CN116296703B - 一种荧光染色液在制备阴道炎检测试剂中的应用 - Google Patents
一种荧光染色液在制备阴道炎检测试剂中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116296703B CN116296703B CN202310553557.7A CN202310553557A CN116296703B CN 116296703 B CN116296703 B CN 116296703B CN 202310553557 A CN202310553557 A CN 202310553557A CN 116296703 B CN116296703 B CN 116296703B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- parts
- methacrylamide
- stirring
- fluorescent
- staining solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 title claims abstract description 39
- 239000000243 solution Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 4
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 title claims description 3
- 201000008100 Vaginitis Diseases 0.000 title description 3
- FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N methacrylamide Chemical class CC(=C)C(N)=O FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 46
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims abstract description 16
- PYIDGJJWBIBVIA-UYTYNIKBSA-N lauryl glucoside Chemical compound CCCCCCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O PYIDGJJWBIBVIA-UYTYNIKBSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 229940048848 lauryl glucoside Drugs 0.000 claims abstract description 16
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims abstract description 16
- CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 3-O-Caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 0.000 claims abstract description 14
- PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N Caffeoylquinic acid Natural products CC(CCC(=O)C(C)C1C(=O)CC2C3CC(O)C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(=O)O PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N Neochlorogenin-saeure Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims abstract description 14
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 229940074393 chlorogenic acid Drugs 0.000 claims abstract description 14
- FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N chlorogenic acid Natural products O[C@@H]1C[C@](O)(C[C@@H](CC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 235000001368 chlorogenic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N cis-3-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims abstract description 14
- COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O Chemical compound CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229960003699 evans blue Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 239000006081 fluorescent whitening agent Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000001744 Sodium fumarate Substances 0.000 claims abstract description 11
- MSJMDZAOKORVFC-SEPHDYHBSA-L disodium fumarate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)\C=C\C([O-])=O MSJMDZAOKORVFC-SEPHDYHBSA-L 0.000 claims abstract description 11
- 229940005573 sodium fumarate Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 235000019294 sodium fumarate Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 51
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 22
- ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N ammonium persulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- RQVLGLPAZTUBKX-VKHMYHEASA-N L-vinylglycine Chemical compound C=C[C@H](N)C(O)=O RQVLGLPAZTUBKX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 15
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 15
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 13
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 12
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 11
- 229910001870 ammonium persulfate Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 10
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 10
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 9
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 9
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 claims description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 9
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 abstract description 11
- 238000010186 staining Methods 0.000 abstract description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 7
- 239000003906 humectant Substances 0.000 abstract description 7
- 238000005282 brightening Methods 0.000 abstract description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000009044 synergistic interaction Effects 0.000 abstract 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 18
- 238000012757 fluorescence staining Methods 0.000 description 12
- 208000007074 Trichomonas Vaginitis Diseases 0.000 description 8
- 208000025206 Trichomonas vaginitis urogenital infection Diseases 0.000 description 8
- 201000007096 Vulvovaginal Candidiasis Diseases 0.000 description 8
- 208000004926 Bacterial Vaginosis Diseases 0.000 description 7
