-乙酸乙酯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
本发明所述姜功胃安颗粒中陈皮的薄层鉴别为：取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各3-8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6:3:0.8-1.2的甲苯-丙酮-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3-10％三氯化铝乙醇溶液，在100-110℃加热3-10min，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
优选的，本发明所述姜功胃安颗粒中陈皮的薄层鉴别优选为：取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6:3:1的甲苯-丙酮-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热5min，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
本发明所述姜功胃安颗粒中盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷的含量测定为：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.03mol/L磷酸二氢钾缓冲液(磷酸调节pH值至2.5)为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为290nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：分别精密称取盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解并制成每1mL分别含20ug、50ug、0.4mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取颗粒，研细，称取5g，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，回流提取30min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明有益效果：
1、本发明建立了处方中药材十大功劳、元胡、吴茱萸和陈皮的薄层鉴别方法，且各味药材的薄层鉴别使用同一供试品溶液，大大方便了检验操作，使得检测方法更加高效迅捷，节省了劳动力，也节约了成本。
2、本发明采用同一方法测定了处方中十大功劳的有效成分盐酸小檗碱、元胡的有效成分延胡索乙素和陈皮的有效成分橙皮苷，实现了多种有效成分的“一测多评”，大大缩短了分析检测时间，避免了试药试剂浪费，降低了设备能耗，同时，由于本检测方法测定的是多指标成分，因此大幅提高了药品质量控制标准，有利于保障患者的用药安全，提升药品质量。
3、本发明通过对各药材的薄层色谱进行了筛选实验，得到十大功劳、元胡、吴茱萸和陈皮薄层鉴别方法，该方法检测结果斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好；并按药典2020年版四部通则9101(中药质量标准分析方法验证指导原则)要求，经过了方法学考察，表明不同湿度条件下，不同温度条件下，用高效薄层板和硅胶G商品板进行试验，色谱图斑点清晰，分离好，符合要求，Rf值适中，验证试验表明重现性好、耐用性好，且无阴性干扰，进一步证明了该薄层鉴别方法的准确性和可靠性。
4、本发明含量检测方法准确可靠，稳定可行。通过方法学验证考察：
(1)在系统适用性确认中，结果盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷的出峰时间分别为8.182、20.076、31.823min，表明供试品中其他组分不干扰盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷的测定，并且待测成分与其他峰的分离度良好，溶剂对检测物质无干扰；
(2)在专属性试验中，阴性样品的色谱图中在与对照品相同保留时间位置上无吸收峰，表明该方法的专属性好、灵敏度高；
(3)在线性关系考察中，盐酸小檗碱，线性范围为0.04284～0.4712μg，回归方差为y＝48363.732x+6904.457，R2＝0.9997；延胡索乙素，线性范围为0.09874～1.086μg，回归方差为y＝31647.498x+1043.488，R2＝0.9998；橙皮苷，线性范围为0.8250～9.075μg，回归方差为y＝6911842.756x+107222.239，R2＝0.9999；表明各线性关系良好；
(4)在精密度实验中，计算得橙皮苷、延胡索乙素和盐酸小檗碱的RSD值分别为0.73％、1.04％、1.15％，表明仪器的精密度良好；
(5)在稳定性实验中，计算得橙皮苷、延胡索乙素和盐酸小檗碱的RSD值分别为0.96％、1.22％、1.35％，表明供试品溶液在8h内稳定性良好；
(6)在重复性实验中，计算得橙皮苷、延胡索乙素和盐酸小檗碱的RSD值分别为0.83％、1.10％、1.41％，表明该样品制备方法稳定可靠、重复性好；
(7)在加样回收率实验中，计算得橙皮苷、延胡索乙素和盐酸小檗碱的平均回收率分别为99.69％、99.17％、99.24％，RSD值分别为1.25％、2.32％、2.18％，表明该方法的回收率良好。
6、本发明根据样品含量检测结果，暂定本品含量限度为：本品每袋含十大功劳以盐酸小檗碱(C20H17NO4)计，不得少于0.10mg；含元胡以延胡索乙素(C21H25NO4)计，不得少于0.15mg；含陈皮以橙皮苷(C28H34O15)计，不得少于10.0mg。
附图说明
图1：十大功劳薄层鉴别室温(25℃)考察展开结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，十大功劳对照药材，盐酸小檗碱对照品)；
图2：十大功劳薄层鉴别低温(5℃)考察展开结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，十大功劳对照药材，盐酸小檗碱对照品)；
图3：十大功劳薄层鉴别高温(40℃)考察展开结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，十大功劳对照药材，盐酸小檗碱对照品)；
图4：十大功劳薄层鉴别在高湿度72％条件下考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，十大功劳对照药材，盐酸小檗碱对照品)；
图5：十大功劳薄层鉴别在低湿度32％条件下考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，十大功劳对照药材，盐酸小檗碱对照品)；
图6：十大功劳薄层鉴别手铺硅胶G板开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，十大功劳对照药材，盐酸小檗碱对照品)；
图7：元胡薄层鉴别自制1％的氢氧化钠硅胶G板开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，延胡索乙素对照品1，延胡索乙素对照品2)；
