CN116284468A - 一种金耳酸性多糖及其制备方法和在改善溃疡性结肠炎中的应用 - Google Patents

一种金耳酸性多糖及其制备方法和在改善溃疡性结肠炎中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种金耳酸性多糖及其制备方法和其在改善溃疡性结肠炎中的应用，属于天然产物开发领域。所述金耳酸性多糖包括甘露糖、木糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和鼠李糖，摩尔百分比分别为59.2％、23.2％、13.9％、1.6％、1.7％和0.4％；糖苷键连接方式为：1,2,3‑甘露糖，1,3‑甘露糖，T‑木糖，1,3‑木糖，1,4‑葡萄糖醛酸和T‑甘露糖。该金耳酸性多糖通过超声提取结合热水浸提，乙醇沉淀及离子层析纯化联合凝胶层析的纯化方法获得；实验证明，该金耳酸性多糖能有效改善溃疡性结肠炎症状，为溃疡性结肠炎药物的开发与研究奠定了基础。

Description

一种金耳酸性多糖及其制备方法和在改善溃疡性结肠炎中的 应用
技术领域
本发明涉及天然产物开发领域，特别是涉及一种金耳酸性多糖及其制备方法和在改善溃疡性结肠炎中的应用。
背景技术
溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种非特异性、复发性的慢性肠道炎症性疾病。虽然UC发病机制尚不明确，但病理学研究表明，UC患者多表现为肠道炎症，肠道微生物紊乱，肠道屏障功能受损等。目前治疗药物以氨基水杨酸类、皮质类固醇、免疫抑制剂等为主，但对UC患者疗效欠佳，有些患者因不良反应加重了身体负担。因此，开发无毒副作用的、可改善UC损伤作用的潜在药物具有重要意义。
金耳(Tremella aurantialbau)，隶属担子菌门，银耳目，耳包革科，耳包革属，寄生于毛韧革菌(Stereum hirsutum)。因其颜色金黄又称黄木耳，是一种物美价廉的优质食用真菌，具有较高的营养和药用价值，是重要的天然药物资源。目前，对金耳多糖改善溃疡性结肠炎的功效尚未见报道。因此，对其进行药用价值的开发和利用具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种金耳酸性多糖及其制备方法和在改善溃疡性结肠炎中的应用，以解决上述现有技术存在的问题，首次从金耳中提取及纯化得到的金耳酸性多糖，试验证明该金耳酸性多糖能够改善溃疡性结肠炎症状，有效降低溃疡性结肠炎的肠道损伤，改善微生物紊乱，提高肠道屏障功能以及降低炎症水平。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明还提供一种金耳酸性多糖，其包括甘露糖、木糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和鼠李糖，所述甘露糖、木糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和鼠李糖的摩尔百分比分别为59.2％、23.2％、13.9％、1.6％、1.7％和0.4％。
优选的是，所述金耳酸性多糖的糖苷键的连接方式为：1,2,3-甘露糖，1,3-甘露糖，T-木糖，1,3-木糖，1,4-葡萄糖醛酸和T-甘露糖。
本发明还提供一种所述的金耳酸性多糖的制备方法，包括以下步骤：对金耳子实体干品采用超声法和水提法结合的方式进行抽提，经过醇沉处理，提取金耳粗多糖，再采用离子层析法和凝胶层析法对所述金耳粗多糖纯化，获得金耳酸性多糖。
优选的是，所述制备方法具体包括以下步骤：
(1)将金耳子实体磨成粉末，与去离子水混匀，超声处理；
(2)经超声处理后的溶液再置于75℃的条件下进行水提取，之后经过滤、浓缩，使得水提取液浓缩至原体积的1/5-1/3，再用无水乙醇分离，经离心收集沉淀，得到金耳多糖粗提物；
(3)所述金耳多糖粗提物采用sevag法去除粗多糖中的蛋白组分后，经透析、冻干获得金耳多糖冻干物；
(4)采用离子层析法对所述金耳多糖冻干物进行分离纯化，得到金耳多糖组分TA1和TA 2，再采用凝胶层析对金耳多糖组分TA 2进一步分离纯化，得到金耳酸性多糖TA 2-1。
