CN116172961B - 一种藤黄酸二聚体自组装纳米粒及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种藤黄酸二聚体自组装纳米粒及其制备方法和用途，属于药物制剂领域。本发明发现，藤黄酸二聚体能够在本发明特定的方法下于水中自组装形成纳米粒，该藤黄酸二聚体纳米粒无需外加载体，形成的自担载纳米粒具有高载药量，制剂工艺简便，易于重复。与藤黄酸相比，该藤黄酸二聚体纳米粒的溶血毒性明显降低，细胞毒性明显降低，生物安全性明显提高，该藤黄酸二聚体纳米粒具有长循环作用，能更好的聚集在小鼠发炎关节处，并延长代谢周期，明显降低系统毒性，能够促进炎性关节中巨噬细胞和破骨细胞的凋亡，从而减少炎性关节中的炎症和骨侵蚀，在制备治疗类风湿性关节炎的药物中具有广阔的临床应用前景。

Description

一种藤黄酸二聚体自组装纳米粒及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种藤黄酸二聚体自组装纳米粒及其制备方法和用途。
背景技术
类风湿性关节炎(RA)是一种慢性自身免疫炎性疾病，可引起滑膜炎症、关节损伤，甚至残疾，严重降低RA患者的生活质量和寿命。全球受RA影响的人口约占1％，中国约占0.28％。
藤黄酸(Gambogic acid，简称GBA)是从藤黄分泌的干燥树脂中提取得到的有效成分，具有广泛的生物活性，常被用于抗炎、抗氧化、抗病毒及抗肿瘤等。研究发现，藤黄酸具有治疗类风湿性关节炎的作用。但是，藤黄酸具有在水中溶解度极小、稳定性差、体内非特异性分布等缺点，限制了其临床应用。此外，藤黄酸具有氧杂蒽酮环结构，因其小分子之间的π–π相互作用使得藤黄酸易发生快速聚集，这为藤黄酸的制剂开发带来了阻碍。
事实上，脱靶毒性和治疗效率不高是目前限制完全缓解RA的主要问题。虽然研究者们尝试以载体封装等方式把药物分子包载在其中形成纳米颗粒来减少药物分子的毒性，但是这种常规纳米粒子仍存在一些不足，如稳定性不佳、药物易泄露、载药量不高、大量药物载体赋形剂易导致毒性等。申请号为CN202210705780.4的专利申请公开了一种肝癌细胞靶向的还原敏感载体GA-PEG2k-SS-PCL5k用于藤黄酸二聚体前药的有效递送，使藤黄酸二聚体前药结构更容易被药物载体通过疏水相互作用包裹进入内核。该药物载体GA-PEG2k-SS-PCL5k与藤黄酸二聚体能够形成稳定的GA-PEG2k-SS-PCL5k/藤黄酸二聚体纳米制剂。但是，该纳米制剂中采用的药物载体的制备过程较为繁琐，不利于大规模生产。因此，在保证RA治疗效果的基础上，尽可能减少载体的使用，构建出低毒性、高载药量的纳米药物是解决上述问题的关键。
发明内容
本发明的目的在于提供一种低毒性，高载药量，无需外加载体的藤黄酸二聚体自组装纳米粒及其制备方法和用途。
本发明提供了一种藤黄酸二聚体自组装纳米粒，它是由藤黄酸二聚体自组装形成的纳米粒子，所述藤黄酸二聚体的结构为：
进一步地，所述藤黄酸二聚体自组装纳米粒的粒径为150～200nm，多分散性指数为0.05～0.30，zeta电位为-25～-35mV。
进一步地，所述藤黄酸二聚体自组装纳米粒的粒径为178.21±1.74nm，多分散性指数为0.13±0.01，zeta电位为-31.2±0.3mV。
进一步地，所述藤黄酸二聚体自组装纳米粒的制备方法包括以下步骤：将藤黄酸二聚体溶于丙酮得到溶液，将溶液滴入水中，加热搅拌，过滤，即得。
进一步的，所述藤黄酸二聚体与丙酮的质量体积比为3-5mg/mL，所述丙酮与水的体积比为1：(9-11)；所述加热搅拌的温度为40-60℃，时间为50-70min。
进一步的，所述藤黄酸二聚体与丙酮的质量体积比为4mg/mL，所述丙酮与水的体积比为1：10；所述加热搅拌的温度为50℃，时间为60min。
本发明还提供了一种制备上述藤黄酸二聚体自组装纳米粒的方法，所述方法包括以下步骤：将藤黄酸二聚体溶于丙酮得到溶液，将溶液滴入水中，加热搅拌，过滤，即得。