图8：元胡薄层鉴别室温(25℃)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，元胡对照药材，延胡索乙素对照品)；
图9：元胡薄层鉴别低温(5℃)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，元胡对照药材，延胡索乙素对照品)；
图10：元胡薄层鉴别高温(40℃)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，元胡对照药材，延胡索乙素对照品)；
图11：元胡薄层鉴别高湿度(72％)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，元胡对照药材，延胡索乙素对照品)；
图12：元胡薄层鉴别低湿度(32％)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，元胡对照药材，延胡索乙素对照品)；
图13：元胡薄层鉴别手铺硅胶G板开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，元胡对照药材，延胡索乙素对照品，元胡对照药材)；
图14：吴茱萸薄层鉴别室温(25℃)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，吴茱萸次碱对照品)；
图15：吴茱萸薄层鉴别低温(5℃)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，吴茱萸次碱对照品)；
图16：吴茱萸薄层鉴别高温(40℃)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，吴茱萸次碱对照品)；
图17：吴茱萸薄层鉴别高湿度(72％)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，吴茱萸次碱对照品)；
图18：吴茱萸薄层鉴别低湿度(32％)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，吴茱萸次碱对照品)；
图19：吴茱萸薄层鉴别手铺硅胶G板开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，吴茱萸次碱对照品)；
图20：陈皮薄层鉴别在甲苯-丙酮-水(6:3:1)的下层溶液为展开剂条件下开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，橙皮苷对照品)；
图21：陈皮薄层鉴别室温(25℃)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，橙皮苷对照品)；
图22：陈皮薄层鉴别低温(5℃)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，橙皮苷对照品)；
图23：陈皮薄层鉴别高温(40℃)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，橙皮苷对照品)；
图24陈皮薄层鉴别高湿度(72％)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，橙皮苷对照品)；
图25：陈皮薄层鉴别低湿度(32％)考察开展结果(注：薄层图点样从左到右依次表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，橙皮苷对照品)；
图26：陈皮薄层鉴别手铺硅胶G板开展结果(注：薄层图点样从左到右依次1表示为阴性样品，样品1，样品2，样品3，橙皮苷对照品)；
图27：含量测定系统适用性(注：A.空白溶剂；B.混合对照品溶液；C.供试品溶液；D.十大功劳阴性供试品溶液；E.元胡阴性供试品溶液；F.陈皮阴性供试品溶液；1.盐酸小檗碱；2.延胡索乙素；3.橙皮苷)；
具体实施方式
实施例1姜功胃安颗粒的质量控制方法
(1)姜功胃安颗粒中十大功劳、元胡、吴茱萸和陈皮四味药材的薄层鉴别：
十大功劳的薄层鉴别：取本品5g，研细，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用0.1％氢氧化钠溶液20ml溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5，用三氯甲烷25ml振摇提取，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取十大功劳对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为7:3:2:0.1的甲苯-乙酸乙酯-丙酮-水为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
元胡的薄层鉴别：取元胡对照药材1g，照上述“十大功劳”薄层鉴别项下优选的供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述2种溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5:1的三氯甲烷-异丙醇为展开剂，展开，取出，晾干，用碘蒸汽熏蒸2min后取出，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
吴茱萸的薄层鉴别：取吴茱萸次碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下优选的供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10:3:1的正己烷-乙酸乙酯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
陈皮的薄层鉴别：取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6:3:1的甲苯-丙酮-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热5min，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)姜功胃安颗粒中盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷的含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2020版四部通则0512)测定