优选的是，步骤(1)中，金耳子实体粉末为100目，所述金耳多糖子实体粉末与去离子水的质量体积比为1:2。
优选的是，步骤(1)中，超声条件为：500W超声10分钟。
优选的是，步骤(2)中，水提取时间为3小时。
优选的是，步骤(3)中，所述金耳多糖粗提物与sevag试剂的体积比为1:2。
优选的是，步骤(4)中，离子层析法分离纯化的条件为：0-1M的NaCl溶液进行梯度洗脱，洗脱速度为0.8mL/min；凝胶层析法分离纯化的条件为：洗脱剂为0.15M氯化钠溶液，洗脱速度为0.5mL/min。
本发明还提供所述的金耳酸性多糖在制备改善溃疡性结肠炎的产品中的应用。更优选的是，所述产品为药物，但不限于此。
本发明公开了以下技术效果：
本发明首次从天然金耳中获得具有新颖结构和多种生物活性的多糖TA 2-1。同时通过小鼠体内实验发现，该多糖能够改善溃疡性结肠炎症状，可有效降低溃疡性结肠炎的肠道损伤、降低微生物紊乱，提高肠道屏障功能以及降低炎症水平。本发明为金耳酸性多糖后续的开发和利用提供研究基础，具有重要的经济价值和市场价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明金耳多糖洗脱曲线；(A)DEAE-琼脂糖凝胶-FF层析洗脱曲线，(B)Hiload 16/600Superdex 200凝胶层析洗脱曲线；
图2为本发明金耳酸性多糖TA 2-1单糖组成分析；
图3为本发明金耳酸性多糖TA2-1的分子量分布曲线；
图4为本发明金耳酸性多糖TA 2-1的FT-IR图谱；
图5为TA 2-1甲基化分析的总离子流图谱；
图6为金耳酸性多糖TA 2-1的核磁共振波谱分析；
图7为金耳酸性多糖TA 2-1的体内抑制UC损伤的作用；(A)DSS给药诱导小鼠UC模型和TA 2-1的给药示意图。各组小鼠的DAI评分(B)、体重(C)、生存曲线(D)和结肠长度(E、F)；数据表示为平均值±标准差(n＝6)#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001vs对照组，*p<0.05，**p<0.01，**p<0.001vs DSS诱导的UC组；
图8为本发明金耳酸性多糖组分TA 2-1对UC小鼠肠组织病理影响的HE结果(A)及其对UC小鼠肠上皮细胞铁死亡相关蛋白表达水平的影响(B)；
图9为本发明采用免疫荧光染色方法检测金耳酸性多糖TA2-1对UC小鼠肠上皮细胞紧密蛋白分子claudin-1(A)和ZO-1(B)表达的影响；
图10为本发明金耳酸性多糖TA2-1对UC小鼠外周血中炎性细胞因子IL-6(A)，TNF-α(B)，IFN-γ(C)和MCP-1(D)水平的影响；
图11为本发明金耳酸性多糖TA2-1对UC小鼠肠道微生物组成的影响：(A)韦恩图谱；(B)主成分分析；
图12为本发明金耳酸性多糖TA 2-1对UC小鼠肠道微生物组成的影响的热图分析结果；
图13为本发明金耳酸性多糖TA 2-1对门级肠道微生物群落相对丰度的影响。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
实施例1金耳酸性多糖的提取制备及纯化
采用高速粉碎机将金耳干品磨为粉末，并过100目筛，并用粉末2倍体积的去离子水混匀，在超声仪500W功率下进行超声萃取10分钟；
将超声后的金耳粉末溶液置于75℃条件下进行高温水提，由于金耳在水中不断泡发，在水提过程中需不断加入75℃去离子水，保持液面能覆盖金耳。浸提3h后，采用多层纱布过滤去除泡发后的金耳，并在75℃条件下对水溶液进行浓缩，将金耳浸提液浓缩至原体积的1/5-1/3。再加入使乙醇终浓度为75％的无水乙醇，室温静止过夜，1000rpm离心10分钟，收集沉淀于无菌平皿上进行烘干，获得了金耳粗浸提物。
Sevag法去除金耳粗浸提物中的蛋白组分。采用去离子水溶解烘干的金耳粗浸提物，按1:2体积比加入sevag试剂(正丁醇：三氯甲烷＝1:3，v/v)，并在水平摇床上以120rpm的速度振荡40分钟混匀，离心去除变性蛋白，再重复1次以上操作，进一步去除残留的蛋白组分；再透析去除小分子后，使用旋转蒸发仪浓缩，对浓缩物进行冻干即获得金耳粗多糖冻干物。