本发明还提供了上述藤黄酸二聚体自组装纳米粒在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。
进一步的，所述药物是以藤黄酸二聚体自组装纳米粒为活性成份和载体的制剂。
进一步的，所述制剂为注射制剂。
本发明发现，藤黄酸二聚体能够在本发明特定的方法下于水中自组装形成纳米粒，这可能与在药物分子中引入“缺陷结构”，使得药物分子刚性减弱，堆积效率随之降低，阻止了分子的长程有序堆积，通过调节分子结构的灵活性以促进其自组装形成纳米粒有关。
该藤黄酸二聚体纳米粒无需外加载体，形成的自担载纳米粒具有高载药量(高达85.78±3.67％)，制剂工艺简便，易于重复。
与藤黄酸相比，该藤黄酸二聚体纳米粒的溶血毒性明显降低，细胞毒性明显降低，生物安全性明显提高，该藤黄酸二聚体纳米粒具有长循环作用，能更好的聚集在小鼠发炎关节处，并延长代谢周期，明显降低系统毒性，能够促进炎性关节中巨噬细胞和破骨细胞的凋亡，从而减少炎性关节中的炎症和骨侵蚀。
本发明提供的低毒性，高载药量，无需外加载体的藤黄酸二聚体自组装纳米粒在制备治疗类风湿性关节炎的药物中具有广阔的临床应用前景。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1：GBA-GBA@Nps的粒径、分布、电位、形貌表征。
图2：GBA-GBA@Nps的长期稳定性。
图3：GBA-GBA@Nps的血清稳定性。
图4：GBA及GBA-GBA@Nps的溶血性实验。
图5：GBA及GBA-GBA@Nps给药24h后对Raw 264.7细胞存活率的影响。
图6：HPLC法考察Raw264.7细胞对GBA和GBA-GBA@Nps在2h的摄取情况。
图7：(A)尾静脉注射DiR、DiR/GBA-GBA@Nps在AIA小鼠上的小动物活体成像图；(B)给药48h后，主要脏器和左后爪的离体荧光图(a：心脏，b：肝脏，c：脾脏，d：肺脏，e：肾脏，f：左后爪)。
图8：GBA-GBA@Nps体内对AIA大鼠足肿胀的抑制作用。(A)
GBA-GBA@Nps治疗AIA大鼠关节炎给药示意图；(B)左后足体积；(C)左后足厚度；(D)体重变化；(E)生存率。
图9：(A)不同组AIA大鼠左后爪代表性照片；(B)不同组AIA大鼠左后爪micro-CT成像；(C)不同组AIA大鼠踝关节H&E染色图；(D)不同组AIA大鼠踝关节番红O染色图；(E)不同组AIA大鼠踝关节甲苯胺蓝染色图；(F)不同组骨密度；(G)不同组骨小梁数；(H)不同组骨小梁骨厚度；(I)不同组骨小梁分离度。
图10：(A)主要器官组织的H&E染色；大鼠全血中(B)WBC、(C)RBC指标；大鼠血清中(D)BUN、(E)CRE、(F)AST、(G)ALT指标。
图11：TUNEL法及CD68(A)和CD51(B)免疫荧光分析分别测定巨噬细胞和破骨细胞的细胞凋亡情况。
图12：大鼠踝关节免疫组化(A)CD68、(C)IL-1β、(D)TNF-α、(E)RANKL；(B)TRAP染色及大鼠血清中(F)IL-1β、(G)TNF-α、(H)RANKL/OPG炎症因子的变化。
具体实施方式
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
实施例1：制备藤黄酸二聚体自组装纳米粒
1.制备藤黄酸二聚体
按照申请号为CN202210705780.4的专利申请实施例4记载的方法，制备得到藤黄酸二聚体：GBA-GBA。
GBA-GBA的结构如下：
2.制备藤黄酸二聚体自组装纳米粒
采用一步纳米沉淀法制备藤黄酸二聚体自组装纳米粒，具体操作如下：取4mgGBA-GBA溶解在1mL丙酮中，超声使之完全溶解，将溶解好的有机溶液逐滴加入10mL去离子水中，加热至50℃搅拌60min，挥干有机溶剂，过0.45μm微孔滤膜，得到无需任何载体的藤黄酸二聚体自组装纳米粒GBA-GBA@Nps溶液。
以下为对照自组装纳米粒样品的制备方法。
对照例1：