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以pH值为2.5的0.03mol/L磷酸二氢钾缓冲液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为290nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：分别精密称取盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解并制成每1mL分别含20ug、50ug、0.4mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取颗粒，研细，称取5g，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，回流提取30min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含十大功劳以盐酸小檗碱(C20H17NO4)计，不得少于0.10mg；含元胡以延胡索乙素(C21H25NO4)计，不得少于0.15mg；含陈皮以橙皮苷(C28H34O15)计，不得少于10.0mg。
实施例2姜功胃安颗粒的质量控制方法
(1)姜功胃安颗粒中十大功劳、元胡、吴茱萸和陈皮四味药材的薄层鉴别：
十大功劳的薄层鉴别：取本品3g，研细，加甲醇10ml，加热回流20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用0.1％氢氧化钠溶液15ml溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至4.5，用三氯甲烷20ml振摇提取，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；另取十大功劳对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述3种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为7:3:2:0.1的甲苯-乙酸乙酯-丙酮-水为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
元胡的薄层鉴别：取元胡对照药材1g，照上述“十大功劳”薄层鉴别项下优选的供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述2种溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5:0.8的三氯甲烷-异丙醇为展开剂，展开，取出，晾干，用碘蒸汽熏蒸1min后取出，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
吴茱萸的薄层鉴别：取吴茱萸次碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下优选的供试品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8:3:1的正己烷-乙酸乙酯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
陈皮的薄层鉴别：取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6:3:0.8的甲苯-丙酮-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，在100℃加热3min，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)姜功胃安颗粒中盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷的含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2020版四部通则0512)测定
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以pH值为2.5的0.03mol/L磷酸二氢钾缓冲液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为290nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：分别精密称取盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解并制成每1mL分别含20ug、50ug、0.4mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取颗粒，研细，称取5g，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，回流提取30min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含十大功劳以盐酸小檗碱(C20H17NO4)计，不得少于0.10mg；含元胡以延胡索乙素(C21H25NO4)计，不得少于0.15mg；含陈皮以橙皮苷(C28H34O15)计，不得少于10.0mg。
实施例3姜功胃安颗粒的质量控制方法
(1)姜功胃安颗粒中十大功劳、元胡、吴茱萸和陈皮四味药材的薄层鉴别：
十大功劳的薄层鉴别：取本品8g，研细，加甲醇30ml，加热回流40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用0.1％氢氧化钠溶液30ml溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5.5，用三氯甲烷30ml振摇提取，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣甲醇8ml使溶解，作为供试品溶液；另取十大功劳对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述3种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为7:3:2:0.2的甲苯-乙酸乙酯-丙酮-水为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
元胡的薄层鉴别：取元胡对照药材1g，照上述“十大功劳”薄层鉴别项下优选的供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述2种溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5:1.2的三氯甲烷-异丙醇为展开剂，展开，取出，晾干，用碘蒸汽熏蒸3min后取出，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
吴茱萸的薄层鉴别：取吴茱萸次碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下优选的供试品溶液各8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为12:3:1的正己烷-乙酸乙酯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
陈皮的薄层鉴别：取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6:3:1.2的甲苯-丙酮-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％三氯化铝乙醇溶液，在110℃加热10min，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)姜功胃安颗粒中盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷的含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2020版四部通则0512)测定