- 208000037009 Vaginitis bacterial Diseases 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 229940072417 peroxidase Drugs 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- 229960002645 boric acid Drugs 0.000 description 2
- 235000010338 boric acid Nutrition 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 208000036649 Dysbacteriosis Diseases 0.000 description 1
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 description 1
- 208000007984 Female Infertility Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010021928 Infertility female Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 208000032159 Vaginal inflammation Diseases 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 description 1
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Chemical group 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000004630 mental health Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000005315 stained glass Substances 0.000 description 1
- 206010046901 vaginal discharge Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
- C08F220/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and only one being terminated by only one carboxyl radical or a salt, anhydride ester, amide, imide or nitrile thereof
- C08F220/02—Monocarboxylic acids having less than ten carbon atoms; Derivatives thereof
- C08F220/52—Amides or imides
- C08F220/54—Amides, e.g. N,N-dimethylacrylamide or N-isopropylacrylamide
- C08F220/56—Acrylamide; Methacrylamide
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/302—Stain compositions
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及一种用于检测的荧光染色液，在本发明方案中，通过光增白剂28、改性甲基丙烯酰胺和伊文思蓝协同增效增强被检样本的染色效果，能够增强荧光染色效果、稳定染色液、延长被检样本的保存时间，并减少组织切片染色过程中的脱片现象，所述荧光染色液按重量份数包括以下原料：荧光增白剂28：0.5‑0.8份、改性甲基丙烯酰胺：0.5‑0.9份、伊文思蓝：0.02‑0.04份、富马酸钠：0.1‑0.15份、绿原酸：0.1‑0.15份、氨基酸：2‑2.2份、保湿剂：1.5‑1.8份、缓冲剂：0.1‑0.12份、过氧化酶：0.1‑0.12份和月桂基葡糖苷：3‑3.3份；属于荧光染色液的技术领域。
Description
技术领域
本发明属于荧光染色液的技术领域，涉及一种用于检测的荧光染色液。
背景技术
阴道炎症是较常见的临床病症，可引起阴道分泌物增多和瘙痒，影响女性身心健康；同时阴道菌群的失调会使得宫腔微生态改变，可导致子宫内膜的损伤进而引起多种妇科疾病，严重时可导致女性不孕、流产等的发生。通过阴道分泌物对炎症疾病作出快速准确的诊断，是临床治疗的重要前提。阴道分泌物常规检查是目前临床最常用的一种检验项目。
但市面的一些荧光染色液存在染色效果欠佳、需要将不同的组份分开配置和储存，形成不同包装的试剂配合使用，否则染色液会有结晶和分层现象，生产成本高，使用步骤繁琐、被检样本无法长期保存留档，组织切片染色过程中容易脱片等。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于检测的荧光染色液，在本发明方案中，通过光增白剂28、改性甲基丙烯酰胺和伊文思蓝协同增效增强被检样本的染色效果，能够增强荧光染色效果、稳定染色液、延长被检样本的保存时间，并减少组织切片染色过程中的脱片现象。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种用于检测的荧光染色液，所述荧光染色液按重量份数包括以下原料：荧光增白剂28：0.5-0.8份、改性甲基丙烯酰胺：0.5-0.9份、伊文思蓝：0.02-0.04份、富马酸钠：0.1-0.15份、绿原酸：0.1-0.15份、氨基酸：2-2.2份、保湿剂：1.5-1.8份、缓冲剂：0.1-0.12份、过氧化酶：0.1-0.12份和月桂基葡糖苷：3-3.3份。