将金耳粗多糖冻干物用去离子水溶解，过膜后采用DEAE-琼脂糖凝胶-FF层析柱进行第一步纯化，并用0-1M的NaCl溶液进行梯度洗脱(0.8mL/min)，每管收集3mL。采用苯酚-硫酸法测定每管洗脱液的多糖组分含量，并绘制曲线图，据此获得金耳多糖组分TA 1和TA2。采用Hiload 16/600Superdex 200凝胶层析柱对TA 2进行第二步纯化，采用0.15M/NaCl进行洗脱(0.5mL/min)，收集多糖部分，每管收集3mL。采用苯酚-硫酸法测定每管洗脱液的多糖组分含量，并绘制曲线图据此获得金耳酸性多糖组分TA2-1，并将其透析和冻干处理获得冻干的金耳酸性多糖TA 2-1(见图1)
实施例2金耳酸性多糖TA2-1单糖组成分析
(1)完全酸水解
称取金耳酸性多糖组分TA2-1约2mg，加入含有1M盐酸的无水甲醇溶液1mL，充N2封管，80℃水解16小时，空气泵吹干后，加入2M三氟乙酸1mL，120℃水解1小时，加入少量乙醇，60℃水浴干燥，重复3～5次，完全蒸除三氟乙酸。
(2)PMP衍生化
向完全酸水解后获得的干燥样品中加入PMP试剂0.5mL和0.3M的NaOH溶液0.5mL，待样品充分溶解后取其中的0.2mL于小离心管中，70℃水浴30min。10000rpm离心5min后，加入0.3M盐酸溶液0.1mL和蒸馏水0.1mL，充分混匀。加入1mL二氯甲烷，混匀后抽提剩余的PMP试剂，吸去二氯甲烷层，保留水层，重复三次。用0.22μm滤膜过滤后，进行HPLC检测：
采用Shimadzu HPLC系统(LC-10ATvp泵和SPD-10AVD紫外光检测器)，Compass C18色谱柱(4.6×150mm)，流动相为PBS(0.1M,pH 7.0-乙腈81:19(v/v)，流速为1.0mL/min，进样量为10μL，检测波长为245nm。
结果如图2所示，表明金耳酸性多糖组分TA2-1由甘露糖(Man)、木糖(Xyl)和葡萄糖醛酸(GlcA)组成，还含有少量的葡萄糖(Glc)、岩藻糖(Fuc)和鼠李糖(Rha)，其摩尔百分比分别为59.2％，23.2％，13.9％，1.6％，1.7％和0.4％。
实施例3金耳酸性多糖TA2-1分子量的检测
称取1～2mg金耳酸性多糖TA2-1，溶解于dH2O中，样品浓度为10mg/mL，通过0.22μm水相滤膜过滤后，利用HPSEC-MALLS-RI高效液相系统进行检测。采用安捷伦1260InfinityII高效液相系统，色谱柱为Shodex OHpak SB-805HQ(8mm×300mm)，检测器为干涉型示差折光仪(OPTILAB T-rEx)和多角度激光光散射仪(DAWN HELEOS II)。流动相为0.2M NaCl，其中含有0.02％ NaN3，洗脱流速为0.6mL/min，柱温为35℃。TA2-1的分子量分布曲线如图3所示。经检测显示金耳酸性多糖TA2-1的重均分子量(Mw)为1.27×105Da，数均分子量(Mn)为5.03×104Da，多分散指数(Mw/Mn)为2.5。
实施例4金耳酸性多糖TA 2-1的FT-IR分析
采用红外光谱分析金耳酸性多糖TA 2-1，结果如图4显示，该样品表现出明显的多糖特征吸收峰，在3600～3200cm–1处为宽而强的,-OH伸缩振动吸收峰，在3000～2800cm-1处为窄而弱的C-H伸缩振动吸收峰，1647cm-1处显示OH的弯曲振动吸收峰，此外，在1403cm-1左右检测到微弱的C-H变形振动峰，以及1071cm-1处有明显吡喃环吸收峰，855～810cm-1处显示吡喃糖α-端基差向异构的C-H变角振动。
实施例5金耳酸性多糖TA 2-1的甲基化分析
(1)酸性糖还原：将5mg样品溶于1mL H2O中，加入200μL浓度为0.2M吗啉乙磺酸(MES)和400μL浓度为500mg/mL碳二亚胺试剂，于25-30℃反应3h。反应结束后加入1mL 4M咪唑-HCl和600μL浓度为70mg/mL NaBD4，4℃反应过夜，冰浴中缓慢加入500μL冰醋酸终止反应，将反应液透析冻干。
