CN116223677A - 一种美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法 - Google Patents

一种美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法，包括下述操作步骤：S1反相键合硅胶色谱柱，规格为250mm×4.6mm5μm，采用等度洗脱，以甲醇与磷酸水溶液混合液为流动相，示差折光检测器，检测器温度40℃，柱温40℃，流速1.2mL/min，进样量100μL，磷酸水溶液为稀释剂；S2配成对照品溶液；S3将所述对照品溶液直接进样，记录检测器的峰信号；S4将待测样品用稀释剂溶解，离心，过滤，水浴，再过滤后进样，利用所述对照品溶液中聚乙二醇400的峰面积与对应的对照品溶液的浓度以及样品中聚乙二醇400在检测器输出的信号峰面积，按外标法计算样品中聚乙二醇400的含量。本发明的有益效果为：具有良好的测定准确度、而且灵敏度高，定量限低，检测范围宽。

Description

一种美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法
技术领域
本发明属于药物制剂的含量测定方法领域，涉及一种美洛昔康粉末制剂辅料的分析方法，具体涉及一种美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法。
背景技术
聚乙二醇(简称：PEG)是相对分子量在200～8000或者8000以上的乙二醇高聚物的总称，是用环氧乙烷和水或乙二醇逐步聚合得到的分子量较小的一类水溶性聚醚，分子式为HO(CH2CH2O)nH，n代表氧乙烯基的平均数，其CAS登记号为25322-68-3。室温下相对分子量为200～600的是液体，相对分子量为1000及以上者是固体。
聚乙二醇在水中具有较好的溶解性和良好的与药物及其他溶剂的相容性，相对分子量小的液体聚乙二醇可以在制剂中作为溶剂使用，相对分子量大的固体聚乙二醇可以与难溶性药物制成固体分散体，以促进药物的溶出。聚乙二醇已被中国、美国、英国等许多国家药典收载作为药用辅料，在制剂中应用十分广泛。
聚乙二醇在液体制剂和注射剂中的应用主要体现在以下几个方面：(一)作为溶剂：低相对分子量的聚乙二醇为无色液体，化学性质稳定，安全，低毒，可作为单一溶剂使用，也可以与水、乙醇、甘油、丙三醇、苯甲醇等混合作为复核溶剂使用。聚乙二醇400作溶剂有三方面的作用：(1)增加难溶性药物的溶解度；(2)提高遇水易分解破坏的药物的稳定性；(3)以聚乙二醇为溶剂的注射剂注射后药物在局部可形成贮库，从而延长药物作用的时间。(二)起增溶作用：聚乙二醇是一类含聚氧乙烯基的高分子化合物，分子结构中含有羟基而表现出较强的水溶性，因此能够增加难溶性药物在水中的溶解度。聚乙二醇在发挥增溶作用时，还能增加制剂的稳定性，改善物理特性，矫臭矫味，减轻刺激，改善吸收，增加药理作用。(三)做稳定剂：通常难溶性固体药物以颗粒状态分散于分散介质中形成的非均匀相的液体制剂，低相对分子量的聚乙二醇400均为中等黏度溶液体，应用聚乙二醇能增加分散介质的黏度，从而降低药物颗粒的沉降速度，同时聚乙二醇又能被药物微粒表面吸附形成机械性或电性的保护膜，防止微粒间相互聚集或结晶的转型。此外聚乙二醇结构中同时具有亲水、亲油基团，可以包围在经分散的油相周围，防止油相的重新聚结。
由于美洛昔康几乎不溶于水，微溶于甲醇或乙醇，因此美洛昔康片剂和胶囊剂在胃肠道中的溶出速率慢导致起效慢、难以获得足够的生物利用度。因此，可采用合适的增溶剂或溶剂，使得在生产工艺中能够获得一种能够快速起效并且具有长效镇痛作用的一种美洛昔康粉末制剂。
聚乙二醇可以增加美洛昔康的溶解度，但在析晶工艺完成后需要过滤除去，其残留量可能会影响有效性和安全性。因此，准确监控制剂中聚乙二醇400的含量，对生产工艺和产品的质量控制有着重要意义。
目前通用的国际标准方法是采用二相萃取的weibull法，其原理是非离子加成物和聚乙二醇都溶于乙酸乙酯，但非离子加成物则不溶。该方法的缺点是操作频繁，温度控制严格，测定周期长(大约需8～10h)，并且灵敏度不高。
中国药典2020年版四部(3202通则)聚乙二醇残留量测定法，其原理为依据聚乙二醇与钡离子和碘离子形成复合物(1:1)，用比色法测定聚乙二醇含量。该方法的缺点是操作繁琐，方法灵敏度受聚乙二醇分子量影响，受具有能与钡离子和碘离子形成复合物的其他辅料和在500nm附近有紫外吸收的辅料很强的干扰，该方法通常不适用于含有多种辅料的药物制剂中对聚乙二醇含量的测定，且线性范围窄(10μg/ml～50μg/ml)。
国家标准GB/T 17830-1999《聚乙氧基化非离子表面活性剂中聚乙二醇400含量的测定高效液相色谱法》以C18硅胶键合相色谱柱，纯甲醇或甲醇/水混合溶剂做流动相，对聚醚型非离子表面活性剂进行反相高效液相色谱法分离，用示差折光检测器检测并记录各组分峰面积，并通过计算仪器的响应因子来求得分析样品中聚乙二醇的百分含量。但由于该方法的局限性，标准已于2018年07月01日被废止。
但是，上述采用高效液相色谱测定聚乙二醇含量的方法，均使用十八烷基硅烷键合硅胶填料的色谱柱进行反向洗脱。其原理是待分析物质按疏水性大小被洗脱分离，极性越大、疏水性越小的物质，越不易与非极性的固定相结合，所以先被洗脱下来。聚乙二醇由于含有较多的羟基和氧孤对电子，使其具有较大的极性、较强的亲水性，易形成氢键，其与色谱柱的亲和力很弱，最先被洗脱出来，而且样品中的水分和其他溶剂及辅料也会干扰聚乙二醇的出峰，分离度欠佳、峰型差、响应低、保留时间短、长时间进样柱压升高等，影响定量结果。
另外，上述测定方法无法用于本文表1所述的一种美洛昔康粉末制剂处方中聚乙二醇400含量或聚乙二醇400残留的测定。
综上所述，为解决美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量的检测的问题，本发明提供了一种美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量的检测方法，该检测方法具有良好的测定准确度、而且灵敏度高，定量限低，检测范围宽，特别适用于聚乙二醇400残留的含量检测。
发明内容
本发明为解决现有技术存在的问题，提供一种聚乙二醇400含量的检测方法，该检测方法解决了现有技术中分离度不佳、峰型差、响应低、以及长时间进样柱压升高的缺陷。
具体的：通过利用样品中聚乙二醇400各组分疏水性的不同，通过优化样品前处理和色谱条件，使用合适的色谱柱填料的粒径与孔径实现优质分离和响应，用示差折光检测器鉴别聚乙二醇400的色谱峰，并通过外标法定量样品中聚乙二醇400的绝对含量和相对含量。
本发明的目的可通过以下技术方案来实现：
一种美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法，包括下述操作步骤：
S1反相键合硅胶色谱柱，规格为250mm×4.6mm 5μm，采用等度洗脱，以甲醇与磷酸水溶液混合液为流动相，示差折光检测器，检测器温度40℃，柱温40℃，流速1.2mL/min，进样量100μL，磷酸水溶液为稀释剂；
S2将与样品中的待测聚乙二醇400分子量相等或相近的聚乙二醇400对照品，用稀释剂溶解并稀释，配成对照品溶液；
S3将所述对照品溶液直接进样，记录检测器的峰信号；
S4将待测样品用稀释剂溶解，离心，过滤，水浴，再过滤后进样，利用所述对照品溶液中聚乙二醇400的峰面积与对应的对照品溶液的浓度以及样品中聚乙二醇400在检测器输出的信号峰面积，按外标法计算样品中聚乙二醇400的含量。
作为本方案的进一步改进，所述反相键合色谱柱的型号为CAPCELL PAK ADME-HR。
作为本方案的进一步改进，所述反相键合色谱柱的载体为硅胶基质，固定相为键合金刚烷(ADME)基团的硅胶填料。
作为本方案的进一步改进，所述硅胶填料的粒径范围为2～5μm，所述硅胶填料的孔径为10nm。
更进一步的改进，所述硅胶填料的粒径优选为5μm
作为本方案的进一步改进，所述流动相中磷酸水溶液为水用磷酸调pH值在2.8～3.2的溶液，所述流动相中甲醇的体积分数为28％～32％。
作为本方案的进一步改进，所述示差折光检测器为waters 2414RI Detector型号示差折光检测器，所述高效液相色谱仪为waters e2695型号高效液相色谱仪。
作为本方案的进一步改进，所述稀释剂为水用磷酸调pH值为1.8～2.2的溶液。
作为本方案的进一步改进，所述反相键合硅胶色谱柱的色谱条件为：流动相流速范围1.1～1.3ml/min，柱温38～42℃，检测器温度40℃，进样体积100μL；
所述的峰信号或峰面积为色谱图中聚乙二醇400前三个不受干扰的组分峰的峰面积之和。
作为本方案的进一步改进，所述S4中的具体操作为：精密称定待测样品150mg，置20ml西林瓶中，加入10ml溶剂振荡5min，离心10000rpm，10min后，取上清液用0.45μm滤头过滤，取滤液于85℃水浴30min，滤液冷却至室温后用0.45μm滤头过滤，舍弃初滤液约1ml，取续滤液作为样品溶液。
更进一步的改进，所述的0.45μm滤头为Hydrophilic PTFE材质的过滤器。
作为本方案的进一步改进，美洛昔康粉末制剂的组成为质量份的下述组分：
美洛昔康66.2份；
羧甲纤维素钠3.7份
聚山梨酯80(II)0.7份
甘露醇29.4份。
表1.一种美洛昔康粉末制剂处方
Figure BDA0004115536880000061
与现有技术相比，本发明具有下述有益效果：
(1)本发明通过选择合适的色谱柱，优化样品前处理方法和色谱条件，可以延长聚乙二醇400各组分的保留时间并提高组分之间分离度，改善聚乙二醇400各组分峰型，提高方法灵敏度，定量限低，检测范围宽，特别适用于聚乙二醇400残留的含量检测；
(2)本发明的方法在10.3276μg/ml～516.3800μg/ml加标浓度范围内的回收率范围为88.6％～106.9％，均能满足中国药典对方法验证中回收率的要求80.0％～120.0％，进一步表明了本发明的检测方法具有良好的测定准确度；
(3)本发明的检测方法中，采用“将待测样品用稀释剂溶解，离心，过滤，水浴，再过滤”的样品前处理，可有效消除难溶性颗粒，解决长时间进样导致柱压升高问题。
附图说明
图1为实施例1的聚乙二醇400对照品溶液的色谱图。
图2为实施例1的聚乙二醇400定量限溶液的色谱图。
图3为实施例2的美洛昔康粉末制剂的色谱图。
图4为实施例3的美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量测定的色谱图。
图5为实施例4的聚乙二醇400对照品峰面积与浓度的线性关系图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图，对本发明的技术方案作进一步的阐述。
实施例1(对比例)
测定聚乙二醇400灵敏度溶液和对照品溶液的色谱图，该对照品为购自南京威尔药业集团股份有限公司，分子量为400。
色谱设备：waters e2695高效液相色谱仪和2414RI Detector示差折光检测器，Empower3色谱数据工作站；
色谱柱：商品名为CAPCELL PAK ADME-HR的反向硅胶键合色谱柱(日本大阪曹达集团)，规格为4.6mm×250mm 5μm；
流动相：乙腈(色谱纯，纯度>99.99％)，超纯水(电阻率≥18.2MΩ.cm)。
(1)流动相配制：分别准确体积比为70:30的磷酸水溶液(取适量超纯水用磷酸调pH至3.0，以0.45μm滤膜过滤)和甲醇混匀，超声脱气。
(2)取聚乙二醇400对照品约20mg，精密称定，置200ml容量瓶中，加溶剂(取适量超纯水用磷酸调pH至2.0，以0.45μm滤膜过滤)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml约含100μg聚乙二醇400的溶液，作为对照品溶液。
(3)精密量取上述聚乙二醇400对照品溶液2ml，置20ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制成每1ml约含10μg聚乙二醇400的溶液，作为定量限溶液。
(4)高效液相色谱仪进样测试，色谱条件为：
柱温：40℃
流速：1.2ml/min
进样量：100μl
示差折光检测器：2414RI，检测器温度40℃
(5)按上述条件进样分析，记录色谱图，定性说明聚乙二醇400各组分峰在该色谱体系的出峰位置。
实施例1得到的对照品色谱图如图1所示，聚乙二醇400对照品物质前三个不受干扰的组分保留时间分别为7.818min、10.325min和13.989min。
实施例1得到的定量限色谱图如图2所示。
实施例2
待测样品为美洛昔康粉末制剂，该药物含有治疗作用的药物美洛昔康和辅料，辅料中残留一定量的聚乙二醇400，分子量为400。
色谱设备：waters e2695高效液相色谱仪和2414RI Detector示差折光检测器，Empower3色谱数据工作站；
色谱柱：商品名为CAPCELL PAK ADME-HR的反向硅胶键合色谱柱(日本大阪曹达集团)，规格为4.6mm×250mm 5μm；
流动相：乙腈(色谱纯，纯度>99.99％)，超纯水(电阻率≥18.2MΩ.cm)。
(1)流动相配制：分别准确体积比为70:30的磷酸水溶液(取适量超纯水用磷酸调pH至3.0，以0.45μm滤膜过滤)和甲醇混匀，超声脱气。
(2)取美洛昔康粉末制剂1瓶，将整瓶内容物搅匀并倒出，精密称定(约150mg)，置20ml西林瓶中，加入10ml溶剂振荡5min，离心(10000rpm，10min)后取上清液用0.45μm滤头过滤，取滤液于85℃水浴30min，滤液冷却至室温后用0.45μm滤头过滤，舍弃初滤液约1ml，取续滤液作为美洛昔康粉末制剂供试品溶液。
(3)高效液相色谱仪进样测试，色谱条件为：
柱温：40℃
流速：1.2ml/min
进样量：100μl
示差折光检测器：2414RI，检测器温度40℃
(4)按上述条件进样分析，记录色谱图，如图3所示。
请参阅图3，美洛昔康粉末制剂中在保留时间7.810min、10.307min和13.956min有出峰，与图1聚乙二醇400对照品物质前三个不受干扰的组分保留时间吻合，可定性说明美洛昔康粉末制剂中含有聚乙二醇400。实施例2美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400前3个未受干扰的组分如下表2，3个组分峰拖尾因子均在1.06～1.08之间，3个组分最小分离度为6.8，说明在该色谱系统中，聚乙二醇400出峰对称，且和组分间及其他峰实现了很好的分离。
表2.实施例2美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400组分表
保留时间(min) 拖尾因子 分离度
7.810 1.07 6.8
10.325 1.06 8.1
13.989 1.08 9.1
实施例3
待测样品为美洛昔康粉末制剂，该药物含有治疗作用的药物美洛昔康和辅料，辅料中残留一定量的聚乙二醇400，分子量为400。
利用该发明检测样品生产后及储存期间聚乙二醇400的具体含量，含量以相对含量表达，该方法作为美洛昔康粉末制剂放行检验，以及稳定性试验研究的检验方法。
色谱设备：waters e2695高效液相色谱仪和2414RI Detector示差折光检测器，Empower3色谱数据工作站；
色谱柱：商品名为CAPCELL PAK ADME-HR的反向硅胶键合色谱柱(日本大阪曹达集团)，规格为4.6mm×250mm 5μm；
流动相：乙腈(色谱纯，纯度>99.99％)，超纯水(电阻率≥18.2MΩ.cm)。
(1)流动相配制：分别准确体积比为70:30的磷酸水溶液(取适量超纯水用磷酸调pH至3.0，以0.45μm滤膜过滤)和甲醇混匀，超声脱气。
(2)取聚乙二醇400对照品约20mg，精密称定，置200ml容量瓶中，加溶剂(取适量超纯水用磷酸调pH至2.0，以0.45μm滤膜过滤)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml约含100μg聚乙二醇400的溶液，作为对照品溶液。
(3)高效液相色谱仪进样测试，色谱条件为：
柱温：40℃
流速：1.2ml/min
进样量：100μl
示差折光检测器：2414RI，检测器温度40℃
(4)取美洛昔康粉末制剂1瓶，将整瓶内容物搅匀并倒出，精密称定154.61mg，置20ml西林瓶中，加入10ml溶剂振荡5min，离心(10000rpm，10min)后取上清液用0.45μm滤头过滤，取滤液于85℃水浴30min，滤液冷却至室温后用0.45μm滤头过滤，舍弃初滤液约1ml，取续滤液作为美洛昔康粉末制剂供试品溶液。
(5)按上述条件进样分析，记录色谱图，如图4所示。
请参阅图4，查看色谱图组分表，出峰时间为7.797min、10.286min和13.919min的峰为聚乙二醇400峰，峰面积之和为619480，结合对照品溶液中平均峰面积366482，按外标法计算得到样品中聚乙二醇400的含量为174.6μg/ml×10ml＝1.746mg，按外标法计算样品中聚乙二醇400相对含量(x)为11291.10ppm。
计算公式：
Figure BDA0004115536880000111
式中AT＝供试品溶液中聚乙二醇400峰面积；
AS＝对照品溶液6针进样中聚乙二醇400峰的平均峰面积；
WS＝对照品溶液中聚乙二醇400对照品的称样量，mg；
VT＝供试品溶液制备中使用稀释剂的体积，ml；
DS＝聚乙二醇400对照品的稀释倍数，ml；
P＝聚乙二醇400对照品的纯度或含量；
WT＝样品冻干粉的称样量，mg。
实施例4
待测样品为美洛昔康粉末制剂，该药物含有治疗作用的药物美洛昔康和辅料，辅料中残留一定量的聚乙二醇400，分子量为400。
色谱设备：waters e2695高效液相色谱仪和2414RI Detector示差折光检测器，Empower3色谱数据工作站；
色谱柱：商品名为CAPCELL PAK ADME-HR的反向硅胶键合色谱柱(日本大阪曹达集团)，规格为4.6mm×250mm 5μm；
流动相：乙腈(色谱纯，纯度>99.99％)，超纯水(电阻率≥18.2MΩ.cm)。
(1)流动相配制：分别准确体积比为70:30的磷酸水溶液(取适量超纯水用磷酸调pH至3.0，以0.45μm滤膜过滤)和甲醇混匀，超声脱气。
(2)高效液相色谱仪进样测试，色谱条件为：
柱温：40℃
流速：1.2ml/min
进样量：100μl
示差折光检测器：2414RI，检测器温度40℃
(4)美洛昔康粉末制剂供试品溶液配制1：取美洛昔康粉末制剂1瓶，将整瓶内容物搅匀并倒出，精密称定150mg，置20ml西林瓶中，加入10ml溶剂振荡5min，离心(10000rpm，10min)后取上清液用0.45μm滤头过滤，取滤液于85℃水浴30min，滤液冷却至室温后用0.45μm滤头过滤，舍弃初滤液约1ml，取续滤液作为美洛昔康粉末制剂供试品溶液。
(5)美洛昔康粉末制剂供试品溶液配制2：取美洛昔康粉末制剂1瓶，将整瓶内容物搅匀并倒出，精密称定150mg，置10ml西林瓶中，加入溶剂摇匀后稀释至刻度，用0.45μm滤头过滤，舍弃初滤液约1ml，取续滤液作为美洛昔康粉末制剂供试品溶液。
(6)按上述条件进样分析，监测色谱系统压力。
表3实施例4色谱系统压力对比表
供试品溶配制方法 色谱系统压力
美洛昔康粉末制剂供试品溶液配制1 约2000psi(系统正常运行)
美洛昔康粉末制剂供试品溶液配制2 ＞5000psi(系统异常终止)
实施例5
根据《中国药典2020年版四部9101分析方法验证知道原则》，考察本发明的测定方法的线性范围。
方法是：取聚乙二醇400对照品适量，加溶剂(取适量超纯水用磷酸调pH至2.0，以0.45μm滤膜过滤)稀释，摇匀，制成每1ml分别含10.3276μg、51.6380μg、103.2760μg、206.5520μg、516.3800μg的聚乙二醇400对照品，作为线性溶液。
具体步骤为：先重复实施例3的步骤(1)和(3)，再将待测的各线性溶液进行测定。
以不同浓度的聚乙二醇400线性溶液的峰面积之和与对应的线性溶液的浓度绘制线性曲线，聚乙二醇400的线性曲线回归方程为：
Y＝3522.6357X+980.9995,R＝1.0000
其中，Y为聚乙二醇400在示差折光检测器输出信号峰面积，X为聚乙二醇400浓度，单位为μg/ml，R为相关系数，测试数据如表3所示，聚乙二醇400峰面积与浓度的线性关系图如图5所示：
表4线性范围测试数据
线性溶液 浓度(μg/ml) 峰面积之和
L1 10.3276 37967
L2 51.6380 187869
L3 103.2760 361460
L4 206.5520 724553
L5 516.3800 1821768
实施例5
根据《中国药典2020年版四部9101分析方法验证知道原则》，考察本发明的测定方法的准确度。
具体步骤为：美洛昔康粉末制剂，该药物含有治疗作用的药物美洛昔康和辅料，辅料中残留一定量的聚乙二醇400，分子量为400。先重复实施例3的步骤(1)～(3)，再将待测的9份准确度溶液分别进样测试。
测试数据如下表5所示：
表5准确度测试数据
Figure BDA0004115536880000141
Figure BDA0004115536880000151
计算公式：回收率＝(回收浓度/加标浓度)×100％
由表4可知，本发明的方法在10.3276μg/ml～516.3800μg/ml加标浓度范围内的回收率范围在88.6％～106.9％，均满足中国药典对方法验证中回收率的要求(80.0％～120.0％)，说明本发明的检测方法具有良好的测定准确度。
实施例6
根据《中国药典2020年版四部9101分析方法验证知道原则》，考察本发明的测定方法的重复性和中间精密度。
方法是：在相同条件下，有两位分析人员，对按实施例3的步骤(4)制得的美洛昔康粉末制剂供试品溶液，分别在不同日期进行各6份测定。
具体步骤为：先重复实施例3的步骤(1)～(3)，再将待测的各6份美洛昔康粉末制剂供试品溶液，有两位分析人员，分别于不同日期进行测定，分别计算各待测样品中聚乙二醇400相对含量的相对标准偏差(RSD)，测试数据如下表6所示：
表6重复性和中间精密度测试数据
Figure BDA0004115536880000152
Figure BDA0004115536880000161
分别计算其相对标准偏差，重复性为1.1％，中间精密度分别为2.0％和1.6％。
另外，验证结果显示方法检出限为5.1638μg/ml、方法定量限为10.3276μg/ml，均能满足微量聚乙二醇400检测的要求。
实施例7
根据《中国药典2020年版四部9101分析方法验证知道原则》，考察本发明的测定方法的耐用性。
色谱设备：waters e2695高效液相色谱仪和2414RI Detector示差折光检测器，Empower3色谱数据工作站；
色谱柱：商品名为CAPCELL PAK ADME-HR的反向硅胶键合色谱柱(日本大阪曹达集团)，规格为4.6mm×250mm 5μm；
流动相：乙腈(色谱纯，纯度>99.99％)，超纯水(电阻率≥18.2MΩ.cm)。
(1)取聚乙二醇400对照品约20mg，精密称定，置200ml容量瓶中，加溶剂(取适量超纯水用磷酸调pH至2.0，以0.45μm滤膜过滤)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml约含100μg聚乙二醇400的溶液，作为对照品溶液。
(2)取美洛昔康粉末制剂1瓶，将整瓶内容物搅匀并倒出，精密称定约150mg，置20ml西林瓶中，加入10ml溶剂振荡5min，离心(10000rpm，10min)后取上清液用0.45μm滤头过滤，取滤液于85℃水浴30min，滤液冷却至室温后用0.45μm滤头过滤，舍弃初滤液约1ml，取续滤液作为美洛昔康粉末制剂供试品溶液，各耐用性变化条件制备1份。
(3)正常色谱条件及耐用性改变色谱条件如下表7：
表7正常色谱条件及耐用性变化色谱条件
Figure BDA0004115536880000171
(5)按上述条件进样分析，记录色谱图，按实施例3计算公式美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400的含量x(ppm)，并与实施例6表5中重复性的含量平均值比较，计算相对偏差，耐用性测试数据如下表8所示：
表8耐用性测试数据
Figure BDA0004115536880000172
/>
Figure BDA0004115536880000181
由表7可知：本发明的检测方法中，采用“将待测样品用稀释剂溶解，离心，过滤，水浴，再过滤”的样品前处理，可有效消除难溶性颗粒，解决长时间进样导致柱压升高问题。
本文中所描述的仅为本发明的优选实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此。本发明所属领域的技术人员对所描述的具体实施例进行的修改或补充或采用类似的方式替换，均应涵盖于本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法，其特征在于，
包括下述操作步骤：
S1反相键合硅胶色谱柱，规格为250mm×4.6mm 5μm，采用等度洗脱，以甲醇与磷酸水溶液混合液为流动相，示差折光检测器，检测器温度40℃，柱温40℃，流速1.2mL/min，进样量100μL，磷酸水溶液为稀释剂；
S2将与样品中的待测聚乙二醇400分子量相等或相近的聚乙二醇400对照品，用稀释剂溶解并稀释，配成对照品溶液；
S3将所述对照品溶液直接进样，记录检测器的峰信号；
S4将待测样品用稀释剂溶解，离心，过滤，水浴，再过滤后进样，利用所述对照品溶液中聚乙二醇400的峰面积与对应的对照品溶液的浓度以及样品中聚乙二醇400在检测器输出的信号峰面积，按外标法计算样品中聚乙二醇400的含量。
2.根据权利要求1所述的美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法，其特征在于，所述反相键合色谱柱的型号为CAPCELL PAK ADME-HR。
3.根据权利要求1所述的美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法，其特征在于，所述反相键合色谱柱的载体为硅胶基质，固定相为键合金刚烷基团的硅胶填料。
4.根据权利要求1所述的美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法，其特征在于，所述硅胶填料的粒径范围为2～5μm，所述硅胶填料的孔径为10nm。
5.根据权利要求1所述的美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法，其特征性在于，所述流动相中磷酸水溶液为水用磷酸调pH值在2.8～3.2的溶液，所述流动相中甲醇的体积分数为28％～32％。
6.根据权利要求1所述的美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法，其特征在于，所述示差折光检测器为waters 2414RIDetector型号示差折光检测器，所述高效液相色谱仪为waters e2695型号高效液相色谱仪。
7.根据权利要求1所述的美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法，其特征在于，所述稀释剂为水用磷酸调pH值为1.8～2.2的溶液。
8.根据权利要求1所述的美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法，其特征在于，所述反相键合硅胶色谱柱的色谱条件为：流动相流速范围1.1～1.3ml/min，柱温38～42℃，检测器温度40℃，进样体积100μL；
所述的峰信号或峰面积为色谱图中聚乙二醇400前三个不受干扰的组分峰的峰面积之和。
9.根据权利要求1所述的美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法，其特征在于，所述S4中的具体操作为：称定待测样品150mg，置20ml西林瓶中，加入10ml溶剂振荡5min，离心10000rpm，10min后，取上清液用0.45μm滤头过滤，取滤液于85℃水浴30min，滤液冷却至室温后用0.45μm滤头过滤，舍弃初滤液约1ml，取续滤液作为样品溶液。
10.根据权利要求1所述的美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法，其特征在于，美洛昔康粉末制剂的组成为质量份的下述组分：
Figure FDA0004115536870000021
/>
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