在本发明方案中，荧光增白剂28、改性甲基丙烯酰胺和伊文思蓝是荧光染色的主要成分，能够增强被检样本的染色效果，并使检测结果更加准确；富马酸钠、绿原酸和硼酸成分能够起到稳定荧光染色液的作用，避免染色液出现结晶和分层现象；苏氨酸和山梨醇则能够使被检样本长期保存留档，避免样本变质导致结果不准确；过氧化酶和月桂基葡糖苷则是增强该配方中各成分的协同增效作用。
作为本发明的一种优选技术方案，所述缓冲剂为硼酸和碳酸钾中的一种或多种；
作为本发明的一种优选技术方案，所述保湿剂为山梨醇和甘油醇中的一种或两种；
作为本发明的一种优选技术方案，所述氨基酸为精氨酸、苏氨酸和谷氨酸中的一种或多种。
本发明方案公开所述改性甲基丙烯酰胺的制备方法，包括以下步骤：
（1）将甲基丙烯酰胺、L-乙烯基甘氨酸和去离子水搅拌混合均匀，得到混合溶液；
（2）将混合溶液加入三甲胺并调节pH值后，加入过硫酸铵，在30-40℃下加热反应2-4h，过滤取固体物，得到共聚物；
（3）将共聚物洗涤、干燥后，得到改性甲基丙烯酰胺。
作为本发明的一种优选技术方案，甲基丙烯酰胺、L-乙烯基甘氨酸、去离子水和过硫酸铵的用量比为80g：20g：1500ml：1g；所述搅拌混合条件为在转速100-200r/min搅拌混合10-20min。
作为本发明的一种优选技术方案，在步骤（2）中，所述三甲胺的质量浓度为1-5%，所述三甲胺的用量为将pH值调节至7.2-7.5。
作为本发明的一种优选技术方案，在步骤（3）中，所述洗涤条件为采用甲醇洗涤3-4次，所述干燥条件为在50-60℃温度下，干燥1.5-2h。
本发明方案公开了一种用于检测的荧光染色液，所述荧光染色液的制备方法包括以下步骤：
1）将缓冲剂溶解在蒸馏水中，加热并搅拌至完全溶解，得到缓冲剂溶液；
2）将改性甲基丙烯酰胺慢慢加入缓冲剂溶液中，依次加入保湿剂、荧光增白剂28、过氧化酶、绿原酸、月桂基葡糖苷和氨基酸加入混合液中，并搅拌均匀至完全溶解，得到混合液；
3）将伊文思蓝加入混合液中，并搅拌均匀，过滤固体物，调整pH值后，得到荧光染色液。
作为本发明的一种优选技术方案，在步骤1）中，所述加热温度为60-65℃，所述搅拌条件为在转速为100-200r/min下搅拌10-15min。
作为本发明的一种优选技术方案，在步骤2）中，所述搅拌均匀的条件为在温度为60-65℃、转速为150-300r/min下搅拌20-30min。
作为本发明的一种优选技术方案，在步骤3）中，所述搅拌均匀条件为在温度为60-65℃、转速为100-200r/min下搅拌5-10min；所述调整pH值至7.0-7.5。
本发明的有益效果：
在本发明方案中，通过不同成分之间能够增强彼此的作用，从而使荧光染色效果更好；其中，荧光增白剂、改性甲基丙烯酰胺和伊文思蓝相互作用，能够增强被检样本的荧光强度；富马酸钠、绿原酸和硼酸相互作用，可以使染色液更加稳定；苏氨酸和山梨醇相互作用，则能够延长被检样本的保存时间。同时，过氧化酶和月桂基葡糖苷也能加强各成分之间的协同效应，从而使整个配方的效果更加优异。
L-乙烯基甘氨酸是一种氨基酸衍生物，与甲基丙烯酰胺共聚可以形成一种水溶性改性甲基丙烯酰胺。由于L-乙烯基甘氨酸具有羧基、酰胺基和氨基等官能团，可以与甲基丙烯酰胺形成氢键、范德瓦尔斯力的相互作用，从而增强改性甲基丙烯酰胺的性能，提高了亲水性和可溶性，使其更易于分散在水中，此外，由于L-乙烯基甘氨酸中的羧基可以与富马酸钠形成盐桥，从而增强共聚物分子的交联和稳定性，显著增强改性甲基丙烯酰胺在荧光染色液中的稳定性、分散性和染色效果。
附图说明
图1-6为分别为采用本发明实施例3、对比例1-5制得的荧光染色液后，在荧光显微镜下观察到的确诊的外阴阴道假丝酵母菌病的阴道分泌物病样本的荧光染色图；
图7-12为采用本发明实施例3、对比例1-5制得的荧光染色液后，在荧光显微镜下观察到的确诊的细菌性阴道的阴道分泌物病样本的荧光染色图；
图13-18为采用本发明实施例3、对比例1-5制得的荧光染色液后，在荧光显微镜下观察到的确诊的滴虫性阴道炎分泌物病样本的荧光染色图。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明为实现预定发明目的所采取的技术手段及功效，以下结合实施例，对依据本发明的具体实施方式、结构、特征及其功效，详细说明如下。
实施例1
一种用于检测的荧光染色液，所述荧光染色液按重量份数包括以下原料：荧光增白剂28：0.5份、改性甲基丙烯酰胺：0.5份、伊文思蓝：0.02份、富马酸钠：0.1份、绿原酸：0.1份、苏氨酸：2份、山梨醇：1.5份、硼酸：0.1份、过氧化酶：0.1份和月桂基葡糖苷：3份。
所述改性甲基丙烯酰胺的制备方法包括以下步骤：
（1）将甲基丙烯酰胺、L-乙烯基甘氨酸和去离子水搅拌混合均匀，得到混合溶液；其中，甲基丙烯酰胺、L-乙烯基甘氨酸、去离子水和过硫酸铵的用量比为80g：20g：1500ml：1g；所述搅拌混合条件为在转速100r/min搅拌混合10min；
（2）将混合溶液加入三甲胺并调节pH值后，加入过硫酸铵，在30℃下加热反应2h，过滤取固体物，得到共聚物；其中，所述三甲胺的质量浓度为1%，所述三甲胺的用量为将pH值调节至7.2；
（3）将共聚物洗涤、干燥后，得到改性甲基丙烯酰胺；其中，所述洗涤条件为采用甲醇洗涤3次，所述干燥条件为在50℃温度下，干燥1.5h。
一种用于检测的荧光染色液的制备方法包括以下步骤：
1）将缓冲剂溶解在蒸馏水中，加热并搅拌至完全溶解，得到缓冲剂溶液；其中，所述加热温度为60℃，所述搅拌条件为在转速为100r/min下搅拌10min；