(2)糖样溶解：称取5mg干燥的样品，溶于0.5mL DMSO(4A分子筛脱水)中，充N2密封，磁力搅拌至糖样充分溶解。取0.5mL NaOH-DMSO混悬液加入溶解的糖样中，充N2密封，磁力搅拌2min，混匀。于冰浴条件下缓慢加入1mL碘甲烷，密封，避光，磁力搅拌反应30min，加入2mL蒸馏水中止反应，流水透析24h，蒸馏水透析24h，浓缩至小体积冻干。
(3)重复以上步骤进行第二次甲基化，终止甲基化反应后，加入等体积的二氯甲烷搅拌萃取30min，静置分层，取二氯甲烷层(下层)，重复萃取三次，合并萃取液，加入5～7mL水搅拌反萃有机相20min，弃去水相，重复三次，用空气泵吹干有机相，加入1mL蒸馏水冻干。
(4)将甲基化后的样品进行红外光谱检测，若IR图谱在3400cm-1处无吸收峰，即无羟基吸收峰，1000cm-1左右有很高的吸收峰，则证明多糖甲基化完全。
甲基化后多糖的水解：向上述干燥的甲基化糖样中加入1mL混合酸(HCOOH:H2O:TFA＝3:2:1)，充N2密封，100℃水解6h，水解结束后反复加入无水乙醇蒸除混合酸至pH＝7(温度低于40℃)。
(5)还原：加入3mg/mL NaBH4溶液1mL室温搅拌还原12h，加入约100μL 50％冰乙酸中和至中性，加入适量强酸型阳离子交换树脂，磁力搅拌20min，过滤(除去树脂)，向滤液中反复加入甲醇，蒸除硼酸至中性(温度低于40℃)。
(6)乙酰化：加乙酸酐、无水吡啶各0.5mL，N2密封，100℃反应2h。反应结束后在冰浴中迅速加入1mL蒸馏水终止反应，盖紧瓶盖，冰浴5min，加入2mL二氯甲烷，2mL蒸馏水，反萃有机相3次，除去水相，吹干有机相，溶于1mL色谱纯二氯甲烷中，过滤后进行GC-MS分析。
(7)GC-MS程序：色谱柱型号为Agilent DB-35ms，进样口温度为300℃，辅助加热器温度为280℃，升温程序：初始温度140℃，保留2min，5℃/min升至170℃，保留3min，1℃/min升至180℃，保留5min，3℃/min升至220℃，保留1min，20℃/min升至295℃，保留3min。
TA 2-1甲基化分析的总离子流如图5所示。结果表明TA 2-1主要的糖苷键连接方式为1,2,3-甘露糖，1,3-甘露糖，T-木糖，1,3-木糖，1,4-葡萄糖醛酸和T-甘露糖(表1)。
表1TA 2-1的糖苷键连接方式
Figure BDA0004061466090000071
实施例6金耳酸性多糖TA 2-1的核磁共振波谱分析
称取20.0mg干燥的样品，利用0.5mL D2O(99.8％)将其溶解，并使用BrukerAvance600MHz核磁共振仪在20℃测定1D NMR光谱(1H NMR，13C NMR)和2D NMR光谱(HSQC，HMBC)。1H NMR检测频率为600MHz，13C NMR检测频率为150MHz。
在13C-NMR谱中，102.32ppm和102.42ppm化学位移分别归属为α-1,3-D-Manp和β-1,3-D-Xylp的异头碳；99.28ppm化学位移归属为α-1,2,3-D-Manp的异头碳；173.15ppm为t-β-D-GlcAp的C-6信号峰；位于高场的19.26ppm归属为乙酰基中甲基部分的异头碳信号峰，乙酰基可能位于O-2ofα-1,3-D-Manp(见图6)。
以下试验例将对本发明得到的金耳酸性多糖TA 2-1的医用用途进行进一步验证分析。
试验例1金耳酸性多糖TA 2-1改善溃疡性结肠炎症状
购买6-8周雄性C57BL/6小鼠，采用口服葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate SodiumSalt，DSS)水溶液的方法构建UC小鼠模型(图7中A)。小鼠共分为四组，分别为阴性对照组，模型组，低剂量TA2-1(20mg/kg)+模型组和高剂量TA2-1(60mg/kg)+模型组。小鼠在口服2.5％ DSS水溶液后，分别采用PBS，PBS，20mg/kg TA2-1和60mg/kg TA2-1水溶液对四组小鼠进行灌胃处理，灌胃体积为100μL，并连续灌胃36天。
通过对小鼠体重，疾病活动指数(Disease activity index,DAI)，结肠长度，生存情况进行记录。结果表明：与模型组相比，TA 2-1给药组小鼠体重，DAI，小鼠生存天数，结肠长度均得到显著改善，且高剂量TA2-1组改善程度高于低剂量组(图7中B-F)。
试验例2金耳酸性多糖TA 2-1有效降低肠上皮细胞铁死亡并降低UC小鼠肠上皮屏障功能损伤
采用苏木精-伊染色法(Hematoxylin-eosin,HE)对小鼠结肠组织进行组化分析，结果表明，DSS诱导的小鼠即模型组出现了显著的肠道损伤(图8中A)，结肠组织中观察到绒毛尖端损伤、固有层分离、上皮损伤、隐窝绒毛轴完全断裂和炎性细胞浸润增加。TA 2-1干预后，这些现象明显缓解，且呈现剂量依赖性。HE染色结果显示，TA2-1灌胃处理可显著改善了UC小鼠结肠组织的病理特征。
免疫组化染色(Immunohistochemistry，IHC)结果表明TA 2-1显著上调了GPX4和FTH的表达，并降低了结肠组织肠上皮细胞中ACSL4的表达水平(图8中B)。ACSL4是多不饱和脂肪酸(PUFA)代谢的一种重要同工酶，与铁死亡水平呈正相关。相反，GPX4利用谷胱甘肽(GSH)来解毒脂质过氧化，并在抑制铁死亡中发挥重要作用。此外，结果显示，TA 2-1增加了FTH的表达，FTH负责细胞质中的铁储存，导致参与铁死亡的游离铁水平降低。以上结果说明TA 2-1可有效抑制肠上皮细胞铁死亡。
紧密连接(Tight junction,TJ)负责构建上皮屏障，包括跨膜和膜蛋白以及信号分子。TJ蛋白包括40多种不同的蛋白质，其中主要的蛋白质是claudin、小带闭塞1和2(ZO1/2)、闭塞素和F-actin。发明人对肠组织中进行了claudin-1和ZO-1的免疫染色，以进一步评估TA 2-1对肠上皮细胞之间紧密连接的影响。免疫荧光染色表明，与对照组相比，DSS诱导小鼠中的claudin-1和ZO-1蛋白水平显著降低(图9中A和B)。与DSS组相比，TA2-1(20mg/kg和60mg/kg)干预显著抑制了claudin-1和ZO-1表达水平的降低。
以上数据说明TA2-1可有效降低肠上皮细胞铁死亡，并可提高紧密连接蛋白水平，表明TA2-1可有效降低UC肠道屏障功能损伤。
试验例3金耳酸性多糖TA2-1显著降低UC小鼠外周血炎性因子水平
TA2-1灌胃结束后，分别收集组小鼠外周血血清，采用CBA(cytometric beadarray)法测定炎性细胞因子(IL-6、TNF-α、IFNγ和MCP-1)水平，以进一步明确TA2-1对UC小鼠炎症水平的影响。结果表明，与对照组相比，DSS模型组的IL-6、TNF-α、IFNγ和MCP-1水平显著提高(图10)。TA 2-1灌胃给药降低了UC小鼠外周炎性因子的表达水平，尤其是高剂量TA 2-1(60mg/kg)组显著降低了IL-6、TNF-α、IFNγ和MCP-1水平。以上结果表明，在DSS诱导的UC小鼠模型中，金耳酸性多糖TA 2-1可显著抑制UC的炎症反应。
试验例4金耳酸性多糖TA2-1有效改善溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群成分
分别收集不同组别小鼠粪便(n＝3)，包括对照组、DSS给药组和TA 2-1处理的DSS组(20mg/kg和60mg/kg)。从盲肠内容物中提取总基因组DNA，并扩增细菌的V3-V4区域，采用Illumina NovaSeq 6000系统完成测序(上海派诺森生物公司)。
Venn图分析表明对照组、模型组、低剂量TA2-1和高剂量TA 2-1组粪便中分别有1958、1942、2396和2396个有效OUT(图11中A)。主成分分析显示，对照组和模型组之间的间距显著增加，经TA 2-1灌胃给药后可有效调节DSS组和治疗组之间的间距(图11中B)。
在门水平上，小鼠肠道微生物主要为厚壁菌门(Firmicutes)，拟杆菌门(Bacteroidetes)和疣菌门(Verrucomicrobia)(图13)。与对照组相比，DSS组小鼠菌群中有益的厚壁菌门减少，而拟杆菌门丰度增加。UC患者肠道微生物中厚壁菌/拟杆菌的丰度比值降低。与DSS组相比，TA 2-1能够提高厚壁菌/拟杆菌的丰度比值，这说明TA 2-1灌胃后能显著改善UC小鼠肠道微生物的组成。