取4mg的GBA-GBA溶解在1mL甲醇中，超声使之完全溶解，将溶解好的有机溶液逐滴加入10mL去离子水中，加热至50℃搅拌60min，挥干有机溶剂，过0.45μm微孔滤膜，得到无需任何载体的对照自组装纳米粒溶液。
以下通过实验例证明本发明的有益效果。
实验例1：粒径、电位、外观形貌测定
采用马尔文粒度仪对所制备的自组装纳米粒进行粒径大小、分布及Zeta电位测定。根据动态光散射(DLS)分析，实施例1所得GBA-GBA@Nps的粒径为178.21±1.74nm，多分散性指数(PDI)为0.13±0.01，zeta电位为-31.2±0.3mV(图1，表1)，对照例1所得对照自组装纳米粒的粒径为257.8nm，PDI为0.219，zeta电位为-28(表1)。
表1.不同溶剂制备的自组装纳米粒的粒径、PDI和Zeta电位
样品 溶剂 粒径(nm) PdI Zeta(mV)
实施例1 丙酮 178.21 0.13 -31.2
对照例1 甲醇 257.8 0.219 -28
采用扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(TEM)对GBA-GBA@Nps的形貌进行表征。结果表明，GBA-GBA@Nps呈纳米尺度的均匀球形形貌(图1)。
上述实验结果表明，与对照例1以甲醇为溶剂制备得到的纳米粒相比，本发明实施例1以丙酮为溶剂制备得到的藤黄酸二聚体自组装纳米粒GBA-GBA@Nps粒径分布更好，更为均一，且其纳米粒的粒径更小，很可能会更好地在炎症部位蓄积。
实验例2：载药量测定
采用高效液相色谱仪(HPLC)测定GBA-GBA@Nps的载药量。精密移取1mL制备好的GBA-GBA@Nps纳米粒的溶液，加入等体积的甲醇，超声数分钟，过0.45μm微孔滤膜，滤液按HPLC色谱条件测定GBA-GBA药物浓度，计算载药量。HPLC液相条件如下：采用C18反相色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)在30℃下测定，最大吸收波长为360nm。流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液(表1)，流速1.0mL/min。
表2.流动相信息
t/min 甲醇 0.1％磷酸水
0-10 85 15
10-30 88 12
30-40 90 10
40-50 90 10
载药量(％)＝制剂中测得药物含量/投药量×100％。
实验结果表明：GBA-GBA@Nps纳米粒的载药量为85.78±3.67％。
实验例3：稳定性试验
将GBA-GBA@Nps纳米粒于4℃贮存7天，DLS每天测定其粒径及PDI变化情况，结果发现一周内纳米粒粒径及其分布变化不大，说明该纳米粒稳定性较好(图2)。
将GBA-GBA@Nps与FBS以1:1(v/v)的比例混合，在37℃轻轻摇晃。于特定时间点(0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0h)收集各组上清液，采用酶标仪检测其在560nm处的吸光度值，观察GBA-GBA@Nps稳定性，结果发现该纳米粒具有良好的血清稳定性(图3)。
实验例4：溶血性试验
溶血性实验是评价血液相容性的重要指标，据报道，GBA存在明显的溶血性。为保证GBA-GBA@Nps静脉注射后的生物安全性，进行溶血实验研究。健康家兔心脏处取5mL新鲜血液。3000rmp离心10min后去掉上清液，用生理盐水洗涤至上清液透明无色，离心所得沉淀为红细胞并用生理盐水制得2％的红细胞悬液，放入冰箱4℃进行冷藏。取2％红细胞悬液分别与等体积等效GBA浓度(1.0和2.0μg/mL)的游离药物和纳米粒子混合，生理盐水作为阴性对照，纯水作为阳性对照。37℃孵育4h后,3000rpm离心10min，采用酶标仪在545nm处测定上清液吸光度。使用以下公式计算样品的溶血率(Hemolytic rate):
其中，As为样品的吸光度值，An和Ap分别为阴性对照和阳性对照的吸光度值。
由图4可见，2.0μg/mL GBA与阳性对照组表现出明显的红细胞膜损伤，而GBA-GBA@Nps在折合等量GBA浓度下未表现出溶血特性。结果表明，与GBA相比，GBA-GBA@Nps的溶血毒性明显降低。
实验例5：细胞毒性实验
取对数生长期的Raw 264.7细胞均匀接种于96孔板中，培养过夜。待细胞贴壁后，吸去上层培养液，每孔加入100μL的含GBA及GBA-GBA@Nps与0.5％FBS的DMEM混匀的培养基，使药物终浓度为1，2，4，8μM，而对照组则加入相同体积的0.5％FBS的DMEM培养基，每个浓度设置3个复孔。孵育24h后每孔加入10μL CCK8，继续孵育4h，酶标仪450nm测OD值。
由图5可知，GBA的IC50为1.476μM，GBA-GBA的IC50为2.531μM，与GBA相比，GBA-GBA@Nps具有明显降低的细胞毒性，证明了GBA-GBA@Nps具有治疗RA的临床应用潜力。
实验例6：细胞摄取实验
将RAW 264.7细胞接种在6孔板中，孵育24小时使细胞贴壁。用等效GBA浓度(100μg/mL)的游离GBA或GBA-GBA@Nps处理细胞4小时。接下来，用HBSS洗涤细胞3次。收集细胞，用液氮反复冻融3次，超声处理15分钟破碎细胞。用0.5mL甲醇提取细胞破碎液，涡旋混合，15000rpm离心5分钟。采用上述HPLC液相条件分析样品中GBA-GBA量。而GBA的分析HPLC液相条件如下：流动相：甲醇-0.1％乙酸水溶液(93:7，v/v)；检测波长：360nm；色谱柱：C18；柱温：25℃；流速：1.0mL/min。
如图6所示，GBA-GBA@Nps的细胞摄取率约为GBA的2倍，具有显著性差异，说明与GBA相比，GBA-GBA@Nps的纳米结构更有利于Raw264.7细胞的摄取。
实验例7：药物在小鼠体内生物分布实验
BALB/c小鼠(20±2g)左后肢皮内注射50μL完全弗氏佐剂(FCA,1mg/mL)，建立佐剂诱导的大鼠关节炎模型(AIA)。17d后，AIA小鼠尾静脉注射1mg/kg DiR(一种荧光染料)或者DiR/GBA-GBA@Nps(3只/组)。在给药后2、4、6、8、24、30、48h，对小鼠进行异氟醚麻醉，并通过体内成像系统(IVIS)(PerkinElmer,USA)进行观察。并于给药48h后，对小鼠进行安乐死。取心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏和后肢通过IVIS测定荧光。
如图7(A)所示，通过尾静脉注射DiR后，由于其非特异性靶向和缓慢累积，小鼠发炎关节处荧光较弱且直至24h才显示出荧光。而DiR/GBA-GBA@Nps组在注射2h后可观察到发炎关节处有荧光信号，且24h达到最强，随后荧光信号逐渐减弱，且注射48h后仍具有较强荧光信号。由图7(B)可知，DiR/GBA-GBA@Nps组荧光在小鼠发炎左后爪中的分布明显高于DiR组。此外，DiR/GBA-GBA@Nps组较DiR组的小鼠肝脏有明显荧光，可能与肝脏是纳米粒子的代谢中心有关。上述结果表明，GBA-GBA@Nps具有长循环作用，能更好的聚集在小鼠发炎关节处，并延长代谢周期。
实验例8：药物对AIA大鼠的治疗作用研究
1.AIA大鼠模型建立
每只SD大鼠(200±20g)单次皮内注射50μl完全弗氏佐剂(FCA，10mg/mL)于左后爪中，建立AIA大鼠模型。正常组用等量生理盐水替代。在实验中观察到用此方法建立的AIA大鼠模型，于造模后第17天开始小鼠爪子出现明显红肿症状。
2.体内治疗RA行为学研究
AIA大鼠随机分为4组(n＝8)，分别为正常组、模型组、GBA组、GBA-GBA@Nps组(GBA等效剂量4mg/kg)。各组从造模成功后开始一周给药2次，持续给药2周(即：第17天，第20天，第24天，第27天，第30天注射给药)。另将没有任何干预措施的健康大鼠作为阴性对照。使用游标卡尺和足趾容积测量仪测量大鼠足肿胀程度，同时检测大鼠体重和生长情况。一周测定2次大鼠左后足跖体积及其厚度、体重变化，并于实验终点第31天时处死大鼠。
如图8B、图8C所示，GBA组与GBA-GBA@Nps组治疗效果相当，较模型组而言均能明显抑制大鼠足肿胀。而图8D、图8E表明GBA组在给药一周后出现明显的体重变化，生存率下降的情况，而GBA-GBA@Nps组、大鼠组、模型组在体重、生存率变化方面均无明显差异，提示GBA-GBA@Nps可能降低GBA的系统毒性。
3.药物对AIA大鼠关节炎治疗效果研究
为更直观的观测GBA及GBA-GBA@Nps对AIA大鼠关节炎的治疗效果情况，对其左后关节拍照以评估其肿胀程度。如图9A所示，GBA组及GBA-GBA@Nps组较模型组相比，能明显抑制大鼠足肿胀。为了进一步研究GBA及GBA-GBA@Nps对大鼠踝关节的损伤和滑膜炎症影响，实验结束时，收集踝关节，将踝关节固定在4％多聚甲醛中，采用micro-CT(PerkinElmer,230Inc.USA)然后重建数据集以获得3D图像并且对骨相关参数进行定量分析。如图9B的大鼠踝关节micro-CT成像所示，模型组大鼠存在骨表面欠光滑、有一定骨损伤的情况(红色箭头)，而GBA及GBA-GBA@Nps组较模型组而言，可明显降低其骨损伤程度。给药组与健康组相比，表现出相似的骨表面光滑程度、轻微的骨损伤情况。此外，给药组的骨密度与健康组均相差不大(图9F)。但与模型组相比，给药组均可增加骨小梁数(图9G)及骨小梁骨厚度(图9H)，且减少骨小梁分离度(图9I)。由此说明GBA及GBA-GBA@Nps可有效修复AIA大鼠模型中的骨质侵蚀情况。
随后，将踝关节浸入15％ EDTA溶液中2个月进行脱钙。将脱钙关节包埋在石蜡中，接下来将蜡块切片进行H&E、番红O、甲苯胺蓝染色，进行组织形态学考察。图9C的踝关节切片H&E染色显示，GBA和GBA-GBA@Np较模型组而言，均能减少炎症细胞的浸润(黄色箭头)和滑膜增生(黑色箭头)。图9D的踝关节切片番红O-甲苯胺蓝染色用于标记糖胺聚糖，从而检查踝关节的软骨完整性。GBA和GBA-GBA@Nps的番红O-甲苯胺蓝染色的阳性区域与健康软骨组织相似(图9D、图9E)，表明GBA或GBA-GBA@Nps能够恢复软骨侵蚀。
4.生物安全性研究
据报道，GBA存在严重毒性，因此，通过对主要器官的组织病理学分析以及血液学和血清生化检测，进一步评价GBA-GBA@Nps的生物安全性。如图10A所示，GBA给药导致主要器官的组织病理学异常，主要表现为结构破坏(黄色箭头)，坏死(黑色箭头)和炎性细胞浸润(红色箭头)。谷丙转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)是评价肝细胞损伤的生物标志物，而尿素氮(BUN)和肌酐(CRE)是肾毒性的生物标志物。GBA组BUN(图10D)、CRE(图10E)、AST(图10F)和ALT(图10G)显著升高，提示存在肾脏和肝脏损伤。白细胞(WBC)计数和红细胞(RBC)计数分别与感染和血液毒性密切相关。同样，异常高的白细胞(图10B)和低的红细胞(图10C)提示GBA的血液相容性差。但是，GBA-GBA@Nps组很大程度上消除了GBA的这些不利影响，该组细胞结构完整，细胞核排列整齐，未出现明显的坏死或变性情况。GBA-GBA@Nps组中WBC，RBC，BUN，CRE，AST，ALT水平与健康大鼠相近。
上述结果表明，GBA-GBA@Nps可明显提高药物的生物安全性。
5.药物对AIA大鼠炎症关节的巨噬细胞和破骨细胞凋亡作用的影响
为了研究GBA-GBA@Nps是否可以靶向炎症关节内的巨噬细胞和破骨细胞，并同时诱导两种细胞凋亡作用，将各组踝关节浸入15％ EDTA溶液中2个月进行脱钙。脱钙后的踝关节制备切片。10μm厚度的切片采用TUNEL分别与大鼠CD68抗体和CD51抗体进行共染色。通过TUNEL染色、CD68和CD51免疫荧光分析分别测定炎症关节内巨噬细胞和破骨细胞的细胞凋亡水平和数量。
如图11A、图11B所示，与游离GBA相比，GBA-GBA@Nps在发炎关节中触发了更高水平的细胞凋亡。由CD68和CD51的红色荧光和TUNEL的绿色荧光重叠情况可见，GBA-GBA@Nps可诱导巨噬细胞和破骨细胞凋亡。这可能与GBA-GBA@Nps可优先富集至炎症关节，选择性靶向巨噬细胞和破骨细胞，并有效诱导细胞凋亡，从而改善佐剂诱导的关节炎且无明显毒性有关。
6.药物对AIA大鼠抗炎作用研究
实验结束时，收集踝关节，将踝关节固定在4％多聚甲醛中，然后切片进行TRAP化学染色、以及CD68、RANKL、TNF-α和IL-1β免疫组化染色。采集各组大鼠血清，血清中的TNF-α、IL-1β、RANKL、OPG由ELISA试剂盒测量。
炎性病变中破骨细胞和巨噬细胞的减少可进一步证实GBA-GBA@Nps的靶向活性。CD68的免疫组化分析表明GBA-GBA@Nps显著减少了巨噬细胞的数量(图12A)。在破骨细胞(红色区域)的抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色中也可以看到类似的结果(图12B)。巨噬细胞与RA中促炎细胞因子如白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌密切相关。研究发现GBA-GBA@Nps组血清中TNF-α和IL-1β的分泌低于GBA组，接近健康组(图12F、图12G)。免疫组化分析同样显示GBA-GBA@Nps有效地降低了踝关节中TNF-α和IL-1β的表达水平(图12C、图12D)。
核因子κB受体激活因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)对于骨骼重塑至关重要。降低RANKL水平及RANKL/OPG比率有助于RA缓解。研究发现，GBA-GBA@Nps较GBA组表现出更好的骨功能恢复趋势，如炎性关节中RANKL的低表达(图12E)以及血清中更小的RANKL/OPG比率(图12H)。上述结果表明，GBA-GBA@Nps能够促进炎性关节中巨噬细胞和破骨细胞的凋亡，从而减少炎性关节中的炎症和骨侵蚀。

Claims (8)

1.一种藤黄酸二聚体自组装纳米粒，其特征在于，它是由藤黄酸二聚体自组装形成的纳米粒子，所述藤黄酸二聚体的结构为：
所述藤黄酸二聚体自组装纳米粒的制备方法包括以下步骤：将藤黄酸二聚体溶于丙酮得到溶液，将溶液滴入水中，加热搅拌，过滤，即得；所述藤黄酸二聚体与丙酮的质量体积比为3-5mg/mL，所述丙酮与水的体积比为1：(9-11)；所述加热搅拌的温度为40-60℃，时间为50-70min。
2.根据权利要求1所述的藤黄酸二聚体自组装纳米粒，其特征在于，它的粒径为150～200 nm，多分散性指数为0.05～0.30，zeta电位为-25～-35mV。
3.根据权利要求2所述的藤黄酸二聚体自组装纳米粒，其特征在于，它的粒径为178.21±1.74 nm，多分散性指数为0.13±0.01，zeta电位为-31.2±0.3mV。
4.根据权利要求1所述的藤黄酸二聚体自组装纳米粒，其特征在于，所述藤黄酸二聚体与丙酮的质量体积比为4mg/mL，所述丙酮与水的体积比为1：10；所述加热搅拌的温度为50℃，时间为60min。
5.一种制备权利要求1-4任一项所述藤黄酸二聚体自组装纳米粒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将藤黄酸二聚体溶于丙酮得到溶液，将溶液滴入水中，加热搅拌，过滤，即得。
6.权利要求1-4任一项所述藤黄酸二聚体自组装纳米粒在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述药物是以藤黄酸二聚体自组装纳米粒为活性成份和载体的制剂。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述制剂为注射制剂。
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