2）将改性甲基丙烯酰胺慢慢加入缓冲剂溶液中，依次加入保湿剂、荧光增白剂28、过氧化酶、绿原酸、月桂基葡糖苷和氨基酸加入混合液中，并搅拌均匀至完全溶解，得到混合液；其中，所述搅拌均匀的条件为在温度为60℃、转速为150r/min下搅拌20min
3）将伊文思蓝加入混合液中，并搅拌均匀，过滤固体物，调整pH值后，得到荧光染色液；其中，所述搅拌均匀条件为在温度为60℃、转速为100r/min下搅拌5min；所述调整pH值至7.0。
实施例2
一种用于检测的荧光染色液，所述荧光染色液按重量份数包括以下原料：荧光增白剂28：0.65份、改性甲基丙烯酰胺：0.7份、伊文思蓝：0.03份、富马酸钠：0.12份、绿原酸：0.12份、苏氨酸：2.1份、山梨醇：1.65份、硼酸：0.11份、过氧化酶：0.11份和月桂基葡糖苷：3.15份。
所述改性甲基丙烯酰胺的制备方法包括以下步骤：
（1）将甲基丙烯酰胺、L-乙烯基甘氨酸和去离子水搅拌混合均匀，得到混合溶液；其中，甲基丙烯酰胺、L-乙烯基甘氨酸、去离子水和过硫酸铵的用量比为80g：20g：1500ml：1g；所述搅拌混合条件为在转速150r/min搅拌混合15min；
（2）将混合溶液加入三甲胺并调节pH值后，加入过硫酸铵，在35℃下加热反应3h，过滤取固体物，得到共聚物；其中，所述三甲胺的质量浓度为3%，所述三甲胺的用量为将pH值调节至7.3；
（3）将共聚物洗涤、干燥后，得到改性甲基丙烯酰胺；其中，所述洗涤条件为采用甲醇洗涤3次，所述干燥条件为在55℃温度下，干燥1.8h。
一种用于检测的荧光染色液的制备方法包括以下步骤：
1）将缓冲剂溶解在蒸馏水中，加热并搅拌至完全溶解，得到缓冲剂溶液；其中，所述加热温度为65℃，所述搅拌条件为在转速为200r/min下搅拌15min；
2）将改性甲基丙烯酰胺慢慢加入缓冲剂溶液中，依次加入保湿剂、荧光增白剂28、过氧化酶、绿原酸、月桂基葡糖苷和氨基酸加入混合液中，并搅拌均匀至完全溶解，得到混合液；其中，所述搅拌均匀的条件为在温度为65℃、转速为300r/min下搅拌30min
3）将伊文思蓝加入混合液中，并搅拌均匀，过滤固体物，调整pH值后，得到荧光染色液；其中，所述搅拌均匀条件为在温度为65℃、转速为200r/min下搅拌10min；所述调整pH值至7.5。
实施例3
一种用于检测的荧光染色液，所述荧光染色液按重量份数包括以下原料：荧光增白剂28：0.8份、改性甲基丙烯酰胺：0.9份、伊文思蓝：0.04份、富马酸钠：0.15份、绿原酸：0.15份、苏氨酸：2.2份、山梨醇：1.8份、硼酸：0.12份、过氧化酶：0.12份和月桂基葡糖苷：3.3份。
所述改性甲基丙烯酰胺的制备方法包括以下步骤：
（1）将甲基丙烯酰胺、L-乙烯基甘氨酸和去离子水搅拌混合均匀，得到混合溶液；其中，甲基丙烯酰胺、L-乙烯基甘氨酸、去离子水和过硫酸铵的用量比为80g：20g：1500ml：1g；所述搅拌混合条件为在转速200r/min搅拌混合20min；
（2）将混合溶液加入三甲胺并调节pH值后，加入过硫酸铵，在40℃下加热反应4h，过滤取固体物，得到共聚物；其中，所述三甲胺的质量浓度为5%，所述三甲胺的用量为将pH值调节至7.5；
（3）将共聚物洗涤、干燥后，得到改性甲基丙烯酰胺；其中，所述洗涤条件为采用甲醇洗涤4次，所述干燥条件为在60℃温度下，干燥2h。
一种用于检测的荧光染色液的制备方法包括以下步骤：
1）将缓冲剂溶解在蒸馏水中，加热并搅拌至完全溶解，得到缓冲剂溶液；其中，所述加热温度为65℃，所述搅拌条件为在转速为200r/min下搅拌15min；
2）将改性甲基丙烯酰胺慢慢加入缓冲剂溶液中，依次加入保湿剂、荧光增白剂28、过氧化酶、绿原酸、月桂基葡糖苷和氨基酸加入混合液中，并搅拌均匀至完全溶解，得到混合液；其中，所述搅拌均匀的条件为在温度为65℃、转速为300r/min下搅拌30min
3）将伊文思蓝加入混合液中，并搅拌均匀，过滤固体物，调整pH值后，得到荧光染色液；其中，所述搅拌均匀条件为在温度为65℃、转速为200r/min下搅拌10min；所述调整pH值至7.5。
对比例1
一种用于检测的荧光染色液，所述荧光染色液按重量份数包括以下原料：荧光增白剂28：0.8份、甲基丙烯酰胺：0.9份、伊文思蓝：0.04份、富马酸钠：0.15份、绿原酸：0.15份、苏氨酸：2.2份、山梨醇：1.8份、硼酸：0.12份、过氧化酶：0.12份和月桂基葡糖苷：3.3份。
与实施例3相比，不同之处在于，对比例1使用甲基丙烯酰胺代替改性甲基丙烯酰胺，其余参数和操作步骤均不变。
对比例2
一种用于检测的荧光染色液，所述荧光染色液按重量份数包括以下原料：荧光增白剂28：0.8份、L-乙烯基甘氨酸：0.9份、伊文思蓝：0.04份、富马酸钠：0.15份、绿原酸：0.15份、苏氨酸：2.2份、山梨醇：1.8份、硼酸：0.12份、过氧化酶：0.12份和月桂基葡糖苷：3.3份。
与实施例3相比，不同之处在于，对比例2使用L-乙烯基甘氨酸代替改性甲基丙烯酰胺，其余参数和操作步骤均不变。
对比例3
与实施例3相比，不同之处在于，对比例3的荧光增白剂28、改性甲基丙烯酰胺和伊文思蓝的用量差异如表1所示。
表1
对比例4-5
与实施例3相比，不同之处在于，对比例4-5的过氧化酶和月桂基葡糖苷的用量差异如表2所示。
表2
实验测试
（1）选择确诊的外阴阴道假丝酵母菌病、细菌性阴道、滴虫性阴道炎的阴道分泌物病样本，用移液器吸取5μL阴道分泌物样本稀释液至载玻片中间区域并进行固定，然后采用移液器将50μL实施例1-3和对比例1-5制得的荧光染色液与样本稀释液进行覆盖并静置30s，接着取盖玻片直接加盖染色完成的载玻片，吸取多余液体后放置纯水中清洗，用以甘油进行封片；