肠道微生物种群在属水平上的差异如图12所示：与对照组相比，拟杆菌(Bacteroides)和瘤胃球(Ruminococcus)菌的种群显著增加，阿克曼氏菌(Akkermansia)、阿德勒克鲁特菌(Adlercreutzia)和乳杆菌(Lactobacillus)的丰度显著降低。而TA2-1给药组的拟杆菌和瘤胃球菌的丰度水平降低，阿克曼氏菌、阿德勒克鲁特菌和乳杆菌的丰度显著增加。UC小鼠肠道微生物群中拟杆菌的水平增加，过量的拟杆菌被认为对肠道免疫系统有害。瘤胃球菌在UC患者中富集，其过度生长与细菌生物被膜(biofilms)的存在有关，而胃肠道疾病患者普遍存在内镜下可见的粘膜生物膜。对UC患者样本中微生物群组成的功能分析表明，在UC发病前，弹性蛋白酶活性增加，这与包括阿德勒克鲁特菌和阿克曼氏菌在内的相关菌群丰度呈负相关。此外，阿德勒克鲁特菌是一个代谢异黄酮的属，酚类化合物以其抗菌和抗炎功能而闻名，其在UC患者中的丰度降低可能会促进炎症状态。双歧杆菌和乳杆菌作为常见的益生菌受到了相当大的关注，而临床上UC患者中双歧杆菌和乳酸杆菌的丰度降低。
以上结果均说明与DSS模型组相比，金耳酸性多糖TA2-1能够有效影响溃疡性结肠炎小鼠肠道微生物组成，可能有助于缓解UC的肠道菌群功能紊乱。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (10)

1.一种金耳酸性多糖，其特征在于，其包括甘露糖、木糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和鼠李糖，所述甘露糖、木糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和鼠李糖的摩尔百分比分别为59.2％、23.2％、13.9％、1.6％、1.7％和0.4％。
2.根据权利要求1所述的金耳酸性多糖，其特征在于，所述金耳酸性多糖提取的连接方式为：1,2,3-甘露糖，1,3-甘露糖，T-木糖，1,3-木糖，1,4-葡萄糖醛酸和T-甘露糖。
3.一种权利要求1所述的金耳酸性多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：对金耳子实体干品采用超声法和水提法结合的方式进行抽提，经过醇沉处理，提取金耳粗多糖，再采用离子层析法和凝胶层析法对所述金耳粗多糖纯化，获得金耳酸性多糖。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：
(1)将金耳子实体磨成粉末，与去离子水混匀，超声处理；
(2)经超声处理后的溶液再置于75℃的条件下进行水提取，之后经过滤、浓缩，使得水提取液浓缩至原体积的1/5-1/3，再用无水乙醇分离，经离心收集沉淀，得到金耳多糖粗提物；
(3)所述金耳多糖粗提物采用sevag法去除粗多糖中的蛋白组分后，经透析、冻干获得金耳多糖冻干物；
(4)采用离子层析法对所述金耳多糖冻干物进行分离纯化，得到金耳多糖组分TA1和TA2，再采用凝胶层析对金耳多糖组分TA2进一步分离纯化，得到金耳酸性多糖TA 2-1。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，金耳子实体粉末为100目，所述金耳多糖子实体粉末与去离子水的质量体积比为1:2。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，超声条件为：500W超声10分钟。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，水提取时间为3小时。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述金耳多糖粗提物与sevag试剂的体积比为1:2。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，离子层析法分离纯化的条件为：0-1M的NaCl溶液进行梯度洗脱，洗脱速度为0.8mL/min；凝胶层析法分离纯化的条件为：洗脱剂为0.15M氯化钠溶液，洗脱速度为0.5mL/min。
10.根据权利要求1所述的金耳酸性多糖在制备改善溃疡性结肠炎的产品中的应用。
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