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以pH值为2.5的0.03mol/L磷酸二氢钾缓冲液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为290nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：分别精密称取盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解并制成每1mL分别含20ug、50ug、0.4mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取颗粒，研细，称取5g，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，回流提取30min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～20μL，注入液相色谱仪测定，即得。
本品每袋含十大功劳以盐酸小檗碱(C20H17NO4)计，不得少于0.10mg；含元胡以延胡索乙素(C21H25NO4)计，不得少于0.15mg；含陈皮以橙皮苷(C28H34O15)计，不得少于10.0mg。
为了进一步验证本发明的有效性，发明人进行了一系列的验证试验，具体如下：
一、姜功胃安颗粒成品质量控制研究
1、姜功胃安颗粒中药材薄层色谱选择考察
1.1试剂与试药
姜功胃安颗粒样品(批号：20210116、20210628、20211021、20220213、20220509)；十大功劳对照药材(批号：121461-201503；来源：中国食品药品检定研究院)；盐酸小檗碱对照品(批号：110713-202015；来源：中国食品药品检定研究院)；延胡索乙素对照品(批号：110726-202020；来源：中国食品药品检定研究院)；元胡对照药材(批号：120928-202110；中国食品药品检定研究院)；吴茱萸次碱对照品(批号：110801-202109；来源：中国食品药品检定研究院)；橙皮苷对照品(批号：110721-202220；来源：中国食品药品检定研究院)；硅胶G薄层板(来源：青岛海洋化工厂分厂生产)；自制硅胶G薄层板；试剂：甲醇、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇、乙醚、丙酮、氯仿等为分析纯。
1.2薄层色谱方法的选择
常见的薄层色谱有硅胶薄层层析、纸层析、聚酰胺薄层层析等。纸层析适用于大极性成分如多糖类成分，聚酰胺层析适用于含有羟基较多的成分，而硅胶适合于低极性和中等极性化合物，适合于十大功劳、元胡、吴茱萸、陈皮中化合物的分离,故选择硅胶层析进行实验。
1.3供试品及对照品的制备
目前姜功胃安颗粒的原质量标准中还没有涉及处方中各药材薄层鉴别和含量测定，为了进一步提升姜功胃安颗粒的质量标准，建立了姜功胃安颗粒中十大功劳、元胡、吴茱萸、陈皮的薄层鉴别；具体如下：
(1)十大功劳的薄层鉴别
取本品5g，研细，加甲醇20ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣用0.1％氢氧化钠溶液20ml溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5，用三氯甲烷25ml振摇提取，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取十大功劳对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2020年版四部通则0502)试验，吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-水(7:3:2:0.1)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
按照国家药典委员会《中药分析方法验证指导原则实施细则》的相关要求进行以下方法学耐用性考察。
①温度的考察：进行了室温(25℃)、低温(5℃)和高温(40℃)的考察，结果均较好。
(见图1、2、3)
②湿度的考察：进行了高湿度(72％)和低湿度(32％)的考察，结果均较好。(见图4、5)
③不同薄层硅胶G板的考察：共试验两种薄层硅胶G板，分别为青岛海洋化工有限公司及手铺硅胶G板。(见图1、6)
结论：在此试验条件下，供试品色谱中在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果表明，分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，可以作为成品质量控制方法。
(2)元胡的薄层鉴别
方法一：取本品5g,研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10ml,合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取缺延胡索阴性样品5g,同法制成阴性对照溶液。另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2020年版四部通则0502)试验，吸取上述3种溶液各5～10μl，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(10:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，未显相同颜色的荧光斑点。见图7。
方法二：取元胡对照药材1g，照“十大功劳”鉴别供试品制备方法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2020年版四部通则0502)试验，吸取上述2种溶液和“十大功劳”鉴别项下供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-异丙醇(5:1)为展开剂，展开，取出，晾干，用碘蒸汽熏蒸2分钟后取出，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
①温度的考察：进行了室温(25℃)、低温(5℃)和高温(40℃)的考察，结果均较好。
(见图8、9、10)
②湿度的考察：进行了高湿度(72％)和低湿度(32％)的考察，结果均较好。(见图11、12)
③不同薄层硅胶G板的考察：共试验两种薄层硅胶G板，分别为青岛海洋化工有限公司及手铺硅胶G板。(见图8、13)
结论：在此试验条件下，供试品色谱中在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果表明，分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，可以作为成品质量控制方法。
(3)吴茱萸的薄层鉴别
取吴茱萸次碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2020年版四部通则0502)试验，吸取上述对照品溶液和“十大功劳”鉴别项下供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以己烷-乙酸乙酯-丙酮(10：3：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
①温度的考察：进行了室温(25℃)、低温(5℃)和高温(40℃)的考察，结果均较好。
(见图14、15、16)
②湿度的考察：进行了高湿度(72％)和低湿度(32％)的考察，结果较好。(见图17、18)
③不同薄层硅胶G板的考察：共试验两种薄层硅胶G板，分别为青岛海洋化工有限公司及手铺硅胶G板。(见图14、19)
结论：供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果表明，分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，可以作为成品质量控制方法。
(4)陈皮的薄层鉴别
取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2020年版四部通则0502)试验吸取上述对照品溶液和“十大功劳”鉴别项下供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以①三氯甲烷-甲醇-水(14：6：2)的下层溶液、②以甲苯-丙酮-水(6：3：1)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。展开剂①分离效果较差，展开剂②分离符合要求，阴性对照无干扰。见图20、21。
按照国家药典委员会《中药分析方法验证指导原则实施细则》的相关要求进行以下方法学耐用性考察。
①温度的考察：进行了室温25℃、低温5℃和高温40℃的考察，结果均较好。(见图21、22、23)
②湿度的考察：进行了高湿度72％和低湿度32％的考察，结果均较好。(见图24、25)
③不同薄层硅胶G板的考察：共试验两种薄层硅胶G板，分别为青岛海洋化工有限公司及手铺硅胶G板。(见图21、26)
结论：此条件下，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果表明，分离度好，斑点显色清晰，且阴性对照无干扰，可以作为成品质量控制方法。
2、处方中药味有效成分含量测定
本发明采用同一方法测定了处方中十大功劳的有效成分盐酸小檗碱、元胡的有效成分延胡索乙素和陈皮的有效成分橙皮苷，实现了多种有效成分的“一测多评”，大大缩短了分析检测时间，避免了试药试剂浪费，降低了设备能耗，同时，由于本检测方法测定的是多指标成分，因此大幅提高了药品质量控制标准，有利于保障患者的用药安全，提升药品质量。
(1)色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.03mol/L磷酸二氢钾缓冲液(磷酸调节pH值至2.5)为流动相B，按下表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为290nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000。
表1梯度洗脱表
(2)供试品溶液的制备
称取颗粒，研细，称取5g，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，回流提取30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
(3)对照品溶液的制备
分别精密称取盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷对照品适量,加甲醇溶解并制成每1mL分别含20ug、50ug、0.4mg的对照品溶液。
(4)系统适用性实验
取上述对照品溶液和供试品溶液,按照色谱条件进样检测,结果见图27。盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷的出峰时间分别为8.182、20.076、31.823min，表明供试品中其他组分不干扰橙皮苷、延胡索乙素和盐酸小檗碱的测定，并且待测成分与其他峰的分离度良好，溶剂对检测物质无干扰。
(5)专属性实验
分别取处方中除十大功劳、元胡和陈皮外的其他药材，按制剂工艺分别制得阴性制剂样品，分别取阴性制剂样品5g，按照供试品溶液制备方法分别制备阴性供试品溶液。
分别精密吸取各阴性供试品溶液10μL注入液相色谱仪，进行测定，结果见图27。结果显示，阴性样品的色谱图中在与对照品相同保留时间位置上无吸收峰,表明该方法的专属性好、灵敏度高。
(6)线性关系考察
分别精密吸取混合对照品溶液2μL，6μL，10μL，14μL，18μL，22μL，分别按照上述色谱条件进样测定，以浓度为横坐标(x)、峰面积为纵坐标(y)，进行回归，结果见表2，表明线性关系良好。
表2线性关系考察结果
(7)精密度实验
精密吸取混合对照品溶液10μL，连续进样6次，分别检测橙皮苷、延胡索乙素和盐酸小檗碱的峰面积，计算RSD值。计算得橙皮苷、延胡索乙素和盐酸小檗碱的RSD值分别为0.73％、1.04％、1.15％，表明仪器的精密度良好。结果见表3。
表3精密度实验结果
(8)稳定性实验
精密吸取供试品溶液10μL，分别于0、2、4、6、8h注入液相色谱仪检测，记录峰面积，计算RSD值。橙皮苷、延胡索乙素和盐酸小檗碱的RSD值分别为0.96％、1.22％、1.35％，表明供试品溶液在8h内稳定性良好。结果见表4。
表4稳定性实验结果
(9)重复性实验
精密称取样品6份，按照供试品溶液制备方法制得供试品溶液，按照前述色谱条件进样检测。计算3种成分的平均含量和RSD值。计算得橙皮苷、延胡索乙素和盐酸小檗碱的RSD值分别为0.83％、1.10％、1.41％，表明该样品制备方法稳定可靠、重复性好。结果见表5。
表5重复性实验结果
(10)加样回收率实验
精密称取样品6份，每2.5g，按各成分在样品中的含量与相应对照品为1：1的比例，精密加入各对照品，按照供试品制备方法制成供试品溶液，进样分析，计算各成分的平均回收率及RSD值。结果见表6。计算得橙皮苷、延胡索乙素和盐酸小檗碱的平均回收率分别为99.69％、99.17％、99.24％，RSD值分别为1.25％、2.32％、2.18％，表明该方法的回收率良好。
表6线性关系考察结果
(11)样品含量测定
精密称定5个批次的姜功胃安颗粒样品，按供试品制备方法制备样品，按照前述色谱条件进样检测，记录3种成分的峰面积,计算供试品中橙皮苷、延胡索乙素和盐酸小檗碱的含量。结果见表7。
表7样品含量测定结果
根据样品检测结果，暂定本品含量限度为：本品每袋含十大功劳以盐酸小檗碱(C20H17NO4)计，不得少于0.10mg；含元胡以延胡索乙素(C21H25NO4)计，不得少于0.15mg；含陈皮以橙皮苷(C28H34O15)计，不得少于10.0mg。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (5)

1.一种姜功胃安颗粒的质量控制方法，其特征在于，所述方法包括：姜功胃安颗粒中十大功劳、元胡、吴茱萸和陈皮四味药材的薄层鉴别；姜功胃安颗粒中盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷的含量测定；
姜功胃安颗粒中十大功劳的薄层鉴别为：取本品3-8g，研细，加甲醇10-30ml，加热回流20-40min，滤过，滤液蒸干，残渣用0.1％氢氧化钠溶液15-30ml溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至4.5-5.5，用三氯甲烷20-30ml振摇提取，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣用甲醇3-8ml溶解，作为供试品溶液；另取十大功劳对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述3种溶液各1-3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为7:3:2:0.1-0.2的甲苯-乙酸乙酯-丙酮-水为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
姜功胃安颗粒中元胡的薄层鉴别为：取元胡对照药材1g，照上述“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述2种溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各3-8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5:0.8-1.2的三氯甲烷-异丙醇为展开剂，展开，取出，晾干，用碘蒸汽熏蒸1-3min后取出，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
姜功胃安颗粒中吴茱萸的薄层鉴别为：取吴茱萸次碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各3-8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8-12:3:1的正己烷-乙酸乙酯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5-10％硫酸乙醇溶液，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
姜功胃安颗粒中陈皮的薄层鉴别为：取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各3-8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6:3:0.8-1.2的甲苯-丙酮-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3-10％三氯化铝乙醇溶液，在100-110℃加热3-10min，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
姜功胃安颗粒中盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷的含量测定为：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以pH值为2.5的0.03mol/L磷酸二氢钾缓冲液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为290nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
梯度洗脱程序为：0～15分钟，20～25％流动相A和80～75％流动相B；15～35分钟，25～30％流动相A和75～70％流动相B；
对照品溶液的制备：分别精密称取盐酸小檗碱、延胡索乙素和橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解并制成每1mL分别含20μg、50μg、0.4mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取颗粒，研细，称取5g，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，回流提取30min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述姜功胃安颗粒中十大功劳的薄层鉴别为：取本品5g，研细，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用0.1％氢氧化钠溶液20ml溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5，用三氯甲烷25ml振摇提取，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣用甲醇5ml溶解，作为供试品溶液；另取十大功劳对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为7:3:2:0.1的甲苯-乙酸乙酯-丙酮-水为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.根据权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于，所述姜功胃安颗粒中元胡的薄层鉴别为：取元胡对照药材1g，照上述“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述2种溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5:1的三氯甲烷-异丙醇为展开剂，展开，取出，晾干，用碘蒸汽熏蒸1-3min后取出，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
4.根据权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于，所述姜功胃安颗粒中吴茱萸的薄层鉴别为：取吴茱萸次碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10:3:1的正己烷-乙酸乙酯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
5.根据权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于，所述姜功胃安颗粒中陈皮的薄层鉴别为：取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液和“十大功劳”薄层鉴别项下供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6:3:1的甲苯-丙酮-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热5min，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
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