（2）取已封片的样片置于380-400nm波段的荧光显微镜下进行直接镜检，观察微生物菌群的形态及荧光强度。
如图1、图7和图13所示，图1、图7和图13分别为采用本实施例3制得的妇科荧光染色液在荧光显微镜下分别观察到的外阴阴道假丝酵母菌病样本、细菌性阴道病样本和滴虫性阴道炎样本的荧光染色图；
如图2、图8和图14所示，图2、图8和图14分别为采用本对比例1制得的妇科荧光染色液在荧光显微镜下分别观察到的外阴阴道假丝酵母菌病样本、细菌性阴道病样本和滴虫性阴道炎样本的荧光染色图；
如图3、图9和图15所示，图3、图9和图15分别为采用本对比例2制得的妇科荧光染色液在荧光显微镜下分别观察到的外阴阴道假丝酵母菌病样本、细菌性阴道病样本和滴虫性阴道炎样本的荧光染色图；
如图4、图10和图16所示，图4、图10和图16分别为采用本对比例3制得的妇科荧光染色液在荧光显微镜下分别观察到的外阴阴道假丝酵母菌病样本、细菌性阴道病样本和滴虫性阴道炎样本的荧光染色图；
如图5、图11和图17所示，图5、图11和图17分别为采用本对比例4制得的妇科荧光染色液在荧光显微镜下分别观察到的外阴阴道假丝酵母菌病样本、细菌性阴道病样本和滴虫性阴道炎样本的荧光染色图；
如图6、图12和图18所示，图6、图12和图18分别为采用本对比例5制得的妇科荧光染色液在荧光显微镜下分别观察到的外阴阴道假丝酵母菌病样本、细菌性阴道病样本和滴虫性阴道炎样本的荧光染色图。
实验测试结果如表3所示。
表3
从表3测试结果结合附图1-18可知，实施例1-3与对比例1-5相比，实施例1-3制得的荧光染色液具有显著的诱导标记与标记性能，且标记有效、染色明显。
在本发明方案中，通过不同成分之间能够增强彼此的作用，实现对细胞和微生物的诱导标记与标记，从而使荧光染色效果更好。
其中，荧光增白剂、改性甲基丙烯酰胺和伊文思蓝相互作用，能够增强被检样本的荧光强度；同时，过氧化酶和月桂基葡糖苷也能加强各成分之间的协同效应，从而使整个配方的效果更加优异。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简介修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (1)
1.一种荧光染色液在制备阴道炎检测试剂中的应用，其特征在于，所述荧光染色液按重量份数包括以下原料：荧光增白剂28：0.5-0.8份、改性甲基丙烯酰胺：0.5-0.9份、伊文思蓝：0.02-0.04份、富马酸钠：0.1-0.15份、绿原酸：0.1-0.15份、苏氨酸：2-2.2份、山梨醇：1.5-1.8份、硼酸：0.1-0.12份、过氧化酶：0.1-0.12份和月桂基葡糖苷：3-3.3份；
所述改性甲基丙烯酰胺的制备方法包括以下步骤：
（1）将甲基丙烯酰胺、L-乙烯基甘氨酸和去离子水搅拌混合均匀，得到混合溶液；所述搅拌混合条件为在转速100-200r/min搅拌混合10-20min；
（2）混合溶液中加入三甲胺调节pH值后，加入过硫酸铵，在30-40℃下加热反应2-4h，过滤取固体物，得到共聚物；其中，所述三甲胺的质量浓度为1-5%，所述三甲胺的用量为将pH值调节至7.2-7.5；
（3）将共聚物洗涤、干燥后，得到改性甲基丙烯酰胺；其中，所述洗涤条件为采用甲醇洗涤3-4次，所述干燥条件为在50-60℃温度下，干燥1.5-2h；
其中，甲基丙烯酰胺、L-乙烯基甘氨酸、去离子水和过硫酸铵的用量比为80g：20g：1500ml：1g。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310553557.7A CN116296703B (zh) | 2023-05-17 | 2023-05-17 | 一种荧光染色液在制备阴道炎检测试剂中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310553557.7A CN116296703B (zh) | 2023-05-17 | 2023-05-17 | 一种荧光染色液在制备阴道炎检测试剂中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116296703A CN116296703A (zh) | 2023-06-23 |
| CN116296703B true CN116296703B (zh) | 2023-07-28 |
Family
ID=86817160
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310553557.7A Active CN116296703B (zh) | 2023-05-17 | 2023-05-17 | 一种荧光染色液在制备阴道炎检测试剂中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116296703B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4920187A (en) * | 1987-01-12 | 1990-04-24 | Nippon Paint Co., Ltd. | Process for preparing particles having monodisperse particle size |
| CN101048551A (zh) * | 2004-10-27 | 2007-10-03 | 西巴特殊化学品控股有限公司 | 荧光增白剂组合物 |
| WO2015037578A1 (ja) * | 2013-09-13 | 2015-03-19 | 学校法人常翔学園 | 蛍光染色による芽胞の迅速な検出方法 |
| CN105950700A (zh) * | 2016-05-13 | 2016-09-21 | 南京汉瑞生物科技有限公司 | 一种真菌荧光染色剂 |
| CN106323925A (zh) * | 2016-08-11 | 2017-01-11 | 付微 | 一种检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂 |
| CN112525652A (zh) * | 2020-11-13 | 2021-03-19 | 广州翰德泽信医药科技有限公司 | 一种稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1252194C (zh) * | 2000-10-06 | 2006-04-19 | 佳能株式会社 | 测量液体组分的方法、液体组分、油墨组、在记录介质上形成着色部分的方法以及喷墨记录装置 |
-
2023
- 2023-05-17 CN CN202310553557.7A patent/CN116296703B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4920187A (en) * | 1987-01-12 | 1990-04-24 | Nippon Paint Co., Ltd. | Process for preparing particles having monodisperse particle size |
| CN101048551A (zh) * | 2004-10-27 | 2007-10-03 | 西巴特殊化学品控股有限公司 | 荧光增白剂组合物 |
| WO2015037578A1 (ja) * | 2013-09-13 | 2015-03-19 | 学校法人常翔学園 | 蛍光染色による芽胞の迅速な検出方法 |
| CN105950700A (zh) * | 2016-05-13 | 2016-09-21 | 南京汉瑞生物科技有限公司 | 一种真菌荧光染色剂 |
| CN106323925A (zh) * | 2016-08-11 | 2017-01-11 | 付微 | 一种检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂 |
| CN112525652A (zh) * | 2020-11-13 | 2021-03-19 | 广州翰德泽信医药科技有限公司 | 一种稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116296703A (zh) | 2023-06-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110940646B (zh) | 一种阴道微生物检测双重荧光染色液及其应用 | |
| CN102258003A (zh) | 一种液基细胞保存液 | |
| CN106198470A (zh) | 一种真菌检测荧光染色液及应用 | |
| CN108384539A (zh) | 一种绿色荧光碳量子点、制备方法及其应用 | |
| CN108344613A (zh) | 一种标记白带及宫颈脱落细胞病原菌的荧光染色试剂 | |
| CN113999219B (zh) | 一种双位点荧光探针及其合成方法和应用 | |
| CN107167356B (zh) | 一种尿液中细胞染色后快速显色的染色剂及其使用方法 | |
| CN116296703B (zh) | 一种荧光染色液在制备阴道炎检测试剂中的应用 | |
| CN108168983A (zh) | 一种真菌特殊染色的荧光试剂 | |
| CN106370503A (zh) | 有机速干封片剂 | |
| CN112525652A (zh) | 一种稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液 | |
| CN102321730A (zh) | 一种阴道炎联合检测试剂盒 | |
| CN106467923B (zh) | 一种增强真菌染色液及配制方法和应用 | |
| CN116773306A (zh) | 一种阴道分泌物荧光染色液及其制备方法 | |
| CN108148887A (zh) | 用于检测微生物感染的染色剂组合物及其制备方法 | |
| CN112129610B (zh) | 一种细菌荚膜染色方法及其用途 | |
| CN103884562B (zh) | 氯化醋酸as-d萘酚酯酶（as-dnce）染色液 | |
| CN111781177A (zh) | 一种检测试剂及其配制方法 | |
| JPS63263096A (ja) | 抗酸菌の改良染色法 | |
| CN108948053B (zh) | 一种稀土荧光水凝胶及制备方法和在细胞培养中的应用 | |
| CN114594244A (zh) | 一种全自动免疫组化染色机适配的低pH抗原修复缓冲液及其制备方法 | |
| CN104819886B (zh) | 一种细菌荚膜快速染色试剂及其染色方法 | |
| TWI625442B (zh) | 一種纖維材料的染色組成物及使用其之染色程序 | |
| CN112608055A (zh) | 防腐剂组合物及其制备方法和应用 | |
| CN114376939B (zh) | 一种多糖组合物及其制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |