CN116096236A - 杀昆虫组合 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了用于形成热塑性部件的热塑性成形工具和组件。特别地，提本发明提供了新的杀昆虫组合、组合物及其使用方法。本发明涉及富含半胱氨酸的杀昆虫肽(CRIP)和杀昆虫剂(IA)的组合。本发明还描述了所述组合和组合物用于防治昆虫的用途。此处，我们描述了以下内容：编码CRIP的基因；包含CRIP和IA的组合物和组合；以及使用对防治害虫有用的该组合物和组合的方法。

Description

杀昆虫组合
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年5月1日提交的美国临时申请序列号63/019,219的权益和优先权，其公开内容全文以引用方式并入本文。
序列表
本申请全文以引用方式并入名称为“225312-491452_ST25.txt”(1.41MB)的序列表，该序列表创建于2021年4月28日下午10:07，并在此以电子方式提交。
技术领域
本发明描述并要求保护用于防治和/或根除害虫的富含半胱氨酸的杀昆虫蛋白(CRIP)和杀昆虫剂(IA)的新杀昆虫组合，所述杀昆虫剂例如化学物质、分子、核苷酸、多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、毒素、毒物、毒药、杀昆虫剂、杀虫剂、有机化合物、无机化合物、原核生物体或真核生物体(以及由所述原核生物体或真核生物体产生的试剂)。
背景技术
许多昆虫是疾病的载体。按蚊属(Anopheles)的蚊子是Zika病毒、基孔肯雅病毒和疟疾的主要载体，疟疾是由锥虫属(Trypanosoma)的原生动物引起的疾病。埃及伊蚊(Aedesaegypti)是引起黄热病和登革热的病毒的主要载体。其他病毒，各种类型脑炎的致病因子，也由伊蚊属物种(Aedes spp.)蚊子携带。班氏丝虫(Wuchereria bancrofti)和马来丝虫(Brugia malayi)是引起丝虫病的寄生蛔虫，通常由库蚊属(Culex)、曼蚊属(Mansonia)和按蚊属的蚊子传播。
马蝇和鹿蝇可传播兔热病(土拉巴斯德氏菌(Pasteurella tularensis))和炭疽(炭疽杆菌(Bacillus anthracis))的细菌性病原体，以及在热带非洲引起罗阿丝虫病的寄生蛔虫(罗阿丝虫)。
潜蝇属(Hippelates)的眼潜蝇可携带引起雅司病(雅司螺旋体(Treponemapertenue))的螺旋菌病原体，并且也可传播结膜炎(红眼病)。舌蝇属(Glossina)的采采蝇传播引起非洲昏睡病的原生动物病原体(冈比亚锥虫(Trypanosoma gambiense)和罗得西亚锥虫(T.rhodesiense))。白蛉属(Phlebotomus)中的白蛉是在南美洲引起卡里翁氏病(奥罗亚热)的细菌(杆菌状巴通体(Bartonella bacilliformis))的载体。在亚洲和北非的部分地区，它们传播引起白蛉热(三天热)的病毒因子以及引起利什曼病的原生动物病原体(利什曼原虫(Leishmania)属)。
因此，为了保护我们赖以生存的农作物，并保障人类和动物的健康，需要有效的杀昆虫处理。
此处，我们描述了杀昆虫剂(IA)和富含半胱氨酸的杀昆虫肽(CRIP)的组合。IA是一种或多种化学物质、分子、核苷酸、多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、毒素、毒物、毒药、杀昆虫剂、杀虫剂、有机化合物、无机化合物、原核生物体和/或其产物(诸如细菌毒素)或真核生物体和/或其产物(诸如真菌毒素)。可将IA组合以提供比单独使用的任何IA的加和效果更大的杀昆虫效果。
CRIP是具有半胱氨酸残基的肽、多肽和/或蛋白质，在一些实施方案中，这些半胱氨酸残基能够形成二硫键；这些二硫键形成支架基序，该支架基序在各种不相关的蛋白质家族中都可观察到。属于CRIP家族的肽的示例是抑制剂胱氨酸结(ICK)肽。ICK肽包括许多具有杀昆虫活性的分子。此类ICK肽通常对天然存在的生物靶标物种，通常是昆虫或某种类型的蛛形纲动物具有毒性。通常ICK肽可具有节肢动物来源诸如蝎子或蜘蛛的毒液。
此处，我们描述了IA和CRIP的新型杀昆虫剂组合。例如，我们尤其描述了杀昆虫有效组合，该杀昆虫有效组合包含(1)一种或多种CRIP或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白或其药学上可接受的盐；或者它们的组合；和(2)一种或多种杀昆虫剂(IA)，以及使用它们保护我们赖以生存的农作物并保障人类和动物的健康的方法。
发明内容
本发明描述了如何将CRIP和IA组合，使得它们提供的杀昆虫效果大于单独使用的任何IA或CRIP的加和杀昆虫效果。本公开描述了如何制备和使用CRIP和IA的组合来杀死和防治昆虫，甚至是杀昆虫剂抗性昆虫，并且甚至在低剂量下。不受理论的束缚，我们对CRIP和IA的理解使我们能够教导本领域的普通技术人员，创造新型方法、组合物、化合物(蛋白质和肽)和程序来保护植物并防治昆虫。
本公开描述了包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(CRIP)和杀昆虫剂(IA)的组合。
此外，本公开描述了包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(CRIP)和杀昆虫剂(IA)的组合，其中IA是细菌毒素、真菌毒素、凝集素、印楝(Azadirachta indica)化合物、硼化合物、病毒或它们的组合；并且其中CRIP是U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽、U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)、海葵毒素、Av3变体多肽(AVP)、巴西游走蛛(Phoneutria)毒素或Atracotoxin(ACTX)。
此外，本公开描述了一种组合物，该组合物包含包括富含半胱氨酸的杀昆虫肽(CRIP)和杀昆虫剂(IA)的组合，并且还包含赋形剂。
此外，本公开描述了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种(Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki)菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽。
此外，本公开描述了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)。
此外，本公开描述了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3-变体多肽(AVP)。
此外，本公开描述了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素。
此外，本公开描述了一种组合，该组合包含球孢白僵菌(Beauveria bassiana)菌株ANT-03孢子和具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
此外，本公开描述了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种(Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis)菌株NB-176中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
此外，本公开描述了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
此外，本公开描述了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis ssp.israelensis)菌株BMP 144中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
此外，本公开描述了一种组合，该组合包含发光光杆状菌(Photorhabdusluminescens)毒素和ACTX；其中发光光杆状菌毒素是发光光杆状菌毒素复合物(Tca)，包括TcaA(SEQ ID NO:616)、TcaB(SEQ ID NO:617)、TcaC(SEQ ID NO:618)和TcaZ(SEQ ID NO:619)；并且其中ACTX肽是U+2-ACTX-Hv1a毒素(SEQ ID NO:61)。
此外，本公开描述了一种组合，该组合包含雪滴花(Galanthus nivalis)凝集素(GNA)和ACTX；其中GNA具有SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列；并且其中ACTX肽是具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
此外，本公开描述了一种组合，该组合包含印楝素和ACTX；其中印楝素是具有以下化学式的印楝素：C35H44O16；并且其中ACTX是具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
此外，本公开描述了一种组合，该组合包含硼酸化合物和ACTX；其中硼酸化合物具有化学式H3BO3；并且其中ACTX肽是具有根据SEQ IDNO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
此外，本公开描述了一种组合，该组合包含苹果蠹蛾(Cydia pomonella)颗粒体病毒(CpGV)和ACTX；其中CpGV是苹果蠹蛾颗粒体病毒分离株V22病毒；并且其中ACTX肽是具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
此外，本公开描述了一种使用包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(CRIP)和杀昆虫剂(IA)的组合来防治昆虫的方法，所述方法包括提供至少一种CRIP和至少一种IA的组合，将包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(CRIP)和杀昆虫剂(IA)的组合施用到昆虫所在处。
此外，本公开描述了一种使用包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(CRIP)和杀昆虫剂(IA)的组合来防治苏云金芽孢杆菌毒素抗性昆虫的方法，该方法包括提供至少一种CRIP和至少一种IA的组合；然后将所述组合施用到昆虫所在处。
此外，本公开描述了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括将杀虫有效量的包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(CRIP)和杀昆虫剂(IA)的组合施用到害虫所在处，或施用到易受害虫侵袭的植物或动物。
附图说明
图1示出了描绘在使用(1)U+2-ACTX-Hv1a与Bti，(2)单独的Bti毒素，(3)单独的U+2-ACTX-Hv1a，和(4)对照(水)的饮食掺入测定后埃及伊蚊(蚊子)幼虫的24小时死亡率的图。
图2描绘了示出在用苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Bacillus thuringiensisvar.kurstaki)毒素(Btk)与Γ-CNTX-Pn1a组合进行叶喷测定后，鳞翅目(Lepidopteran)物种甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)的3天死亡率的图。此处，处理是(1)单独的Γ-CNTX-Pn1a；(2)单独的Btk毒素；(3)Γ-CNTX-Pn1a和Btk毒素的组合；或(4)对照(0.125％Vintre，表面活性剂)。
图3描绘了示出在用Btk结合Av3变体多肽(AVP)进行叶喷测定后鳞翅目物种甜菜夜蛾的3天死亡率的图。此处，对(1)单独的AVP；(2)单独的Btk毒素；(3)AVP和Btk毒素两者的组合；或(4)对照(0.125％ Vintre，表面活性剂)进行了测试。此处，测试的AVP是AVPb。
图4示出了评价在0分钟、20分钟、40分钟、60分钟、180分钟和1260分钟后在模拟鳞翅目昆虫肠道环境的美洲棉铃虫(Helicoverpa zea)肠道提取物(HGE)中WT-Ta1b降解的色谱图。方框表示主峰和次峰，由此表示WT-Ta1b的降解。嵌套插图示出了色谱图的放大和缩小视图。方框突出了证明蛋白水解事件的峰，这由两个肩峰的存在来证明：主峰右侧较小的“肩峰”表示部分蛋白水解事件。
图5示出了评价在0分钟、20分钟、40分钟、60分钟、180分钟和1260分钟后在模拟鳞翅目昆虫肠道环境的美洲棉铃虫肠道提取物(HGE)中TVP-R9Q降解的色谱图。方框表示单峰的存在，因此表示TVP-R9Q的稳定性。嵌套插图示出了色谱图的放大和缩小视图。此处，单一主峰(示出在方框中)的存在表示TVP-R9Q肽的稳定性。
图6描绘了示出当测试WT-Ta1b、Btk毒素以及它们的组合对鳞翅目物种美洲棉铃虫(玉米穗虫)的脱叶测定结果的图。处理如下：(1)单独的WT-Ta1b；(2)单独的Btk毒素；(3)WT-Ta1b和Btk毒素两者的组合；或(4)对照(0.125％ Vintre，表面活性剂)。此处，Btk毒素示出为“Btk”。
图7描绘了示出当测试TVP-R9Q、Btk毒素以及它们的组合对鳞翅目物种美洲棉铃虫(玉米穗虫)的脱叶测定结果的图。处理如下：(1)单独的TVP-R9Q；(2)单独的Btk毒素；(3)TVP-R9Q和Btk毒素两者的组合；或(4)对照(0.125％ Vintre，表面活性剂)。此处，Btk毒素示出为“Btk”。
图8描绘了示出当测试WT-Ta1b、Btk毒素以及它们的组合对鳞翅目物种美洲棉铃虫(玉米穗虫)的死亡率测定结果的图。处理如下：(1)单独的WT-Ta1b；(2)单独的Btk毒素；(3)WT-Ta1b和Btk毒素两者的组合；或(4)对照(0.125％ Vintre，表面活性剂)。此处，Btk毒素示出为“Btk”。
图9描绘了示出当测试TVP-R9Q、Btk毒素以及它们的组合对鳞翅目物种美洲棉铃虫(玉米穗虫)的死亡率测定结果的图。处理如下：(1)单独的TVP-R9Q；(2)单独的Btk毒素；(3)TVP-R9Q和Btk毒素两者的组合；或(4)对照(0.125％ Vintre，表面活性剂)。此处，Btk毒素示出为“Btk”。
图10描绘了示出鞘翅目(Coleopteran)物种拟步甲(小粉虫(Alphitobiusdiaperinus))在使用(1)单独的U+2-ACTX-Hv1a；(2)单独的Btt毒素；(3)U+2-ACTX-Hv1a和Btt毒素的组合；或(4)未处理的对照(水)进行饮食掺入测定后的4天死亡率的图。
图11描绘了示出科罗拉多马铃薯甲虫(马铃薯甲虫(Leptinotarsadecemlineata))在喷洒(1)单独的U+2-ACTX-Hv1a；(2)单独的Btt毒素；(3)U+2-ACTX-Hv1a和Btt毒素的组合；或(4)未处理的对照(水)时的4天死亡率的图。
图12描绘了示出用以下物质处理玉米穗虫幼虫的4天死亡率的图：(a)水；(b)单独的发光光杆状菌毒素复合物提取物(4.75％v/v)；(c)10mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(1％w/v)；和(d)发光光杆状菌毒素复合物提取物(4.75％w/v)与10mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(1％w/v)。此处，％w/v是组合物总体积的百分比w/v，其余是水。
图13描绘了示出在用(a)0mg/mL GNA(0％w/v)与0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)(对照)；(b)2.5mg/mL GNA(0.25％w/v)、0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)；(c)0mg/mL GNA(0％w/v)、5mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.5％w/v)；和(d)2.5mg/mL GNA(0.25％w/v)、5mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.5％w/v)处理后第三天玉米穗虫新生虫死亡率的图。此处，％w/v是组合物总体积的百分比w/v，其余是水。比例死亡率是指在实验过程中杀死的单个昆虫的比例，即死亡个体的数量占个体总数的比例。
图14描绘了示出在用(a)几丁质酶0μL/L(0％w/v)、U+2-ACTX-Hv1a0mg/mL(0％w/v)、蔗糖(10％w/v)；(b)几丁质酶100μL/L(0.01％w/v)、U+2-ACTX-Hv1a 0mg/mL(0％w/v)、蔗糖(10％w/v)；(c)几丁质酶0μL/L(0％w/v)、U+2-ACTX-Hv1a 5mg/mL(0.5％w/v)、蔗糖(10％w/v)；和(d)几丁质酶100μL/L(0.01％w/v)、U+2-ACTX-Hv1a5mg/mL(0.5％w/v)、蔗糖(10％w/v)处理后第三天草地粘虫(草地夜蛾(Spodoptera frugiperda))幼虫死亡率的图。此处，％w/v是组合物总体积的百分比w/v，其余是水。
图15描绘了昆虫生长调节剂印楝素的化学结构。
图16描绘了示出在用(a)0μL/L印楝素(0％v/v)、0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)(对照)；(b)80μL/L印楝素(0.008％v/v)、0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)；(c)0μL/L印楝素(0％v/v)、10mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(1％w/v)；和(d)80μL/L印楝素(0.008％v/v)、10mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(1％w/v)处理后第三天玉米穗虫(美洲棉铃虫)新生虫死亡率的图。此处，％w/v是组合物总体积的百分比w/v，其余是水。
图17描绘了示出用以下物质处理后第三天暗黑菌虫(小粉虫)新生虫死亡率的图：(a)0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)、0mg/mL硼酸(0％w/v)(对照)；(b)0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)、2.5mg/mL硼酸(0.25％w/v)；(c)1mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.1％w/v)、0mg/mL硼酸(0％w/v)；和(d)1mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.1％w/v)、2.5mg/mL硼酸(0.25％w/v)。此处，％w/v是组合物总体积的百分比w/v，其余是水。
图18描绘了示出在用以下物质处理后第七天苹果小卷蛾(苹果蠹蛾)新生虫死亡率的图：(a)0mg/mL球孢白僵菌毒素(0％w/v)；0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)(对照)；(b)1.2mg/mL球孢白僵菌毒素(0.12％w/v)、0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)；(c)0mg/mL球孢白僵菌毒素、2mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.2％w/v)；和(d)1.2mg/mL球孢白僵菌毒素(0.12％w/v)、2mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.2％w/v)。此处，％w/v是组合物总体积的百分比w/v，其余是水。
图19描绘了示出在用(a)0μL/L CpGV(0％w/v)、0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)(对照)；(b)58.5μL/L CpGV(0.00585％w/v)、0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)；(c)0μL/LCpGV(0％w/v)、2mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.2％w/v)；和(d)58.5μL/L CpGV(0.00585％w/v)、2mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(此处0.2％w/v，％w/v是组合物总体积的百分比w/v，其余是水)处理后第二天苹果小卷蛾(苹果蠹蛾)新生虫死亡率的图。
图20描绘了示出双苯氟脲与U+2-ACTX-Hv1a的饮食掺入测定结果和3天后评价玉米穗虫(美洲棉铃虫)死亡率的图。如此处所示，在玉米穗虫(美洲棉铃虫)饮食掺入测定中，没有证据表明当双苯氟脲与U+2-ACTX-Hv1a组合时的效果大于加和效果。此处，U+2是指U+2-ACTX-Hv1a。双苯氟脲的浓度如下：(a)80μL/L的双苯氟脲(0.008％w/v)；(b)8μL/L的双苯氟脲(0.0008％w/v)；(c)0.8μL/L的双苯氟脲(0.00008％w/v)；和(d)0μL/L的双苯氟脲(0％w/v)。10ppt Spear对应于1mg/mL(1％w/v)U+2-ACTX-Hv1a。
图21描绘了示出纳米颗粒与U+2-ACTX-Hv1a的饮食掺入测定结果和3天后评价玉米穗虫(美洲棉铃虫)死亡率的图。如此处所示，在玉米穗虫(美洲棉铃虫)饮食掺入测定中，没有证据表明当纳米颗粒与U+2-ACTX-Hv1a组合时的效果大于加和效果。此处，“Spear”是指U+2-ACTX-Hv1a。纳米颗粒的浓度如下：(a)50nm胺化二氧化硅(2700ppm)；(b)50nm二氧化硅(2575ppm)；(c)20nm二氧化硅(1177ppm)；和(d)10nm二氧化硅(12500ppm)。此处，“U+2”对应于5ppt U+2-ACTX-Hv1a，即0.5mg/mL(组合物总体积的0.5％w/v)U+2-ACTX-Hv1a。比例死亡率＝死亡昆虫数除以昆虫总数。“UTC”意指未处理的对照(水)。
图22描绘了示出3天后冰晶石和U+2-ACTX-Hv1a对玉米穗虫(美洲棉铃虫)的饮食掺入测定的死亡率剂量响应的图。如此处所示，在玉米穗虫(美洲棉铃虫)饮食掺入测定中，没有证据表明当冰晶石与U+2-ACTX-Hv1a组合时的效果大于加和效果。此处，U+2是指U+2-ACTX-Hv1a。纳米颗粒的浓度如下：(a)10000ppm；(b)2000ppm；(c)400ppm；和(d)0ppm。此处，10ppt“U+2”(即U+2-ACTX-Hv1a)对应于1mg/mL(组合物总体积的1％w/v)U+2-ACTX-Hv1a。比例死亡率＝死亡昆虫数除以昆虫总数。
具体实施方式
定义
“5'-末端”和“3'-末端”是指方向性，即核苷酸聚合物(例如DNA)的末端-末端取向。多核苷酸的5’-末端是具有第五个碳的多核苷酸的末端。
“5'-和3'-同源臂”或“5'和3'臂”或“左臂和右臂”是指载体和/或靶向载体中的多核苷酸序列，这些多核苷酸序列与宿主生物体中的靶向基因组序列和/或感兴趣的内源基因同源重组，以便实现宿主生物体的染色体基因座的成功遗传修饰。
“Γ-CNTX-Pn1a”或“γ-CNTX-Pn1a”或“γ-CNTX-Pn1a”或“γ”是指源自巴西武装蜘蛛(巴西流浪蜘蛛(Phoneutria nigriventer))的杀昆虫神经毒素。Γ-CNTX-Pn1a靶向离子型谷氨酸受体(GRIN)的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)亚型和钠通道。
“ω/κ-HXTX-Hv1a”或“Omega/Kappa-HXTX-Hv1a”是指源自澳大利亚蓝山漏斗网蜘蛛(澳大利亚漏斗网蜘蛛(Hadronyche versuta))的杀昆虫毒素。ω/κ-HXTX-Hv1a是一种ACTX肽，即已经从属于Atracinae家族的蜘蛛中分离的杀昆虫ICK肽家族。ω/κ-HXTX-Hv1a是烟碱乙酰胆碱受体的正变构调节剂，并且也可以是昆虫电压门控Ca2+通道和电压门控K+通道的双重拮抗剂。参见Chambers等人，“Insecticidal spider toxins are highaffinity positive allosteric modulators of the nicotinic acetylcholinereceptor”，FEBS Lett.，2019年6月，第593卷第12期：第1336-1350页；以及Windley等人，“Lethal effects of an insecticidal spider venom peptide involve positiveallosteric modulation of insect nicotinic acetylcholine receptors”，Neuropharmacology，2017年12月，第127卷：第224-242页，这些文献的公开内容全文以引用方式并入本文。
“ACTX”或“ACTX肽”或“atracotoxin”是指从属于毒疣蛛(Atracinae)亚科的蜘蛛中分离的杀昆虫ICK肽家族。一种这样的蜘蛛被称为澳大利亚蓝山漏斗网蜘蛛，其学名为澳大利亚漏斗网蜘蛛。来自该物种的ACTX肽的两个示例是Omega肽和U肽。
“ADN1启动子”是指由源自粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)粘附缺陷蛋白质1基因的启动子序列组成的DNA片段。
“α-MF信号”或“αMF分泌信号”是指将新生重组多肽导向分泌途径的蛋白质。
“农业上可接受的载体”涵盖通常用于杀虫剂配制技术中的所有佐剂、惰性组分、分散剂、表面活性剂、增粘剂、粘合剂等；这些是杀虫剂配制领域技术人员熟知的。
“农业上可接受的盐”在本文中与术语“药学上可接受的盐”同义使用。
“农杆菌感染”意指通过使用根癌农杆菌(Agrobacteria tumefaciens)或发根农杆菌(Agrobacteria rhizogenes)将DNA导入植物细胞的植物转化方法。
“比对”是指比较两个或更多个序列(例如，核苷酸、多核苷酸、氨基酸、肽、多肽或蛋白质序列)以确定它们彼此之间的关系的方法。比对通常由应用各种算法的计算机程序执行，然而，也可手动执行比对。比对程序通常通过潜在的序列比对进行迭代，并使用置换表对比对进行评分，从而采用多种策略以达到潜在的最佳比对评分。常用的比对算法包括但不限于CLUSTALW(参见Thompson J.D.、Higgins D.G.、Gibson T.J.，“CLUSTAL W:improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment throughsequence weighting,position-specific gap penalties and weight matrix choice”，Nucleic Acids Research，第22卷：第4673-4680页，1994年)、CLUSTALV(参见Larkin M.A.等人，CLUSTALW2,ClustalW and ClustalX version 2，Bioinformatics，第23卷第21期：第2947-2948页，2007年)、Mafft、Kalign、ProbCons和T-Coffee(参见Notredame等人，“T-Coffee:A novel method for multiple sequence alignments”，Journal of MolecularBiology，第302卷：第205-217页，2000年)。实现前述算法中的一者或多者的示例性程序包括但不限于来自DNAStar的MegAlign(DNAStar,Inc.，3801Regent St.Madison，Wis.，53705)、MUSCLE、T-Coffee、CLUSTALX、CLUSTALV、JalView、Phylip和来自Accelrys的Discovery Studio(Accelrys,Inc.，10188Telesis Ct，Suite 100，San Diego，Calif.，92121)。在一些实施方案中，比对将“相移”和/或“空位”引入被比较的序列中的一者或两者中，以便最大化两个序列之间的相似性，并且评分是指定量表达所比对序列的相关性的过程。
“α-MF信号”或“αMF分泌信号”是指将新生重组多肽导向分泌途径的蛋白质。
“蛛形纲”是指节肢动物类。例如在一些实施方案中，蛛形纲可意指蜘蛛、蝎子、蜱、螨、盲蛛或避日蛛(solifuges)。
“Av2”或“ATX-II”或“神经毒素2”或“蛇锁海葵(Anemonia viridis)毒素2”或“δ-AITX-Avd1c”是指从沟迎风海葵(Anemonia sulcata)毒液中分离的毒素。Av2多肽的一个示例是具有SEQ ID NO:588的氨基酸序列的多肽。
“Av3”是指从海葵(蛇锁海葵)中分离的多肽，其可靶向电压门控钠通道的α-亚基III上的受体位点3。Av3多肽的一个示例是具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的Av3多肽(NCBI登录号P01535.1)。
“AVP”或“Av3变体多肽”是指Av3多肽序列和/或由变体Av3多核苷酸序列编码的多肽，该多核苷酸序列已改变以产生非天然存在的多肽和/或多核苷酸序列。
“BAAS”意指大麦α-淀粉酶信号肽，并且是ERSP的一个示例。BAAS的一个示例是具有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的BAAS(NCBI登录号AAA32925.1)。
“生物量”是指任何测量的植物产物。
“二元载体”或“二元表达载体”意指在大肠杆菌(E.coli)菌株和农杆菌菌株中可复制自身的表达载体。此外，该载体包含由左和右边界序列括起的DNA区(通常称为t-DNA)，该区域被毒力基因识别，从而被农杆菌复制并递送到植物细胞中。
“bp”或“碱基对”是指包含两个彼此键合的化学碱基的分子。例如，DNA分子由两条缠绕链组成，其中每条链具有由交替的脱氧核糖和磷酸基团组成的主链。附着在每个脱氧核糖上的是四个碱基中的一者，即腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)或胸腺嘧啶(T)，其中腺嘌呤与胸腺嘧啶形成碱基对，并且胞嘧啶与鸟嘌呤形成碱基对。
“Bt毒素”是指由苏云金芽孢杆菌(Bt)产生的发酵固体、孢子和毒素，Bt是一种革兰氏阳性孢子形成细菌，诸如苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)、苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)和苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)。在孢子形成期间，苏云金芽孢杆菌产生具有杀昆虫作用的晶体蛋白质(即蛋白质内含物)，称为δ-内毒素。在一些实施方案中，Bt毒素可以是晶体(Cry)蛋白质、溶细胞(Cyt)蛋白质、植物杀昆虫蛋白(Vip)或苏云金芽孢杆菌产生的其他毒素。
“抗Bt”或“Bt抗性”或“抗Bt昆虫”或“抗苏云金芽孢杆菌毒素昆虫”是指害虫群体敏感性的可遗传变化，这种变化反映在产品(诸如Bt)在用于对抗该害虫物种时反复未能达到预期的防治水平。
“C-末端”是指位于多肽末端的游离羧基(即-COOH)。
“cDNA”或“拷贝DNA”或“互补DNA”是指与RNA分子互补的分子。在一些实施方案中，cDNA可以是单链或双链的。在一些实施方案中，cDNA可以是在逆转录酶催化的反应中由单链RNA模板合成的双链DNA。在其他实施方案中，“cDNA”是指共享在天然成熟mRNA物种中发现的序列元件排列的所有核酸，其中序列元件是外显子和3'和5'非编码区。通常mRNA物种具有连续的外显子，其中间插内含子被核RNA剪接除去，以形成编码蛋白质的连续开放阅读框。在一些实施方案中，“cDNA”是指与mRNA模板互补并源自该mRNA模板的DNA。
“CEW”指玉米穗虫。
“可切割接头”参见接头。
“克隆”是指涉及插入来自一个源的DNA片段(例如，通常是感兴趣的基因，例如tvp)并将其与来自另一个源的DNA片段(例如，通常是载体，例如质粒)重组，并引导该重组DNA或“重组DNA”复制，通常通过将该重组DNA转化到细菌或酵母宿主中的过程和/或方法。
“嵌合基因”意指编码源自一个或多个编码序列的部分的基因以产生新基因的DNA序列。
“编码序列”或“CDS”是指当置于适当的调节序列控制下并在必需的转录和/或翻译分子因子存在时可被转录(例如，在DNA的情况下)或翻译(例如，在mRNA的情况下)成肽、多肽或蛋白质的多核苷酸或核酸序列。编码序列的边界由5'(氨基)末端的翻译起始密码子和3'(羧基)末端的翻译终止密码子确定。转录终止序列通常位于编码序列的3'。在一些实施方案中，编码序列可在5'和/或3'末端侧翼有非翻译区。在一些实施方案中，编码序列可用于产生肽、多肽或蛋白质产物。在一些实施方案中，编码序列可以或可以不与另一编码序列或定位信号诸如核定位信号融合。在一些实施方案中，编码序列可克隆到载体或表达构建体中，可整合到基因组中，或可作为DNA片段存在。
“密码子优化”指产生其中一个或多个内源、天然和/或野生型密码子被最终仍编码相同氨基酸但在对应宿主中优选的密码子取代的基因。
“组合”是指两个或更多个项之间的任何关联。该关联可以是空间的、时间的，并且/或者是指出于共同目的使用该两个或更多个项。例如，组合可以是以下项的任何时空关联、混合物或排列：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；和(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)，其中(1)和(2)用于防治或对抗昆虫害虫的共同目的，使得昆虫害虫死亡、停止或减慢其移动；停止或减慢其进食；停止或减慢其生长；变得混淆(例如，关于导航、定位食物、睡眠行为和/或交配)；不能化蛹；干扰繁殖；以及/或者阻止该昆虫产生后代和/或阻止该昆虫产生可育后代。
除非上下文另有说明，否则术语“组合”可包括同时、分开或依次施用：以任意顺序施用(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；与(2)一种或多种杀昆虫剂(IA)。
应当理解，在一些实施方案中，(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；和(2)一种或多种杀昆虫剂(IA)，被认为是当害虫或害虫所在处暴露于(1)和(2)两者时，或用同时暴露于(1)和(2)处理要保护免受害虫侵害的所在处(例如，植物)时，作为“组合”施用或“组合”施用。在一些实施方案中，(1)该一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；和(2)该一种或多种杀昆虫剂(IA)中的每一者可依次施用或按照不同的时间表施用—实际上，不需要同时或以相同的组合物施用不同试剂的单个剂量。而是，只要(1)该一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；和(2)该一种或多种杀昆虫剂(IA)两者，保持杀虫效果(即具有杀昆虫活性)，就认为它们“组合”施用。
在一些实施方案中，“组合”是指同时施用：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；与(2)一种或多种杀昆虫剂(IA)。
在一些实施方案中，“组合”是指分开施用：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；与(2)一种或多种杀昆虫剂(IA)。
在其他实施方案中，“组合”是指依次施用(1)一种或多种CRIP，或其药学可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；与(2)一种或多种杀昆虫剂(IA)。
在本发明的一些实施方案中，即其中组合的施用是依次的或分开的，第二组分的施用延迟不应导致组合(即(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；与(2)一种或多种杀昆虫剂(IA)的组合)的有益效果完全丧失。当两种或更多种组分的组合分开或依次施用时，应当理解每种组分的剂量方案可不同且独立于其他组分。
在一些实施方案中，该一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合，可与该一种或多种杀昆虫剂(IA)在同一天施用。在其他实施方案中，该一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合，可与该一种或多种杀昆虫剂(IA)在同一周或同一月施用。
在一些实施方案中，组合可以是“混合物”。如本文所用，“混合物”是指两种或更多种药剂的组合，例如(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；与(2)一种或多种杀昆虫剂(IA)，它们彼此物理和/或化学接触。
“互补”是指本领域技术人员所理解的两个多核苷酸的相互作用表面的拓扑兼容性或匹配在一起。因此，如果两个序列能够彼此杂交以形成稳定的反平行双链核酸结构，则它们是彼此“互补的”。如果第一多核苷酸的核苷酸序列与第二多核苷酸的多核苷酸结合配偶体的核苷酸序列基本上相同，或者如果第一多核苷酸在严格的杂交条件下可与第二多核苷酸杂交，则第一多核苷酸与第二多核苷酸互补。因此，序列为5'-TATAC-3'的多核苷酸与序列为5'-GTATA-3'的多核苷酸互补。
“条件培养基”意指已被细胞使用并富含细胞衍生物质但不含细胞的细胞培养基。
“鸡心螺”或“芋螺”或“螺”是指属于捕食性海洋腹足类芋螺(Conus)属的生物体。例如，在一些实施方案中，鸡心螺可以是以下物种中的一者：阿玛迪芋螺(Conus amadis)；猫芋螺(Conus catus)；乌龟芋螺(Conus ermineus)；杀手芋螺(Conus geographus)；海之荣光芋螺(Conus gloriamaris)；木下芋螺(Conus kinoshitai)；僧袍芋螺(Conus magus)；大理石芋螺(Conus marmoreus)；紫金芋螺(Conus purpurascens)；飞蝇芋螺(Conusstercusmuscarum)；细线芋螺(Conus striatus)；织锦芋螺(Conus textile)；或郁金香芋螺(Conus tulipa)。
“芋螺毒素”是指从鸡心螺中分离的毒素，通过干扰神经元通讯而起作用。例如，在一些实施方案中，芋螺毒素可以是α-、ω-、μ-、δ-或κ-芋螺毒素。简而言之，α-芋螺毒素(和αA-芋螺毒素和φ-芋螺毒素)靶向烟碱配体门控通道；ω-芋螺毒素靶向电压门控钙通道；μ-芋螺毒素靶向电压门控钠通道；δ-芋螺毒素靶向电压门控钠通道；并且κ-芋螺毒素靶向电压门控钾通道。
“拷贝数”是指载体、表达盒、扩增单位、基因或任何定义的核苷酸序列在任何时间存在于宿主细胞中的相同拷贝数。例如，在一些实施方案中，基因或另一定义的染色体核苷酸序列可以一个、两个或更多个拷贝存在于染色体上。自主复制载体可以每个宿主细胞一个或几百个拷贝存在。
“CRIP”是指富含半胱氨酸的杀昆虫肽。CRIP是富含半胱氨酸残基的肽，在一些实施方案中，这些肽可操作以在此类半胱氨酸残基之间形成二硫键。在一些实施方案中，在具有至少10个氨基酸的蛋白质或肽中，CRIP包含至少四(4)个、有时六(6)个、并且有时八(8)个半胱氨酸氨基酸，其中半胱氨酸形成二(2)个、三(3)个或四(4)个二硫键。在一些实施方案中，二硫键有助于杀昆虫肽的折叠、三维结构和活性。半胱氨酸-半胱氨酸二硫键和它们形成的三维结构在这些杀昆虫肽的杀昆虫性质中发挥重要作用。在一些实施方案中，CRIP可包含或可不包含抑制性胱氨酸结(ICK)基序。例如，在一些实施方案中，具有ICK基序的CRIP可以是来自蜘蛛的ACTX肽；在其他实施方案中，没有ICK基序的CRIP，即非ICK CRIP，可以是肽如Av2和Av3，是从海葵中分离的肽。非ICK CRIP可具有4个至8个半胱氨酸，这些半胱氨酸形成2个至4个二硫键。当暴露于环境时，这些半胱氨酸-半胱氨酸二硫键稳定的毒性肽(CRIP)可具有显著的稳定性。许多CRIP从有毒动物(诸如蜘蛛、蝎子、蛇和海螺以及海葵)中分离，并且它们对昆虫有毒。
“CRIP构建体”是指肽、多肽和/或可操作地连接的多肽片段的基序(例如，CRIP-杀昆虫蛋白)的三维排列/取向。例如，CRIP表达ORF可包括以下组分或基序中的一者或多者：CRIP；内质网信号肽(ERSP)；接头肽(L)；翻译稳定蛋白质(STA)；或它们的任何组合。并且，如本文所用，术语“CRIP构建体”用于描述结构基序的名称和/或取向。换句话讲，CRIP构建体描述了在给定的CRIP表达ORF中包含的组分或基序的排列和取向。例如，在一些实施方案中，CRIP构建体描述但不限于以下CRIP-杀昆虫蛋白中的一者的取向：ERSP-CRIP、ERSP-(CRIP)N、ERSP-CRIP-L、ERSP-(CRIP)N-L、ERSP-(CRIP-L)N、ERSP-L-CRIP、ERSP-L-(CRIP)N、ERSP-(L-CRIP)N、ERSP-STA-CRIP、ERSP-STA-(CRIP)N、ERSP-CRIP-STA、ERSP-(CRIP)N-STA、ERSP-(STA-CRIP)N、ERSP-(CRIP-STA)N、ERSP-L-CRIP-STA、ERSP-L-STA-CRIP、ERSP-L-(CRIP-STA)N、ERSP-L-(STA-CRIP)N、ERSP-L-(CRIP)N-STA、ERSP-(L-CRIP)N-STA、ERSP-(L-STA-CRIP)N、ERSP-(L-CRIP-STA)N、ERSP-(L-STA)N-CRIP、ERSP-(L-CRIP)N-STA、ERSP-STA-L-CRIP、ERSP-STA-CRIP-L、ERSP-STA-L-(CRIP)N、ERSP-(STA-L)N-CRIP、ERSP-STA-(L-CRIP)N、ERSP-(STA-L-CRIP)N、ERSP-STA-(CRIP)N-L、ERSP-STA-(CRIP-L)N、ERSP-(STA-CRIP)N-L、ERSP-(STA-CRIP-L)N、ERSP-CRIP-L-STA、ERSP-CRIP-STA-L、ERSP-(CRIP)N-STA-LERSP-(CRIP-L)N-STA、ERSP-(CRIP-STA)N-L、ERSP-(CRIP-L-STA)N或ERSP-(CRIP-STA-L)N；其中N是1至200的整数。还参见“结构基序”。
“CRIP ORF图表”是指一个或多个CRIP ORF的组成，如以图或方程式形式写出的。例如，“CRIP ORF图表”可写成使用首字母缩写词或简称来表示ORF内包含的DNA片段。因此，在一个示例中，“CRIP ORF图表”可描述编码ERSP、L、STA和CRIP的多核苷酸片段，通过以方程式形式分别将DNA片段图示为“ersp”(即，编码ERSP多肽的多核苷酸序列)；“linker”或“L”(即编码接头多肽的多核苷酸序列)；“sta”(即编码STA多肽的多核苷酸序列)和“crip”(即编码CRIP的多核苷酸序列)。CRIP ORF图表的示例是“ersp-sta-(linkeri-cripj)N”或“ersp-(cripj-linkeri)N-sta”和/或它们的DNA片段的任何组合。
“CRIP多核苷酸”是指可操作以表达和/或编码杀昆虫蛋白的多核苷酸或多核苷酸组，该杀昆虫蛋白除了包含一种或多种非CRIP多肽或蛋白质之外，还包含一种或多种CRIP。
“CRIP-杀昆虫蛋白”是指由以下组成的任何蛋白质、肽、多肽、氨基酸序列、构型或排列：(1)至少一种CRIP，或者两种或更多种CRIP；和(2)另外的肽、多肽或蛋白质，其中所述另外的肽、多肽或蛋白质具有进行以下中的一者或多者的能力：(a)相对于单独的CRIP，当昆虫暴露于CRIP-杀昆虫蛋白时，增加昆虫的死亡率和/或抑制昆虫的生长；(b)增加所述CRIP-杀昆虫蛋白的表达，例如，在宿主细胞或表达系统中；和/或(c)影响CRIP-杀昆虫蛋白的翻译后加工。
在一些实施方案中，杀昆虫蛋白可包含本文公开的一种或多种CRIP。在一些实施方案中，CRIP-杀昆虫蛋白可以是包含两种或更多种CRIP的聚合物。在一些实施方案中，杀昆虫蛋白可包含CRIP均聚物，例如两种或更多种为相同CRIP的CRIP单体。在一些实施方案中，杀昆虫蛋白可包含CRIP杂聚物，例如，两种或更多种CRIP单体，其中CRIP单体是不同的。
在一些实施方案中，CRIP-杀昆虫蛋白可以是氨基酸的聚合物，当其适当地折叠时或者在其最天然的热力学状态下，对一种或多种昆虫发挥杀昆虫活性。
在一些实施方案中，CRIP-杀昆虫蛋白可以是包含两种或更多种CRIP的聚合物，其中CRIP经由接头肽(例如可切割和/或不可切割接头)可操作地连接。在一些实施方案中，CRIP-杀昆虫蛋白可指与一种或多种蛋白质(诸如稳定化结构域(STA)、内质网信号传导蛋白质(ERSP)、昆虫可切割或昆虫不可切割的接头(L)和/或它们的任何其他组合)可操作地连接的一种或多种CRIP。在一些实施方案中，CRIP杀昆虫蛋白可以是非天然存在的蛋白，包括(1)野生型CRIP蛋白；和(2)另外的肽、多肽或蛋白质，例如ERSP、接头、STA、UBI或组氨酸标签或相似标记。
“培养”或“细胞培养”是指在人工的体外环境中维持细胞。
“培养”是指在各种培养基上或其中繁殖生物体。例如，术语“培养”可以意指在合适的条件下在液体或固体培养基中使细胞群生长。在一些实施方案中，培养是指(通常在容器或反应器中)发酵重组生产感兴趣的异源多肽和/或其他期望的终产物。
“胱氨酸”是指氧化的半胱氨酸-二聚体。胱氨酸是经由氧化两个半胱氨酸分子获得的含硫氨基酸，并且通过二硫键连接。
“确定成分培养基”是指由已知化学组分组成但不含粗蛋白质提取物或副产物诸如酵母提取物或蛋白胨的培养基。
“简并性”或“密码子简并性”是指一种氨基酸可由不同的核苷酸密码子编码的现象。因此，编码蛋白质或多肽的核酸分子的核酸序列可由于简并性而变化。由于遗传密码的简并性，许多核酸序列可编码具有特定活性的给定多肽；本文考虑的是此类功能相当的变体。
“去甲基利莫菌素B”是指[(5R,7R,8R,9R,10R,13S,17S)-17-[(3R)-5-羟基氧杂环戊烯-3-基]-4,4,8,10,13-五甲基-3,16-二氧代-6,7,9,11,12,17-六氢-5H-环戊[a]菲-7-基]乙酸酯。
“二硫键”意指通过偶联它们侧链上的两个巯基而衍生的两个半胱氨酸之间的共价键。
“DNA”是指脱氧核糖核酸，包含一个或多个脱氧核糖核苷酸或核苷酸(即腺嘌呤[A]、鸟嘌呤[G]、胸腺嘧啶[T]或胞嘧啶[C])的聚合物，其可以单链或双链形式排列。例如，一个或多个核苷酸产生多核苷酸。
“dNTP”是指组成DNA和RNA的三磷酸核苷。
“双表达盒”指包含在同一载体上的两个异源多肽表达盒。
“双转基因肽表达载体”或“双转基因表达载体”是指包含两个拷贝的异源多肽表达盒的酵母表达载体。
“内源的”是指多核苷酸、肽、多肽、蛋白质或生物体中天然发生和/或存在的过程，例如在特定遗传操作之前已经存在于宿主细胞中的分子或活性。
“增强子元件”是指与启动子可操作地连接的DNA序列，相对于不存在增强子元件时由启动子产生的转录活性，该DNA序列可对启动子发挥增强的转录活性。
“ER”或“内质网”是所有真核生物常见的亚细胞器，其中发生一些翻译后修饰过程。
“ERSP”或“内质网信号肽”是氨基酸的N-末端序列，在编码CRIP的mRNA分子的蛋白质翻译过程期间，其被宿主细胞信号识别颗粒识别并结合，该宿主细胞信号识别颗粒将蛋白质翻译核糖体/mRNA复合物移动至细胞质中的ER。结果是蛋白质翻译暂停，直到其与ER对接，在那里继续翻译，并将所得蛋白质注入ER中。
“ersp”是指编码肽ERSP的多核苷酸。
“ER运输”是指将细胞表达的蛋白质运输到ER中进行翻译后修饰、分类和运输。
“赋形剂”是指任何药理学上无活性的、天然的或合成的组分或物质，其与本发明的活性成分(即CRIP或CRIP-杀昆虫蛋白)一起配制(例如同时)，或在其之后配制。在一些实施方案中，赋形剂可以是任何添加剂、佐剂、粘合剂、增体剂、载体、包衣、稀释剂、崩解剂、填充剂、助流剂、润滑剂、防腐剂、溶媒或它们的组合，本发明的CRIP或CRIP-杀昆虫蛋白可与其一起施用，并且/或者其可用于制备本发明的组合物。赋形剂包括本领域已知的无毒且不与组合物的其他组分相互作用的任何此类物质。在一些实施方案中，当制备组合物时，赋形剂可与CRIP或CRIP-杀昆虫蛋白一起配制，以用于膨胀组合物的目的(因此通常称为膨胀剂、填充剂或稀释剂)。在其他实施方案中，赋形剂可用于赋予最终剂型中活性成分的增强，诸如促进吸收和/或溶解。在其他实施方案中，赋形剂可用于提供稳定性或防止污染(例如，微生物污染)。在其他实施方案中，赋形剂可用于赋予组合物(例如，干燥颗粒或干燥可流动粉末物理形式的组合物)物理性质。提及赋形剂时，包括一种和一种以上此类赋形剂。合适的药物赋形剂描述于Remington's Pharmaceutical Sciences，E.W.Martin，其公开内容全文以引入方式并入本文。
“表达盒”是指(1)感兴趣的DNA序列，例如可操作以编码CRIP的多核苷酸；和以下中的一者或多者：(2)启动子、终止子和/或增强子元件，(3)合适的mRNA稳定化聚腺苷酸化信号，(4)内部核糖体进入位点(IRES)，(5)内含子，和/或(6)转录后调节元件。(1)与(2)至(6)中至少一者的组合称为“表达盒”。在一些实施方案中，可存在许多克隆到载体中的表达盒。例如，在一些实施方案中，可存在第一表达盒，该第一表达盒包含可操作以编码CRIP的多核苷酸。在另选的实施方案中，存在两个表达盒，每个表达盒都包括可操作以编码CRIP的多核苷酸(即双表达盒)。在其他实施方案中，存在三个可操作以编码CRIP的表达盒(即，三表达盒)。在一些实施方案中，可通过将第二表达盒亚克隆到含有第一表达盒的载体中来产生双表达盒。在一些实施方案中，可通过将第三表达盒亚克隆到含有第一和第二表达盒的载体中来产生三表达盒。涉及表达盒和克隆技术的方法是本领域熟知的，并在本文中有所描述。还参见CRIP表达盒。
“表达ORF”意指编码蛋白质复合物的核苷酸，并定义为ORF中的核苷酸。
“FECT”意指使用消除了外壳蛋白基因和三基因框的狐尾花叶病毒的瞬时植物表达系统。
“发酵啤酒”是指用过的发酵培养基，即除去生物体后的发酵培养基上清液，其已经用转化的宿主细胞(例如，可操作以表达本发明的CRIP的酵母细胞)接种并消耗。在一些实施方案中，发酵啤酒是指在转化的宿主细胞发酵后回收的溶液。术语“发酵”广义地指在受控条件(例如，温度、氧、pH、营养物等)下微生物对有机物质(例如，碳底物)营养物质的酶促和厌氧或需氧分解以产生发酵产物(例如，本发明的一种或多种肽)。虽然发酵通常描述在厌氧条件下发生的过程，但如本文所用，这并不意味着该术语仅限于严格的厌氧条件，因为本文所用的术语“发酵”也可发生在氧存在下发生的过程。
“发酵固体”是指在基于酵母的发酵过程期间从发酵啤酒中保留的固体(包括溶解的)，并且基本上由盐、复合蛋白源、维生素和另外的酵母副产物组成，其截留分子量为约200kDa至约1kDa。
“GFP”意指水母(水晶果冻水母(Aequorea victoria))的绿色荧光蛋白质。
“HIS”或“His”是指组氨酸。例如，在一些实施方案中，“HIS”或His”可指组氨酸标签，例如，具有SEQ ID NO:591所示的氨基酸序列的组氨酸标签。
“同源的”是指两个多肽之间或两个核酸分子之间的序列相似性或序列同一性。当两个比较序列中的位置均被相同的碱基或氨基酸单体亚基占据时，例如，如果两个DNA分子中的每一者中的位置被腺嘌呤占据，那么这些分子在该位置是同源的。两个序列之间的同源性百分比是两个序列共享的匹配或同源位置数除以比较的位置数×100的函数。因此，在一些实施方案中，术语“同源的”是指两个多肽分子之间或两个核酸分子之间的序列相似性。当两个比较序列中的位置均被相同的碱基或氨基酸单体亚基占据时，例如，如果两个DNA分子中的每一者中的位置被腺嘌呤占据，则这些分子在该位置是同源的。两个序列之间的同源性是两个序列共享的匹配或同源位置数的函数。例如，如果两个序列中10个位置中的6个位置是匹配的或同源的，则这两个序列是60％同源的。例如，DNA序列ATTGCC和TATGGC共享50％同源性。
当与核酸相关使用时，术语“同源性”是指互补性程度。可存在部分同源性，或完全同源性，并因此是相同的。“序列同一性”是指两个或更多个核酸之间相关性的量度，并且以相对于总比较长度的百分比给出。同一性计算考虑了在它们各自的较大序列中相同的那些核苷酸残基和在相同相对位置的那些核苷酸残基。
“同源重组”是指DNA片段被具有相同区域(同源)或几乎相同区域的另一DNA片段取代的事件。例如，在一些实施方案中，“同源重组”是指一种类型的遗传重组，其中核苷酸序列在两个相似或相同的DNA分子之间交换。简而言之，同源重组被细胞最广泛地用于精确修复在DNA的两条链上发生的有害断裂，称为双链断裂。尽管同源重组在不同的生物体和细胞类型之间变化很大，但大多数形式涉及相同的基本步骤：在发生双链断裂后，在称为切除的过程期间切除了断裂5'端周围的DNA部分。在随后的链侵入步骤中，断裂的DNA分子的突出3'末端“侵入”未断裂的相似或相同的DNA分子。在链侵入后，事件的进一步序列可遵循两种主要途径中的任一者，即双链断裂修复途径或合成依赖性链退火途径。同源重组在生命的所有三个结构域以及病毒中都是保守的，这表明它是几乎通用的生物学机制。例如，在一些实施方案中，同源重组可使用位点特异性整合(SSI)序列发生，由此在核苷酸组成基本上相似的核酸序列之间存在链交换事件。这些交换事件可在本发明的靶向构建体中所含的序列(即，SSI序列)和内源基因组核酸序列(例如，编码肽亚基的多核苷酸)之间发生。此外，在一些实施方案中，可能发生多于一个位点特异性同源重组事件，这将导致置换事件，其中包含在靶向构建体中的核酸序列已经置换了存在于内源基因组序列中的特异性序列。
“ICK基序”或“ICK基序蛋白质”或“抑制性胱氨酸结基序”或“ICK肽”或“胱氨酸结基序”或“胱氨酸结肽”是指具有至少6个半胱氨酸核心氨基酸的16个至60个氨基酸的肽，这些半胱氨酸核心氨基酸具有三个二硫键，其中3个二硫键是共价键，并且在六个半胱氨酸残基中，共价二硫键位于从N末端氨基酸开始的六个核心半胱氨酸氨基酸的第一和第四、第二和第五以及第三和第六半胱氨酸之间。通常，这种类型的肽包含β-发夹二级结构，通常由位于基序的第四和第六核心半胱氨酸之间的残基组成，发夹通过由基序的三个二硫键提供的结构交联而稳定。注意，在抑制性胱氨酸结基序中可存在另外的半胱氨酸/胱氨酸或半胱氨酸氨基酸。
“ick”意指编码ICK基序蛋白质的核苷酸。
“ICK基序蛋白质表达ORF”或“表达ORF”意指编码ICK基序蛋白质复合物的核苷酸，并定义为ORF中的核苷酸。
“ICK基序蛋白质表达载体”或“ICK表达载体”或“ICK基序表达载体”意指包含表达ORF的二元载体。二元载体还包含围绕表达ORF的必需转录启动子和终止子序列，以促进ORF及其编码的蛋白质的表达。
“同一性”是指两个或更多个多肽序列或两个或更多个多核苷酸序列之间的关系，如通过比较所述序列确定的。术语“同一性”还意指多肽或多核苷酸序列之间的序列相关程度，视情况而定，如通过此类序列的字符串之间的匹配确定的。“同一性”和“相似性”可容易地通过本领域普通技术人员已知的无数方法中的任一种来计算，包括但不限于以下描述的那些：Computational Molecular Biology，Lesk,A.M.编辑，Oxford University Press，New York，1988年；Biocomputing:Informatics and Genome Projects，Smith,D.W.编辑，Academic Press，New York，1993年；Computer Analysis of Sequence Data，第1部分，Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编辑，Humana Press，New Jersey，1994年；SequenceAnalysis in Molecular Biology，von Heinje,G.，Academic Press，1987年；以及Sequence Analysis Primer，Gribskov,M.和Devereux,J.编辑，M Stockton Press，NewYork，1991年；以及Carillo,H.和Lipman,D.，SIAM J.Applied Math.，第48卷：第1073页，1988年，这些文献的公开内容全文以引用方式并入本文。此外，确定同一性和相似性的方法被编码在公众可获得的计算机程序中。例如，在一些实施方案中，测定两个序列之间的同一性和相似性的方法包括但不限于GCG程序包(Devereux,J.等人，Nucleic Acids Research，第12卷第1期：第387页，1984年)、BLASTP、BLASTN和FASTA(Altschul,S.F.等人，J.Molec.Biol.，第215卷：第403-410页(1990年))。BLAST X程序可从NCBI和其他来源公开获得(BLAST Manual，Altschul,S.等人，NCBI NLM NIH Bethesda，Md.，20894；Altschul,S.等人，J.Mol.Biol.，第215卷：第403-410页，1990年)，这些文献的公开内容全文以引用方式并入本文。
“IGER”意指基于其单字母代码的实际序列的短肽的名称。它是间插接头的示例。
“体内”是指天然环境(例如，动物或细胞)和在天然环境中发生的过程或反应。
“失活”是指某物不处于使用状态的情况，例如处于休眠和/或不工作状态。例如，当用于基因的上下文中或当提及基因时，术语失活意指所述基因不再活跃地合成基因产物，使所述基因产物翻译成蛋白质，或以其他方式使基因执行其正常功能。例如，在一些实施方案中，术语失活可指基因转录RNA的失败、RNA加工(例如，前mRNA加工、RNA剪接、或其他转录后修饰)的失败；干扰非编码RNA成熟；干扰RNA输出(例如，从细胞核到细胞质)；干扰翻译；蛋白折叠；易位；蛋白质转运；和/或抑制和/或干扰分子多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、转录因子、调节剂、抑制剂或参与任何上述过程的其他因子中的任一者。
“不可操作”是指某物不起作用、失灵或不再能够起作用的情况。例如，当用于基因的上下文中或当提及基因时，术语“不可操作”是指所述基因不再能够如其正常情况那样永久或暂时地操作。例如，在一些实施方案中，“不可操作”意指基因不再能够合成基因产物，将所述基因产物翻译成蛋白质，或以其他方式不能使基因执行其正常功能。例如，在一些实施方案中，术语不可操作可指基因转录RNA的失败、RNA加工(例如，前mRNA加工、RNA剪接、或其他转录后修饰)的失败；干扰非编码RNA成熟；干扰RNA输出(例如，从细胞核到细胞质)；干扰翻译；蛋白折叠；易位；蛋白质转运；和/或抑制和/或干扰分子多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、转录因子、调节剂、抑制剂或参与任何上述过程的其他因子中的任一者。
“昆虫”包括“昆虫纲(Insecta)”中的所有生物体。术语“成虫前”昆虫是指成虫阶段之前任何形式的生物体，包括例如卵、幼虫和若虫。如本文所用，术语“昆虫”是指任何节肢动物和线虫，包括螨虫，和已知侵染所有作物、蔬菜和树木的昆虫，并且包括在林业、园艺和农业领域中被视为害虫的昆虫。可用本文公开的方法保护的具体作物的示例是大豆、玉米、棉花、苜蓿和蔬菜作物。本文包括了具体作物和昆虫的列表。
“昆虫肠道环境”或“肠道环境”意指在昆虫或昆虫幼虫的前肠、中肠或后肠中发现的特定pH和蛋白酶条件。
“昆虫血淋巴环境”意指在昆虫或昆虫幼虫中发现的特定pH和蛋白酶条件。
“杀昆虫活性”意指当昆虫暴露于化合物、试剂或肽时或之后，昆虫死亡、停止或减慢其移动；停止或减慢其进食；停止或减慢其生长；变得混淆(例如，关于导航、定位食物、睡眠行为和/或交配)；不能化蛹；干扰繁殖；以及/或者阻止该昆虫产生后代和/或阻止该昆虫产生可育后代。
“杀昆虫剂”或“IA”或“试剂”是指一种或多种化学物质、分子、核苷酸、多核苷酸、RNA、DNA、肽、多肽、蛋白质、脂质、糖脂、酶、毒素、毒物、毒药、杀昆虫剂、杀虫剂、有机化合物、无机化合物、病毒、原核生物体或真核生物体(以及由所述原核生物体或真核生物体产生的试剂)。在一些实施方案中，IA包括但不限于选自以下类别的成员：RNAi；胃毒剂；0型几丁质生物合成抑制剂；1型几丁质生物合成抑制剂；昆虫病毒；从印楝(Azadirachtaindica)中分离的化合物；具有未知MOA的化合物；细菌(及其产物)；真菌(及其产物)；线虫(及其产物)；植物精华；机械干扰物；荧光增白剂；二氧化硅纳米球；几丁质酶；凝集素；膜攻击复合物/穿孔素(MACPF)蛋白；植物病毒外壳蛋白-毒素融合体；聚糖结合结构域/毒素融合蛋白；乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制剂；GABA门控氯离子通道阻断剂；钠通道调节剂；烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)竞争性调节剂；烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)变构调节剂-位点I；谷氨酸门控氯离子通道(GluCl)变构调节剂；保幼激素模拟物；其他非特异性(多位点)抑制剂；弦音器TRPV通道调节剂；螨生长抑制剂；线粒体ATP合酶抑制剂；通过破坏质子梯度的氧化磷酸化的解偶联剂；烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)通道阻断剂；蜕皮干扰物(双翅目)；蜕皮激素受体激动剂；章鱼胺受体激动剂；线粒体复合物III电子传递抑制剂；线粒体复合物I电子传递抑制剂；电压依赖性钠通道阻滞剂；乙酰辅酶A羧化酶抑制剂；线粒体复合物IV电子传递抑制剂；线粒体复合物II电子传递抑制剂；兰尼碱受体调节剂；弦音器调节剂—未定义的靶位点；或GABA门控的氯离子通道变构调节剂。在一些实施方案中，杀昆虫剂可以是氨基酸、肽、多肽或蛋白质的聚合物；此类肽-IA可根据本文所述的与肽和/或蛋白质有关的任何方法制备和/或使用。
“整合表达载体”或“整合载体”意指能够将其自身插入酵母细胞基因组的特定基因座并稳定地成为酵母基因组的一部分的酵母表达载体。
“抗杀昆虫剂”或“杀昆虫剂抗性”或“抗杀昆虫剂昆虫”是指害虫群体对杀昆虫剂的敏感性的遗传性变化，这种变化反映在所述杀昆虫剂当用于对抗害虫物种时反复未能达到预期的防治水平。
“间插接头”是指蛋白质中分离蛋白质不同部分的短肽序列，或置于ORF的阅读框中以分离上游和下游DNA序列的短DNA序列。例如，在一些实施方案中，可使用间插接头，从而允许蛋白质在翻译期间实现它们独立的二级和三级结构形成。在一些实施方案中，间插接头可在植物细胞环境中、在昆虫和/或鳞翅目肠道环境中、以及在昆虫血淋巴和鳞翅目血淋巴环境中具有抗性或易受切割。
“分离的”是指从其天然环境中分离物质和/或组分，例如，从给定属或物种中分离的毒素意指从其天然环境中分离的毒素，例如，从WT生物体中取出的毒素。
“Kappa-ACTX肽”是指抑制昆虫钙激活钾(KCa)通道(Slo型)的兴奋性毒素。如本文所用，“Kappa-ACTX肽”可指从澳大利亚蓝山漏斗网蜘蛛(澳大利亚漏斗网蜘蛛)或其变体中分离的肽。
“kb”指千碱基，即1000个碱基。如本文所用，术语“kb”意指核酸分子的长度。例如，1kb是指1000个核苷酸长度的核酸分子。1kb长度的双链DNA长度包含两千个核苷酸(即每条链上有一千个)。另选地，1kb长度的单链RNA的长度包含一千个核苷酸。
“kDa”是指千道尔顿，等于1,000道尔顿的单位；“道尔顿”或“Da”是分子量(MW)的单位。
“敲入”(“Knock in”或“knock-in”或“knocks-in”或“knocking-in”)是指用外源或异源基因或它们的部分替换内源基因。例如，在一些实施方案中，术语“敲入”是指通过同源重组将编码所需蛋白质的核酸序列引入靶基因座，从而引起所需蛋白质的表达。在一些实施方案中，“敲入”突变可修饰基因序列以产生功能丧失或功能获得突变。术语“敲入”可指将外源或异源多核苷酸序列或其片段引入基因组(例如，“它们进行了敲入”或“它们敲入异源基因”)或所得细胞和/或生物体(例如，“细胞是敲入的“或“动物是敲入的”)的程序。
“敲除”(“Knock out”或“knockout”或“knock-out”或“knocks-out”或“knocking-out”)是指部分或完全抑制细胞中由内源DNA序列编码的蛋白质的表达基因产物(例如，mRNA)。在一些实施方案中，“敲除”可通过靶向缺失编码肽、多肽或蛋白质的整个基因或基因的一部分来实现。结果，缺失可使基因失活、部分失活、不可操作、部分不可操作，或以其他方式降低基因或其产物在其正常表达的整个生物体和/或细胞中的任何细胞中的表达。术语“敲除”可指使内源基因(例如，“它们进行了敲除”或“它们敲除了内源基因”)或所得细胞和/或生物体(例如，“细胞是敲除的”或“动物是敲除的”)完全或部分失活或不可操作的程序。
“击倒剂量50”或“KD50”是指在50％的群体中，例如在家蝇(Musca domestica)(普通家蝇)和/或埃及伊蚊(蚊子)的群体中，引起瘫痪或停止移动所需的中值剂量。
“l”或“linker”是指编码接头肽的核苷酸。
“L”在适当的上下文中是指接头肽，该接头肽将翻译稳定蛋白(STA)与另外的多肽，例如异源肽和/或多个异源肽连接。当提及氨基酸时，“L”也可意指亮氨酸。
“LAC4启动子”或“Lac4启动子”是指由源自乳酸杆菌(K.lactis)β-半乳糖苷酶基因的启动子序列组成的DNA片段。LAC4启动子是强的且可诱导的报告基因，用于驱动转化到酵母中的外源基因的表达。
“LAC4终止子”或“Lac4终止子”是指由来自乳酸杆菌β-半乳糖苷酶基因的转录终止子序列组成的DNA片段。
“LD20”是指杀死20％群体所需的剂量。
“LD50”是指致死剂量50，意指杀死50％群体所需的剂量。
“鳞翅目肠道环境”意指在鳞翅目昆虫或幼虫的前肠、中肠或后肠中发现的特定pH和蛋白酶条件。
“鳞翅目血淋巴环境”意指在鳞翅目昆虫或幼虫中发现的特定pH和蛋白酶条件。
“接头”(“Linker”或“LINKER”)或“肽接头”或“L”或“间插接头”是指可操作以将两个肽连接在一起的短肽序列。接头还可指置于ORF的阅读框中以分离上游和下游DNA序列的短DNA序列。在一些实施方案中，接头可被昆虫蛋白酶切割。在一些实施方案中，接头可允许蛋白质在翻译期间实现它们独立的二级和三级结构形成。在一些实施方案中，接头可在植物细胞环境中、在昆虫和/或鳞翅目肠道环境中、以及/或者在昆虫血淋巴和鳞翅目血淋巴环境中具有抗性或易受切割。在一些实施方案中，接头可被蛋白酶切割，例如，在一些实施方案中，接头可被植物蛋白酶(例如，木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、猕猴桃蛋白酶、生姜蛋白酶和/或cardosin)、昆虫蛋白酶、真菌蛋白酶、脊椎动物蛋白酶、无脊椎动物蛋白酶、细菌蛋白酶、哺乳动物蛋白酶、爬行动物蛋白酶或禽类蛋白酶切割。在一些实施方案中，接头可以是可切割的或不可切割的。在一些实施方案中，接头包含二元或三元区，其中每个区可被至少两种类型的蛋白酶切割：其中一种是昆虫和/或线虫蛋白酶，并且另一种是人蛋白酶。在一些实施方案中，接头可具有(至少)三个作用中的一者：在昆虫肠道环境中切割，在植物细胞中切割，或设计成不是有意切割。
“培养基”是指用于在细胞培养中培养细胞的营养液。
“MOA”是指作用机制。
“分子量(MW)”是指分子的质量或重量，并且通常以“道尔顿(Da)”或千道尔顿(kDa)测量。在一些实施方案中，可使用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、分析超速离心或光散射来计算MW。在一些实施方案中，SDS-PAGE方法如下：在凝胶上用一组分子量标准分离感兴趣的样品。运行样品，然后用所需的染色剂处理凝胶，随后脱色约2小时至14小时。下一步骤是确定标准品和感兴趣的蛋白质的相对迁移距离(Rf)。迁移距离可使用以下等式来确定：
Figure BDA0004014715560000301
接下来，可基于针对标准中的条带获得的值来确定MW的对数；例如，在一些实施方案中，将SDS变性多肽的分子量的对数及其相对迁移距离(Rf)绘制成图。在绘制成图后，对得到的值进行插值将提供未知蛋白质条带的分子量。
“基序”是指涉及具有一些生物学意义和/或发挥一些作用或参与一些生物学过程的多核苷酸或多肽序列。
“多克隆位点”或“MCS”是指在载体上发现的DNA片段，其包含许多限制位点，其中可插入感兴趣的DNA序列。
“突变体”是指(例如，在核苷酸序列或氨基酸序列中)具有改变或变异的生物体、DNA序列、氨基酸序列、肽、多肽或蛋白质，该改变或变异导致所述生物体和/或序列不同于与突变体比较的天然存在的或野生型生物体、野生型序列和/或参考序列。在一些实施方案中，该改变或变异可以是一个或多个核苷酸和/或氨基酸取代或修饰(例如，缺失或添加)。在一些实施方案中，该一个或多个氨基酸取代或修饰可以是保守的；此处，“突变体”中的这种保守氨基酸取代和/或修饰基本上不会降低突变体相对于其非突变形式的活性。例如，在一些实施方案中，与具有公开的和/或要求保护的序列的肽相比，“突变体”具有一个或多个保守氨基酸取代，如SEQ ID NO所示。
“N-末端”是指位于多肽的起始或起点的游离胺基(即，-NH2)。
“NCBI”是指国家生物技术信息中心。
“nm”是指纳米。
“非ICK CRIP”是指具有4个至8个半胱氨酸的肽，这些半胱氨酸形成2个至4个二硫键。非ICK肽包括不是ICK肽的胱氨酸结肽。非ICK肽可具有与ICK不同的二硫键连接模式。非ICK CRIP的示例是肽，如从海葵中分离的Av2和Av3；这些海葵肽是调节昆虫外周神经系统(PNS)中的钠通道的一类化合物的示例。
“非极性氨基酸”是弱疏水性的氨基酸，并且包括甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸和甲硫氨酸。甘氨酸或Gly是本发明的二肽最优选的非极性氨基酸。
“标准化肽产量”意指条件培养基中的肽产量除以测量肽产量时的对应细胞密度。肽产量可用单位体积中产生的肽的质量表示，例如，mg/升或mg/L，或用HPLC色谱中产生的肽的UV吸收峰面积表示，例如，mAu.sec。细胞密度可用培养物在600nm波长(OD600)下的可见光吸收表示。
“OD”是指光密度。通常，OD是使用分光光度计测量的。当测量细胞群体随时间的生长时，OD600优于UV光谱；这是因为在600nm波长下，细胞不会像在太多UV光下那样受到伤害。
“OD660nm”或“OD660nm”是指660纳米(nm)下的光密度。
“Omega肽”或“Omega毒素”或“Omega-ACTX-Hv1a”或“天然OmegaACTX-Hv1a”都是指首先从称为澳大利亚蓝山漏斗网蜘蛛(澳大利亚漏斗网蜘蛛)的蜘蛛中分离的ACTX肽。Omega肽是烟碱乙酰胆碱受体的正变构调节剂，并且还可以是昆虫电压门控Ca2+通道和电压门控K+通道的双重拮抗剂。参见Chambers等人，“Insecticidal spider toxins are highaffinity positive allosteric modulators of the nicotinic acetylcholinereceptor”，FEBS Lett.，2019年6月，第593卷第12期：第1336-1350页；以及Windley等人，“Lethal effects of an insecticidal spider venom peptide involve positiveallosteric modulation of insect nicotinic acetylcholine receptors”，Neuropharmacology，2017年12月，第127卷：第224-242页，这些文献的公开内容全文以引用方式并入本文。
“单字母代码”意指以其单字母代码列出的肽序列，以区分蛋白质一级结构中的各种氨基酸：丙氨酸＝A，精氨酸＝R，天冬酰胺＝N，天冬氨酸＝D，天冬酰胺或天冬氨酸＝B，半胱氨酸＝C，谷氨酸＝E，谷氨酰胺＝Q，谷氨酰胺或谷氨酸＝Z，甘氨酸＝G，组氨酸＝H，异亮氨酸＝I，亮氨酸＝L，赖氨酸＝K，甲硫氨酸＝M，苯丙氨酸＝F，脯氨酸＝P，丝氨酸＝S，苏氨酸＝T，色氨酸＝W，酪氨酸＝Y，并且缬氨酸＝V。
“可操作”是指被使用的能力、做某事的能力和/或实现某种功能或结果的能力。例如，在一些实施方案中，“可操作”是指多核苷酸、DNA序列、RNA序列或其他核苷酸序列或基因编码肽、多肽和/或蛋白质的能力。例如，在一些实施方案中，多核苷酸可以可操作地编码蛋白质，这意味着多核苷酸包含赋予其产生蛋白质的能力的信息(例如，通过转录mRNA，其继而又被翻译成蛋白质)。
“可操作地连接”是指并置，其中如此描述的组分处于允许它们以其预期方式发挥功能的关系。例如，在一些实施方案中，可操作地连接可指两个或更多个DNA、肽或多肽序列。在其他实施方案中，可操作地连接可指两个相邻的DNA序列放置在一起，使得一个DNA序列的转录激活可作用于另一个DNA序列。在其他实施方案中，术语“可操作地连接”可指两个或更多个肽和/或多肽，其中所述两个或更多个肽和/或多肽以产生单个多肽链的方式连接；另选地，术语可操作地连接可指两个或更多个肽以一个肽对另一个肽发挥一些作用的方式连接。在其他实施方案中，可操作地连接可指两个相邻的DNA序列放置在一起，使得一个序列的转录激活可作用于另一个序列。
“ORF”或“开放阅读框”是指在翻译起始信号(例如分别为AUG或ATG)和编码一个或多个多肽序列的已知终止密码子中的任一者或多者之间的RNA或DNA序列的长度。换句话说，ORF描述了从翻译RNA编码的核糖体的角度来看的参考框，因为核糖体由于没有遇到终止密码子而能够保持阅读(即，向新生蛋白质添加氨基酸)。因此，“开放阅读框”或“ORF”是指在编码序列的翻译起始和终止密码子之间编码的氨基酸序列。此处，术语“起始密码子”和“终止密码子”是指编码序列中分别指定蛋白质合成(mRNA翻译)的起始和链终止的三个相邻核苷酸的单元(即密码子)。
在一些实施方案中，ORF是密码子的连续延伸，该连续延伸以起始密码子(通常对于DNA为ATG，并且对于RNA为AUG)开始并在终止密码子(通常为UAA、UAG或UGA)处结束。在其他实施方案中，ORF可以是在翻译起始信号(例如，AUG或ATG)和已知终止密码子中的任一者或多者之间的RNA或DNA序列的长度，其中所述RNA或DNA序列的长度编码一个或多个多肽序列。在一些其他实施方案中，ORF可以是编码蛋白质的DNA序列，该序列以ATG起始密码子开始并以TGA、TAA或TAG终止密码子结束。ORF也可以意指DNA编码的翻译蛋白质。通常，本领域普通技术人员基于“开放阅读框”的最广义的定义简单地考虑了不包含终止密码子的一系列密码子的事实，将术语“开放阅读框”和“ORF”与术语“编码序列”区分开来。因此，尽管ORF可包含内含子，但编码序列通过参照那些可被分成密码子的核苷酸(例如，连接的外显子)来区分，这些密码子实际上通过核糖体翻译机制(即，编码序列不包含内含子)翻译成氨基酸；然而，如本文所用，术语“编码序列”、“CDS”、“开放阅读框”和“ORF”可互换使用。
“外重组”(“Out-recombined”或“out-recombination”)是指在体内同源重组期间除去侧翼为两个位点特异性重组位点(例如，与靶载体的同源臂同源的靶基因的5’-和3’-核苷酸序列)的基因和/或多核苷酸序列(例如，内源基因)。参见“敲除”。
“伴孢晶体毒素”是指作为伴孢体或伴孢晶体的一部分的肽、多肽和/或蛋白质中的任一者，其是含有一个或多个肽、多肽和/或蛋白质的双锥体晶体。当伴孢体或伴孢晶体被昆虫摄取时，这种含有毒素的伴孢晶体溶解在碱性肠液中，随后经由原毒素的中肠蛋白酶切割，产生活性肽毒素，例如δ-内毒素。
“肽表达盒”或“表达盒”意指由在生物表达系统中完成杀昆虫蛋白转录所必需的所有DNA元件组成的DNA序列。在本文所述的方法中，它包括转录启动子、编码α-交配因子信号序列的DNA序列、切割位点、杀昆虫蛋白转基因、终止密码子和转录终止子。
“肽表达载体”意指包含异源肽转基因的宿主生物体表达载体。
“肽表达酵母菌株”、“肽表达菌株”或“肽生产菌株”意指能够生产异源肽的酵母菌株。
“肽-IA”是指杀昆虫剂，这些杀昆虫剂是氨基酸、肽、多肽和/或蛋白质。
“肽转基因”或“杀昆虫肽转基因”或“杀昆虫蛋白转基因”是指编码感兴趣的肽并可在生物表达系统中翻译的DNA序列。
“肽产量”意指在由肽表达酵母菌株的细胞产生的条件培养基中杀昆虫肽的浓度。它可用单位体积中产生的肽的质量表示，例如，mg/升或mg/L，或用HPLC色谱中产生的肽的UV吸收峰面积表示，例如，mAu.sec。
“围食膜”意指昆虫肠道内的捕获大食物颗粒的内衬，其可帮助这些大食物颗粒移动通过肠道，同时允许消化，但也保护肠壁。
“害虫”包括，但不限于：昆虫、真菌、细菌、线虫、螨、蜱等。
“杀虫有效量”是指能够使至少一种害虫死亡或显著减少害虫生长、进食或正常生理发育的杀虫剂的量。该量将根据以下因素而变化，例如待防治的特定靶标害虫，待处理的特定环境、位置、植物、作物或农业场所，环境条件，以及杀昆虫有效的多肽组合物的施用方法、比率、浓度、稳定性和量。制剂还可根据气候条件、环境考虑和/或施用频率和/或害虫侵袭的严重程度而变化。
“药学上可接受的盐”与农业上可接受的盐同义，并且如本文所用，是指通过制备其酸或碱盐而修饰的化合物。
“植物”应意指完整的植物、植物组织、植物器官(例如，叶、茎、根等)、种子、植物细胞、繁殖体、胚及其后代。植物细胞可以是分化的或未分化的(例如，愈伤组织、悬浮培养细胞、原生质体、叶细胞、根细胞、韧皮部细胞和花粉)。
“植物转基因蛋白质”意指在将编码来自异源物种的蛋白质的DNA或RNA递送到植物细胞中的一者或多者后在植物中表达的该蛋白质。
“植物可切割接头”意指可切割接头肽或编码可切割接头肽的核苷酸，其包含植物蛋白酶识别位点，并且可在植物细胞中的蛋白质表达过程期间切割。
“植物嵌入式保护剂”或“PIP”是指由转基因植物产生的杀昆虫蛋白，以及植物产生该蛋白质所必需的遗传物质。
“质粒”是指作为感兴趣的基因的载体的DNA片段，当转化或转染到生物体中时，可独立于宿主生物体复制和表达包含在质粒中的DNA序列。质粒是一种类型的载体，并且可以是“克隆载体”(即，用于克隆DNA片段和/或经由一些选择指示剂选择携带质粒的宿主群体的简单质粒)或“表达质粒”(即，用于产生大量多核苷酸和/或多肽的质粒)。
“极性氨基酸”是极性的氨基酸，并且包括丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、组氨酸、色氨酸和酪氨酸；优选的极性氨基酸是丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺；其中丝氨酸是最优选的。
“多核苷酸”是指任何长度的核苷酸(例如，核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或它们的类似物)的聚合形式；例如两个或更多个核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸的序列。如本文所用，术语“多核苷酸”包括双链和单链DNA，以及双链和单链RNA；它还包括修饰和未修饰形式的多核苷酸(对多核苷酸的修饰和作为多核苷酸的修饰例如可包括甲基化、磷酸化和/或加帽)。在一些实施方案中，多核苷酸可以是以下中的一者：基因或基因片段(例如，探针、引物、EST或SAGE标签)；基因组DNA；基因组DNA片段；外显子；内含子；信使RNA(mRNA)；转移RNA；核糖体RNA；核酶；cDNA；重组多核苷酸；分支多核苷酸；质粒；载体；任何序列的分离的DNA；任何序列的分离的RNA；核酸探针；引物或前述中的任一者的扩增拷贝。
在其他实施方案中，多核苷酸可指可操作以编码基因的开放阅读框的聚合形式的核苷酸。
在一些实施方案中，多核苷酸可指cDNA。
在一些实施方案中，多核苷酸可具有任何三维结构，并且可执行任何已知或未知的功能。多核苷酸的结构也可通过其5'-或3'-末端来指代，这指示多核苷酸的方向性。在多核苷酸单链中相邻的核苷酸通常通过它们3'和5'碳之间的磷酸二酯键连接。然而，也可使用不同的核苷酸间键，诸如包括亚甲基、氨基磷酸酯键等的键。这意味着相应的5'和3'碳可暴露在多核苷酸的任一端，其可被称为5'和3'末端或端。5'和3'末端也可分别称为磷酰基(PO4)和羟基(OH)末端，因为化学基团连接到那些末端。术语多核苷酸还指双链和单链分子。除非另有说明或要求，否则制备或使用多核苷酸的任何实施方案包括双链形式和已知或预测构成双链形式的两个互补单链形式中的每一者两者。
在一些实施方案中，多核苷酸可包括修饰的核苷酸，诸如甲基化核苷酸和核苷酸类似物(包括具有非天然碱基的核苷酸、具有修饰的天然碱基的核苷酸，诸如氮杂-或脱氮-嘌呤等)。如果存在，则可在多核苷酸组装之前或之后赋予对核苷酸结构的修饰。
在一些实施方案中，多核苷酸还可在聚合后进一步修饰，诸如通过与标记组分缀合。另外，多核苷酸中的核苷酸序列可被非核苷酸组分中断。多核苷酸的一个或多个末端可被保护或以其他方式修饰，以防止该末端以特定方式与其他多核苷酸相互作用(例如，形成共价键)。
在一些实施方案中，多核苷酸可由四种核苷酸碱基的特定序列组成：腺嘌呤(A)；胞嘧啶(C)；鸟嘌呤(G)；和胸腺嘧啶(T)。也可存在尿嘧啶(U)，例如，当多核苷酸是RNA时，作为胸腺嘧啶的天然替代物。尿嘧啶也可用于DNA。因此，术语“序列”是指多核苷酸或任何核酸分子的字母表示，包括天然和非天然碱基。
术语“RNA分子”或核糖核酸分子是指具有核糖而不是脱氧核糖并且通常尿嘧啶而不是胸腺嘧啶作为嘧啶碱基中的一者的多核苷酸。本发明的RNA分子通常是单链的，但也可以是双链的。在RNA分子来自RNA样品的上下文中，RNA分子可包括从细胞核、线粒体或叶绿体中的DNA转录的单链分子，这些单链分子具有与转录它的DNA链互补的核苷酸碱基的线性序列。
在一些实施方案中，多核苷酸可进一步包含一个或多个异源调节元件。例如，在一些实施方案中，调节元件是一个或多个启动子、增强子、沉默子、操作子、剪接信号、聚腺苷酸化信号、终止信号、RNA输出元件、内部核糖体进入位点(IRES)、聚-U序列或它们的组合。
“转录后基因沉默”或“PTGS”意指活细胞内抑制基因表达的细胞过程。
“转录后调控元件”是在mRNA转录后影响其的DNA区段和/或机制。转录后机制包括剪接事件、加帽、添加Poly(A)尾和本领域普通技术人员已知的其他机制。
“启动子”是指RNA聚合酶结合并启动基因转录的DNA区。
在本文中，“蛋白质”具有与“肽”和/或“多肽”相同的含义。
“比率”是指两个量之间的定量关系，示出了一个值包含或包含在另一个值内的次数。
“阅读框”是指双链DNA分子的六个可能的阅读框中的一个阅读框，每个方向三个阅读框。所用的阅读框决定了在DNA分子的编码序列中哪些密码子用于编码氨基酸。在一些实施方案中，阅读框是将多核苷酸和/或核酸(例如，DNA或RNA)中的核苷酸序列分成一组连续的非重叠的三联体的方式。
“重组DNA”或“rDNA”是指由两个或更多个不同DNA片段组成的DNA。
“重组载体”意指插入了外源DNA的DNA质粒载体。
“调控元件”是指控制核酸序列表达和/或加工的一些方面的遗传元件。例如，在一些实施方案中，可在转录和转录后水平发现调控元件。调控元件可以是顺式调控元件(CRE)或反式调控元件(TRE)。在一些实施方案中，调节元件可以是一个或多个启动子、增强剂、沉默子、操作子、剪接信号、聚腺苷酸化信号、终止信号、RNA输出元件、内部核糖体进入位点(IRES)、聚-U序列和/或例如以组织特异性方式、时间相关方式增加或减少表达以及/或者引起组成型表达来影响基因表达的其他元件。
“限制酶”或“限制性内切核酸酶”是指在特定限制位点切割DNA的酶。例如，限制酶可在EcoRI、SacII或BstXI限制位点切割质粒，从而使质粒线性化，并连接感兴趣的DNA。
“限制位点”是指DNA上包含4个至8个核苷酸的序列的位置，并且其序列被特定的限制酶识别。
“Salannin”是指从印楝中分离的具有杀昆虫活性的化合物。在一些实施方案中，Salannin的分子式为C34H44O9，并且分子量为596.7g/mol。
“海葵”是指海葵(Actiniaria)目的一组海洋动物。海葵以银莲花命名，是一种陆生开花植物，由于许多海葵拥有多彩的外观。例如，在一些实施方案中，海葵是以下物种中的一者：红海葵(Actinia equine)；Anemonia erythraea；沟迎风海葵；蛇锁海葵；华丽黄海葵(Anthopleura elegantissima)；锈绿侧花海葵(Anthopleura fuscoviridis)；黄海葵(Anthopleura xanthogrammica)；Bunodosoma caissarum；Bunodosoma cangicum；疣状海葵(Bunodosoma granulifera)；紫点海葵(Heteractis crispa)；Parasicyonisactinostoloides；Radianthus paumotensis；或向日葵大海葵(Stoichactishelianthus)。
“选择基因”意指赋予遗传修饰的生物体在选择压力下生长的优势的基因。
“血清变型”或“血清型”是指通过一组特征性抗原区分的一组密切相关的微生物。在一些实施方案中，血清变型是抗原性和血清学上不同的微生物变异种。
“sp.”是指物种。
“ssp.”或“subsp.”是指亚种。
“亚克隆”或“亚克隆的”是指将DNA从一个载体转移到另一个载体(通常是有利的载体)的过程。例如，在选择用pKLAC1质粒转化的酵母菌落后，可将编码突变体或肽的多核苷酸亚克隆到pKlac1质粒中。
“SSI”是上下文相关的首字母缩写词。在一些上下文中，它可指“位点特异性整合”，用于指将允许体内同源重组在宿主生物体的基因组内的特定位点发生的序列。因此，在一些实施方案中，术语“位点特异性整合”是指将转基因导向宿主生物体基因组中的靶位点的过程，从而允许将感兴趣的基因整合至宿主生物体的预选基因组位置。然而，在其他上下文中，SSI可指“室内表面喷洒”，这是将可变体积可喷洒量的杀昆虫剂施用到病媒所处的表面(诸如墙壁、窗户、地板和天花板上)上的技术。
“STA”或“翻译稳定蛋白质”或“稳定结构域”或“稳定蛋白质”(本文可互换使用)意指具有足够三级结构的肽或蛋白质，其可在细胞中积累而不被细胞的蛋白质降解过程靶向。该蛋白质的长度可在5个和50个氨基酸之间。翻译稳定蛋白质由蛋白质的在ORF中与编码杀昆虫蛋白或CRIP的序列可操作地连接的DNA序列编码。可操作地连接的STA可以在CRIP的上游或下游，并且在两个序列(STA和CRIP)之间可具有任何间插序列，只要间插序列不导致任一个DNA序列的移码。翻译稳定蛋白质也可具有增加CRIP穿过肠壁并进入昆虫血淋巴的递送的活性。
“sta”意指编码翻译稳定蛋白质的核苷酸。
“结构基序”是指肽和/或多肽的三维排列，和/或可操作地连接的多肽区段的排列。例如，具有ERSP基序、STA基序、LINKER基序和CRIP多肽基序的多肽具有ERSP-STA-L-CRIP的总体“结构基序”。还参见“CRIP构建体”。
“Ta1b”或“U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b”或“Ta1bWT”或“野生型U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b”指从流浪汉蛛(流浪汉蜘蛛(Eratigena agrestis))中分离的多肽。U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的一个示例是具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的多肽(NCBI登录号O46167.1)。
“Ta1b变体多核苷酸”或“U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多核苷酸”是指可操作以表达和/或编码包含一个或多个TVP的杀昆虫蛋白的多核苷酸或多核苷酸组。术语“U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多核苷酸”当用于描述包含在TVP表达ORF中的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多核苷酸序列时、其在载体中的内含物时，和/或当描述编码杀昆虫蛋白的多核苷酸时，被描述为“tvp”和/或“Tvp”。
“毒素”是指毒液和/或毒物，尤其是由某些动物、高等植物和病原菌产生的蛋白质或结合蛋白质。通常，术语“毒素”是保留的天然产物，例如在蝎子、蜘蛛、蛇、有毒蘑菇等中发现的分子和肽，而术语“毒物”保留用于人造产物和/或人工产物，例如人造化学杀虫剂。然而，如本文所用，术语“毒素”和“毒物”同义使用。
“转染”和“转化”均是指将外源和/或异源DNA或RNA(例如，含有编码CRIP的多核苷酸的载体)引导至宿主生物体(例如，原核生物或真核生物)的过程。通常，本领域普通技术人员有时保留术语“转化”来描述将外源和/或异源DNA或RNA引入细菌细胞的过程；并保留术语“转染”用于描述将外源和/或异源DNA或RNA引入真核细胞的过程。然而，如本文所用，术语“转化”和“转染”同义使用，无论方法是否描述将外源和/或异源DNA或RNA引入原核生物(例如，细菌)或真核生物(例如，酵母、植物或动物)中。
“转基因”意指编码被转化到植物中的蛋白质的异源DNA序列。
“转基因宿主细胞”意指用基因转化并经由另外的选择基因选择其转基因状态的细胞。
“转基因植物”意指源自用外源DNA转化的单个细胞的植物，使得植物中的每个细胞都包含该转基因。
“瞬时表达系统”意指基于根癌农杆菌的系统，该系统将编码卸甲植物病毒的DNA递送到植物细胞中，并在其中表达。植物病毒已被工程改造为以高达40％的TSP的高浓度表达感兴趣的蛋白质。
“三表达盒”是指包含在同一载体上的三个CRIP表达盒。
“TRBO”意指使用烟草花叶病毒并除去病毒外壳蛋白基因的瞬时植物表达系统。
“TSP”或“总可溶性蛋白质”意指可从植物组织样品中提取并溶解到提取缓冲液中的蛋白质总量。
“TVP”或“U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)”或“Ta1b变体多肽(TVP)”是指野生型U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b多肽序列和/或编码野生型U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b多肽的多核苷酸序列的突变体或变体，这些突变体或变体已被改变以产生非天然存在的多肽和/或多核苷酸序列。本文提供了具有SEQ ID NO:1的示例性野生型U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b多肽序列。本文提供了具有SEQ ID NO:48的示例性野生型U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b前体多肽序列(NCBI登录号O46167.1)，该序列包括信号序列“MKLQLMICLVLLPCFFC”(SEQ ID NO:59)。在一些实施方案中，TVP可具有根据表1中列出的氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列。因此，术语“TVP”是指相对于SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有一个或多个突变体的多肽。在一些实施方案中，TVP可具有根据式(I)的氨基酸序列：
E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7
式(I)
其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是A、S或N；X2是R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T或S；X3是T或P；X4是K或A；X5是R或A；Z1是T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E或R；X6是K或不存在；并且X7是G或不存在。
在一些实施方案中，TVP可具有根据式(II)的氨基酸序列：
E-P-D-E-I-C-R-A-X1-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-K-G
式(II)
其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是R或Q；并且Z1是T或A；或其药学上可接受的盐。
“U-ACTX-Hv1a”或“杂合肽”或“杂合毒素”或“杂合-ACTX-Hv1a”或“天然杂合ACTX-Hv1a”或“U肽”或“U毒素”或“天然U”或“天然U-ACTX-Hv1a”都是指从称为澳大利亚蓝山漏斗网蜘蛛(澳大利亚漏斗网蜘蛛)的蜘蛛中发现的ACTX肽。U-ACTX-Hv1a是烟碱乙酰胆碱受体的正变构调节剂，并且还可以是昆虫电压门控Ca2+通道和电压门控K+通道的双重拮抗剂。参见Chambers等人，“Insecticidal spider toxins are high affinity positiveallosteric modulators of the nicotinic acetylcholine receptor”，FEBS Lett.，2019年6月，第593卷第12期：第1336-1350页；以及Windley等人，“Lethal effects of aninsecticidal spider venom peptide involve positive allosteric modulation ofinsect nicotinic acetylcholine receptors”，Neuropharmacology，2017年12月，第127卷：第224-242页，这些文献的公开内容全文以引用方式并入本文。示例性U-ACTX-Hv1a肽提供于SEQ ID NO:60中。
“U+2肽”或“U+2蛋白质”或“U+2毒素”或“U+2”或“U+2-ACTX-Hv1a”或“Spear”都是指具有与天然肽可操作连接的另外二肽的U-ACTX-Hv1a。由“+2”或“加2”表示的与U肽可操作地连接的另外的二肽可选自几种肽，其中任一种都可产生具有本文所讨论的独特性质的“U+2肽”。在一些优选的实施方案中，二肽是“GS”；示例性U+2-ACTX-Hv1a肽如SEQ ID NO:61所示。
“UBI”是指泛素。例如，在一些实施方案中，UBI可指从玉蜀黍(Zea mays)中分离的泛素单体。
“var.”是指变种或变异种。术语“var.”用于表示排列在物种水平和/或亚种(当存在时)以下的分类学类别。在一些实施方案中，术语“var.”代表与相同亚种或物种的其他成员在次要但永久或可遗传特征上不同的成员。
“变体”或“变体序列”或“变体肽”是指具有一个或多个保守氨基酸取代或保守修饰的氨基酸序列。“变体”中的保守氨基酸取代相对于其非变异形式基本上不降低变体的活性。例如，在一些实施方案中，与具有公开的和/或要求保护的序列的肽相比，“变体”具有一个或多个保守氨基酸取代，如SEQ ID NO所示。
“载体”是指接受感兴趣的外源基因(例如，crip)的DNA片段。感兴趣的基因称为“插入物”或“转基因”。
“Vip”或“VIP”或“营养期杀昆虫蛋白”是指从筛选营养生长的Bt菌株的上清液中发现的可能具有杀昆虫活性的蛋白质。Vip与Cry蛋白质具有很少的相似性或没有相似性。本文中特别有用和优选使用的是称为VIP3或Vip3的蛋白质，这些蛋白质具有鳞翅目活性。认为Vip具有与Bt cry肽相似的作用模式。
“玻璃化”是指将材料转化为玻璃样无定形材料的过程。玻璃样无定形固体可以不含任何晶体结构。玻璃质固体的固化发生在玻璃化转变温度(Tg)下。
“野生型”或“WT”是指在其天然存在的状态或条件下发现和/或观察到的生物体、多核苷酸序列和/或多肽序列的表型和/或基因型(即，外观或序列)。
“酵母表达载体”或“表达载体”或“载体”意指可将异源基因和/或表达盒引入酵母细胞以进行转录和翻译的质粒。
“产量”是指肽的产量，并且产量增加可意指生产量增加、生产率增加和平均或中值产量增加以及更高产量的频率增加。术语“产量”当用于植物作物生长和/或生产时，如在“植物的产量”中，是指由植物产生的生物质的质量和/或数量。
在整个说明书中，除非另有特别说明或上下文需要，否则提及单个步骤、物质组合物、步骤组或物质组合物组时，应包括那些步骤、物质组合物、步骤组或物质组合物组中的一个和多个(即，一者或多者)。
除非另有说明，否则本公开内容无需过多的实验，而是使用分子生物学、微生物学、病毒学、重组DNA技术、固相和液体核酸合成、溶液中的肽合成、固相肽合成、免疫学、细胞培养和配制的常规技术。此类程序描述于例如Sambrook、Fritsch和Maniatis，MolecularCloning:A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratories，New York，第二版，1989年，第一卷、第二卷和第三卷；DNA Cloning:A Practical Approach，第一卷和第二卷，D.N.Glover编辑，1985年，IRL Press，Oxford，全文；Oligonucleotide Synthesis:APractical Approach，M.J.Gait编辑，1984年，IRL Press，Oxford，全文，特别是其中Gait的论文，第1-22页；Atkinson等人，第35-81页；Sproat等人，第83-115页；以及Wu等人，第135-151页；4.Nucleic Acid Hybridization:A Practical Approach，B.D.Hames和S.J.Higgins编辑，1985年，IRL Press，Oxford，全文；Immobilized Cells and Enzymes:APractical Approach，1986年，IRL Press，Oxford，全文；Perbal,B.，A Practical Guideto Molecular Cloning，1984年；Methods In Enzymology，S.Colowick和N.Kaplan编辑，Academic Press,Inc.，全系列；J.F.Ramalho Ortigao，“The Chemistry of PeptideSynthesis”，载于：访问虚拟实验室网站的知识数据库，Interactiva，Germany；Sakakibara,D.、Teichman,J.、Lien,E.L和Fenichel,R.L.，1976年，Biochem.Biophys.Res.Commun.，第73卷，第336-342页；Merrifield,R.B.，1963年，J.Am.Chem.Soc.，第85卷，第2149-2154页；Barany,G.和Merrifield,R.B.，1979年，“ThePeptides”，Gross,E.和Meienhofer,3编辑，第2卷，第1-284页，Academic Press，New York，12.Wiinsch,E.编辑，1974年，Synthese von Peptiden in Houben-Weyls Metoden derOrganischen Chemie，Muler,E.编辑，第15卷，第4版，第1部分和第2部分，Thieme，Stuttgart；Bodanszky,M.，1984年，Principles of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，Heidelberg；Bodanszky,M.和Bodanszky,A.，1984年，The Practice of PeptideSynthesis，Springer-Verlag，Heidelberg；Bodanszky,M.，1985年，Int.J.PeptideProtein Res.，第25卷，第449-474页；Handbook of Experimental Immunology，第I-IV卷，D.M.Weir和C.C.Blackwell编辑，1986年，Blackwell Scientific Publications；以及Animal Cell Culture:Practical Approach，第三版，John R.W.Masters编辑，2000年；这些文献中的每一者全文都以引用方式并入本文。
在整个说明书中，除非上下文另有要求，否则词语“包括”或其变体诸如“包含”或“含有”将被理解为暗示包括所述步骤或元件或整数或者步骤或元件或整数的组，但不排除任何其他步骤或元件或整数或者元件或整数的组。
本文所提及的所有专利申请、专利和印刷出版物全文都以引用方式并入本文，就好像每个单独的出版物、专利或专利申请全文都被明确地并且单独地指出以引用方式并入。并且，本文引用的所有专利申请、专利和印刷出版物全文都以引用方式并入本文，除了任何定义、主题免责声明或否认声明，并且除了并入的材料与本文明确的公开内容不一致的程度，在这种情况下，以本公开的语言为准。
富含半胱氨酸的杀昆虫蛋白(CRIP)
本发明提供了组合，这些组合包含(1)一种或多种CRIP，或其药学可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；和(2)一种或多种杀昆虫剂(IA)。本文考虑和教导了几种类型的CRIP。下文详细描述了本发明的CRIP，这些CRIP可与本发明的杀昆虫剂(IA)组合使用。适用于本发明的组合并在下文考虑的所有CRIP包括CRIP-杀昆虫蛋白。
蜘蛛肽和毒素
在一些实施方案中，CRIP可以是从以下中的一者分离的蜘蛛毒素肽或蛋白质：巴西流浪蜘蛛；华丽异漏蛛(Allagelena opulenta)；Cupiennius salei；暗色距蛛(Plectreurys tristis)；马来西亚毛蛛(Coremiocnemis valida)；虎纹捕鸟蛛(Haplopelma huwenum)；Agelena orientalis；华丽异漏蛛；弗罗伦蒂娜蜘蛛(Segestriaflorentina)；Apomastus schlingeri；Phoneutria keyserlingi；巨型上户蜘蛛(Macrothele gigas)；雷氏大疣蛛(Macrothele raveni)；Missulena bradleyi；阴暗拟隙蛛(Pireneitega luctuosa)；Phoneutria reidyi；Illawara wisharti；Eucratoscelusconstrictus；Agelenopsis aperta；Hololena curta；Oxyopes lineatus；墨西哥金背红尾(Brachypelma albiceps)；或墨西哥红膝蜘蛛(Brachypelma smithi)。
在一些实施方案中，CRIP可从澳大利亚漏斗网蜘蛛、Hadronyche venenata、悉尼漏斗网蜘蛛(Atrax robustus)、Atrax formidabilis或Atrax infensus中分离。
在一些实施方案中，CRIP可以是以下蜘蛛肽、多肽和/或毒素中的任一者：U+2-ACTX-Hv1a、Γ-CNTX-Pn1a、U13-ctenitoxin-Pn1a、U13-ctenitoxin-Pn1b、U13-ctenitoxin-Pn1c、U1-漏斗网蛛毒素-Aop1a、U1-ctenitoxin-Cs1a、U1-nemetoxin-Csp1a、U1-nemetoxin-Csp1b、U1-nemetoxin-Csp1c、U1-plectoxin-Pt1a、U1-plectoxin-Pt1b、U1-plectoxin-Pt1c、U1-plectoxin-Pt1d、U1-plectoxin-Pt1f、U1-theraphotoxin-Cv1a、U1-theraphotoxin-Hh1a_1、U1-theraphotoxin-Hh1a_2、U1-theraphotoxin-Hh1a_3、U1-theraphotoxin-Hh1b、U1-theraphotoxin-Hh1c_1、U1-theraphotoxin-Hh1c_2、U1-theraphotoxin-Hh1d、U1-theraphotoxin-Hh1e、U1-theraphotoxin-Hh1f_1、U1-theraphotoxin-Hh1f_2、U1-theraphotoxin-Hh1f_3、U1-theraphotoxin-Hh1f_4、U1-theraphotoxin-Hh1g、U2-漏斗网蛛毒素-Ao1a、U2-漏斗网蛛毒素-Aop1a、U2-ctenitoxin-Cs1a、U2-ctenitoxin-Pn1a、U2-cyrtautoxin-As1a、U2-segestritoxin-Sf1a、U2-segestritoxin-Sf1b、U2-segestritoxin-Sf1c、U2-segestritoxin-Sf1d、U2-segestritoxin-Sf1e、U2-segestritoxin-Sf1f、U2-segestritoxin-Sf1g、U2-segestritoxin-Sf1h、U2-theraphotoxin-Hh1a、U3-cyrtautoxin-As1a、U3-plectoxin-Pt1a、U5-ctenitoxin-Pn1a、U7-ctenitoxin-Pk1a、β-hexatoxin-Mg1a、β-hexatoxin-Mr1a、Γ-ctenitoxin-Pn1a、δ-actinopoditoxin-Mb1a、δ-Amaurobitoxin-Pl1a、δ-Amaurobitoxin-Pl1b、δ-Amaurobitoxin-Pl1c、δ-Amaurobitoxin-Pl1d、δ-ctenitoxin-Asp2e、δ-ctenitoxin-Pn1a_1、δ-ctenitoxin-Pn1a_2、δ-ctenitoxin-Pn1b、δ-ctenitoxin-Pn2a、δ-ctenitoxin-Pn2b、δ-ctenitoxin-Pn2cδ-ctenitoxin-Pr2d、δ-hexatoxin-Ar1a、δ-hexatoxin-Hv1a、δ-hexatoxin-Hv1b、δ-hexatoxin-Iw1a、δ-hexatoxin-Mg1a、δ-hexatoxin-Mg1b、κ-hexatoxin-Hf1a、κ-hexatoxin-Hv1a、κ-hexatoxin-Hv1b、κ-hexatoxin-Hv1c_1、κ-hexatoxin-Hv1c_2、κ-hexatoxin-Hv1c_3、κ-hexatoxin-Hv1c_4、κ-hexatoxin-Hv1d、κ-hexatoxin-Hv1e、κ-theraphotoxin-Ec2a、κ-theraphotoxin-Ec2b、μ-漏斗网蛛毒素-Aa1a、μ-漏斗网蛛毒素-Aa1b、μ-漏斗网蛛毒素-Aa1c、μ-漏斗网蛛毒素-Aa1d、μ-漏斗网蛛毒素-Aa1e、μ-漏斗网蛛毒素-Aa1f、μ-漏斗网蛛毒素-Hc1a、μ-漏斗网蛛毒素-Hc1b、μ-漏斗网蛛毒素-Hc1c、μ-hexatoxin-Mg1a、μ-hexatoxin-Mg1b、μ-hexatoxin-Mg1c、μ-hexatoxin-Mg2a、μ-theraphotoxin-Hh1a、ω-actinopoditoxin-Mb1a、ω-漏斗网蛛毒素-Aa4a、ω-漏斗网蛛毒素-Aa4b、ω-漏斗网蛛毒素-Aa4c、ω-hexatoxin-Ar1a_1、ω-hexatoxin-Ar1a_3、ω-hexatoxin-Ar1b_1、ω-hexatoxin-Ar1d_1、ω-hexatoxin-Ar1d_4、ω-hexatoxin-Ar1e_1、ω-hexatoxin-Ar1f、ω-hexatoxin-Ar1g_1、ω-hexatoxin-Ar1h、ω-hexatoxin-Ar2a、ω-hexatoxin-Ar2b、ω-hexatoxin-Ar2c、ω-hexatoxin-Ar2d、ω-hexatoxin-Ar2e_1、ω-hexatoxin-Ar2e_2、ω-atracotoxin-Asp2a、ω-hexatoxin-Asp2b、ω-hexatoxin-Hf1a、ω-hexatoxin-Hi1a_1、ω-hexatoxin-Hi1a_2、ω-hexatoxin-Hi1a_3、ω-hexatoxin-Hi1b_1、ω-hexatoxin-Hi1b_10、ω-hexatoxin-Hi1b_2、ω-hexatoxin-Hi1b_5、ω-hexatoxin-Hi1b_8、ω-hexatoxin-Hi1c_1、ω-hexatoxin-Hi1c_2、ω-hexatoxin-Hv1a、ω-hexatoxin-Hv1b、ω-hexatoxin-Hv1c、ω-hexatoxin-Hv1d、ω-hexatoxin-Hv1e、ω-hexatoxin-Hv1f、ω-hexatoxin-Hv1g_1、ω-hexatoxin-Hv1g_5ω-hexatoxin-Hv1g_6ω-hexatoxin-Hv2a、ω-hexatoxin-Hv2b_1、ω-hexatoxin-Hv2b_2、ω-hexatoxin-Hv2b_3、ω-hexatoxin-Hv2b_4、ω-hexatoxin-Hv2b_5、ω-hexatoxin-Hv2b_6、ω-hexatoxin-Hv2b_7、ω-hexatoxin-Hv2c、ω-hexatoxin-Hv2d_1、ω-hexatoxin-Hv2d_2、ω-hexatoxin-Hv2d_3、ω-hexatoxin-Hv2e、ω-hexatoxin-Hv2f、ω-hexatoxin-Hv2g、ω-hexatoxin-Hv2h_1、ω-hexatoxin-Hv2h_2、ω-hexatoxin-Hv2i、ω-hexatoxin-Hv2j_1、ω-hexatoxin-Hv2j_2、ω-hexatoxin-Hv2k、ω-hexatoxin-Hv2l、ω-hexatoxin-Hv2m_1、ω-hexatoxin-Hv2m_2、ω-hexatoxin-Hv2m_3、ω-hexatoxin-Hv2n、ω-hexatoxin-Hv2o、ω-hexatoxin-Hvn1a、ω-hexatoxin-Hvn1b_1、ω-hexatoxin-Hvn1b_2、ω-hexatoxin-Hvn1b_3、ω-hexatoxin-Hvn1b_4、ω-hexatoxin-Hvn1b_6、ω-hexatoxin-Iw2a、ω-oxotoxin-Ol1b、ω-plectoxin-Pt1a、ω-theraphotoxin-Asp1a、ω-theraphotoxin-Asp1f、ω-theraphotoxin-Asp1g、ω-theraphotoxin-Ba1a、ω-theraphotoxin-Ba1b、ω-theraphotoxin-Bs1a、ω-theraphotoxin-Bs2a或ω-theraphotoxin-Hh2a。
在一些实施方案中，CRIP可以是蜘蛛毒素或肽，其具有SEQ ID NO:192-278和281-370中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，编码CRIP的多核苷酸可编码具有与SEQ ID NO:192-278和281-370所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的CRIP。
ACTX肽
在一些实施方案中，CRIP可以是ACTX肽。
在一些实施方案中，CRIP可以是以下ACTX肽中的一种或多种ACTX肽：U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、rκ-ACTX-Hv1c、ω-ACTX-Hv1a和/或ω-ACTX-Hv1a+2。
示例性ACTX肽包括：U-ACTX-Hv1a，其具有氨基酸序列“QYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA”(SEQ ID NO:60)；U+2-ACTX-Hv1a，其具有氨基酸序列“GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA”(SEQ ID NO:61)；Omega-ACTX-Hv1a，其具有氨基酸序列“SPTCIPSGQPCPYNENCCSQSCTFKENENGNTVKRCD”(SEQ ID NO:62)；“ω+2-ACTX-Hv1a+2”(或Omega+2-ACTX-Hv1a)，其具有氨基酸序列“GSSPTCIPSGQPCPYNENCCSQSCTFKENENGNTVKRCD”(SEQ ID NO:63)；和Kappa+2-ACTX-Hv1a(或κ+2-ACTX-Hv1a，其具有氨基酸序列“GSAICTGADRPCAACCPCCPGTSCKAESNGVSYCRKDEP”(SEQ ID NO:64)。
在一些实施方案中，CRIP可以是“Kappa-ACTX-Hv1a”(或κ+2-ACTX-Hv1a)，其具有氨基酸序列“AICTGADRPCAACCPCCPGTS CKAESNGVSYCRKDEP”(SEQ ID NO:594)。
在一些实施方案中，ACTX肽可包含与SEQ ID NO:60-64、192-370和594具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，编码ACTX肽的多核苷酸可编码具有与SEQ IDNO:60-64和594所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的ACTX肽。
Γ-CNTX-Pn1a肽
在一些优选的实施方案中，CRIP可以是Γ-CNTX-Pn1a或γ-CNTX-Pn1a毒素。Γ-CNTX-Pn1a肽是源自巴西武装蜘蛛(巴西流浪蜘蛛)的杀昆虫神经毒素。Γ-CNTX-Pn1a靶向离子型谷氨酸受体(GRIN)的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)亚型和钠通道。示例性野生型全长Γ-CNTX-Pn1a肽具有以下氨基酸序列：MKVAIVFLSLLVLAFASESIEENREEFPVEESARCADINGACKSDCDCCGDSVTCDCYWSDSCKCRESNFKIGMAIRKKFC(SEQ ID NO:689)(NCBI登录号P59367)。提供了重组成熟Γ-CNTX-Pn1A肽，其具有“GSCADINGACKSDCDCCGDSVTCDCYWSDSCKCRESNFKIGMAIRKKFC”(SEQ ID NO:65)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，Γ-CNTX-Pn1a肽可包含与SEQ ID NO:65具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，编码Γ-CNTX-Pn1a肽的多核苷酸可编码具有与SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a肽。
野生型U1-漏斗网蛛毒素和TVP
“流浪汉蛛”(流浪汉蜘蛛，以前是流浪者蜘蛛(Tegenaria agrestis))是草蛛科(Agelenidae)蜘蛛或漏斗网蛛科的成员。参见Ingale A，“Antigenic epitopesprediction and MHC binder of a paralytic insecticidal toxin(ITX-1)ofTegenaria agrestis(hobo spider)”，2010年8月4号，第2010卷第2期：第97-103页。流浪蜘蛛的毒液被认为具有杀昆虫活性。参见Johnson等人，“Novel insecticidal peptidesfrom Tegenaria agrestis spider venom may have a direct effect on the insectcentral nervous system”，Arch Insect Biochem Physiol.，1998年，第38卷第1期：第19-31页；Klint等人，Production of Recombinant Disulfide-Rich Venom Peptides forStructural and Functional Analysis via Expression in the Periplasm of E.coli，PLoS One，2013年，第8卷第5期：第e63865页。
流浪蜘蛛—与草蛛科中的几种其他蜘蛛一起，产生含有漏斗网蛛毒素的毒液—其表现出杀昆虫活性。漏斗网蛛毒素是一组化学性质多样的毒素，根据目标物种不同，其可诱导不同的杀昆虫效果；例如漏斗网蛛毒素在鞘翅目、鳞翅目和双翅目中引起缓慢发作的痉挛性瘫痪；提高家蝇(普通家蝇)中枢神经系统(CNS)的神经元放电率；并且对其他昆虫是致命的(例如，铜绿蝇(Lucilia cuprina))。因此，漏斗网蛛毒素涉及靶向CNS。参见Undheim等人，“Weaponization of a hormone:convergent recruitment of hyperglycemichormone into the venom of arthropod predators”，Structure，第23卷：第1283-1292页；以及Johnson等人，“Novel insecticidal peptides from Tegenaria agrestisspider venom may have a direct effect on the insect central nervous system”，Arch.Insect Biochem.Physiol.，第38卷：第19-31页(1998年)。
两种类型的漏斗网蛛毒素包括U1-漏斗网蛛毒素-Ta1a和U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b，它们都是螺旋状节肢动物-神经肽-衍生的(HAND)毒素家族的成员。除了蜘蛛之外，这些毒素还可在蜈蚣的毒液中发现。漏斗网蛛毒素是古老蜕皮激素家族的进化分支，即离子转运肽/甲壳动物高血糖激素(ITP/CHH)家族。参见Undheim等人，“Weaponization of ahormone:convergent recruitment of hyperglycemic hormone into the venom ofarthropod predators”，Structure，第23卷：第1283-1292页；以及Johnson等人，“Novelinsecticidal peptides from Tegenaria agrestis spider venom may have a directeffect on the insect central nervous system”，Arch.Insect Biochem.Physiol.，第38卷：第19-31页(1998年)。
流浪蜘蛛衍生的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b毒素具有完整的氨基酸序列“MKLQLMICLVLLPCFFCEPDEICRARMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYTACHEAQKG(SEQ ID NO:48)”，其包括来自氨基酸位置1-17的信号肽和来自位置18-68的成熟毒素。如前述文献所述。该蛋白质包含四个紧密包装的α-螺旋，不存在β-链，并且成熟毒素的分子量为5700.39道尔顿(Da)。如前述文献所述。
提供了来自流浪汉蜘蛛的示例性成熟野生型U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b多肽，其具有氨基酸序列：“EPDEICRARMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYTACHEAQKG”(SEQ ID NO:1)。
在蛋白质加工期间，成熟的野生型U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b毒素经历C-末端甘氨酸的切除事件，从而产生以下氨基酸序列：EPDEICRARMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYTACHEAQK(SEQ ID NO:60)。随后的翻译后事件导致成熟野生型U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b毒素具有C-末端酰胺化。
U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)是在某些方面不同于野生型U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b(SEQ ID NO:1)的突变体或变体，例如，在一些实施方案中，该变化可以是氨基酸取代、缺失或添加；或编码野生型U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的多核苷酸的改变，从而导致氨基酸取代、缺失或添加。这种变异的结果是非天然存在的多肽和/或编码该多肽的多核苷酸序列相对于野生型U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b对一种或多种昆虫物种具有增强的杀昆虫活性。
在一些实施方案中，TVP可具有根据SEQ ID NO:2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651或653-654的氨基酸序列，如表1所示。
表1.本发明的TVP。
Figure BDA0004014715560000521
Figure BDA0004014715560000531
Figure BDA0004014715560000541
Figure BDA0004014715560000551
Figure BDA0004014715560000561
Figure BDA0004014715560000571
在一些实施方案中，具有根据SEQ ID NO:2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651或653-654的序列的多核苷酸序列可操作以编码TVP。例如，在一些实施方案中，表2中所示的多核苷酸可操作以编码TVP。
表2.本发明的多核苷酸。
Figure BDA0004014715560000581
Figure BDA0004014715560000591
Figure BDA0004014715560000601
Figure BDA0004014715560000611
示例性的TVP
在国际申请号PCT/US21/28254中提供了TVP和可操作以编码TVP的多核苷酸的示例性描述，其公开内容全文以引用方式并入本文。
在一些实施方案中，TVP相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含一个或多个突变。例如，在一些实施方案中，TVP可具有相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列的第一、第二或第三突变。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与根据以下式(I)的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是A、S或N；X2是R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T或S；X3是T或P；X4是K或A；X5是R或A；Z1是T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E或R；X6是K或不存在；并且X7是G或不存在，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与根据以下式(I)的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是A、S或N；X2是R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T或S；X3是T或P；X4是K或A；X5是R或A；Z1是T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E或R；X6是K或不存在；并且X7是G或不存在；并且其中TVP在X1、X2、X3、X4或X5处具有一个氨基酸取代，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与根据以下式(I)的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是A、S或N；X2是R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T或S；X3是T或P；X4是K或A；X5是R或A；Z1是T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E或R；X6是K或不存在；并且X7是G或不存在；并且其中TVP在X1、X2、X3、X4或X5处具有一个氨基酸取代；并且其中X7是甘氨酸，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与根据以下式(I)的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是A、S或N；X2是R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T或S；X3是T或P；X4是K或A；X5是R或A；Z1是T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E或R；X6是K或不存在；并且X7是G或不存在；并且其中TVP在X1、X2、X3、X4或X5处具有一个氨基酸取代；并且其中X7不存在，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与根据以下式(I)的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是A、S或N；X2是R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T或S；X3是T或P；X4是的K或A；X5是R或A；Z1是T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E或R；X6是K或不存在；并且X7是G或不存在；并且其中TVP在X1、X2、X3、X4或X5处具有一个氨基酸取代；并且其中X6和X7不存在，或它们的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与根据以下式(I)的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是A、S或N；X2是R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T或S；X3是T或P；X4是K或A；X5是R或A；Z1是T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E或R；X6是K或不存在；并且X7是G或不存在；并且其中TVP包含SEQ ID NO:2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651或653-654中任一项所示的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与根据以下式(I)的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是A、S或N；X2是R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T或S；X3是T或P；X4是K或A；X5是R或A；Z1是T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E或R；X6是K或不存在；并且X7是G或不存在；并且其中TVP由SEQ ID NO:17-30、54-58或655-688中任一项所示的多核苷酸序列或它们的互补核苷酸序列编码。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与根据以下式(I)的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是A、S或N；X2是R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T或S；X3是T或P；X4是K或A；X5是R或A；Z1是T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E或R；X6是K或不存在；并且X7是G或不存在；并且其中TVP进一步包含两个或更多个TVP的均聚物或杂聚物，其中每个TVP的氨基酸序列相同或不同。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与根据以下式(I)的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是A、S或N；X2是R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T或S；X3是T或P；X4是K或A；X5是R或A；Z1是T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E或R；X6是K或不存在；并且X7是G或不存在；并且其中TVP是包含由可切割或不可切割的接头分离的两个或更多个TVP的融合蛋白质，并且其中每个TVP的氨基酸序列可相同或不同。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与根据以下式(I)的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是A、S或N；X2是R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T或S；X3是T或P；X4是K或A；X5是R或A；Z1是T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E或R；X6是K或不存在；并且X7是G或不存在；并且其中TVP是包含由可切割或不可切割的接头分离的两个或更多个TVP的融合蛋白质，并且其中每个TVP的氨基酸序列可相同或不同，并且其中接头在昆虫的肠道或血淋巴内可切割。
在一些实施方案中，接头具有SEQ ID NO:61-70中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与根据以下式(I)的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是A、S或N；X2是R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T或S；X3是T或P；X4是K或A；X5是R或A；Z1是T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E或R；X6是K或不存在；并且X7是G或不存在；并且其中如果Z1是T或S，则TVP是糖基化的，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与氨基酸序列“EPDEICRAQMTNKEFTYKSNVCNNCGD QVAACEAECFRNDVYAACHEAQKG”(SEQ IDNO:51)的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与根据以下式(II)的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP：E-P-D-E-I-C-R-A-X1-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-K-G；其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是R或Q；并且Z1是T或A；或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与根据以下式(II)的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP：E-P-D-E-I-C-R-A-X1-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-K-G；其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是R或Q；并且Z1是T或A；或其药学上可接受的盐；其中如果Z1是T，则TVP是糖基化的。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与根据以下式(II)的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP：E-P-D-E-I-C-R-A-X1-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-K-G；其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是R或Q；并且Z1是T或A；或其药学上可接受的盐，其中X1是Q；并且Z1是A。
在一些实施方案中，杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)可以是包含具有与SEQ ID NO:2、49或51中任一项所示氨基酸序列的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的TVP，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，TVP可包含具有与氨基酸序列“EPDEICRAQMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYAACH EAQKG”(SEQ ID NO:51)具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
在一些优选的实施方案中，TVP可以是TVP-R9Q/T43A(SEQ ID NO：51)。
在各种实施方案中，编码TVP的多核苷酸可用于转化植物细胞、酵母细胞或细菌细胞。在一些实施方案中，杀昆虫TVP转基因蛋白质可被配制成组合物，这些组合物可以本领域技术人员已知的任何方式喷洒或以其他方式施用到植物或其部分的表面。因此，本文提供了DNA构建体，其可操作以在宿主细胞(例如，植物细胞)中在适当条件下编码一种或多种TVP。用于防治植物细胞的寄生昆虫的害虫感染的方法包括通过重组技术将编码如本文所述的TVP的多核苷酸施用或引入植物、植物组织或植物细胞，以及在暴露于害虫的田地中使所述重组改变的植物、植物组织或植物细胞生长。另选地，TVP可配制成由TVP和赋形剂组成的可喷洒组合物，并通过直接施用而直接施用于易感植物，使得传染性昆虫摄入TVP后产生有害作用。
蝎肽和毒素
在一些实施方案中，CRIP可以是以下蝎(scorpion)肽、多肽和/或毒素中的任一者：Imperatoxin-A(IpTxa)、钾通道毒素α-KTx 10.2(Cobatoxin-2)、钾通道毒素α-KTx11.1(Parabutoxin-1)、钾通道毒素α-KTx 11.2(Parabutoxin-2)、钾通道毒素α-KTx 11.3(Parabutoxin-10)、钾通道毒素α-KTx 12.1(Butantoxin)、钾通道毒素α-KTx 12.2(Butantoxin)、钾通道毒素α-KTx 12.3(Butantoxin样肽)、钾通道毒素α-KTx 15.1(肽Aa1)、钾通道毒素α-KTx 15.3(毒素AmmTX3)、钾通道毒素α-KTx 15.6(Discrepin)、钾通道毒素α-KTx 16.1(Tamulotoxin)、钾通道毒素α-KTx 19.1(神经毒素BmBKTx1)、钾通道毒素α-KTx 1.3(非洲蝎毒)、钾通道毒素α-KTx 1.4(Limbatotoxin)、钾通道毒素α-KTx 1.7(Lqh15-1)、钾通道毒素α-KTx 1.9(Hongotoxin-2)、钾通道毒素α-KTx1.10(Parabutoxin-3)、钾通道毒素α-KTx 1.11(Slotoxin)、钾通道毒素α-KTx 1.13(卡律(布德)蝎毒素c)、钾通道毒素α-KTx 2.1(Noxiustoxin)、钾通道毒素α-KTx 2.2(玛格毒素)、钾通道毒素α-KTx2.3(CllTx1)、钾通道毒素α-KTx 2.4(Noxiustoxin-2)、钾通道毒素α-KTx 2.5(Hongotoxin-1)、钾通道毒素α-KTx 2.6(Hongotoxin-3)、钾通道毒素α-KTx 2.7(CllTx2)、钾通道毒素α-KTx 2.8(毒素Ce1)、钾通道毒素α-KTx 2.9(毒素Ce2)、钾通道毒素α-KTx 2.10(毒素Ce3)、钾通道毒素α-KTx 2.11(毒素Ce4)、钾通道毒素α-KTx 2.12(毒素Ce5)、钾通道毒素α-KTx3.1(短肤蝎毒素-1)、钾通道毒素α-KTx 3.2(Agitoxin-2)、钾通道毒素α-KTx 3.3(Agitoxin-3)、钾通道毒素α-KTx 3.4(Agitoxin-1)、钾通道毒素α-KTx 3.7(OsK-1)、钾通道毒素α-KTx 3.8(卡律(布德)蝎毒素样肽Bs 6)、钾通道毒素α-KTx 3.9(短肤蝎毒素-3)、钾通道毒素α-KTx 4.1(东亚钳蝎毒K-α)、钾通道毒素α-KTx 4.3(毒素TdK1)、钾通道毒素α-KTx 4.4(毒素Tc30)、钾通道毒素α-KTx5.1(Leiurotoxin-1)、钾通道毒素α-KTx 5.2(Leiurotoxin I样毒素P05)、钾通道毒素α-KTx 5.4(Tamapin)、钾通道毒素α-KTx 5.5(Tamapin-2)、钾通道毒素α-KTx 6.1(钾通道阻滞毒素1)、钾通道毒素α-KTx 6.2(Maurotoxin)、钾通道毒素α-KTx 6.3(神经毒素HsTX1)、钾通道毒素α-KTx 6.12(Anuroctoxin)、钾通道毒素α-KTx 6.13(Spinoxin)、钾通道毒素α-KTx 6.14(HgeTx1)、钾通道毒素α-KTx 7.2(毒素PiTX-K-β)、钾通道毒素γ-KTx 1.2(Ergtoxin样蛋白质1)、钾通道毒素γ-KTx 1.3(Ergtoxin样蛋白质1)、钾通道毒素γ-KTx 1.4(Ergtoxin样蛋白质1)、钾通道毒素γ-KTx 1.5(Ergtoxin样蛋白质1)、钾通道毒素γ-KTx 1.6(Ergtoxin样蛋白质1)、钾通道毒素γ-KTx 4.2(Ergtoxin样蛋白质5)、Insectotoxin-I1。小毒素(肽I)、Insectotoxin-I3(BeI3)、Insectotoxin-I4(BeI4)、Insectotoxin-I5A、神经毒素8(神经毒素VIII)、可能的毒素Lqh 8/6、神经毒素9(神经毒素IX)、Maurocalcin(MCa)、氯毒素样肽Bs14(Bs14)、氯毒素(CTX)、神经毒素P2、Insectotoxin-I5(BeI5)、钾通道毒素α-KTx 6.15(半毒素)、毒素GaTx1、AahIT1、Phaiodotoxin、BaIT2、BotIT1、BotIT2、BmK M1、BmK-M2、BmK-M4、BmK-M7、BmK IT-AP、Bom3、Bom4、BjaIT、Bj-xtrIT、BjIT2、LqhaIT、Lqhb1、LqhIT2、LqhdprIT3a、Lgh-xtrIT、Lqh3、Lqh6、Lqh7、LqqIT1、LqqIT2、Lqq3、OD1、Ts1或Tz1。
在一些实施方案中，CRIP可以是蝎肽，其具有SEQ ID NO:88-191中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CRIP可以是imperatoxin。Imperatoxin是源自非洲蝎(帝王蝎(Pandinus imperator))的毒液中的肽毒素。
在一些实施方案中，CRIP可以是imperatoxin，其中imperatoxin是imperatoxin A(IpTx-a)或其变体。在一些实施方案中，IpTx-a具有GDCLPHLKRCKADNDCCGKKCKRRGTNAEKRCR(SEQ ID NO:66)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CRIP可以是AaIT1毒素。蛋白质毒素AalT1是来自北非沙漠蝎(黄肥尾蝎(Androctonus australis))的钠通道位点4毒素。示例性AaIT1毒素是具有根据SEQ ID NO:88的氨基酸序列的肽(NCBI登录号P01497.2)。AaIT1是位点4毒素，其通过降低激活反应能量屏障来迫使昆虫钠通道打开。
在一些实施方案中，蝎肽可包含与SEQ ID NO:66、88-191具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，编码蝎肽或毒素的多核苷酸可编码具有与SEQ ID NO:66、88-191所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的蝎肽或毒素。
海葵肽和毒素
在一些实施方案中，CRIP可从海葵中分离。例如，在一些实施方案中，海葵可以是等指海葵(Actinia equina)；Anemonia erythraea；沟迎风海葵；蛇锁海葵；华丽黄海葵；锈绿侧花海葵；黄海葵；Bunodosoma caissarum；Bunodosoma cangicum；疣状海葵；紫点海葵；Parasicyonis actinostoloides；Radianthus paumotensis；或向日葵大海葵。在其他实施方案中，海葵毒素可以是Av2；Av3；或它们的变体。
在一些实施方案中，CRIP可以是以下海葵毒素中的一者：毒素AETX-1(AETX I)、毒素APETx1、毒素APETx2、抗高血压蛋白质BDS-1(血液抑制物质I)、抗高血压蛋白质BDS-2(血液抑制物质II)、神经毒素Bg-2(Bg II)、神经毒素Bg-3(Bg III)、毒素APE 1-1、毒素APE 1-2、神经毒素-1(毒素ATX-I)、神经毒素-1(神经毒素I)、神经毒素1(毒素RTX-I)、神经毒素1(毒素SHP-I)、毒素APE 2-1、毒素APE 2-2、神经毒素-2(毒素ATX-II)、(aka AV2)神经毒素-2(毒素AFT-II)、神经毒素2(毒素RTX-II)、神经毒素2(神经毒素II)、神经毒素3同源物(神经毒素III同源物)、神经毒素3(毒素RTX-III)、神经毒素3(神经毒素-III)、神经毒素4(毒素RTX-IV)、神经毒素-5(毒素ATX-V)、神经毒素5(毒素RTX-V)、黄海葵强心肽-A(毒素AP-A)、黄海葵强心肽-B(毒素AP-B)、黄海葵强心肽-C(毒素AP-C)、钾通道毒素Aek、钾通道毒素Bgk、主要神经毒素BcIII、神经毒素BcIV、Cangitoxin(CGTX)、钾通道毒素ShK、毒素PCR1(PCR1-2)、毒素PCR2(PCR2-5)、毒素PCR3(PCR2-1)、毒素PCR4(PCR2-10)、毒素PCR6(PCR3-7)、Cangitoxin-2(Cangitoxin II)或Cangitoxin-3(Cangitoxin III)。
在一些实施方案中，CRIP可以是海葵肽，其具有SEQ ID NO:371-411所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明的CRIP可以是源自海葵(蛇锁海葵)的一种或多种多肽，该一种或多种多肽具有用于自身防御的多种毒素。源自蛇锁海葵的毒素中的一者是神经毒素“Av3”。Av3是III型海葵毒素，其抑制受体位点3处的电压门控钠(Na+)通道的失活，从而导致收缩麻痹。Av3毒素与位点3的结合导致钠通道的失活状态变得不稳定，这继而又导致通道保持开放位置(参见Blumenthal等人，“Voltage-gated sodium channel toxins:poisons,probes,and future promise”，Cell Biochem Biophys.，2003年，第38卷第2期：第215-238页)。Av3对甲壳动物和昆虫钠通道显示出高选择性，并且对哺乳动物钠通道显示出低选择性(参见Moran等人，“Sea anemone toxins affecting voltage-gated sodiumchannels-molecular and evolutionary features”，Toxicon，2009年12月15日，第54卷第8期：第1089-1101页)。提供了来自蛇锁海葵的示例性Av3多肽，该多肽具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明的CRIP可以是Av3变体多肽(AVP)。在一些实施方案中，AVP可具有来自SEQ ID NO:44的以下氨基酸变异：相对于SEQ ID NO:44，R1K的N-末端氨基酸取代，从而将多肽序列从野生型“RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV”改变为“KSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV”(SEQ ID NO:45)；相对于SEQ ID NO:44，C-末端氨基酸可缺失，从而将多肽序列从野生型“RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV”改变为“RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPK”(SEQ ID NO:46)；和/或N-末端突变和C-末端突变，其中相对于SEQ ID NO:44，N-末端氨基酸可具有R1K的取代，并且相对于SEQ ID NO:44，C-末端氨基酸可缺失，从而将多肽序列从野生型“RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV”改变为“KSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPK”(SEQ ID NO:47)。
在一些实施方案中，例示性的Av3肽或其变体描述于2019年9月13日提交的申请人的PCT申请(申请号PCT/US19/51093)，名称为“Av3 Mutant Insecticidal Polypeptidesand Methods for Producing and Using Same”，该申请的公开内容和Av3肽或其变体的公开内容描述于本文并且全文以引用方式并入本文。
在一些实施方案中，海葵肽可包含与SEQ ID NO:44-47和371-411具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，编码海葵肽的多核苷酸可编码具有与SEQ ID NO:44-47和371-411所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的海葵肽。
鸡心螺肽和芋螺毒素
芋螺毒素是从鸡心螺中分离的毒素；这些毒素通过干扰神经元通讯而起作用。芋螺毒素的示例包括α-、ω-、μ-、δ-和κ-芋螺毒素。简而言之，α-芋螺毒素(和αA-芋螺毒素和φ-芋螺毒素)靶向烟碱配体门控通道；ω-芋螺毒素靶向电压门控钙通道；μ-芋螺毒素靶向电压门控钠通道；δ-芋螺毒素靶向电压门控钠通道；并且κ-芋螺毒素靶向电压门控钾通道。
在一些实施方案中，CRIP可从属于芋螺属的生物体中分离，其中所分离的肽是芋螺毒素。
在一些实施方案中，CRIP可分离自：阿玛迪芋螺；猫芋螺；乌龟芋螺；杀手芋螺；海之荣光芋螺；木下芋螺；僧袍芋螺；大理石芋螺；紫金芋螺；飞蝇芋螺；细线芋螺；织锦芋螺；或郁金香芋螺。
其他CRIP
在一些实施方案中，CRIP可以是毒素、肽或蛋白质(另外称为毒液或毒肽或蛋白质)，其产生和/或分离自节肢动物、蜘蛛、蝎子、昆虫、蜜蜂、黄蜂、蜈蚣、甲壳动物、爬行动物、蛇、蜥蜴、两栖动物、蛙、蝾螈、软体动物、鸡心螺、刺胞动物、海葵、水母、水螅虫、头足类动物、章鱼、鱿鱼、乌贼、鱼或哺乳动物。
在一些实施方案中，CRIP可以是蛇毒，或来自蛇毒的毒素。
CRIP-杀昆虫蛋白
CRIP-杀昆虫蛋白是任何蛋白质、肽、多肽、氨基酸序列、构型或排列，由以下组成：(1)至少一个CRIP，或两个或更多个CRIP；和(2)另外的非CRIP肽、多肽或蛋白质，例如，在一些实施方案中，其具有进行下列操作的能力：相对于单独的CRIP，当昆虫暴露于CRIP-杀昆虫蛋白时，增加昆虫的死亡率和/或抑制昆虫的生长；增加所述CRIP-杀昆虫蛋白的表达，例如，在宿主细胞或表达系统中；和/或影响CRIP-杀昆虫蛋白的翻译后加工。
在一些实施方案中，CRIP-杀昆虫蛋白可以是包含两种或更多种CRIP的聚合物。在一些实施方案中，CRIP-杀昆虫蛋白可以是包含两种或更多种CRIP的聚合物，其中CRIP经由接头肽(例如可切割和/或不可切割接头)可操作地连接。
在一些实施方案中，CRIP-杀昆虫蛋白可指与一种或多种蛋白质(诸如稳定化结构域(STA)、内质网信号传导蛋白质(ERSP)、昆虫可切割或昆虫不可切割的接头(L)和/或它们的任何其他组合)可操作地连接的一种或多种CRIP。
在一些实施方案中，CRIP-杀昆虫蛋白可以是非天然存在的蛋白，包括(1)野生型CRIP；和(2)另外的肽、多肽或蛋白质，例如ERSP、接头、STA、UBI或组氨酸标签或相似标记。
在一些实施方案中，CRIP-杀昆虫蛋白可以是非天然存在的蛋白，包括(1)野生型CRIP；和(2)非天然存在的CRIP。
在一些实施方案中，CRIP-杀昆虫蛋白可以是非天然存在的蛋白，包括(1)野生型CRIP；和(2)非天然存在的CRIP；和(3)另外的肽、多肽或蛋白质，例如ERSP、接头、STA、UBI或组氨酸标签或相似标记。
在一些实施方案中，CRIP-杀昆虫蛋白可包括本文所述的CRIP中的任一者。
在一些实施方案中，杀昆虫蛋白可包含本文公开的一种或多种CRIP。在一些实施方案中，杀昆虫蛋白可包含CRIP均聚物，例如两种或更多种为相同CRIP的CRIP单体。在一些实施方案中，杀昆虫蛋白可包含CRIP杂聚物，例如，两种或更多种CRIP单体，其中CRIP单体是不同的。
在一些实施方案中，杀昆虫蛋白可包含融合蛋白质，该融合蛋白质包含由可切割或不可切割接头分离的两个或更多个CRIP，其中每个CRIP的氨基酸序列可相同或不同。
在一些实施方案中，杀昆虫蛋白可包含融合蛋白质，该融合蛋白质包含由可切割或不可切割接头分离的两个或更多个CRIP，其中每个CRIP的氨基酸序列可相同或不同，其中该接头在昆虫的肠道或血淋巴内是可切割的。
在一些实施方案中，杀昆虫蛋白可包含融合蛋白质，该融合蛋白质包含由可切割或不可切割接头分离的两个或更多个CRIP，其中每个CRIP的氨基酸序列可相同或不同，其中该接头在哺乳动物的肠道内是可切割的。
用于产生可切割和不可切割接头的示例性方法可见于美国专利申请号15/727,277和PCT申请号PCT/US2013/030042，这些申请的公开内容全文以引用方式并入本文。
CRIP或肽-IA的生产方法
生产蛋白质的方法是本领域熟知的，并且存在多种技术可用。例如，在一些实施方案中，可使用重组方法或化学合成来生产蛋白质。本公开提供了用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白和其他肽杀昆虫试剂(肽-IA)的方法。这些方法将在下文详细描述。
在一些实施方案中，本发明的CRIP可使用任何已知的用于生产蛋白质的方法生产。例如，在一些实施方案中，并且没有限制，CRIP可使用重组表达系统，诸如酵母表达系统或者细菌表达系统来产生。然而，本领域普通技术人员将认识到，可使用其他蛋白质生产方法。
在一些实施方案中，本发明提供了使用重组表达系统生产CRIP的方法。
在一些实施方案中，本发明包括、基本上由、或由生产CRIP的方法组成，所述方法包括：(a)制备包含第一表达盒的载体，该第一表达盒包含、基本上由、或由可操作以编码CRIP的多核苷酸或其互补核苷酸序列组成；(b)将该载体引入宿主细胞，例如细菌或酵母，或昆虫，或植物细胞，或动物细胞；以及(c)在可操作以能够使CRIP表达和分泌到生长培养基中的条件下，在生长培养基中培养酵母菌株。在一些相关的实施方案中，宿主细胞是酵母细胞。
本发明在多种宿主细胞中都是可行的(参见下文的宿主细胞部分)。实际上，本发明的最终用户可在他或她选择的任何宿主细胞中实践其教导。因此，在一些实施方案中，宿主细胞可以是满足最终用户要求的任何宿主细胞；即，在一些实施方案中，CRIP的表达可使用多种宿主细胞并依照本文的教导完成。例如，在一些实施方案中，用户可能期望使用一种特定类型的宿主细胞(例如，酵母细胞或细菌细胞)而不是另一种；给定宿主细胞的优选范围可从可用性到成本。
例如，在一些实施方案中，在一些实施方案中，本发明包括、基本上由、或由生产CRIP的方法组成，所述方法包括：(a)制备包含第一表达盒的载体，该第一表达盒包含、基本上由、或由可操作以编码CRIP的多核苷酸或其互补核苷酸序列组成；(b)将该载体引入宿主细胞，例如细菌或酵母，或昆虫，或植物细胞，或动物细胞；以及(c)在可操作以能够使CRIP表达和分泌到生长培养基中的条件下，在生长培养基中培养酵母菌株。在一些相关的实施方案中，宿主细胞是酵母细胞。
分离和突变野生型CRIP
CRIP或肽-杀昆虫剂(肽-IA)可直接从源获得(例如，从动物分离所述CRIP或肽-IA)。突变型CRIP或肽-IA可通过以下方式产生：在野生型CRIP或肽-IA多核苷酸序列中产生突变；将CRIP或肽-IA多核苷酸序列插入到合适的载体中；以表达编码CRIP或肽-IA的多核苷酸的方式转化宿主生物体；培养宿主生物体以产生所需量的CRIP或肽-IA；然后从宿主生物体中和/或周围纯化CRIP或肽-IA。
在野生型CRIP或肽-IA多核苷酸序列中产生突变可通过本领域普通技术人员熟知的各种方法来实现。诱变方法包括昆克尔方法；盒式诱变；PCR定点诱变；“完美的谋杀”技术(“完美的犯罪”)；利用PCR和一个可循环标记进行直接基因缺失和定点诱变；利用PCR和一个使用长同源区的可循环标记进行直接基因缺失和定点诱变；移位“弹入弹出”方法；和CRISPR-Cas 9。定点诱变的示例性方法可见于Ruvkun和Ausubel，“A general method forsite-directed mutagenesis in prokaryotes”，Nature，1981年1月1日，第289卷第5793期：第85-88页；Wallace等人，“Oligonucleotide directed mutagenesis of the humanbeta-globin gene:a general method for producing specific point mutations incloned DNA”，Nucleic Acids Res.，1981年8月11日，第9卷第15期：第3647-3656页；Dalbadie-McFarland等人，“Oligonucleotide-directed mutagenesis as a general andpowerful method for studies of protein function”，Proc Natl Acad Sci U S A，1982年11月，第79卷第21期：第6409-6413页，Bachman，“Site-directed mutagenesis.”Methods Enzymol.，2013年，第529卷：第241-248页；Carey等人，“PCR-mediated site-directed mutagenesis”，Cold Spring Harb Protoc.，2013年8月1日，2013年，第8卷：第738-742页；以及Cong等人，“Multiplex genome engineering using CRISPR/Cassystems”，Science，2013年2月15日，第339卷第6121期：第819-823页；这些文献的公开内容全文以引用方式并入本文。
野生型CRIP，例如蜘蛛、蝎子和/或其他毒素可从毒液中分离。例如，可使用本领域普通技术人员已知的任何技术从蜘蛛(例如，蜘蛛诸如流浪汉蜘蛛)的毒液腺中分离蜘蛛毒液。例如，在一些实施方案中，可根据美国专利号5,688,764中所述的方法从蜘蛛中分离毒液，该专利的公开内容全文以引用方式并入本文。
可通过使用针对CRIP或肽-IA多核苷酸序列的引物探针筛选基因组文库来获得野生型CRIP或肽-IA多核苷酸序列。另选地，可化学合成野生型CRIP或肽-IA多核苷酸序列和/或突变型CRIP或肽-IA多核苷酸序列。例如，可使用寡核苷酸合成方法产生CRIP或肽-IA多核苷酸序列和/或突变型CRIP或肽-IA多核苷酸序列，诸如亚磷酰胺；三酯、亚磷酸酯或H-膦酸酯方法。参见Engels,J.W.和Uhlmann,E.，1989年，Gene Synthesis(New SyntheticMethods(77))，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.，第28卷：第716-734页，其公开内容全文以引用方式并入本文。
化学合成CRIP或肽-IA多核苷酸
在一些实施方案中，编码CRIP或肽-IA的多核苷酸序列可使用商业上可获得的多核苷酸合成服务(诸如由
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(例如，TurboGENETM、PriorityGENE和FragmentGENE)或
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(例如，定制DNA和RNA寡聚物设计和定制DNA寡聚物)提供的那些)化学合成。用于产生DNA和/或定制化学合成的多核苷酸的示例性方法是本领域熟知的，并且例示性地提供于1995年2月13日提交的美国专利号5,736,135、序列号08/389,615中，这些申请的公开内容全文以引用方式并入本文。还参见Agarwal等人，“Chemical synthesisof polynucleotides”，Angew Chem Int Ed Engl.，1972年6月，第11卷第6期：第451-459页；Ohtsuka等人，“Recent developments in the chemical synthesis ofpolynucleotides”，Nucleic Acids Res.，1982年11月11日，第10卷第21期：第6553-6570页；Sondek和Shortle，“A general strategy for random insertion and substitutionmutagenesis:substoichiometric coupling of trinucleotide phosphoramidites”，Proc Natl Acad Sci U S A，1992年4月15日，第89卷第8期：第3581-3585页；BeaucageS.L.等人，“Advances in the Synthesis of Oligonucleotides by thePhosphoramidite Approach”，Tetrahedron，Elsevier Science Publishers，Amsterdam，NL，第48卷第12期，1992年，第2223-2311页；Agrawal，1993年，“Protocols forOligonucleotides and Analogs:Synthesis and Properties”，Methods in MolecularBiology，第20卷，这些文献的公开内容全文以引用方式并入本文。
化学合成的多核苷酸允许产生DNA序列，该序列基于所述序列内的核苷酸排列(即胞嘧啶[C]、鸟嘌呤[G]、腺嘌呤[A]或胸腺嘧啶[T]分子的排列)被定制以产生所需多肽；从化学合成的DNA多核苷酸转录的mRNA序列可翻译成氨基酸序列，每个氨基酸对应于mRNA序列中的密码子。因此，从mRNA序列翻译的多肽链的氨基酸组成可通过改变决定20种氨基酸中的哪一种将被添加到生长中的多肽中的基础密码子来改变；因此，DNA中的突变诸如插入、取代、缺失和移码可引起氨基酸插入、取代或缺失，这取决于基础密码子。
从化学合成的DNA多核苷酸序列和/或经由诱变改变的野生型DNA多核苷酸序列获得CRIP或肽-IA可通过将DNA序列克隆到合适的载体中来实现。本领域普通技术人员已知多种可用的表达载体、宿主生物体和克隆策略。例如，载体可以是质粒，其可将异源基因和/或表达盒引入酵母细胞中以进行转录和翻译。术语“载体”用于指载体核酸分子，核酸序列可插入其中以引入细胞，在该细胞中该核酸序列可复制。载体可包含“载体元件”，诸如复制起点(ORI)；赋予抗生素抗性以允许选择的基因；多克隆位点；启动子区；用于非细菌转染的选择标记；和引物结合位点。核酸序列可以是“外源的”，这意味着其对于载体所引入的细胞是外源的，或者该序列与细胞中的序列同源，但在宿主细胞核酸中通常没有发现该序列的位置。载体包括质粒、粘粒、病毒(噬菌体、动物病毒和植物病毒)和人工染色体(例如，YAC)。本领域技术人员将很好地通过标准重组技术构建载体，这在Sambrook等人1989年和Ausubel等人1996年的文献中有所描述，这两篇文献均以引入方式并入本文。除了编码CRIP或肽-IA多核苷酸之外，载体可编码靶分子。靶分子是将所需核酸引导至特定组织、细胞或其他位置的分子。
载体和转化
在一些实施方案中，CRIP或肽-IA多核苷酸可使用各种克隆策略以及本领域普通技术人员容易获得的商业克隆试剂盒和材料克隆到载体中。例如，CRIP或肽-IA多核苷酸可使用此类策略如SnapFast、Gateway、TOPO、Gibson、LIC、InFusionHD或Electra策略克隆到载体中。存在许多商业上可获得的载体可用于生产CRIP或肽-IA。例如，CRIP或肽-IA多核苷酸可使用聚合酶链反应(PCR)产生，并与pCRTMII-TOPO载体或PCRTM
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载体(作为
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TA
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试剂盒从Invitrogen商购获得)在室温下混合5分钟；然后可将
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反应物转化到感受态细胞中，随后可基于颜色变化选择这些感受态细胞(参见Janke等人，“Aversatile toolbox for PCR-based tagging of yeast genes:newfluorescent proteins,more markers and promoter substitution cassettes”，Yeast，2004年8月，第21卷第11期：第947-962页；还参见Adams等人，Methods in YeastGenetics.，Cold Spring Harbor，NY，1997年，这些文献的公开内容全文以引用方式并入本文)。
在一些实施方案中，编码CRIP或肽-IA的多核苷酸可克隆到载体中，诸如质粒、粘粒、病毒(噬菌体、动物病毒和植物病毒)和/或人工染色体(例如，YAC)。
在一些实施方案中，编码CRIP或肽-IA的多核苷酸可通过进行以下操作插入到载体(例如，使用大肠杆菌作为宿主的质粒载体)中：使用允许插入感兴趣的DNA片段所必需的限制酶消化约2μg至5μg载体DNA，随后过夜温育以完成完全消化(碱性磷酸酶可用于5’末端去磷酸化以便避免自连接/再环化)；凝胶纯化消化的载体。接下来，经由PCR扩增感兴趣的DNA片段，例如，编码CRIP或肽-IA的多核苷酸，并使用本领域普通技术人员已知的技术(例如，通过使用PCR清除试剂盒)从PCR反应中除去任何过量的酶、引物、未掺入的dNTP、短时失败的PCR产物和/或盐。通过产生包含以下的混合物将感兴趣的DNA片段与载体连接：约20ng载体；约100ng至1,000ng或感兴趣的DNA片段；2μL 10×缓冲液(即，30mM Tris-HCl 4mMMgCl2，26μM NAD，1mM DTT，50μg/ml BSA，pH 8，在25℃下储存)；1μL T4 DNA连接酶；通过加入H2O使总体积达到20μL。然后，可将连接反应混合物在室温下温育2小时，或在16℃下温育过夜。然后，连接反应物(即，约1μL)可转化到感受态细胞中，例如，通过使用电穿孔或化学方法，然后可进行菌落PCR以鉴定含有感兴趣的DNA片段的载体。
在一些实施方案中，编码CRIP或肽-IA的多核苷酸，连同一起组成CRIP或肽-IA表达ORF的其他DNA片段一起，可被设计用于从宿主酵母细胞分泌。设计CRIP或肽-IA表达ORF的例示性方法如下：ORF可以信号肽序列开始，随后编码Kex2切割位点(赖氨酸-精氨酸)的DNA序列，并且接着随后是CRIP或肽-IA多核苷酸转基因，其中在5’末端添加甘氨酸-丝氨酸密码子，并且最后在3’末端添加终止密码子。然后所有这些元件在酵母细胞中作为单个开放阅读框(ORF)表达为融合肽。α-交配因子(αMF)信号序列最常用于促进重组杀昆虫肽通过重组酵母的内源分泌途径的代谢加工，即表达的融合肽通常将进入内质网，其中α-交配因子信号序列通过信号肽酶活性被除去，然后将所得的前杀昆虫肽运输至高尔基体，其中上述赖氨酸-精氨酸二肽被Kex2内切蛋白酶完全去除，之后成熟的多肽(即CRIP或肽-IA)从细胞分泌出来。
在一些实施方案中，重组酵母细胞中的多肽表达水平可通过基于特定宿主酵母物种优化密码子来增强。在给定宿主生物体的内源开放阅读框中观察到的密码子的天然存在频率不一定需要被优化用于高效表达。此外，不同的酵母物种(例如，乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)等)具有不同的用于高效表达的最佳密码子。因此，应该考虑密码子优化用于CRIP或肽-IA表达ORF，包括编码信号序列的序列元件，Kex2切割位点和CRIP或肽-IA，因为它们最初在重组酵母细胞中被翻译成一个融合肽。
在一些实施方案中，密码子优化的CRIP或肽-IA表达ORF可连接到酵母特异性表达载体中用于酵母表达。存在许多表达载体可用于酵母表达，包括附加型载体和整合型载体，并且它们通常是为特定酵母菌株设计的。应该根据将用于肽生产的特定酵母表达系统仔细选择合适的表达载体。在一些实施方案中，可使用整合载体，其整合到转化的酵母细胞的染色体中，并且在细胞分裂和增殖的循环中保持稳定。整合型DNA序列与转化的酵母物种中的靶向基因组DNA基因座同源，并且此类的整合型序列包括pLAC4、25S rDNA、pAOX1和TRP2等。杀昆虫肽转基因的位置可与整合型DNA序列(插入载体)相邻或在整合型DNA序列(置换载体)内。
在一些实施方案中，表达载体可包含用于在大肠杆菌中制备DNA的大肠杆菌元件，例如大肠杆菌复制起点、抗生素选择标记等。在一些实施方案中，载体可包含表达感兴趣的转基因所需的序列元件的阵列，例如转录启动子、终止子、酵母选择标记、与宿主酵母DNA同源的整合型DNA序列等。存在许多合适的酵母启动子可用，包括天然和工程改造启动子，例如，酵母启动子诸如pLAC4、pAOX1、pUPP、pADH1、pTEF、pGal1等，和其他可用于一些实施方案中的启动子。
在一些实施方案中，可使用选择方法诸如乙酰胺原养型选择；博莱霉素抗性选择；遗传霉素抗性选择；诺尔丝菌素抗性选择；尿嘧啶缺乏选择；和/或其他选择方法。例如，在一些实施方案中，构巢曲霉(Aspergillus nidulans)amdS基因可用作选择性标记。使用选择性标记的示例性方法可见于美国专利号6,548,285(1997年4月3日提交)；6,165,715(1998年6月22日提交)；6,110,707(1997年1月17日提交)，这些专利的公开内容全文以引入方式并入本文。
在一些实施方案中，可将编码CRIP或肽-IA的多核苷酸插入到pKLAC1质粒中。pKLAC1可从New England
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Inc.(NEB#E1000)商购获得。pKLAC1被设计为实现重组蛋白(例如CRIP或肽-IA)在酵母乳酸克鲁维酵母中的高水平表达。pKLAC1质粒可单独订购，或作为乳酸克鲁维酵母蛋白质表达试剂盒的一部分订购。pKLAC1质粒可使用SacII或BstXI限制酶线性化，并具有αMF分泌信号下游的MCS。αMF分泌信号指导重组蛋白质进入分泌途径，然后经由Kex2切割，从而产生例如CRIP或肽-IA。Kex2是钙依赖性丝氨酸蛋白酶，其参与激活分泌途径的蛋白原，并且是可商购获的(
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项目号450-45)。
在一些实施方案中，编码CRIP或肽-IA的多核苷酸可插入到pKlac1质粒中，或在选择用与编码CRIP或肽-IA的多核苷酸连接的pKLAC1质粒转化的酵母菌落后亚克隆到pKlac1质粒中。可基于乙酰胺酶(amdS)选择用与编码CRIP或肽-IA的多核苷酸连接的pKLAC1质粒转化的酵母例如乳酸克鲁维酵母，这允许转化的酵母细胞在含有乙酰胺作为其唯一氮源的YCB培养基中生长。一旦鉴定出用与编码CRIP或肽-IA的多核苷酸连接的pKLAC1质粒转化的阳性酵母菌落。
在一些实施方案中，编码CRIP或肽-IA的多核苷酸可插入到其他可商购获得的质粒和/或载体中，这些质粒和/或载体对于本领域技术人员是容易获得的，例如质粒可从Addgene(非盈利质粒库)、
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和PromegaTM获得。
在一些实施方案中，编码TVP的多核苷酸可插入到其他可商购获得的质粒和/或载体中，这些质粒和/或载体对于本领域技术人员是容易获得的，例如质粒可从Addgene(非盈利质粒库)、
Figure BDA0004014715560000871
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和PromegaTM获得。
在一些实施方案中，用一个或多个CRIP表达盒转化的酵母细胞可在酵母培养物中生产CRIP，产量为：每升培养基至少70mg/L、至少80mg/L、至少90mg/L、至少100mg/L、至少110mg/L、至少120mg/L、至少130mg/L、至少140mg/L、至少150mg/L、至少160mg/L、至少170mg/L、至少180mg/L、至少190mg/L、200mg/L、至少500mg/L、至少750mg/L、至少1,000mg/L、至少1,250mg/L、至少1,500mg/L、至少1,750mg/L、至少2,000mg/L、至少2,500mg/L、至少3,000mg/L、至少3,500mg/L、至少4,000mg/L、至少4,500mg/L、至少5,000mg/L、至少5,500mg/L、至少6,000mg/L、至少6,500mg/L、至少7,000mg/L、至少7,500mg/L、至少8,000mg/L、至少8,500mg/L、至少9,000mg/L、至少9,500mg/L、至少10,000mg/L、至少11,000mg/L、至少12,000mg/L、至少12,500mg/L、至少13,000mg/L、至少14,000mg/L、至少15,000mg/L、至少16,000mg/L、至少17,000mg/L、至少17,500mg/L、至少18,000mg/L、至少19,000mg/L、至少20,000mg/L、至少25,000mg/L、至少30,000mg/L、至少40,000mg/L、至少50,000mg/L、至少60,000mg/L、至少70,000mg/L、至少80,000mg/L、至少90,000mg/L或至少100,000mg/L的CRIP。
在一些实施方案中，包含可操作以表达CRIP的多核苷酸的一个或多个表达盒可被插入到载体中，从而导致每升培养基(酵母发酵液上清液)中CRIP的产量在以下范围内：约100mg/L的CRIP至约100,000mg/L的CRIP；约110mg/L至约100,000mg/L；约120mg/L至约100,000mg/L；约130mg/L至约100,000mg/L；约140mg/L至约100,000mg/L；约150mg/L至约100,000mg/L；约160mg/L至约100,000mg/L；约170mg/L至约100,000mg/L；约180mg/L至约100,000mg/L；约190mg/L至约100,000mg/L；约200mg/L至约100,000mg/L；约250mg/L至约100,000mg/L；约500mg/L至约100,000mg/L；约750mg/L至约100,000mg/L；约1000mg/L至约100,000mg/L；约1000mg/L至约100,000mg/L；约1500mg/L至约100,000mg/L；约2000mg/L至约100,000mg/L；约2500mg/L至约100,000mg/L；约3000mg/L至约100,000mg/L；约3500mg/L至约100,000mg/L；约4000mg/L至约100,000mg/L；约4500mg/L至约100,000mg/L；约5000mg/L至约100,000mg/L；约5500mg/L至约100,000mg/L；约6000mg/L至约100,000mg/L；约6500mg/L至约100,000mg/L；约7000mg/L至约100,000mg/L；约7500mg/L至约100,000mg/L；约8000mg/L至约100,000mg/L；约8500mg/L至约100,000mg/L；约9000mg/L至约100,000mg/L；约9500mg/L至约100,000mg/L；约10000mg/L至约100,000mg/L；约10500mg/L至约100,000mg/L；约11000mg/L至约100,000mg/L；约11500mg/L至约100,000mg/L；约12000mg/L至约100,000mg/L；约12500mg/L至约100,000mg/L；约13000mg/L至约100,000mg/L；约13500mg/L至约100,000mg/L；约14000mg/L至约100,000mg/L；约14500mg/L至约100,000mg/L；约15000mg/L至约100,000mg/L；约15500mg/L至约100,000mg/L；约16000mg/L至约100,000mg/L；约16500mg/L至约100,000mg/L；约17000mg/L至约100,000mg/L；约17500mg/L至约100,000mg/L；约18000mg/L至约100,000mg/L；约18500mg/L至约100,000mg/L；约19000mg/L至约100,000mg/L；约19500mg/L至约100,000mg/L；约20000mg/L至约100,000mg/L；约20500mg/L至约100,000mg/L；约21000mg/L至约100,000mg/L；约21500mg/L至约100,000mg/L；约22000mg/L至约100,000mg/L；约22500mg/L至约100,000mg/L；约23000mg/L至约100,000mg/L；约23500mg/L至约100,000mg/L；约24000mg/L至约100,000mg/L；约24500mg/L至约100,000mg/L；约25000mg/L至约100,000mg/L；约25500mg/L至约100,000mg/L；约26000mg/L至约100,000mg/L；约26500mg/L至约100,000mg/L；约27000mg/L至约100,000mg/L；约27500mg/L至约100,000mg/L；约28000mg/L至约100,000mg/L；约28500mg/L至约100,000mg/L；约29000mg/L至约100,000mg/L；约29500mg/L至约100,000mg/L；约30000mg/L至约100,000mg/L；约30500mg/L至约100,000mg/L；约31000mg/L至约100,000mg/L；约31500mg/L至约100,000mg/L；约32000mg/L至约100,000mg/L；约32500mg/L至约100,000mg/L；约33000mg/L至约100,000mg/L；约33500mg/L至约100,000mg/L；约34000mg/L至约100,000mg/L；约34500mg/L至约100,000mg/L；约35000mg/L至约100,000mg/L；约35500mg/L至约100,000mg/L；约36000mg/L至约100,000mg/L；约36500mg/L至约100,000mg/L；约37000mg/L至约100,000mg/L；约37500mg/L至约100,000mg/L；约38000mg/L至约100,000mg/L；约38500mg/L至约100,000mg/L；约39000mg/L至约100,000mg/L；约39500mg/L至约100,000mg/L；约40000mg/L至约100,000mg/L；约40500mg/L至约100,000mg/L；约41000mg/L至约100,000mg/L；约41500mg/L至约100,000mg/L；约42000mg/L至约100,000mg/L；约42500mg/L至约100,000mg/L；约43000mg/L至约100,000mg/L；约43500mg/L至约100,000mg/L；约44000mg/L至约100,000mg/L；约44500mg/L至约100,000mg/L；约45000mg/L至约100,000mg/L；约45500mg/L至约100,000mg/L；约46000mg/L至约100,000mg/L；约46500mg/L至约100,000mg/L；约47000mg/L至约100,000mg/L；约47500mg/L至约100,000mg/L；约48000mg/L至约100,000mg/L；约48500mg/L至约100,000mg/L；约49000mg/L至约100,000mg/L；约49500mg/L至约100,000mg/L；约50000mg/L至约100,000mg/L；约50500mg/L至约100,000mg/L；约51000mg/L至约100,000mg/L；约51500mg/L至约100,000mg/L；约52000mg/L至约100,000mg/L；约52500mg/L至约100,000mg/L；约53000mg/L至约100,000mg/L；约53500mg/L至约100,000mg/L；约54000mg/L至约100,000mg/L；约54500mg/L至约100,000mg/L；约55000mg/L至约100,000mg/L；约55500mg/L至约100,000mg/L；约56000mg/L至约100,000mg/L；约56500mg/L至约100,000mg/L；约57000mg/L至约100,000mg/L；约57500mg/L至约100,000mg/L；约58000mg/L至约100,000mg/L；约58500mg/L至约100,000mg/L；约59000mg/L至约100,000mg/L；约59500mg/L至约100,000mg/L；约60000mg/L至约100,000mg/L；约60500mg/L至约100,000mg/L；约61000mg/L至约100,000mg/L；约61500mg/L至约100,000mg/L；约62000mg/L至约100,000mg/L；约62500mg/L至约100,000mg/L；约63000mg/L至约100,000mg/L；约63500mg/L至约100,000mg/L；约64000mg/L至约100,000mg/L；约64500mg/L至约100,000mg/L；约65000mg/L至约100,000mg/L；约65500mg/L至约100,000mg/L；约66000mg/L至约100,000mg/L；约66500mg/L至约100,000mg/L；约67000mg/L至约100,000mg/L；约67500mg/L至约100,000mg/L；约68000mg/L至约100,000mg/L；约68500mg/L至约100,000mg/L；约69000mg/L至约100,000mg/L；约69500mg/L至约100,000mg/L；约70000mg/L至约100,000mg/L；约70500mg/L至约100,000mg/L；约71000mg/L至约100,000mg/L；约71500mg/L至约100,000mg/L；约72000mg/L至约100,000mg/L；约72500mg/L至约100,000mg/L；约73000mg/L至约100,000mg/L；约73500mg/L至约100,000mg/L；约74000mg/L至约100,000mg/L；约74500mg/L至约100,000mg/L；约75000mg/L至约100,000mg/L；约75500mg/L至约100,000mg/L；约76000mg/L至约100,000mg/L；约76500mg/L至约100,000mg/L；约77000mg/L至约100,000mg/L；约77500mg/L至约100,000mg/L；约78000mg/L至约100,000mg/L；约78500mg/L至约100,000mg/L；约79000mg/L至约100,000mg/L；约79500mg/L至约100,000mg/L；约80000mg/L至约100,000mg/L；约80500mg/L至约100,000mg/L；约81000mg/L至约100,000mg/L；约81500mg/L至约100,000mg/L；约82000mg/L至约100,000mg/L；约82500mg/L至约100,000mg/L；约83000mg/L至约100,000mg/L；约83500mg/L至约100,000mg/L；约84000mg/L至约100,000mg/L；约84500mg/L至约100,000mg/L；约85000mg/L至约100,000mg/L；约85500mg/L至约100,000mg/L；约86000mg/L至约100,000mg/L；约86500mg/L至约100,000mg/L；约87000mg/L至约100,000mg/L；约87500mg/L至约100,000mg/L；约88000mg/L至约100,000mg/L；约88500mg/L至约100,000mg/L；约89000mg/L至约100,000mg/L；约89500mg/L至约100,000mg/L；约90000mg/L至约100,000mg/L；约90500mg/L至约100,000mg/L；约91000mg/L至约100,000mg/L；约91500mg/L至约100,000mg/L；约92000mg/L至约100,000mg/L；约92500mg/L至约100,000mg/L；约93000mg/L至约100,000mg/L；约93500mg/L至约100,000mg/L；约94000mg/L到约100,000mg/L；约94500mg/L至约100,000mg/L；约95000mg/L至约100,000mg/L；约95500mg/L至约100,000mg/L；约96000mg/L至约100,000mg/L；约96500mg/L至约100,000mg/L；约97000mg/L至约100,000mg/L；约97500mg/L至约100,000mg/L；约98000mg/L至约100,000mg/L；约98500mg/L至约100,000mg/L；约99000mg/L至约100,000mg/L；或约99500mg/L至约100,000mg/L。
在一些实施方案中，包含可操作以表达CRIP的多核苷酸的一个或多个表达盒可被插入到载体中，从而导致每升培养基(酵母发酵液上清液)中CRIP的产量在以下范围内：约100mg/L至约100,000mg/L的CRIP；约100mg/L至约99500mg/L；约100mg/L至约99000mg/L；约100mg/L至约98500mg/L；约100mg/L至约98000mg/L；约100mg/L至约97500mg/L；约100mg/L至约97000mg/L；约100mg/L至约96500mg/L；约100mg/L至约96000mg/L；约100mg/L至约95500mg/L；约100mg/L至约95000mg/L；约100mg/L至约94500mg/L；约100mg/L至约94000mg/L；约100mg/L至约93500mg/L；约100mg/L至约93000mg/L；约100mg/L至约92500mg/L；约100mg/L至约92000mg/L；约100mg/L至约91500mg/L；约100mg/L至约91000mg/L；约100mg/L至约90500mg/L；约100mg/L至约90000mg/L；约100mg/L至约89500mg/L；约100mg/L至约89000mg/L；约100mg/L至约88500mg/L；约100mg/L至约88000mg/L；约100mg/L至约87500mg/L；约100mg/L至约87000mg/L；约100mg/L至约86500mg/L；约100mg/L至约86000mg/L；约100mg/L至约85500mg/L；约100mg/L至约85000mg/L；约100mg/L至约84500mg/L；约100mg/L至约84000mg/L；约100mg/L至约83500mg/L；约100mg/L至约83000mg/L；约100mg/L至约82500mg/L；约100mg/L至约82000mg/L；约100mg/L至约81500mg/L；约100mg/L至约81000mg/L；约100mg/L至约80500mg/L；约100mg/L至约80000mg/L；约100mg/L至约79500mg/L；约100mg/L至约79000mg/L；约100mg/L至约78500mg/L；约100mg/L至约78000mg/L；约100mg/L至约77500mg/L；约100mg/L至约77000mg/L；约100mg/L至约76500mg/L；约100mg/L至约76000mg/L；约100mg/L至约75500mg/L；约100mg/L至约75000mg/L；约100mg/L至约74500mg/L；约100mg/L至约74000mg/L；约100mg/L至约73500mg/L；约100mg/L至约73000mg/L；约100mg/L至约72500mg/L；约100mg/L至约72000mg/L；约100mg/L至约71500mg/L；约100mg/L至约71000mg/L；约100mg/L至约70500mg/L；约100mg/L至约70000mg/L；约100mg/L至约69500mg/L；约100mg/L至约69000mg/L；约100mg/L至约68500mg/L；约100mg/L至约68000mg/L；约100mg/L至约67500mg/L；约100mg/L至约67000mg/L；约100mg/L至约66500mg/L；约100mg/L至约66000mg/L；约100mg/L至约65500mg/L；约100mg/L至约65000mg/L；约100mg/L至约64500mg/L；约100mg/L至约64000mg/L；约100mg/L至约63500mg/L；约100mg/L至约63000mg/L；约100mg/L至约62500mg/L；约100mg/L至约62000mg/L；约100mg/L至约61500mg/L；约100mg/L至约61000mg/L；约100mg/L至约60500mg/L；约100mg/L至约60000mg/L；约100mg/L至约59500mg/L；约100mg/L至约59000mg/L；约100mg/L至约58500mg/L；约100mg/L至约58000mg/L；约100mg/L至约57500mg/L；约100mg/L至约57000mg/L；约100mg/L至约56500mg/L；约100mg/L至约56000mg/L；约100mg/L至约55500mg/L；约100mg/L至约55000mg/L；约100mg/L至约54500mg/L；约100mg/L至约54000mg/L；约100mg/L至约53500mg/L；约100mg/L至约53000mg/L；约100mg/L至约52500mg/L；约100mg/L至约52000mg/L；约100mg/L至约51500mg/L；约100mg/L至约51000mg/L；约100mg/L至约50500mg/L；约100mg/L至约50000mg/L；约100mg/L至约49500mg/L；约100mg/L至约49000mg/L；约100mg/L至约48500mg/L；约100mg/L至约48000mg/L；约100mg/L至约47500mg/L；约100mg/L至约47000mg/L；约100mg/L至约46500mg/L；约100mg/L至约46000mg/L；约100mg/L至约45500mg/L；约100mg/L至约45000mg/L；约100mg/L至约44500mg/L；约100mg/L至约44000mg/L；约100mg/L至约43500mg/L；约100mg/L至约43000mg/L；约100mg/L至约42500mg/L；约100mg/L至约42000mg/L；约100mg/L至约41500mg/L；约100mg/L至约41000mg/L；约100mg/L至约40500mg/L；约100mg/L至约40000mg/L；约100mg/L至约39500mg/L；约100mg/L至约39000mg/L；约100mg/L至约38500mg/L；约100mg/L至约38000mg/L；约100mg/L至约37500mg/L；约100mg/L至约37000mg/L；约100mg/L至约36500mg/L；约100mg/L至约36000mg/L；约100mg/L至约35500mg/L；约100mg/L至约35000mg/L；约100mg/L至约34500mg/L；约100mg/L至约34000mg/L；约100mg/L至约33500mg/L；约100mg/L至约33000mg/L；约100mg/L至约32500mg/L；约100mg/L至约32000mg/L；约100mg/L至约31500mg/L；约100mg/L至约31000mg/L；约100mg/L至约30500mg/L；约100mg/L至约30000mg/L；约100mg/L至约29500mg/L；约100mg/L至约29000mg/L；约100mg/L至约28500mg/L；约100mg/L至约28000mg/L；约100mg/L至约27500mg/L；约100mg/L至约27000mg/L；约100mg/L至约26500mg/L；约100mg/L至约26000mg/L；约100mg/L至约25500mg/L；约100mg/L至约25000mg/L；约100mg/L至约24500mg/L；约100mg/L至约24000mg/L；约100mg/L至约23500mg/L；约100mg/L至约23000mg/L；约100mg/L至约22500mg/L；约100mg/L至约22000mg/L；约100mg/L至约21500mg/L；约100mg/L至约21000mg/L；约100mg/L至约20500mg/L；约100mg/L至约20000mg/L；约100mg/L至约19500mg/L；约100mg/L至约19000mg/L；约100mg/L至约18500mg/L；约100mg/L至约18000mg/L；约100mg/L至约17500mg/L；约100mg/L至约17000mg/L；约100mg/L至约16500mg/L；约100mg/L至约16000mg/L；约100mg/L至约15500mg/L；约100mg/L至约15000mg/L；约100mg/L至约14500mg/L；约100mg/L至约14000mg/L；约100mg/L至约13500mg/L；约100mg/L至约13000mg/L；约100mg/L至约12500mg/L；约100mg/L至约12000mg/L；约100mg/L至约11500mg/L；约100mg/L至约11000mg/L；约100mg/L至约10500mg/L；约100mg/L至约10000mg/L；约100mg/L至约9500mg/L；约100mg/L至约9000mg/L；约100mg/L至约8500mg/L；约100mg/L至约8000mg/L；约100mg/L至约7500mg/L；约100mg/L至约7000mg/L；约100mg/L至约6500mg/L；约100mg/L至约6000mg/L；约100mg/L至约5500mg/L；约100mg/L至约5000mg/L；约100mg/L至约4500mg/L；约100mg/L至约4000mg/L；约100mg/L至约3500mg/L；约100mg/L至约3000mg/L；约100mg/L至约2500mg/L；约100mg/L至约2000mg/L；约100mg/L至约1500mg/L；约100mg/L至约1000mg/L；约100mg/L至约1000mg/L；约100mg/L至约750mg/L；约100mg/L至约500mg/L；约100mg/L至约250mg/L；约100mg/L至约100mg/L；或约100mg/L至约110mg/L。
除了编码CRIP或肽-IA的DNA多核苷酸序列之外，可将称为调节元件的另外的DNA片段克隆到允许外源DNA或转基因表达增强的载体中；此类附加DNA片段的示例包括(1)启动子、终止子和/或增强子元件；(2)合适的mRNA稳定化聚腺苷酸化信号；(3)内部核糖体进入位点(IRES)；(4)内含子；和(5)转录后调节元件。感兴趣的DNA片段与前述顺式作用元件中的任一者的组合称为“表达盒”。
单个表达盒可包含上述调节元件中的一者或多者，和可操作以表达CRIP或肽-IA的多核苷酸。例如，在一些实施方案中，CRIP或肽-IA表达盒可包含可操作以表达CRIP或肽-IA的多核苷酸，和α-MF信号；Kex2位点；LAC4终止子；ADN1启动子；和乙酰胺酶(amdS)选择标记—在5'末端和3'末端侧接LAC4启动子。
在一些实施方案中，可存在许多克隆到载体中的表达盒。例如，在一些实施方案中，可存在第一表达盒，该第一表达盒包含可操作以表达CRIP或肽-IA的多核苷酸。在另选的实施方案中，存在两个可操作以编码CRIP或肽-IA的(即，双表达盒)。在其他实施方案中，存在三个可操作以编码CRIP或肽-IA的表达盒(即，三表达盒)。
在一些实施方案中，双表达盒可通过将第二CRIP或肽-IA表达盒亚克隆到含有第一CRIP或肽-IA表达盒的载体中来产生。
在一些实施方案中，可通过将第三CRIP或肽-IA表达盒亚克隆到含有第一和第二CRIP或肽-IA表达盒的载体中来产生三表达盒。
在一些实施方案中，用一个或多个CRIP或肽-IA表达盒转化的酵母细胞可在酵母培养物中生产CRIP或肽-IA，产量为：每升酵母培养基至少70mg/L、至少80mg/L、至少90mg/L、至少100mg/L、至少110mg/L、至少120mg/L、至少130mg/L、至少140mg/L、至少150mg/L、至少160mg/L、至少170mg/L、至少180mg/L、至少190mg/L、200mg/L、至少500mg/L、至少750mg/L、至少1,000mg/L、至少1,250mg/L、至少1,500mg/L、至少1,750mg/L、至少2,000mg/L、至少2,500mg/L、至少3,000mg/L、至少3,500mg/L、至少4,000mg/L、至少4,500mg/L、至少5,000mg/L、至少5,500mg/L、至少6,000mg/L、至少6,500mg/L、至少7,000mg/L、至少7,500mg/L、至少8,000mg/L、至少8,500mg/L、至少9,000mg/L、至少9,500mg/L、至少10,000mg/L、至少11,000mg/L、至少12,000mg/L、至少12,500mg/L、至少13,000mg/L、至少14,000mg/L、至少15,000mg/L、至少16,000mg/L、至少17,000mg/L、至少17,500mg/L、至少18,000mg/L、至少19,000mg/L、至少20,000mg/L、至少25,000mg/L、至少30,000mg/L、至少40,000mg/L、至少50,000mg/L、至少60,000mg/L、至少70,000mg/L、至少80,000mg/L、至少90,000mg/L或至少100,000mg/L的CRIP或肽-IA。
在一些实施方案中，包含可操作以表达CRIP或肽-IA的多核苷酸的一个或多个表达盒可被插入到载体(例如pKlac1质粒)中，从而导致产量为约100mg/L CRIP或肽-IA(酵母发酵液上清液)。例如，在一些实施方案中，包含可操作以表达CRIP或肽-IA的多核苷酸的两个表达盒可被插入到载体(例如pKS482质粒)中，从而导致产量为约2g/L CRIP或肽-IA(酵母发酵液上清液)。另选地，在一些实施方案中，包含可操作以表达CRIP或肽-IA的多核苷酸的三个表达盒可被插入到载体(例如pKlac1T质粒)中。
在一些实施方案中，可将多个CRIP或肽-IA表达盒转染到酵母中，以便能够将一个或多个拷贝的优化CRIP或肽-IA转基因整合到乳酸克鲁维酵母基因组中。将多个CRIP或肽-IA表达盒引入到乳酸克鲁维酵母基因组中的示例性方法如下：合成CRIP或肽-IA表达盒DNA序列，其包含完整的LAC4启动子元件、密码子优化的CRIP或肽-IA表达ORF元件和pLAC4终止子元件；将完整的表达盒连接到pKS477的pLAC4终止子下游的SalI和KpnI限制位点之间的pKlac1载体中，从而产生双转基因CRIP或肽-IA表达载体pKS482；然后使用SacII限制性内切核酸酶将双转基因载体pKS482线性化，并通过电穿孔转化到乳酸克鲁维酵母YCT306菌株中。然后使所得酵母菌落在补充有5mM乙酰胺的YCB琼脂板上生长，只有表达乙酰胺酶的细胞才能有效地使用乙酰胺作为氮的代谢源。为了评价酵母菌落，可从pKS482酵母板上挑取约100个至400个菌落。来自菌落的接种物各自在2.2mL的加入了2％糖醇作为碳源的确定的乳酸克鲁维酵母培养基中培养。培养物在23.5℃下温育，以280rpm振荡六天，此时培养物中的细胞密度将达到其最大水平，如600nm(OD600)处的吸光度所示。然后通过以4,000rpm离心10分钟从培养物中除去细胞，并将所得上清液(条件培养基)通过0.2μM膜过滤用于HPLC产量分析。
化学合成肽
肽合成或化学合成或肽和/或多肽可用于产生CRIP或肽-IA：这些方法可由本领域普通技术人员和/或通过使用商业供应商(例如，
Figure BDA0004014715560000961
Piscataway、New Jersey)进行。例如，在一些实施方案中，化学肽合成可使用液相肽合成(LPPS)或固相肽合成(SPPS)来实现。
在一些实施方案中，肽合成通常可通过使用一种策略来实现，其中将随后的氨基酸的羧基偶联到在前氨基酸的N-末端产生新生多肽链—这过程与自然界中发生的多肽合成类型相反。
肽去保护是多肽化学合成中重要的第一步。肽去保护是其中通过使用化学品封闭氨基酸的反应性基团以便防止所述氨基酸的官能团参与不希望的或非特异性反应或副反应的过程；换句话讲，氨基酸被“保护”以免参与这些不希望的反应。
在合成肽链之前，必须将氨基酸“去保护”以允许链形成(即，氨基酸结合)。用于保护N-末端的化学品包括9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)和叔丁氧基羰基(Boc)，它们中的每一者可分别经由使用弱碱(例如，哌啶)和中强酸(例如，三氟乙酸(TFA))除去。
所需的C-末端保护剂取决于所用的化学肽合成策略的类型：例如，LPPS需要保护C-末端氨基酸，而SPPS不需要，因为固体载体充当保护基团。侧链氨基酸需要使用几种不同的保护基团，这些保护基团基于各个肽序列和N-末端保护策略而变化；然而，用于侧链氨基酸的保护基团通常基于叔丁基(tBu)或苄基(Bzl)保护基团。
氨基酸偶联是肽合成程序中的下一步骤。为了实现氨基酸偶联，必须活化引入的氨基酸的C-末端羧酸：这可使用碳二亚胺诸如二异丙基碳二亚胺(DIC)或二环己基碳二亚胺(DCC)来完成，这些碳二亚胺与引入的氨基酸的羧基反应形成O-酰基异脲中间体。随后经由增长的肽链N末端上的伯氨基的亲核攻击置换O-酰基异脲中间体。由碳二亚胺产生的反应性中间体可导致氨基酸的外消旋化。为了避免氨基酸的外消旋化，加入试剂诸如1-羟基苯并三唑(HOBt)以便与O-酰基异脲中间体反应。可使用的其他偶联剂包括2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)和苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(BOP)，以及另外的活化碱。最后，在氨基酸去保护和偶联后，
在合成过程结束时，必须从多肽中除去保护基团—通常通过酸解发生的过程。确定肽切割所需的试剂取决于所使用保护方案和总体合成方法。例如，在一些实施方案中，溴化氢(HBr)；氟化氢(HF)；或三氟甲磺酸(TFMSA)可用于切割Bzl和Boc基团。另选地，在其他实施方案中，较弱的酸诸如TFA可实现tBut和Fmoc基团的酸解。最后，可基于肽的生理化学特性(例如，电荷、大小、疏水性等)纯化肽。可用于纯化肽的技术包括纯化技术，包括反相色谱法(RPC)；大小排阻色谱法；分配色谱法；高效液相色谱法(HPLC)；和离子交换色谱法(IEC)。
肽合成的示例性方法可见于：Anderson G.W.和McGregor A.C.，1957年，“T-butyloxycarbonylamino acids and their use in peptide synthesis”，Journal ofthe American Chemical Society，第79卷：第6180-6183页；Carpino L.A.，1957年，“Oxidative reactions of hydrazines.Iv.Elimination of nitrogen from 1,1-disubstituted-2-arenesulfonhydrazides1-4”，Journal of the American ChemicalSociety，第79卷：第4427-4431页；McKay F.C.和Albertson N.F.，1957年，“New amine-masking groups for peptide synthesis”，Journal of the American ChemicalSociety，第79卷：第4686-4690页；Merrifield R.B.，1963年，“Solid phase peptidesynthesis.I.The synthesis of a tetrapeptide”，Journal of the American ChemicalSociety，第85卷：第2149-2154页；Carpino L.A.和Han G.Y.，1972年，“9-fluorenylmethoxycarbonyl amino-protecting group”，The Journal of OrganicChemistry，第37卷：第3404-3409页；以及A Lloyd-Williams P.等人，1997年，“Chemicalapproaches to the synthesis of peptides and proteins”，Boca Raton:CRC Press，第278页；美国专利号：3,714,140(1971年3月16日提交)；4,411,994(1978年6月8日提交)；7,785,832(2006年1月20日提交)；8,314,208(2006年2月10日提交)；10,442,834(2015年10月2日提交)；以及美国专利申请2005/0165215(2004年12月23日提交)，这些文献和专利的公开内容全文以引用方式并入本文。
产生多核苷酸、肽和CRIP的其他示例性方法可见于美国专利申请公开号20150148288A1，其公开内容全文以引用方式并入本文。
本文所述的方法中的任一者可用于产生本文所述的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA中的任一者。
细胞培养和转化技术
术语“转化”和“转染”两者均描述了将外源和/或异源DNA或RNA引入宿主生物体的过程。通常，本领域普通技术人员有时保留术语“转化”来描述将外源和/或异源DNA或RNA引入细菌细胞的过程；并保留术语“转染”用于描述将外源和/或异源DNA或RNA引入真核细胞的过程。然而，如本文所用，术语“转化”和“转染”同义使用，无论方法是否描述将外源和/或异源DNA或RNA引入原核生物(例如，细菌)或真核生物(例如，酵母、植物或动物)中。
在一些实施方案中，宿主细胞可使用以下方法进行转化：电穿孔；细胞挤压；显微镜下注射；刺穿；使用液体静压力；声穿孔；光学转染；连续输液；脂质转染；通过使用病毒如腺病毒、腺相关病毒、慢病毒、单纯疱疹病毒和逆转录病毒；化学磷酸盐法；经由DEAE-葡聚糖或聚乙烯亚胺(PEI)的内吞作用；原生质体融合；水动力递送；磁转染；核仁转染；和/或其他。关于转染和/或转化技术的示例性方法可见于：Makrides，2003年，“Gene Transfer andExpression in Mammalian Cells”，Elvesier；Wong,TK和Neumann,E.，“Electric fieldmediated gene transfer”，Biochem.Biophys.Res.Commun.，第107卷：第584-587页，1982年；Potter和Heller，“Transfection by Electroporation”，Curr Protoc Mol Biol.，2003年5月，章节：第9.3单元；Kim和Eberwine，“Mammalian cell transfection:thepresent and the future”，Anal Bioanal Chem.，2010年8月，第397卷第8期：第3173-3178页，这些文献中的每一者的公开内容全文以引用方式并入本文。
电穿孔是一种其中将电流施加到细胞上使细胞膜变得可渗透的技术；这继而又允许外源DNA被引入细胞。电穿孔是本领域普通技术人员熟知的，并且实现电穿孔所需的工具和装置是可商购获得的(例如，Gene Pulser XcellTM电穿孔系统，
Figure BDA0004014715560000991
用于电穿孔的
Figure BDA0004014715560000992
转染系统，Thermo-Fisher Scientific；和其他工具和/或装置)。电穿孔的示例性方法示于：Potter和Heller，“Transfection by Electroporation”，Curr Protoc MolBiol.，2003年5月，章节：第9.3单元；Saito，2015年，“Electroporation Methods inNeuroscience”，Springer press；Pakhomov等人，2017年，“Advanced ElectroporationTechniques in Biology and Medicine”，Taylor&Francis；这些文献的公开内容全文以引用方式并入本文。
在一些实施方案中，电穿孔可用于将含有编码CRIP或肽-IA的多核苷酸的载体引入酵母，例如将CRIP或肽-IA克隆到pKlac1质粒中，并经由电穿孔转化到乳酸克鲁维酵母细胞中，可通过用合适的酵母物种例如乳酸克鲁维酵母、马克斯克鲁维酵母(Kluyveromycesmarxianus)、酿酒酵母、巴斯德毕赤酵母等接种约10mL至200mL酵母提取物蛋白胨右旋糖(YEPD)，并在30℃下在振荡器上温育直到酵母培养物的早期指数期(例如约0.6至2×108个细胞/mL)来实现；在无菌离心管中收获酵母，并在4℃下以3000rpm离心5分钟(注意：在该程序期间保持细胞冷冻)，用40mL冰冷的无菌去离子水洗涤细胞，并以23,000rpm粒化细胞5分钟；重复洗涤步骤，并将细胞重悬于20mL的1M可发酵糖中，例如半乳糖、麦芽糖、拉托三糖(latotriose)、蔗糖、果糖或葡萄糖和/或糖醇，例如赤藓醇、氢化淀粉水解产物、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇、甘露醇和木糖醇，随后以3,000rpm旋转5分钟；用适当体积的冰冷的1M可发酵糖，例如半乳糖、麦芽糖、拉托三糖、蔗糖、果糖或葡萄糖和/或糖醇，例如赤藓醇、氢化淀粉水解产物、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇、甘露醇和木糖醇，重悬细胞至3×109个细胞/mL的最终细胞密度；在预冷的0.2cm电穿孔比色皿中，将40μl酵母悬浮液与含有编码CRIP或肽-IA的线性多核苷酸(约1μg)的约1μl至4μl载体混合(注意：确保样品与铝比色皿的两侧接触)；提供2000V的单脉冲，RC回路的最佳时间常数为5ms，然后将细胞在0.5mLYED和0.5mL 1M可发酵糖中回收，例如半乳糖、麦芽糖、拉托三糖、蔗糖、果糖或葡萄糖和/或糖醇，例如赤藓醇、氢化淀粉水解产物、异麦芽糖、乳糖醇、麦芽糖醇、甘露醇和木糖醇混合物，然后涂布到选择性板上。
在一些实施方案中，电穿孔可用于通过如下步骤将含有编码CRIP或肽-IA的多核苷酸的载体引入植物原生质体中：在原生质体溶液(例如，大约8mL的10mM 2-[N-吗啉代]乙磺酸(MES)，pH 5.5；0.01％(w/v)果胶酶(pectylase)；1％(w/v)离析酶；40mM CaCl2；和0.4M甘露醇)中温育无菌植物材料，并在30℃下将混合物加入到旋转振荡器中约3小时至6小时以生产原生质体；经由80μm目尼龙筛过滤除去碎片；用约4ml植物电穿孔缓冲液(例如，5mM CaCl2；0.4M甘露醇；和PBS)冲洗该筛；将原生质体合并在无菌的15mL锥形离心管中，然后以约300×g离心约5分钟；离心后，弃去上清液，并用5mL植物电穿孔缓冲液洗涤；将原生质体以每mL液体约1.5×106至2×106个原生质体重悬于植物电穿孔缓冲液中；将约0.5mL原生质体悬浮液转移到置于冰上的一个或多个电穿孔比色皿中，并加入载体(注意：为了稳定转化，应使用上述限制性方法中的任一者将载体线性化，并可使用约1μg至10μg载体；为了瞬时表达，可将载体保持在其超螺旋状态，并可使用约10μg至40μg载体)；将载体与原生质体悬浮液混合；将比色皿放入电穿孔设备中，并在约1kV至2kV(最初可使用3μF至25μF电容，同时优化反应)下电击一次或多次；将比色皿放回冰中；在完全培养基中将转化细胞稀释20倍；并在约48小时后收获原生质体。
宿主细胞
本发明的方法、组合物、CRIP和肽-IA可在任何细胞类型(例如真核或原核细胞)中实施。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞是原核生物。例如，在一些实施方案中，宿主细胞可以是古细菌或真细菌，诸如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体。有用的细菌的示例包括埃希氏菌属(Escherichia)(例如，大肠杆菌)、芽孢杆菌属(Bacilli)(例如，枯草杆菌)、肠杆菌属(Enterobacteria)、假单胞菌属(Pseudomonas)(例如，绿脓杆菌(P.aeruginosa))、鼠伤寒沙门氏菌属(Salmonellatyphimurium)、粘质沙雷菌属(Serratia marcescans)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、变形杆菌属(Proteus)、志贺氏菌属(Shigella)、根瘤菌属(Rhizobia)、透明颤菌(Vitreoscilla)或副球菌属(Paracoccus)。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是单细胞的细胞。例如，在一些实施方案中，宿主细胞可以是细菌细胞，诸如革兰氏阳性细菌。
在一些实施方案中，宿主细胞可以是选自以下属的细菌：CandidatusChloracidobacterium、节杆菌(Arthrobacter)、棒状杆菌(Corynebacterium)、弗兰克氏菌(Frankia)、微球菌(Micrococcus)、分枝杆菌(Mycobacterium)、丙酸杆菌(Propionibacterium)、链霉菌(Streptomyces)、产水菌(Aquifex)、拟杆菌(Bacteroides)、卟啉菌(Porphyromonas)、拟杆菌(Bacteroides)、卟啉菌(Porphyromonas)、黄杆菌(Flavobacterium)、衣原体(Chlamydia)、突柄杆菌(Prosthecobacter)、疣微菌(Verrucomicrobium)、橙色绿屈挠菌(Chloroflexus)、色球藻(Chroococcus)、平裂藻(Merismopedia)、聚球藻(Synechococcus)、项圈藻(Anabaena)、念珠藻(Nostoc)、螺旋藻(Spirulina)、束毛藻(Trichodesmium)、宽球藻(Pleurocapsa)、原绿球藻(Prochlorococcus)、原绿藻(Prochloron)、芽孢杆菌(Bacillus)、李斯特菌(Listeria)、葡萄球菌(Staphylococcus)、梭菌(Clostridium)、脱卤素杆菌(Dehalobacter)、Epulopiscium、瘤胃球菌(Ruminococcus)、肠球菌(Enterococcus)、乳杆菌(Lactobacillus)、链球菌(Streptococcus)、丹毒丝菌(Erysipelothrix)、支原体(Mycoplasma)、钩端螺旋菌(Leptospirillum)、硝化螺旋菌(Nitrospira)、热脱硫杆菌(Thermodesulfobacterium)、出芽菌(Gemmata)、小梨形菌(Pirellula)、浮霉状菌(Planctomyces)、柄细菌(Caulobacter)、农杆菌(Agrobacterium)、大豆根瘤菌(Bradyrhizobium)、布鲁菌(Brucella)、甲基杆菌(Methylobacterium)、突柄微菌(Prosthecomicrobium)、根瘤菌(Rhizobium)、红假单胞菌(Rhodopseudomonas)、中华根瘤菌(Sinorhizobium)、红细菌(Rhodobacter)、玫瑰杆菌(Roseobacter)、醋酸菌(Acetobacter)、红螺菌(Rhodospirillum)、立克次氏体(Rickettsia)、康氏立克次体(Rickettsia conorii)、线粒体(Mitochondria)、沃尔巴克氏菌(Wolbachia)、赤杆菌(Erythrobacter)、赤微杆菌(Erythromicrobium)、鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas)、产碱杆菌(Alcaligenes)、伯克霍尔德菌(Burkholderia)、纤毛菌(Leptothrix)、球衣菌(Sphaerotilus)、硫化细菌(Thiobacillus)、奈瑟菌(Neisseria)、亚硝酸菌(Nitrosomonas)、披毛菌(Gallionella)、螺菌(Spirillum)、固氮弓菌(Azoarcus)、气单胞菌(Aeromonas)、Succinomonas、琥珀酸弧菌(Succinivibrio)、瘤胃杆菌(Ruminobacter)、亚硝化球菌(Nitrosococcus)、荚硫菌(Thiocapsa)、肠杆菌(Enterobacter)、埃希氏菌(Escherichia)、克雷伯氏菌(Klebsiella)、沙门氏菌(Salmonella)、志贺氏菌(Shigella)、威格尔斯沃思氏菌(Wigglesworthia)、耶尔森菌(Yersinia)、柯克斯体(Coxiella)、军团菌(Legionella)、盐单胞菌(Halomonas)、巴斯德菌(Pasteurella)、不动杆菌(Acinetobacter)、固氮菌(Azotobacter)、假单胞菌(Pseudomonas)、嗜冷杆菌(Psychrobacter)、贝氏硫细菌(Beggiatoa)、华丽硫珠菌(Thiomargarita)、弧菌(Vibrio)、黄单胞菌(Xanthomonas)、蛭弧菌(Bdellovibrio)、弯曲杆菌(Campylobacter)、螺杆菌(Helicobacter)、粘球菌(Myxococcus)、脱硫叠球菌(Desulfosarcina)、地杆菌(Geobacter)、脱硫单胞菌(Desulfuromonas)、包柔氏螺旋体(Borrelia)、细螺旋体(Leptospira)、密螺旋体(Treponema)、石袍菌(Petrotoga)、栖热袍菌(Thermotoga)、异常球菌(Deinococcus)或栖热菌(Thermus)。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可选自以下细菌物种中的一者：嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短杆菌(Bacillus brevis)、环状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)、变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)、鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)、天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)、白色链霉菌(Streptomyces albicans)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)、Streptomyces plicatosporus、艾伯特埃希氏菌(Escherichiaalbertii)、布拉特埃希氏菌(Escherichia blattae)、大肠杆菌(Escherichia coli)、费格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)、赫氏埃希氏菌(Escherichia hermannii)、塞内加尔埃希氏菌(Escherichia senegalensis)、伤口埃希氏菌(Escherichia vulneris)、冷杉假单胞菌(Pseudomonas abietaniphila)、伞菌假单胞菌(Pseudomonas agarici)、Pseudomonas agarolyticus、嗜碱假单胞(Pseudomonas alcaliphila)、Pseudomonasalginovora、Pseudomonas andersonii、Pseudomonas antarctica、铁角蕨假单胞菌(Pseudomonas asplenii)、Pseudomonas azelaica、Pseudomonas batumici、波扎诺假单胞菌(Pseudomonas borealis)、油菜假单胞菌(Pseudomonas brassicacearum)、裂解亚氯酸假单胞菌(Pseudomonas chloritidismutans)、Pseudomonas cremoricolorata、Pseudomonas diterpeniphila、Pseudomonas filiscindens、杨树根际解磷细菌(Pseudomonas frederiksbergensis)、Pseudomonas gingeri、Pseudomonas graminis、溶磷菌(Pseudomonas grimontii)、脱氮假单孢杆菌(Pseudomonas halodenitrificans)、Pseudomonas halophila、栖木假单胞菌(Pseudomonas hibiscicola)、Pseudomonashydrogenovora、印度假单胞菌(Pseudomonas indica)、日本假单胞菌(Pseudomonasjaponica)、杰氏假单胞菌(Pseudomonas jessenii)、Pseudomonas kilonensis、韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis)、亚麻假单胞菌(Pseudomonas lini)、浅黄色假单胞菌(Pseudomonas lurida)、Pseudomonas lutea、划界假单胞菌(Pseudomonas marginata)、Pseudomonas meridiana、Pseudomonas mesoacidophila、海绵假单胞菌(Pseudomonaspachastrellae)、帕勒隆尼氏假单胞菌(Pseudomonas palleroniana)、副黄假单胞菌(Pseudomonas parafulva)、Pseudomonas pavonanceae、Pseudomonas proteolyica、嗜冷假单胞菌(Pseudomonas psychrophila)、耐冷假单胞菌(Pseudomonas psychrotolerans)、Pseudomonas pudica、Pseudomonas rathonis、Pseudomonas reactans、Pseudomonasrhizosphaerae、Pseudomonas salmononii、高温假单胞菌(Pseudomonas thermaerum)、Pseudomonas thermocarboxydovorans、Pseudomonas thermotolerans、赛维瓦尔假单胞菌(Pseudomonas thivervalensis)、阴城假单胞菌(Pseudomonas umsongensis)、温哥华假单胞菌(Pseudomonas vancouverensis)、Pseudomonas wisconsinensis、黄色海假单胞菌(Pseudomonas xanthomarina)、厦门假单胞菌(Pseudomonas xiamenensis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes)、病鳝假单胞菌(Pseudomonas anguilliseptica)、香茅醇假单胞菌(Pseudomonas citronellolis)、变黄假单胞菌(Pseudomonas flavescens)、Pseudomonas jinjuensis、门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)、硝基还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens)、食油假单胞菌(Pseudomonas oleovorans)、假产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes)、食树脂假单孢菌(Pseudomonas resinovorans)、Pseudomonas straminae、桔黄假单胞菌(Pseudomonas aurantiaca)、绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)、莓实假单胞菌(Pseudomonas fragi)、隆德假单胞菌(Pseudomonas lundensis)、腐臭假单胞菌(Pseudomonas taetrolens)、产氮假单胞菌(Pseudomonas azotoformans)、布氏假单胞菌(Pseudomonas brenneri)、Pseudomonas cedrina、结冰假单胞菌(Pseudomonascongelans)、皱纹假单胞菌(Pseudomonas corrugata)、康氏假单胞菌(Pseudomonascostantinii)、极端东方化假单胞菌(Pseudomonas extremorientalis)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、Pseudomonas fulgida、盖氏假单胞菌(Pseudomonasgessardii)、Pseudomonas libanensis、孟氏假单胞菌(Pseudomonas mandelii)、边缘假单胞菌(Pseudomonas marginalis)、地中海假单胞菌(Pseudomonas mediterranea)、米氏假单胞菌(Pseudomonas migulae)、霉味假单胞菌(Pseudomonas mucidolens)、东方假单胞菌(Pseudomonas orientalis)、草假单胞菌(Pseudomonas poae)、罗氏假单胞菌(Pseudomonas rhodesiae)、产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)、托拉氏假单孢菌(Pseudomonas tolaasii)、平凡假单胞菌(Pseudomonastrivialis)、威隆假单胞菌(Pseudomonas veronii)、脱氮假单孢杆菌(Pseudomonas denitrificans)、穿孔假单胞菌(Pseudomonas pertucinogena)、黄褐假单胞菌(Pseudomonas fulva)、蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)、摩氏假单胞菌(Pseudomonas mosselii)、栖稻假单胞菌(Pseudomonas oryzihabitans)、变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、巴利阿里假单胞菌(Pseudomonas balearica)、Pseudomonas luteola或施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)。榛黄假单胞菌(Pseudomonas avellanae)、大麻假单胞菌(Pseudomonas cannabina)、番木瓜假单胞菌(Pseudomonas caricapapyae)、菊苣假单胞菌(Pseudomonas cichorii)、晕斑假单胞菌(Pseudomonas coronafaciens)、褐鞘假单胞菌(Pseudomonas fuscovaginae)、Pseudomonas tremae或黄假单胞菌(Pseudomonas viridiflava)。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是真核生物。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或者肽-IA的宿主细胞可以是属于分化枝的细胞：后鞭毛生物；绿色植物(例如，藻类和植物)；Amebozoa；丝足虫门；囊泡虫门；海洋鞭毛虫门；不等鞭毛门；盘嵴总门或古虫界。
在一些实施方案中，本文所述的程序和方法可使用宿主细胞完成，该宿主细胞是例如后生动物(Metazoan)、领鞭目(Choanoflagellata)或真菌(fungi)。
在一些实施方案中，本文所述的程序和方法可使用宿主细胞完成，该宿主细胞是例如真菌。例如，在一些实施方案中，宿主细胞可以是属于真核生物门的细胞：子囊菌门、担子菌门、壶菌门、小孢子虫目或接合菌门。
在一些实施方案中，本文所述的程序和方法可使用宿主细胞完成，该宿主细胞是属于以下属中的一者的真菌：曲霉属(Aspergillus)、枝孢属(Cladosporium)、稻瘟病菌属(Magnaporthe)、羊肚菌属(Morchella)、脉孢霉属(Neurospora)、青霉属(Penicillium)、酵母菌属(Saccharomyces)、隐球菌属(Cryptococcus)或黑粉菌属(Ustilago)。
在一些实施方案中，本文所述的程序和方法可使用宿主细胞完成，该宿主细胞是属于以下物种中的一者的真菌：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、布拉氏酵母(Saccharomyces boulardi)、葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)；黄曲霉(Aspergillusflavus)、土曲霉(A.terreus)、泡盛曲霉(A.awamori)；隆起支孢霉(Cladosporiumelatum)、多主枝孢霉(Cl.Herbarum)球孢枝孢霉(Cl.Sphaerospermum)和芽枝状枝孢霉(Cl.Cladosporioides)；稻瘟病(Magnaporthe grise)、稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)、Magnaporthe rhizophila；小羊肚菌(Morchella deliciosa)、羊肚菌(Morchellaesculenta)、尖顶羊肚菌(Morchella conica)；粗糙脉胞霉(Neurospora crassa)、间型脉孢菌(Neurospora intermedia)、Neurospora tetrasperma；青霉菌(Penicilliumnotatum)、产黄青霉(Penicilliumchrysogenum)、娄地青霉(Penicillium roquefortii)或简青霉(Penicillium simplicissimum)。
在一些实施方案中，本文所述的程序和方法可使用宿主细胞完成，该宿主细胞是乳酸克鲁维酵母、马克斯克鲁维酵母、酿酒酵母或巴斯德毕赤酵母。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或者肽-IA的宿主细胞可以是属于以下属中的一者的真菌：曲霉属、枝孢属、稻瘟病菌属、羊肚菌属、脉孢霉属、青霉属、酵母菌属、隐球菌属或黑粉菌属。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是酵母(Saccharomycetaceae)科的成员。例如，在一些实施方案中，宿主细胞可以是酵母科内的以下属中的一者：酒香酵母属(Brettanomyces)、假丝酵母属(Candida)、固囊酵母属(Citeromyces)、兔粪酵母属(Cyniclomyces)、德巴利酵母属(Debaryomyces)、伊萨酵母属(Issatchenkia)、哈萨克斯坦酵母属(Kazachstania)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、驹形氏酵母属(Komagataella)、柯达酵母属(Kuraishia)、拉钱斯氏酵母属(Lachancea)、娄德酵母属(Lodderomyces)、Nakaseomyces、管囊酵母属(Pachysolen)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母菌属(Saccharomyces)、Spathaspora、Tetrapisispora、Vanderwaltozyma、孢圆酵母属(Torulaspora)、威尔酵母属(Williopsis)、接合酵母属(Zygosaccharomyces)或Zygotorulaspora。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是以下中的一者：黄曲霉、土曲霉、泡盛曲霉、隆起支孢霉、多主枝孢霉、球孢枝孢菌(Cladosporium Sphaerospermum)、枝状枝孢菌(Cladosporium cladosporioides)、稻瘟病、稻瘟病菌、Magnaporthe rhizophila、小羊肚菌、羊肚菌、尖顶羊肚菌、尖顶羊肚菌、尖顶羊肚菌、Neurospora tetrasperma、青霉素、产黄青霉、娄地青霉或简青霉。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是假丝酵母属中的物种。例如，宿主细胞可以是以下中的一者：白假丝酵母(Candidaalbicans)、艾斯卡乐菲假丝酵母(Candida ascalaphidarum)、暗牧菲克假丝酵母(Candidaamphixiae)、南极假丝酵母(Candida antarctica)、Candida argentea、大西洋假丝酵母(Candida atlantica)、大气假丝酵母(Candida atmosphaerica)、耳念珠菌(Candidaauris)、布兰克假丝酵母(Candida blankii)、布拉特假丝酵母(Candida blattae)、Candida bracarensis、凤梨假丝酵母(Candida bromeliacearum)、果生假丝酵母(Candidacarpophila)、Candida carvajalis、Candida cerambycidarum、Candida chauliodes、Candida corydalis、多西假丝酵母(Candida dosseyi)、都柏林念珠菌(Candidadubliniensis)、Candida ergatensis、果实假丝酵母(Candida fructus)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、发酵假丝酵母(Candida fermentati)、季也蒙假丝酵母(Candidaguilliermondii)、希木龙假丝酵母(Candida haemulonii)、小假丝酵母(Candidahumilis)、平常假丝酵母(Candida insectamens)、昆虫假丝酵母(Candida insectorum)、中间假丝酵母(Candida intermedia)、Candida jeffresii或乳酒假丝酵母(Candidakefyr)。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是克鲁维酵母属中的物种。例如，宿主细胞可以是以下中的一者：海泥克鲁维酵母(Kluyveromyces aestuarii)、多布克鲁维酵母(Kluyveromyces dobzhanskii)、乳酸克鲁维酵母、马克斯克鲁维酵母、非发酵克鲁维酵母(Kluyveromyces nonfermentans)或柳叶克鲁维酵母(Kluyveromyces wickerhamii)。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是毕赤酵母属中的物种。例如，宿主细胞可以是以下中的一者：粉状毕赤酵母(Pichiafarinose)、异常毕赤酵母(Pichia anomala)、Pichia heedii、季也蒙毕赤酵母(Pichiaguilliermondii)、克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri)、膜醭毕赤酵母(Pichiamembranifaciens)、挪威毕赤酵母(Pichia norvegensis)、奥默毕赤酵母(Pichiaohmeri)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)或亚膜毕赤酵母(Pichia subpelliculosa)。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是酵母属中的物种。例如，宿主细胞可以是以下中的一者：树生酵母(Saccharomycesarboricolus)、贝酵母(Saccharomyces bayanus)、博伊丁酵母(Saccharomyces bulderi)、加勒比酵母(Saccharomyces cariocanus)、Saccharomyces cariocus、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、布拉迪酵母(Saccharomyces cerevisiae varboulardii)、薛瓦酵母(Saccharomyces chevalieri)、Saccharomyces dairenensis、葡萄酒酵母(Saccharomyces ellipsoideus)、真贝酵母(Saccharomyces eubayanus)、少孢酵母(Saccharomyces exiguous)、弗罗棱酵母菌(Saccharomyces florentinus)、脆壁酵母(Saccharomyces fragilis)、库德里阿兹威酵母(Saccharomyces kudriavzevii)、Saccharomyces martiniae、米卡酵母(Saccharomyces mikatae)、摩拿酵母(Saccharomyces monacensis)、诺地酵母(Saccharomyces norbensis)、奇异酵母(Saccharomyces paradoxus)、斯德酵母(Saccharomyces pastorianus)、Saccharomycesspencerorum、图列茨酵母(Saccharomyces turicensis)、单孢酵母(Saccharomycesunisporus)、葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)或Saccharomyces zonatus。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是以下中的一者：酿酒酵母、巴斯德毕赤酵母、甲醇毕赤酵母、粟酒裂殖酵母或异常汉逊酵母(Hansenula anomala)。
使用酵母细胞作为宿主生物体来产生重组CRIP或肽-IA是本领域普通技术人员熟知的一种特殊方法。在一些实施方案中，本文所述的方法和组合物可用任何酵母物种进行，包括但不限于酵母属、毕赤酵母属、克鲁维酵母属、汉逊酵母属、耶氏酵母属或裂殖酵母属的任何物种，并且酵母菌属的物种包括酵母属的任何物种，例如选自以下菌株的酿酒酵母物种：INVSc1、YNN27、S150-2B、W303-1B、CG25、W3124、JRY188、BJ5464、AH22、GRF18、W303-1A和BJ3505。在一些实施方案中，毕赤酵母属物种的成员包括毕赤酵母属的任何物种，例如毕赤酵母属物种、巴斯德毕赤酵母，例如，巴斯德毕赤酵母选自以下菌株：Bg08、Y-11430、X-33、GS115、GS190、JC220、JC254、GS200、JC227、JC300、JC301、JC302、JC303、JC304、JC305、JC306、JC307、JC308、YJN165、KM71、MC100-3、SMD1163、SMD1165、SMD1168、GS241、MS105、任何pep4敲除菌株和任何prb1敲除菌株，以及从以下菌株中选择的巴斯德毕赤酵母：Bg08、X-33、SMD1168和KM71。在一些实施方案中，任何克鲁维酵母属的物种可用于完成本文所述的方法，包括克鲁维酵母属的任何物种，例如乳酸克鲁维酵母，并且我们教导了乳酸克鲁维酵母的菌株可以但不是必须选自以下菌株：GG799、YCT306、YCT284、YCT389、YCT390、YCT569、YCT598、NRRL Y-1140、MW98-8C、MS1、CBS293.91、Y721、MD2/1、PM6-7A、WM37、K6、K7、22AR1、22A295-1、SD11、MG1/2、MSK110、JA6、CMK5、HP101、HP108和PM6-3C，除了乳酸克鲁维酵母物种之外，还选自GG799、YCT306和NRRL Y-1140。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是米曲霉(Aspergillus oryzae)。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是日本曲霉(Aspergillus japonicas)。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是黑曲霉(Aspergillus niger)。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是地衣芽孢杆菌。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是枯草芽孢杆菌。
在一些实施方案中，用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的宿主细胞可以是里氏木霉(Trichoderma reesei)。
在一些实施方案中，本文所述的程序和方法可使用宿主细胞完成，该宿主细胞是酵母，包括但不限于汉逊酵母属物种的任何物种，包括汉逊酵母属的任何物种，并且优选多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)。在一些实施方案中，本文所述的程序和方法可用酵母的任何物种完成，包括但不限于耶氏酵母属物种的任何物种，例如解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)。在一些实施方案中，本文所述的程序和方法可用酵母的任何物种完成，包括但不限于裂殖酵母属的任何物种，包括裂殖酵母属的任何物种，并且优选粟酒裂殖酵母。
酵母细胞培养
在一些实施方案中，酵母物种诸如乳酸克鲁维酵母、酿酒酵母、巴斯德毕赤酵母等可用作宿主生物体。酵母细胞培养技术是本领域普通技术人员熟知的。酵母细胞培养的示例性方法可见于Evans，Yeast Protocols，Springer，1996年；Bill，Recombinant ProteinProduction in Yeast，Springer，2012年；Hagan等人，Fission Yeast:A LaboratoryManual，CSH Press，2016年；Konishi等人，“Improvement of the transformationefficiency of Saccharomyces cerevisiae by altering carbon sources in pre-culture”，Biosci Biotechnol Biochem.，2014年，第78卷第6期：第1090-1093页；Dymond，“Saccharomyces cerevisiae growth media”，Methods Enzymol.，2013年，第533卷：第191-204页；Looke等人，“Extraction of genomic DNA from yeasts for PCR-basedapplications”，Biotechniques，2011年5月，第50卷第5期：第325-328页；以及Romanos等人，“Culture of yeast for the production of heterologous proteins”，Curr ProtocCell Biol.，2014年9月2日，第64卷第20.9期：第1-16页，这些文献的公开内容全文以引用方式并入本文。
酵母细胞发酵培养基和原种的配方如下所述：(1)MSM培养基配方：2g/L柠檬酸钠二水合物；1g/L硫酸钙二水合物(0.79g/L无水硫酸钙)；42.9g/L磷酸二氢钾；5.17g/L硫酸铵；14.33g/L硫酸钾；11.7g/L硫酸镁七水合物；2mL/L PTM1微量盐溶液；0.4ppm生物素(来自500×，200ppm储备液)；1％至2％纯甘油或其他碳源。(2)PTM1微量盐溶液：硫酸铜-5H2O6.0g；碘化钠0.08g；硫酸锰-H2O 3.0g；钼酸钠-2H2O 0.2g；硼酸0.02g；氯化钴0.5g；氯化锌20.0g；硫酸亚铁-7H2O 65.0g；生物素0.2g；硫酸5.0ml；加水至终体积为1升。乳酸克鲁维酵母确定成分培养基(DMSor)的例示性组成如下：11.83g/L KH2PO4、2.299g/L K2HPO4、20g/L可发酵糖(例如半乳糖、麦芽糖、拉托三糖、蔗糖、果糖或葡萄糖和/或糖醇，例如赤藓醇、氢化淀粉水解产物、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇、甘露醇和木糖醇)、1g/L MgSO4.7H2O、10g/L(NH4)SO4、0.33g/L CaCl2.2H2O、1g/L NaCl、1g/L KCl、5mg/L CuSO4.5H2O、30mg/LMnSO4.H2O、10mg/L ZnCl2、1mg/L KI、2mg/L CoCl2.6H2O、8mg/LNa2MoO4.2H2O、0.4mg/LH3BO3、15mg/L FeCl3.6H2O、0.8mg/L生物素、20mg/L泛酸钙、15mg/L硫胺素、16mg/L肌醇、10mg/L烟酸和4mg/L吡哆醇。
酵母细胞可在48孔深孔板中培养，接种后用无菌透气盖密封。可挑取在板上培养的酵母菌落，例如乳酸克鲁维酵母菌落，并用每孔2.2mL由DMSor组成的培养基接种深孔板。接种的深孔板可在23.5℃下在冷藏的培养箱振荡器中以280rpm振荡生长6天。在接种后第6天，应通过以4000rpm离心10分钟，随后使用具有0.22μM膜的滤板过滤来收获条件培养基，其中将过滤的培养基进行HPLC分析。
酵母转化、肽纯化和分析
酵母转化的示例性方法如下：将携带CRIP ORF、CRIP-杀昆虫蛋白ORF或肽-IA ORF的表达载体转化到酵母细胞中。首先，表达载体通常通过特异性限制酶切割而线性化，以促进经由同源重组的染色体整合。然后通过化学或电穿孔转化方法将线性表达载体转化到酵母细胞中，并通过同源重组整合到酵母基因组的靶位点中。整合可在相同染色体基因座发生多次；因此，转化的酵母细胞的基因组可包含多拷贝的CRIP或肽-IA表达盒。成功转化的酵母细胞可使用有利于选择标记的生长条件来鉴定，该选择标记被工程改造到表达载体中并与CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA ORF共整合到酵母染色体中；此类标记的示例包括但不限于乙酰胺原养型、博来霉素抗性、遗传霉素抗性、诺尔丝菌素抗性和尿嘧啶原养型。
由于不可预知且可变的因素的影响—诸如基因和基因网络的表观遗传修饰，以及在经历转化程序的群体中的单个细胞中发生的整合事件的数量的变化—给定转化过程的单个酵母菌落将在它们生产CRIP ORF、CRIP-杀昆虫蛋白ORF或肽-IA ORF的能力上不同。因此，应该从携带CRIP或肽-IA转基因的转基因酵母菌落中筛选高产量菌株。用于这种筛选的两种有效方法—每种方法依赖于转基因酵母的小规模培养物的生长以提供用于随后分析的条件培养基样品—使用反相HPLC或家蝇注射程序来分析来自阳性转基因酵母菌落的条件培养基样品。
转基因酵母培养可使用14mL圆底聚丙烯培养管进行，其中向每个管中加入5mL至10mL确定成分培养基，或者在48孔深孔培养板中进行，其中向每个孔中加入2.2mL确定成分培养基。将不含粗蛋白质提取物或副产物诸如酵母提取物或蛋白胨的成分确定培养基用于培养以降低收获用于随后筛选步骤的条件培养基中的蛋白质背景。培养在最佳温度下进行，例如，对于乳酸克鲁维酵母为23.5℃，培养约5天至6天，直到达到最大细胞密度。CRIP或肽-IA现在将由转化的酵母细胞生产并从细胞分泌至生长培养基中。为了制备用于筛选的样品，通过离心从培养物中除去细胞，并收集上清液作为条件培养基，然后通过0.22μm滤膜过滤来清洗，然后准备用于菌株筛选。
在一些实施方案中，用CRIP或肽-IA转化的阳性酵母菌落可经由推定的酵母菌落的反相HPLC(rpHPLC)筛选来筛选。在该筛选方法中，可使用具有C18键合相的HPLC分析柱。以乙腈和水为流动相溶剂，并且用设定在220nm的UV吸光度检测器进行肽检测。将适量的条件培养基样品加载到rpHPLC系统中，并用线性梯度的流动相溶剂洗脱。在HPLC色谱中杀昆虫肽的对应峰面积被用于定量条件培养基中CRIP或肽-IA的浓度。已知量的纯CRIP或肽-IA通过相同的rpHPLC柱用相同的HPLC方案运行，以确认肽的保留时间，并产生用于定量的标准肽HPLC曲线。
阳性乳酸克鲁维酵母细胞的示例性反相HPLC筛选方法如下：CRIP ORF、CRIP-杀昆虫蛋白ORF或肽-IA ORF可插入到表达载体pKLAC1中，并转化到来自New England Biolabs(Ipswich，MA，USA)的乳酸克鲁维酵母菌株YCT306中。pKLAC1载体是整合型表达载体。一旦CRIP或肽-IA转基因克隆到pKLAC1中并转化到YCT306中，它们的表达就由LAC4启动子控制。所得转化菌落生产前原肽，其包含α-交配因子信号肽、Kex2切割位点和成熟CRIP或肽-IA。α-交配因子信号肽引导前原肽进入内源分泌途径，并且成熟CRIP或肽-IA被释放到生长培养基中。
在一些实施方案中，用于CRIP或肽-IA表达的密码子优化可在两轮中进行，例如，在第一轮中，基于高表达DNA序列的一些共同特征，设计表达α-交配因子信号肽、Kex2切割位点和CRIP或肽-IA的CRIP或肽-IA表达ORF的多个变体，并在乳酸克鲁维酵母YCT306菌株中评价它们的表达水平，从而产生初始乳酸克鲁维酵母表达算法；在第二轮优化中，可基于初始乳酸克鲁维酵母表达算法设计另外的变体CRIP或肽-IA表达ORF，以进一步微调乳酸克鲁维酵母表达算法，并鉴定在乳酸克鲁维酵母中CRIP或肽-IA表达的最佳ORF。在一些实施方案中，由上述优化所得的DNA序列可具有编码α-MF信号肽、Kex2切割位点和CRIP、CRIP杀昆虫蛋白或肽-IA的开放阅读框，可使用Hind III而不是I限制位点将其克隆到pKLAC1载体中，从而产生CRIP或肽-IA表达载体。
在一些实施方案中，可用CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA表达盒转化酵母巴斯德毕赤酵母。转化巴斯德毕赤酵母的示例性方法如下：载体pJUGαKR和pJUZαKR可用于将CRIP或肽-IA转化到巴斯德毕赤酵母中。pJUGαKR和pJUZαKR载体可从Biogrammatics(Carlsbad，California，USA)获得。两种载体都是整合型载体，并使用尿嘧啶核酸核糖基转移酶启动子(pUPP)来增强异源转基因表达。载体之间的唯一差异是pJUGαKR为宿主酵母提供G418抗性，而pJUZαKR提供Zeocin抗性。设计和合成编码CRIP或肽-IA的互补寡核苷酸对以用于亚克隆到两个酵母表达载体中。通过将对应的互补寡核苷酸在30mM NaCl、10mM Tris-Cl(所有终浓度)、pH 8中混合至最终浓度20μM，然后在95℃下温育20分钟，随后在92℃下开始温育9小时，并在17℃结束温育，其中每20分钟降3℃，来进行杂交反应。杂交反应将产生编码CRIP或肽-IA的DNA片段。用BsaI-HF限制酶消化这两个巴斯德毕赤酵母载体，然后使用标准程序将反应的双链DNA产物亚克隆到线性化的巴斯德毕赤酵母载体中。在证实亚克隆的序列后，通过电穿孔将质粒等份转染到巴斯德毕赤酵母菌株Bg08中。可如本文所述培养和筛选所得转化酵母，该转化酵母是基于分别由工程改造到载体pJUZαKR和pJUGαKR中的元件赋予的对Zeocin或G418的抗性来选择的。
下文提供了ORF及其组分的详细描述。
酵母肽产量的筛选和评价
肽产量可通过本领域技术人员已知的任何方法(例如，毛细管凝胶电泳(CGE)、蛋白质印迹分析等)来测定。如本文所述和本领域已知的活性测定也可提供关于肽产量的信息。在一些实施方案中，这些或本领域已知的任何其他方法可用于评价肽产量。
定量测定
在一些实施方案中，并且没有限制，CRIP肽产量可使用以下方法测量：HPLC；质谱法(MS)和相关技术；LC/MS/MS；反相蛋白质阵列(RPPA)；免疫组织化学；ELISA；悬浮珠阵列，质谱法；斑点印迹；SDS-PAGE；毛细管凝胶电泳(CGE)；蛋白质印迹分析；Bradford测定；测量260nm处的UV吸收；Lowry测定；Smith铜/二辛可宁测定；分泌测定；Pierce蛋白质测定；缩二脲反应等。蛋白质定量的示例性方法提供于Stoscheck,C.，1990年，“Quantification ofProtein”，Methods in Enzymology，第182卷：第50-68页；Lowry,O.、Rosebrough,A.、Farr,A.和Randall,R.，1951年，J.Biol.Chem.，第193卷：第265页；Smith,P.等人，1985年，Anal.Biochem.，第150卷：第76-85页；Bradford,M.，1976年，“A Rapid and SensitiveMethod for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing thePrinciple of Protein-Dye Binding”，Anal.Biochem.，第72卷：第248-254页；Cabib,E.和Polacheck,I.，1984年，“Protein assay for dilute solutions”，Methods inEnzymology，第104卷：第318-328页；Turcanu,Victor、Williams,Neil A.，2001年，“Cellidentification and isolation on the basis of cytokine secretion:A novel toolfor investigating immune responses”Nature Medicine，第7卷第3期：第373-376页；美国专利号6,391,649；这些文献和专利的公开内容全文以引用方式并入本文。
在其他实施方案中，CRIP肽产量可使用包括但不限于以下的方法来定量和/或评估：每体积培养物的重组蛋白质量(例如，每升培养物克或毫克蛋白质)；细胞裂解后获得的重组蛋白质不溶性沉淀物的百分比或分数测定于(例如，重组蛋白质提取上清液中，不溶性成分中的蛋白质的量/数量)；活性蛋白质的百分比或分数(例如，用于蛋白质量的活性蛋白质的量/分析)；总细胞蛋白质(TCP)百分比或分数；和/或蛋白质/细胞的量和干生物量的百分比或比率。
在一些实施方案中，其中产量以培养物体积表示，可考虑培养细胞密度，特别是当比较不同培养物之间的产量时。
在一些实施方案中，本发明提供了生产异源多肽的方法，该异源多肽是总细胞蛋白质(tcp)的至少约5％、至少约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。“总细胞蛋白质百分比”是宿主细胞中异源多肽的量占聚集细胞蛋白质的百分比。总细胞蛋白质百分比的测定是本领域熟知的。
“总细胞蛋白质(tcp)”或“总细胞蛋白质百分比(％tcp)”是宿主细胞中蛋白质或多肽的量占聚集细胞蛋白质的百分比。测定总细胞蛋白质百分比的方法是本领域熟知的。
在一些实施方案中，HPLC可以用于定量肽产量。例如，在一些实施方案中，CRIP或肽-IA产量可使用配备有Onyx整体式4.5×100mm C18反相分析HPLC柱和自动注射器的Agilent 1100HPLC系统来评价。配备有Onyx整体式4.5×100mm C18反相分析HPLC柱和自动注射器的Agilent 1100HPLC系统的例示性用法如下：通过分析HPLC级水和含有0.1％三氟乙酸的乙腈(构成用于HPLC分析的两种流动相溶剂)，使用配备有Onyx整体式4.5×100mmC18反相分析HPLC柱和自动注射器的Agilent 1100HPLC系统分析来自转化的乳酸克鲁维酵母细胞的过滤的条件培养基样品；使用HPLC色谱分析CRIP或肽-IA两者的峰面积，然后用来计算条件培养基中的肽浓度，该肽浓度可进一步标准化为对应的最终细胞密度(如通过OD600测量确定的)，作为标准化的肽产量。
活性测定
在一些实施方案中，可使用家蝇注射测定筛选用CRIP或肽-IA转化的阳性酵母菌落。当通过背侧胸腔的体壁注射测量剂量时，CRIP或肽-IA可麻痹/杀死家蝇。CRIP或肽-IA的效力可用肽的平均麻痹/致死剂量(PD50/LD50)定义，其分别引起注射的家蝇50％的敲减比率或死亡率。纯CRIP或肽-IA通常用于家蝇注射测定中以产生标准剂量-反应曲线，从该曲线可测定PD50/LD50值。使用来自纯CRIP或肽-IA的标准剂量-反应曲线分析的PD50/LD50值，使用用对应条件培养基的连续稀释物进行的家蝇注射测定，可实现通过转化酵母产生的CRIP或肽-IA的定量。
示例性家蝇注射生物测定如下：条件培养基被连续稀释以产生来自家蝇注射生物测定的全剂量-反应曲线。在注射前，用CO2固定成年家蝇(普通家蝇)，并选用12mg至18mg家蝇用于注射。使用装有1cc注射器和30号针头的微量施用器，通过家蝇背侧胸腔的体壁，将每只苍蝇0.5μL剂量的连续稀释的条件培养基样品注射到家蝇体内。将已注射的家蝇置于有潮湿滤纸并且盖上有呼吸孔的密闭容器中，并通过敲减比率或通过注射后24小时的死亡率评分来检查它们。计算标准化产量。肽产量意指条件培养基中肽的浓度，单位为mg/L。然而，肽产量并不总是足以准确地比较菌株生产率。单个菌株可具有不同的生长率，因此当收获培养物时，不同的培养物的细胞密度可能不同。具有高细胞密度的培养物可在培养基中生产更高浓度的肽，即使该菌株的肽生产率低于具有更高产生率的另一菌株。因此，术语“标准化产量”通过将肽产量除以对应培养物中的细胞密度来产生，并且这允许菌株之间肽生产率的更好比较。细胞密度由600nm处的吸光度表示，单位为“A”(吸光度单位)。
筛选已经经历了CRIP或肽-IA转化的酵母菌落可从数百个潜在的菌落中鉴定高产量酵母菌株。当使用本文所述的优化的发酵培养基和发酵条件时，这些菌株可在生物反应器中发酵以实现至少高达4g/L或至少高达3g/L或至少高达2g/L的CRIP或肽-IA产量。较高的生产率(以mg/L表示)可以是约100mg/L至约100,000mg/L；或约100mg/L至约90,000mg/L；或约100mg/L至约80,000mg/L；或约100mg/L至约70,000mg/L；或约100mg/L至约60,000mg/L；或约100mg/L至约50,000mg/L；或约100mg/L至约40,000mg/L；或约100mg/L至约30,000mg/L；或约100mg/L至约20,000mg/L；或约100mg/L至约17,500mg/L；或约100mg/L至约15,000mg/L；或约100mg/L至约12,500mg/L；或约100mg/L至约10,000mg/L；或约100mg/L至约9,000mg/L；或约100mg/L至约8,000mg/L；或约100mg/L至约7,000mg/L；或约100mg/L至约6,000mg/L；或约100mg/L至约5,000mg/L；或约100mg/L至约3,000mg/L；或约100mg/L至2,000mg/L；或约100mg/L至1,500mg/L；或约100mg/L至1,000mg/L；或约100mg/L至750mg/L；或约100mg/L至500mg/L；或约150mg/L至100,000mg/L；或约200mg/L至100,000mg/L；或约300mg/L至100,000mg/L；或约400mg/L至100,000mg/L；或约500mg/L至100,000mg/L；或约750mg/L至100,000mg/L；或约1,000mg/L至100,000mg/L；或约1,250mg/L至100,000mg/L；或约1,500mg/L至100,000mg/L；或约2,000mg/L至100,000mg/L；或约2,500mg/L至100,000mg/L；或约3,000mg/L至100,000mg/L；或约3,500mg/L至100,000mg/L；或约4,000mg/L至100,000mg/L；或约4,500mg/L至100,000mg/L；或约5,000mg/L至100,000mg/L；或约6,000mg/L至100,000mg/L；或约7,000mg/L至100,000mg/L；或约8,000mg/L至100,000mg/L；或约9,000mg/L至100,000mg/L；或约10,000mg/L至100,000mg/L；或约12,500mg/L至100,000mg/L；或约15,000mg/L至100,000mg/L；或约17,500mg/L至100,000mg/L；或约20,000mg/L至100,000mg/L；或约30,000mg/L至100,000mg/L；或约40,000mg/L至100,000mg/L；或约50,000mg/L至100,000mg/L；或约60,000mg/L至100,000mg/L；或约70,000mg/L至100,000mg/L；或约80,000mg/L至100,000mg/L；或约90,000mg/L至100,000mg/L；或者使用与转化前生产肽所用的相同或相似的生产方法提供的任何值的任何范围，或甚至比用转化前的肽可达到的产量更高。
前述方法中的任一者都可被使用和/或定制以生产CRIP和/或肽-IA(例如，有助于此类方法的杀昆虫剂，例如，氨基酸的聚合物、肽和/或蛋白质)。例如，上述方法中的任一者都可用于生产、产生、制造、表达、转录、翻译、合成或以其他方式产生本文所述的CRIP或肽-IA中的任一者，包括但不限于ACTX肽(例如，U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、rκ-ACTX-Hv1c、ω-ACTX-Hv1a和/或ω-ACTX-Hv1a+2)；Γ-CNTX-Pn1a；U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b；TVP；Av2；Av3；AVP；和/或Bt毒素(例如，Cry毒素、Cyt毒素或Vip)。
培养和发酵条件
细胞培养技术是本领域熟知的。在一些实施方案中，培养方法和/或材料将必然需要基于所选择的宿主细胞进行调整；并且，此类调整(例如，改变pH、温度、培养基含量等)是本领域普通技术人员熟知的。在一些实施方案中，任何已知的培养技术都可用于生产本发明的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA。
示例性培养方法提供于美国专利号3,933,590；3,946,780；4,988,623；5,153,131；5,153,133；5,155,034；5,316,905；5,330,908；6,159,724；7,419,801；9,320,816；9,714,408；和10,563,169；这些专利的公开内容全文以引用方式并入本文。
酵母培养物
酵母细胞培养技术是本领域普通技术人员熟知的。酵母细胞培养的示例性方法可见于Evans，Yeast Protocols，Springer，1996年；Bill，Recombinant Protein Productionin Yeast，Springer，2012年；Hagan等人，Fission Yeast:A Laboratory Manual，CSHPress，2016年；Konishi等人，“Improvement of the transformation efficiency ofSaccharomyces cerevisiae by altering carbon sources in pre-culture”，BiosciBiotechnol Biochem.，2014年，第78卷第6期：第1090-1093页；Dymond，“Saccharomycescerevisiae growth media”，Methods Enzymol.，2013年，第533卷：第191-204页；Looke等人，“Extraction of genomic DNA from yeasts for PCR-based applications”，Biotechniques，2011年5月，第50卷第5期：第325-328页；以及Romanos等人，“Culture ofyeast for the production of heterologous proteins”，Curr Protoc Cell Biol.，2014年9月2日，第64卷第20.9期：第1-16页，这些文献的公开内容全文以引用方式并入本文。
酵母可在多种培养基中培养，例如，在一些实施方案中，酵母可在以下培养基中培养：基本培养基；YPD培养基；酵母营养缺陷型培养基；酵母氮基(YNB，含或不含氨基酸)；YEPD培养基；ADE D培养基；ADE DS”培养基；LEU D培养基；HIS D培养基；或矿物盐培养基。
在一些实施方案中，酵母可在基本培养基中培养。在一些实施方案中，基本培养基成分可包含：2％糖；磷酸盐缓冲液，pH 6.0；硫酸镁；氯化钙；硫酸铵；氯化钠；氯化钾；硫酸铜；硫酸锰；氯化锌；碘化钾；氯化钴；钼酸钠；硼酸；氯化铁；生物素；泛酸钙；硫胺；肌醇；烟酸；和吡哆醇。
在一些实施方案中，酵母可在YPD培养基中培养。YPD培养基包含细菌蛋白胨、酵母提取物和葡萄糖。
在一些实施方案中，酵母可在酵母营养缺陷型培养基中培养，该酵母营养缺陷型培养基可用于区分营养缺陷型突变菌株，这些营养缺陷型突变菌株在没有用质粒转化的特定培养基组分的情况下不能生长，该质粒允许所述转化体在缺乏所需组分的培养基上生长。
在一些实施方案中，可使用酵母氮基(YNB，含或不含氨基酸)培养酵母，YNB包含氮、维生素、微量元素和盐。
在一些实施方案中，培养基可以是YEPD培养基，例如包含2％ D-葡萄糖、2％BACTO蛋白胨(Difco Laboratories，Detroit，MI)、1％ BACTO酵母提取物(Difco)、0.004％腺嘌呤和0.006％L-亮氨酸或它们的变型的培养基，其中碳源是糖醇，例如甘油或山梨醇。
在一些实施方案中，培养基可以是ADE D培养基，例如，包含0.056％-Ade-Trp-Thr粉、0.67％不含氨基酸的酵母氮基、2％ D-葡萄糖和0.5％200×色氨酸、苏氨酸溶液或它们的变型的培养基，其中碳源是糖醇，例如，甘油或山梨醇。
在一些实施方案中，培养基可以是ADE DS”培养基，例如，包含0.056％-Ade-Trp-Thr粉、0.67％不含氨基酸的酵母氮基、2％ D-葡萄糖、0.5％200×色氨酸、苏氨酸溶液和18.22％ D-山梨醇或它们的变型的培养基，其中碳源完全是糖醇，例如，甘油或山梨醇。
在一些实施方案中，培养基可以是LEU D培养基，例如，包含0.052％-Leu-Trp-Thr粉、0.67％不含氨基酸的酵母氮基、2％ D-葡萄糖和0.5％200×色氨酸、苏氨酸溶液或它们的变型的培养基，其中碳源是糖醇，例如，甘油或山梨醇。
在一些实施方案中，培养基可以是HIS D培养基，例如，包含0.052％-His-Trp-Thr粉、0.67％不含氨基酸的酵母氮基、2％ D-葡萄糖和0.5％200×色氨酸、苏氨酸溶液或它们的变型的培养基，其中碳源是糖醇，例如，甘油或山梨醇。
在一些实施方案中，可使用矿物盐培养基。矿物盐培养基由矿物盐和碳源(诸如葡萄糖、蔗糖或甘油)组成。矿物盐培养基的示例包括，例如，M9培养基、假单胞菌培养基(ATCC179)和Davis-Mingioli培养基。参见Davis和Mingioli，1950年，J.Bact.，第60卷：第17-28页。用于制备矿物盐培养基的矿物盐包括选自以下的那些：例如，磷酸钾、硫酸铵或氯化铵、硫酸镁或氯化镁和微量矿物质诸如氯化钙、硼酸盐，以及铁、铜、锰和锌的硫酸盐。通常，在矿物盐培养基中不包括有机氮源，诸如蛋白胨、胰蛋白胨、氨基酸或酵母提取物。相反，使用无机氮源，并且其可选自例如铵盐、氨水和气态氨。矿物盐培养基将通常包含葡萄糖或甘油作为碳源。
与矿物盐培养基相比，基本培养基还可包含无机盐和碳源，但是可补充有例如低水平的氨基酸、维生素、蛋白胨或其他成分，尽管这些以非常低的水平加入。可使用本领域所述的方法制备培养基，例如美国专利申请公开号2006/0040352，其公开内容全文以引用方式并入本文。在本发明的方法中有用的培养程序和矿物盐培养基的细节描述于Riesenberg,D等人，1991年，“High cell density cultivation of Escherichia coli atcontrolled specific growth rate”，J.Biotechnol.，第20卷第1期：第17-27页。
在一些实施方案中，乳酸克鲁维酵母在补充有2％葡萄糖、半乳糖、山梨醇或甘油作为唯一碳源的基本培养基中生长。培养物在30℃下温育直到对数中期(24小时至48小时)以进行β-半乳糖苷酶测量，或在23.5℃下温育6天以进行异源蛋白质表达。
在一些实施方案中，酵母细胞可在48孔深孔板中培养，接种后用无菌透气盖密封。可挑取在板上培养的酵母菌落，例如乳酸克鲁维酵母菌落，并用每孔2.2mL由DMSor组成的培养基接种深孔板。接种的深孔板可在23.5℃下在冷藏的培养箱振荡器中以280rpm振荡生长6天。在接种后第6天，应通过以4000rpm离心10分钟，随后使用具有0.22μM膜的滤板过滤来收获条件培养基，其中将过滤的培养基进行HPLC分析。
在一些实施方案中，酵母物种诸如乳酸克鲁维酵母、酿酒酵母、巴斯德毕赤酵母等可用作宿主生物体，和/或使用本文所述的方法修饰的酵母。
温度和pH条件将根据培养阶段和所选择的宿主细胞物种而变化。细胞培养中的变量诸如温度和pH是本领域普通技术人员容易知道的。
pH水平在酵母的培养中是重要的。本领域技术人员将理解，培养过程不仅包括酵母培养的开始，而且还包括培养的维持。酵母培养可在任何pH水平开始，然而，由于酵母培养的培养基随时间推移趋于变得更酸(即，降低pH)，因此必须小心监测培养过程中的pH水平。
在本发明的一些实施方案中，酵母在基于所用酵母的种类、培养阶段和/或温度决定的pH水平的培养基中生长。因此，在一些实施方案中，pH水平可落在约2至约10的范围内。本领域普通技术人员将认识到，大多数微生物的最适pH接近中性点(pH 7.0)。然而，在一些实施方案中，一些真菌物种优选酸性环境：因此，在一些实施方案中，pH可在2至6.5的范围内。在一些实施方案中，pH可在约4至约4.5的范围内。一些真菌物种(例如，霉菌)可在约2至约8.5的pH下生长，但优选酸性pH。参见Mountney和Gould，Practical food microbiologyand technology，1988年，第3版；以及Pena等人，“Effects of high medium pH ongrowth,metabolism and transport in Saccharomyces cerevisiae”，FEMS Yeast Res.，2015年3月，第15卷第2期：fou005。
在其他实施方案中，pH为约5.7至5.9、5.8至6.0、5.9至6.1、6.0至6.2、6.1至6.3、6.2至6.5、6.4至6.7、6.5至6.8、6.6至6.9、6.7至7.0、6.8至7.1、6.9至7.2、7.0至7.3、7.1至7.4、7.2至7.5、7.3至7.6、7.4至7.7、7.5至7.8、7.6至7.9、7.7至8.0、7.8至8.1、7.9至8.2、8.0至8.3、8.1至8.4、8.2至8.5、8.3至8.6、8.4至8.7或8.5至8.8。
在一些实施方案中，培养基的pH可以是至少5.5。在其他方面，培养基的pH水平可以是约5.5。在其他方面，培养基的pH水平可在4和8之间。在一些情况下，培养物的pH水平维持在5.5和8之间。在其他方面，培养基的pH水平在6和8之间。在一些情况下，培养基的pH水平维持在6和8之间。在一些实施方案中，酵母在6.1和8.1之间的pH水平下生长和/或维持。在一些实施方案中，酵母在6.2和8.2之间的pH水平下生长和/或维持。在一些实施方案中，酵母在6.3和8.3之间的pH水平下生长和/或维持。在一些实施方案中，酵母在6.4和8.4之间的pH水平下生长和/或维持。在一些实施方案中，酵母在5.5和8.5之间的pH水平下生长和/或维持。在一些实施方案中，酵母在6.5和8.5之间的pH水平下生长和/或维持。在一些实施方案中，酵母在约5.6、5.7、5.8或5.9的pH水平下生长。在一些实施方案中，酵母在约6的pH水平下生长。在一些实施方案中，酵母在约6.5的pH水平下生长。在一些实施方案中，酵母在约6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9或7.0的pH水平下生长。在一些实施方案中，酵母在约7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0的pH水平下生长。在一些实施方案中，酵母以高于8的水平生长。
在一些实施方案中，培养基的pH可在2至8.5的pH范围内。在某些实施方案中，pH为约4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7或8.8。
酵母培养的示例性方法可见于：美国专利号5,436,136，名称为“Repressibleyeast promoters”(1991年12月20日提交，受让人Ciba-Geigy Corporation)；美国专利号6,645,739，名称为“Yeast expression systems,methods of producing polypeptidesin yeast,and compositions relating to same”(2001年7月26日提交，受让人PhoenixPharmacologies,Inc.，Lexington，KY)；以及美国专利号10,023,836，名称为“Medium foryeasts”(2013年8月23日提交，受让人Yamaguchi University)；这些专利的公开内容全文以引用方式并入本文。
发酵
本发明考虑以任何发酵形式培养宿主生物体。例如，本文可采用分批、补料分批、半连续和连续发酵模式。
发酵可以任何规模进行。根据本发明所考虑的方法和技术可用于任何规模的重组蛋白质表达。因此，在一些实施方案中，例如，可使用微升规模、毫升规模、厘升规模和分升规模的发酵体积，并且可使用1升规模和更大的发酵体积。
在一些实施方案中，发酵体积为或高于约1升。例如，在一些实施方案中，发酵体积为约1升至约100升。在一些实施方案中，发酵体积为约1升、约2升、约3升、约4升、约5升、约6升、约7升、约8升、约9升或约10升。在一些实施方案中，发酵体积为约1升至约5升、约1升至约10升、约1升至约25升、约1升至约50升、约1升至约75升、约10升至约25升、约25升至约50升或约50升至约100升。在其他实施方案中，发酵体积为或高于5升、10升、15升、20升、25升、50升、75升、100升、200升、500升、1,000升、2,000升、5,000升、10,000升或50,000升。
在一些实施方案中，发酵培养基可以是用于生长和/或维持细胞的营养液。非限制性地，该溶液通常提供来自以下类别中的一者或多者的至少一种组分：(1)通常为碳源形式的能量源，例如，葡萄糖；(2)所有必需氨基酸，并且通常是二十种氨基酸的基本集合；(3)低浓度时所需的维生素和/或其他有机化合物；(4)游离脂肪酸或脂质，例如亚油酸；和(5)微量元素，其中微量元素被定义为通常需要非常低浓度(通常在微摩尔范围内)的无机化合物或天然存在的元素。
在一些实施方案中，发酵培养基可与细胞培养基或本文所述的任何其他培养基相同。在一些实施方案中，发酵培养基可不同于细胞培养基。在一些实施方案中，可修饰发酵培养基以便适应蛋白质的大规模生产。
在一些实施方案中，发酵培养基可选择性地补充有来自以下类别中的任一者的一种或多种组分：(1)激素和其他生长因子，诸如血清、胰岛素、转铁蛋白等；(2)盐，例如镁、钙和磷酸盐；(3)缓冲液，诸如HEPES；(4)核苷和碱基，诸如腺苷、胸苷等；(5)蛋白质和组织水解产物，例如可从纯化的明胶、植物材料或动物副产品获得的蛋白胨或蛋白胨混合物；(6)抗生素，诸如庆大霉素；和(7)细胞保护剂，例如普朗尼克多元醇。
在一些实施方案中，可使用pH缓冲液和本领域技术人员已知的方法维持发酵培养基的pH。也可使用氨水来实现发酵期间pH的控制。在一些实施方案中，发酵培养基的pH将基于所用生物体的优选pH来选择。因此，在一些实施方案中，并且根据宿主细胞和温度，pH可在约1至约10的范围内。
在一些实施方案中，发酵培养基的pH范围可以是2至8.5的pH。在某些实施方案中，pH为约4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7或8.8。
在其他实施方案中，pH为约5.7至5.9、5.8至6.0、5.9至6.1、6.0至6.2、6.1至6.3、6.2至6.5、6.4至6.7、6.5至6.8、6.6至6.9、6.7至7.0、6.8至7.1、6.9至7.2、7.0至7.3、7.1至7.4、7.2至7.5、7.3至7.6、7.4至7.7、7.5至7.8、7.6至7.9、7.7至8.0、7.8至8.1、7.9至8.2、8.0至8.3、8.1至8.4、8.2至8.5、8.3至8.6、8.4至8.7或8.5至8.8。
在一些实施方案中，例如，当使用大肠杆菌时，最佳pH范围在6.5和7.5之间，这取决于温度。
在其他实施方案中，例如，当使用酵母菌株时，pH可在约4.0至8.0的范围内。
在一些实施方案中，可使用中性pH，即pH为约7.0。
本领域普通技术人员将认识到，在发酵期间，pH水平可能由于底物和代谢化合物的转化和生产而漂移。
在一些实施方案中，发酵培养基可补充有缓冲液或其他化学品以便避免pH的变化。例如，在一些实施方案中，可向发酵培养基中加入Ca(OH)2、CaCO3、NaOH或NH4OH以中和在工业过程期间例如在一些酵母物种中出现的酸性化合物的产生。
温度是发酵过程中的另一个重要考虑因素；并且，与pH考虑一样，温度将取决于所选择的宿主细胞的类型。
在一些实施方案中，发酵温度维持在约4℃至约42℃。在某些实施方案中，发酵温度为约4℃、约5℃、约6℃、约7℃、约8℃、约9℃、约10℃、约11℃、约12℃、约13℃、约14℃、约15℃、约16℃、约17℃、约18℃、约19℃、约20℃、约21℃、约22℃、约23℃、约24℃、约25℃、约26℃、约27℃、约28℃、约29℃、约30℃、约31℃、约32℃、约33℃、约34℃、约35℃、约36℃、约37℃、约38℃、约39℃、约40℃、约41℃或约42℃。
在其他实施方案中，发酵温度维持在约25℃至约27℃、约25℃至约28℃、约25℃至约29℃、约25℃至约30℃、约25℃至约31℃、约25℃至约32℃、约25℃至约33℃、约26℃至约28℃、约26℃至约29℃、约26℃至约30℃、约26℃至约31℃、约26℃至约32℃、约27℃至约29℃、约27℃至约30℃、约27℃至约31℃、约27℃至约32℃、约26℃至约33℃、约28℃至约30℃、约28℃至约31℃、约28℃至约32℃、约29℃至约31℃、约29℃至约32℃、约29℃至约33℃、约30℃至约32℃、约30℃至约33℃、约31℃至约33℃、约31℃至约32℃、约30℃至约33℃或约32℃至约33℃。
在其他实施方案中，温度在发酵期间改变，例如，取决于发酵阶段。
发酵可用本领域普通技术人员已知的多种微生物实现。适合大规模生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的微生物包括本文列出的任何微生物。在一些实施方案中，微生物的非限制性示例包括以下属的菌株：酵母属物种(包括但不限于啤酒酵母(面包酵母)、糖化酵母(S.distaticus)、葡萄汁酵母)、乳酸克鲁维酵母属(包括但不限于马克斯克鲁维酵母、脆壁克鲁维酵母(K.fragilis))、假丝酵母属(包括但不限于热带假丝酵母(C.pseudotropicalis)和C.brassicae)、树干毕赤酵母(Pichia stipitis)(休哈塔假丝酵母(Candida shehatae)的近亲)、棒孢酵母属(Clavispora)(包括但不限于C.lusitaniae和C.opuntiae)、管囊酵母属(包括但不限于嗜鞣管囊酵母(P.tannophilus))、酒香酵母属(包括但不限于例如B.clausenii)。其他合适的微生物包括，例如运动发酵单胞菌(Zymomonasmobilis)、梭菌(Clostridium)物种(包括但不限于热纤梭菌(C.thermocellum)；糖丁基丙酮梭菌(C.saccharobutylacetonicum)、糖丁酸梭菌(C.saccharobutylicum)、略紫色梭菌(C.Puniceum)、拜氏梭菌(C.beijernckii)和丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum))、丛梗孢酵母(Moniliella pollinis)、Moniliella megachiliensis、乳杆菌物种、解脂耶氏酵母、短柄霉属(Aureobasidium)物种、Trichosporonoides物种、三角酵母(Trigonopsisvariabilis)、丝孢酵母属(Trichosporon)物种、丛梗孢酵母(Moniliellaacetoabutans)物种、多变核瑚菌(Typhula variabilis)、木兰假丝酵母(Candida magnolias)、黑粉菌纲(Ustilaginomycetes)物种、筑波拟酵母(Pseudozyma tsukubaensis)，接合酵母属、德巴利酵母属、汉逊酵母属和毕赤酵母属的酵母物种，以及暗丛梗孢形属圆酵母(Torula)的真菌。参见例如，Philippidis,G.P.，1996年，“Cellulose bioconversion technology”，Handbook on Bioethanol:Production and Utilization，Wyman,C.E.编辑，Taylor&Francis，Washington,D.C.，第179-212页。
发酵培养基可根据宿主细胞和/或最终用户的需要进行选择。除了例如碳之外的任何必需的补充物还可以适当的浓度单独引入或作为与另一种补充物或培养基诸如复合氮源的混合物引入。
酵母发酵
使用酵母的发酵方法是本领域普通技术人员熟知的。在一些实施方案中，可根据本文提供的方法使用分批发酵；在其他实施方案中，可使用连续发酵程序。
在一些实施方案中，分批发酵方法可用于生产本发明的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA。简而言之，分批发酵方法是指用封闭系统进行的发酵类型，其中培养基的组成在发酵开始时确定，并且在发酵期间不经受人为改变(即，在发酵开始时用一种或多种酵母细胞接种培养基，并且允许发酵继续进行，不被用户中断)。通常，在分批发酵系统中，系统的代谢物和生物质组成持续变化，直到发酵停止。在分批培养中，酵母细胞经过静态迟滞期到高生长对数期，并且最后到稳定期，在稳定期生长速率降低或停止。如果不处理，则稳定期的酵母细胞最终会死亡。在分批方法中，对数期的酵母细胞通常负责最终产物的大量合成。
在一些实施方案中，补料分批发酵可用于生产本发明的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA。简而言之，补料分批发酵与典型的分批方法(如上所述)相似，然而，补料分批方法中的底物随着发酵进行而递增加入。当分解代谢物抑制可抑制酵母细胞代谢时，以及当希望培养基中具有有限量的底物时，补料分批发酵是有用的。通常，补料分批系统中底物浓度的测量是基于反映代谢的可测量因素的变化来估计的，所述因素诸如pH、溶解氧、废气(例如，CO2)分压等。
在一些实施方案中，补料分批发酵程序可如下用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA：在用N2/CO2混合物吹扫的10L生物反应器中，使用含有5g/L磷酸钾、2.5g/L氯化铵、0.5g/L硫酸镁和30g/L玉米浆的5L液体培养基和20g/L的初始第一和第二碳源浓度培养生产生物体(例如，修饰的酵母细胞)。随着修饰的酵母细胞生长并利用碳源，然后以大约平衡碳源消耗的速率将另外的70％碳源混合物进料到生物反应器中。生物反应器的温度通常维持在30℃下。生长持续大约24小时或更长，并且异源肽达到所需浓度，例如细胞密度在约5g/L和10g/L之间。在培养期完成后，发酵罐内容物可经过细胞分离单元诸如离心机以除去细胞和细胞碎片，并且发酵液可被转移到产物分离单元。异源肽的分离可通过本领域熟知的标准分离程序进行。
在一些实施方案中，连续发酵可用于生产本发明的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA。简而言之，连续发酵是指用开放系统的发酵，其中将发酵培养基连续加入到生物反应器中，并且同时取出大约等量的条件培养基用于加工。连续发酵通常将培养物维持在高密度，其中酵母细胞主要处于对数期生长。通常，进行连续发酵方法以维持稳态生长条件，并且由于培养基撤出导致的酵母细胞损失应与发酵中的细胞生长速率平衡。
在一些实施方案中，连续发酵方法可如下用于生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA：可使用生物反应器设备和培养基组成培养修饰的酵母菌株，尽管其中初始第一和第二碳源是约例如30g/L至50g/L。当碳源耗尽时，以约0.5L/小时至1L/小时的速率连续供应相同组成的补料培养基，并以相同的速率撤出液体。生物反应器中的异源肽浓度通常与细胞密度一起保持恒定。温度通常保持在30℃下，并且根据需要，pH通常使用浓NaOH和HCl维持在约4.5。
在一些实施方案中，当生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA时，生物反应器可连续操作，例如，约一个月，其中每天或者根据需要取样以保证目标化合物浓度的一致性。在连续模式中，随着新的补料培养基的供应，发酵罐内容物被不断地除去。然后，含有细胞、培养基和异源肽的出口流可进行连续的产物分离程序，除去或不除去细胞和细胞碎片，并且可通过本领域熟知的连续分离方法进行，以从感兴趣的肽中分离有机产物。
在一些实施方案中，可操作以表达CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的酵母细胞可例如使用需氧生物反应器中的分批补料过程生长。简而言之，用包含碳源和其他试剂的培养基填充反应器至约20％至约70％容量。使用本文所述的一种或多种化学品维持温度和pH。通过与搅拌一致地间歇吹扫空气来维持氧水平。
例如，在一些实施方案中，本发明提供了在需氧生物反应器中使用补料分批过程的方法，其中将反应器填充至约20％；21％；22％；23％；24％；25％；26％；27％；28％；29％；30％；31％；32％；33％；34％；35％；36％；37％；38％；39％；40％；41％；42％；43％；44％；45％；46％；47％；48％；49％；50％；51％；52％；53％；54％；55％；56％；57％；58％；59％；60％；61％；62％；63％；64％；65％；66％；67％；68％；69％；或70％容量。
在一些实施方案中，本发明提供了使用有氧生物反应器的补料分批发酵方法，以生产CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA，其中培养基是丰富的培养基。例如，在一些实施方案中，碳源可以是葡萄糖、山梨糖醇或乳糖。
在一些实施方案中，葡萄糖的量可为约2g/L；3g/L；4g/L；5g/L；6g/L；7g/L；8g/L；9g/L；10g/L；11g/L；12g/L；13g/L；14g/L；15g/L；16g/L；17g/L；18g/L；19g/L；20g/L；21g/L；22g/L；23g/L；24g/L；25g/L；26g/L；27g/L；28g/L；29g/L；或30g/L培养基。
在一些实施方案中，山梨醇的量可为约2g/L；3g/L；4g/L；5g/L；6g/L；7g/L；8g/L；9g/L；10g/L；11g/L；12g/L；13g/L；14g/L；15g/L；16g/L；17g/L；18g/L；19g/L；20g/L；21g/L；22g/L；23g/L；24g/L；25g/L；26g/L；27g/L；28g/L；29g/L；或30g/L培养基。
在一些实施方案中，乳糖的量可为约2g/L；3g/L；4g/L；5g/L；6g/L；7g/L；8g/L；9g/L；10g/L；11g/L；12g/L；13g/L；14g/L；15g/L；16g/L；17g/L；18g/L；19g/L；20g/L；21g/L；22g/L；23g/L；24g/L；25g/L；26g/L；27g/L；28g/L；29g/L；或30g/L培养基。
在一些实施方案中，本发明提供了使用需氧生物反应器的补料分批发酵方法，其中培养基补充有磷酸、硫酸钙、硫酸钾、硫酸镁七水合物、氢氧化钾和/或玉米浆中的一者或多者。
在一些实施方案中，培养基可补充有磷酸，向培养基中补充的量为约2g/L；3g/L；4g/L；5g/L；6g/L；7g/L；8g/L；9g/L；10g/L；11g/L；12g/L；13g/L；14g/L；15g/L；16g/L；17g/L；18g/L；19g/L；20g/L；21g/L；22g/L；23g/L；24g/L；25g/L；26g/L；27g/L；28g/L；29g/L；或30g/L。
在一些实施方案中，培养基可补充有硫酸钙，向培养基中补充的量为约0.05g/L；0.15g/L；0.25g/L；0.35g/L；0.45g/L；0.55g/L；0.65g/L；0.75g/L；0.85g/L；0.95g/L；1.05g/L；1.15g/L；1.25g/L；1.35g/L；1.45g/L；1.55g/L；1.65g/L；1.75g/L；1.85g/L；1.95g/L；2.05g/L；2.15g/L；2.25g/L；2.35g/L；2.45g/L；2.55g/L；2.65g/L；2.75g/L；2.85g/L；或2.95g/L。
在一些实施方案中，培养基可补充有硫酸钾，向培养基中补充的量为约2g/L；2.5g/L；3g/L；3.5g/L；4g/L；4.5g/L；5g/L；5.5g/L；6g/L；6.5g/L；7g/L；7.5g/L；8g/L；8.5g/L；9g/L；9.5g/L；10g/L；10.5g/L；11g/L；11.5g/L；12g/L；12.5g/L；13g/L；13.5g/L；14g/L；14.5g/L；15g/L；15.5g/L；16g/L；16.5g/L；17g/L；17.5g/L；18g/L；18.5g/L；19g/L；19.5g/L；或20g/L。
在一些实施方案中，培养基可补充有硫酸镁七水合物，向培养基中补充的量为约0.25g/L；0.5g/L；0.75g/L；1g/L；1.25g/L；1.5g/L；1.75g/L；2g/L；2.25g/L；2.5g/L；2.75g/L；3g/L；3.25g/L；3.5g/L；3.75g/L；4g/L；4.25g/L；4.5g/L；4.75g/L；5g/L；5.25g/L；5.5g/L；5.75g/L；6g/L；6.25g/L；6.5g/L；6.75g/L；7g/L；7.25g/L；7.5g/L；7.75g/L；8g/L；8.25g/L；8.5g/L；8.75g/L；9g/L；9.25g/L；9.5g/L；9.75g/L；10g/L；10.25g/L；10.5g/L；10.75g/L；11g/L；11.25g/L；11.5g/L；11.75g/L；12g/L；12.25g/L；12.5g/L；12.75g/L；13g/L；13.25g/L；13.5g/L；13.75g/L；14g/L；14.25g/L；14.5g/L；14.75g/L；或15g/L。
在一些实施方案中，培养基可补充有氢氧化钾，向培养基中补充的量为约0.25g/L；0.5g/L；0.75g/L；1g/L；1.25g/L；1.5g/L；1.75g/L；2g/L；2.25g/L；2.5g/L；2.75g/L；3g/L；3.25g/L；3.5g/L；3.75g/L；4g/L；4.25g/L；4.5g/L；4.75g/L；5g/L；5.25g/L；5.5g/L；5.75g/L；6g/L；6.25g/L；6.5g/L；6.75g/L；或7g/L。
在一些实施方案中，培养基可补充有玉米浆，向培养基中补充的量为约5g/L；6g/L；7g/L；8g/L；9g/L；10g/L；11g/L；12g/L；13g/L；14g/L；15g/L；16g/L；17g/L；18g/L；19g/L；20g/L；21g/L；22g/L；23g/L；24g/L；25g/L；26g/L；27g/L；28g/L；29g/L；30g/L；31g/L；32g/L；33g/L；34g/L；35g/L；36g/L；37g/L；38g/L；39g/L；40g/L；41g/L；42g/L；43g/L；44g/L；45g/L；46g/L；47g/L；48g/L；49g/L；50g/L；51g/L；52g/L；53g/L；54g/L；55g/L；56g/L；57g/L；58g/L；59g/L；60g/L；61g/L；62g/L；63g/L；64g/L；65g/L；66g/L；67g/L；68g/L；69g/L；或70g/L。
在一些实施方案中，反应器的温度可维持在约15℃和约45℃之间。在一些实施方案中，反应器可具有约20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃或40℃的温度。
在一些实施方案中，pH可具有约3至约6的水平。在一些实施方案中，pH可以是3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9或6.0。
在一些实施方案中，经由加入一种或多种化学品，pH可维持在恒定水平。例如，在一些实施方案中，可加入氢氧化铵以维持pH。在一些实施方案中，可将氢氧化铵加入到培养基中，使得其中氢氧化铵的水平为约5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％的氢氧化铵。
在一些实施方案中，可通过吹扫维持氧水平。例如，在一些实施方案中，通过吹扫0.5体积/体积/分钟至1.5体积/体积/分钟的空气和通过增加搅拌以维持10％至30％的设定点，可将溶解氧维持在恒定水平。
在一些实施方案中，可基于包含约2.5g/L至约50g/L的碳源(例如，葡萄糖、山梨醇或乳糖)的过夜种子培养物来完成反应器的接种。在一些实施方案中，过夜种子培养物可包含玉米浆，例如约2.5g/L至约50g/L的玉米浆。
在一些实施方案中，接种百分比可在初始填充体积的约5％至20％的范围内。接种后，可向反应器中加入约50％至约80％的所选择的碳源溶液，直到反应器充满和/或达到所需的上清液肽浓度。在一些实施方案中，填充反应器所需的时间可为约86小时至约160小时。在一些实施方案中，达到期望的肽浓度所需的量可在约0.8g/L至约1.2g/L的范围内。在发酵完成后，内容物可经过细胞分离单元并任选地浓缩，这取决于材料的预期用途。
本文提供了用于酵母发酵培养基的另外的配方。
酵母细胞发酵培养基和原种的配方如下所述：(1)MSM培养基配方：2g/L柠檬酸钠二水合物；1g/L硫酸钙二水合物(0.79g/L无水硫酸钙)；42.9g/L磷酸二氢钾；5.17g/L硫酸铵；14.33g/L硫酸钾；11.7g/L硫酸镁七水合物；2mL/L PTM1微量盐溶液；0.4ppm生物素(来自500×，200ppm储备液)；1％至2％纯甘油或其他碳源。(2)PTM1微量盐溶液：硫酸铜-5H2O6.0g；碘化钠0.08g；硫酸锰-H2O 3.0g；钼酸钠-2H2O 0.2g；硼酸0.02g；氯化钴0.5g；氯化锌20.0g；硫酸亚铁-7H2O 65.0g；生物素0.2g；硫酸5.0ml；加水至终体积为1升。乳酸克鲁维酵母确定成分培养基(DMSor)的例示性组成如下：11.83g/L KH2PO4、2.299g/L K2HPO4、20g/L可发酵糖(例如半乳糖、麦芽糖、拉托三糖、蔗糖、果糖或葡萄糖和/或糖醇，例如赤藓醇、氢化淀粉水解产物、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇、甘露醇和木糖醇)、1g/L MgSO4.7H2O、10g/L(NH4)SO4、0.33g/L CaCl2.2H2O、1g/L NaCl、1g/L KCl、5mg/L CuSO4.5H2O、30mg/LMnSO4.H2O、10mg/L ZnCl2、1mg/L KI、2mg/L CoCl2.6H2O、8mg/LNa2MoO4.2H2O、0.4mg/LH3BO3、15mg/L FeCl3.6H2O、0.8mg/L生物素、20mg/L泛酸钙、15mg/L硫胺素、16mg/L肌醇、10mg/L烟酸和4mg/L吡哆醇。
肽降解
蛋白质、多肽和肽在生物样品和溶液(例如，细胞培养物和/或发酵期间)两者中降解。检测肽降解(例如，CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的降解)的方法是本领域熟知的。此处可使用熟知的检测肽降解(例如，在发酵期间)的方法中的任一者。
在一些实施方案中，肽降解可使用以下方法进行检测：同位素标记技术；液相色谱/质谱(LC/MS)；HPLC；放射性氨基酸的掺入和随后的检测，例如经由闪烁计数；使用报告蛋白质，例如可被检测(例如通过荧光、光谱、发光测定法等)的蛋白质；一种或多种生物发光蛋白质和/或荧光蛋白质和/或其融合物的荧光强度；脉冲追踪分析(例如，用放射性氨基酸对细胞进行脉冲标记，并在用未标记前体追踪的同时跟随标记蛋白质的衰变，并阻止蛋白质合成和测量总蛋白质水平随时间推移的衰变)；放线菌酮追踪测定；
在一些实施方案中，测定可用于检测肽降解，其中使样品与非荧光化合物接触，该非荧光化合物可操作以与所述样品中通过肽降解产生的游离伯胺反应，然后产生可定量并与标准进行比较的荧光信号。根据本公开，可用作游离胺的荧光标记的非荧光化合物的示例是3-(4-羧基苯甲酰基)喹啉-2-甲醛(CBQCA)、荧光胺和邻苯二醛。
在一些实施方案中，测定来自报告蛋白质的读出信号的方法取决于报告蛋白质的性质。例如，对于荧光报告蛋白质，读出信号对应于荧光信号的强度。例如，可使用基于光谱法、荧光测定法、光度测定法和/或发光法的方法和检测系统来测量读出信号。此类方法和检测系统在本领域中是熟知的。
在一些实施方案中，本领域普通技术人员已知的标准免疫学程序可用于检测肽降解。例如，在一些实施方案中，可使用采用可检测抗体的免疫测定来检测样品中的肽降解。此类免疫测定包括例如凝集测定、ELISA、Pandex微量荧光测定、流式细胞术、血清诊断测定和免疫组织化学染色程序，所有这些程序都是本领域熟知的。在一些实施方案中，一个样品中(例如，荧光的)水平可与标准进行比较。抗体可通过本领域熟知的各种方法进行检测。例如，可检测标记可直接或间接地附着于抗体。有用的标记包括例如放射性核苷酸、酶、荧光团、色原体和化学发光标记。
检测肽降解的示例性方法提供于：美国专利号5,766,927；7,504,253；9,201,073；9,429,566；美国专利申请20120028286；Eldeeb等人，“A molecular toolbox forstudying protein degradation in mammalian cells”，J Neurochem.，2019年11月，第151卷第4期：第520-533页；以及Buchanan等人，“Cycloheximide Chase Analysis ofProtein Degradation in Saccharomyces cerevisiae”，J Vis Exp.，2016年，第110期：第53975页，这些专利和文献的公开内容全文以引用方式并入本文。
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CRIP掺入植物或其部分
本文所述的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白和肽-IA，以及/或者包含本文所述的至少一个CRIP或肽-IA的杀昆虫蛋白，可掺入植物、植物组织、植物细胞、植物种子和/或其植物部分，用于CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA和/或编码它们的多核苷酸序列的稳定或瞬时表达。
在一些实施方案中，CRIP或肽-IA可使用本领域已知的重组技术掺入到植物中。在一些实施方案中，CRIP或肽-IA或者包含至少一个CRIP或肽-IA的杀昆虫蛋白可以是可包含一个或多个CRIP或肽-IA单体的杀昆虫蛋白的形式。在其他实施方案中，包含至少一种CRIP或肽-IA的杀昆虫蛋白还可包含一个或多个非CRIP或非IA多肽或蛋白质，例如可操作地连接到一个或多个CRIP或肽-IA的内质网信号肽。
如本章节所用，关于转基因植物、植物组织、植物细胞和植物种子，术语“CRIP”或“肽-IA”还包括除一种或多种非CRIP或非IA肽、多肽或蛋白质之外还包含一种或多种CRIP或肽-IA的杀昆虫蛋白，并且“CRIP多核苷酸”或“IA多核苷酸”同样也用于包括可操作以表达和/或编码除一种或多种非CRIP或非IA多肽或蛋白质之外还包含一种或多种CRIP或肽-IA的杀昆虫蛋白的多核苷酸或多核苷酸组。
将CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA掺入植物(即，产生表达CRIP或肽-IA的转基因植物)的目的是经由昆虫对昆虫消耗的植物组织中表达的转基因CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的消耗，将杀昆虫蛋白递送给害虫。当昆虫从其食物(例如，以转基因植物为食的昆虫)中消耗CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA时，消耗的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA可具有抑制昆虫生长、削弱其移动或甚至杀死昆虫的能力。因此，表达CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA多核苷酸和/或CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA多肽的转基因植物可在多种植物组织中表达所述的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA多核苷酸/多肽，包括但不限于表皮(例如叶肉)；周皮；韧皮部；木质部；薄壁组织；厚角组织；厚壁组织；和初生和次生分生组织。例如，在一些实施方案中，编码CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的多核苷酸序列能够可操作地连接到含有磷酸烯醇丙酮酸羧化酶启动子的调节区，从而导致CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA在植物叶肉组织中的表达。
表达CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA和/或可操作以表达CRIP/肽-IA的多核苷酸的转基因植物可通过本领域普通技术人员熟知的各种方法和方案中的任一者产生；本发明的此类方法不需要使用将核苷酸构建体引入植物的特定方法，只要核苷酸构建体能够进入植物的至少一个细胞的内部。将核苷酸构建体引入植物的方法是本领域已知的，包括但不限于稳定转化方法、瞬时转化方法和病毒介导的方法。“转基因植物”或“转化的植物”或“稳定转化的”植物或细胞或组织是指已将外源核酸序列或DNA片段掺入或整合入植物细胞的植物。这些核酸序列包括外源的或不存在于未转化的植物细胞中的那些，以及可以是内源的或存在于未转化的植物细胞中的那些。“异源的”通常是指对于细胞或它们所存在的天然基因组的部分不是内源的，并且已通过感染、转染、显微镜下注射、电穿孔、显微投影等加入到细胞中的核酸序列。
植物细胞的转化可通过本领域已知的几种技术中的一种技术完成。通常，表达外源或异源感兴趣的肽或多肽(例如CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA)的构建体将包含驱动基因转录的启动子，以及允许转录终止和聚腺苷酸化的3’非翻译区。此类构建体的设计和组织是本领域熟知的。在一些实施方案中，基因可被工程改造，使得所得肽被分泌，或在植物细胞内以其他方式靶向特定区和/或细胞器。例如，基因可被工程改造以包含信号肽，以促进肽向内质网的转移。还优选将植物表达盒工程化以包含内含子，使得内含子的mRNA加工是表达所需的。
通常，植物表达盒可插入到植物转化载体中。该植物转化载体可由实现植物转化所需的一种或多种DNA载体组成。例如，本领域的常规实践是利用由一个以上连续DNA片段组成的植物转化载体。这些载体在本领域中通常称为“二元载体”。二元载体以及具有辅助质粒的载体最常用于农杆菌介导的转化，其中实现有效转化所需的DNA片段的大小和复杂性相当大，并且将功能分离到单独的DNA分子上是有利的。二元载体通常包含质粒载体，该质粒载体包含T-DNA转移所需的顺式作用序列(诸如左边界和右边界)、经工程改造以能够在植物细胞中表达的选择性标记和“感兴趣的基因”(经工程改造以能够在期望产生转基因植物的植物细胞中表达的基因)。细菌复制所需的序列也存在于该质粒载体上。顺式作用序列以允许有效转移到植物细胞中并在其中表达的方式排列。例如，选择标记基因和CRIP/肽-IA位于左边界和右边界之间。通常第二质粒载体包含介导T-DNA从农杆菌转移到植物细胞的反式作用因子。该质粒通常包含毒力功能(Vir基因)，其允许农杆菌感染植物细胞，以及通过在边界序列切割和vir介导的DNA转移来转移DNA，如本领域所理解的(Hellens和Mullineux，2000年，Trends in Plant Science，第5卷：第446-451页)。几种类型的农杆菌菌株(例如，LBA4404、GV3101、EHA101、EHA105等)可用于植物转化。第二质粒载体对于通过其他方法诸如显微投影、显微镜下注射、电穿孔、聚乙二醇等转化植物不是必需的。
通常，植物转化方法包括将异源DNA转移到靶植物细胞(例如未成熟或成熟胚、悬浮培养物、未分化愈伤组织、原生质体等)中，随后应用最大阈值水平的适当选择(取决于选择标记基因)以从一组未转化的细胞团中回收转化的植物细胞。外植体通常被转移到新鲜供应的相同培养基中并进行常规培养。随后，在置于补充有最大阈值水平的选择剂的再生培养基后，转化的细胞分化成芽。然后将芽转移到选择性生根培养基中以回收生根的芽或小植株。然后转基因小植株生长成成熟的植物并产生可育种子(例如Hiei等人，1994年，ThePlant Journal，第6卷：第271-282页；Ishida等人，1996年，Nature Biotechnology，第14卷：第745-750页)。外植体通常被转移到新鲜供应的相同培养基中并进行常规培养。产生转基因植物的技术和方法的一般描述见于：Ayres和Park，1994年，Critical Reviews inPlant Science，第13卷：第219-239；以及Bommineni和Jauhar，1997年，Maydica，第42卷：第107-120页。因为转化的材料包含许多细胞，所以转化的和未转化的细胞两者均存在于任一块受试的靶愈伤组织或组织或细胞组中。杀死非转化的细胞并使转化的细胞增殖的能力产生了转化的植物培养物。通常，除去未转化的细胞的能力受限于快速回收转化的植物细胞和成功产生转基因植物。
转化方案以及将核苷酸序列引入植物的方案可取决于靶向用于转化的植物或植物细胞的类型，即单子叶植物或双子叶植物而变化。转基因植物的产生可通过几种方法中的一者进行，包括但不限于显微镜下注射、电穿孔、直接基因转移、通过农杆菌将异源DNA引入植物细胞(农杆菌介导的转化)、用粘附于颗粒的异源外源DNA轰击植物细胞、弹道颗粒加速、气溶胶束转化、Lec1转化和各种其他非颗粒直接介导的转移DNA的方法。示例性转化方案公开于美国公开申请号20010026941；美国专利号4,945,050；国际公开号WO 91/00915；和美国公开申请号2002015066，这些专利的公开内容全文以引用方式并入本文。
叶绿体也可容易地转化，并且关于叶绿体转化的方法是本领域已知的。例如，参见Svab等人，1990年，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第87卷：第8526-8530页；Svab和Maliga，1993年，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第90卷：第913-917页；Svab和Maliga，1993年，EMBO J.，第12卷：第601-606页，这些文献的公开内容全文以引用方式并入本文。叶绿体转化的方法依赖于颗粒枪递送含有选择标记的DNA和通过同源重组将DNA靶向质体基因组。另外，质体转化可通过组织优选表达核编码的和质体指导的RNA聚合酶而反式激活沉默质体携带的转基因来实现。该系统已报告于McBride等人，1994年，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第91卷：第7301-7305页。
异源外源DNA整合到植物细胞中后，本领域普通技术人员可在培养基中应用最大阈值水平的适当选择化学品/试剂(例如抗生素)以杀死未转化的细胞，并通过将所述存活细胞有规律地转移到新鲜培养基中来使从该选择处理存活的推定转化的细胞分离和生长。通过连续传代和用适当选择进行攻击，技术人员鉴定和增殖用质粒载体转化的细胞。然后可使用分子和生物化学方法来确认整合到转基因植物基因组中的感兴趣的异源基因的存在。
可根据本领域普通技术人员已知的常规方法使已经转化的细胞生长成植物。例如，参见McCormick等人，1986年，Plant Cell Reports，第5卷：第81-84页，其公开内容全文以引用方式并入本文。然后可使这些植物生长，并且用相同的转化菌株或不同的菌株授粉，并且鉴定具有所需表型特征的组成型表达的所得杂种。可培育两代或多代以确保稳定地维持和遗传所需表型特征的表达，然后收获种子以确保已实现所需表型特征的表达。以这种方式，本公开提供了转化的种子(也称为“转基因种子”)，其具有稳定地掺入其基因组中的本发明的核苷酸构建体，例如本发明的表达盒。
在各种实施方案中，本公开提供了杀昆虫蛋白，该杀昆虫蛋白包含至少一种CRIP/肽-IA，其作为如上所述的昆虫蛋白酶、蛋白酶和肽酶(本文统称为“蛋白酶”)的底物。
在一些实施方案中，可接受CRIP或肽-IA表达的转基因植物或其部分和/或包含CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或肽-IA的组合物，如本文所述，可包括：苜蓿、香蕉、大麦、豆、西兰花、卷心菜、卡诺拉油菜、胡萝卜、木薯、蓖麻、花椰菜、芹菜、鹰嘴豆、大白菜、柑橘、椰子、咖啡、玉米、三叶草、棉花、葫芦、黄瓜、花旗松、茄子、桉树、亚麻、大蒜、葡萄、啤酒花、韭葱、莴苣、火炬松、小米、甜瓜、坚果、燕麦、橄榄、洋葱、观赏植物、棕榈、牧草、豌豆、花生、胡椒、木豆、松树、马铃薯、白杨、南瓜、辐射松、萝卜、油菜籽、稻、根茎、黑麦、红花、灌木、高粱、南方松、大豆、菠菜、南瓜、草莓、甜菜、甘蔗、向日葵、甜玉米、香枫、甘薯、柳枝稷、茶、烟草、番茄、黑小麦、草皮草、西瓜和小麦植物。在一些实施方案中，转基因植物可从最初用本文所述的DNA构建体转化的细胞生长。在其他实施方案中，转基因植物可在特定的组织或植物部分，例如叶、茎、花、萼片、果实、根或种子或它们的组合中表达所编码的CRIP/肽-IA组合物。
前述植物掺入方法/技术中的任一者都可用于生产CRIP和/或肽-IA(例如，有助于此类方法的杀昆虫剂，例如，氨基酸的聚合物、肽或蛋白质)。例如，上述方法中的任一者都可用于生产、产生、制造、表达、转录、翻译、合成或以其他方式产生本文所述的CRIP或肽-IA中的任一者，包括但不限于ACTX肽(例如，U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、rκ-ACTX-Hv1c、ω-ACTX-Hv1a和/或ω-ACTX-Hv1a+2)；Γ-CNTX-Pn1a；U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b；TVP；Av2；Av3；AVP；和/或Bt毒素(例如，Cry毒素、Cyt毒素或Vip)。
具有可切割接头和不可切割接头的蛋白质
在一些实施方案中，包含至少一种CRIP(或肽-IA)的杀昆虫蛋白能够可操作地连接到可切割肽上。在其他实施方案中，包含至少一种CRIP(或肽-IA)的杀昆虫蛋白能够可操作地连接到非可切割肽上。
在一些实施方案中，包含至少一种CRIP/肽-IA的杀昆虫蛋白可具有两个或更多个可切割肽，其中该杀昆虫蛋白包含昆虫可切割接头(L)，该昆虫可切割接头与包含(CRIP-L)n的构建体框内融合，其中“n”是1至200、或1至100、或1至10的整数。在另一个实施方案中，包含至少一种CRIP的杀昆虫蛋白，并且如本文所述，包含与CRIP可操作地连接的内质网信号肽(ERSP)，该ERSP与昆虫可切割接头(L)和/或重复构建体(L-CRIP)n或(CRIP-L)n可操作地连接，其中n是1至200、或1至100、或1至10的整数。
在各种实施方案中，示例性杀昆虫蛋白可包括蛋白质构建体，该蛋白质构建体包含：(ERSP)-(CRIP-L)n；(ERSP)-(L)-(CRIP-L)n；(ERSP)-(L-CRIP)n；(ERSP)-(L-CRIP)n-(L)；其中n是1至200、或1至100、或1至10的整数。在上述各种相关实施方案中，CRIP是前述的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽，L是不可切割或可切割肽，并且n是1至200的整数，优选1至100的整数，更优选1至10的整数。在一些实施方案中，杀昆虫蛋白可包含相同或不同的CRIP肽和相同或不同的昆虫可切割肽。在一些实施方案中，C-末端CRIP在其C-末端与可切割肽可操作地连接，该可切割肽可操作地在昆虫的肠道环境中被切割。在一些实施方案中，N-末端CRIP在其N-末端与可切割肽可操作地连接，该可切割肽可操作地在昆虫的肠道环境中被切割。
在昆虫肠道环境中发现的一些可用的蛋白酶和肽酶依赖于昆虫的生命阶段，因为这些酶通常在空间和时间上表达。昆虫的消化系统由消化道和相关腺体组成。食物进入口腔并与可含有或不含消化蛋白酶和肽酶的分泌物混合。前肠和后肠起源于外胚层。前肠通常用作生食的贮藏库。离散的食物团从前肠进入中肠(肠系膜或胃)。中肠是食物营养的消化和吸收部位。通常，中肠中某些蛋白酶和肽酶的存在遵循肠的pH。人胃肠系统中的某些蛋白酶和肽酶可包括：胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、羧肽酶、氨肽酶和二肽酶。
昆虫的肠道环境包括食草动物物种的消化系统区，在消化期间肽和蛋白质在该消化系统区降解。在昆虫肠道环境中发现的一些可用蛋白酶和肽酶可包括：(1)丝氨酸蛋白酶；(2)半胱氨酸蛋白酶；(3)天冬氨酸蛋白酶，和(4)金属蛋白酶。
植食性昆虫的消化系统中两种主要的蛋白酶类型是丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶。Murdock等人(1987年)对属于鞘翅目的多种害虫的中肠酶进行了详细研究，而Srinivasan等人(2008年)已报告了属于鳞翅目的多种害虫的中肠酶。已知丝氨酸蛋白酶在幼虫肠道环境中占主导地位，并且在鳞翅目中占总消化活性的约95％，而鞘翅目物种具有更宽范围的主导肠道蛋白酶，包括半胱氨酸蛋白酶。
木瓜蛋白酶家族包含具有多种活性的肽酶，包括具有广泛特异性的内肽酶(诸如木瓜蛋白酶)、具有非常窄特异性的内肽酶(诸如甘氨酰内肽酶)、氨肽酶、二肽基肽酶，以及具有内肽酶和外肽酶活性的肽酶(诸如组织蛋白酶B和H)。在各种昆虫的中肠中发现的其他示例性蛋白酶包括胰蛋白酶样酶，例如胰蛋白酶和糜蛋白酶、胃蛋白酶、羧肽酶-B和氨基三肽酶。
丝氨酸蛋白酶广泛分布于几乎所有动物和微生物中(Joanitti等人，2006年)。在高等生物体中，近2％的基因编码这些酶(Barrette-Ng等人，2003年)。丝氨酸蛋白酶对于其宿主生物体的维持和存活是基本上不可缺少的，其在许多生物过程中起关键作用。丝氨酸蛋白酶通常根据它们的底物特异性分类，特别是根据P1处的残基是否为：胰蛋白酶样(Lys/Arg，优选在P1处)、糜蛋白酶样(大的疏水残基，诸如在P1处的Phe/Tyr/Leu)或弹性蛋白酶样(小的疏水残基，诸如在P1处的Ala/Val)(由Tyndall等人2005年修订)。丝氨酸蛋白酶是一类蛋白水解酶，其中心催化机制由三个不变的残基组成，即天冬氨酸、组氨酸和独特反应性丝氨酸，后者使其得名“催化三联体”。Asp-His-Ser三联体可见于至少四种不同的结构背景(Hedstrom，2002年)。丝氨酸蛋白酶的这四个族以糜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、羧肽酶Y和Clp蛋白酶为代表。已经最详细研究的糜蛋白酶样族的三种丝氨酸蛋白酶是糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶。最近，已发现了具有新型催化三联体和二联体的丝氨酸蛋白酶在消化中的作用，包括Ser-His-Glu、Ser-Lys/His、His-Ser-His和N-末端Ser。
在昆虫的肠道环境中发现的一类充分研究的消化酶是半胱氨酸蛋白酶类。术语“半胱氨酸蛋白酶”旨在描述在酶催化位点具有半胱氨酸残基的高反应性巯基的蛋白酶。证据表明，许多植食性昆虫和植物寄生线虫至少部分依赖中肠半胱氨酸蛋白酶用于蛋白质消化。这些包括但不限于半翅目，尤其是南瓜蝽(南瓜缘蝽(Anasa tristis))；绿椿象(拟绿蝽(Acrosternum hilare))；点蜂缘椿象(Riptortus clavatus)；以及迄今为止所检查的几乎所有鞘翅目，尤其是科罗拉多马铃薯甲虫(马铃薯甲虫)；三线马铃薯甲虫(Lematrilineata)；天门冬甲虫(芦笋甲虫(Crioceris asparagi))；墨西哥豆甲虫(墨西哥豆瓢虫(Epilachna varivestis))；赤拟榖盗甲虫(赤拟谷盗(Triolium castaneum))；糊涂粉甲虫(杂拟谷盗(Tribolium confusum))；跳蚤甲虫(凹胫跳甲属(Chaetocnema)物种、Haltica物种和毛跳甲属(Epitrix)物种)；玉米根虫(叶甲属(Diabrotica)物种)；四纹豆象(Callosobruchus aculatue)；象鼻虫(苜蓿叶象甲(Antonomus grandis))；稻象虫(米象(Sitophilus oryza))；玉米象(Sitophilus zeamais)；蚰子(谷象(Sitophilusgranarius))；埃及苜蓿叶象虫(苜蓿叶象虫(Hypera postica))；大豆象(菜豆象(Acanthoseelides obtectus))；谷蠹(Rhyzopertha dominica)；黄粉虫(大黄粉虫(Tenebrio molitor))；缨翅目(Thysanoptera)，尤其是西方花蓟马(西花蓟马(Frankliniella occidentalis))；双翅目，尤其是潜叶蝇物种(三叶斑潜蝇(Liriomyza trifolii))；植物寄生线虫，尤其是马铃薯白线虫(Globodera物种)、甜菜孢囊线虫(Heteroderaschachtii)和根瘤线虫(根结线虫(Meloidogyne)物种)。
另一类消化酶是天冬氨酸蛋白酶。术语“天冬氨酸蛋白酶”旨在描述在酶催化位点具有两个高度反应性的天冬氨酸残基的蛋白酶，并且其最通常的特征是对胃蛋白酶抑制剂的特异性抑制，该胃蛋白酶抑制剂是几乎所有已知天冬氨酸蛋白酶的低分子量抑制剂。证据表明，许多植食性昆虫部分依赖中肠天冬氨酸蛋白酶进行蛋白质消化，最常见的是与半胱氨酸蛋白酶结合。这些植食性昆虫包括但不限于半翅目，尤其是(长红锥蝽(Rhodniusprolixus)和床虱(臭虫(Cimex)物种)，以及瘤蝽科(Phymatidae)、蝽科(Pentatomidae)、长蝽科(Lygaeidae)和负子蝽科(Belostomatidae)的成员；鞘翅目，在芫菁科(Meloidae)、叶甲科(Chrysomelidae)、食蚜瓢虫(Coccinelidae)和豆象科(Bruchidae)中都属于扁虫下目(Cucujiformia)系列，尤其是科罗拉多马铃薯甲虫(马铃薯甲虫)、三线马铃薯甲虫(Lematri lineata)；南方和西方玉米根虫(玉米根虫、黄瓜条叶甲(undecimpunctata)和西方玉米根虫(D.virgifera)、象鼻虫(苜蓿叶象甲)、南瓜蝽(南瓜缘蝽)；跳甲(萝卜菜跳甲(Phyllotreta crucifera))、豆像甲虫(四纹豆象(Callosobruchus maculatus))、墨西哥豆甲虫(墨西哥豆瓢虫)、蚕豆日潜蝇(大豆潜叶虫(Odontota horni))、具缘芫菁(原野豆芫菁(Epicauta pestifera))和赤拟榖盗甲虫(赤拟谷盗)；双翅目，尤其是家蝇(普通家蝇)(Terra和Ferreira，1994年，Comn.Biochem.Physiol.，109B:第1-62页；Wolfson和Murdock，1990年，J.Chem.Ecol.，第16卷：第1089-1102页)。
多核苷酸向植物中的掺入
关于异源多肽在转基因植物中表达的挑战是在宿主生物体中表达时维持所引入多肽的期望效果(例如杀昆虫活性)；维持这种作用的一种方式是通过使用可操作地连接的内质网信号肽(ERSP)来增加正确的蛋白质折叠的机会。另一种维持转基因蛋白质作用的方法是掺入翻译稳定蛋白质(STA)。
内质网信号肽(ERSP)
重组蛋白质对ER的亚细胞靶向可通过使用与所述重组蛋白质可操作地连接的ERSP来实现；这允许此类蛋白质的正确组装和/或折叠，以及这些重组蛋白质在植物中的高水平积累。关于将宿主蛋白质区室化到细胞内贮藏的示例性方法公开于McCormick等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第96卷第2期：第703-708页，1999年；Staub等人，NatureBiotechnology，第18卷：第333-338页，2000年；Conrad等人，Plant Mol.Biol.，第38卷：第101-109页，1998年；以及Stoger等人，Plant Mol.Biol.，第42卷：第583-590页，2000年，这些文献的公开内容全文以引用方式并入本文。因此，实现重组蛋白质的正确组装和/或折叠的一种方式是将内质网信号肽(ERSP)可操作地连接到感兴趣的重组蛋白质。
在一些实施方案中，包含内质网信号肽(ERSP)的肽可与CRIP(称为ERSP-CRIP)可操作地连接，其中所述ERSP是所述肽的N-末端，并且其中ERSP肽的长度为3个至60个氨基酸，长度为5个至50个氨基酸，长度为20个至30个氨基酸，并且/或者其中肽是BAAS，或烟草伸展蛋白信号肽，或修饰的烟草伸展蛋白信号肽，或阿什杜松(Juniperus ashei)的Jun a3信号肽。例如，在一些实施方案中，可用编码本文所述为内质网信号肽(ERSP)和/或CRIP的肽中的任一者的核苷酸转化植物。
在一些实施方案中，包含内质网信号肽(ERSP)的蛋白质可与CRIP可操作地连接，与间插接头肽(L或接头)可操作地连接，称为ERSP-L-CRIP或ERSP-CRIP-L，其中所述ERSP是所述蛋白质的N-末端，并且所述L或接头可以在CRIP的N-末端侧(上游)或CRIP的C-末端侧(下游)。称为ERSP-L-CRIP或ERSP-CRIP-L的蛋白质，包含本文所述的ERSP或CRIP中的任一者，并且其中所述L可以是不可切割接头肽或可切割接头肽，其可在蛋白质表达过程期间在植物细胞中是可切割的或可在昆虫肠道环境和血淋巴环境中是可切割的，并且由本文所述或本文档教导的间插接头肽(LINKER)组成，包括以下序列：IGER(SEQ ID NO:31)、EEKKN(SEQ ID NO:32)和ETMFKHGL(SEQ ID NO:33)。
在一些实施方案中，包含内质网信号肽(ERSP)的蛋白质能够可操作地连接到CRIP，该CRIP继而又可操作地连接到翻译稳定蛋白质(STA)。此处，这种构型称为ERSP-STA-CRIP或ERSP-CRIP-STA，其中所述ERSP是所述蛋白质的N-末端，所述STA可在CRIP的N-末端侧(上游)，或在CRIP的C-末端侧(下游)。在一些实施方案中，称为ERSP-STA-CRIP或ERSP-CRIP-STA的包括本文所述的ERSP或CRIP中的任一者的蛋白质能够可操作地连接到STA，例如本文所述或本文档教导的任何翻译稳定蛋白质，包括GFP(绿色荧光蛋白质；SEQ ID NO:34；NCBI登录号P42212)或Jun a 3(阿什杜松；SEQ ID NO:36；NCBI登录号P81295.1)。
例如，使用上述转染方法中的任一者，可用编码包含一种或多种CRIP和一种或多种非CRIP肽、多肽或蛋白质的CRIP或杀昆虫蛋白的DNA序列瞬时或稳定转染植物；另选地，可用编码可操作地连接到编码ERSP、LINKER和/或STA蛋白质的多核苷酸的CRIP的多核苷酸转染植物。例如，在一些实施方案中，可转染转基因植物或植物基因组以掺入编码内质网信号肽(ERSP)、CRIP和/或间插接头肽(LINKER，L)的多核苷酸序列，从而使从异源DNA转录的mRNA在转化植物中表达。
本公开可用于任何植物物种的转化，包括但不限于单子叶植物和双子叶植物。转基因方法或PEP将是特别有用的方法的作物包括但不限于：苜蓿、棉花、番茄、玉蜀黍、小麦、玉米、甜玉米、紫花苜蓿、大豆、高粱、红豌豆、亚麻籽、红花、油菜籽、油菜、稻、大豆、大麦、向日葵、树(包括针叶树和落叶树)、花(包括商业上和温室中生长的那些)、羽扇豆、柳枝稷、甘蔗、马铃薯、番茄、烟草、十字花科植物、胡椒、甜菜、大麦和油菜、芸苔属物种、黑麦、小米、花生、甘薯、木薯、咖啡、椰子、菠萝、柑橘树、可可、茶、香蕉、鳄梨、无花果、番石榴、芒果、橄榄、木瓜、腰果、澳洲坚果、杏仁、燕麦、蔬菜、观赏植物和针叶树。
在一些实施方案中，本文所述的CRIP表达开放阅读框(ORF)是多核苷酸序列，该多核苷酸序列将使植物能够表达mRNA，该mRNA继而又将被翻译成肽，这些肽被正确表达、折叠和/或积累到这样的程度，以致所述蛋白质提供足以抑制和/或杀死一种或多种害虫的剂量。在一个实施方案中，蛋白质CRIP表达ORF的示例可以是富含半胱氨酸的杀昆虫蛋白(crip)、“ersp”(即编码ERSP多肽的多核苷酸序列)、“linker”(即编码LINKER多肽的多核苷酸序列)、“sta”(即编码STA多肽的多核苷酸序列)或它们的任何组合，并且可以下文的方程形式描述：
ersp-sta-(linkeri-cripj)n或ersp-(cripj-linkeri)n-sta
多核苷酸方程的前述例示性实施方案将导致表达以下蛋白质复合物：ERSP-STA-(LINKERI-CRIPJ)N，含有四种可能肽组分，用破折号分离每种组分。ersp的核苷酸组分是编码植物内质网运输信号肽(ERSP)的多核苷酸片段。sta的组分是编码翻译稳定蛋白质(STA)的多核苷酸片段，该STA有助于在植物中表达的CRIP的积累，然而，在一些实施方案中，在CRIP表达ORF中可能不需要包括sta。linkeri的组分是编码间插接头肽(L或LINKER)的多核苷酸片段，以将CRIP与ORF中包含的其他组分以及翻译稳定蛋白质分离。下标字母“i”表示在一些实施方案中，不同类型的接头肽可用于CRIP表达ORF中。组分“crip”表示编码CRIP的多核苷酸片段。下标“j”表示不同的CRIP多核苷酸可包括在CRIP表达ORF中。例如，在一些实施方案中，CRIP多核苷酸序列可编码具有氨基酸取代或氨基酸缺失的CRIP。如“(linkeri-cripj)n”中所示的下标“n”表示编码间插接头肽和CRIP的核苷酸的结构可在相同CRIP表达ORF中的相同开放阅读框中重复“n”次，其中“n”可以是1至10的任何整数；“n”可以是1至10，具体地“n”可以是1、2、3、4或5，并且在一些实施方案中“n”是6、7、8、9或10。重复序列可包含编码不同间插接头(LINKER)和不同CRIP的多核苷酸区段。包括相同CRIP表达ORF中的重复序列的不同多核苷酸片段都在相同的翻译框中。在一些实施方案中，在CRIP表达ORF中包含sta多核苷酸可能不是必需的。例如，ersp多核苷酸序列可直接与编码CRIP变体多核苷酸的多核苷酸连接而无需接头。
在前述的示例性方程中，编码多肽“CRIP”的多核苷酸“crip”可以是编码本文所述的任何CRIP的多核苷酸序列。例如，在一些实施方案中，“crip”多核苷酸可编码CRIP，包括但不限于ACTX肽(例如，U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、rκ-ACTX-Hv1c、ω-ACTX-Hv1a和/或ω-ACTX-Hv1a+2)；Γ-CNTX-Pn1a；U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b；TVP；Av2；Av3或AVP。此外，上述方程也可用于编码肽-IA(例如适用于此类方法的杀昆虫剂，例如氨基酸聚合物、肽或蛋白质)，诸如Bt毒素(例如，Cry毒素、Cyt毒素或Vip)。
在前述的示例性方程中，编码多肽“CRIP”的多核苷酸“crip”可以是编码本文所述的任何CRIP的多核苷酸序列，例如，包含与以下肽具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列的CRIP：具有SEQID NO:192-370中任一项所示的氨基酸序列的蜘蛛肽；具有SEQ ID NO:60-64、192-370和594中任一项所示的氨基酸序列的ACTX肽(例如，U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、κ-ACTX-Hv1a、κ+2-ACTX-Hv1a、ω-ACTX-Hv1a和/或ω+2-ACTX-Hv1a)；具有SEQ ID NO:65中任一项所示的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a；具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽；具有SEQ ID NO:2-15、49-53、2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651或653-654中任一项所示的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)；具有SEQ ID NO:66、88-191中任一项所示的氨基酸序列的蝎肽；具有SEQ ID NO:371-411中任一项所示的氨基酸序列的海葵肽；来自蛇锁海葵的具有SEQ IDNO:44所示的氨基酸序列的Av3多肽；具有SEQ ID NO:45-47中任一项所示的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)；或芋螺毒素。
在一些实施方案中，CRIP ORF从它的5’-末端的ersp开始。当从转基因植物中表达时，为了使CRIP正确折叠并发挥功能，它必须具有与编码CRIP的多核苷酸框内融合的ersp核苷酸。在细胞翻译过程期间，翻译的ERSP可通过与被称为信号识别颗粒的细胞组分结合来指导被翻译的CRIP插入到植物细胞的内质网(ER)中。在ER内，ERSP肽被信号肽酶切割，并且CRIP被释放进入ER，在那里CRIP在翻译后修饰过程期间正确折叠，例如，形成二硫键。没有任何另外的滞留蛋白质信号，蛋白质通过ER转运到高尔基体，在那里它最终分泌到质膜外并进入质外体空间。CRIP可以有效地在质外体空间积累以达到在植物中的杀昆虫剂量。
ERSP肽位于植物翻译的CRIP复合物的N-末端区，并且ERSP部分由约3个至60个氨基酸组成。在一些实施方案中，它是5个至50个氨基酸。在一些实施方案中，它是10个至40个氨基酸，但最经常由15个至20个；20个至25个；或25个至30个氨基酸组成。ERSP是信号肽，如此命名是因为它指导蛋白质的运输。信号肽还可称为靶向信号、信号序列、转运肽或定位信号。用于ER运输的信号肽通常长度为15个至30个氨基酸残基，并且具有三重组织，由疏水性残基的核心组成，侧接带正电荷的氨基末端和极性但不带电荷的羧基末端区。(Zimmermann等人，“Protein translocation across the ER membrane”，Biochimica et BiohysicaActa，2011年，第1808卷：第912-924页)。
许多ERSP是已知的。ERSP不是必须源自植物ERSP，非植物ERSP将使用本文所述的程序。然而，许多植物ERSP是熟知的，并且我们在此处描述了一些植物来源的ERSP。BAAS，例如，源自植物大麦(Hordeum vulgare)，并且具有如下氨基酸序列：MANKHLSLSLFLVLLGLSASLASG(SEQ ID NO:37)
植物ERSP选自已知被表达并释放到植物质外体空间的蛋白质的基因组序列，包括示例诸如BAAS、胡萝卜伸展蛋白和烟草PR1。以下参考文献提供了进一步的描述，并且全文以引用方式并入本文。De Loose,M.等人，“The extensin signal peptide allowssecretion of a heterologous protein from protoplasts”，Gene，1991年，第99卷：第95-100页；De Loose,M.等人描述了来自皱叶烟草(Nicotiana plumbaginifolia)的延伸编码基因的结构分析，其序列包含用于蛋白质向内质网易位的典型信号肽；Chen,M.H.等人，“Signal peptide-dependent targeting of a rice alpha-amylase and cargoproteins to plastids and extracellular compartments of plant cells”，PlantPhysiology，2004年7月，第135卷：第3期：第1367-1377页。Epub，2004年7月2日。Chen,M.H.等人通过分析α-淀粉酶在转基因烟草中的表达，有或没有其信号肽，研究了α-淀粉酶在植物细胞中的亚细胞定位。这些参考文献和其他文献教导和公开了可用于本文所述的方法、程序和肽、蛋白质和核苷酸复合物和构建体的信号肽。
烟草伸展蛋白信号肽基序是ERSP(Memelink等人，the Plant Journal，1993年，第4卷：第1011-1022页；还参见Pogue GP等人，Plant Biotechnology Journal，2010年，第8卷：第638-654页)。在一些实施方案中，CRIP ORF可具有烟草伸展蛋白信号肽基序。在一个实施方案中，CRIP ORF可具有根据SEQ ID NO:38的伸展蛋白基序。在另一个实施方案中，CRIP ORF可具有根据SEQ ID NO:39的伸展蛋白基序。
如何产生具有扩展信号基序的实施方案的例示性示例如下：使用具有四种合成DNA引物的寡聚延伸PCR设计编码伸展蛋白基序的DNA序列(例如，SEQ ID NO:40或SEQ IDNO:41所示的DNA序列)；末端位点诸如限制位点，例如5'末端的Pac I限制位点，和3'末端GFP序列的5'末端，可使用PCR以延伸蛋白DNA序列作为模板加入，并产生片段；该片段用作正向PCR引物以扩增编码CRIP ORF的DNA序列，例如包含在pFECT载体中的“gfp-l-CRIP”，因此产生编码(从N'到C'末端)“ERSP-GFP-L-CRIP”的CRIP ORF，其中ERSP是伸展蛋白。然后将所得DNA序列克隆到FECT载体的Pac I和Avr II限制位点中，以产生用于GFP融合CRIP的瞬时植物表达的pFECT-CRIP载体。
在一些实施方案中，例示性表达系统可包括将含有CRIP ORF的FECT表达载体转化到农杆菌GV3101，并将转化的GV3101注射到烟草叶片中用于瞬时表达CRIP ORF。
翻译稳定蛋白质(STA)
翻译稳定蛋白质(STA)可增加植物组织中CRIP的量。CRIP ORF、ERSP-CRIP中的一者足以在转染的植物中表达正确折叠的CRIP，但是在一些实施方案中，有效保护植物免受害虫损害可能需要植物表达的CRIP积累。转染正确构建的CRIP ORF，转基因植物可表达和积累更大量的正确折叠的CRIP。当植物积累了更大量的正确折叠的CRIP时，它可以更容易地抵抗、抑制和/或杀死侵袭和吃掉植物的害虫。增加多肽在转基因组织中的积累的一种方法是通过使用翻译稳定蛋白质(STA)。翻译稳定蛋白质可用于显著增加CRIP在植物组织中的积累，并因此增加用CRIP转染的植物关于害虫抗性的效力。翻译稳定蛋白质是具有足够三级结构的蛋白质，其可在细胞中积累而不被细胞的蛋白质降解过程靶向。以下方程描述了编码与U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多核苷酸序列融合的稳定蛋白质的CRIP ORF的一个示例：
ersp-sta-l-crip或ersp-crip-l-sta
在一些实施方案中，翻译稳定蛋白质可以是另一个蛋白的结构域，或者其可以包含完整的蛋白质序列。在一些实施方案中，翻译稳定蛋白质可以是5个和50个之间的氨基酸，50个至250个氨基酸(例如，GNA)，250个至750个氨基酸(例如，几丁质酶)和750个至1500个氨基酸(例如，增效蛋白)。
蛋白质或蛋白质结构域可包含除了翻译稳定之外没有有用特征的蛋白质，或者它们可具有除了翻译稳定之外的其他有用特征。翻译稳定蛋白质的一个实施方案可以是涉及CRIP的融合蛋白质的聚合物。此处提供了翻译稳定蛋白质的具体示例，以说明翻译稳定蛋白质的用途。该示例不旨在以任何方式限制本公开或权利要求。有用的翻译稳定蛋白质是本领域熟知的，并且如本文所公开的，可使用任何这种类型的蛋白质。评价和测试肽的生产的程序在本领域中是已知的并且在本文中有所描述。一种翻译稳定蛋白质的一个示例是绿色荧光蛋白质(GFP)(SEQ ID NO:34；NCBI登录号P42212.1)。
翻译稳定蛋白质的另外示例可见于以下参考文献，这些参考文献的公开内容全文以引用方式并入本文：Kramer,K.J.等人，“Sequence of a cDNA and expression of thegene encoding epidermal and gut chitinases of Manduca sexta”，InsectBiochemistry and Molecular Biology，第23卷第6期，1993年9月，第691-701页。Kramer,K.J.等人从烟草天蛾(Manduca sexta)中分离了编码几丁质酶的cDNA并对其进行了测序。Hashimoto,Y.等人，“Location and nucleotide sequence of the gene encoding theviral enhancing factor of the Trichoplusia ni granulosis virus”，Journal ofGeneral Virology，1991年，第72卷：第2645-2651页。Hashimoto,Y.等人克隆了编码粉纹夜蛾颗粒体病毒的病毒增效蛋白的基因，并测定了完整的核苷酸序列。这些参考文献和其他文献教导和公开了可用于本文所述的方法、程序和肽、蛋白质和核苷酸复合物和构建体的翻译稳定蛋白质。
在一些实施方案中，CRIP ORF可使用包含STA例如Jun a 3的CRIP ORF转化到植物中，例如烟草植物本氏烟草(Nicotiana benthamiana)中。成熟的Jun a 3是一种约30kDa的植物防御蛋白，其也是一些人的过敏原。Jun a 3由阿什杜松树产生，并且在一些实施方案中可用作翻译稳定蛋白质(STA)。在一些实施方案中，Jun a 3氨基酸序列可以是SEQ IDNO:36中所示的序列。在其他实施方案中，Jun a 3氨基酸序列可以是SEQ ID NO:42中所示的序列。
接头
接头蛋白质有助于组成CRIP ORF的不同基序的正确折叠。如果表达ORF涉及多个CRIP结构域表达，则本发明描述的CRIP ORF也包括编码间插接头肽的多核苷酸序列，这些间插接头肽位于编码CRIP(crip)和翻译稳定蛋白质(sta)的多核苷酸序列之间，或位于编码多个编码CRIP的多核苷酸序列，即(l-crip)N或(crip-l)N的多核苷酸序列之间。间插接头肽(LINKER或L)分离表达的CRIP复合物的不同部分，并在表达过程期间帮助复合物的不同部分正确折叠。在表达的CRIP复合物中，不同的间插接头肽可参与分离不同的功能结构域。在一些实施方案中，LINKER附接到CRIP上，并且这个二价基团可重复多达10次(N＝1-10)，并且可能甚至超过10次，以便促进在要保护的植物中正确折叠的CRIP的积累。
在一些实施方案中，间插接头肽的长度可在1个和30个氨基酸之间。然而，它不是植物中表达的CRIP中必需的组分。可为CRIP ORF设计可切割接头肽，以从转化的植物中表达的CRIP复合物中释放正确CRIP，以改善CRIP给予植物关于害虫损害的保护。一种类型的间插接头肽是植物可切割接头肽。在植物翻译后修饰期间，可从表达的CRIP ORF复合物中完全除去这种类型的接头肽。因此，在一些实施方案中，在植物中翻译后修饰期间，由这种类型的间插接头肽连接的正确折叠的CRIP可在植物细胞中从表达的CRIP ORF复合物中释放。
另一种类型的可切割间插接头肽在植物中的表达过程中是不可切割的。然而，它具有对丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸蛋白酶或金属蛋白酶特异的蛋白酶切割位点。该类型的可切割接头肽可被在昆虫和鳞翅目肠道环境和/或昆虫血淋巴和鳞翅目血淋巴环境中发现的蛋白酶消化，以在昆虫肠道或血淋巴中释放CRIP。使用本公开所教导的信息，本领域技术人员应当常规地制造或找到将在本发明中有用的LINKER的其他示例。
在一些实施方案中，CRIP ORF可包含可切割类型的间插接头，例如，SEQ ID NO:31中列出的类型，具有氨基酸代码“IGER”(SEQ ID NO:31)。该间插接头或LINKER的分子量为473.53道尔顿。在其他实施方案中，间插接头肽(LINKER)也可以是没有任何类型蛋白酶切割位点的间插接头肽，即不可切割间插接头肽，例如接头“ETMFKHGL”(SEQ ID NO:33)。
在一些实施方案中，CRIP-杀昆虫蛋白可具有两个或更多个可切割肽，其中该杀昆虫蛋白包含昆虫可切割接头(L)，该昆虫可切割接头与包含(CRIP-L)n的构建体框内融合，其中“n”是1至200、或1至100、或1至10的整数。在另一个实施方案中，CRIP-杀昆虫蛋白，并且如本文所述，包含与CRIP可操作地连接的内质网信号肽(ERSP)，该ERSP与昆虫可切割接头(L)和/或重复构建体(L-CRIP)n或(CRIP-L)n可操作地连接，其中n是1至200、或1至100、或1至10的整数。
在一些实施方案中，包含内质网信号肽(ERSP)的蛋白质可与CRIP和间插接头肽(L或接头)可操作地连接，此类构建体称为ERSP-L-CRIP或ERSP-CRIP-L，其中所述ERSP是所述蛋白质的N-末端，并且所述L或接头可以在CRIP的N-末端侧(上游)或CRIP的C-末端侧(下游)。称为ERSP-L-CRIP或ERSP-CRIP-L的蛋白质，包含本文所述的ERSP或CRIP中的任一者，可具有接头“L”，其可以是不可切割接头肽或可切割接头肽，并且其可在蛋白质表达过程期间在植物细胞中是可切割的或可在昆虫肠道环境和/或血淋巴环境中是可切割的。
前述接头的示例性描述以及制备和使用其的方法提供于美国专利申请公开号US20180362598A1中，其公开内容全文以引用方式并入本文。
间插接头肽的其他示例可见于以下参考文献中，这些参考文献全文以引用方式并入本文：Heath等人发现植物表达的丝氨酸蛋白酶抑制剂前体包含被六个相同的接头肽分离的五个同质蛋白质抑制剂，“Characterization of the protease processing sitesin a multidomain proteinase inhibitor precursor from Nicotiana alata”，European Journal of Biochemistry，1995年，第230卷：第250-257页。Chang,H.C.等人对绿色荧光蛋白质通过六种不同接头的折叠行为进行了比较，“De novo folding of GFPfusion proteins:high efficiency in eukaryotes but not in bacteria”，Journal ofMolecular Biology，2005年10月21日，第353卷第2期：第397-409页。Daskalova,S.M.等人的研究表明，人GalNAc-Ts家族的同种型GalNAc-T2在本氏烟草植物中表达后保留了其定位和功能，“Engineering of N.benthamiana L.plants for production of N-acetylgalactosamine-glycosylated proteins”，BMC Biotechnology，2010年8月24日，第10卷：第62页。Kwok,E.Y.等人示出了内源质体蛋白质穿过基质的能力，“GFP-labelledRubisco and aspartate aminotransferase are present in plastid stromules andtraffic between plastids”，Journal of Experimental Botany，2004年3月，第55卷第397期：第595-604页。Epub，2004年1月30日。Borovsky,D.等人报告了用蚊子十肽激素、胰蛋白酶调节的抑制因子(TMOF)对烟草花叶病毒(TMV)病毒体的表面进行工程改造，“Expression of Aedes trypsin-modulating oostatic factor on the virion of TMV:A potential larvicide”，Proc Natl Acad Sci，2006年12月12日，第103卷第50期：第18963-18968页。这些参考文献和其他文献教导和公开了可用于本文所述的方法、程序和肽、蛋白质和核苷酸复合物和构建体的间插接头。
CRIP ORF和CRIP构建体
“CRIP ORF”是指编码CRIP和/或一个或多个稳定蛋白质、分泌信号或靶向指导信号，例如ERSP或STA的核苷酸，并定义为ORF中具有翻译能力的核苷酸。因此，“CRIP ORF图表”是指一个或多个CRIP ORF的组成，如以图或方程形式写出的。例如，“CRIP ORF图表”可写成使用首字母缩写词或简称来表示表达ORF内包含的DNA片段。因此，在一个示例中，“CRIP ORF图表”可描述编码ERSP、LINKER、STA和CRIP的多核苷酸片段，通过以方程形式分别将DNA片段图示为“ersp”(即，编码ERSP多肽的多核苷酸序列)；“linker”或“L”(即编码LINKER多肽的多核苷酸序列)；“sta”(即编码STA多肽的多核苷酸序列)和“crip”(即编码CRIP的多核苷酸序列)。CRIP ORF图表的示例是“ersp-sta-(linkeri-cripj)N”或“ersp-(cripj-linkeri)N-sta”和/或它们的DNA片段的任何组合。
下文的方程描述了编码ERSP、STA、接头和CRIP的CRIP ORF的两个示例：
ersp-sta-l-crip或ersp-crip-l-sta
在一些实施方案中，本文所述的CRIP开放阅读框(ORF)是多核苷酸序列，该多核苷酸序列将使植物能够表达mRNA，该mRNA继而又将被翻译成肽，这些肽将正确折叠和/或积累到这样的程度，以致所述蛋白质提供足以抑制和/或杀死一种或多种害虫的剂量。在一个实施方案中，蛋白质CRIP ORF的示例可以是编码CRIP(crip)、“ersp”(即编码ERSP多肽的多核苷酸序列)、“linker”(即编码LINKER多肽的多核苷酸序列)、“sta”(即编码STA多肽的多核苷酸序列)或它们的任何组合的多核苷酸，并且可以下文的方程形式描述：
ersp-sta-(linkeri-cripj)n或ersp-(cripj-linkeri)n-sta
多核苷酸方程的前述例示性实施方案将导致表达以下蛋白质复合物：ERSP-STA-(LINKERI-CRIPJ)N，含有四种可能肽组分，用破折号分离每种组分。ersp的核苷酸组分是编码植物内质网运输信号肽(ERSP)的多核苷酸片段。sta的组分是编码翻译稳定蛋白质(STA)的多核苷酸片段，该STA有助于在植物中表达的CRIP的积累，然而，在一些实施方案中，在CRIP ORF中可能不需要包括sta。接头i的组分是编码间插接头肽(L或LINKER)的多核苷酸片段，以将CRIP与ORF中包含的其他组分以及翻译稳定蛋白质分离。下标字母“i”表示在一些实施方案中，不同类型的接头肽可用于CRIP ORF中。组分“crip”表示编码CRIP的多核苷酸片段。下标“j”表示不同的多核苷酸可包括在CRIP ORF中。例如，在一些实施方案中，多核苷酸序列可编码具有不同氨基酸取代的CRIP。如“(接头i-cripj)n”中所示的下标“n”表示编码间插接头肽和CRIP的核苷酸的结构可在相同CRIP ORF中的相同开放阅读框中重复“n”次，其中“n”可以是1至10的任何整数；“n”可以是1至10，具体地“n”可以是1、2、3、4或5，并且在一些实施方案中“n”是6、7、8、9或10。重复序列可包含编码不同间插接头(LINKER)和不同CRIP的多核苷酸区段。包括相同CRIP ORF中的重复序列的不同多核苷酸片段都在相同的翻译框中。在一些实施方案中，在CRIP ORF中包含sta多核苷酸可能不是必需的。例如，ersp多核苷酸序列可直接与编码CRIP变体多核苷酸的多核苷酸连接而无需接头。
在前述的示例性方程中，编码多肽“CRIP”的多核苷酸“crip”可以是编码本文所述的任何CRIP的多核苷酸序列，例如，包含与以下肽具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列的CRIP：具有SEQ ID NO:192-370中任一项所示的氨基酸序列的蜘蛛肽；具有SEQ ID NO:60-64、192-370和594中任一项所示的氨基酸序列的ACTX肽(例如，U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、κ-ACTX-Hv1a、κ+2-ACTX-Hv1a、ω-ACTX-Hv1a和/或ω+2-ACTX-Hv1a)；具有SEQ ID NO:65中任一项所示的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a；具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽；具有SEQ IDNO:2-15、49-53、2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651或653-654中任一项所示的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)；具有SEQ ID NO:66、88-191中任一项所示的氨基酸序列的蝎肽；具有SEQ ID NO:371-411中任一项所示的氨基酸序列的海葵肽；来自蛇锁海葵的具有SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的Av3多肽；具有SEQ ID NO:45-47中任一项所示的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)；或芋螺毒素。
在一些实施方案中，多核苷酸可操作以编码具有下列CRIP构建体取向和/或排列的CRIP-杀昆虫蛋白：ERSP-CRIP、ERSP-(CRIP)N、ERSP-CRIP-L、ERSP-(CRIP)N-L、ERSP-(CRIP-L)N、ERSP-L-CRIP、ERSP-L-(CRIP)N、ERSP-(L-CRIP)N、ERSP-STA-CRIP、ERSP-STA-(CRIP)N、ERSP-CRIP-STA、ERSP-(CRIP)N-STA、ERSP-(STA-CRIP)N、ERSP-(CRIP-STA)N、ERSP-L-CRIP-STA、ERSP-L-STA-CRIP、ERSP-L-(CRIP-STA)N、ERSP-L-(STA-CRIP)N、ERSP-L-(CRIP)N-STA、ERSP-(L-CRIP)N-STA、ERSP-(L-STA-CRIP)N、ERSP-(L-CRIP-STA)N、ERSP-(L-STA)N-CRIP、ERSP-(L-CRIP)N-STA、ERSP-STA-L-CRIP、ERSP-STA-CRIP-L、ERSP-STA-L-(CRIP)N、ERSP-(STA-L)N-CRIP、ERSP-STA-(L-CRIP)N、ERSP-(STA-L-CRIP)N、ERSP-STA-(CRIP)N-L、ERSP-STA-(CRIP-L)N、ERSP-(STA-CRIP)N-L、ERSP-(STA-CRIP-L)N、ERSP-CRIP-L-STA、ERSP-CRIP-STA-L、ERSP-(CRIP)N-STA-L ERSP-(CRIP-L)N-STA、ERSP-(CRIP-STA)N-L、ERSP-(CRIP-L-STA)N或ERSP-(CRIP-STA-L)N；其中N是1至200的整数。
在一些实施方案中，本文描述的CRIP ORF和/或CRIP构建体中的任一者可重组产生，例如，在一些实施方案中，本文描述的CRIP ORF和/或CRIP构建体中的任一者可在细胞培养物中产生，例如，通过酵母细胞。
上述方法中的任一者和/或本文所述的方法中的任一者可用于将一种或多种多核苷酸掺入植物或其植物部分，该一种或多种多核苷酸可操作以表达本文所述的CRIP或CRIP-杀昆虫蛋白中的任一者或多者；例如，具有SEQ ID NO:2-15、49-53或77-110的氨基酸序列的一种或多种CRIP或CRIP-杀昆虫蛋白质，其同样在本文有所描述。
本公开可用于任何植物物种的转化，包括但不限于单子叶植物和双子叶植物。转基因方法或PEP将是特别有用的方法的作物包括但不限于：苜蓿、棉花、番茄、玉蜀黍、小麦、玉米、甜玉米、紫花苜蓿、大豆、高粱、红豌豆、亚麻籽、红花、油菜籽、油菜、稻、大豆、大麦、向日葵、树(包括针叶树和落叶树)、花(包括商业上和温室中生长的那些)、羽扇豆、柳枝稷、甘蔗、马铃薯、番茄、烟草、十字花科植物、胡椒、甜菜、大麦和油菜、芸苔属物种、黑麦、小米、花生、甘薯、木薯、咖啡、椰子、菠萝、柑橘树、可可、茶、香蕉、鳄梨、无花果、番石榴、芒果、橄榄、木瓜、腰果、澳洲坚果、杏仁、燕麦、蔬菜、观赏植物和针叶树。
用多核苷酸转化植物
在一些实施方案中，上文和本文描述的CRIP ORF和CRIP构建体可被克隆到任何植物表达载体中，以便CRIP在植物中瞬时或稳定地表达。
瞬时植物表达系统可用于迅速地优化植物中某些特定CRIP表达的CRIP ORF结构，包括一些组分的必要性，一些组分的密码子优化，每种组分的顺序的优化等。瞬时植物表达载体通常源自植物病毒基因组。植物病毒载体由于植物病毒的感染特性而在植物中提供快速和高水平的外源基因表达的优势。植物病毒基因组的全长可用作载体，但通常缺失病毒组分，例如外壳蛋白质，并将转基因ORF亚克隆在该位置。CRIP ORF可被亚克隆到这样的位点以产生病毒载体。这些病毒载体可以机械方式引入植物，因为它们本身是感染性的，例如通过植物创伤、喷雾等。它们也可经由农杆菌感染通过将病毒载体克隆到冠瘿病细菌根癌农杆菌或发根细菌毛根农杆菌的T-DNA中而转染到植物中。CRIP在这个载体中的表达由RNA病毒的复制控制，并且病毒翻译成mRNA进行复制由强病毒启动子控制，例如，来自花椰菜花叶病毒的35S启动子。具有CRIP ORF的病毒载体通常克隆到二元载体的T-DNA区中，该二元载体可在大肠杆菌菌株和农杆菌菌株中自身复制。植物的瞬时转染可通过用包含用于CRIP表达的病毒载体的农杆菌细胞浸润植物叶来完成。在瞬时转化的植物中，由于转录后基因沉默(PTGS)，外源蛋白质表达通常在短时间内停止。有时PTGS抑制蛋白质基因必须与驱动CRIP ORF表达的相同类型的病毒载体瞬时共转化到植物中。这改善和扩展了植物中CRIP的表达。最常用的PTGS抑制蛋白质是从番茄丛矮病毒(TBSV)中发现的P19蛋白。
在一些实施方案中，植物的瞬时转染可通过将编码CRIP的多核苷酸与容易获得的载体(参见上文)中的任一者重组来实现，并且使用标记或信号(例如GFP发射)来确认。在一些实施方案中，瞬时转染的植物可通过在载体中将编码CRIP的多核苷酸与编码GFP-杂种融合蛋白质的DNA重组，并使用设计用于靶向表达的不同FECT载体将所述载体转染到植物(例如，烟草)中而产生。在一些实施方案中，编码CRIP的多核苷酸可与用于APO(质外体定位)积累的pFECT载体重组；与用于CYTO(细胞质定位)积累的pFECT载体重组；或与用于ER(内质网定位)积累的pFECT-ersp载体重组。
示例性瞬时植物转化策略是使用植物病毒载体的农杆菌感染，这是由于其高效、简便和低成本。在一些实施方案中，烟草花叶病毒过表达系统(参见TRBO，Lindbo JA，PlantPhysiology，2007年，第145卷：第1232-1240页)可用于用CRIP瞬时转化植物。TRBO DNA载体具有用于农杆菌感染的T-DNA区，该区包含驱动没有编码病毒包膜蛋白质的基因的烟草花叶病毒RNA表达的CaMV 35S启动子。此外，该系统使用“卸甲”病毒基因组，因此可有效地防止病毒植物至植物的传播。
在另一个实施方案中，FECT病毒瞬时植物表达系统可用于用CRIP瞬时转化植物(参见Liu Z和Kearney CM，BMC Biotechnology，2010年，第10卷：第88页)。FECT载体包含用于农杆菌感染的T-DNA区，该区包含驱动没有编码病毒包膜蛋白质和三基因块的基因的狐尾花叶病毒RNA表达的CaMV 35S启动子。此外，该系统使用“卸甲”病毒基因组，因此可有效地防止病毒植物至植物的传播。为了有效地表达引入的异源基因，FECT表达系统还需要共表达P19，一种来自番茄丛矮病毒的RNA沉默抑制蛋白质，以防止引入的T-DNA的转录后基因沉默(PTGS)。(TRBO表达系统不需要P19的共表达)。
在一些实施方案中，CRIP ORF可被设计为编码一系列翻译融合的结构基序，其可描述如下：N'-ERSP-STA-L-CRIP-C'，其中“N'”和“C'”分别表示N-末端和C-末端氨基酸，并且ERSP基序可以是大麦α-淀粉酶信号肽(BAAS)(SEQ ID NO:37)；稳定蛋白质(STA)可以是GFP(SEQ ID NO:34)；接头肽“L”可以是IGER(SEQ ID NO:31)。在一些实施方案中，ersp-sta-l-CRIP ORF可化学合成以包括限制位点，例如在其5'末端的Pac I限制位点，和在其3'末端的Avr II限制位点。在一些实施方案中，CRIP ORF可克隆到FECT表达载体(pFECT)的Pac I和Avr II限制位点中，以产生用于FECT瞬时植物表达系统(pFECT-CRIP)的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体表达载体。为了使FECT表达系统中的表达最大化，一些实施方案可具有表达为共转化产生的RNA沉默抑制蛋白质P19的FECT载体(pFECT-P19)。
在一些实施方案中，例如，通过进行常规PCR程序并将Not I限制位点加入到上述CRIP ORF的3'-末端，然后将CRIP ORF克隆到TRBO表达载体(pTRBO-CRIP)的Pac I和Not I限制位点，可重组U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体表达载体以用于TRBO瞬时植物表达系统。
在一些实施方案中，使用一种或多种瞬时表达系统(例如，FECT和TRBO表达系统)，根癌农杆菌菌株(例如，可商购获得的GV3101细胞)可用于在植物组织(例如，烟叶)中瞬时表达CRIP ORF。这种瞬时转染方案的示例性说明包括如下：GV3101的过夜培养物可用于接种200mL Luria-Bertani(LB)培养基；可使细胞生长至OD600在0.5和0.8之间的对数期；然后通过在4℃下以5000rpm离心10分钟沉淀细胞；然后用10mL预冷的TE缓冲液(Tris-HCl10mM，EDTA 1mM，pH8.0)洗涤细胞一次，然后重悬于20mL LB培养基中；GV3101细胞重悬浮液然后可以250μL级分等分到1.5mL微管中；然后将等分试样在液氮中速冻并储存在-80℃冰箱中以备进一步转化。然后可使用如下冻融方法将pFECT-CRIP和pTRBO-CRIP载体转化到感受态GV3101细胞中：将储存的感受态GV3101细胞在冰上解冻，并与1μg至5μg纯DNA(pFECT-CRIP或pTRBO-CRIP载体)混合。将细胞-DNA混合物在冰上保持5分钟，转移到-80℃下5分钟，并在37℃水浴中温育5分钟。然后将冻融处理的细胞稀释到1mL LB培养基中，并在室温下在摇床上振荡2小时至4小时。然后将200μL等份试样的细胞-DNA混合物涂布在含有适当抗生素(10μg/mL利福平、25μg/mL庆大霉素和50μg/mL卡那霉素可用于pFECT-CRIP转化和pTRBO-CRIP转化两者)的LB琼脂板上，并在28℃下温育两天。然后挑取所得转化的菌落，并在6mL等分的LB培养基中培养，该培养基含有用于转化的DNA分析的适当抗生素，并制备转化的GV3101细胞的甘油储备物。
在一些实施方案中，植物组织(例如烟叶)的瞬时转化可使用3mL无针头注射器进行叶注射来进行。在一个例示性示例中，将转化的GV3101细胞划线接种到具有适当抗生素(如上所述)的LB平板上，并在28℃孵育两天。将转化的GV3101细胞的集落接种到5ml LB-MESA培养基(补充有10mM MES和20μM乙酰丁香酮的LB培养基)和上述相同的抗生素中，并在28℃下生长过夜。通过以5000rpm离心10分钟收集过夜培养物的细胞，并以1.0的最终OD600重悬于诱导培养基(10mM MES、10mM MgCl2、100μM乙酰丁香酮)中。然后将细胞在诱导培养基中于室温下孵育2小时至过夜，然后准备好进行烟叶的瞬时转化。可使用不带针头的3mL注射器通过注射将处理过的细胞浸润到本氏烟草植物附着叶的下侧。
在一些实施方案中，瞬时转化可通过如下方式完成：用pFECT-CRIP或pTRBO-CRIP转染GV3101细胞的一个群体并用pFECT-P19转染另一个群体，然后将两个细胞群体等量混合在一起用于通过用3mL注射器注射来浸润烟叶。
用于编码CRIP的多核苷酸的稳定整合在本公开中也是可能的，例如，CRIP ORF也可使用稳定植物转化技术整合到植物基因组中，因此CRIP可在植物中稳定表达并保护转化的植物代代相传。为了植物的稳定转化，CRIP表达载体可以是环状的或线性的。CRIP ORF、CRIP表达盒和/或具有编码用于稳定植物转化的CRIP的多核苷酸的载体应基于本领域普通技术人员已知的内容，和/或通过使用预测性载体设计工具诸如Gene Designer 2.0(AtumBio)、VectorBuilder(Cyagen)、
Figure BDA0004014715560001591
查看器、GeneArtTM质粒构建服务(Thermo-Fisher Scientific)和/或其他商业上可获得的质粒设计服务来进行仔细设计，以便优化植物中的表达。参见Tolmachov，“Designing plasmid vectors.”Methods Mol Biol.，2009年，第542卷：第117-129页。CRIP的表达通常由在转基因植物的一些或所有细胞中促进转录的启动子控制。启动子可以是强植物病毒启动子，例如来自花椰菜花叶病毒(CaMV)的组成型35S启动子；它还可以是强植物启动子，例如，来自拟南芥(Arabidopsis thaliana)的氢过氧化物裂解酶启动子(pHPL)；来自大豆的大豆多聚泛素(Gmubi)启动子；来自不同植物物种(水稻、玉米、马铃薯等)的泛素启动子等。植物转录终止子通常出现在ORF的终止密码子之后，以终止RNA聚合酶和mRNA的转录。为了评价CRIP的表达，可在CRIP表达载体中包含报告基因，例如，用于GUS染色测定的β-葡糖醛酸酶基因(GUS)、用于在UV光下进行绿色荧光检测的绿色荧光蛋白(GFP)基因等。为了选择转化的植物，选择标记基因通常包含在CRIP表达载体中。在一些实施方案中，标记基因表达产物可为转化植物提供对特定抗生素(例如，卡那霉素、潮霉素等)或特定除草剂(例如，草甘膦等)的抗性。如果采用农杆菌感染技术进行植物转化，则T-DNA左边界和右边界序列也包含在CRIP表达载体中，以将T-DNA部分转运到植物中。
构建的CRIP表达载体可使用多种转染技术转染到植物细胞或者组织中。农杆菌感染是使用根癌农杆菌菌株或毛根农杆菌菌株转化植物的一种非常普遍的方法。粒子轰击(也称为基因枪或生物射弹)技术也是非常常见的植物转染方法。其他较不常见的转染方法包括组织电穿孔、碳化硅晶须、直接注射DNA等。转染后，将转染的植物细胞或组织置于植物再生培养基上，以将成功转染的植物细胞或组织再生为转基因植物。
转化植物的评价可在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平上完成。稳定转化的植物可在所有这些水平上进行评价，而瞬时转化的植物通常仅在蛋白质水平上进行评价。为了确保CRIP ORF整合到稳定转化的植物的基因组中，可从稳定转化的植物组织中提取基因组DNA，并使用PCR或DNA印迹进行分析。CRIP在稳定转化的植物中的表达可在RNA水平上进行评价，例如，通过使用RNA印迹或RT-PCR分析从转化的植物组织中提取的总mRNA。CRIP在转化植物中的表达也可直接在蛋白质水平上进行评价。有许多方法来评价CRIP在转化植物中的表达。如果报告基因包含在CRIP ORF中，则可进行报告基因测定，例如，在一些实施方案中，可使用用于GUS报告基因表达的GUS应变测定、用于GFP报告基因表达的绿色荧光检测测定、用于荧光素酶报告基因表达的荧光素酶测定和/或其他报告技术。
在一些实施方案中，可从转化的植物组织中提取总蛋白，用于使用Bradford测定评价样品中的总蛋白水平，以直接评价CRIP的表达。
在一些实施方案中，可采用分析型HPLC层析技术、蛋白质印迹技术或iELISA测定来定性或定量地评价从转化的植物组织中提取的总蛋白质样品中的CRIP。CRIP表达也可通过在昆虫生物测定中使用从转化的植物组织中提取的总蛋白样品来评价，例如，在一些实施方案中，转化的植物组织或整个转化的植物本身可用于昆虫生物测定中以评价CRIP表达及其为植物提供保护的能力。
在一些实施方案中，本发明的植物、植物组织、植物细胞、植物种子或其部分可包含一种或多种CRIP，或编码该一种或多种CRIP的多核苷酸。
在一些实施方案中，本发明的植物、植物组织、植物细胞、植物种子或其部分可包含一种或多种CRIP，或编码该一种或多种CRIP的多核苷酸，其中所述CRIP是本文所述的任何CRIP。例如，在一些实施方案中，植物、植物组织、植物细胞、植物种子或其部分可包含CRIP，包括但不限于以下的一者或多者：ACTX肽(例如，U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、rκ-ACTX-Hv1c、ω-ACTX-Hv1a和/或ω-ACTX-Hv1a+2)；Γ-CNTX-Pn1a；U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b；TVP；Av2；Av3；或AVP。此外，这些方法和技术可用于产生植物、植物组织、植物细胞、植物种子或其部分，其包含肽-IA(例如，适于此类方法的杀昆虫剂，例如聚合物、肽或蛋白质)，诸如Bt毒素(例如，Cry毒素、Cyt毒素或Vip)。
在一些实施方案中，本发明的植物、植物组织、植物细胞、植物种子或其部分可包含一种或多种CRIP或编码该一种或多种CRIP的多核苷酸，其中所述CRIP可包含与以下肽具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：具有SEQ ID NO:192-370中任一项所示的氨基酸序列的蜘蛛肽；具有SEQ ID NO:60-64、192-370和594中任一项所示的氨基酸序列的ACTX肽(例如，U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、κ-ACTX-Hv1a、κ+2-ACTX-Hv1a、ω-ACTX-Hv1a和/或ω+2-ACTX-Hv1a)；具有SEQ ID NO:65中任一项所示的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a；具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽；具有SEQ IDNO:2-15、49-53、2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651或653-654中任一项所示的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)；具有SEQ ID NO:66、88-191中任一项所示的氨基酸序列的蝎肽；具有SEQ ID NO:371-411中任一项所示的氨基酸序列的海葵肽；来自蛇锁海葵的具有SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的Av3多肽；具有SEQ ID NO:45-47中任一项所示的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)；或芋螺毒素。
确认用CRIP成功转化
在将异源外源DNA引入到植物细胞中以后，异源基因在植物基因组中的转化或整合通过各种方法如与整合基因有关的核酸、蛋白质和代谢物的分析来证实。
PCR分析是移种到土壤之前筛选早期转化细胞、组织或苗中掺入基因存在的快速方法(Sambrook和Russell，2001年，“Molecular Cloning:A Laboratory Manual.”，ColdSpring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.)。使用对所关注基因或农杆菌属载体背景等特异的寡核苷酸引物进行PCR。
植物转化可通过基因组DNA的DNA印迹分析来证实(Sambrook和Russell，2001年，(出处同上))。一般而言，从转化的植物提取总DNA，用适当的限制性酶消化，在琼脂糖凝胶中进行分级分离并且转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上。然后根据标准技术(Sambrook和Russell，2001年，出处同上)，可用例如放射性标记的32P靶DNA片段探测该膜或“印迹”，以证实被引入的基因在植物基因组中的整合。
在RNA印迹分析中，根据本领域常规使用的标准程序(Sambrook和Russell，2001年，出处同上)，从转化的植物的特定组织分离RNA，该RNA在甲醛琼脂糖凝胶中进行分级分离，并且印迹到尼龙滤膜上。然后通过本领域内已知的方法(Sambrook和Russell，2001年，出处同上)，使所述滤膜与源自CRIP的放射性探针杂交，来检测由编码CRIP的多核苷酸编码的RNA的表达。
根据标准程序(Sambrook和Russell，2001年，出处同上)，使用与存在于CRIP上的一个或多个表位结合的抗体，可对转基因植物进行蛋白质印迹和生化测定等，以证实由CRIP基因编码的蛋白质的存在。
已经开发了许多标记来确定植物转化的成功，例如对氯霉素、氨基糖苷G418、潮霉素等的抗性。编码参与叶绿体代谢的产物的其他基因也可用作选择标记。例如，提供对植物除草剂诸如草甘膦、溴苯腈或咪唑啉酮的抗性的基因可能特别有用。此类基因已被报道(Stalker等人，1985年，J.Biol.Chem.，第263卷，第6310-6314页(溴苯腈抗性腈水解酶基因)；和Sathasivan等人，1990年，Nucl.Acids Res.，第18卷，第2188页(AHAS咪唑啉酮抗性基因)。此外，本文公开的基因可用作评估细菌、酵母或植物细胞转化的标记。用于检测转基因在植物、植物器官(例如，叶、茎、根等)、种子、植物细胞、繁殖体、胚或其子代中的存在的方法是本领域众所周知的。在一个实施方案中，通过测试杀虫活性来检测转基因的存在。
可测试表达CRIP和/或U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多核苷酸的可育植物的杀虫活性，并选择显示最佳活性的植物用于进一步育种。可获得本领域用于测定害虫活性的方法。通常，将蛋白质混合并用于取食测定。例如，参见Marrone等人，1985年，J.of EconomicEntomology，第78卷，第290-293页。
在一些实施方案中，评价瞬时转染程序的成功可基于报告基因(例如，GFP)的表达来确定。在一些实施方案中，GFP可在UV光下在用FECT和/或TRBO载体转化的烟叶中检测。
在一些实施方案中，可定量地评价植物(例如，烟草)中的CRIP表达。说明烟草植物中CRIP定量的示例性程序如下：通过用1000μL移液管吸头的大开口对叶子打孔，收集100mg转化的叶组织的圆片。将收集的叶组织置于具有5/32英寸直径不锈钢研磨球的2mL微管中，并在-80℃冷冻1小时，然后使用Troemner-Talboys高通量均质器均质化。接着，将750μL冰冷的TSP-SE1提取溶液(磷酸钠溶液50mM，1:100稀释的蛋白酶抑制剂混合物，EDTA 1mM，DIECA 10mM，PVPP 8％，pH 7.0)加入到管中并涡旋。然后将微管在室温下静置15分钟，然后在4℃下以16,000g离心15分钟；取100μL所得上清液并装入0.45μm MilliporeMultiScreen过滤微量滴定板中的Pre-Sephadex G-50填充柱中，在底部具有空的接收Costar微量滴定板。然后将微量滴定板在4℃下以800g离心2分钟。然后将所得滤液溶液(本文中称为烟叶的总可溶性蛋白提取物(TSP提取物))准备用于定量分析。
在一些实施方案中，TSP提取物的总可溶性蛋白浓度可使用Pierce考马斯Plus蛋白测定来估计。已知浓度的BSA蛋白质标准品可用于生成蛋白质定量标准曲线。例如，可将2μL的每种TSP提取物混合到200μL的考马斯Plus蛋白测定试剂盒的显色试剂(CPPA试剂)中，并孵育10分钟。然后可通过使用SoftMax Pro作为控制软件的SpectroMax-M2读板机读取OD595来评价显色反应。在得自通过FECT和TRBO转化的植物的TSP提取物中总可溶性蛋白的浓度可分别为约0.788±0.20μg/μL或约0.533±0.03μg/μL，并且该结果可用于计算用于iELISA测定的TSP中表达的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体肽的百分比(％TSP)。
在一些实施方案中，间接ELISA(iELISA)测定可用于定量地评价用FECT和/或TRBO表达系统瞬时转化的烟叶中的CRIP含量。使用iELISA定量CRIP的一个例示性示例如下：将5μL叶TSP提取物在Immulon 2HD 96孔板的孔中用95μL CB2溶液(ImmunochemistryTechnologies)稀释，必要时进行连续稀释；然后将从提取物样品获得的叶蛋白在黑暗、室温下包被孔壁3小时，然后除去CB2溶液；每个孔用200μL PBS(Gibco)洗涤两次；将150μL封闭液(含5％脱脂奶粉的PBS中的封闭BSA)加入每个孔中，并在黑暗、室温下孵育1小时；除去封闭液后，用PBS洗涤孔，加入100μL针对CRIP的一抗(定制抗体可从ProMabBiotechnologies,Inc.商购获得；
Figure BDA0004014715560001641
或使用本领域普通技术人员容易获得的知识制备)；将以1:250的稀释度在封闭溶液中稀释的抗体加入每个孔中，并在黑暗、室温下孵育1小时；除去一抗，并用PBS洗涤每个孔4次；将100μL HRP偶联的二抗(即，针对用于产生一抗的宿主物种的抗体，以在封闭溶液中1:1000的稀释度使用)加入每个孔中，并在黑暗、室温下孵育1小时；除去二抗，并用100μL PBS洗涤孔；将底物溶液(ABTS过氧化物酶底物溶液A和溶液B的1:1混合物，KPL)加入每个孔中，并且显色反应进行直到显色足够明显；将100μL过氧化物酶终止液加入每个孔中以终止反应；使用SpectroMax-M2读板机在405nm下读取板中每种反应混合物的吸光度，SoftMax Pro用作控制软件；连续稀释的已知浓度的纯CRIP样品可按照上述在iELISA测定中所述的相同方式进行处理，以生成用于定量分析的质量吸光度标准曲线。可通过iELISA检测表达的CRIP，在来自FECT转化的烟草的叶TSP提取物中为约3.09±1.83ng/μL；并且在来自TRBO转化的烟草的叶TSP提取物中为约3.56±0.74ng/μL。或者，对于FECT转化的植物，表达的CRIP可以是约0.40％的总可溶性蛋白(％TSP)，并且在TRBO转化的植物中，表达的CRIP可以是约0.67％的TSP。
杀昆虫剂(IA)
杀昆虫剂(IA)是具有至少一些杀昆虫活性的化学物质、分子、核苷酸、多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、毒素、毒物、毒药、杀昆虫剂、杀虫剂、有机化合物、无机化合物、原核生物或真核生物(以及由所述原核生物或真核生物产生的试剂)。
在一些实施方案中，IA可以是任何一种或多种表现出杀昆虫活性的化学物质、分子、核苷酸、多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、毒药、杀昆虫剂、杀虫剂、有机化合物、无机化合物或其组合。
在一些实施方案中，IA可以是表现出杀昆虫活性的原核生物、真核生物或由其产生的试剂。
在一些实施方案中，IA包括但不限于选自以下类别的成员：RNAi；胃毒剂；0型几丁质生物合成抑制剂；1型几丁质生物合成抑制剂；昆虫病毒；从印楝中分离的化合物；具有未知MOA的化合物；细菌(及其产物)；真菌(及其产物)；线虫(及其产物)；植物精华；机械干扰物；荧光增白剂；二氧化硅纳米球；几丁质酶；凝集素；膜攻击复合物/穿孔素(MACPF)蛋白；植物病毒外壳蛋白-毒素融合体；聚糖结合结构域/毒素融合蛋白；乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制剂；GABA门控氯离子通道阻断剂；钠通道调节剂；烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)竞争性调节剂；烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)变构调节剂-位点I；谷氨酸门控氯离子通道(GluCl)变构调节剂；保幼激素模拟物；其他非特异性(多位点)抑制剂；弦音器TRPV通道调节剂；螨生长抑制剂；线粒体ATP合酶抑制剂；通过破坏质子梯度的氧化磷酸化的解偶联剂；烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)通道阻断剂；蜕皮干扰物(双翅目)；蜕皮激素受体激动剂；章鱼胺受体激动剂；线粒体复合物III电子传递抑制剂；线粒体复合物I电子传递抑制剂；电压依赖性钠通道阻滞剂；乙酰辅酶A羧化酶抑制剂；线粒体复合物IV电子传递抑制剂；线粒体复合物II电子传递抑制剂；兰尼碱受体调节剂；弦音器调节剂—未定义的靶位点；或GABA门控的氯离子通道变构调节剂。
在一些优选的实施方案中，杀昆虫剂(IA)可选自以下物质：RNAi：诸如dsRNA(例如，WupA dsRNA)；胃毒：例如，砷剂诸如“巴黎绿”或乙酰亚砷酸铜、砷酸铅、砷酸钙；氟化合物(例如，氟化钠)；硼酸盐(例如，硼砂、硼酸、八硼酸二钠、硼酸钠、偏硼酸钠、十水合四硼酸钠、氧化硼、碳化硼、氮化硼、三溴化硼、三氯化硼或三氟化硼)；0型几丁质生物合成抑制剂：例如，苯甲酰脲类(例如，双三氟虫脲、氟啶脲、除虫脲、氟螨脲、氟虫脲、氟铃脲、虱螨脲、双苯氟脲、多氟脲、氟苯脲或杀铃脲)；1型几丁质生物合成抑制剂：例如噻嗪酮；昆虫病毒：例如，杆状病毒科(Baculoviridae)病毒(例如，β杆状病毒(Betabaculoviruses)，诸如颗粒体病毒(GV)和核多角体病毒(NPVS)，例如苹果蠹蛾(Cydia pomonella)GV、苹果异胫小卷蛾(Thaumatotibia leucotreta)GV、黎豆夜蛾(Anticarsia gemmatalis)MNPV或棉铃虫(Helicoverpa armigera)NPV)；和细小病毒科(Parvoviridae)病毒(例如，鹿眼蛱蝶(Junonia coenia)浓核病毒(JcDNV))；从印楝分离的化合物：例如，印楝素；印苦楝二酮；Azadiradionolide；脱乙酰葛杜宁；印楝素B；Desfuranoazadiradione；环氧楝树二酮；葛杜宁；Mahmoodin；Neemnipin A；Neemfruitin B；印苦楝内酯；印楝宾；Nimolicinol；OhchininAcetate；印楝沙兰林；Salannol；alpha-Nimolactone；beta-Nimolactone；2',3'-二氢印楝沙兰林；3-脱乙酰基印楝沙兰林；6-脱乙酰基印楝素；7-Acetyl-16,17-dehydro-16-hydroxyneotrichilenone；7-Benzoylnimbocinol；7-脱乙酰基-7-苯甲酰基环氧楝树二酮；7-脱乙酰基-7-苯甲酰基葛杜宁；7-Deacetyl-17-epinimolicinol；15-羟基印苦楝二酮；17-表-17-羟基印苦楝二酮；17-表印苦楝二酮；20,21,22,23-四氢-23-氧代印苦楝二酮；22,23-Dihydronimocinol；或28-去氧代印苦楝内酯；具有未知MOA的化合物：例如，苯螨特、溴螨酯、灭螨猛、三氯杀螨醇、石硫合剂、啶虫丙醚或硫；细菌：包括发酵固体、孢子、毒素和/或其产物，例如短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)；短短芽孢杆菌毒素(例如，TIC4670β成孔蛋白)；粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)；粪产碱杆菌毒素(例如，AfIP-1A/1B)；绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)；绿针假单胞菌毒素(例如，PIP-72Aa)；嗜虫耶尔森氏菌(Yersinia entomophaga)(例如，嗜虫耶尔森氏菌MH96)；Yersinia nurmii；发光光杆状菌；发光光杆状菌毒素复合物(Tca)；伯克氏菌属物种(Burkholderia spp)或尖音库蚊沃尔巴克氏体(Wolbachie pipientis)；苏云金芽孢杆菌(例如，苏云金芽孢杆菌以色列变种(var.israelensis)、苏云金芽孢杆菌鲇泽(aizawai)变种、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Bacillus thuringiensis var.kurstaki)、苏云金芽孢杆菌tenebrionensis变种或球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus))；苏云金芽孢杆菌毒素，例如伴孢晶体毒素(例如，δ-内毒素诸如Cry毒素、Cyt毒素)；或分泌蛋白(例如，营养期杀昆虫蛋白(Vip)、分泌期杀昆虫蛋白(Sip)、Bin样家族蛋白或ETX_MTX2家族蛋白)；真菌：包括其部分和/或产物，例如子囊菌纲(Ascomycete)真菌，诸如虫草(Cordycipitaceae)科的真菌(例如，球孢白僵菌(Beauveria bassiana)或球孢虫草(Cordyceps bassiana)和/或来自它们的毒素)；绿僵菌(Metarhizium anisopliae)(例如，菌株F52)及其产物；或玫烟色拟青霉(Paecilomycesfumosoroseus)(例如，Apopka菌株97)及其产物，或格氏线虫(Steinernema glaseri)及其产物；线虫：例如，格氏线虫(Steinernema glaseri)或嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditisbacteriophora)；植物精华：包括合成物和/或提取物或未精制的油，例如土荆芥油(Dysphania ambrosioides)或近土荆芥提取物、与甘油形成的脂肪酸单酯或丙二醇印楝油；机械干扰物：诸如硅藻土、矿物质和/或合成/天然纤维；荧光增白剂：例如CalcofluorWhite M2R；二氧化硅纳米球：例如，NanoXact二氧化硅纳米球；几丁质酶：例如，来自灰色链霉菌(Streptomyces griseus)的几丁质酶；凝集素：例如雪滴花(Galanthus nivalis)凝集素(GNA)；西洋接骨木(Sambucus nigra)凝集素(SNA)；朝鲜槐(Maackia amurensis)-II(MAL-II)；鸡冠刺桐(Erythrina cristagalli)凝集素(ECL)；蓖麻(Ricinus communis)凝集素-I(RCA)；花生凝集素(PNA)；麦胚凝集素(WGA)；单叶加纳籽(Griffoniasimplicifolia)-II(GSL-II)；伴刀豆球蛋白A(Con A)；小扁豆(Lens culinaris)凝集素(LCA)；甘露糖结合凝集素(MBL)；香蕉凝集素(BanLec)；半乳凝集素；菜豆(Phaseolusvulgaris)白细胞凝集素(PHA-L)；菜豆红细胞凝集素(PHA-E)；或曼陀罗(Daturastramonium)凝集素(DSL)；膜攻击复合物/穿孔素(MACPF)蛋白：例如，从蕨类植物中分离的MACPF；或从着色杆菌分离的GNIP1Aa；植物病毒外壳蛋白-毒素融合体：例如豌豆耳突花叶病毒(Pea enation mosaic virus)(PEMV)融合体；或POC抗蚜虫；聚糖结合结构域/毒素融 合蛋白：例如来自嗜虫耶尔森氏菌MH96的几丁质酶聚糖结合结构域、来自雪花莲凝集素的聚糖结合结构域、来自植物黄矮病毒组的聚糖结合结构域和/或来自昆虫细小病毒科病毒或杆状病毒科病毒的聚糖结合结构域。
在其他实施方案中，杀昆虫剂(IA)可选自以下组：乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制剂：例如，氨基甲酸酯类(例如，棉铃威、涕灭威、恶虫威、丙硫克百威、丁酮威、丁酮砜威、甲萘威、克百威、丁硫克百威、杀虫丹、仲丁威、伐虫脒、呋线威、异丙威、甲硫威、灭多威、速灭威、草氨酰、抗蚜威、残杀威、硫双威、久效威、唑蚜威、混杀威、灭除威和灭杀威)；和有机磷酸酯类(例如，高灭磷、甲基吡啶磷、乙基谷硫磷、甲基谷硫磷、硫线磷、氯氧磷、毒虫畏、氯甲磷、毒死蜱、甲基毒死蜱、蝇毒磷、杀螟腈、甲基内吸磷、二嗪农、敌敌畏/DDVP、百治磷、乐果、甲基毒虫畏、乙拌磷、苯硫磷、乙硫磷、灭线磷、伐灭磷、苯线磷、杀螟硫磷、倍硫磷、噻唑磷、庚烯磷、异柳磷、异恶唑磷、马拉硫磷、灭蚜磷、甲胺磷、杀扑磷、速灭磷、久效磷、二溴磷、氧化乐果、砜吸磷、对硫磷、甲基对硫磷、稻丰散、伏杀磷、甲拌磷、亚胺硫磷、磷胺、辛硫磷、丙溴磷、胺丙畏、丙硫磷、吡唑硫磷、哒嗪硫磷、喹硫磷、治螟磷、丁基嘧啶磷、双硫磷、特丁磷、杀虫畏、甲基乙拌磷、三唑磷、敌百虫、蚜灭磷、甲基嘧啶磷、imicyafos和o-(甲氧基氨基硫代磷酰基)水杨酸异丙酯；GABA门控氯离子通道阻断剂：例如，环二烯有机氯(例如，氯丹和硫丹)；和苯基吡唑类(fiproles)(例如，乙虫腈和氟虫腈)；钠通道调节剂：例如，拟除虫菊酯和除虫菊酯(例如，氟丙菊酯、丙烯菊酯、右旋顺反丙烯菊酯、右旋反式丙烯菊酯、联苯菊酯、生物烯丙菊酯、2-环戊烯基生物烯丙菊酯、生物苄呋菊酯、乙氰菊酯、氟氯氰菊酯、β-氟氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、λ-氯氟氰菊酯、γ-氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、α-氯氰菊酯、β-氯氰菊酯、θ-氯氰菊酯、ζ-氯氰菊酯、苯氰菊酯[(1r)-反式异构体]、溴氰菊酯、烯炔菊酯[(ez)-(1r)-异构体]、高氰戊菊酯、醚菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氟氰戊菊酯、氟氯苯菊酯、氟胺氰菊酯、kadathrin、除虫菊酯(除虫菊)、苄螨醚、苯醚菊酯[(1r)-反式异构体]、炔丙菊酯、苄呋菊酯、氟硅菊酯、七氟菊酯、胺菊酯、胺菊酯[(1r)-异构体]、四溴菊酯、四氟苯菊酯和百灭宁)；DDT；或甲氧氯；烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)竞争性调节剂：例如，新烟碱类(例如，啶虫脒、噻虫胺、呋虫胺、吡虫啉、烯啶虫胺、噻虫啉、噻虫嗪)；烟碱；亚砜亚胺类(例如，氟啶虫胺腈)；丁烯羟酸内酯(例如，氟吡呋喃酮)；和介离子类(例如，三氟苯嘧啶)；烟碱乙酰胆碱受体 (nAChR)变构调节剂-位点I：例如，多杀霉素(例如，乙基多杀菌素和多杀菌素)；谷氨酸门控 氯离子通道(GluCl)变构调节剂：例如，阿维菌素和米尔贝霉素(例如，阿维菌素、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、雷皮菌素和弥拜菌素)；保幼激素模拟物：例如，保幼激素类似物(例如，烯虫乙酯、烯虫炔酯和甲氧普林)；苯氧威；和吡丙醚；其他非特异性(多位点)抑制剂：例如，烷 基卤(例如，甲基溴和其他烷基卤)；三氯硝基甲烷；吐酒石；和异硫氰酸甲酯产生剂(例如，棉隆和威百亩)；弦音器TRPV通道调节剂：例如，吡啶偶氮甲碱衍生物(例如，吡蚜酮和吡氟喹虫唑)；和丙烯类(例如，双丙环虫酯)；螨生长抑制剂：例如，四螨嗪；氟螨嗪；噻螨酮；和乙 螨唑；线粒体ATP合酶抑制剂：例如，丁醚脲；有机锡杀螨剂(例如，三唑锡、三环锡和苯丁锡)；克螨特；和四氯杀螨砜；通过破坏质子梯度的氧化磷酸化的解偶联剂：例如，吡咯类、二 硝基酚和氟虫胺(例如，溴虫腈、DNOC和氟虫胺)；烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)通道阻断剂：例如沙蚕毒素类似物，诸如杀虫磺、杀螟丹盐酸盐、杀虫环、杀虫双；蜕皮干扰物(双翅目)：例如，灭蝇胺；蜕皮激素受体激动剂：例如，双酰肼类，诸如环虫酰肼、氯虫酰肼、甲氧虫酰肼和虫酰肼；章鱼胺受体激动剂：例如，双甲脒；线粒体复合物III电子传递抑制剂：例如，氟蚁 腙；灭螨醌；嘧螨酯；和联苯肼酯；线粒体复合物I电子传递抑制剂：例如，线粒体电子传递抑制性杀螨剂和杀昆虫剂(例如，喹螨醚、唑螨酯、嘧螨醚、哒螨灵、吡螨胺和唑虫酰胺)；和鱼 藤酮；电压依赖性钠通道阻滞剂：例如，噁二嗪(例如，茚虫威)；和缩氨基脲(例如，氰氟虫腙)；乙酰辅酶A羧化酶抑制剂：例如，特窗酸和特特拉姆酸衍生物(例如，螺螨酯、螺甲螨酯、甲氧哌啶乙酯和螺虫乙酯)；线粒体复合物IV电子传递抑制剂：例如，磷化物(例如，磷化铝、磷化钙、磷化氢和磷化锌)；和氰化物(例如，氰化钙、氰化钾和氰化钠)；线粒体复合物II电 子传递抑制剂：例如，β-酮腈衍生物(例如，腈吡螨酯和丁氟螨酯)；和羧酰苯胺类(例如，吡氟布胺)；兰尼碱受体调节剂：例如，二酰胺类，诸如氯虫苯甲酰胺、溴氰虫酰胺、环溴虫酰胺、氟虫双酰胺和氟氰虫酰胺；弦音器调节剂—未定义的靶位点：例如，氟啶虫酰胺；或GABA 门控的氯离子通道变构调节剂：例如，间二酰胺类和异噁唑啉类，诸如溴虫氟苯双酰胺、氟噁唑酰胺。
在一些实施方案中，IA可以是核苷酸、多核苷酸、基因、肽、多肽、蛋白质或酶。
在一些实施方案中，IA可在植物中表达。例如，在一些实施方案中，用于在植物、植物组织、植物细胞、植物种子或其植物部分中表达的IA可包括以下的一者或多者：从称为苏云金芽孢杆菌以色列变种、苏云金芽孢杆菌鲇泽变种、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌tenebrionensis变种和/或球形芽孢杆菌的生物体中分离的核苷酸、肽、多肽和/或蛋白质；几丁质酶；雪滴花凝集素；Wupa dsRNA；TIC4670β成孔蛋白；AfIP-1A/1B、PIP-72Aa、黄矮病毒组CP-毒素融合体；来自嗜虫耶尔森氏菌MH96的几丁质酶聚糖结合结构域；与毒素融合的来自雪花莲凝集素的聚糖结合结构域；与毒素融合的来自植物黄矮病毒组的聚糖结合结构域；以及与毒素融合的来自昆虫细小病毒科外壳蛋白病毒或杆状病毒科外壳蛋白病毒的聚糖结合结构域。
IA：真菌和真菌毒素
昆虫病原真菌是可充当昆虫和/或无脊椎动物的寄生虫和/或疾病的真菌。顾名思义，昆虫病原真菌是真核生物，具有由膜清楚地限定的细胞核。昆虫病原真菌可以是单细胞生物体(即单细胞的)，例如在酵母中；或者，它们可通过称为菌丝的丝状单元多细胞地形成，形成菌丝体。菌丝由单核或多核段形成，由横向壁隔开。
真菌繁殖单位被称为孢子或分生孢子。由于它属于昆虫病原真菌，目标昆虫通常被这些繁殖单位感染。一般来说，昆虫病原真菌对昆虫的感染通常分为三个步骤：(1)昆虫表皮中的粘附和孢子萌发；(2)穿透昆虫血囊；和(3)真菌发育，通常以昆虫死亡结束。参见Tanada,Y.和Kaya,H.K.，1993年，Insect Pathology.San Diego.Academic Press。
简而言之，发病机制的一般途径描述如下：一旦昆虫病原真菌穿透角质层，它就会进入血囊，其中菌丝转化为菌丝体或芽生孢子和/或原生质体。然后这些真菌传播到昆虫身体的各个部分，并最终破坏内部器官。昆虫的死亡是由于营养缺乏、对昆虫组织的侵入和破坏以及由于真菌产生的毒性物质引起的代谢失衡而发生的。参见Gillespie,A.T.和Claydon,N.，“The use of entomogenous fungi for pest control and the role oftoxins in pathogenesis.”1989年，Pestic.Sci.，第27卷：第203-215页。
在昆虫的腔内，感染成功将取决于真菌必须快速生长、穿透存在于昆虫体内的屏障和抵抗昆虫可能产生的毒性物质的遗传潜力，以及它的防御机制。昆虫的主要防御机制是外来物质的包裹和黑化。
一旦昆虫的免疫屏障被克服，真菌就会腐生地生长，形成菌袋并在血囊内产生繁殖结构。在足够的湿度和温度条件下，孢子和无菌菌丝从昆虫中长出。孢子的产生、卸载、分散、存活和萌发过程将取决于环境条件。昆虫尸体产生的大量孢子部分地补偿了它们中绝大多数根本无法存活的高几率。参见A.E.Hajek和R.J St.Leger，“Interactions BetweenFungal Pathogens and Insect Hosts”，Annual Review of Entomology，1994年，第39卷第1期，第293-322页。
在一些实施方案中，IA可以是昆虫病原真菌或由其衍生的产物，例如菌丝、孢子或繁殖结构。
在一些实施方案中，IA可以是由昆虫病原真菌产生的肽、蛋白质或毒素。
在一些实施方案中，IA可以是子囊菌纲真菌毒素。
在一些实施方案中，IA可以是虫草科真菌毒素。
在一些实施方案中，IA可以是刺束梗孢属(Akanthomyces)毒素、多孔囊菌属(Ascopolyporus)毒素；白僵菌属(Beauveria)毒素；Beejasamuha毒素；冬虫夏草(Cordyceps)毒素；Coremiopsis毒素；侧齿霉属(Engyodontium)毒素；球束梗孢属(Gibellula)毒素；厚盖霉属(Hyperdermium)毒素；Insecticola毒素；棒束孢属(Isaria)毒素；蜡蚧菌属(Lecanicillium)毒素；Microhilum毒素；Phytocordyceps毒素；拟球束梗孢属(Pseudogibellula)毒素；Rotiferophthora毒素；拟青霉属(Simplicillium)毒素；或虫壳属(Torrubiella)毒素。
在一些实施方案中，IA可以是选自下列属的生物体或来自该生物体的毒素：白僵菌属；绿僵菌属；拟青霉属；蜡蚧菌属；野村菌属(Nomuraea)；棒束孢属；被毛孢属(Hirsutella)；Sorosporella；曲霉属(Aspergillus)；Cordiceps；虫霉属(Entomophthora)；虫瘟霉属(Zoophthora)；帮斗蛤属(Pandora)；噬虫霉属(Entomophaga)；耳霉属(Conidiobolus)和蛙粪霉属(Basidiobolus)。
在一些实施方案中，IA可以是白僵菌属毒素。
在一些实施方案中，IA可以是：白色白僵菌(Beauveria alba)毒素；多形白僵菌(Beauveria amorpha)毒素；Beauveria arenaria毒素；Beauveria asiatica毒素；Beauveria australis毒素；球孢白僵菌(Beauveria bassiana)毒素；球孢虫草(Cordycepsbassiana)毒素；布朗尼氏白僵菌(Beauveria brongniartii)毒素；Beauveria brumptii毒素；苏格兰白僵菌(Beauveria caledonica)毒素；凯罗门白僵菌(Beauveria chiromensis)毒素；Beauveria coccorum毒素；Beauveria cretacea毒素；柱孢白僵菌(Beauveriacylindrospora)毒素；Beauveria delacroixii毒素；致密白僵菌(Beauveria densa)毒素；Beauveria dependens毒素；Beauveria doryphorae毒素；Beauveria effusa毒素；Beauveria epigaea毒素；猫棒束孢白僵菌(Beauveria felina)毒素；Beauveria geodes毒素；小球孢白僵菌(Beauveria globulifera)毒素；Beauveria heimii毒素；Beauveriahoplocheli毒素；Beauveria kipukae毒素；Beauveria laxa毒素；Beauveria malawiensis毒素；Beauveria medogensis毒素；Beauveria melolonthae毒素；Beauveria nubicola毒素；稻米白僵菌(Beauveria oryzae)毒素；Beauveria paradoxa毒素；Beauveriaparanensis毒素；Beauveria parasitica毒素；Beauveria petelotii毒素；假球孢白僵菌(Beauveria pseudobassiana)毒素；Beauveria rileyi毒素；Beauveria rubra毒素；Beauveria shiotae毒素；Beauveria sobolifera毒素；Beauveria spicata毒素；Beauveria stephanoderis毒素；Beauveria sulfurescens毒素；Beauveria sungii毒素；纤细白僵菌(Beauveria tenella)毒素；Beauveria tundrensis毒素；粘孢白僵菌(Beauveria velata)毒素；伊拉克白僵菌(Beauveria varroae)毒素；蠕孢白僵菌(Beauveria vermiconia)毒素；Beauveria vexans毒素；Beauveria viannai毒素；或Beauveria virella毒素。
在一些实施方案中，IA可以是球孢白僵菌毒素。
在一些实施方案中，IA可以是白僵菌素。
白僵菌素是由各种镰刀菌属(Fusarium)物种以及真菌球孢白僵菌产生的真菌毒素。白僵菌素是一种环肽，对昆虫以及人和鼠细胞系都有毒性作用。白僵菌素的活性是由于该化合物的离子载体特性。白僵菌素能够与碱金属阳离子形成复合物，并影响离子跨细胞膜的转运。此外，据报道，白僵菌素是最有效的胆固醇乙酰转移酶抑制剂之一。白僵菌素也已被证明诱导一种与细胞凋亡非常相似的细胞死亡。间接证据进一步表明，白僵菌素与其他镰刀菌毒素协同作用，产生额外的毒性作用。
在一些实施方案中，IA可以是具有化学式C45H57N3O9的白僵菌素。
在一些实施方案中，IA可以是具有化学式C46H59N3O9的“白僵菌素A”毒素。
在一些实施方案中，IA可以是具有化学式C47H61N3O9的“白僵菌素B”毒素。
在一些实施方案中，IA可以是球孢白僵菌菌株ANT-03孢子。
生产、制备和使用真菌和真菌毒素以防治和/或抑制昆虫的示例性方法公开于：名称为“Fungal strain Beauveria sp.MTCC 5184and a process for the preparation ofenzymes therefrom”的美国专利号9,217,140；名称为“Mycoinsecticides against aninsect of the grasshopper family”的美国专利号6,261,553；名称为“Bio-pesticideand method for pest control”的美国专利号8,709,399；名称为“Methods andmaterials for control of insects such as pecan weevils”的美国专利号7,241,612；以及名称为“Biocontrol of Varroa mites with Beauveria bassiana,”的美国专利号8,226,938，这些专利的公开内容全文以引用方式并入本文。
IA：凝集素
凝集素是能够识别并以特定方式可逆结合游离碳水化合物和/或细胞膜糖缀合物的多肽。凝集素是两组聚糖结合蛋白(GBP)中的一组，另一组是硫酸化糖胺聚糖(GAG)结合蛋白。在动物界、植物界、真菌界、原生生物界、古细菌界、细菌界和病毒界中发现，凝集素具有高度可变的生物学功能，具体取决于来源的生物体。例如，在哺乳动物中，内源性凝集素参与细胞-细胞外基质(ECM)；配子受精；细胞间自我识别；胚胎发育；细胞生长、分化、信号传导、粘附和迁移；细胞凋亡；宿主-病原体相互作用；免疫调节和炎症；糖蛋白折叠和路由；促有丝分裂诱导；和体内平衡。
通常，凝集素具有至少一个非催化结构域，该非催化结构域能够以可逆方式高特异性地结合与细胞膜结合的碳水化合物或游离碳水化合物(例如，多糖、糖蛋白或糖脂)。该结构域被称为碳水化合物识别结构域(CRD)。在一些实施方案中，凝集素的示例可包括：伴刀豆球蛋白A(ConA)，其分离自刀豆。ConA结合葡萄糖、甘露糖以及甘露糖和/或葡萄糖的糖苷。麦胚凝集素(WGA)是另一种与N-乙酰葡糖胺及其糖苷结合的凝集素。红芸豆凝集素与N-乙酰葡糖胺结合，并且花生凝集素与半乳糖和半乳糖苷结合。凝集素结构和生物学的示例性综述可见于Essentials of Glycobiology，第3版，Varki A、Cummings RD、Esko JD等人编辑，Cold Spring Harbor(NY):Cold Spring Harbor Laboratory Press，2015-2017。
由于其不同的作用和结构，凝集素可根据几种标准分类，例如，凝集素可基于细胞定位分类(例如，细胞外凝集素、细胞内内质网(ER)凝集素、高尔基凝集素、细胞质凝集素、膜结合凝集素)。参见Lakhtin等人，Lectins of living organisms.Theoverview.Anaerobe，2011年12月，第17卷第6期：第452-455页中描述的那些，其公开内容全文以引用方式并入本文。
结构或序列的相似性也可用于分类凝集素(例如，β棱柱凝集素(B型)、钙依赖性凝集素(C型)、具有纤维胶凝蛋白-纤维蛋白原/胶原结构域的凝集素(F型)、大蒜和雪花莲凝集素(G型)、透明质酸结合蛋白或透明质酸粘素(H型)、免疫球蛋白超家族凝集素(I型)、Jocob和相关凝集素(J型)、豆类种子凝集素(L型)、α甘露糖苷酶相关凝集素(M型)、核苷酸磷酸水解酶凝集素(N型)、蓖麻毒素凝集素(R型)、中国鲎(Tachypleus tridentatus)(T型)、麦胚凝集素(W型)、非洲爪蟾卵凝集素(X型))。参见Kumar等人，“Biological role oflectins:A review.”，J.Orofac.Sci.，2012年，第4卷：第20-25页，其公开内容全文以引用方式并入本文。
或者，碳水化合物特异性也可用于对凝集素进行分类。例如，基于动物和植物(例如，d-甘露糖(d-葡萄糖)结合凝集素、2-乙酰氨基-2-脱氧-葡萄糖结合凝集素、2-乙酰氨基-2-脱氧-半乳糖结合凝集素、d-半乳糖结合凝集素、l-岩藻糖结合凝集素、其他凝集素)；或基于所有生物体(例如，葡萄糖/甘露糖结合凝集素、半乳糖和N-乙酰基-d-半乳糖胺结合凝集素、l-岩藻糖结合凝集素、唾液酸结合凝集素)。参见Goldstein I.J.和Hayes C.E.，“The Lectins:Carbohydrate-binding proteins of plants and animals.”Adv.Carbohydr.Chem.Biochem.，1978年，第35卷：第127-340页；和Kumar等人，“Biologicalrole of lectins:A review.”，J.Orofac.Sci.，2012年，第4卷：第20-25页，其公开内容全文以引用方式并入本文。
凝集素结合结构域的表征可通过如下方式完成：相关接触和蛋白质动力学的X-射线共结晶学、NMR和MS图谱；针对标记半抗原的平衡透析；与过滤(例如，膜)的平衡结合；通过PEG离心终止(溶解的受体)的平衡结合；多价配体的使用；多价受体探针的使用；Biacore实时动力学；和/或评估细胞粘附的速率，例如，在剪切下向固定的聚糖或受体的流动。
凝集素序列、3D X射线结构和关于凝集素的参考文献可从以下网站获得：https://www.unilectin.eu/unilectin3D/；参见Bonnardel等人，“UniLectin3D,adatabase of carbohydrate binding proteins with curated information on 3Dstructures and interacting ligands.”，Nucleic Acids Res.，2019年1月8日，第47卷第D1期：第D1236-D1244页，其公开内容全文以引用方式并入本文。
在一些实施方案中，IA可以是凝集素。
在一些实施方案中，IA可以是凝集素，其中所述凝集素既不与CRIP融合也不与CRIP有效连接。
在一些实施方案中，IA可以是以下之一：雪滴花凝集素(GNA)；西洋接骨木凝集素(SNA)；朝鲜槐-II(MAL-II)；鸡冠刺桐凝集素(ECL)；蓖麻凝集素-I(RCA)；花生凝集素(PNA)；麦胚凝集素(WGA)；单叶加纳籽-II(GSL-II)；Con A；小扁豆凝集素(LCA)；甘露糖结合凝集素(MBL)；BanLec；半乳凝集素；菜豆白细胞凝集素(PHA-L)；菜豆红细胞凝集素(PHA-E)；和/或曼陀罗凝集素(DSL)。
在一些实施方案中，IA可以是表3中所列的一种或多种凝集素。例如，在一些实施方案中，凝集素可具有与SEQ ID NO:35、595-615中任一项所示的氨基酸序列或其变体具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
表3.该表提供了充分表征的凝集素的非限制性示例以及它们在NCBI上的登录号、序列表中列出的序列和SEQ ID NO。
Figure BDA0004014715560001771
Figure BDA0004014715560001781
Figure BDA0004014715560001791
Figure BDA0004014715560001801
在一些实施方案中，IA可包含与SEQ ID No:35、595-615中任一项所示的氨基酸序列具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
IA：几丁质酶
在一些实施方案中，IA可以是几丁质酶。
在一些实施方案中，IA可以是来自绿色木霉(Trichoderma viride)的几丁质酶。
在一些实施方案中，IA可以是具有SEQ ID NO:620所示的氨基酸序列的几丁质酶。
在一些实施方案中，IA可以是包含与SEQ ID No:620中任一项所示的氨基酸序列具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列的几丁质酶。
IA：印楝化合物
印楝(也称为印度楝、印楝树或印度丁香)是楝科(Meliaceae)桃花心木属的树。印楝原产于印度次大陆，通常生长在热带和亚热带地区。
几个世纪以来，印楝一直被用作杀虫剂的来源。各种印度楝种子提取物，特别是含有亲水性四降三萜印楝素的印度楝种子提取物，已知会影响属于各种目的多种昆虫物种的摄食行为、蜕变(昆虫生长调节[IGR]作用)、繁殖力和适应性。
印楝素是一种从印度楝树(印楝)中提取的柠檬苦素类四降三萜植物杀昆虫剂。它是高度氧化的四降三萜，具有过多的氧官能团，并且包含烯醇醚、缩醛、半缩醛和四取代的环氧乙烷以及多种羧酸酯。
印楝素在结构上类似于昆虫激素“蜕皮激素”。这些激素通常控制昆虫从幼虫到蛹再到成虫的蜕变过程。印楝素主要起“蜕皮激素阻断剂”的作用。它阻断昆虫产生和释放重要激素。结果，昆虫不能蜕皮。已知印楝素还会干扰昆虫的交配和性交流，驱赶幼虫和成虫，阻止雌性产卵，使成虫绝育并阻止进食。
在一些实施方案中，IA可以是印楝化合物。
在一些实施方案中，IA可以是印楝素；印苦楝二酮；Azadiradionolide；脱乙酰葛杜宁；印楝素B；Desfuranoazadiradione；环氧楝树二酮；葛杜宁；Mahmoodin；NeemfruitinA；Neemfruitin B；印苦楝内酯；印楝宾；Nimolicinol；Ohchinin Acetate；印楝沙兰林；Salannol；alpha-Nimolactone；beta-Nimolactone；2',3'-二氢印楝沙兰林；3-脱乙酰基印楝沙兰林；6-脱乙酰基印楝素；7-Acetyl-16,17-dehydro-16-hydroxyneotrichilenone；7-Benzoylnimbocinol；7-脱乙酰基-7-苯甲酰基环氧楝树二酮；7-脱乙酰基-7-苯甲酰基葛杜宁；7-Deacetyl-17-epinimolicinol；15-羟基印苦楝二酮；17-表-17-羟基印苦楝二酮；17-表印苦楝二酮；20,21,22,23-四氢-23-氧代印苦楝二酮；22,23-Dihydronimocinol；或28-去氧代印苦楝内酯。
在一些实施方案中，IA可以是印楝素。
在一些实施方案中，IA可以是具有以下化学式的印楝素：C35H44O16。
提取印楝素的示例性方法公开于名称为“Azadirachtin extraction process”的美国专利号6,312,738中，其公开内容全文以引用方式并入本文。
由印楝种子材料生产印楝素浓缩物的示例性方法公开于名称为“Method forproducing azadirachtin concentrates from neem seed materials”的PCT申请号WO1995002962A1中，其公开内容全文以引用方式并入本文。
纯化印楝素的示例性方法公开于名称为“Process for preparing purifiedAzadirachtin in powder form from neem seeds and storage stable aqueouscomposition containing Azadirachtin”的美国专利号5,736,145，其公开内容全文以引用方式并入本文。
产生和储存包含印楝素的组合物的示例性方法公开于名称为“Storage stablepesticide formulations containing azadirachtin”的美国专利号6,811,790中，其公开内容全文以引用方式并入本文。
制备和使用印楝素的示例性方法公开于名称为“Pesticide and a method ofcontrolling a wide variety of pests”的美国专利号9,635,858中，其公开内容全文以引用方式并入本文。
示例性的印楝素提取物和组合物公开于名称为“Insecticidal hydrogenatedneem extracts”的美国专利号4,943,434、名称为“Hydrophic extracted neem oil-anovel insecticide”的美国专利号5,411,736和名称为“Insecticidal compositionsderived from neem oil and neem wax fractions”的美国专利号5,372,817，这些专利的公开内容全文以引用方式并入本文。
IA：硼化合物
在一些实施方案中，IA可以是硼化合物。
在一些实施方案中，IA可以是硼酸、四羟基二硼、硼酸盐、氧化硼、硼烷或任何前述物质的任何组合。
在一些实施方案中，IA可以是在水性介质中产生硼氧化物的硼烷和/或硼酸酯。
在一些实施方案中，硼化合物是硼酸、硼酸盐(例如，碱性硼酸钠(硼砂))或硼酸和硼酸盐的混合物。
在一些实施方案中，IA可以是硼酸盐。合适的硼酸盐包括但不限于过硼酸盐、偏硼酸盐、四硼酸盐、八硼酸盐、硼酸酯和任何前述物质的任何组合。优选的硼酸盐包括但不限于金属硼酸盐(例如，硼酸钠、硼酸锌和硼酸钾)，诸如十水合四硼酸二钠、四水合八硼酸二钠、偏硼酸钠、一水合过硼酸钠、八硼酸二钠、五水合四硼酸钠、四硼酸钠、偏硼酸铜、硼酸锌、偏硼酸钡和它们的任何组合。
在一些实施方案中，IA可以是硼砂(例如，十水合硼酸钠-10mol Na2B4O7.10H2O或五水合硼酸钠-5mol Na2B4O7.5H2O)。
在其他实施方案中，IA可以是硼化合物，其可以有效量用作硼砂的替代物(或可以有效量与硼砂或彼此组合使用)。例如，在一些实施方案中，IA可以是无水硼砂(Na2B4O7)；四硼酸铵((NH4)2B4O7.4H2O)；五硼酸铵((NH4)2B10O16.8H2O)；五硼酸钾(K2B10O16.8H2O)；四硼酸钾(K2B4O7.4H2O)；偏硼酸钠((8mol)Na2B2O4.8H2O)；偏硼酸钠((4mol)Na2B2O4.4H2O)；十水合四硼酸二钠(Na2B4O7.10H2O)；五水合四硼酸二钠(Na2B4O7.5H2O)；四水合八硼酸二钠(Na2B8O13.4H2O)；或它们的组合。
在一些实施方案中，IA可以是选自以下物质的硼化合物：硼砂、硼酸、八硼酸二钠、硼酸钠、偏硼酸钠、十水合四硼酸钠、氧化硼、碳化硼、氮化硼、三溴化硼、三氯化硼和三氟化硼。
在一些实施方案中，IA可以是硼酸。
在一些实施方案中，IA可以是具有化学式H3BO3的硼酸。
描述硼化合物和/或含硼化合物的生产和使用的示例性方法公开于名称为“Insecticide”的美国专利号490,688、名称为“Insectifuge”的美国专利号1,029,203、名称为“Composition and method of preparing roach tablets”的美国专利号1,636,688、名称为“Termite bait composition”的美国专利号4,363,798、名称为“Pestexterminating composition”的美国专利号4,959,221、名称为“Pest-controllingcomposition”的美国专利号5,871,780和名称为“Dual-action pest controlformulation and method”的美国专利号8,778,372，这些专利的公开内容全文以引用方式并入本文。
IA：病毒
在一些实施方案中，IA可以是在与昆虫物种接触时具有杀昆虫活性的病毒。
在一些实施方案中，IA可以是DNA病毒或RNA病毒。
在一些实施方案中，IA可以是囊泡病毒、杆状病毒、浓核病毒、昆虫痘病毒、唾液腺肥大病毒、虹彩病毒、裸杆状病毒、多DNA病毒、双顺反子病毒、传染性软腐病病毒、诺达病毒、四病毒或质型多角体病毒。
囊泡病毒(Ascoviridae)科病毒
在一些实施方案中，IA可以是来自囊泡病毒科的病毒。例如，在一些实施方案中，IA可以是囊泡病毒属，诸如烟芽夜蛾(Heliothis virescens)囊泡病毒3a；烟芽夜蛾囊泡病毒3；烟芽夜蛾囊泡病毒3b；烟芽夜蛾囊泡病毒3c；烟芽夜蛾囊泡病毒3d；烟芽夜蛾囊泡病毒3e；烟芽夜蛾囊泡病毒3f；烟芽夜蛾囊泡病毒3g；烟芽夜蛾囊泡病毒3h；烟芽夜蛾囊泡病毒3j；草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)囊泡病毒1a；粉纹夜蛾(Trichoplusiani)囊泡病毒2a；烟芽夜蛾囊泡病毒3i；灰翅夜蛾属(Spodoptera)囊泡病毒；甜菜夜蛾囊泡病毒5a；草地贪夜蛾囊泡病毒1c；草地贪夜蛾囊泡病毒1d；粉纹夜蛾囊泡病毒2b；粉纹夜蛾囊泡病毒2c；粉纹夜蛾囊泡病毒2d；或粉纹夜蛾囊泡病毒6b。
在一些实施方案中，IA可以是来自囊泡病毒科的病毒。例如，在一些实施方案中，IA可以是图尔病毒属，诸如美丽双缘姬蜂(Diadromus pulchellus)图尔病毒；美丽双缘姬蜂囊泡病毒4a；或枣瘿蚊(Dasineura jujubifolia)图尔病毒2a。
浓核病毒(Densovirinae)亚科病毒
在一些实施方案中，IA可以是来自浓核病毒亚科的病毒。例如，在一些实施方案中，IA可以是双义浓核病毒。
在一些实施方案中，IA可以是选自以下组的双义浓核病毒：小行星(Asteroid)双义浓核病毒1；海星相关浓核病毒；蜚蠊(Blattodean)双义浓核病毒1；黑胸大蠊(Periplaneta fuliginosa)浓核病毒；黑胸大蠊浓核病毒Guo/2000；蜚蠊双义浓核病毒2；德国小蠊(Blattella germanica)浓核病毒1；十足类双义浓核病毒1；红螯螯虾(Cheraxquadricarinatus)浓核病毒；双翅目双义浓核病毒1；尖音库蚊(Culex pipiens)浓核病毒；半翅目双义浓核病毒1；柑橘粉蚧(Planococcus citri)浓核病毒；半翅目双义浓核病毒2；车前圆尾蚜(Dysaphis plantaginea)浓核病毒；半翅目双义浓核病毒3；桃蚜(Myzuspersicae)浓核病毒；烟蚜(Myzus persicae nicotianae)浓核病毒；膜翅目(Hymenopteran)双义浓核病毒1；红火蚁(Solenopsis invicta)浓核病毒；鳞翅目双义浓核病毒1；大蜡螟(Galleria mellonella)浓核病毒；鹿眼蛱蝶(Junonia coenia)浓核病毒；鹿眼蛱蝶浓核病毒pBRJ/1990；罗氏夜蛾(Mythimna loreyi)浓核病毒；大豆尺夜蛾(Pseudoplusia includens)浓核病毒；直翅目(Orthopteran)双义浓核病毒1；家蟋蟀(Acheta domestica)浓核病毒；未分类的双义浓核病毒；二斑叶螨(Tetranychus urticae)相关的双义浓核病毒；未分类的浓核病毒；双义浓核病毒CaaDV1；双义浓核病毒CaaDV2；Atrato Denso样病毒；Atrato Denso样病毒1；浓核病毒SC1065；浓核病毒SC1118；浓核病毒SC116；浓核病毒SC2121；浓核病毒SC2209；浓核病毒SC2228；浓核病毒SC2886；浓核病毒SC3749；浓核病毒SC3908；浓核病毒SC4092；浓核病毒SC444；浓核病毒SC525；柑橘木虱(Diaphorina citri)浓核病毒；小蔗螟(Diatraea saccharalis)浓核病毒；狼粪(Lupinefece)相关浓核病毒；狼粪相关浓核病毒2；或双义浓核病毒属物种。
昆虫痘病毒(Entomopoxvirinae)亚科病毒
在一些实施方案中，IA可以是来自昆虫痘病毒亚科的病毒。例如，在一些实施方案中，IA可以是甲型昆虫痘病毒；乙型昆虫痘病毒；茧蜂(Diachasmimorpha)昆虫痘病毒；血黑蝗(Melanoplus sanguinipes)昆虫痘病毒；或一些迄今未分类的昆虫痘病毒亚科。
在一些实施方案中，IA可以是选自以下组的昆虫痘病毒亚科病毒：古铜异丽金龟(Anomala cuprea)昆虫痘病毒；茶小卷叶蛾(Adoxophyes honmai)昆虫痘病毒；茶小卷叶蛾昆虫痘病毒“L”；桑灯蛾(Amsacta moorei)昆虫痘病毒；双年色卷蛾(Choristoneurabiennis)昆虫痘病毒；云杉色卷蛾(Choristoneura fumiferana)昆虫痘病毒；蔷薇斜条卷叶蛾(Choristoneura rosaceana)昆虫痘病毒；蔷薇斜条卷叶蛾昆虫痘病毒“L”；棉铃实夜蛾(Heliothis armigera)昆虫痘病毒；东方粘虫(Mythimna separata)昆虫痘病毒；东方粘虫昆虫痘病毒“L”；未分类的乙型昆虫痘病毒；长尾潜蝇茧蜂(Diachasmimorphalongicaudata)昆虫痘病毒；迁徒蚱蜢(Melanoplus sanguinipes)昆虫痘病毒“O”；埃及蚂蚱(Anacridium aegyptium)昆虫痘病毒；意大利蝗(Calliptamus italicus)昆虫痘病毒；细长摇蚊(Chironomus decorus)昆虫痘病毒；西伯利亚蝗(Gomphocerus sibiricus)昆虫痘病毒；茶卷叶蛾(Homona coffearia)昆虫痘病毒；阿根廷蚁(Linepithema humile)昆虫痘病毒1；亚洲小车蝗(Oedaleus asiaticus)昆虫痘病毒；或粘虫(Pseudaletia separata)昆虫痘病毒。
虹彩病毒(Iridoviridae)科病毒
在一些实施方案中，IA可以是虹彩病毒科病毒，例如虹彩病毒。
在一些实施方案中，IA可以是选自以下组的虹彩病毒科病毒：大蚊(Tipula)虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒31；普通卷甲虫(Armadillidium vulgare)虹色病毒；日本丽金龟(Popillia japonica)虹色病毒；粗糙鼠妇(Porcellio scaber)虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒6；双斑蟋(Gryllus bimaculatus)虹彩病毒；未分类的虹彩病毒；樱花科毛对虾(Acetes erythraeus)虹彩病毒；黎豆夜蛾虹色病毒；Armadillidium decorum虹色病毒；Barramundi perch虹彩病毒；蓝鳃太阳鱼虹彩病毒；短棘鲾虹彩病毒；红鳍笛鲷虹彩病毒；长体圆鲹(Decapterus macrosoma)虹彩病毒；小牙鲾(Gazza minuta)虹彩病毒；无脊椎动物虹色病毒16；褐新西兰肋翅鳃角金龟(Costelytra zealandica)虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒2；白粉金黾甲(Sericesthis)虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒23；非洲独角仙(Heteronychus arator)虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒24；东方蜜蜂(Apis cerana)虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒29；黄粉虫(Tenebrio molitor)虹色病毒；虹彩病毒金目鲈/Quang Ninh/VNM/2008；虹彩病毒IV31；日本海鲈虹彩病毒；有毒兔头鲀(Lagocephalussceleratus)虹彩病毒；尖吻鲈(Lates calcarifer)虹彩病毒；黑边鲾(Leiognathussplendens)虹彩病毒；笋壳鱼虹彩病毒；圆眼燕鱼虹彩病毒；三线矶鲈(Parapristipomatrilineatum)虹彩病毒；鲈鱼虹彩病毒603-2/中国；六指马鲅(Polydactylus sextarius)虹彩病毒；猪西门氏菌(Porcellio siculoccidentalis)虹彩病毒；榆黄莹叶甲(Pyrrhaltaluteola)虹彩病毒；英国林蛙(Rana temporaria)虹彩病毒1；英国林蛙虹彩病毒2；海银鲷鱼虹彩病毒；黑鱼虹彩病毒；石鲽虹彩病毒603-3/中国；石鲽虹彩病毒724/中国；鲟鱼虹彩病毒；印度狗母鱼(Synodus indicus)虹彩病毒；或Trichoniscus panormidensis虹色病毒。
裸杆状病毒(Nudiviridae)科病毒
在一些实施方案中，IA可以是裸杆状病毒科病毒，例如，α型裸杆状病毒、β型裸杆状病毒或一些迄今未分类的裸杆状病毒科病毒。
在一些实施方案中，IA可以是选自以下组的裸杆状病毒科病毒：双斑蟋裸杆状病毒；椰子犀角金龟(Oryctes rhinoceros)裸杆状病毒；玉米穗虫(Heliothis zea)裸杆状病毒；美洲棉铃虫裸杆状病毒2；叉犀金龟属(Allomyrina)裸杆状病毒；果蝇(Drosophilainnubila)裸杆状病毒；果蝇属(Drosophila)裸杆状病毒RLU-2011；Esparto病毒；欧洲龙虾(Homarus gammarus)裸杆状病毒；Kallithea病毒；沼虾属(Macrobrachium)裸杆状病毒CN-SL2011；Mautenbach病毒；褐飞虱(Nilaparvata lugens)内源性裸杆状病毒；斑节对虾(Penaeus monodon)裸杆状病毒；沼泽大蚊(Tipula oleracea)裸杆状病毒；或Tomelloso病毒。
传染性软腐病病毒(Iflaviridae)科病毒
在一些实施方案中，IA可以是选自以下组的传染性软腐病病毒科病毒：柞蚕(Antheraea pernyi)传染性软腐病病毒；菜蚜(Brevicoryne brassicae)病毒；菜蚜病毒-UK；蜜蜂残翅病毒；Kakugo病毒；VDV-1/DWV重组体；瓢虫茧蜂(Dinocampus coccinellae)麻痹病毒；茶尺蠖(Ectropis obliqua)病毒；茶尺蠖小RNA病毒；传染性软化病病毒；传染性软化病病毒(蚕分离株)；全环硬蜱(Ixodes holocyclus)传染性软腐病病毒；牧草盲蝽(Lyguslineolaris)病毒1；舞毒蛾(Lymantria dispar)传染性软腐病病毒1；褐飞虱蜜露病毒1；榕透翅毒蛾(Perina nuda)病毒；囊状幼虫病病毒；囊状幼虫病病毒CSBV-LN/中国/2009；慢蜂麻痹病毒；甜菜夜蛾传染性软腐病病毒1；甜菜夜蛾传染性软腐病病毒2；瓦螨(Varroadestructor)病毒1；未分类的传染性软腐病病毒；ACT flea传染性软腐病病毒；刺扰伊蚊(Aedes vexans)传染性软腐病病毒；阿蚊属(Armigeres)传染性软腐病病毒；蝙蝠传染性软腐病病毒；蜜蜂传染性软腐病病毒1；黑莓传染性软腐病病毒A；黑莓传染性软腐病病毒B；家蚕(Bombyx mori)传染性软腐病病毒；Breves传染性软腐病病毒；小菜蛾(Diamondbackmoth)传染性软腐病病毒；毛眼林蚁(Formica exsecta)病毒2；褐黄血蜱(Haemaphysalisflava)传染性软腐病病毒；艺神袖蝶(Heliconius erato)传染性软腐病病毒；棉铃虫传染性软腐病病毒；蠓传染性软腐病病毒90C0；亚洲长翼蝠(Miniopterus fuliginosus)传染性软腐病病毒；Moku病毒；丽蝇蛹集金小蜂(Nasonia vitripennis)病毒；Pirizal传染性软腐病病毒；异沙叶蝉(Psammotettix alienus)传染性软腐病病毒1；Rondonia传染性软腐病病毒1；Rondonia传染性软腐病病毒2；葡萄带叶蝉(Scaphoideus titanus)传染性软腐病病毒1；葡萄带叶蝉传染性软腐病病毒2；VDV-1/DWV重组体4；墨胸胡蜂(Vespa velutina)Moku病毒；或冠花蟹蛛(Xysticus cristatus)传染性软腐病病毒。
杆状病毒科病毒
在一些实施方案中，IA可以是来自杆状病毒科的病毒。例如，在一些实施方案中，IA可以是α杆状病毒属、β杆状病毒属、δ杆状病毒属、γ杆状病毒属或迄今未分类的杆状病毒科病毒。
在一些实施方案中，IA可以是选自以下组的α杆状病毒属病毒：茶小卷叶蛾核型多角体病毒；小地老虎(Agrotis ipsilon)多核型多角体病毒；黄地老虎(Agrotis segetum)核型多角体病毒A；黄地老虎核型多角体病毒B；柞蚕核型多角体病毒；普利柞蚕(Antheraeaproylei)核型多角体病毒；蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricini)核型多角体病毒；黎豆夜蛾多核型多角体病毒；苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)多核型多角体病毒；芹菜夜蛾(Anagrapha falcifera)MNPV；苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒；大蜡螟MNPV；小菜蛾多核型多角体病毒；两色髯须夜蛾(Rachiplusia nu)MNPV；薄荷灰夜蛾(Rachiplusia ou)MNPV；家蚕核型多角体病毒；野桑蚕(Bombyx mandarina)核型多角体病毒；野桑蚕核型多角体病毒S2；家蚕核型多角体病毒K1；油桐尺蠖(Buzura suppressaria)核型多角体病毒；迁粉蝶(Catopsilia pomona)核型多角体病毒；云杉色卷蛾DEF多核型多角体病毒；云杉色卷蛾多核型多角体病毒；西部云杉色卷蛾(Choristoneura occidentalis)α杆状病毒；欧洲云杉卷叶蛾(Choristoneura murinana)核型多角体病毒；蔷薇斜条卷叶蛾核型多角体病毒；金双斑蛾(Chrysodeixis chalcites)核型多角体病毒；金双斑蛾SNPV TF1-A；大豆尺蠖(Chrysodeixis includens)核型多角体病毒；大豆尺夜蛾SNPV IE；豆天蛾(Clanisbilineata)核型多角体病毒；泡桐茸毒蛾(Dasychira pudibunda)核型多角体病毒；茶尺蠖核型多角体病毒；苹果褐卷蛾(Epiphyas postvittana)核型多角体病毒；茶黄毒蛾(Euproctis pseudoconspersa)核多角体病毒；棉铃虫核型多角体病毒；棉铃虫NPV NNg1；棉铃虫NPV澳大利亚株；棉铃虫核型多角体病毒G4；棉铃虫SNPV；铃夜蛾属(Helicoverpa)SNPV AC53；美洲棉铃虫单核型多角体病毒；新天蚕蛾属(Hemileuca)物种核型多角体病毒；新天蚕蛾属物种核型多角体病毒；美国白蛾(Hyphantria cunea)核型多角体病毒；铁杉尺蠖(Lambdina fiscellaria)核型多角体病毒；粘虫(Leucania separata)核型多角体病毒；巴西天蚕蛾(Lonomia obliqua)核型多角体病毒；巴西天蚕蛾多核型多角体病毒；舞毒蛾多核型多角体病毒；黑角舞蛾(Lymantria xylina)核型多角体病毒；甘蓝夜蛾(Mamestrabrassicae)多核型多角体病毒；蓓带夜蛾(Mamestra configurata)核型多角体病毒A；蓓带夜蛾核型多角体病毒B；棉铃虫多核型多角体病毒；豆野螟(Maruca vitrata)核型多角体病毒；一点粘虫(Mythimna unipuncta)核型多角体病毒；冬尺蠖蛾(Operophtera brumata)核型多角体病毒；白斑毒蛾(Orgyialeucostigma)核型多角体病毒；黄杉合毒蛾(Orgyiapseudotsugata)多核型多角体病毒；斜纹刺蛾(Oxyplax ochracea)核型多角体病毒；Perigonia lusca核型多角体病毒；Perigonia lusca单核型多角体病毒；甜菜夜蛾多核型多角体病毒；甜菜夜蛾核型多角体病毒(US株)；草地贪夜蛾多核型多角体病毒；棉叶虫(Spodoptera littoralis)核型多角体病毒；斜纹夜蛾(Spodoptera litura)核型多角体病毒；枣尺蠖(Sucra jujuba)核型多角体病毒；弧金翅夜蛾(Thysanoplusia orichalcea)核型多角体病毒；粉纹夜蛾单核型多角体病毒；蝙蝠蛾(Wiseana signata)核型多角体病毒；未分类的α杆状病毒；醋栗尺蛾(Abraxas grossulariata)核型多角体病毒；绿尾大蚕蛾(Actias Selene)核型多角体病毒；棉花棉褐带卷蛾(Adoxophyes orana)核型多角体病毒；银纹红袖蝶(Agraulis vanillae)MNPV；警纹地夜蛾(Agrotis exclamationis)核型多角体病毒；小地老虎多衣壳核型多角体病毒；Amorbia cuneacapsa核型多角体病毒；鳄梨卷蛾(Amorbia cuneana)核型多角体病毒；葡萄天蛾(Ampelophagarubiginosa)核型多角体病毒；花生灯蛾(Amsacta albistriga)核型多角体病毒；芹菜夜蛾多核型多角体病毒；多音天蚕(Antheraea polyphemus)核型多角体病毒；黎豆夜蛾核型多角体病毒；春尺蛾(Apocheimacinerarium)核型多角体病毒；绢粉蝶(Aporia crataegi)核型多角体病毒；丑巢黄卷蛾(Archips cerasivoranus)核型多角体病毒；蔷薇黄卷蛾(Archips rosanus)核型多角体病毒；蓖麻蚕(Attacus ricini)核型多角体病毒；生菜尺蠖(Autographa biloba)核型多角体病毒；丫纹夜蛾(Autographa gamma)核型多角体病毒；黑点银纹夜蛾(Autographanigrisigna)核型多角体病毒；双尖顶尺蠖(Boarmia bistortata)核型多角体病毒；野桑蚕核型多角体病毒；玉米茎蛀褐夜蛾(Busseola fusca)核型多角体病毒；Catposilia pomona核型多角体病毒；翎夜蛾(Cerapteryx graminis)核型多角体病毒；异色卷蛾(Choristoneura diversana)核型多角体病毒；西枞色卷蛾(Choristoneuraoccidentalis)核型多角体病毒；行军切叶虫(Chorizagrotis auxiliaris)核型多角体病毒；大豆尺蠖NPV；粉花凌霄大蚕蛾(Coloradia pandora)α杆状病毒；粉花凌霄大蚕蛾核型多角体病毒；Condylorrhiza vestigialis MNPV；Condylorrhiza vestigialis多核型多角体病毒；Cryptophlebia peltastica核型多角体病毒；波纹杂毛虫(Cyclophragma undans)核型多角体病毒；云杉茸毒蛾(Dasychira plagiata)核型多角体病毒；思茅松毛虫(Dendrolimus kikuchii)核型多角体病毒；条纹绢野螟(Diaphania pulverulentalis)核型多角体病毒；天后银纹袖蝶(Dione Juno)MNPV tmk1/ARG/2003；天后银纹袖蝶核型多角体病毒；Dirphia peruvianus核型多角体病毒；灰茶尺蠖(Ectropis grisescens)核型多角体病毒；Epinotia granitalis核型多角体病毒；半带黄毒蛾(Euproctis digramma)核型多角体病毒；云杉吉松叶蜂(Gilpinia hercyniae)核型多角体病毒；艺神袖蝶核型多角体病毒；烟青虫(Helicoverpa assulta)核型多角体病毒；南美棉铃虫(Helicoverpagelotopoeon)单核型多角体病毒；点实夜蛾(Heliothis peltigera)SNPV；玉米穗虫核型多角体病毒；Hemerocampa vetusta核型多角体病毒；新天蚕蛾属(Hemileuca)α杆状病毒；黄钩尺蛾(Hyposidra infixaria)NPV；大钩翅尺蛾(Hyposidra talaca)NPV；茶刺蛾(Iragoides fasciata)核型多角体病毒；鹿眼蛱蝶核型多角体病毒；Leucoma salicis核型多角体病毒；枫首毒蛾(Lymantria mathura)多核型多角体病毒；松针毒蛾(Lymantriamonacha)核型多角体病毒；黑角舞蛾核型多角体病毒2；天幕毛虫属(Malacosoma)α杆状病毒；苹天幕毛虫(Malacosoma americanum)核型多角体病毒；加州天幕毛虫(Malacosomacalifornicum)核型多角体病毒；西加州天幕毛虫(Malacosoma californicum pluviale)核型多角体病毒；森林天幕毛虫(Malacosoma disstria)核型多角体病毒；黄褐天幕毛虫(Malacosoma neustria)核型多角体病毒；蓓带夜蛾核型多角体病毒；娆粉蝶属(Neophasia)α杆状病毒；冷杉绿伪尺蛾(Nepytia phantasmaria)核型多角体病毒；孔雀蛱蝶(Nymphalis io)核型多角体病毒；橡树尺蠖α杆状病毒；同安钮夜蛾(Ophiusadisjungens)核型多角体病毒；澳古毒蛾(Orgyia anartoides)核型多角体病毒；灰斑古毒蛾(Orgyia ericae)核型多角体病毒；黄杉合毒蛾单衣壳核型多角体病毒；小眼夜蛾(Panolis flammea)核型多角体病毒；疆夜蛾属(Peridroma)α杆状病毒；斑色地老虎(Peridroma margaritosa)核型多角体病毒；榕透翅毒蛾核型多角体病毒；加利福尼亚橡树虫(Phryganidia californica)核型多角体病毒；Plusia acuta核型多角体病毒；金翅夜蛾(Plusia orichalcea)核型多角体病毒；小菜蛾(Plutella maculipennis)核型多角体病毒；拟粘液蛾属(Pseudaletia)α杆状病毒；大豆尺夜蛾核型多角体病毒；澳洲牧场毛虫(Pterolocera amplicornis)核型多角体病毒；Rachiplusia nu核型多角体病毒；Rachiplusia nu单核型多角体病毒；眉纹天蚕蛾(Samia cynthia)核型多角体病毒；人纹污灯蛾(Spilarctia obliqua)核型多角体病毒；尘污灯蛾(Spilosoma obliqua)核型多角体病毒；Spilosoma phasma核型多角体病毒；Spodoptera cosmioides核型多角体病毒；亚热带粘虫(Spodoptera eridania)核型多角体病毒；莎草粘虫(Spodoptera exempta)核型多角体病毒；棉叶虫多衣壳核型多角体病毒；斜纹夜蛾(Spodoptera litura)MNPV；斜纹夜蛾核型多角体病毒II；Spodoptera terricola核型多角体病毒；衣蛾(Tineolabisselliella)核型多角体病毒；金裳凤蝶(Troides aeacus)核型多角体病毒；Wiseanacervinata核型多角体病毒；银纹红袖蝶属(Agraulis)物种核型多角体病毒；天幕毛虫属(Malacosoma)物种α杆状病毒；天幕毛虫属物种核型多角体病毒；娆粉蝶属物种α杆状病毒；或未鉴定的核型多角体病毒。
在一些实施方案中，IA可以是选自以下组的β杆状病毒属病毒：棉花棉褐带卷蛾颗粒体病毒；黄地老虎颗粒体病毒；菜粉蝶(Artogeia rapae)颗粒体病毒；欧洲粉蝶(Pierisbrassicae)颗粒体病毒；云杉色卷蛾颗粒体病毒；西部云杉色卷蛾颗粒体病毒；杨扇舟蛾(Clostera anachoreta)颗粒体病毒；分月扇舟蛾(Clostera anastomosis)颗粒体病毒A；分月扇舟蛾颗粒体病毒(河南)；分月扇舟蛾颗粒体病毒B；稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocismedinalis)颗粒体病毒；苹果异形小卷蛾(Cryptophlebia leucotreta)颗粒体病毒；苹果蠹蛾(Cydia pomonella)颗粒体病毒；苹果蠹蛾颗粒体病毒(墨西哥分离株)；小蔗螟颗粒体病毒；夜小卷蛾(Epinotia aporema)颗粒体病毒；木薯天蛾(Erinnyis ello)颗粒体病毒；葡萄叶斑蛾(Harrisina brillians)颗粒体病毒；棉铃虫颗粒体病毒；草安夜蛾(Lacanobiaoleracea)颗粒体病毒；南美毛胫夜蛾(Mocis latipes)颗粒体病毒；一点粘虫颗粒体病毒A；Pseudalatia unipuncta颗粒体病毒；一点粘虫颗粒体病毒B；一点粘虫颗粒体病毒；马铃薯块茎蛾(Phthorimaea operculella)颗粒体病毒；印度谷螟(Plodia interpunctella)颗粒体病毒；小菜蛾颗粒体病毒；草地贪夜蛾颗粒体病毒；斜纹夜蛾颗粒体病毒；粉纹夜蛾颗粒体病毒；粉纹夜蛾颗粒体病毒LBIV-12；八字地老虎(Xestia c-nigrum)颗粒体病毒；飞扬阿夜蛾(Achaea janata)颗粒体病毒；茶小卷叶蛾颗粒体病毒；警纹地夜蛾颗粒体病毒；跳螳螂(Amelia pallorana)颗粒体病毒；茶蚕(Andraca bipunctata)颗粒体病毒；丫纹夜蛾颗粒体病毒；茶细蛾(Caloptilia theivora)颗粒体病毒；欧洲云杉卷叶蛾颗粒体病毒；栎绿色卷蛾(Choristoneura viridis)β杆状病毒；分月扇舟蛾颗粒体病毒；杂食云卷蛾(Cnephasia longana)颗粒体病毒；盐泽灯蛾(Estigmene acrea)颗粒体病毒；红背地老虎(Euxoa ochrogaster)颗粒体病毒；棉铃实夜蛾颗粒体病毒；四叉莜夜蛾(Hoplodinaambigua)颗粒体病毒；美国白蛾颗粒体病毒；黑点刺蛾(Natada nararia)颗粒体病毒；青铜地老虎(Nephelodes emmedonia)颗粒体病毒；三线褐卷蛾(Pandemis limitata)颗粒体病毒；Peridorma morpontora颗粒体病毒；菜青虫(Pieris rapae)颗粒体病毒；苜蓿绿叶蛾(Plathypena scabra)颗粒体病毒；拟粘液蛾属β杆状病毒；三叶草夜蛾(Scotogrammatrifolii)颗粒体病毒；Spodoptera androgea颗粒体病毒；棉叶虫颗粒体病毒；安第斯马铃薯块茎蛾(Tecia solanivora)颗粒体病毒；或毛胫夜蛾属(Mocis)物种颗粒体病毒。
在一些实施方案中，IA可以是选自以下组的δ杆状病毒属病毒：黑须库蚊(Culexnigripalpus)核型多角体病毒；或黑须库蚊NPV佛罗里达/1997。
在一些实施方案中，IA可以是选自以下组的γ杆状病毒属病毒：红头松叶蜂(Neodiprion lecontei)核型多角体病毒；红头松叶蜂NPV(加拿大株)；欧洲新松叶蜂(Neodiprion sertifer)核型多角体病毒；未分类的γ杆状病毒；或冷杉锯角叶蜂(Neodiprion abietis)NPV。
在一些实施方案中，IA可以是选自以下组的一些迄今未分类的杆状病毒科病毒：Achaea faber核型多角体病毒；烦扰伊蚊(Aedes sollicitans)核型多角体病毒；荨麻蛱蝶(Aglais urticae)核型多角体病毒；银纹红袖蝶核型多角体病毒；黄麻桥夜蛾(Anomissabulifera)核型多角体病毒；天蚕(Antheraea yamamai)核型多角体病毒；荨麻舞蛾(Anthophila fabriciana)颗粒体病毒；Aroa discalis核型多角体病毒；对虾杆状病毒(Baculovirus penaei)；干果斑螟(Cadra cautella)核型多角体病毒；Chaliopsis junodi核型多角体病毒；缘腹盘绒茧蜂(Cotesia marginiventris)杆状病毒；Cynosarga ornata核型多角体病毒；Darna nararia颗粒体病毒；窃达刺蛾(Darna trima)颗粒体病毒；落叶松尺蛾(Erannis defoliaria)核型多角体病毒；锦夜蛾(Euplexia lucipara)颗粒体病毒；棕尾毒蛾(Euproctis chrysorrhoea)核型多角体病毒；桑毛虫(Euproctis similis)核型多角体病毒；性腺特异性病毒；茶卷叶蛾颗粒体病毒；全须夜蛾(Hyblaea puera)核型多角体病毒；Idaea seriata核型多角体病毒；鹿眼蛱蝶颗粒体病毒；栎枯叶蛾(Lasiocampaquercus)核型多角体病毒；奇特望灯蛾(Lemyra imparilis)核型多角体病毒；油棕榈袋蛾(Mahasena corbetti)核型多角体病毒；乌夜蛾(Melanchra persicariae)颗粒体病毒；幽波尺蛾(Operophtera bruceata)核型多角体病毒；古毒蛾(Orgyia antiqua)核型多角体病毒；Orgyia mixta核型多角体病毒；Pachytrina philargyria核型多角体病毒；香泽兰灯蛾(Pareuchaetes pseudoinsulata)核型多角体病毒；斑节对虾核型多角体病毒；圆掌舟蛾(Phalera bucephala)核型多角体病毒；白钩蛱蝶(Polygonia c-album)核型多角体病毒；印度蚕(Samia ricini)核型多角体病毒；Spilosoma lutea颗粒体病毒；Spodopteraalbula核型多角体病毒；黄绿枯叶蛾(Trabala vishnou)核型多角体病毒；小垂中国蓝带蚊(Uranotaenia sapphirina)核型多角体病毒；长尾弄蝶(Urbanus proteus)核型多角体病毒；Utetheisa pulchella核型多角体病毒；大西洋赤蛱蝶(Vanessa atalanta)核型多角体病毒；小红蛱蝶(Vanessa cardui)核型多角体病毒；Wiseana cervinata颗粒体病毒；或杆状病毒科物种。
在一些实施方案中，IA可以是杆状病毒科病毒。
在一些实施方案中，IA可以是β杆状病毒。
在一些实施方案中，IA可以是棉花棉褐带卷蛾颗粒体病毒；黄地老虎颗粒体病毒；菜粉蝶颗粒体病毒；欧洲粉蝶颗粒体病毒；云杉色卷蛾颗粒体病毒；西部云杉色卷蛾颗粒体病毒；杨扇舟蛾颗粒体病毒；分月扇舟蛾颗粒体病毒A；分月扇舟蛾颗粒体病毒(河南)；分月扇舟蛾颗粒体病毒B；稻纵卷叶螟颗粒体病毒；苹果异形小卷蛾颗粒体病毒；苹果蠹蛾颗粒体病毒；苹果蠹蛾颗粒体病毒(墨西哥分离株)；小蔗螟颗粒体病毒；夜小卷蛾颗粒体病毒；木薯天蛾颗粒体病毒；葡萄叶斑蛾颗粒体病毒；棉铃虫颗粒体病毒；草安夜蛾颗粒体病毒；南美毛胫夜蛾颗粒体病毒；一点粘虫颗粒体病毒A；Pseudalatia unipuncta颗粒体病毒；一点粘虫颗粒体病毒B；一点粘虫颗粒体病毒；马铃薯块茎蛾颗粒体病毒；印度谷螟颗粒体病毒；小菜蛾颗粒体病毒；草地贪夜蛾颗粒体病毒；斜纹夜蛾颗粒体病毒；粉纹夜蛾颗粒体病毒；粉纹夜蛾颗粒体病毒LBIV-12；八字地老虎颗粒体病毒；未分类的β杆状病毒；飞扬阿夜蛾颗粒体病毒；茶小卷叶蛾颗粒体病毒；警纹地夜蛾颗粒体病毒；跳螳螂颗粒体病毒；茶蚕颗粒体病毒；丫纹夜蛾颗粒体病毒；茶细蛾颗粒体病毒；欧洲云杉卷叶蛾颗粒体病毒；栎绿色卷蛾β杆状病毒；分月扇舟蛾颗粒体病毒；杂食云卷蛾颗粒体病毒；盐泽灯蛾颗粒体病毒；红背地老虎颗粒体病毒；棉铃实夜蛾颗粒体病毒；四叉莜夜蛾颗粒体病毒；美国白蛾颗粒体病毒；黑点刺蛾颗粒体病毒；青铜地老虎颗粒体病毒；三线褐卷蛾颗粒体病毒；Peridormamorpontora颗粒体病毒；菜青虫颗粒体病毒；苜蓿绿叶蛾颗粒体病毒；拟粘液蛾属β杆状病毒；三叶草夜蛾颗粒体病毒；Spodoptera androgea颗粒体病毒；棉叶虫颗粒体病毒；安第斯马铃薯块茎蛾颗粒体病毒；或毛胫夜蛾属物种颗粒体病毒。
在一些实施方案中，IA可以是苹果蠹蛾颗粒体病毒。
在一些实施方案中，IA可以是苹果蠹蛾颗粒体病毒分离株V22病毒。
苹果蠹蛾颗粒体病毒的示例性完整基因组具有NCBI登录号NC_002816.1；还参见Lugue等人，“The complete sequence of the Cydia pomonella granulovirus genome.”J Gen Virol.，2001年10月，第82卷第10期：第2531-2547页；其公开内容全文以引用方式并入本文。
示例性昆虫病毒、昆虫病毒序列以及制备和使用方法等描述于名称为“Insecticidal compositions and process for preparation thereof”的美国专利号5,560,909、名称为“Novel virus composition to protect agricultural commoditiesfrom insects”的美国专利号5,023,182、名称为“Recombinant insect virus withreduced capacity for host-to-host transmission in the environment and methodsto produce said virus”的美国专利号6,130,074、名称为“Insect viruses and theiruses in protecting plants”的美国专利号6,177,075、名称为“Production of adeno-associated virus in insect cells”的美国专利号7,271,002、名称为“Baculovirus forthe control of insect pests”的美国专利号6,042,843、名称为“DNA sequence codingfor a polypeptide which enhances virus infection of host insects”的WIPO公开号WO1997008197A1和名称为“Insect viruses,sequences,insecticidal compositions andmethods”的美国专利号5,858,353，这些专利的公开内容全文以引用方式并入本文。
IA：细菌和细菌毒素
在一些实施方案中，IA可以是在与昆虫接触时具有杀昆虫活性的细菌。
在一些实施方案中，IA可以是从细菌中分离的肽或毒素。
在一些实施方案中，IA可以是细菌毒素。
光杆状菌(Photorhabdus)和/或来自它们的毒素
在一些实施方案中，IA可以是从属于致病杆菌(Xenorhabdus)属或光杆状菌属的细菌中分离的细菌毒素。
在一些实施方案中，IA可以是光杆状菌毒素。
在一些实施方案中，IA可以是选自以下组的光杆状菌毒素：Photorhabdusakhurstii毒素；非共生光杆状菌(Photorhabdus asymbiotica)毒素；非共生光杆状菌非共生亚种(Photorhabdus asymbiotica subsp.asymbiotica)毒素；非共生光杆状菌非共生亚种ATCC 43949毒素；澳洲光杆状菌(Photorhabdus australis)毒素；澳洲光杆状菌DSM17609毒素；Photorhabdus bodei毒素；Photorhabdus caribbeanensis毒素；Photorhabduscinerea毒素；海南光杆状菌(Photorhabdus hainanensis)毒素；Photorhabdusheterorhabditis毒素；Photorhabdus kayaii毒素；Photorhabdus khanii毒素；Photorhabdus khanii NC19毒素；Photorhabdus khanii subsp.guanajuatensis毒素；Photorhabdus kleinii毒素；Photorhabdus laumondii毒素；Photorhabdus laumondiisubsp.clarkei毒素；Photorhabdus laumondii subsp.laumondii毒素；Photorhabduslaumondii subsp.Laumondii TTO1毒素；发光光杆状菌BA1毒素；发光光杆状菌NBAIIH75HRPL105毒素；发光光杆状菌NBAII HiPL101毒素；发光光杆状菌发光亚种(Photorhabdus luminescens subsp.luminescens)毒素；发光光杆状菌发光亚种ATCC29999毒素；发光光杆状菌墨西哥亚种(Photorhabdus luminescens subsp.mexicana)毒素；发光光杆状菌sonorensis亚种毒素；Photorhabdus namnaonensis毒素；Photorhabdusnoenieputensis毒素；Photorhabdus stackebrandtii毒素；Photorhabdus tasmaniensis毒素；中温光杆状菌(Photorhabdus temperata)毒素；中温光杆状菌J3毒素；中温光杆状菌phorame亚种毒素；中温光杆状菌中温亚种(Photorhabdus temperata subsp.temperata)毒素；中温光杆状菌中温亚种M1021毒素；中温光杆状菌中温亚种Meg1毒素；Photorhabdusthracensis毒素；未分类的光杆状菌毒素；光杆状菌属物种(Photorhabdus sp.)毒素；光杆状菌属物种3014毒素；光杆状菌属物种3240毒素；光杆状菌属物种Az29毒素；光杆状菌属物种BS21毒素；光杆状菌属物种CbKj163毒素；光杆状菌属物种CRCIA-P01毒素；光杆状菌属物种ENY毒素；光杆状菌属物种FL2122毒素；光杆状菌属物种FL480毒素；光杆状菌属物种FsIw96毒素；光杆状菌属物种GDd233毒素；光杆状菌属物种H3086毒素；光杆状菌属物种H3107毒素；光杆状菌属物种H3240毒素；光杆状菌属物种HB301毒素；光杆状菌属物种HB78毒素；光杆状菌属物种HB89毒素；光杆状菌属物种HIT毒素；光杆状菌属物种HO1毒素；光杆状菌属物种HUG-39毒素；光杆状菌属物种IT毒素；光杆状菌属物种JUN毒素；光杆状菌属物种KcTs129毒素；光杆状菌属物种KJ13.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ14.3 TH毒素；光杆状菌属物种KJ24.5TH毒素；光杆状菌属物种KJ29.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ37.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ7.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ8.2 TH毒素；光杆状菌属物种KJ9.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ9.2 TH毒素；光杆状菌属物种KK1.3 TH毒素；光杆状菌属物种KK1.4 TH毒素；光杆状菌属物种KMD74毒素；光杆状菌属物种KOH毒素；光杆状菌属物种MID10毒素；光杆状菌属物种MOL毒素；光杆状菌属物种MSW_058毒素；光杆状菌属物种MSW_079毒素；光杆状菌属物种NK2.1 TH毒素；光杆状菌属物种NK2.5 TH毒素；光杆状菌属物种NnMt2h毒素；光杆状菌属物种NP1毒素；光杆状菌属物种OH10毒素；光杆状菌属物种OnIr40毒素；光杆状菌属物种OnKn2毒素；光杆状菌属物种PB10.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB16.3TH毒素；光杆状菌属物种PB17.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB17.3TH毒素；光杆状菌属物种PB2.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB22.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB22.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB32.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB33.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB33.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB37.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB39.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB4.5TH毒素；光杆状菌属物种PB41.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB45.5TH毒素；光杆状菌属物种PB47.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB47.3 TH毒素；光杆状菌属物种PB5.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB5.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB50.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB51.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB52.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB54.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB58.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB58.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB58.5TH毒素；光杆状菌属物种PB59.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB6.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB67.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB67.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB68.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB7.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB76.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB76.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB76.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB78.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB80.3TH毒素；光杆状菌属物种PB80.4 TH毒素；光杆状菌属物种Pjun毒素；光杆状菌属物种RW14-46毒素；光杆状菌属物种S10-54毒素；光杆状菌属物种S12-55毒素；光杆状菌属物种S14-60毒素；光杆状菌属物种S15-56毒素；光杆状菌属物种S5P8-50毒素；光杆状菌属物种S7-51毒素；光杆状菌属物种S8-52毒素；光杆状菌属物种S9-53毒素；光杆状菌属物种SJ2毒素；光杆状菌属物种SN259毒素；光杆状菌属物种SP1.5 TH毒素；光杆状菌属物种SP16.4 TH毒素；光杆状菌属物种SP21.5 TH毒素；光杆状菌属物种SP3.4 TH毒素；光杆状菌属物种SP4.5 TH毒素；光杆状菌属物种SP7.3 TH毒素；光杆状菌属物种TyKb140毒素；光杆状菌属物种UK76毒素；光杆状菌属物种VMG毒素；光杆状菌属物种WA21C毒素；光杆状菌属物种WkSs43毒素；光杆状菌属物种Wx13毒素；光杆状菌属物种X4毒素；光杆状菌属物种YNb90毒素；和光杆状菌属物种ZM毒素。
在一些实施方案中，IA可以是发光光杆状菌毒素。
在一些实施方案中，IA可以是发光光杆状菌毒素，其中该发光光杆状菌毒素包括发光光杆状菌“毒素复合物a”(Tca)。
在一些实施方案中，IA可以是发光光杆状菌毒素，其中该发光光杆状菌毒素包括发光光杆状菌“毒素复合物c”(Tcc)。
在一些实施方案中，IA可以是发光光杆状菌毒素，其中该发光光杆状菌毒素包括发光光杆状菌“毒素复合物d”(Tcd)。
在一些实施方案中，IA可以是Tca，Tca包括TcaA蛋白(SEQ ID NO:616)、TcaB蛋白(SEQ ID NO:617)、TcaC蛋白(SEQ ID NO:618)和TcaZ蛋白(SEQ ID NO:619)。
示例性的发光光杆状菌毒素肽、核苷酸、序列及其制备和使用方法描述于名称为“Mixing and matching TC proteins for pest control”的美国专利号7,491,698、名称为“Insecticidal toxins from Photorhabdus luminescens and nucleic acidsequences coding therefor”的美国专利号6,281,413、名称为“Toxin genes from thebacteria Xenorhabdus nematophilus and Photorhabdus luminescens”的美国专利号6,630,619、名称为“Insecticidal protein toxins from Photorhabdus”的美国专利号6,528,484、名称为“DNA sequences from tcd genomic region of Photorhabdusluminescens”的美国专利号7,777,100、名称为“DNA Sequences from Photorhabdusluminescens”的美国专利号7,161,062、名称为“Insecticidal protein toxins fromPhotorhabdus”的美国专利申请公布号20030207806、名称为“Sequence of thePhotorhabdus luminescens strain tt01 genome and uses”的美国专利申请公布号20070020625A1和名称为“tcdB2 protein from Photorhabdus luminescens W-14”的美国专利号7,268,275，这些专利的公开内容全文以引用方式并入本文。
耶尔森氏菌生物体及其产物
在一些实施方案中，IA可以是属于耶尔森氏菌属的一种或多种生物体。
在一些实施方案中，IA可以是从属于耶尔森氏菌属的生物体中分离的一种或多种肽。
在一些实施方案中，IA可以是以下物种中的一种或多种物种：Yersiniaaldovaeyb、Yersinia aleksiciae、伯氏耶尔森氏菌(Yersinia bercovieri)、Yersiniacanariae、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)、小肠结肠炎耶尔森氏菌耶尔森氏菌亚种(Yersinia enterocolitica subsp.enterocolitica)、小肠结肠炎耶尔森氏菌古北区亚种(Yersinia enterocolitica subsp.palearctica)、嗜虫耶尔森氏菌(Yersinia entomophaga)、弗氏耶尔森氏菌(Yersinia frederiksenii)、Yersiniahibernica、中间耶尔森氏菌(Yersinia intermedia)、克氏耶尔森氏菌(Yersiniakristensenii)、克氏耶尔森氏菌克氏亚种(Yersinia kristenseniisubsp.kristensenii)、克氏耶尔森氏菌rochesterensis亚种、马赛耶尔森氏菌(Yersiniamassiliensis)、莫氏耶尔森氏菌(Yersinia mollaretii)、Yersinia nurmii、Yersiniapekkanenii、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)、鼠疫耶尔森氏菌鼠疫亚种(Yersiniapestis subsp.pestis)、鼠疫耶尔森氏菌中古型亚种(Yersinia pestissubsp.medievalis)、鼠疫耶尔森氏菌东方型亚种(Yersinia pestis subsp.orientalis)、假结核耶尔森菌(Yersinia pseudotuberculosis)、假结核耶尔森氏菌鼠疫亚种(Yersiniapseudotuberculosis subsp.pestis)、假结核耶尔森氏菌假结核亚种(Yersiniapseudotuberculosis subsp.pseudotuberculosis)、罗氏耶尔森氏菌(Yersinia rohdei)、鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri)、类似耶尔森氏菌(Yersinia similis)或Yersiniawautersii。
在一些实施方案中，IA可以是从以下物种中的一种或多种物种中分离的一种或多种肽：Yersinia aldovaeyb、Yersinia aleksiciae、伯氏耶尔森氏菌、Yersinia canariae、小肠结肠炎耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌耶尔森氏菌亚种、小肠结肠炎耶尔森氏菌古北区亚种、嗜虫耶尔森氏菌、弗氏耶尔森氏菌、Yersinia hibernica、中间耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌克氏亚种、克氏耶尔森氏菌rochesterensis亚种、马赛耶尔森氏菌、莫氏耶尔森氏菌、Yersinia nurmii、Yersinia pekkanenii、鼠疫耶尔森氏菌、鼠疫耶尔森氏菌鼠疫亚种、鼠疫耶尔森氏菌中古型亚种、鼠疫耶尔森氏菌东方型亚种、假结核耶尔森菌、假结核耶尔森氏菌鼠疫亚种、假结核耶尔森氏菌假结核亚种、罗氏耶尔森氏菌、鲁氏耶尔森氏菌、类似耶尔森氏菌或Yersinia wautersii。
在一些实施方案中，IA可以是嗜虫耶尔森氏菌或Yersinia nurmii。
在一些实施方案中，IA可以是从嗜虫耶尔森氏菌或Yersinia nurmii分离的一种或多种肽。
简而言之，嗜虫耶尔森氏菌是一种从新西兰草蛴螬的患病幼虫中分离的革兰氏阴性、杆状、不形成孢子的细菌。同样，Yersinia nurmii也是一种革兰氏阴性杆状菌株，尽管它来源于在气调下包装的肉鸡肉。参见Hurst等人，“The main virulence determinant ofYersinia entomophaga MH96 is a broad-host-range toxin complex active againstinsects.”J Bacteriol，2011年4月，第193卷第8期：第1966-1980页；以及Landsberg等人，“3D structure of the Yersinia entomophaga toxin complex and implications forinsecticidal activity.”Proc Natl Acad Sci U S A.，2011年12月20日，第108卷第51期：第20544-20549页。
在一些实施方案中，IA可以是嗜虫耶尔森氏菌细菌和/或来自它们的毒素。
在一些实施方案中，IA可以是一种或多种Yersinia nurmii细菌和/或来自它们的毒素。
在一些实施方案中，IA可以是一种或多种嗜虫耶尔森氏菌细菌和/或来自它们的毒素，以及一种或多种Yersinia nurmii细菌和/或来自它们的毒素。
制备和使用含耶尔森氏菌和耶尔森氏菌毒素的混合物的示例性方法公开于名称为“COMBINATIONS OF YERSINIA ENTOMOPHAGA AND PESTICIDES OR OTHER SUBSTANCES”的PCT申请号WO2018175677A1(受让人：Novozymes Bioag A/S)，其公开内容全文以引用方式并入本文。
苏云金芽孢杆菌生物体及其产物
“Bt”是称为苏云金芽孢杆菌的细菌的首字母。Bt细菌产生一系列对许多昆虫有毒的肽。众所周知，Bt毒性肽能够产生伴孢晶体蛋白包涵体(通常称为晶体)，该伴孢晶体蛋白包涵体属于两种主要类型的毒素：溶细胞素(Cyt)和晶体Bt蛋白(Cry)。自从20世纪80年代早期第一个晶体蛋白基因的克隆和测序以来，许多其他基因已被表征，现在根据Crickmore等人，1998年的命名法进行分类。通常，Cyt蛋白对鞘翅目(甲虫)和双翅目(蝇)有毒，并且Cry蛋白针对鳞翅目(蛾和蝶)。Cry蛋白与中肠(上皮)细胞膜上的特定受体结合，导致这些细胞破裂。如果Cry蛋白在其可结合的上皮细胞上不能找到特异性受体，则它是无毒的。Bt菌株可具有不同的Cyt和Cry蛋白补体，因此限定了它们的宿主范围。已经鉴定了编码许多Cry蛋白的基因。
目前，基于目特异性，杀昆虫Bt伴孢肽具有四种主要致病型：鳞翅目特异性(CryI，现在是Cry1)；鞘翅目特异性(CryIII，现在是Cry3)；双翅目特异性(CryIV，现在是Cry4、Cry10、Cry11；和CytA，现在是Cyt1A)；和CryII(现在是Cry2)，目前已知唯一具有双重(鳞翅目和双翅目)特异性的科。现在在许多情况下，跨目活性是明显的。
命名法为全型序列分配唯一的名称，该名称包括基于差异程度的等级，其中一级(阿拉伯数字)、二级(大写字母)和三级(小写字母)等级之间的界限代表大约95％、78％和45％的同一性。第四级(另一个阿拉伯数字)用于表示序列相同或仅略有不同的全型毒素基因的独立分离物。目前，该命名法区分了174个全型序列，这些序列被归入55个cry和2个cyt家族(Crickmore,N.、Zeigler,D.R.、Schnepf,E.、Van Rie,J.、Lereclus,D.、Daum,J、Bravo,A.、Dean,D.H.，“B.thuringiensis toxin nomenclature”)。这些晶体蛋白和产生它们的基因中的任一者均可用于产生适用于本发明的Bt相关毒素。
本发明的描述中还包括由其他细菌产生的高度相关的晶体蛋白家族：来自双酶梭状芽孢杆菌(Clostridium bifermentans)的Cry16和Cry17(Barloy等人，1996,1998)、来自日本金龟子芽孢杆菌(Bacillus popilliae)的Cry 18(Zhang等人，1997年)、来自Paenibacillus lentimorbis的Cry43(Yokoyama等人，2004年)和由球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)产生的二元Cry48/Cry49(Jones等人，2008年)。其他结晶或分泌的杀虫蛋白诸如此处包括的S-层蛋白(
Figure BDA0004014715560002031
等人，2006年)是遗传改变的晶体蛋白(例如，Lambert等人，1996年)，但通过单个氨基酸取代修饰的那些蛋白除外。这些基因中的任一种都可用于产生适用于本发明的Bt相关毒素。
天然存在的等位基因变体可用公知的分子生物学技术进行鉴定，诸如用下文所述的聚合酶链反应(PCR)和杂交技术来鉴定。变体核苷酸序列也包括合成而得的核苷酸序列，其例如已通过使用定点诱变而产生，但仍然编码本公开中公开的Bt蛋白，如下文所讨论。本公开所涵盖的变体蛋白是生物活性的，也就是说它们继续拥有天然蛋白的所需生物活性，即，保留杀虫活性。所谓“保留活性”意指变体将具有天然蛋白的至少约30％、至少约50％、至少约70％，或至少约80％的杀虫活性。用于测量杀虫活性的方法是本领域熟知的。参见，例如Czapla和Lang(1990年)J.Econ.Entomol.，第83卷：第2480-2485页；Andrews等人，(1988年)Biochem.J.，第252卷：第199-206页；Marrone等人，(1985年)J.of EconomicEntomology，第78卷：第290-293页；和美国专利号5,743,477，所有这些文献均全文以引用方式并入本文，并且所有用数字标识的序列明确地以引用方式并入。
Bt蛋白和基因描述在下表中描述，这些表包含Bt毒素和对应的参考文献，每个参考文献均全文以引用方式并入。
表4.Bt毒素和参考文献
Figure BDA0004014715560002041
表5.杂合杀昆虫晶体蛋白和专利。
专利号 全型毒素
US2008020967 Cry29Aa
US2008040827 Cry1Ca
US2007245430 Cry8Aa
US2008016596 Cry8Aa
US2008020968 Cry1Cb
表6.与其他杂合杀昆虫晶体蛋白相关的专利。
全型毒素 专利号
Cry23A、Cry37A US7214788
Cry1A US7019197
Cry1A、Cry1B US6320100
Cry1A、Cry1C AU2001285900B
Cry23A、Cry37A US2007208168
Cry3A、Cry1I、Cry1B WO0134811
Cry3A、Cry3B、Cry3C US2004033523
Cry1A、Cry1C、Cry1E、Cry1G US6780408
Cry1A、Cry1F US2008047034
包含CRIP和IA的新型混合物、制剂和/或组合物可用于防治、杀灭和/或抑制害虫诸如昆虫。
在一些实施方案中，IA可以是苏云金芽孢杆菌生物体。
在一些实施方案中，IA可以是苏云金芽孢杆菌毒素。
在一些实施方案中，IA可以是苏云金芽孢杆菌亚种。例如，在一些实施方案中，苏云金芽孢杆菌亚种可以是下列亚种之一：鲇泽；鲇泽/太平洋(pacificus)；阿莱(Alesi)；阿马金(amagiensis)；安达楼(andalousiensis)；阿根廷(argentinensis)；asturiensis；azorensis；balearica；berliner；bolivia；brasilensis；喀麦隆(cameroun)；加拿大(canadensis)；chanpaisis；中华(chinensis)；科尔默(colmeri)；coreanensis；达尔可他(dakota)；达姆斯塔特(darmstadiensis)；松蜀(dendrolimus)；杀虫(entomocidus)；杀虫/亚毒(subtoxicus)；幕虫(finitimus)；fukuokaensis；galechiae；蜡螟(galleriae)；graciosensis；贵阳(guiyangiensis)；higo；华中(huazhongensis)；iberica；印第安(indiana)；以色列(israelensis)；以色列/励木(tochigiensis)；日本(japonensis)；jegathesan；景洪(jinghongiensis)；肯尼亚(kenyae)；kim；kumamtoensis；戈尔斯德(kurstaki)；九州(kyushuensis)；李氏(leesis)；londrina；malayensis；medellin；墨西哥(mexicanensis)；mogi；蒙特雷(monterrey)；莫里逊(morrisoni)；muju；navarensis；neoleonensis；nigeriensis；novosibirsk；ostriniae；oswaldocruzi；pahangi；巴基斯坦(pakistani)；palmanyolensis；pingluonsis；pirenaica；poloniensis；pondicheriensis；pulsiensis；rongseni；roskildiensis；圣地亚哥(san diego)；汉城(seoulensis)；山东(shandongiensis)；锡卢(silo)；sinensis；sooncheon；猝倒(sotto)；猝倒/松蜀；亚毒；sumiyoshiensis；sylvestriensis；拟步行甲(tenebrionis)；thailandensis；汤普逊(thompsoni)；苏云金(thuringiensis)；励木(tochigiensis)；toguchini；东北(tohokuensis)；多窝(tolworthi)；托马诺夫(toumanoffi)；vazensis；wratislaviensis；武汉(wuhanensis)；xiaguangiensis；yosoo；云南(yunnanensis)；肇东(zhaodongensis)；str.Al Hakam；或konkukian.
在一些实施方案中，IA可以是苏云金芽孢杆菌变种。例如，在一些实施方案中，IA可以是选自以下组的苏云金芽孢杆菌变种：苏云金芽孢杆菌鲇泽变种；苏云金芽孢杆菌鲇泽/太平洋变种；苏云金芽孢杆菌阿莱变种；苏云金芽孢杆菌阿马金变种；苏云金芽孢杆菌安达楼变种；苏云金芽孢杆菌阿根廷变种；苏云金芽孢杆菌asturiensis变种；苏云金芽孢杆菌azorensis变种；苏云金芽孢杆菌balearica变种；苏云金芽孢杆菌berliner变种；苏云金芽孢杆菌bolivia变种；苏云金芽孢杆菌brasilensis变种；苏云金芽孢杆菌喀麦隆变种；苏云金芽孢杆菌加拿大变种；苏云金芽孢杆菌chanpaisis变种；苏云金芽孢杆菌中华变种；苏云金芽孢杆菌科尔默变种；苏云金芽孢杆菌coreanensis变种；苏云金芽孢杆菌达尔可他变种；苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特变种；苏云金芽孢杆菌松蜀变种；苏云金芽孢杆菌杀虫变种；苏云金芽孢杆菌杀虫/亚毒变种；苏云金芽孢杆菌幕虫变种；苏云金芽孢杆菌fukuokaensis变种；苏云金芽孢杆菌galechiae变种；苏云金芽孢杆菌蜡螟变种；苏云金芽孢杆菌graciosensis变种；苏云金芽孢杆菌贵阳变种；苏云金芽孢杆菌higo变种；苏云金芽孢杆菌华中变种；苏云金芽孢杆菌iberica变种；苏云金芽孢杆菌印第安变种；苏云金芽孢杆菌以色列变种；苏云金芽孢杆菌以色列/励木变种；苏云金芽孢杆菌日本变种；苏云金芽孢杆菌jegathesan变种；苏云金芽孢杆菌景洪变种；苏云金芽孢杆菌肯尼亚变种；苏云金芽孢杆菌kim变种；苏云金芽孢杆菌kumamtoensis变种；苏云金芽孢杆菌kunthalanags3变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX24变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX27变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX28变种；苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种；苏云金芽孢杆菌九州变种；苏云金芽孢杆菌李氏变种；苏云金芽孢杆菌londrina变种；苏云金芽孢杆菌malayensis变种；苏云金芽孢杆菌medellin变种；苏云金芽孢杆菌墨西哥变种；苏云金芽孢杆菌mogi变种；苏云金芽孢杆菌蒙特雷变种；苏云金芽孢杆菌莫里逊变种；苏云金芽孢杆菌muju变种；苏云金芽孢杆菌navarensis变种；苏云金芽孢杆菌neoleonensis变种；苏云金芽孢杆菌nigeriensis变种；苏云金芽孢杆菌novosibirsk变种；苏云金芽孢杆菌ostriniae变种；苏云金芽孢杆菌oswaldocruzi变种；苏云金芽孢杆菌pahangi变种；苏云金芽孢杆菌巴基斯坦变种；苏云金芽孢杆菌palmanyolensis变种；苏云金芽孢杆菌pingluonsis变种；苏云金芽孢杆菌pirenaica变种；苏云金芽孢杆菌poloniensis变种；苏云金芽孢杆菌pondicheriensis变种；苏云金芽孢杆菌pulsiensis变种；苏云金芽孢杆菌rongseni变种；苏云金芽孢杆菌roskildiensis变种；苏云金芽孢杆菌圣地亚哥变种；苏云金芽孢杆菌汉城变种；苏云金芽孢杆菌山东变种；苏云金芽孢杆菌锡卢变种；苏云金芽孢杆菌sinensis变种；苏云金芽孢杆菌sooncheon变种；苏云金芽孢杆菌猝倒变种；苏云金芽孢杆菌猝倒/松蜀变种；苏云金芽孢杆菌亚毒变种；苏云金芽孢杆菌sumiyoshiensis变种；苏云金芽孢杆菌sylvestriensis变种；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种；苏云金芽孢杆菌thailandensis变种；苏云金芽孢杆菌汤普逊变种；苏云金芽孢杆菌苏云金变种；苏云金芽孢杆菌励木变种；苏云金芽孢杆菌toguchini变种；苏云金芽孢杆菌东北变种；苏云金芽孢杆菌多窝变种；苏云金芽孢杆菌托马诺夫变种；苏云金芽孢杆菌vazensis变种；苏云金芽孢杆菌wratislaviensis变种；苏云金芽孢杆菌武汉变种；苏云金芽孢杆菌xiaguangiensis变种；苏云金芽孢杆菌yosoo变种；苏云金芽孢杆菌云南变种；苏云金芽孢杆菌肇东变种；苏云金芽孢杆菌str.Al Hakam；苏云金芽孢杆菌T01-328；苏云金芽孢杆菌YBT-1518；或苏云金芽孢杆菌Konkukian变种。
在一些实施方案中，IA可以是苏云金芽孢杆菌血清变型。例如，在一些实施方案中，IA可以是选自以下组的苏云金芽孢杆菌血清变型：苏云金芽孢杆菌AKS-7；苏云金芽孢杆菌Bt18247；苏云金芽孢杆菌Bt18679；苏云金芽孢杆菌Bt407；苏云金芽孢杆菌DAR81934；苏云金芽孢杆菌DB27；苏云金芽孢杆菌F14-1；苏云金芽孢杆菌FC1；苏云金芽孢杆菌FC10；苏云金芽孢杆菌FC2；苏云金芽孢杆菌FC6；苏云金芽孢杆菌FC7；苏云金芽孢杆菌FC8；苏云金芽孢杆菌FC9；苏云金芽孢杆菌HD-771；苏云金芽孢杆菌HD-789；苏云金芽孢杆菌HD1002；苏云金芽孢杆菌IBL 200；苏云金芽孢杆菌IBL 4222；苏云金芽孢杆菌JM-Mgvxx-63；苏云金芽孢杆菌LDC 391；苏云金芽孢杆菌LM1212；苏云金芽孢杆菌MC28；苏云金芽孢杆菌Sbt003；苏云金芽孢杆菌鲇泽血清变型；苏云金芽孢杆菌鲇泽/太平洋血清变型；苏云金芽孢杆菌阿莱血清变型；苏云金芽孢杆菌阿马金血清变型；苏云金芽孢杆菌安达楼血清变型；苏云金芽孢杆菌阿根廷血清变型；苏云金芽孢杆菌asturiensis血清变型；苏云金芽孢杆菌azorensis血清变型；苏云金芽孢杆菌balearica血清变型；苏云金芽孢杆菌berliner血清变型；苏云金芽孢杆菌bolivia血清变型；苏云金芽孢杆菌brasilensis血清变型；苏云金芽孢杆菌喀麦隆血清变型；苏云金芽孢杆菌加拿大血清变型；苏云金芽孢杆菌chanpaisis血清变型；苏云金芽孢杆菌中华血清变型；苏云金芽孢杆菌科尔默血清变型；苏云金芽孢杆菌coreanensis血清变型；苏云金芽孢杆菌达尔可他血清变型；苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特血清变型；苏云金芽孢杆菌松蜀血清变型；苏云金芽孢杆菌杀虫血清变型；苏云金芽孢杆菌杀虫/亚毒血清变型；苏云金芽孢杆菌幕虫血清变型；苏云金芽孢杆菌fukuokaensis血清变型；苏云金芽孢杆菌galechiae血清变型；苏云金芽孢杆菌蜡螟血清变型；苏云金芽孢杆菌graciosensis血清变型；苏云金芽孢杆菌贵阳血清变型；苏云金芽孢杆菌higo血清变型；苏云金芽孢杆菌华中血清变型；苏云金芽孢杆菌iberica血清变型；苏云金芽孢杆菌印第安血清变型；苏云金芽孢杆菌以色列血清变型；苏云金芽孢杆菌以色列/励木血清变型；苏云金芽孢杆菌日本血清变型；苏云金芽孢杆菌jegathesan血清变型；苏云金芽孢杆菌景洪血清变型景洪；苏云金芽孢杆菌肯尼亚血清变型；苏云金芽孢杆菌kim血清变型；苏云金芽孢杆菌kumamtoensis血清变型；苏云金芽孢杆菌kunthalanags3血清变型；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX24血清变型；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX27血清变型；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX28血清变型；苏云金芽孢杆菌戈尔斯德血清变型；苏云金芽孢杆菌九州血清变型；苏云金芽孢杆菌李氏血清变型；苏云金芽孢杆菌londrina血清变型；苏云金芽孢杆菌malayensis血清变型；苏云金芽孢杆菌medellin血清变型；苏云金芽孢杆菌墨西哥血清变型；苏云金芽孢杆菌mogi血清变型；苏云金芽孢杆菌蒙特雷血清变型；苏云金芽孢杆菌莫里逊血清变型；苏云金芽孢杆菌muju血清变型；苏云金芽孢杆菌navarensis血清变型；苏云金芽孢杆菌neoleonensis血清变型；苏云金芽孢杆菌nigeriensis血清变型；苏云金芽孢杆菌novosibirsk血清变型；苏云金芽孢杆菌ostriniae血清变型；苏云金芽孢杆菌oswaldocruzi血清变型；苏云金芽孢杆菌pahangi血清变型；苏云金芽孢杆菌巴基斯坦血清变型；苏云金芽孢杆菌palmanyolensis血清变型；苏云金芽孢杆菌pingluonsis血清变型；苏云金芽孢杆菌pirenaica血清变型；苏云金芽孢杆菌poloniensis血清变型；苏云金芽孢杆菌pondicheriensis血清变型；苏云金芽孢杆菌pulsiensis血清变型；苏云金芽孢杆菌rongseni血清变型；苏云金芽孢杆菌roskildiensis血清变型；苏云金芽孢杆菌圣地亚哥血清变型；苏云金芽孢杆菌汉城血清变型；苏云金芽孢杆菌山东血清变型；苏云金芽孢杆菌锡卢血清变型；苏云金芽孢杆菌sinensis血清变型；苏云金芽孢杆菌sooncheon血清变型；苏云金芽孢杆菌猝倒血清变型；苏云金芽孢杆菌猝倒/松蜀血清变型；苏云金芽孢杆菌亚毒血清变型；苏云金芽孢杆菌sumiyoshiensis血清变型；苏云金芽孢杆菌sylvestriensis血清变型；苏云金芽孢杆菌拟步行甲血清变型；苏云金芽孢杆菌thailandensis血清变型；苏云金芽孢杆菌汤普逊血清变型；苏云金芽孢杆菌苏云金血清变型；苏云金芽孢杆菌励木血清变型；苏云金芽孢杆菌toguchini血清变型；苏云金芽孢杆菌东北血清变型；苏云金芽孢杆菌多窝血清变型；苏云金芽孢杆菌托马诺夫血清变型；苏云金芽孢杆菌vazensis血清变型；苏云金芽孢杆菌wratislaviensis血清变型；苏云金芽孢杆菌武汉血清变型；苏云金芽孢杆菌xiaguangiensis血清变型；苏云金芽孢杆菌yosoo血清变型；苏云金芽孢杆菌云南血清变型；苏云金芽孢杆菌肇东血清变型；苏云金芽孢杆菌str.Al Hakam；苏云金芽孢杆菌T01-328；苏云金芽孢杆菌YBT-1518；和苏云金芽孢杆菌Konkukian血清变型。
在一些优选的实施方案中，IA可以是下列生物体之一：苏云金芽孢杆菌以色列变种、苏云金芽孢杆菌鲇泽变种、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种或苏云金芽孢杆菌tenebrionensis变种。
在一些实施方案中，IA可以是从苏云金芽孢杆菌分离的蛋白质。例如，在一些实施方案中，IA可以是从苏云金芽孢杆菌以色列变种、苏云金芽孢杆菌鲇泽变种、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种或苏云金芽孢杆菌tenebrionensis变种分离的毒素。
在一些实施方案中，IA可以是MTX2毒素，例如从球形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sphaericus)分离的MTX2毒素。
在一些实施方案中，IA可以是Bin样毒素，例如从球形赖氨酸芽孢杆菌分离的Bin样毒素。
在一些实施方案中，IA可以是苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)毒素。
在一些实施方案中，IA可以是苏云金芽孢杆菌毒素以色列亚种菌株BMP 144Bti毒素。
在一些实施方案中，IA可以是苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)毒素。
在一些实施方案中，IA可以是苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19Btk毒素。
在一些实施方案中，IA可以是苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)毒素。
在一些实施方案中，IA可以是苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176Btt毒素。
在一些实施方案中，从苏云金芽孢杆菌分离的IA可包含在市售产品中。例如，在一些实施方案中，包含IA的市售产品可以是购自Becker Microbial Products,Inc.的AQUABAC
Figure BDA0004014715560002111
购自
Figure BDA0004014715560002112
U.S.A.LLC Agricultural Products的
Figure BDA0004014715560002113
FC；和/或购自AEF Global Inc.的BioProtec PlusTM。
在一些实施方案中，IA可以是一种或多种苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19细胞。
在一些实施方案中，IA可以是从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19细胞分离的一种或多种发酵固体、孢子和/或杀昆虫毒素。
在一些实施方案中，IA可以是一种或多种苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176细胞。
在一些实施方案中，IA可以是从苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176细胞分离的一种或多种发酵固体、孢子和/或杀昆虫毒素。
在一些实施方案中，IA可以是一种或多种苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP144细胞。
在一些实施方案中，IA可以是从苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP144细胞分离的一种或多种发酵固体、孢子和/或杀昆虫毒素。
在一些实施方案中，IA可以是AQUABAC
Figure BDA0004014715560002114
其由以下成分组成：6％-10％(约8％)苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144固体、孢子和杀昆虫毒素，其中所述杀昆虫毒素是δ-内毒素，并且相当于1,200国际毒性单位(ITU/mg)(48.4亿ITU/加仑或12亿ITU/升)；以及约92％的其他/非活性成分。
在一些实施方案中，IA可以是
Figure BDA0004014715560002121
FC(或可流动浓缩物)，其由以下成分组成：：10％苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176发酵固体和可溶物，其效力为15,000马铃薯甲虫(Leptinotarsa)单位(LTU)/克产物(相当于1630万LTU/夸脱产物)；和90％其他/非活性成分。
在一些实施方案中，IA可以是BioProtec PlusTM，其由以下成分组成：14.49％苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19发酵固体、孢子和杀昆虫毒素，其效力为17,500甘蓝银纹夜蛾单位(CLU)/mg产物(相当于760亿CLU/加仑产物)；和85.51％其他/非活性成分。
在一些实施方案中，IA可以是Bt毒素，其中所述Bt毒素是δ-内毒素(例如，晶体(Cry)毒素和/或溶细胞(Cyt)毒素)；营养期杀昆虫蛋白(Vip)；分泌期杀昆虫蛋白(Sip)；或Bin样毒素。
在一些实施方案中，IA可以是Bt毒素，其具有SEQ ID NO:412-587中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，IA可以是Cry蛋白，其具有SEQ ID NO:412-461中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，IA可以是Cyt蛋白，其具有SEQ ID NO:462-481中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，IA可以是Vip，其具有SEQ ID NO:482-587中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，IA可以是以下Cry蛋白中的一种或多种Cry蛋白：Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A样、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb样、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H样、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I样、Cry1I样、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1样、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A样、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba样、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8样、Cry8样、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa样、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9样、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A样、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa样、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20样、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43样、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1和/或Cry78Aa1。
在一些实施方案中，IA可以是如本文所述的或表7中所示的任何Cry毒素。
表7.Cry毒素的非限制性示例、它们在NCBI上的登录号和菌株。此处，如果单元格留空，则登录号和/或菌株不适用。
Figure BDA0004014715560002171
Figure BDA0004014715560002181
Figure BDA0004014715560002191
Figure BDA0004014715560002201
Figure BDA0004014715560002211
Figure BDA0004014715560002221
Figure BDA0004014715560002231
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Figure BDA0004014715560002251
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Figure BDA0004014715560002291
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Figure BDA0004014715560002331
Figure BDA0004014715560002341
Figure BDA0004014715560002351
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Figure BDA0004014715560002371
Figure BDA0004014715560002381
Figure BDA0004014715560002391
在一些实施方案中，IA可以是以下Cyt蛋白中的一种或多种Cyt蛋白：Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa样、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba样、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B样、Cyt2Ca1和/或Cyt3Aa1。
在一些实施方案中，IA可以是如本文所述的或表8中所示的任何Cyt毒素。
表8.Cyt毒素的非限制性示例、它们在NCBI上的登录号和菌株。此处，如果单元格留空，则登录号和/或菌株不适用。
Figure BDA0004014715560002392
Figure BDA0004014715560002401
在一些实施方案中，IA可以是属于Vip1、Vip2、Vip3或Vip4家族的蛋白。例如，在一些实施方案中，IA可以是以下Vip蛋白中的一种或多种Vip蛋白：Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4和/或Vip4Aa1。
在一些实施方案中，IA可以是如本文所述的或表9中所示的任何Vip蛋白。
表9.Vip蛋白的非限制性示例以及它们在NCBI上的登录号。此处，如果单元格留空，则登录号不适用。
Figure BDA0004014715560002411
Figure BDA0004014715560002421
Figure BDA0004014715560002431
Figure BDA0004014715560002441
Figure BDA0004014715560002451
CRIP和IA组合
任何上述CRIP或IA可用于产生本发明的混合物和/或组合物，其中所述混合物和/或组合物包含至少一种CRIP和至少一种其他IA。
参考本文鉴定的多肽描述和并入所提及序列的同源变体，这些同源变体与此类序列或本文提及的序列具有同源性，包括与本文公开的任何序列或以引用方式并入的任何序列具有至少以下百分比同一性中的任一者的所有同源序列：与上述序列中鉴定的任何和所有序列(包括本申请的序列表中的每个和所有序列)具有50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％或更高同一性，或100％同一性。当术语“同源的”或“同源性”在本文中以诸如50％或更高的数值使用时，其含义是两种肽之间的同一性百分比或相似性百分比。当在没有数字百分比的情况下使用“同源的”或“同源性”时，它指的是在进化或发育方面密切相关的两个肽序列，因为它们共有共同的物理和功能方面，如局部毒性和相似的大小(即，同源物比本文具体提及的肽或如上文参考本文鉴定的肽长100％或短50％)。
在一些实施方案中，混合物可由本文描述的任何CRIP和本文描述的任何IA组成。
在一些实施方案中，混合物可包含与一种或多种IA组合的一种或多种CRIP；并且其中该混合物还包含赋形剂。
CRIP和IA组合
在一些实施方案中，表A中列出的CRIP中的任一者或多者可与表B中列出的IA中的任一者或多者组合。
下面的表A和表B分别展示了本发明的优选CRIP和IA。两个表均提供了“组编号”和“组名”：这些名称标识了给定CRIP或IA所属的类别。CRIP组编号以罗马数字“I”开头(例如，I1、I2、I3等)。杀昆虫剂(IA)组编号以罗马数字“II”开头(例如，II2、II3、II3等)。更高一级的特异性具有“CRIP编号”和“IA编号”；这些名称标识了特定的CRIP或IA。CRIP编号以“A”开头(例如，A1、A2、A3等)。IA编号以“B”开头(例如，B1、B2、B3等)。
表A.本发明的CRIP。
Figure BDA0004014715560002471
Figure BDA0004014715560002481
表B.本发明的杀昆虫剂(IA)。此处，星号“*”表示当与U+2-ACTX-Hv1a(SEQIDNO: 61)组合时，显示出不发挥大于累加杀昆虫效果的IA。
Figure BDA0004014715560002482
Figure BDA0004014715560002491
Figure BDA0004014715560002501
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Figure BDA0004014715560002581
Figure BDA0004014715560002591
Figure BDA0004014715560002601
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含选自表A的一种或多种CRIP或其组合，以及选自表B的一种或多种杀昆虫剂(IA)或其组合，或基本上由其组成，或由其组成。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含一种或多种CRIP、基本上由其组成或由其组成，该一种或多种CRIP选自CRIP组I1、I2、I3、I4、I5、I6、I7或它们的组合中的任一者；与IA组II1、II2、II3、II4、II5、II6、II7、II8、II9、II10、II11、II12、II13、II14、II15、II16、II17、II18、II19、II20、II21、II22、II23、II24、II25、II26、II27、II28、II29、II30、II31、II32、II33、II34、II35、II36、II37、II38、II39、II40、II41、II42、II43、II44、II45或它们的组合中的任一种或多种IA组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含CRIP、基本上由其组成或由其组成，该CRIP选自：A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20、A21、A22、A23、A24、A25、A26、A27、A28、A29、A30、A31、A32、A33、A34、A35、A36、A37、A38、A39、A40、A41、A42、A43、A44、A45、A46、A47、A48、A49、A50、A51、A52、A53、A54、A55、A56、A57、A58、A59、A60、A61、A62、A63、A64、A65、A66、A67、A68或它们的组合；与选自以下的IA组合：B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9、B10、B11、B12、B13、B14、B15、B16、B17、B18、B19、B20、B21、B22、B23、B24、B25、B26、B27、B28、B29、B30、B31、B32、B33、B34、B35、B36、B37、B38、B39、B40、B41、B42、B43、B44、B45、B46、B47、B48、B49、B50、B51、B52、B53、B54、B55、B56、B57、B58、B59、B60、B61、B62、B63、B64、B65、B66、B67、B68、B69、B70、B71、B72、B73、B74、B75、B76、B77、B78、B79、B80、B81、B82、B83、B84、B85、B86、B87、B88、B89、B90、B91、B92、B93、B94、B95、B96、B97、B98、B99、B100、B101、B102、B103、B104、B105、B106、B107、B108、B109、B110、B111、B112、B113、B114、B115、B116、B117、B118、B119、B120、B121、B122、B123、B124、B125、B126、B127、B128、B129、B130、B131、B132、B133、B134、B135、B136、B137、B138、B139、B140、B141、B142、B143、B144、B145、B146、B147、B148、B149、B150、B151、B152、B153、B154、B155、B156、B157、B158、B159、B160、B161、B162、B163、B164、B165、B166、B167、B168、B169、B170、B171、B172、B173、B174、B175、B176、B177、B178、B179、B180、B181、B182、B183、B184、B185、B186、B187、B188、B189、B190、B191、B192、B193、B194、B195、B196、B197、B198、B199、B200、B201、B202、B203、B204、B205、B206、B207、B208、B209、B210、B211、B212、B213、B214、B215、B216、B217、B218、B219、B220、B221、B222、B223、B224、B225、B226、B227、B228、B229、B230、B231、B232、B233、B234、B235、B236、B237、B238、B239、B240、B241、B242、B243、B244、B245、B246、B247、B248、B249、B250、B251、B252、B253、B254、B255、B256、B257、B258、B259、B260、B261、B262、B263、B264、B265、B266、B267、B268、B269、B270、B271、B272、B273、B274、B275、B276、B277、B278、B279、B280、B281、B282、B283、B284、B285、B286、B287、B288、B289、B290、B291、B292、B293、B294、B295、B296、B297、B298、B299、B300、B301、B302、B303、B304、B305、B306、B307、B308、B309、B310、B311、B312、B313、B314、B315、B316、B317、B318、B319、B320、B321、B322、B323、B324、B325、B326、B327、B328、B329、B330、B331、B332、B333、B334、B335、B336、B337、B338、B339、B340、B341、B342、B343、B344、B345、B346、B347、B348、B349、B350、B351、B352、B353、B354、B355、B356、B357、B358、B359、B360、B361、B362、B363、B364、B365、B366、B367、B368、B369、B370、B371、B372、B373、B374、B375、B376、B377、B378、B379、B380、B381、B382、B383、B384、B385、B386、B387、B388、B389、B390、B391、B392、B393、B394、B395、B396、B397、B398、B399、B400、B401、B402、B403、B404、B405、B406、B407、B408、B409、B410、B411、B412、B413、B414、B415、B416、B417、B418、B419、B420、B421、B422、B423、B424、B425、B426、B427、B428、B429、B430、B431、B432、B433、B434、B435、B436、B437、B438、B439、B440、B441、B442、B443、B444、B445、B446、B447、B448、B449、B450、B451、B452、B453、B454、B455、B456、B457、B458、B459、B460、B461、B462、B463、B464、B465、B466、B467、B468、B469、B470、B471、B472、B473、B474、B475、B476、B477、B478、B479或它们的组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A1、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A2、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A3、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A4、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A5、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A6、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A7、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A8、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A9、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A10、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A11、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A12、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A13、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A14、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A15、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A16、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A17、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A18、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A19、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A20、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A21、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A22、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A23、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A24、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A25、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A26、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A27、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A28、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A29、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A30、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A31、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A32、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A33、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含表A的CRIP A34、基本上由其组成或由其组成，并与选自表B中B1-B479的任一种或多种杀昆虫剂(IA)组合。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含来自表A的CRIP、基本上由其组成或由其组成，该CRIP选自：A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20、A21、A22、A23、A24、A25、A26、A27、A28、A29、A30、A31、A32、A33、A34、A35、A36、A37、A38、A39、A40、A41、A42、A43、A44、A45、A46、A47、A48、A49、A50、A51、A52、A53、A54、A55、A56、A57、A58、A59、A60、A61、A62、A63、A64、A65、A66、A67或A68；其中所述CRIP与分别在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、49、50、51、52、53、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、66、88、588、44、45、46、47、60、61、62、63、64、594或65所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性。
在一些实施方案中，本发明的混合物可包含CRIP和IA，基本上由CRIP和IA组成，或者由CRIP和IA组成；其中该CRIP肽可包含与以下肽具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，基本上由这些氨基酸序列组成，或者由这些氨基酸序列组成：具有SEQ ID NO:192-370中任一项所示的氨基酸序列的蜘蛛肽；具有SEQ ID NO:60-64、192-370和594中任一项所示的氨基酸序列的ACTX肽(例如，U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、κ-ACTX-Hv1a、κ+2-ACTX-Hv1a、ω-ACTX-Hv1a和/或ω+2-ACTX-Hv1a)；具有SEQ ID NO:65中任一项所示的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a；具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽；具有SEQ ID NO:2-15、49-53、2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651或653-654中任一项所示的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)；具有SEQID NO:66、88-191中任一项所示的氨基酸序列的蝎肽；具有SEQ ID NO:371-411中任一项所示的氨基酸序列的海葵肽；来自蛇锁海葵的具有SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的Av3多肽；具有SEQ ID NO:45-47中任一项所示的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)；或芋螺毒素；并且其中IA是表B中列出的IA，并且其中IA是B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9、B10、B11、B12、B13、B14、B15、B16、B17、B18、B19、B20、B21、B22、B23、B24、B25、B26、B27、B28、B29、B30、B31、B32、B33、B34、B35、B36、B37、B38、B39、B40、B41、B42、B43、B44、B45、B46、B47、B48、B49、B50、B51、B52、B53、B54、B55、B56、B57、B58、B59、B60、B61、B62、B63、B64、B65、B66、B67、B68、B69、B70、B71、B72、B73、B74、B75、B76、B77、B78、B79、B80、B81、B82、B83、B84、B85、B86、B87、B88、B89、B90、B91、B92、B93、B94、B95、B96、B97、B98、B99、B100、B101、B102、B103、B104、B105、B106、B107、B108、B109、B110、B111、B112、B113、B114、B115、B116、B117、B118、B119、B120、B121、B122、B123、B124、B125、B126、B127、B128、B129、B130、B131、B132、B133、B134、B135、B136、B137、B138、B139、B140、B141、B142、B143、B144、B145、B146、B147、B148、B149、B150、B151、B152、B153、B154、B155、B156、B157、B158、B159、B160、B161、B162、B163、B164、B165、B166、B167、B168、B169、B170、B171、B172、B173、B174、B175、B176、B177、B178、B179、B180、B181、B182、B183、B184、B185、B186、B187、B188、B189、B190、B191、B192、B193、B194、B195、B196、B197、B198、B199、B200、B201、B202、B203、B204、B205、B206、B207、B208、B209、B210、B211、B212、B213、B214、B215、B216、B217、B218、B219、B220、B221、B222、B223、B224、B225、B226、B227、B228、B229、B230、B231、B232、B233、B234、B235、B236、B237、B238、B239、B240、B241、B242、B243、B244、B245、B246、B247、B248、B249、B250、B251、B252、B253、B254、B255、B256、B257、B258、B259、B260、B261、B262、B263、B264、B265、B266、B267、B268、B269、B270、B271、B272、B273、B274、B275、B276、B277、B278、B279、B280、B281、B282、B283、B284、B285、B286、B287、B288、B289、B290、B291、B292、B293、B294、B295、B296、B297、B298、B299、B300、B301、B302、B303、B304、B305、B306、B307、B308、B309、B310、B311、B312、B313、B314、B315、B316、B317、B318、B319、B320、B321、B322、B323、B324、B325、B326、B327、B328、B329、B330、B331、B332、B333、B334、B335、B336、B337、B338、B339、B340、B341、B342、B343、B344、B345、B346、B347、B348、B349、B350、B351、B352、B353、B354、B355、B356、B357、B358、B359、B360、B361、B362、B363、B364、B365、B366、B367、B368、B369、B370、B371、B372、B373、B374、B375、B376、B377、B378、B379、B380、B381、B382、B383、B384、B385、B386、B387、B388、B389、B390、B391、B392、B393、B394、B395、B396、B397、B398、B399、B400、B401、B402、B403、B404、B405、B406、B407、B408、B409、B410、B411、B412、B413、B414、B415、B416、B417、B418、B419、B420、B421、B422、B423、B424、B425、B426、B427、B428、B429、B430、B431、B432、B433、B434、B435、B436、B437、B438、B439、B440、B441、B442、B443、B444、B445、B446、B447、B448、B449、B450、B451、B452、B453、B454、B455、B456、B457、B458、B459、B460、B461、B462、B463、B464、B465、B466、B467、B468、B469、B470、B471、B472、B473、B474、B475、B476、B477、B478、B479或它们的组合。
在一些实施方案中，基于干重，CRIP与IA的比率可选自至少约下列比率：10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000，或这些值中的任何两者的任何组合。混合物中CRIP和IA的总浓度选自以下百分比浓度：0、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％，或这些值中的任何两者之间的任何范围，并且混合物的剩余百分比由赋形剂组成。
包含如本文所述的一种或多种CRIP和一种或多种IA的任何前述混合物、组合物或制剂还可包含赋形剂、基本上由赋形剂组成或由赋形剂组成。
包含一种或多种CRIP和一种或多种IA的任何前述混合物或组合物可同时和/或依次施用，并且可在相同或单独的组合物中施用。CRIP与IA的比率将取决于所针对的昆虫害虫和使用者的需要。
此外，包含一种或多种CRIP和一种或多种IA的任何前述混合物或组合物可与其他化合物同时或依次施用于待处理的作物区或植物。例如，在一些实施方案中，这些其他化合物可以是肥料、除草剂、冷冻保护剂、表面活性剂、洗涤剂、杀虫皂、休眠油、聚合物和/或定时释放或可生物降解的载体制剂，其允许在单次施用该制剂后对靶区域进行长期投药。其他化合物还可以是选择性除草剂、化学杀昆虫剂、杀病毒剂、杀微生物剂、杀变形虫剂、杀虫剂、杀真菌剂、杀细菌剂、杀线虫剂、杀软体动物剂或几种这些制剂的混合物，如果需要，与其他农业上可接受的载体、表面活性剂或在配制领域中通常使用的促进施用的助剂一起使用。在一些实施方案中，合适的载体和助剂可以是固体或者液体，并对应于通常用于配制技术的物质，例如天然或者再生的矿物质、溶剂、分散剂、湿润剂、增粘剂、粘合剂或者肥料。同样，可将任何上述混合物、组合物或制剂制备成可食用的“诱饵”或塑造成害虫“陷阱”，以允许靶标害虫摄食或摄取该杀虫制剂。
组合物和制剂
如本文所用，术语“组合物”和“制剂”可互换使用。
％v/v；％w/w；和％w/v
如本文所用，“v/v”或“％v/v”或“体积/体积”是指溶液的体积浓度(“v/v”代表体积/体积)。此处，当溶液的两种组分都是液体时，可使用v/v。例如，当用50mL水稀释50mL成分X时，在100mL的总体积中将有50mL成分X；因此，这可表示为“成分X 50％v/v”。如下计算体积/体积百分比(％v/v)：(溶质体积(mL)/溶液体积(100mL))；例如，％v/v＝溶质mL/100mL溶液。
如本文所用，“w/w”或“％w/w”或“重量/重量”或“wt/wt”或“％wt/wt”是指制剂或溶液的重量浓度，即重量/重量百分比(“w/w”表示重量/重量)。此处，w/w表示100g溶液或混合物中成分的克数(g)。例如，由30g成分X和70g水组成的混合物将表示为“成分X 30％w/w”。重量/重量百分比(％w/w)如下计算：(溶质重量(g)/溶液重量(g))×100；或(溶质质量(g)/溶液质量(g))×100。
如本文所用，“w/v”或“％w/v”或“重量/体积”是指溶液的质量浓度，即重量/体积百分比(“w/v”表示重量/体积)。此处，w/v表示100mL溶液中成分的克数(g)。例如，如果使用1g成分X来组成100mL的总体积，则制备了“成分X的1％w/v溶液”。重量/体积百分比(％w/v)如下计算：(溶质质量(g)/溶液体积(mL))×100。
包含(1)CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白、其药学上可接受的盐或其组合和(2)一种或多种杀昆虫剂、基本上由(1)和(2)组成或由(1)和(2)组成的组合物(例如，农用化学组合物)可包括但不限于：气溶胶和/或气溶胶化的产品，例如喷雾剂、熏蒸剂、粉末、粉剂和/或气体；拌种剂；口服制剂(例如，昆虫食物等)；(瞬时和/或稳定地)表达和/或产生TVP、TVP杀昆虫蛋白和/或TVP ORF的转基因生物体，例如植物或动物。
可将组合物配制成粉末、粉剂、小丸剂、颗粒剂、喷雾剂、乳剂、胶体剂、溶液剂等，并且可通过常规方法，例如包含该多肽的细胞培养物的干燥、冻干、均质化、提取、过滤、离心、沉淀或浓缩来制备该组合物。在包含至少一种此类杀虫多肽的所有这些组合物中，该多肽可以约1重量％至约99重量％的浓度存在。
在一些实施方案中，本文所述的杀虫剂组合物可通过将CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或其药学上可接受的盐与期望的农业上可接受的载体一起配制来制备。在施用前，可以合适的方法例如冻干、冷冻干燥、干燥，或者在水性载体、介质或合适稀释剂例如盐水和/或其他的缓冲液中配制该组合物。在一些实施方案中，配制的组合物可以为粉尘或颗粒材料的形式，或者在油(植物或矿物油)中的悬浮液的形式，或者水或油/水乳剂的形式，或者作为可湿性粉剂，或者与适合于农业应用的任何其他载体材料相组合。合适的农业载体可以是固体或液体，并且是本领域熟知的。在一些实施方案中，该制剂可与一种或多种固体或液体助剂相混合，并且可通过多种方法来制备，例如通过使用常规配制技术将杀虫组合物与合适的助剂一起均匀地混合、掺合和/或研磨。合适的配制和施用方法描述于美国专利号6,468,523中，其公开内容全文以引用方式并入本文。
在一些实施方案中，该组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：CRIP或其药学上可接受的盐；杀昆虫剂；和赋形剂。
在一些实施方案中，该组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：CRIP-杀昆虫蛋白或其药学上可接受的盐；杀昆虫剂；和赋形剂。
在一些实施方案中，该组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：(1)CRIP，或其药学上可接受的盐；CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；(2)一种或多种杀昆虫剂；和(3)赋形剂。
药学上可接受的盐
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”和“农业上可接受的盐”是同义词。在一些实施方案中，可使用本文所述的和适用的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白和/或杀昆虫剂的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式和单独的异构体、对映异构体、互变异构体、非对映异构体和前药。
在一些实施方案中，本发明的药学上可接受的盐具有母体化合物的所需药理活性。此类盐包括：与无机酸形成的酸加成盐；与有机酸形成的酸加成盐；或当存在于母体化合物中的酸性质子被金属离子例如碱金属离子、铝离子取代或与有机碱诸如乙醇胺等配位时形成的盐。
在一些实施方案中，药学上可接受的盐包括常规的有毒或无毒盐。例如，在一些实施方案中，常规的无毒盐包括诸如富马酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、氯酸盐等的那些无毒盐。在一些实施方案中，本发明的药学上可接受的盐可通过常规化学方法从母体化合物合成。在一些实施方案中，可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量量的适当碱或酸在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备此类盐。在一些实施方案中，非水性介质如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。合适的盐的列表可见于Remington'sPharmaceutical Sciences，第17版，Mack Publishing Company,Easton,Pa.，1985年，第1418页，其公开内容全文以引用方式并入本文。
在一些实施方案中，药学上可接受的盐可以是以下之一：盐酸盐；钠；硫酸盐；醋酸盐；磷酸盐或二磷酸盐；氯化物；钾；马来酸盐；钙；柠檬酸盐；甲磺酸酯；硝酸盐；酒石酸盐；铝；或葡萄糖酸盐。
在一些实施方案中，可用于形成盐的药学上可接受的酸的列表可以是：乙醇酸；马尿酸；氢溴酸；盐酸；异丁酸；乳酸(DL)；乳糖酸；月桂酸；马来酸；苹果酸(-L)；丙二酸；扁桃酸(DL)；甲磺酸；萘-1,5-二磺酸；萘-2-磺酸；烟酸；硝酸；油酸；草酸；棕榈酸；帕莫酸；磷酸；丙酸；焦谷氨酸(-L)；水杨酸；癸二酸；硬脂酸；琥珀酸；硫酸；酒石酸(+L)；硫氰酸；甲苯磺酸(p)；十一碳烯酸；1-羟基-2-萘甲酸；2,2-二氯乙酸；2-羟基乙磺酸；2-酮戊二酸；4-乙酰氨基苯甲酸；4-氨基水杨酸；乙酸；己二酸；抗坏血酸(L)；天冬氨酸(L)；苯磺酸；苯甲酸；樟脑酸(+)；樟脑-10-磺酸(+)；癸酸(十酸)；己酸(六酸)；辛酸(八酸)；碳酸；肉桂酸；柠檬酸；环拉酸；十二烷基硫酸；1,2-乙二磺酸；乙磺酸；甲酸；富马酸；半乳糖二酸；龙胆酸；葡庚糖酸(D)；葡糖酸(D)；葡糖醛酸(D)；谷氨酸；戊二酸；或甘油磷酸。
在一些实施方案中，药学上可接受的盐可以是任何有机或无机加成盐。
在一些实施方案中，盐可使用无机酸和有机酸作为游离酸。无机酸可以是盐酸、溴酸、硝酸、硫酸、高氯酸、磷酸等。有机酸可以是柠檬酸、醋酸、乳酸、马来酸、富马酸、葡糖酸、甲磺酸、葡糖酸、琥珀酸、酒石酸、半乳糖醛酸、亚甲基双羟萘酸、谷氨酸、天冬氨酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、马来酸、甲磺酸、乙磺酸、4-甲苯磺酸、水杨酸、柠檬酸、苯甲酸、丙二酸等。
在一些实施方案中，盐包括碱金属盐(钠盐、钾盐等)和碱土金属盐(钙盐、镁盐等)。例如，酸加成盐可包括乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、海苯酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘二甲酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、蔗糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐、铝、精氨酸、苄星、钙、胆碱、二乙胺、二乙醇胺、甘氨酸、赖氨酸、镁、葡甲胺、乙醇胺、钾、钠、氨丁三醇、锌盐等，并且其中可使用盐酸盐或三氟乙酸盐。
在其他实施方案中，药学上可接受的盐可以是与酸形成的盐，该酸诸如乙酸、丙酸、丁酸、甲酸、三氟乙酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、硬脂酸、琥珀酸、乙基琥珀酸、乳糖酸、葡糖酸、葡庚糖酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、十二烷基硫酸、苹果酸、天冬氨酸、谷氨酸、己二酸、半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、氢碘酸、烟酸、草酸、苦味酸、硫氰酸、十一烷酸、聚丙烯酸盐或羧乙烯基聚合物。
在一些实施方案中，药学上可接受的盐可由无机碱或有机碱制备。衍生自无机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、亚铁盐、锌盐、铜盐、亚锰盐、铝盐、铁盐、锰盐等。优选的无机盐是铵盐、钠盐、钾盐、钙盐和镁盐。衍生自有机碱的盐包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺，取代胺(包括天然存在的取代胺)，以及环胺(包括异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、氨丁三醇、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、N-烷基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶等)的盐。优选的有机碱是异丙胺、二乙胺、乙醇胺、哌啶、氨丁三醇和胆碱。
在一些实施方案中，药学上可接受的盐是指在合理的医学判断范围内，适用于与人和低等动物的组织接触而没有过度的毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理的效益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐是本领域公知的。例如，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences，第66卷：第1-19页(1977年)中详细描述了药学上可接受的盐，该文献的公开内容全文以引用方式并入本文。
在一些实施方案中，本发明的盐可在本发明化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，或者通过使游离碱官能团与合适的有机酸反应而单独制备。药学上可接受的无毒酸加成盐的示例是氨基与无机酸或有机酸形成的盐，该无机酸诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，该有机酸诸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸，或者通过使用本领域使用的其他方法诸如离子交换形成的盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。代表性的碱金属盐或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。其他药学上可接受的盐包括，当合适时，无毒的铵、季铵和使用抗衡离子形成的胺阳离子，抗衡离子诸如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐。
药学上可接受的盐的示例性描述在P.H.Stahl和C.G.Wermuth(编辑)，Handbookof Pharmaceutical Salts:Properties,Selection and Use，John Wiley&Sons，8月23日(2002年)中提供，该文献的公开内容全文以引用方式并入本文。
可喷雾组合物
本发明的喷雾产品的示例可包括用于农业用途的田间可喷雾制剂和用于住宅或商业空间的内部空间的室内喷雾剂。在一些实施方案中，包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68，与一种或多种杀昆虫剂：B1-B479的组合的残留喷雾剂或空间喷雾剂可用于减少或消除内部空间中的昆虫害虫。
室内表面喷雾(SSI)是将可变体积可喷雾量的杀昆虫剂施用到病媒停留的室内表面(例如墙壁、窗户、地板和天花板)上的技术。可变体积可喷雾量的主要目的是缩短昆虫害虫(例如，蝇、蚤、蜱或蚊子媒介)的寿命，并由此减少或中断疾病传播。其次的影响是降低处理区域内昆虫害虫的密度。SSI可用作防治昆虫害虫媒介疾病的方法，诸如莱姆病、沙门氏菌、基孔肯雅病毒、寨卡病毒和疟疾，也可用于处理昆虫媒介携带的寄生虫，诸如利什曼病和恰加斯病。许多携带寨卡病毒、基孔肯雅病毒和疟疾的蚊子媒介包括家栖蚊媒介，它们在吸食血液后在房屋内休息。这些蚊子特别易于通过用可喷雾组合物进行室内表面喷雾(SSI)来防治，该可喷雾组合物包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合。顾名思义，SSI涉及将组合物与残留杀虫剂一起施用到墙壁和房屋的其他表面。
在一个实施方案中，包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合的组合物将击倒与这些表面接触的昆虫害虫。SSI并不能直接防止人们被蚊子叮咬。相反，如果昆虫害虫停留在经喷雾的表面上，则SSI通常在它们吸血后对它们进行防治。因此，SSI防止感染被传播给其他人。为了有效，SSI必须应用于区域中非常高比例的住户(通常大于40％-80％)。因此，根据本发明的具有良好残留效力和可接受气味的喷雾剂特别适合作为综合的昆虫害虫媒介处理或防治解决方案的组分。
与要求活性CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或杀昆虫剂(例如用油漆)结合到住宅表面(诸如墙壁或天花板)的SSI相反，本发明的空间喷雾产品依赖于产生大量的小杀昆虫剂液滴，旨在在给定的时间段内通过一定体积的空气分布。当这些液滴碰到目标害虫时，它们会释放有效击倒剂量的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或杀昆虫剂，以有效防治昆虫害虫。产生空间喷雾的传统方法包括热雾化(由此产生包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合的组合物的稠密云雾，从而产生浓雾的外观)和超低体积(ULV)，由此通过冷的机械气溶胶产生机器产生液滴。也可使用即用型气溶胶，诸如气溶胶罐。
因为大面积可在任何时间处理，所以前述方法是快速减少特定区域中飞行昆虫害虫数量的非常有效的方法。并且，由于施用后残留活性非常有限，因此必须以5-7天的间隔重复以便完全有效。该方法在需要快速减少昆虫害虫数量的流行情况下特别有效。因此，它可用于城市登革热防治活动。
有效的空间喷雾通常取决于以下具体原则。目标昆虫通常飞过喷雾云(或者有时停留在暴露的表面上时被碰到)。因此，喷雾液滴与目标昆虫之间的接触效率是至关重要的。这是通过确保喷雾液滴在最佳时间段内保持空气传播并且它们含有正确剂量的杀昆虫剂来实现的。这两个问题在很大程度上通过优化液滴尺寸来解决。如果液滴太大，它们就会太快地落到地面上，并且不会穿透植被或在施用过程中遇到的其他障碍物(限制了施用的有效面积)。如果这些大液滴中的一个大液滴碰到单独昆虫，那么它也“过量杀伤”，因为将对每只单独昆虫释放高剂量。如果液滴太小，那么它们可能由于空气动力学的原因而不会沉积在目标昆虫上(没有碰撞)，或者它们可能被对流气流向上带入大气。对于空间喷雾应用，液滴的最佳尺寸是体积中值直径(VMD)为10微米-25微米的液滴。
在一些实施方案中，可喷雾组合物可含有量为约0.005重量％至约99重量％的一种或多种表A中列出的CRIP，即A1-A68的组合。
在一些实施方案中，可喷雾组合物可含有量为约0.005重量％至约99重量％的一种或多种表B中列出的杀昆虫剂，即B1-B479的组合。
泡沫
包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合的本发明的活性组合物可制成基于气溶胶的应用(包括气溶胶化泡沫应用)的喷雾产品形式。加压罐是用于形成气溶胶的典型容器。一种与使用的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或杀昆虫剂相容的气溶胶推进剂。优选地，使用液化气型推进剂。
合适的推进剂包括压缩空气、二氧化碳、丁烷和氮气。推进剂在活性化合物组合物中的浓度为吡啶组合物的约5重量％至约40重量％，优选为组合物的约15重量％至约30重量％，该组合物包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合。
在一个实施方案中，由TVP、TVP杀昆虫蛋白或其药学上可接受的盐组成的制剂还可包括一种或多种发泡剂。可使用的发泡剂包括月桂醇聚醚硫酸钠、椰油酰胺DEA和椰油酰胺丙基甜菜碱。优选地，月桂醇聚醚硫酸钠、椰油酰胺DEA和椰油酰胺丙基组合使用。发泡剂在活性化合物组合物中的浓度为组合物的约10重量％至约25重量％，更优选15重量％至20重量％。
当这种制剂用于不含发泡剂的气溶胶应用时，本发明的活性组合物可在使用前无需混合即直接使用。然而，含有发泡剂的气溶胶制剂确实需要在使用前立即混合(即，摇动)。此外，如果含有发泡剂的制剂使用时间较长，则它们可能需要在使用过程中定期进行额外的混合。
在一些实施方案中，可喷雾组合物可含有量为约0.005重量％至约99重量％的一种或多种表A中列出的CRIP，即A1-A68的组合。
在一些实施方案中，可喷雾组合物可含有量为约0.005重量％至约99重量％的一种或多种表B中列出的杀昆虫剂，即B1-B479的组合。
燃烧制剂
在一些实施方案中，还可用活性CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或杀昆虫剂组合物来处理居住区，方法是使用燃烧制剂，例如含有该组合物的蜡烛、烟卷或一柱熏香。例如，该组合物可被配制成家用产品，诸如“加热的”空气清新剂，其中杀昆虫剂组合物在加热(例如，电加热或燃烧)时释放。包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合的本发明的活性化合物组合物可制成喷雾产品形式，诸如气溶胶、蚊香和/或汽化器或喷雾器。
在一些实施方案中，可喷雾组合物可含有量为约0.005重量％至约99重量％的一种或多种表A中列出的CRIP，即A1-A68的组合。
在一些实施方案中，可喷雾组合物可含有量为约0.005重量％至约99重量％的一种或多种表B中列出的杀昆虫剂，即B1-B479的组合。
织物处理
在一些实施方案中，可制备含有杀虫有效组合物的织物和服装，该杀虫有效组合物包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合。在一些实施方案中，本文所述的聚合物材料、纤维、纱线、织物、网或基材中的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或杀昆虫剂的浓度可在相对宽的浓度范围内变化，例如，0.05重量％至15重量％，优选0.2重量％至10重量％，更优选0.4重量％至8重量％，尤其是0.5重量％至5重量％，诸如1重量％至3重量％。
类似地，包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合的组合物(无论是用于处理表面还是用于涂覆纤维、纱线、网、织物)的浓度可在相对宽的浓度范围内变化，例如，0.1重量％至70重量％，诸如0.5重量％至50重量％，优选1重量％至40重量％，更优选5重量％至30重量％，尤其是10重量％至20重量％。
CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或杀昆虫剂的浓度可根据应用领域选择，以满足关于击倒效力、持久性和毒性的要求。也可实现材料性质的调整，因此可通过这种方式获得定制的纺织织物。
因此，CRIP或杀昆虫剂的有效量可取决于具体的使用模式，最希望防治的昆虫害虫，以及CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或杀昆虫剂将被使用的环境。因此，CRIP或杀昆虫剂的有效量足以实现对昆虫害虫的防治。
在一些实施方案中，可喷雾组合物可含有量为约0.005重量％至约99重量％的一种或多种表A中列出的CRIP，即A1-A68的组合。
在一些实施方案中，可喷雾组合物可含有量为约0.005重量％至约99重量％的一种或多种表B中列出的杀昆虫剂，即B1-B479的组合。
表面处理组合物
在一些实施方案中，本发明提供了用于涂覆建筑物内部的墙壁、地板和天花板，以及用于涂覆基材或非生物材料组合物或制剂，其包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合。包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合的本发明组合物可使用已知技术出于所考虑的目的制备。包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合的组合物的制剂可被配制成还包含粘合剂以促进化合物与表面或其他基材的结合。用于结合的试剂是本领域已知的，并且往往是聚合形式。与纤维、纱线、织物或网相比，适用于待施加到具有特定孔隙率和/或粘合特性的壁表面的组合物的粘合剂的类型将是不同的—因此，基于已知的教导内容，技术人员将基于期望的表面和/或基材选择合适的粘合剂。
典型的粘合剂是聚乙烯醇、改性淀粉、聚乙烯丙烯酸酯、聚丙烯酸、聚乙酸乙烯酯共聚物、聚氨酯和改性植物油。合适的粘合剂可包括衍生自各种聚合物和共聚物以及它们的组合的胶乳分散体。在本发明组合物中用作粘合剂的合适胶乳包括苯乙烯、烷基苯乙烯、异戊二烯、丁二烯、丙烯腈、低级烷基丙烯酸酯、氯乙烯、偏二氯乙烯、低级羧酸和α,β-烯键式不饱和羧酸的乙烯基酯的聚合物和共聚物，包括其中共聚的含有三种或更多种不同单体种类的聚合物，以及硅酮或聚氨酯的后分散悬浮液。同样合适的可以是用于将活性成分粘合到其他表面的聚四氟乙烯(PTFE)聚合物。
在一些实施方案中，可喷雾组合物可含有量为约0.005重量％至约99重量％的一种或多种表A中列出的CRIP，即A1-A68的组合。
在一些实施方案中，可喷雾组合物可含有量为约0.005重量％至约99重量％的一种或多种表B中列出的杀昆虫剂，即B1-B479的组合。
分散剂
在一些示例性实施方案中，根据本公开的杀昆虫制剂可包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合，该赋形剂例如稀释剂或载体(例如，水)、聚合物粘合剂，和/或附加组分，诸如分散剂、聚合剂、乳化剂、增稠剂、醇、香料，或本领域已知的用于制备可喷雾杀昆虫剂的任何其他惰性赋形剂。
在一些实施方案中，包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合的组合物可被制备成多种不同形式或制剂类型，诸如混悬剂或胶囊混悬剂。并且本领域技术人员可根据特定CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或杀昆虫剂的性质、其用途以及其应用类型来制备相关组合物。例如，在本公开的方法、实施方案和其他方面中使用的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或杀昆虫剂可被包封在混悬剂或胶囊混悬剂制剂中。包封的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或杀昆虫剂可提供改善的耐洗牢度，以及更长的活性期。制剂可以是有机基的或水基的，优选水基的。
在一些实施方案中，可喷雾组合物可含有量为约0.005重量％至约99重量％的一种或多种表A中列出的CRIP，即A1-A68的组合。
在一些实施方案中，可喷雾组合物可含有量为约0.005重量％至约99重量％的一种或多种表B中列出的杀昆虫剂，即B1-B479的组合。
微胶囊化
适用于根据本公开的组合物和方法的微胶囊化CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或杀昆虫剂可用本领域已知的任何合适的技术制备。例如，先前已经开发了用于使材料微囊化的各种方法。这些方法可分为三类：物理方法、相分离和界面反应。在物理方法类别中，微胶囊壁材料和芯颗粒物理地结合在一起，并且壁材料围绕芯颗粒流动以形成微胶囊。在相分离类别中，微胶囊通过将芯材料乳化或分散在不混溶的连续相中而形成，其中壁材料溶解在该连续相中，并且通过例如凝聚作用使壁材料与连续相物理分离，并且沉积在芯颗粒周围。在界面反应类别中，微胶囊通过将芯材料乳化或分散在不混溶的连续相中，然后在芯颗粒的表面引起界面聚合反应而形成。存在于微胶囊中的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或杀昆虫剂的浓度可在微胶囊重量的0.1％至60％之间变化。
在一些实施方案中，可喷雾组合物可含有量为约0.005重量％至约99重量％的一种或多种表A中列出的CRIP，即A1-A68的组合。
在一些实施方案中，可喷雾组合物可含有量为约0.005重量％至约99重量％的一种或多种表B中列出的杀昆虫剂，即B1-B479的组合。
试剂盒、制剂、分散剂及其成分
用于根据本公开的组合物(包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合)、方法、实施方案和其他方面的制剂可通过将所有成分与水混合在一起，并任选地使用合适的混合和/或分散聚集体而形成。通常，此类制剂在10℃至70℃，优选15℃至50℃，更优选20℃至40℃的温度下形成。通常，包含(A)、(B)、(C)和/或(D)中的一者或多者的制剂是可能的，其中可以使用：CRIP和杀昆虫剂(作为杀虫剂)(A)；固体聚合物(B)；任选的另外的添加剂(D)；并将它们分散在含水组分(C)中。如果粘合剂存在于本发明的组合物(包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合)中，优选使用聚合物粘合剂(B)在水中的分散体以及以前分别制备的CRIP、CRIP-杀昆虫蛋白或杀昆虫剂(A)在水中的含水制剂。此类单独的制剂可含有用于稳定各制剂中的(A)和/或(B)的额外添加剂，并且是可商购获得的。在第二方法步骤中，加入此类粗制制剂和任选的额外的水(组分(C))。同样，基于前述方案的上述成分的组合也是可能的，例如使用(A)和/或(B)的预形成分散体并将其与固体(A)和/或(B)混合。聚合物粘合剂(B)的分散体可以是化学品制造商已经制造的预制分散体。
此外，使用“手工制备的”分散体，即由最终使用者小规模制备的分散体也在本发明的范围内。这种分散体可通过提供约20％的粘合剂(B)在水中的混合物、将该混合物加热到90℃至100℃的温度并将该混合物强力搅拌数小时来制备。可以将制剂制成最终产品，以便最终使用者可以容易地将其用于根据本发明的方法。并且，当然可以类似地制备浓缩物，其可由最终使用者用额外的水(C)稀释至所需的使用浓度。
在一个实施方案中，适用于SSI应用的组合物(包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合)或包衣制剂(包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，和(3)赋形剂的组合)含有活性成分和载体诸如水，并且还可含有一种或多种选自分散剂、润湿剂、防冻剂、增稠剂、防腐剂、乳化剂和粘合剂或粘着剂的助剂。
在一些实施方案中，CRIP或杀昆虫剂的示例性固体制剂通常被研磨至期望的粒度，例如粒度分布d(0.5)通常为3μm至20μm，优选5μm至15μm，尤其是7μm至12μm。
此外，可以将制剂作为试剂盒运送给最终使用者，该试剂盒包含：至少第一组分，该第一组分包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479(A)的组合；以及包含至少一种聚合物粘合剂(B)的第二组分。其他添加剂(D)可以是试剂盒的第三单独组分，或者可以已经与组分(A)和/或(B)混合。最终使用者可仅通过向试剂盒的组分中加入水(C)并混合来制备供使用的制剂。试剂盒的组分也可以是水中的制剂。当然，可以将一种组分的含水制剂与另一种组分的干燥制剂混合。举例来说，试剂盒可由一种制剂和第二单独的制剂组成，该制剂包含(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479(A)和任选的水(C)的组合；该第二单独的制剂包含至少一种聚合物粘合剂(B)、作为组分(C)的水和任选的组分(D)。
组分(A)、(B)、(C)和任选的(D)的浓度将由技术人员根据用于包衣/处理的技术来选择。通常，(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479(A)的组合的量可为基于组合物的重量计至多50重量％，优选1重量％至50重量％，例如10重量％至40重量％，尤其是15重量％至30重量％。聚合物粘合剂(B)的量可为基于组合物的重量计0.01重量％至30重量％，优选0.5重量％至15重量％，更优选1重量％至10重量％，尤其是1重量％至5重量％。如果存在，附加组分(D)的量通常为基于组合物的重量计0.1重量％至20重量％，优选0.5重量％至15重量％。如果存在，颜料和/或染料和/或香料的合适量通常为基于组合物的重量计0.01重量％至5重量％，优选0.1重量％至3重量％，更优选0.2重量％至2重量％。典型的即用型制剂包含0.1重量％至40重量％，优选1重量％至30重量％的组分(A)、(B)和任选的(D)，余量为水(C)。待由最终使用者稀释的浓缩物的典型浓度可包含5重量％至70重量％、优选10重量％至60重量％的组分(A)、(B)和任选的(D)，余量为水(C)。
如本文所述的表A中列出的任何CRIP，即A1-A68，或表B中列出的任何杀昆虫剂，即B1-B479；和/或关于它们的任何方法，可用于产生如本文所述的任何前述可喷雾组合物、制剂和/或试剂盒。
TVP组合物
玻璃化
玻璃化描述了一种过程，其中通过将肽固定在刚性、无定形玻璃状糖基质中来减缓肽的反应动力学：这导致肽的降解显著减缓。参见Slade等人，“Beyond water activity:recent advances based on an alternative approach to the assessment of foodquality and safety”，Crit.Rev.Food Sci.Nutr.，(1991)，第30卷，第115-360页。肽的解折叠和其他降解机制取决于肽的分子流动性；因此，玻璃化减缓了这种降解。参见Change等人，“Mechanism of protein stabilization by sugars during freeze-drying andstorage:native structure preservation,specific interaction,and/orimmobilization in a glassy matrix？”，J Pharm.Sci.，(2005)第94卷，第1427-1444页；和G.O.Poinar和R.Hess，“Ultrastructure of 40-million-year-old insect tissue”，Science，(1982)第80卷第215期：第1241–1242页。
玻璃化的示例性描述及其在肽稳定化中的考虑提供于如下文献：Mensink等人，“How sugars protect proteins in the solid state and during drying(review):Mechanisms of stabilization in relation to stress conditions.”Eur J PharmBiopharm.，2017年5月，第114卷：第288-295页，其公开内容全文以引用方式并入本文。
在一些实施方案中，CRIP或者CRIP-杀昆虫蛋白(例如，本发明的TVP)可被玻璃化。例如，在一些实施方案中，本发明的TVP可使用玻璃化过程来稳定。
在一些实施方案中，玻璃化可通过使用糖发生。在一些实施方案中，糖可以是海藻糖。
海藻糖
海藻糖是由两个α-葡萄糖单元之间的1,1-糖苷键形成的二糖。在一些实施方案中，海藻糖的分子式是C12H22O11；分子量为342.3g/mol。
海藻糖在自然界中以二糖形式存在，在某些聚合物中也以单体形式存在；然而，存在一些自然界中没有发现的海藻糖异构体。参见Elbein等人，“New insights ontrehalose:a multifunctional molecule.”，Glycobiology.，2003年4月，第13卷第4期：第17R-27R页。
海藻糖已被证明能稳定蛋白质和细胞抵抗应激诸如热、冷冻和干燥。参见K.Lippert和E.Galinski，Appl.Microbiol.Biotechnol.，1992年，第37卷，第61-65页；J.K.Kaushik和R.Bhat，J.Biol.Chem.，2003年，第278卷，第26458-26465页；R.P.Baptista、S.Pedersen、G.J.Cabrita、D.E.Otzen、J.M.Cabral和E.P.Melo，Biopolymers，2008年，第89卷，第538-547页；Guo等人，Nat.Biotechnol.，2000年，第18卷，第168-171页；Hengherr等人，FEBS J.，2008年，第275卷，第281-288页；Crowe等人，Science，1984年，第223卷，第701-703页；Beattie等人，Diabetes，1997年，第46卷，第519-523页；P.Sundaramurthi和R.Suryanarayanan，J.Phys.Chem.Lett.，2009年，第1卷，第510-514页；Duong等人，Appl.Environ.Microbiol.，2006年，第72卷，第1218-1225页。
事实上，一些动物在应对环境应激时会积累海藻糖至显著水平，因此强调了海藻糖稳定生物分子的能力。参见P.Westh和H.Ramlev，J.Exp.Zool.，1991年，第258卷，第303-311页；以及K.A.C.Madin和J.H.Crowe，J.Exp.Zool.，1975年，第193卷，第335-342页。此外，海藻糖通常被认为是安全的，并在多种药物中用作稳定剂。参见N.K.Jain和I.Roy，ProteinSci.，2009年，第18卷，第24-36页；以及S.Ohtake和Y.J.Wang，J.Pharm.Sci.，2011年，第100卷，第2020-2053页。
海藻糖的使用是本领域公知的。海藻糖可容易地从商业来源获得。例如，D-(+)-海藻糖二水合物(产品编号T9531)和海藻糖(产品编号PHR1344和1673715)可从SigmaAldrich(美国密苏里州圣路易斯市西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich Corp.St.Louis,MO,USA))商购获得。
本文提供了示例性海藻糖分子，其具有化学文摘服务社(CAS)登录号99-20-7(无水)；和CAS登录号6138-23-4(二水)。本公开的示例性海藻糖化合物具有PubChem CID号7427。
海藻糖用于稳定肽的用途的示例性描述提供于：美国专利号6,165,981、6,171,586、6,991,790、7,956,028、10,273,333、10,588,957，这些专利的公开内容全文以引用方式并入本文。
组合物中海藻糖的制备和用途的示例性描述提供于美国专利号7,678,764中，其公开内容全文以引用方式并入本文。
TVP组合物及其组分的范围和描述
如本文所用，“制剂”和“组合物”是同义词。
在一些实施方案中，包含杀昆虫剂(IA)和TVP、TVP杀昆虫蛋白或其药学上可接受的盐的制剂可以是液体浓缩物、可湿性粉末或颗粒制剂。在一些实施方案中，如本文所述的TVP、TVP杀昆虫蛋白或其药学上可接受的盐中的任一者可用于任何下述制剂，例如前述TVP、TVP杀昆虫蛋白或其药学上可接受的盐中的任一者可用于以下制剂：可湿性粉末或颗粒制剂；或液体浓缩物制剂。
在一些实施方案中，制剂包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：(1)一种或多种如本文所述的IA(例如，表B中所列的那些)；(2)TVP、TVP杀昆虫蛋白或其药学上可接受的盐；和(3)一种或多种赋形剂；其中该赋形剂包含海藻糖、磷酸氢二钾(K2HPO4)、磷酸二氢钾(KH2PO4)、麦芽糖糊精和BIT，基本上由其组成或由其组成。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按总制剂的重量计浓度范围为约0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％的海藻糖。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约99.9％；约1％至约99.9％；约2％至约99.9％；约3％至约99.9％；约4％至约99.9％；约5％至约99.9％；约6％至约99.9％；约7％至约99.9％；约8％至约99.9％；约9％至约99.9％；约10％至约99.9％；约11％至约99.9％；约12％至约99.9％；约13％至约99.9％；约14％至约99.9％；约15％至约99.9％；约16％至约99.9％；约17％至约99.9％；约18％至约99.9％；约19％至约99.9％；约20％至约99.9％；约21％至约99.9％；约22％至约99.9％；约23％至约99.9％；约24％至约99.9％；约25％至约99.9％；约26％至约99.9％；约27％至约99.9％；约28％至约99.9％；约29％至约99.9％；约30％至约99.9％；约31％至约99.9％；约32％至约99.9％；约33％至约99.9％；约34％至约99.9％；约35％至约99.9％；约36％至约99.9％；约37％至约99.9％；约38％至约99.9％；约39％至约99.9％；约40％至约99.9％；约41％至约99.9％；约42％至约99.9％；约43％至约99.9％；约44％至约99.9％；约45％至约99.9％；约46％至约99.9％；约47％至约99.9％；约48％至约99.9％；约49％至约99.9％；约50％至约99.9％；约51％至约99.9％；约52％至约99.9％；约53％至约99.9％；约54％至约99.9％；约55％至约99.9％；约56％至约99.9％；约57％至约99.9％；约58％至约99.9％；约59％至约99.9％；约60％至约99.9％；约61％至约99.9％；约62％至约99.9％；约63％至约99.9％；约64％至约99.9％；约65％至约99.9％；约66％至约99.9％；约67％至约99.9％；约68％至约99.9％；约69％至约99.9％；约70％至约99.9％；约71％至约99.9％；约72％至约99.9％；约73％至约99.9％；约74％至约99.9％；约75％至约99.9％；约76％至约99.9％；约77％至约99.9％；约78％至约99.9％；约79％至约99.9％；约80％至约99.9％；约81％至约99.9％；约82％至约99.9％；约83％至约99.9％；约84％至约99.9％；约85％至约99.9％；约86％至约99.9％；约87％至约99.9％；约88％至约99.9％；约89％至约99.9％；约90％至约99.9％；约91％至约99.9％；约92％至约99.9％；约93％至约99.9％；约94％至约99.9％；约95％至约99.9％；约96％至约99.9％；约97％至约99.9％；约98％至约99.9％；或约99％至约99.9％的海藻糖。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约99％；约0.1％至约98％；约0.1％至约97％；约0.1％至约96％；约0.1％至约95％；约0.1％至约94％；约0.1％至约93％；约0.1％至约92％；约0.1％至约91％；约0.1％至约90％；约0.1％至约89％；约0.1％至约88％；约0.1％至约87％；约0.1％至约86％；约0.1％至约85％；约0.1％至约84％；约0.1％至约83％；约0.1％至约82％；约0.1％至约81％；约0.1％至约80％；约0.1％至约79％；约0.1％至约78％；约0.1％至约77％；约0.1％至约76％；约0.1％至约75％；约0.1％至约74％；约0.1％至约73％；约0.1％至约72％；约0.1％至约71％；约0.1％至约70％；约0.1％至约69％；约0.1％至约68％；约0.1％至约67％；约0.1％至约66％；约0.1％至约65％；约0.1％至约64％；约0.1％至约63％；约0.1％至约62％；约0.1％至约61％；约0.1％至约60％；约0.1％至约59％；约0.1％至约58％；约0.1％至约57％；约0.1％至约56％；约0.1％至约55％；约0.1％至约54％；约0.1％至约53％；约0.1％至约52％；约0.1％至约51％；约0.1％至约50％；约0.1％至约49％；约0.1％至约48％；约0.1％至约47％；约0.1％至约46％；约0.1％至约45％；约0.1％至约44％；约0.1％至约43％；约0.1％至约42％；约0.1％至约41％；约0.1％至约40％；约0.1％至约39％；约0.1％至约38％；约0.1％至约37％；约0.1％至约36％；约0.1％至约35％；约0.1％至约34％；约0.1％至约33％；约0.1％至约32％；约0.1％至约31％；约0.1％至约30％；约0.1％至约29％；约0.1％至约28％；约0.1％至约27％；约0.1％至约26％；约0.1％至约25％；约0.1％至约24％；约0.1％至约23％；约0.1％至约22％；约0.1％至约21％；约0.1％至约20％；约0.1％至约19％；约0.1％至约18％；约0.1％至约17％；约0.1％至约16％；约0.1％至约15％；约0.1％至约14％；约0.1％至约13％；约0.1％至约12％；约0.1％至约11％；约0.1％至约10％；约0.1％至约9％；约0.1％至约8％；约0.1％至约7％；约0.1％至约6％；约0.1％至约5％；约0.1％至约4％；约0.1％至约3％；约0.1％至约2％；约0.1％至约1％；或约0.1％至约0.5％的海藻糖。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约40％；约0.5％至约40％；约1％至约40％；约2％至约40％；约3％至约40％；约4％至约40％；约5％至约40％；约6％至约40％；约7％至约40％；约8％至约40％；约9％至约40％；约10％至约40％；约11％至约40％；约12％至约40％；约13％至约40％；约14％至约40％；约15％至约40％；约16％至约40％；约17％至约40％；约18％至约40％；约19％至约40％；约20％至约40％；约21％至约40％；约22％至约40％；约23％至约40％；约24％至约40％；约25％至约40％；约26％至约40％；约27％至约40％；约28％至约40％；约29％至约40％；约30％至约40％；约31％至约40％；约32％至约40％；约33％至约40％；约34％至约40％；约35％至约40％；约36％至约40％；约37％至约40％；约38％至约40％；或39％至约40％的磷酸氢二钾(K2HPO4)。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约40％；约0.1％至约39％；约0.1％至约38％；约0.1％至约37％；约0.1％至约36％；约0.1％至约35％；约0.1％至约34％；约0.1％至约33％；约0.1％至约32％；约0.1％至约31％；约0.1％至约30％；约0.1％至约29％；约0.1％至约28％；约0.1％至约27％；约0.1％至约26％；约0.1％至约25％；约0.1％至约24％；约0.1％至约23％；约0.1％至约22％；约0.1％至约21％；约0.1％至约20％；约0.1％至约19％；约0.1％至约18％；约0.1％至约17％；约0.1％至约16％；约0.1％至约15％；约0.1％至约14％；约0.1％至约13％；约0.1％至约12％；约0.1％至约11％；约0.1％至约10％；约0.1％至约9％；约0.1％至约8％；约0.1％至约7％；约0.1％至约6％；约0.1％至约5％；约0.1％至约4％；约0.1％至约3％；约0.1％至约2％；约0.1％至约1％；或约0.1％至约0.5％的磷酸氢二钾(K2HPO4)。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约20％；约0.5％至约20％；约1％至约20％；约2％至约20％；约3％至约20％；约4％至约20％；约5％至约20％；约6％至约20％；约7％至约20％；约8％至约20％；约9％至约20％；约10％至约20％；约11％至约20％；约12％至约20％；约13％至约20％；约14％至约20％；约15％至约20％；约16％至约20％；约17％至约20％；约18％至约20％；或约19％至约20％的磷酸二氢钾(KH2PO4)。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约20％；约0.1％至约19％；约0.1％至约18％；约0.1％至约17％；约0.1％至约16％；约0.1％至约15％；约0.1％至约14％；约0.1％至约13％；约0.1％至约12％；约0.1％至约11％；约0.1％至约10％；约0.1％至约9％；约0.1％至约8％；约0.1％至约7％；约0.1％至约6％；约0.1％至约5％；约0.1％至约4％；约0.1％至约3％；约0.1％至约2％；约0.1％至约1％；或约0.1％至约0.5％的磷酸二氢钾(KH2PO4)。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约99.9％；约1％至约99.9％；约2％至约99.9％；约3％至约99.9％；约4％至约99.9％；约5％至约99.9％；约6％至约99.9％；约7％至约99.9％；约8％至约99.9％；约9％至约99.9％；约10％至约99.9％；约11％至约99.9％；约12％至约99.9％；约13％至约99.9％；约14％至约99.9％；约15％至约99.9％；约16％至约99.9％；约17％至约99.9％；约18％至约99.9％；约19％至约99.9％；约20％至约99.9％；约21％至约99.9％；约22％至约99.9％；约23％至约99.9％；约24％至约99.9％；约25％至约99.9％；约26％至约99.9％；约27％至约99.9％；约28％至约99.9％；约29％至约99.9％；约30％至约99.9％；约31％至约99.9％；约32％至约99.9％；约33％至约99.9％；约34％至约99.9％；约35％至约99.9％；约36％至约99.9％；约37％至约99.9％；约38％至约99.9％；约39％至约99.9％；约40％至约99.9％；约41％至约99.9％；约42％至约99.9％；约43％至约99.9％；约44％至约99.9％；约45％至约99.9％；约46％至约99.9％；约47％至约99.9％；约48％至约99.9％；约49％至约99.9％；约50％至约99.9％；约51％至约99.9％；约52％至约99.9％；约53％至约99.9％；约54％至约99.9％；约55％至约99.9％；约56％至约99.9％；约57％至约99.9％；约58％至约99.9％；约59％至约99.9％；约60％至约99.9％；约61％至约99.9％；约62％至约99.9％；约63％至约99.9％；约64％至约99.9％；约65％至约99.9％；约66％至约99.9％；约67％至约99.9％；约68％至约99.9％；约69％至约99.9％；约70％至约99.9％；约71％至约99.9％；约72％至约99.9％；约73％至约99.9％；约74％至约99.9％；约75％至约99.9％；约76％至约99.9％；约77％至约99.9％；约78％至约99.9％；约79％至约99.9％；约80％至约99.9％；约81％至约99.9％；约82％至约99.9％；约83％至约99.9％；约84％至约99.9％；约85％至约99.9％；约86％至约99.9％；约87％至约99.9％；约88％至约99.9％；约89％至约99.9％；约90％至约99.9％；约91％至约99.9％；约92％至约99.9％；约93％至约99.9％；约94％至约99.9％；约95％至约99.9％；约96％至约99.9％；约97％至约99.9％；约98％至约99.9％；或约99％至约99.9％的麦芽糖糊精。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约99％；约0.1％至约98％；约0.1％至约97％；约0.1％至约96％；约0.1％至约95％；约0.1％至约94％；约0.1％至约93％；约0.1％至约92％；约0.1％至约91％；约0.1％至约90％；约0.1％至约89％；约0.1％至约88％；约0.1％至约87％；约0.1％至约86％；约0.1％至约85％；约0.1％至约84％；约0.1％至约83％；约0.1％至约82％；约0.1％至约81％；约0.1％至约80％；约0.1％至约79％；约0.1％至约78％；约0.1％至约77％；约0.1％至约76％；约0.1％至约75％；约0.1％至约74％；约0.1％至约73％；约0.1％至约72％；约0.1％至约71％；约0.1％至约70％；约0.1％至约69％；约0.1％至约68％；约0.1％至约67％；约0.1％至约66％；约0.1％至约65％；约0.1％至约64％；约0.1％至约63％；约0.1％至约62％；约0.1％至约61％；约0.1％至约60％；约0.1％至约59％；约0.1％至约58％；约0.1％至约57％；约0.1％至约56％；约0.1％至约55％；约0.1％至约54％；约0.1％至约53％；约0.1％至约52％；约0.1％至约51％；约0.1％至约50％；约0.1％至约49％；约0.1％至约48％；约0.1％至约47％；约0.1％至约46％；约0.1％至约45％；约0.1％至约44％；约0.1％至约43％；约0.1％至约42％；约0.1％至约41％；约0.1％至约40％；约0.1％至约39％；约0.1％至约38％；约0.1％至约37％；约0.1％至约36％；约0.1％至约35％；约0.1％至约34％；约0.1％至约33％；约0.1％至约32％；约0.1％至约31％；约0.1％至约30％；约0.1％至约29％；约0.1％至约28％；约0.1％至约27％；约0.1％至约26％；约0.1％至约25％；约0.1％至约24％；约0.1％至约23％；约0.1％至约22％；约0.1％至约21％；约0.1％至约20％；约0.1％至约19％；约0.1％至约18％；约0.1％至约17％；约0.1％至约16％；约0.1％至约15％；约0.1％至约14％；约0.1％至约13％；约0.1％至约12％；约0.1％至约11％；约0.1％至约10％；约0.1％至约9％；约0.1％至约8％；约0.1％至约7％；约0.1％至约6％；约0.1％至约5％；约0.1％至约4％；约0.1％至约3％；约0.1％至约2％；约0.1％至约1％；或约0.1％至约0.5％的麦芽糖糊精。
在一些实施方案中，麦芽糖糊精可具有按占总制剂的wt/wt计范围为约2％至约20％；约3％至约20％；约4％至约20％；约5％至约20％；约6％至约20％；约7％至约20％；约8％至约20％；约9％至约20％；约10％至约20％；约11％至约20％；约12％至约20％；约13％至约20％；约14％至约20％；约15％至约20％；约16％至约20％；约17％至约20％；约18％至约20％；或约19％至约20％的右旋糖当量。
在一些实施方案中，麦芽糖糊精可具有按占总制剂的wt/wt计范围为约2％至约20％；约2％至约19％；约2％至约18％；约2％至约17％；约2％至约16％；约2％至约15％；约2％至约14％；约2％至约13％；约2％至约12％；约2％至约11％；约2％至约10％；约2％至约9％；约2％至约8％；约2％至约7％；约2％至约6％；约2％至约5％；约2％至约4％；或约2％至约3％的右旋糖当量。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.01％至约1％；约0.025％至约1％；约0.05％至约1％；约0.075％至约1％；约0.1％至约1％；约0.125％至约1％；约0.15％至约1％；约0.175％至约1％；约0.2％至约1％；约0.225％至约1％；约0.25％至约1％；约0.275％至约1％；约0.3％至约1％；约0.325％至约1％；约0.35％至约1％；约0.375％至约1％；约0.4％至约1％；约0.425％至约1％；约0.45％至约1％；约0.475％至约1％；约0.5％至约1％；约0.525％至约1％；约0.55％至约1％；约0.575％至约1％；约0.6％至约1％；约0.625％至约1％；约0.65％至约1％；约0.675％至约1％；约0.7％至约1％；约0.725％至约1％；约0.75％至约1％；约0.775％至约1％；约0.8％至约1％；约0.825％至约1％；约0.85％至约1％；约0.875％至约1％；约0.9％至约1％；约0.925％至约1％；约0.95％至约1％；约0.975％至约1％的苯并异噻唑啉酮(BIT)。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.01％至约1％；约0.01％至约0.975％；约0.01％至约0.95％；约0.01％至约0.925％；约0.01％至约0.9％；约0.01％至约0.875％；约0.01％至约0.85％；约0.01％至约0.825％；约0.01％至约0.8％；约0.01％至约0.775％；约0.01％至约0.75％；约0.01％至约0.725％；约0.01％至约0.7％；约0.01％至约0.675％；约0.01％至约0.65％；约0.01％至约0.625％；约0.01％至约0.6％；约0.01％至约0.575％；约0.01％至约0.55％；约0.01％至约0.525％；约0.01％至约0.5％；约0.01％至约0.475％；约0.01％至约0.45％；约0.01％至约0.425％；约0.01％至约0.4％；约0.01％至约0.375％；约0.01％至约0.35％；约0.01％至约0.325％；约0.01％至约0.3％；约0.01％至约0.275％；约0.01％至约0.25％；约0.01％至约0.225％；约0.01％至约0.2％；约0.01％至约0.175％；约0.01％至约0.15％；约0.01％至约0.125％；约0.01％至约0.1％；约0.01％至约0.075％；约0.01％至约0.05％；或约0.01％至约0.025％的苯并异噻唑啉酮(BIT)。
在一些实施方案中，BIT可以是1,2-苯并异噻唑啉-3-酮。本文提供了具有CAS号2634-33-5的示例性的1,2-苯并异噻唑啉-3-酮。WIPO公开号WO2014173716A1中提供了描述如何制备1,2-苯并异噻唑啉-3-酮的示例性描述，其公开内容全文以引用方式并入本文。此外，1,2-苯并异噻唑啉-3-酮可容易地从商业供应商处获得，例如，
Figure BDA0004014715560002931
AQ防腐剂；9.25％的1,2-苯并异噻唑啉-3-酮的水溶液，从瑞士巴塞尔瑞士巴塞尔的龙沙集团(LonzaGroup Ltd.Muenchensteinerstrasse 38,CH-4002Basel,Switzerland)处商购获得。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约1％；约0.125％至约1％；约0.15％至约1％；约0.175％至约1％；约0.2％至约1％；约0.225％至约1％；约0.25％至约1％；约0.275％至约1％；约0.3％至约1％；约0.325％至约1％；约0.35％至约1％；约0.375％至约1％；约0.4％至约1％；约0.425％至约1％；约0.45％至约1％；约0.475％至约1％；约0.5％至约1％；约0.525％至约1％；约0.55％至约1％；约0.575％至约1％；约0.6％至约1％；约0.625％至约1％；约0.65％至约1％；约0.675％至约1％；约0.7％至约1％；约0.725％至约1％；约0.75％至约1％；约0.775％至约1％；约0.8％至约1％；约0.825％至约1％；约0.85％至约1％；约0.875％至约1％；约0.9％至约1％；约0.925％至约1％；约0.95％至约1％；约0.975％至约1％的木质素磺酸盐。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约1％；约0.1％至约0.975％；约0.1％至约0.95％；约0.1％至约0.925％；约0.1％至约0.9％；约0.1％至约0.875％；约0.1％至约0.85％；约0.1％至约0.825％；约0.1％至约0.8％；约0.1％至约0.775％；约0.1％至约0.75％；约0.1％至约0.725％；约0.1％至约0.7％；约0.1％至约0.675％；约0.1％至约0.65％；约0.1％至约0.625％；约0.1％至约0.6％；约0.1％至约0.575％；约0.1％至约0.55％；约0.1％至约0.525％；约0.1％至约0.5％；约0.1％至约0.475％；约0.1％至约0.45％；约0.1％至约0.425％；约0.1％至约0.4％；约0.1％至约0.375％；约0.1％至约0.35％；约0.1％至约0.325％；约0.1％至约0.3％；约0.1％至约0.275％；约0.1％至约0.25％；约0.1％至约0.225％；约0.1％至约0.2％；约0.1％至约0.175％；约0.1％至约0.15％；或约0.1％至约0.125％的木质素磺酸盐。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约1％；约0.125％至约1％；约0.15％至约1％；约0.175％至约1％；约0.2％至约1％；约0.225％至约1％；约0.25％至约1％；约0.275％至约1％；约0.3％至约1％；约0.325％至约1％；约0.35％至约1％；约0.375％至约1％；约0.4％至约1％；约0.425％至约1％；约0.45％至约1％；约0.475％至约1％；约0.5％至约1％；约0.525％至约1％；约0.55％至约1％；约0.575％至约1％；约0.6％至约1％；约0.625％至约1％；约0.65％至约1％；约0.675％至约1％；约0.7％至约1％；约0.725％至约1％；约0.75％至约1％；约0.775％至约1％；约0.8％至约1％；约0.825％至约1％；约0.85％至约1％；约0.875％至约1％；约0.9％至约1％；约0.925％至约1％；约0.95％至约1％；或约0.975％至约1％的石膏。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约1％；约0.1％至约0.975％；约0.1％至约0.95％；约0.1％至约0.925％；约0.1％至约0.9％；约0.1％至约0.875％；约0.1％至约0.85％；约0.1％至约0.825％；约0.1％至约0.8％；约0.1％至约0.775％；约0.1％至约0.75％；约0.1％至约0.725％；约0.1％至约0.7％；约0.1％至约0.675％；约0.1％至约0.65％；约0.1％至约0.625％；约0.1％至约0.6％；约0.1％至约0.575％；约0.1％至约0.55％；约0.1％至约0.525％；约0.1％至约0.5％；约0.1％至约0.475％；约0.1％至约0.45％；约0.1％至约0.425％；约0.1％至约0.4％；约0.1％至约0.375％；约0.1％至约0.35％；约0.1％至约0.325％；约0.1％至约0.3％；约0.1％至约0.275％；约0.1％至约0.25％；约0.1％至约0.225％；约0.1％至约0.2％；约0.1％至约0.175％；约0.1％至约0.15％；或约0.1％至约0.125％的石膏。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.5％至约8％；约0.75％至约8％；约1％至约8％；约1.25％至约8％；约1.5％至约8％；约1.75％至约8％；约2％至约8％；约2.25％至约8％；约2.5％至约8％；约2.75％至约8％；约3％至约8％；约3.25％至约8％；约3.5％至约8％；约3.75％至约8％；约4％至约8％；约4.25％至约8％；约4.5％至约8％；约4.75％至约8％；约5％至约8％；约5.25％至约8％；约5.5％至约8％；约5.75％至约8％；约6％至约8％；约6.25％至约8％；约6.5％至约8％；约6.75％至约8％；约7％至约8％；约7.25％至约8％；约7.5％至约8％；或约7.75％至约8％的山梨糖醇。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.5％至约8％；约0.5％至约7.75％；约0.5％至约7.5％；约0.5％至约7.25％；约0.5％至约7％；约0.5％至约6.75％；约0.5％至约6.5％；约0.5％至约6.25％；约0.5％至约6％；约0.5％至约5.75％；约0.5％至约5.5％；约0.5％至约5.25％；约0.5％至约5％；约0.5％至约4.75％；约0.5％至约4.5％；约0.5％至约4.25％；约0.5％至约4％；约0.5％至约3.75％；约0.5％至约3.5％；约0.5％至约3.25％；约0.5％至约3％；约0.5％至约2.75％；约0.5％至约2.5％；约0.5％至约2.25％；约0.5％至约2％；约0.5％至约1.75％；约0.5％至约1.5％；约0.5％至约1.25％；约0.5％至约1％；或约0.5％至约0.75％的山梨糖醇。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约1％；约0.125％至约1％；约0.15％至约1％；约0.175％至约1％；约0.2％至约1％；约0.225％至约1％；约0.25％至约1％；约0.275％至约1％；约0.3％至约1％；约0.325％至约1％；约0.35％至约1％；约0.375％至约1％；约0.4％至约1％；约0.425％至约1％；约0.45％至约1％；约0.475％至约1％；约0.5％至约1％；约0.525％至约1％；约0.55％至约1％；约0.575％至约1％；约0.6％至约1％；约0.625％至约1％；约0.65％至约1％；约0.675％至约1％；约0.7％至约1％；约0.725％至约1％；约0.75％至约1％；约0.775％至约1％；约0.8％至约1％；约0.825％至约1％；约0.85％至约1％；约0.875％至约1％；约0.9％至约1％；约0.925％至约1％；约0.95％至约1％；约0.975％至约1％的苯甲酸钠。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约1％；约0.1％至约0.975％；约0.1％至约0.95％；约0.1％至约0.925％；约0.1％至约0.9％；约0.1％至约0.875％；约0.1％至约0.85％；约0.1％至约0.825％；约0.1％至约0.8％；约0.1％至约0.775％；约0.1％至约0.75％；约0.1％至约0.725％；约0.1％至约0.7％；约0.1％至约0.675％；约0.1％至约0.65％；约0.1％至约0.625％；约0.1％至约0.6％；约0.1％至约0.575％；约0.1％至约0.55％；约0.1％至约0.525％；约0.1％至约0.5％；约0.1％至约0.475％；约0.1％至约0.45％；约0.1％至约0.425％；约0.1％至约0.4％；约0.1％至约0.375％；约0.1％至约0.35％；约0.1％至约0.325％；约0.1％至约0.3％；约0.1％至约0.275％；约0.1％至约0.25％；约0.1％至约0.225％；约0.1％至约0.2％；约0.1％至约0.175％；约0.1％至约0.15％；或约0.1％至约0.125％的苯甲酸钠。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约1％；约0.125％至约1％；约0.15％至约1％；约0.175％至约1％；约0.2％至约1％；约0.225％至约1％；约0.25％至约1％；约0.275％至约1％；约0.3％至约1％；约0.325％至约1％；约0.35％至约1％；约0.375％至约1％；约0.4％至约1％；约0.425％至约1％；约0.45％至约1％；约0.475％至约1％；约0.5％至约1％；约0.525％至约1％；约0.55％至约1％；约0.575％至约1％；约0.6％至约1％；约0.625％至约1％；约0.65％至约1％；约0.675％至约1％；约0.7％至约1％；约0.725％至约1％；约0.75％至约1％；约0.775％至约1％；约0.8％至约1％；约0.825％至约1％；约0.85％至约1％；约0.875％至约1％；约0.9％至约1％；约0.925％至约1％；约0.95％至约1％；约0.975％至约1％的山梨酸钾。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约1％；约0.1％至约0.975％；约0.1％至约0.95％；约0.1％至约0.925％；约0.1％至约0.9％；约0.1％至约0.875％；约0.1％至约0.85％；约0.1％至约0.825％；约0.1％至约0.8％；约0.1％至约0.775％；约0.1％至约0.75％；约0.1％至约0.725％；约0.1％至约0.7％；约0.1％至约0.675％；约0.1％至约0.65％；约0.1％至约0.625％；约0.1％至约0.6％；约0.1％至约0.575％；约0.1％至约0.55％；约0.1％至约0.525％；约0.1％至约0.5％；约0.1％至约0.475％；约0.1％至约0.45％；约0.1％至约0.425％；约0.1％至约0.4％；约0.1％至约0.375％；约0.1％至约0.35％；约0.1％至约0.325％；约0.1％至约0.3％；约0.1％至约0.275％；约0.1％至约0.25％；约0.1％至约0.225％；约0.1％至约0.2％；约0.1％至约0.175％；约0.1％至约0.15％；或约0.1％至约0.125％的山梨酸钾。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约1％；约0.125％至约1％；约0.15％至约1％；约0.175％至约1％；约0.2％至约1％；约0.225％至约1％；约0.25％至约1％；约0.275％至约1％；约0.3％至约1％；约0.325％至约1％；约0.35％至约1％；约0.375％至约1％；约0.4％至约1％；约0.425％至约1％；约0.45％至约1％；约0.475％至约1％；约0.5％至约1％；约0.525％至约1％；约0.55％至约1％；约0.575％至约1％；约0.6％至约1％；约0.625％至约1％；约0.65％至约1％；约0.675％至约1％；约0.7％至约1％；约0.725％至约1％；约0.75％至约1％；约0.775％至约1％；约0.8％至约1％；约0.825％至约1％；约0.85％至约1％；约0.875％至约1％；约0.9％至约1％；约0.925％至约1％；约0.95％至约1％；约0.975％至约1％的EDTA。
在一些实施方案中，本发明的制剂包含按占总制剂的wt/wt计浓度范围为约0.1％至约1％；约0.1％至约0.975％；约0.1％至约0.95％；约0.1％至约0.925％；约0.1％至约0.9％；约0.1％至约0.875％；约0.1％至约0.85％；约0.1％至约0.825％；约0.1％至约0.8％；约0.1％至约0.775％；约0.1％至约0.75％；约0.1％至约0.725％；约0.1％至约0.7％；约0.1％至约0.675％；约0.1％至约0.65％；约0.1％至约0.625％；约0.1％至约0.6％；约0.1％至约0.575％；约0.1％至约0.55％；约0.1％至约0.525％；约0.1％至约0.5％；约0.1％至约0.475％；约0.1％至约0.45％；约0.1％至约0.425％；约0.1％至约0.4％；约0.1％至约0.375％；约0.1％至约0.35％；约0.1％至约0.325％；约0.1％至约0.3％；约0.1％至约0.275％；约0.1％至约0.25％；约0.1％至约0.225％；约0.1％至约0.2％；约0.1％至约0.175％；约0.1％至约0.15％；或约0.1％至约0.125％的EDTA。
在一些实施方案中，本发明的制剂可在约5至约11；约5.5至约11；约6至约11；约6.5至约11；约7至约11；约7.5至约11；约8至约11；约8.5至约11；约9至约11；约9.5至约11；约10至约11；或约10.5至约11的pH范围内配制。
在一些实施方案中，本发明的制剂可在约5至约11；约5至约10.5；约5至约10；约5至约9.5；约5至约9；约5至约8.5；约5至约8；约5至约7.5；约5至约7；约5至约6.5；约5至约6；或约5至约5.5的pH范围内配制。
在一些实施方案中，该制剂可被配制成颗粒形式(颗粒制剂)。产生颗粒制剂的方法是本领域众所周知的，包括:结晶、沉淀、锅包衣、流化床包衣、附聚(例如流化床附聚)、旋转雾化、挤出、造粒、滚圆、尺寸减小方法、转鼓造粒和/或高剪切造粒等。
在一些实施方案中，颗粒制剂可通过团聚产生，例如喷雾干燥团聚、再润湿团聚、流化床团聚等等。
在一些实施方案中，团聚的类型可以是流化床团聚。流化床团聚的示例性方法提供于美国专利号7,582,147，其公开内容全文以引用方式并入本文。
在一些实施方案中，颗粒制剂可通过流化床团聚产生。
在一些实施方案中，颗粒制剂可通过将活性和惰性成分喷雾到流化床中的空白载体上来产生。
在一些实施方案中，颗粒制剂可通过将活性成分和惰性成分(赋形剂)喷雾到空白载体上并在盘式造粒机中造粒而产生。
在一些实施方案中，颗粒制剂可通过将活性粉末和惰性粉末(即，本文所述的一种或多种赋形剂)与水混合来产生，随后通过使成分通过挤出机而造粒。
在一些实施方案中，颗粒制剂可通过将活性粉末和惰性粉末(即，本文所述的一种或多种赋形剂)与水混合来产生，并通过辊压造粒。
例示性组合、组合物和产品
本公开考虑了包含一种或多种CRIP和一种或多种杀昆虫剂(IA)的组合、组合物和产品。
利用如本文所述的CRIP和如本文所述的IA(例如，以下CRIP中的一者或多者：A1-A68，以及以下IA中的一者或多者：B1-B479的混合物)的任何组合、组合、产品、多肽和/或植物可用于防治害虫、其生长和/或其作用所致的损害，尤其是其对植物的损害。
包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68，以及以下IA中的一者或多者：B1-B479的组合的组合物可包括农用化学品组合物。例如，在一些实施方案中，农用化学品组合物可包括但不限于气溶胶和/或气溶胶化的产品，例如喷雾剂、熏蒸剂、粉末、粉剂和/或气体；拌种剂；口服制剂(例如，昆虫食物等)；(瞬时和/或稳定地)表达和/或产生CRIP和/或CRIP ORF和肽IA的转基因生物体，例如植物或动物。
在一些实施方案中，包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68，以及以下IA中的一者或多者：B1-B479的组合或组合物可与本文所述的其他杀昆虫剂蛋白和/或杀虫剂同时或顺序地使用。
在一些实施方案中，组合物或组合可包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68，以及以下IA中的一者或多者：B1-B479的组合，和来自另一种生物体的一种或多种肽或多肽。
例如，在一些实施方案中，组合或组合物可包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68，以及以下IA中的一者或多者：B1-B479的组合，以及来自蜘蛛、蝎子、海葵、鸡心螺、蛇、蜥蜴或水母的一种或多种肽或多肽。
在一些实施方案中，本公开的活性成分可以组合物的形式施用，并且可以同时或相继地与其他化合物一起施用于待处理的作物区域或植物。这些化合物可以是肥料、除草剂、冷冻保护剂、表面活性剂、洗涤剂、杀虫皂、休眠油、聚合物和/或定时释放或可生物降解的载体制剂，其允许在单次施用该制剂后对靶区域进行长期给药。它们还可以是选择性除草剂、化学杀昆虫剂、杀病毒剂、杀微生物剂、杀变形虫剂、杀虫剂、杀真菌剂、杀细菌剂、杀线虫剂、杀软体动物剂或几种这些制剂的混合物，如果需要，与其他农业上可接受的载体、表面活性剂或在配制领域中通常使用的促进施用的助剂一起使用。合适的载体和助剂可以是固体或者液体，并对应于通常用于配制技术的物质，例如天然或者再生的矿物质、溶剂、分散剂、湿润剂、增粘剂、粘合剂或者肥料。同样，可将这些制剂制备成可食用的“诱饵”或塑造成害虫“陷阱”，以允许靶标害虫摄食或摄取该杀虫制剂。
施用本公开的活性成分或本公开的农用化学品组合物的方法包括叶面施用、种子包衣和土壤施用，该农用化学品组合物包含本公开的通过本文所述方法产生的以下CRIP中的一者或多者：A1-A68，以及以下IA中的一者或多者：B1-B479的组合。在一些实施方案中，施用次数和施用速度取决于相应害虫侵扰的强度。
可将组合物配制成粉末、粉剂、小丸剂、颗粒剂、喷雾剂、乳剂、胶体剂、溶液剂等，并且可通过常规方法，例如包含该多肽的细胞培养物的干燥、冻干、均质化、提取、过滤、离心、沉淀或浓缩来制备该组合物。在包含至少一种此类杀虫多肽的所有这些组合物中，该多肽可以约1重量％至约99重量％的浓度存在。
在一些实施方案中，包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68，以及以下IA中的一者或多者：B1-B479的组合的组合物可预防性地施用于环境区域以防止易感害虫(例如，鳞翅目和/或鞘翅目害虫)的侵染，可通过本发明的方法在给定区域杀死这些害虫的或减少其数量。在一些实施方案中，害虫摄取或接触杀虫有效量的多肽。
在一些实施方案中，可通过将细菌、酵母或其他细胞、晶体和/或孢子悬液或分离的蛋白质组分与所需的农业上可接受的载体配制在一起来制备本文所述的杀虫剂组合物。在施用前，可以合适的方法例如冻干、冷冻干燥、干燥，或者在水性载体、介质或合适稀释剂例如盐水和/或其他的缓冲液中配制该组合物。在一些实施方案中，配制的组合物可以为粉尘或颗粒材料的形式，或者在油(植物或矿物油)中的悬浮液的形式，或者水或油/水乳剂的形式，或者作为可湿性粉剂，或者与适合于农业应用的任何其他载体材料相组合。合适的农业载体可以是固体或液体，并且是本领域熟知的。在一些实施方案中，该制剂可与一种或多种固体或液体助剂相混合，并且可通过多种方法来制备，例如通过使用常规配制技术将杀虫组合物与合适的助剂一起均匀地混合、掺合和/或研磨。合适的配制和施用方法描述于美国专利号6,468,523中，其全文以引用方式并入本文。
在一些实施方案中，包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68，以及以下IA中的一者或多者：B1-B479的组合的组合物还可包含另外的成分，例如除草剂、化学杀昆虫剂、杀病毒剂、杀微生物剂、杀变形虫剂、杀虫剂、杀真菌剂、杀细菌剂、杀线虫剂、杀软体动物剂、多肽和/或前述它们的混合物中的一种或多种。
在一些实施方案中，本发明的组合可包括在制剂中，例如，由极性非质子溶剂和/或水组成的制剂，并且/或者其中该极性非质子溶剂以1重量％-99重量％的量存在，该极性质子溶剂以1重量％-99重量％的量存在，并且水以0重量％-98重量％的量存在。当极性非质子溶剂制剂含有MSO时，它们特别有效。MSO是使用大豆油甲酯的甲基化种子油和表面活性剂的混合物，用量为约80％-85％的矿物油与15％-20％的表面活性剂。
在一些实施方案中，本发明的组合包含两种类型的组分，其中第一类型的组分是杀昆虫剂(IA)，并且第二类型的组分是富含半胱氨酸的杀昆虫肽(CRIP)，其中IA和CRIP都不是融合蛋白的一部分；并且其中该组合产生杀昆虫效果；其中IA与CRIP的比率是约10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000。
组合：海葵毒素和杀昆虫剂(IA)
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种来源于海葵的多肽。例如，在一些实施方案中，海葵多肽可分离自：等指海葵；Anemonia erythraea；沟迎风海葵；蛇锁海葵；华丽黄海葵；锈绿侧花海葵；黄海葵；Bunodosoma caissarum；Bunodosoma cangicum；疣状海葵；紫点海葵；Parasicyonis actinostoloides；Radianthus paumotensis；或向日葵大海葵。在其他实施方案中，海葵毒素可以是Av2；Av3；或它们的变体。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和下列海葵毒素中的一者或多者：毒素AETX-1(AETX I)、毒素APETx1、毒素APETx2、抗高血压蛋白质BDS-1(血液抑制物质I)、抗高血压蛋白质BDS-2(血液抑制物质II)、神经毒素Bg-2(Bg II)、神经毒素Bg-3(Bg III)、毒素APE 1-1、毒素APE 1-2、神经毒素-1(毒素ATX-I)、神经毒素-1(神经毒素I)、神经毒素1(毒素RTX-I)、神经毒素1(毒素SHP-I)、毒素APE 2-1、毒素APE 2-2、神经毒素-2(毒素ATX-II)、(aka AV2)神经毒素-2(毒素AFT-II)、神经毒素2(毒素RTX-II)、神经毒素2(神经毒素II)、神经毒素3同源物(神经毒素III同源物)、神经毒素3(毒素RTX-III)、神经毒素3(神经毒素-III)、神经毒素4(毒素RTX-IV)、神经毒素-5(毒素ATX-V)、神经毒素5(毒素RTX-V)、黄海葵强心肽-A(毒素AP-A)、黄海葵强心肽-B(毒素AP-B)、黄海葵强心肽-C(毒素AP-C)、钾通道毒素Aek、钾通道毒素Bgk、主要神经毒素BcIII、神经毒素BcIV、Cangitoxin(CGTX)、钾通道毒素ShK、毒素PCR1(PCR1-2)、毒素PCR2(PCR2-5)、毒素PCR3(PCR2-1)、毒素PCR4(PCR2-10)、毒素PCR6(PCR3-7)、Cangitoxin-2(Cangitoxin II)或Cangitoxin-3(Cangitoxin III)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种海葵多肽，该一种或多种海葵多肽具有SEQ ID NO:371-411所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种来源于海葵(蛇锁海葵)的多肽，该海葵具有多种用于自卫的毒素。源自蛇锁海葵的毒素中的一者是神经毒素“Av3”。Av3是III型海葵毒素，其抑制受体位点3处的电压门控钠(Na+)通道的失活，从而导致收缩麻痹。Av3毒素与位点3的结合导致钠通道的失活状态变得不稳定，这继而又导致通道保持开放位置(参见Blumenthal等人，“Voltage-gated sodium channel toxins:poisons,probes,and future promise”，Cell Biochem Biophys.，2003年，第38卷第2期：第215-238页)。Av3对甲壳动物和昆虫钠通道显示出高选择性，并且对哺乳动物钠通道显示出低选择性(参见Moran等人，“Seaanemone toxins affecting voltage-gated sodium channels-molecular andevolutionary features”，Toxicon，2009年12月15日，第54卷第8期：第1089-1101页)。
提供了来自蛇锁海葵的示例性Av3多肽，该多肽具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列。AVP与杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的比率，基于干重，可选自至少约下列比率：10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000，或这些值中的任何两者的任何组合。组合物中AVP和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的总浓度选自下列百分比浓度：0、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％，或这些值中的任何两者之间的任何范围，并且组合物的剩余百分比由赋形剂组成。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种衍生自海葵Av3的多肽，例如Av3变体多肽(AVP)中的一者或多者可具有自SEQ ID NO:44的下列氨基酸变异：相对于SEQ ID NO:44的N-末端氨基酸取代，将多肽序列从野生型“RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV”变为“RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPK”(SEQ ID NO:45)；C-末端氨基酸可相对于SEQ ID NO:44缺失，将多肽序列从野生型“RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV”改变为“RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPK”(SEQ ID NO:46)；和/或N-末端突变和C-末端突变，其中N-末端氨基酸可具有相对于SEQ ID NO:44的R1K取代，C-末端氨基酸可相对于SEQ ID NO:44缺失，将多肽序列从野生型“RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV”变为“KSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPK”(SEQ ID NO:47)。
AVP与杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的比率，基于干重，可选自至少约下列比率：10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000，或这些值中的任何两者的任何组合。组合物中AVP和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的总浓度选自下列百分比浓度：0、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％，或这些值中的任何两者之间的任何范围，并且组合物的剩余百分比由赋形剂组成。
在一些实施方案中，防治昆虫的方法包括：向昆虫施用AVP；以及向所述昆虫施用杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)。前述施用可同时和/或顺序地并且在相同或单独的组合物中施用。在一些实施方案中，AVP和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可施用于杀昆虫抗性昆虫(例如，Bt抗性昆虫)。AVP与杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的比率，基于干重，可选自至少约下列比率：10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000，或这些值中的任何两者的任何组合。组合物中AVP和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的总浓度选自下列百分比浓度：0、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％，或这些值中的任何两者之间的任何范围，并且组合物的剩余百分比由赋形剂组成。
在一些实施方案中，例示性的Av3肽或其变体描述于2019年9月13日提交的申请人的PCT申请(申请号PCT/US19/51093)，名称为“Av3 Mutant Insecticidal Polypeptidesand Methods for Producing and Using Same”，该申请的公开内容和Av3肽或其变体的公开内容描述于本文并且全文以引用方式并入本文。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)，并且一种或多种海葵肽具有与SEQ ID NO:44-47和371-411所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
组合：蜘蛛毒素和杀昆虫剂(IA)
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种衍生自、分离自和/或源自蜘蛛的多肽。
在一些实施方案中，蜘蛛毒素可分离自下列物种中的一种或多种物种：巴西流浪蜘蛛；华丽异漏蛛；Cupiennius salei；暗色距蛛；马来西亚毛蛛；虎纹捕鸟蛛；Agelenaorientalis；华丽异漏蛛；弗罗伦蒂娜蜘蛛；Apomastus schlingeri；Phoneutriakeyserlingi；巨型上户蜘蛛；雷氏大疣蛛；Missulena bradleyi；阴暗拟隙蛛；Phoneutriareidyi；Illawara wisharti；Eucratoscelus constrictus；Agelenopsis aperta；Hololena curta；Oxyopes lineatus；墨西哥金背红尾；或墨西哥红膝蜘蛛。
在一些实施方案中，蜘蛛毒素可分离自澳大利亚漏斗网蜘蛛(Hadronycheversuta)(也称为蓝山漏斗网蜘蛛)、Hadronyche venenata、悉尼漏斗网蜘蛛(Atraxrobustus)、Atrax formidabilis或Atrax infensus。
在一些实施方案中，杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可与下列蜘蛛毒素中的一者或多者组合：U13-ctenitoxin-Pn1a、U13-ctenitoxin-Pn1b、U13-ctenitoxin-Pn1c、U1-漏斗网蛛毒素-Aop1a、U1-ctenitoxin-Cs1a、U1-nemetoxin-Csp1a、U1-nemetoxin-Csp1b、U1-nemetoxin-Csp1c、U1-plectoxin-Pt1a、U1-plectoxin-Pt1b、U1-plectoxin-Pt1c、U1-plectoxin-Pt1d、U1-plectoxin-Pt1f、U1-theraphotoxin-Cv1a、U1-theraphotoxin-Hh1a_1、U1-theraphotoxin-Hh1a_2、U1-theraphotoxin-Hh1a_3、U1-theraphotoxin-Hh1b、U1-theraphotoxin-Hh1c_1、U1-theraphotoxin-Hh1c_2、U1-theraphotoxin-Hh1d、U1-theraphotoxin-Hh1e、U1-theraphotoxin-Hh1f_1、U1-theraphotoxin-Hh1f_2、U1-theraphotoxin-Hh1f_3、U1-theraphotoxin-Hh1f_4、U1-theraphotoxin-Hh1g、U2-漏斗网蛛毒素-Ao1a、U2-漏斗网蛛毒素-Aop1a、U2-ctenitoxin-Cs1a、U2-ctenitoxin-Pn1a、U2-cyrtautoxin-As1a、U2-segestritoxin-Sf1a、U2-segestritoxin-Sf1b、U2-segestritoxin-Sf1c、U2-segestritoxin-Sf1d、U2-segestritoxin-Sf1e、U2-segestritoxin-Sf1f、U2-segestritoxin-Sf1g、U2-segestritoxin-Sf1h、U2-theraphotoxin-Hh1a、U3-cyrtautoxin-As1a、U3-plectoxin-Pt1a、U5-ctenitoxin-Pn1a、U7-ctenitoxin-Pk1a、β-hexatoxin-Mg1a、β-hexatoxin-Mr1a、Γ-ctenitoxin-Pn1a、δ-actinopoditoxin-Mb1a、δ-Amaurobitoxin-Pl1a、δ-Amaurobitoxin-Pl1b、δ-Amaurobitoxin-Pl1c、δ-Amaurobitoxin-Pl1d、δ-ctenitoxin-Asp2e、δ-ctenitoxin-Pn1a_1、δ-ctenitoxin-Pn1a_2、δ-ctenitoxin-Pn1b、δ-ctenitoxin-Pn2a、δ-ctenitoxin-Pn2b、δ-ctenitoxin-Pn2c、δ-ctenitoxin-Pr2d、δ-hexatoxin-Ar1a、δ-hexatoxin-Hv1a、δ-hexatoxin-Hv1b、δ-hexatoxin-Iw1a、δ-hexatoxin-Mg1a、δ-hexatoxin-Mg1b、κ-hexatoxin-Hf1a、κ-hexatoxin-Hv1a、κ-hexatoxin-Hv1b、κ-hexatoxin-Hv1c_1、κ-hexatoxin-Hv1c_2、κ-hexatoxin-Hv1c_3、κ-hexatoxin-Hv1c_4、κ-hexatoxin-Hv1d、κ-hexatoxin-Hv1e、κ-theraphotoxin-Ec2a、κ-theraphotoxin-Ec2b、μ-漏斗网蛛毒素-Aa1a、μ-漏斗网蛛毒素-Aa1b、μ-漏斗网蛛毒素-Aa1c、μ-漏斗网蛛毒素-Aa1d、μ-漏斗网蛛毒素-Aa1e、μ-漏斗网蛛毒素-Aa1f、μ-漏斗网蛛毒素-Hc1a、μ-漏斗网蛛毒素-Hc1b、μ-漏斗网蛛毒素-Hc1c、μ-hexatoxin-Mg1a、μ-hexatoxin-Mg1b、μ-hexatoxin-Mg1c、μ-hexatoxin-Mg2a、μ-theraphotoxin-Hh1a、ω-actinopoditoxin-Mb1a、ω-漏斗网蛛毒素-Aa4a、ω-漏斗网蛛毒素-Aa4b、ω-漏斗网蛛毒素-Aa4c、ω-hexatoxin-Ar1a_1、ω-hexatoxin-Ar1a_3、ω-hexatoxin-Ar1b_1、ω-hexatoxin-Ar1d_1、ω-hexatoxin-Ar1d_4、,ω-hexatoxin-Ar1e_1、ω-hexatoxin-Ar1f、ω-hexatoxin-Ar1g_1、ω-hexatoxin-Ar1h、ω-hexatoxin-Ar2a、ω-hexatoxin-Ar2b、ω-hexatoxin-Ar2c、ω-hexatoxin-Ar2d、ω-hexatoxin-Ar2e_1、ω-hexatoxin-Ar2e_2、ω-atracotoxin-Asp2a、ω-hexatoxin-Asp2b、ω-hexatoxin-Hf1a、ω-hexatoxin-Hi1a_1、ω-hexatoxin-Hi1a_2、ω-hexatoxin-Hi1a_3、ω-hexatoxin-Hi1b_1、ω-hexatoxin-Hi1b_10、ω-hexatoxin-Hi1b_2、ω-hexatoxin-Hi1b_5、ω-hexatoxin-Hi1b_8、ω-hexatoxin-Hi1c_1、ω-hexatoxin-Hi1c_2、ω-hexatoxin-Hv1a、ω-hexatoxin-Hv1b、ω-hexatoxin-Hv1c、ω-hexatoxin-Hv1d、ω-hexatoxin-Hv1e、ω-hexatoxin-Hv1f、ω-hexatoxin-Hv1g_1、ω-hexatoxin-Hv1g_5、ω-hexatoxin-Hv1g_6、ω-hexatoxin-Hv2a、ω-hexatoxin-Hv2b_1、ω-hexatoxin-Hv2b_2、ω-hexatoxin-Hv2b_3、ω-hexatoxin-Hv2b_4、ω-hexatoxin-Hv2b_5、ω-hexatoxin-Hv2b_6、ω-hexatoxin-Hv2b_7、ω-hexatoxin-Hv2c、ω-hexatoxin-Hv2d_1、ω-hexatoxin-Hv2d_2、ω-hexatoxin-Hv2d_3、ω-hexatoxin-Hv2e、ω-hexatoxin-Hv2f、ω-hexatoxin-Hv2g、ω-hexatoxin-Hv2h_1、ω-hexatoxin-Hv2h_2、ω-hexatoxin-Hv2i、ω-hexatoxin-Hv2j_1、ω-hexatoxin-Hv2j_2、ω-hexatoxin-Hv2k、ω-hexatoxin-Hv2l、ω-hexatoxin-Hv2m_1、ω-hexatoxin-Hv2m_2、ω-hexatoxin-Hv2m_3、ω-hexatoxin-Hv2n、ω-hexatoxin-Hv2o、ω-hexatoxin-Hvn1a、ω-hexatoxin-Hvn1b_1、ω-hexatoxin-Hvn1b_2、ω-hexatoxin-Hvn1b_3、ω-hexatoxin-Hvn1b_4、ω-hexatoxin-Hvn1b_6、ω-hexatoxin-Iw2a、ω-oxotoxin-Ol1b、ω-plectoxin-Pt1a、ω-theraphotoxin-Asp1a、ω-theraphotoxin-Asp1f、ω-theraphotoxin-Asp1g、ω-theraphotoxin-Ba1a、ω-theraphotoxin-Ba1b、ω-theraphotoxin-Bs1a、ω-theraphotoxin-Bs2a或ω-theraphotoxin-Hh2a。
在一些实施方案中，杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可与一种或多种蜘蛛毒素组合，该一种或多种蜘蛛毒素具有SEQ ID NO:192-278和281-370所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可与一种或多种ACTX肽组合。
在一些实施方案中，杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可与下列ACTX肽中的一者或多者组合：U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、rκ-ACTX-Hv1c、ω-ACTX-Hv1a和/或ω-ACTX-Hv1a+2。
示例性ACTX肽包括：U-ACTX-Hv1a，其具有氨基酸序列“QYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA”(SEQ ID NO:60)；U+2-ACTX-Hv1a，其具有氨基酸序列“GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA”(SEQ ID NO:61)；Omega-ACTX-Hv1a，其具有氨基酸序列“SPTCIPSGQPCPYNENCCSQSCTFKENENGNTVKRCD”(SEQ ID NO:62)；Omega-hexatoxin-Ar1d，具有氨基酸序列“GSSPTCIPSGQPCPYNENCCSQSCTFKENENGNTVKRCD”(SEQ ID NO:63)；和Kappa-hexatoxin-Hv1c，具有氨基酸序列“GSAICTGADRPCAACCPCCPGTSCKAESNGVSYCRKDEP”(SEQ IDNO:64)。
在一些实施方案中，杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B7、B9-B40和B42-B479)可与上述示例性ACTX肽中的一种或多种组合。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种U-ACTX肽、Omega-ACTX肽和/或Kappa-ACTX肽。ACTX肽与杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B7、B9-B40和B42-B479)的比率，基于干重，可选自至少约下列比率：10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000，或这些值中的任何两者的任何组合。组合物中ACTX和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的总浓度选自下列百分比浓度：0、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％，或这些值中的任何两者之间的任何范围，并且组合物的剩余百分比由赋形剂组成。
在一些实施方案中，防治昆虫的方法包括：向昆虫施用ACTX肽；以及向所述昆虫施用杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)。前述施用可同时和/或顺序地并且在相同或单独的组合物中施用。在一些实施方案中，ACTX肽和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可施用于杀昆虫抗性昆虫(例如，Bt抗性昆虫)。ACTX肽与杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的比率，基于干重，可选自至少约下列比率：10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000，或这些值中的任何两者的任何组合。组合物中ACTX肽和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的总浓度选自下列百分比浓度：0、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％，或这些值中的任何两者之间的任何范围，并且组合物的剩余百分比由赋形剂组成。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种蜘蛛毒素，该一种或多种蜘蛛毒素具有与SEQ ID NO:192-278和281-370所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B7、B9-B40和B42-B479)和一种或多种ACTX肽，该一种或多种ACTX肽具有与SEQ ID NO:60-64和594所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
Γ-CNTX-Pn1a和杀昆虫剂(IA)
在一些优选的实施方案中，杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可与一种或多种Γ-CNTX-Pn1a或γ-CNTX-Pn1a毒素组合。Γ-CNTX-Pn1a肽是源自巴西武装蜘蛛(巴西流浪蜘蛛)的杀昆虫神经毒素。Γ-CNTX-Pn1a靶向离子型谷氨酸受体(GRIN)的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)亚型和钠通道。示例性的Γ-CNTX-Pn1a肽具有MKVAIVFLSLLVLAFASESIEENREEFPVEESARCADINGACKSDCDCCGDSVTCDCYWSDSCKCRESNFKIGMAIRKKFC(SEQ ID NO:65)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，防治昆虫的方法包括：向昆虫施用Γ-CNTX-Pn1a；以及向所述昆虫施用IA。前述施用可同时和/或顺序地并且在相同或单独的组合物中施用。在一些实施方案中，Γ-CNTX-Pn1a和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可施用于(Γ-CNTX-Pn1a)-抗性昆虫。在一些实施方案中，Γ-CNTX-Pn1a和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可施用于(Bt毒素)-抗性昆虫。基于干重，Γ-CNTX-Pn1a与IA的比率可选自至少约下列比率：10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000，或这些值中的任何两者的任何组合。组合物中Γ-CNTX-Pn1a和TVP的总浓度选自下列百分比浓度：0、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％，或这些值中的任何两者之间的任何范围，并且组合物的剩余百分比由赋形剂组成。
在一些实施方案中，组合或组合物包含Γ-CNTX-Pn1a和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)两者。组合或组合物可采用Γ-CNTX-Pn1a与杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的比率，基于干重，该比率为约任何或所有下列比率：10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000，或这些值中的任何两者的任何组合。在一些实施方案中，组合物可具有Γ-CNTX-Pn1a与杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的比率，基于干重，该比率选自约下列比率：0:50、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、0.5:99.5、0.1:99.9和0.01:99.99，或这些值中的任何两者的任何组合。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种Γ-CNTX-Pn1a肽，该一种或多种Γ-CNTX-Pn1a肽具有与SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
野生型U1-漏斗网蛛毒素、TVP和杀昆虫剂(IA)
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种TVP，该一种或多种TVP包含与根据式(I)的氨基酸序列具有至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中该多肽包含相对于如SEQ IDNO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列的至少一个氨基酸取代，并且其中X1为A、S或N；X2为R、Q或N；X3为T或P；X4为K或A；X5为R或A；Z1为T或A；X6为K或不存在；并且X7为G或不存在。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种TVP，该一种或多种TVP包含与根据式(I)的氨基酸序列具有至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中该多肽包含相对于如SEQ IDNO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列的至少一个氨基酸取代，并且其中X1为A、S或N；X2为R、Q或N；X3为T或P；X4为K或A；X5为R或A；Z1为T或A；X6为K或不存在；并且X7为G或不存在；并且其中TVP在X1、X2、X3、X4或X5处具有一个氨基酸取代。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种TVP，该一种或多种TVP包含与根据式(I)的氨基酸序列具有至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中该多肽包含相对于如SEQ IDNO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列的至少一个氨基酸取代，并且其中X1为A、S或N；X2为R、Q或N；X3为T或P；X4为K或A；X5为R或A；Z1为T或A；X6为K或不存在；并且X7为G或不存在；并且其中TVP在X1、X2、X3、X4或X5处具有一个氨基酸取代；并且其中X7为甘氨酸。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种TVP，该一种或多种TVP包含与根据式(I)的氨基酸序列具有至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中该多肽包含相对于如SEQ IDNO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列的至少一个氨基酸取代，并且其中X1为A、S或N；X2为R、Q或N；X3为T或P；X4为K或A；X5为R或A；Z1为T或A；X6为K或不存在；并且X7为G或不存在；并且其中TVP在X1、X2、X3、X4或X5处具有一个氨基酸取代；并且其中X7不存在。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种TVP，该一种或多种TVP包含与根据式(I)的氨基酸序列具有至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中该多肽包含相对于如SEQ IDNO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列的至少一个氨基酸取代，并且其中X1为A、S或N；X2为R、Q或N；X3为T或P；X4为K或A；X5为R或A；Z1为T或A；X6为K或不存在；并且X7为G或不存在；并且其中TVP在X1、X2、X3、X4或X5处具有一个氨基酸取代；并且其中X6和X7不存在。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种TVP，该一种或多种TVP包含与根据式(I)的氨基酸序列具有至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中该多肽包含相对于如SEQ IDNO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列的至少一个氨基酸取代，并且其中X1为A、S或N；X2为R、Q或N；X3为T或P；X4为K或A；X5为R或A；Z1为T或A；X6为K或不存在；并且X7为G或不存在；并且其中TVP包含SEQ ID NO 2至15或49至53中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种TVP，该一种或多种TVP包含与根据式(I)的氨基酸序列具有至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中该多肽包含相对于如SEQ IDNO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列的至少一个氨基酸取代，并且其中X1为A、S或N；X2为R、Q或N；X3为T或P；X4为K或A；X5为R或A；Z1为T或A；X6为K或不存在；并且X7为G或不存在；并且其中TVP由SEQ ID NO 17至30或54至58中任一项所示的多核苷酸序列或其互补核苷酸序列编码。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种TVP，该一种或多种TVP包含与根据式(I)的氨基酸序列具有至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中该多肽包含相对于如SEQ IDNO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列的至少一个氨基酸取代，并且其中X1为A、S或N；X2为R、Q或N；X3为T或P；X4为K或A；X5为R或A；Z1为T或A；X6为K或不存在；并且X7为G或不存在；并且其中TVP还包含两种或更多种TVP的均聚物或杂聚物，其中每种TVP的氨基酸序列相同或不同。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种TVP，该一种或多种TVP包含与根据式(I)的氨基酸序列具有至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中该多肽包含相对于如SEQ IDNO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列的至少一个氨基酸取代，并且其中X1为A、S或N；X2为R、Q或N；X3为T或P；X4为K或A；X5为R或A；Z1为T或A；X6为K或不存在；并且X7为G或不存在；并且其中TVP是包含两种或更多种TVP的融合蛋白，该两种或更多种TVP由可切割的或不可切割的接头分开，并且其中每种TVP的氨基酸序列可相同或不同。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种TVP，该一种或多种TVP包含与根据式(I)的氨基酸序列具有至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中该多肽包含相对于如SEQ IDNO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列的至少一个氨基酸取代，并且其中X1为A、S或N；X2为R、Q或N；X3为T或P；X4为K或A；X5为R或A；Z1为T或A；X6为K或不存在；并且X7为G或不存在；并且其中TVP是包含由可切割的或不可切割的接头分开的两种或更多种TVP的融合蛋白，并且其中每种TVP的氨基酸序列可相同或不同，并且其中该接头在昆虫的肠或血淋巴内是可切割的。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种TVP，该一种或多种TVP包含与根据式(I)的氨基酸序列具有至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中该多肽包含相对于如SEQ IDNO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列的至少一个氨基酸取代，并且其中X1为A、S或N；X2为R、Q或N；X3为T或P；X4为K或A；X5为R或A；Z1为T或A；X6为K或不存在；并且X7为G或不存在；并且其中如果Z1为T，则TVP为糖基化的。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种TVP，该一种或多种TVP具有与SEQ ID NO:2-15、49-53、2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651或653-654所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种野生型U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，该一种或多种野生型U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽具有与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
组合：蝎毒素和杀昆虫剂(IA)
在一些实施方案中，杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可与一种或多种分离自蝎子的毒素组合。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种选自下列毒素的蝎毒素：Imperatoxin-A(IpTxa)、钾通道毒素α-KTx 10.2(Cobatoxin-2)、钾通道毒素α-KTx 11.1(Parabutoxin-1)、钾通道毒素α-KTx 11.2(Parabutoxin-2)、钾通道毒素α-KTx 11.3(Parabutoxin-10)、钾通道毒素α-KTx 12.1(Butantoxin)、钾通道毒素α-KTx 12.2(Butantoxin)、钾通道毒素α-KTx 12.3(Butantoxin样肽)、钾通道毒素α-KTx 15.1(肽Aa1)、钾通道毒素α-KTx 15.3(毒素AmmTX3)、钾通道毒素α-KTx 15.6(Discrepin)、钾通道毒素α-KTx 16.1(Tamulotoxin)、钾通道毒素α-KTx 19.1(神经毒素BmBKTx1)、钾通道毒素α-KTx 1.3(非洲蝎毒)、钾通道毒素α-KTx 1.4(Limbatotoxin)、钾通道毒素α-KTx 1.7(Lqh 15-1)、钾通道毒素α-KTx 1.9(Hongotoxin-2)、钾通道毒素α-KTx 1.10(Parabutoxin-3)、钾通道毒素α-KTx 1.11(Slotoxin)、钾通道毒素α-KTx 1.13(卡律(布德)蝎毒素c)、钾通道毒素α-KTx 2.1(Noxiustoxin)、钾通道毒素α-KTx 2.2(玛格毒素)、钾通道毒素α-KTx 2.3(CllTx1)、钾通道毒素α-KTx 2.4(Noxiustoxin-2)、钾通道毒素α-KTx 2.5(Hongotoxin-1)、钾通道毒素α-KTx 2.6(Hongotoxin-3)、钾通道毒素α-KTx 2.7(CllTx2)、钾通道毒素α-KTx 2.8(毒素Ce1)、钾通道毒素α-KTx 2.9(毒素Ce2)、钾通道毒素α-KTx 2.10(毒素Ce3)、钾通道毒素α-KTx2.11(毒素Ce4)、钾通道毒素α-KTx 2.12(毒素Ce5)、钾通道毒素α-KTx 3.1(短肤蝎毒素-1)、钾通道毒素α-KTx 3.2(Agitoxin-2)、钾通道毒素α-KTx 3.3(Agitoxin-3)、钾通道毒素α-KTx 3.4(Agitoxin-1)、钾通道毒素α-KTx 3.7(OsK-1)、钾通道毒素α-KTx 3.8(卡律(布德)蝎毒素样肽Bs 6)、钾通道毒素α-KTx 3.9(短肤蝎毒素-3)、钾通道毒素α-KTx 4.1(东亚钳蝎毒K-α)、钾通道毒素α-KTx 4.3(毒素TdK1)、钾通道毒素α-KTx 4.4(毒素Tc30)、钾通道毒素α-KTx 5.1(Leiurotoxin-1)、钾通道毒素α-KTx 5.2(Leiurotoxin I样毒素P05)、钾通道毒素α-KTx 5.4(Tamapin)、钾通道毒素α-KTx 5.5(Tamapin-2)、钾通道毒素α-KTx 6.1(钾通道阻滞毒素1)、钾通道毒素α-KTx 6.2(Maurotoxin)、钾通道毒素α-KTx 6.3(神经毒素HsTX1)、钾通道毒素α-KTx 6.12(Anuroctoxin)、钾通道毒素α-KTx 6.13(Spinoxin)、钾通道毒素α-KTx6.14(HgeTx1)、钾通道毒素α-KTx 7.2(毒素PiTX-K-β)、钾通道毒素γ-KTx 1.2(Ergtoxin样蛋白质1)、钾通道毒素γ-KTx 1.3(Ergtoxin样蛋白质1)、钾通道毒素γ-KTx 1.4(Ergtoxin样蛋白质1)、钾通道毒素γ-KTx 1.5(Ergtoxin样蛋白质1)、钾通道毒素γ-KTx 1.6(Ergtoxin样蛋白质1)、钾通道毒素γ-KTx 4.2(Ergtoxin样蛋白质5)、Insectotoxin-I1。小毒素(肽I)、Insectotoxin-I3(BeI3)、Insectotoxin-I4(BeI4)、Insectotoxin-I5A、神经毒素8(神经毒素VIII)、可能毒素Lqh 8/6、神经毒素9(神经毒素IX)、Maurocalcin(MCa)、氯毒素样肽Bs 14(Bs14)、氯毒素(CTX)、神经毒素P2、Insectotoxin-I5(BeI5)、钾通道毒素α-KTx 6.15(半毒素)、毒素GaTx1、AahIT1、Phaiodotoxin、BaIT2、BotIT1、BotIT2、BmK M1、BmK-M2、BmK-M4、BmK-M7、BmK IT-AP、Bom3、Bom4、BjaIT、Bj-xtrIT、BjIT2、LqhaIT、Lqhb1、LqhIT2、LqhdprIT3a、Lgh-xtrIT、Lqh3、Lqh6、Lqh7、LqqIT1、LqqIT2、Lqq3、OD1、Ts1、Tz1或它们的组合。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种蝎毒素，其中该蝎毒素具有SEQ ID NO：88-191所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种蝎毒素，其中该毒素可为欧前胡素。Imperatoxin是源自非洲蝎(帝王蝎)的毒液中的肽毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种欧前胡素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种欧前胡素，其中该欧前胡素是欧前胡素A(IpTx-a)或其变体。在一些实施方案中，IpTx-a具有GDCLPHLKRCKADNDCCGKKCKRRGTNAEKRCR(SEQ ID NO:66)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，防治昆虫的方法包括：向昆虫施用IpTx-a；以及向所述昆虫施用杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)。前述施用可同时和/或顺序地并且在相同或单独的组合物中施用。在一些实施方案中，IpTx-a和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可施用于(IpTx-a)-抗性昆虫。在一些实施方案中，IpTx-a和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可施用于(Bt毒素)-抗性昆虫。基于干重，IpTx-a与IA的比率可选自至少约下列比率：10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000，或这些值中的任何两者的任何组合。组合物中IpTx-a和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的总浓度选自下列百分比浓度：0、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％，或这些值中的任何两者之间的任何范围，并且组合物的剩余百分比由赋形剂组成。
在一些实施方案中，组合或组合物包含IpTx-a和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)两者。组合或组合物可采用IpTx-a与杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的比率，基于干重，该比率为约任何或所有下列比率：10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000，或这些值中的任何两者的任何组合。在一些实施方案中，组合或组合物可具有IpTx-a与杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的比率，基于干重，该比率选自约下列比率：0:50、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、0.5:99.5、0.1:99.9和0.01:99.99，或这些值中的任何两者的任何组合。
在一些实施方案中，杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可与一种或多种AaIT1毒素组合。蛋白质毒素AalT1是来自北非沙漠蝎(黄肥尾蝎)的钠通道位点4毒素。示例性AaIT1毒素是具有根据SEQ ID NO:88的氨基酸序列的肽(NCBI登录号P01497.2)。AaIT1是位点4毒素，其通过降低激活反应能量屏障来迫使昆虫钠通道打开。
在一些实施方案中，防治昆虫的方法包括：向昆虫施用AaIT1；以及向所述昆虫施用杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)。前述施用可同时和/或顺序地并且在相同或单独的组合物中施用。在一些实施方案中，AaIT1和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可施用于(AaIT1)-抗性昆虫。在一些实施方案中，AaIT1和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可施用于(Bt毒素)-抗性昆虫。AaIT1与杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的比率，基于干重，可选自至少约下列比率：10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000，或这些值中的任何两者的任何组合。组合物中AaIT1和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的总浓度选自下列百分比浓度：0、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％，或这些值中的任何两者之间的任何范围，并且组合物的剩余百分比由赋形剂组成。
在一些实施方案中，组合或组合物包含杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)和一种或多种蝎肽或蝎毒素，该一种或多种蝎肽或蝎毒素具有与SEQID NO:66、88-191所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
组合：芋螺毒素和杀昆虫剂(IA)
芋螺毒素是从鸡心螺中分离的毒素；这些毒素通过干扰神经元通讯而起作用。芋螺毒素的示例包括α-、ω-、μ-、δ-和κ-芋螺毒素。简而言之，α-芋螺毒素(和αA-芋螺毒素和φ-芋螺毒素)靶向烟碱配体门控通道；ω-芋螺毒素靶向电压门控钙通道；μ-芋螺毒素靶向电压门控钠通道；δ-芋螺毒素靶向电压门控钠通道；并且κ-芋螺毒素靶向电压门控钾通道。
在一些实施方案中，杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可与从属于芋螺属的生物体分离的一种或多种肽组合。
在一些实施方案中，杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可与从属于芋螺属的生物体分离的一种或多种肽组合，其中该分离的肽为芋螺毒素。
在一些实施方案中，杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可与一种或多种肽组合，该一种或多种肽分离自阿玛迪芋螺；猫芋螺；乌龟芋螺；杀手芋螺；海之荣光芋螺；木下芋螺；僧袍芋螺；大理石芋螺；紫金芋螺；飞蝇芋螺；细线芋螺；织锦芋螺；或郁金香芋螺。
在一些实施方案中，杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可与一种或多种α-芋螺毒素、αA-芋螺毒素、φ-芋螺毒素、ω-芋螺毒素、μ-芋螺毒素、δ-芋螺毒素或κ-芋螺毒素组合。
在一些实施方案中，防治昆虫的方法包括：向昆虫施用芋螺毒素；以及向所述昆虫施用杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)。前述施用可同时和/或顺序地并且在相同或单独的组合物中施用。在一些实施方案中，芋螺毒素和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可施用于(芋螺毒素)-抗性昆虫。在一些实施方案中，芋螺毒素和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可施用于(Bt毒素)-抗性昆虫。芋螺毒素与杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的比率，基于干重，可选自至少约下列比率：10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000，或这些值中的任何两者的任何组合。组合物中芋螺毒素和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的总浓度选自下列百分比浓度：0、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％，或这些值中的任何两者之间的任何范围，并且组合物的剩余百分比由赋形剂组成。
在一些实施方案中，组合或组合物包含芋螺毒素和杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)两者。组合或组合物可采用芋螺毒素与杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的比率，基于干重，该比率为约任何或所有下列比率：10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000，或这些值中的任何两者的任何组合。在一些实施方案中，组合或组合物可具有芋螺毒素与杀昆虫剂(IA)(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的比率，基于干重，该比率选自约下列比率：0:50、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、0.5:99.5、0.1:99.9和0.01:99.99，或这些值中的任何两者的任何组合。
组合：真菌/真菌毒素和CRIP
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是昆虫病原真菌。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是由昆虫病原真菌产生的肽、蛋白质或毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是子囊菌真菌毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是虫草科真菌毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是刺束梗孢属毒素、多孔囊菌属毒素；白僵菌属毒素；Beejasamuha毒素；冬虫夏草毒素；Coremiopsis毒素；侧齿霉属毒素；球束梗孢属毒素；厚盖霉属毒素；Insecticola毒素；棒束孢属毒素；蜡蚧菌属毒素；Microhilum毒素；Phytocordyceps毒素；拟球束梗孢属毒素；Rotiferophthora毒素；拟青霉属毒素；或虫壳属毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是真菌生物体或来自其的毒素，该真菌生物体选自下列属：白僵菌属；绿僵菌属；拟青霉属；蜡蚧菌属；野村菌属；棒束孢属；被毛孢属；Sorosporella；曲霉属；Cordiceps；虫霉属；虫瘟霉属；帮斗蛤属；噬虫霉属；耳霉属和蛙粪霉属。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是白僵菌属毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是下列毒素之一：白色白僵菌毒素；多形白僵菌毒素；Beauveria arenaria毒素；Beauveria asiatica毒素；Beauveria australis毒素；球孢白僵菌毒素；球孢虫草毒素；布朗尼氏白僵菌毒素；Beauveria brumptii毒素；苏格兰白僵菌毒素；凯罗门白僵菌毒素；Beauveria coccorum毒素；Beauveria cretacea毒素；柱孢白僵菌毒素；Beauveria delacroixii毒素；致密白僵菌毒素；Beauveria dependens毒素；Beauveria doryphorae毒素；Beauveria effusa毒素；Beauveria epigaea毒素；猫棒束孢白僵菌毒素；Beauveria geodes毒素；小球孢白僵菌毒素；Beauveria heimii毒素；Beauveria hoplocheli毒素；Beauveria kipukae毒素；Beauveria laxa毒素；Beauveria malawiensis毒素；Beauveria medogensis毒素；Beauveria melolonthae毒素；Beauveria nubicola毒素；稻米白僵菌毒素；Beauveriaparadoxa毒素；Beauveria paranensis毒素；Beauveria parasitica毒素；Beauveriapetelotii毒素；假球孢白僵菌毒素；Beauveria rileyi毒素；Beauveria rubra毒素；Beauveria shiotae毒素；Beauveria sobolifera毒素；Beauveria spicata毒素；Beauveria stephanoderis毒素；Beauveria sulfurescens毒素；Beauveria sungii毒素；纤细白僵菌毒素；Beauveriatundrensis毒素；粘孢白僵菌毒素；伊拉克白僵菌毒素；蠕孢白僵菌毒素；Beauveria vexans毒素；Beauveria viannai毒素；或Beauveria virella毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是球孢白僵菌毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是白僵菌素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是具有化学式C45H57N3O9的白僵菌素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是具有化学式C46H59N3O9的“白僵菌素A”毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是具有化学式C47H61N3O9的“白僵菌素B”毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是球孢白僵菌菌株ANT-03孢子。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种杀昆虫剂(IA)，其中IA是子囊菌真菌毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是虫草科真菌毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是刺束梗孢属毒素、多孔囊菌属毒素；白僵菌属毒素；Beejasamuha毒素；冬虫夏草毒素；Coremiopsis毒素；侧齿霉属毒素；球束梗孢属毒素；厚盖霉属毒素；Insecticola毒素；棒束孢属毒素；蜡蚧菌属毒素；Microhilum毒素；Phytocordyceps毒素；拟球束梗孢属毒素；Rotiferophthora毒素；拟青霉属毒素；或虫壳属毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是白僵菌毒素。
组合：凝集素和CRIP
在一些实施方案中，本发明的组合可包含一种或多种IA和一种或多种CRIP，其中IA既不与CRIP融合也不与CRIP有效连接，并且其中IA是雪滴花凝集素(GNA)。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是凝集素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是凝集素，其中所述凝集素既不与CRIP融合也不与CRIP有效连接。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是下列凝集素之一：雪滴花凝集素(GNA)；西洋接骨木凝集素(SNA)；朝鲜槐-II(MAL-II)；鸡冠刺桐凝集素(ECL)；蓖麻凝集素-I(RCA)；花生凝集素(PNA)；麦胚凝集素(WGA)；单叶加纳籽-II(GSL-II)；Con A；小扁豆凝集素(LCA)；甘露糖结合凝集素(MBL)；BanLec；半乳凝集素；菜豆白细胞凝集素(PHA-L)；菜豆红细胞凝集素(PHA-E)；和/或曼陀罗凝集素(DSL)。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是凝集素，该凝集素具有选自SEQ ID NO:35、595-615的氨基酸序列或其变体。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是下列凝集素之一：雪滴花凝集素(GNA)(SEQ IDNO:35)；西洋接骨木(欧洲接骨木)凝集素(SNA)(SEQ ID NO:596)；来自朝鲜槐(MAL)种子的白细胞凝集素(SEQ ID NO:597)；鸡冠刺桐凝集素(ECL)(SEQID NO:598)；蓖麻凝集素-I(RCA)(SEQ ID NO:599)；花生凝集素(PNA)(SEQ ID NO:600)；凝集素同工凝集素1(WGA1)(SEQ ID NO:601)；伴刀豆球蛋白A(CNA)前体(SEQ ID NO:602)；Jacalin样凝集素(链A)(SEQ ID NO:603)；凝集素α-1链(SEQ ID NO:604)；凝集素CaBo(SEQID NO:605)；凝集素ConGF(SEQ ID NO:606)；甘露糖特异性凝集素α链(SEQ ID NO:607)；β-半乳糖苷-特异性凝集素1(SEQ ID NO:608)；半乳凝集素-3(SEQ ID NO:609)；甘露糖/葡萄糖特异性凝集素Cramoll(SEQ ID NO:610)；β-半乳糖苷-特异性凝集素3(SEQ ID NO:611)；乳糖结合凝集素-2(SEQ ID NO:612)；半乳凝集素-1(SEQ ID NO:613)；α-N-乙酰半乳糖胺特异性凝集素(SEQ ID NO:614)；Favin(SEQ ID NO:615)；或它们的组合。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA可包含与SEQ IDNO:35、595-615中任一项所示的氨基酸序列具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
组合：几丁质酶和CRIP
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是几丁质酶。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是来自绿色木霉的几丁质酶。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是具有SEQ ID NO:620所示的氨基酸序列的几丁质酶。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA可以是包含与SEQID NO:620所示的氨基酸序列具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列的几丁质酶。
组合：印楝化合物和CRIP
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是印楝化合物。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是印楝素；印苦楝二酮；Azadiradionolide；脱乙酰葛杜宁；印楝素B；Desfuranoazadiradione；环氧楝树二酮；葛杜宁；Mahmoodin；Neemfruitin A；Neemfruitin B；印苦楝内酯；印楝宾；Nimolicinol；Ohchinin Acetate；印楝沙兰林；Salannol；alpha-Nimolactone；beta-Nimolactone；2',3'-二氢印楝沙兰林；3-脱乙酰基印楝沙兰林；6-脱乙酰基印楝素；7-Acetyl-16,17-dehydro-16-hydroxyneotrichilenone；7-Benzoylnimbocinol；7-脱乙酰基-7-苯甲酰基环氧楝树二酮；7-脱乙酰基-7-苯甲酰基葛杜宁；7-Deacetyl-17-epinimolicinol；15-羟基印苦楝二酮；17-表-17-羟基印苦楝二酮；17-表印苦楝二酮；20,21,22,23-四氢-23-氧代印苦楝二酮；22,23-Dihydronimocinol；或28-去氧代印苦楝内酯。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是印楝素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是具有以下化学式的印楝素：C35H44O16。
组合：硼化合物和CRIP
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是硼化合物。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是硼酸、四羟基二硼、硼酸盐、氧化硼、硼烷或它们的组合。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是在水性介质中产生硼氧化物的硼烷和/或硼酸酯。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是硼酸、硼酸盐(例如，碱性硼酸钠(硼砂))或硼酸和硼酸盐的组合。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是硼酸盐。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是下列物质之一：过硼酸盐、偏硼酸盐、四硼酸盐、八硼酸盐、硼酸酯、金属硼酸盐(例如，硼酸钠、硼酸锌和硼酸钾)、十水合四硼酸二钠、四水合八硼酸二钠、偏硼酸钠、一水合过硼酸钠、八硼酸二钠、五水合四硼酸钠、四硼酸钠、偏硼酸铜、硼酸锌、偏硼酸钡或它们的任何组合。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是硼砂(例如，十水合硼酸钠-10mol Na2B4O7.10H2O或五水合硼酸钠-5mol Na2B4O7.5H2O)。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是硼化合物，其可以有效量用作硼砂的替代物(或可以有效量与硼砂或彼此组合使用)。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是无水硼砂(Na2B4O7)；四硼酸铵((NH4)2B4O7.4H2O)；五硼酸铵((NH4)2B10O16.8H2O)；五硼酸钾(K2B10O16.8H2O)；四硼酸钾(K2B4O7.4H2O)；偏硼酸钠((8mol)Na2B2O4.8H2O)；偏硼酸钠((4mol)Na2B2O4.4H2O)；十水合四硼酸二钠(Na2B4O7.10H2O)；五水合四硼酸二钠(Na2B4O7.5H2O)；四水合八硼酸二钠(Na2B8O13.4H2O)；或它们的组合。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是选自由以下项组成的组的硼化合物：硼砂、硼酸、八硼酸二钠、硼酸钠、偏硼酸钠、十水合四硼酸钠、氧化硼、碳化硼、氮化硼、三溴化硼、三氯化硼和三氟化硼。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是硼酸。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是具有H3BO3的化学式的硼酸。
组合：病毒和CRIP
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是囊泡病毒科病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是囊泡病毒属，诸如烟芽夜蛾囊泡病毒3a、烟芽夜蛾囊泡病毒3、烟芽夜蛾囊泡病毒3b、烟芽夜蛾囊泡病毒3c、烟芽夜蛾囊泡病毒3d、烟芽夜蛾囊泡病毒3e、烟芽夜蛾囊泡病毒3f、烟芽夜蛾囊泡病毒3g、烟芽夜蛾囊泡病毒3h、烟芽夜蛾囊泡病毒3j、草地贪夜蛾囊泡病毒1a、粉纹夜蛾囊泡病毒2a、烟芽夜蛾囊泡病毒3i、灰翅夜蛾属囊泡病毒、甜菜夜蛾囊泡病毒5a、草地贪夜蛾囊泡病毒1c、草地贪夜蛾囊泡病毒1d、粉纹夜蛾囊泡病毒2b、粉纹夜蛾囊泡病毒2c、粉纹夜蛾囊泡病毒2d或粉纹夜蛾囊泡病毒6b。
在一些实施方案中，IA可以是来自囊泡病毒科的病毒。例如，在一些实施方案中，IA可以是图尔病毒属，诸如美丽双缘姬蜂图尔病毒；美丽双缘姬蜂囊泡病毒4a；或枣瘿蚊图尔病毒2a。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是来自浓核病毒亚 科的病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是双义浓核病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是选自以下组的双义浓核病毒：小行星双义浓核病毒1；海星相关浓核病毒；蜚蠊双义浓核病毒1；黑胸大蠊浓核病毒；黑胸大蠊浓核病毒Guo/2000；蜚蠊双义浓核病毒2；德国小蠊浓核病毒1；十足类双义浓核病毒1；红螯螯虾浓核病毒；双翅目双义浓核病毒1；尖音库蚊浓核病毒；半翅目双义浓核病毒1；柑橘粉蚧浓核病毒；半翅目双义浓核病毒2；车前圆尾蚜浓核病毒；半翅目双义浓核病毒3；桃蚜浓核病毒；烟蚜浓核病毒；膜翅目双义浓核病毒1；红火蚁浓核病毒；鳞翅目双义浓核病毒1；大蜡螟浓核病毒；鹿眼蛱蝶浓核病毒；鹿眼蛱蝶浓核病毒pBRJ/1990；罗氏夜蛾浓核病毒；大豆尺夜蛾浓核病毒；直翅目双义浓核病毒1；家蟋蟀浓核病毒；未分类的双义浓核病毒；二斑叶螨相关的双义浓核病毒；未分类的浓核病毒；双义浓核病毒CaaDV1；双义浓核病毒CaaDV2；Atrato Denso样病毒；Atrato Denso样病毒1；浓核病毒SC1065；浓核病毒SC1118；浓核病毒SC116；浓核病毒SC2121；浓核病毒SC2209；浓核病毒SC2228；浓核病毒SC2886；浓核病毒SC3749；浓核病毒SC3908；浓核病毒SC4092；浓核病毒SC444；浓核病毒SC525；柑橘木虱浓核病毒；小蔗螟浓核病毒；狼粪相关浓核病毒和狼粪相关浓核病毒2。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是来自昆虫痘病毒 亚科的病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是甲型昆虫痘病毒；乙型昆虫痘病毒；茧蜂昆虫痘病毒；血黑蝗昆虫痘病毒；或一些迄今未分类的昆虫痘病毒亚科。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是选自以下组的昆虫痘病毒亚科病毒：古铜异丽金龟昆虫痘病毒；茶小卷叶蛾昆虫痘病毒；茶小卷叶蛾昆虫痘病毒“L”；桑灯蛾昆虫痘病毒；双年色卷蛾昆虫痘病毒；云杉色卷蛾昆虫痘病毒；蔷薇斜条卷叶蛾昆虫痘病毒；蔷薇斜条卷叶蛾昆虫痘病毒“L”；棉铃实夜蛾昆虫痘病毒；东方粘虫昆虫痘病毒；东方粘虫昆虫痘病毒“L”；未分类的乙型昆虫痘病毒；长尾潜蝇茧蜂昆虫痘病毒；迁徒蚱蜢昆虫痘病毒“O”；埃及蚂蚱昆虫痘病毒；意大利蝗昆虫痘病毒；细长摇蚊昆虫痘病毒；西伯利亚蝗昆虫痘病毒；茶卷叶蛾昆虫痘病毒；阿根廷蚁昆虫痘病毒1；亚洲小车蝗昆虫痘病毒；和粘虫昆虫痘病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是虹彩病毒科病毒，例如虹彩病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是选自以下组的虹彩病毒科病毒：大蚊虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒31；普通卷甲虫虹色病毒；日本丽金龟虹色病毒；粗糙鼠妇虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒6；双斑蟋虹彩病毒；未分类的虹彩病毒；樱花科毛对虾虹彩病毒；黎豆夜蛾虹色病毒；Armadillidium decorum虹色病毒；Barramundi perch虹彩病毒；蓝鳃太阳鱼虹彩病毒；短棘鲾虹彩病毒；红鳍笛鲷虹彩病毒；长体圆鲹虹彩病毒；小牙鲾虹彩病毒；无脊椎动物虹色病毒16；褐新西兰肋翅鳃角金龟虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒2；白粉金黾甲虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒23；非洲独角仙虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒24；东方蜜蜂虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒29；黄粉虫虹色病毒；虹彩病毒金目鲈/Quang Ninh/VNM/2008；虹彩病毒IV31；日本海鲈虹彩病毒；有毒兔头鲀虹彩病毒；尖吻鲈虹彩病毒；黑边鲾虹彩病毒；笋壳鱼虹彩病毒；圆眼燕鱼虹彩病毒；三线矶鲈虹彩病毒；鲈鱼虹彩病毒603-2/中国；六指马鲅虹彩病毒；猪西门氏菌虹彩病毒；榆黄莹叶甲虹彩病毒；英国林蛙虹彩病毒1；英国林蛙虹彩病毒2；海银鲷鱼虹彩病毒；黑鱼虹彩病毒；石鲽虹彩病毒603-3/中国；石鲽虹彩病毒724/中国；鲟鱼虹彩病毒；印度狗母鱼虹彩病毒；和Trichoniscus panormidensis虹色病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是裸杆状病毒科病 毒，例如，α型裸杆状病毒、β型裸杆状病毒或一些迄今未分类的裸杆状病毒科病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是选自以下组的裸杆状病毒科病毒：双斑蟋裸杆状病毒；椰子犀角金龟裸杆状病毒；玉米穗虫裸杆状病毒；美洲棉铃虫裸杆状病毒2；叉犀金龟属裸杆状病毒；果蝇裸杆状病毒；果蝇属裸杆状病毒RLU-2011；Esparto病毒；欧洲龙虾裸杆状病毒；Kallithea病毒；沼虾属裸杆状病毒CN-SL2011；Mautenbach病毒；褐飞虱内源性裸杆状病毒；斑节对虾裸杆状病毒；沼泽大蚊裸杆状病毒；和Tomelloso病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是选自以下组的传 染性软腐病病毒科病毒：柞蚕传染性软腐病病毒；菜蚜病毒；菜蚜病毒-UK；蜜蜂残翅病毒；Kakugo病毒；VDV-1/DWV重组体；瓢虫茧蜂麻痹病毒；茶尺蠖病毒；茶尺蠖小RNA病毒；传染性软化病病毒；传染性软化病病毒(蚕分离株)；全环硬蜱传染性软腐病病毒；牧草盲蝽病毒1；舞毒蛾传染性软腐病病毒1；褐飞虱蜜露病毒1；榕透翅毒蛾病毒；囊状幼虫病病毒；囊状幼虫病病毒CSBV-LN/中国/2009；慢蜂麻痹病毒；甜菜夜蛾传染性软腐病病毒1；甜菜夜蛾传染性软腐病病毒2；瓦螨病毒1；未分类的传染性软腐病病毒；ACT flea传染性软腐病病毒；刺扰伊蚊传染性软腐病病毒；阿蚊属传染性软腐病病毒；蝙蝠传染性软腐病病毒；蜜蜂传染性软腐病病毒1；黑莓传染性软腐病病毒A；黑莓传染性软腐病病毒B；家蚕传染性软腐病病毒；Breves传染性软腐病病毒；小菜蛾传染性软腐病病毒；毛眼林蚁病毒2；褐黄血蜱传染性软腐病病毒；艺神袖蝶传染性软腐病病毒；棉铃虫传染性软腐病病毒；蠓传染性软腐病病毒90C0；亚洲长翼蝠传染性软腐病病毒；Moku病毒；丽蝇蛹集金小蜂病毒；Pirizal传染性软腐病病毒；异沙叶蝉传染性软腐病病毒1；Rondonia传染性软腐病病毒1；Rondonia传染性软腐病病毒2；葡萄带叶蝉传染性软腐病病毒1；葡萄带叶蝉传染性软腐病病毒2；VDV-1/DWV重组体4；墨胸胡蜂Moku病毒；或冠花蟹蛛传染性软腐病病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是来自杆状病毒科的病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA可以是α杆状病毒属、β杆状病毒属、δ杆状病毒属、γ杆状病毒属或迄今未分类的杆状病毒科病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是选自以下组的α杆 状病毒属病毒：茶小卷叶蛾核型多角体病毒；小地老虎多核型多角体病毒；黄地老虎核型多角体病毒A；黄地老虎核型多角体病毒B；柞蚕核型多角体病毒；普利柞蚕核型多角体病毒；蓖麻蚕核型多角体病毒；黎豆夜蛾多核型多角体病毒；苜蓿银纹夜蛾多核型多角体病毒；芹菜夜蛾MNPV；苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒；大蜡螟MNPV；小菜蛾多核型多角体病毒；两色髯须夜蛾MNPV；薄荷灰夜蛾MNPV；家蚕核型多角体病毒；野桑蚕核型多角体病毒；野桑蚕核型多角体病毒S2；家蚕核型多角体病毒K1；油桐尺蠖核型多角体病毒；迁粉蝶核型多角体病毒；云杉色卷蛾DEF多核型多角体病毒；云杉色卷蛾多核型多角体病毒；西部云杉色卷蛾α杆状病毒；欧洲云杉卷叶蛾核型多角体病毒；蔷薇斜条卷叶蛾核型多角体病毒；金双斑蛾核型多角体病毒；金双斑蛾SNPV TF1-A；大豆尺蠖核型多角体病毒；大豆尺夜蛾SNPV IE；豆天蛾核型多角体病毒；泡桐茸毒蛾核型多角体病毒；茶尺蠖核型多角体病毒；苹果褐卷蛾核型多角体病毒；茶黄毒蛾核多角体病毒；棉铃虫核型多角体病毒；棉铃虫NPV NNg1；棉铃虫NPV澳大利亚株；棉铃虫核型多角体病毒G4；棉铃虫SNPV；铃夜蛾属SNPV AC53；玉米棉铃虫单核型多角体病毒；新天蚕蛾属物种核型多角体病毒；新天蚕蛾属物种核型多角体病毒；美国白蛾核型多角体病毒；铁杉尺蠖核型多角体病毒；粘虫核型多角体病毒；巴西天蚕蛾核型多角体病毒；巴西天蚕蛾多核型多角体病毒；舞毒蛾多核型多角体病毒；黑角舞蛾核型多角体病毒；甘蓝夜蛾多核型多角体病毒；蓓带夜蛾核型多角体病毒A；蓓带夜蛾核型多角体病毒B；棉铃虫多核型多角体病毒；豆野螟核型多角体病毒；一点粘虫核型多角体病毒；冬尺蠖蛾核型多角体病毒；白斑毒蛾核型多角体病毒；黄杉合毒蛾多核型多角体病毒；斜纹刺蛾核型多角体病毒；Perigonia lusca核型多角体病毒；Perigonia lusca单核型多角体病毒；甜菜夜蛾多核型多角体病毒；甜菜夜蛾核型多角体病毒(US株)；草地贪夜蛾多核型多角体病毒；棉叶虫核型多角体病毒；斜纹夜蛾核型多角体病毒；枣尺蠖核型多角体病毒；弧金翅夜蛾核型多角体病毒；粉纹夜蛾单核型多角体病毒；蝙蝠蛾核型多角体病毒；未分类的α杆状病毒；醋栗尺蛾核型多角体病毒；绿尾大蚕蛾核型多角体病毒；棉花棉褐带卷蛾核型多角体病毒；银纹红袖蝶MNPV；警纹地夜蛾核型多角体病毒；小地老虎多衣壳核型多角体病毒；Amorbiacuneacapsa核型多角体病毒；鳄梨卷蛾核型多角体病毒；葡萄天蛾核型多角体病毒；花生灯蛾核型多角体病毒；芹菜夜蛾多核型多角体病毒；多音天蚕核型多角体病毒；黎豆夜蛾核型多角体病毒；春尺蛾核型多角体病毒；绢粉蝶核型多角体病毒；丑巢黄卷蛾核型多角体病毒；蔷薇黄卷蛾核型多角体病毒；蓖麻蚕核型多角体病毒；生菜尺蠖核型多角体病毒；丫纹夜蛾核型多角体病毒；黑点银纹夜蛾核型多角体病毒；双尖顶尺蠖核型多角体病毒；野桑蚕核型多角体病毒；玉米茎蛀褐夜蛾核型多角体病毒；Catposilia pomona核型多角体病毒；翎夜蛾核型多角体病毒；异色卷蛾核型多角体病毒；西枞色卷蛾核型多角体病毒；行军切叶虫核型多角体病毒；大豆尺蠖NPV；粉花凌霄大蚕蛾α杆状病毒；粉花凌霄大蚕蛾核型多角体病毒；Condylorrhiza vestigialis MNPV；Condylorrhiza vestigialis多核型多角体病毒；Cryptophlebia peltastica核型多角体病毒；波纹杂毛虫核型多角体病毒；云杉茸毒蛾核型多角体病毒；思茅松毛虫核型多角体病毒；条纹绢野螟核型多角体病毒；天后银纹袖蝶MNPV tmk1/ARG/2003；天后银纹袖蝶核型多角体病毒；Dirphia peruvianus核型多角体病毒；灰茶尺蠖核型多角体病毒；Epinotia granitalis核型多角体病毒；半带黄毒蛾核型多角体病毒；云杉吉松叶蜂核型多角体病毒；艺神袖蝶核型多角体病毒；烟青虫核型多角体病毒；南美棉铃虫单核型多角体病毒；点实夜蛾SNPV；玉米穗虫核型多角体病毒；Hemerocampavetusta核型多角体病毒；新天蚕蛾属α杆状病毒；黄钩尺蛾NPV；大钩翅尺蛾NPV；茶刺蛾核型多角体病毒；鹿眼蛱蝶核型多角体病毒；Leucoma salicis核型多角体病毒；枫首毒蛾多核型多角体病毒；松针毒蛾核型多角体病毒；黑角舞蛾核型多角体病毒2；天幕毛虫属α杆状病毒；苹天幕毛虫核型多角体病毒；加州天幕毛虫核型多角体病毒；西加州天幕毛虫核型多角体病毒；森林天幕毛虫核型多角体病毒；黄褐天幕毛虫核型多角体病毒；蓓带夜蛾核型多角体病毒；娆粉蝶属α杆状病毒；冷杉绿伪尺蛾核型多角体病毒；孔雀蛱蝶核型多角体病毒；橡树尺蠖α杆状病毒；同安钮夜蛾核型多角体病毒；澳古毒蛾核型多角体病毒；灰斑古毒蛾核型多角体病毒；黄杉合毒蛾单衣壳核型多角体病毒；小眼夜蛾核型多角体病毒；疆夜蛾属α杆状病毒；斑色地老虎核型多角体病毒；榕透翅毒蛾核型多角体病毒；加利福尼亚橡树虫核型多角体病毒；Plusia acuta核型多角体病毒；金翅夜蛾核型多角体病毒；小菜蛾核型多角体病毒；拟粘液蛾属α杆状病毒；大豆尺夜蛾核型多角体病毒；澳洲牧场毛虫核型多角体病毒；Rachiplusia nu核型多角体病毒；Rachiplusia nu单核型多角体病毒；眉纹天蚕蛾核型多角体病毒；人纹污灯蛾核型多角体病毒；尘污灯蛾核型多角体病毒；Spilosoma phasma核型多角体病毒；Spodoptera cosmioides核型多角体病毒；亚热带粘虫核型多角体病毒；莎草粘虫核型多角体病毒；棉叶虫多衣壳核型多角体病毒；斜纹夜蛾MNPV；斜纹夜蛾核型多角体病毒II；Spodoptera terricola核型多角体病毒；衣蛾核型多角体病毒；金裳凤蝶核型多角体病毒；Wiseana cervinata核型多角体病毒；银纹红袖蝶属物种核型多角体病毒；天幕毛虫属物种α杆状病毒；天幕毛虫属物种核型多角体病毒；娆粉蝶属物种α杆状病毒；和未鉴定的核型多角体病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是选自以下组的β杆 状病毒属病毒：棉花棉褐带卷蛾颗粒体病毒；黄地老虎颗粒体病毒；菜粉蝶颗粒体病毒；欧洲粉蝶颗粒体病毒；云杉色卷蛾颗粒体病毒；西部云杉色卷蛾颗粒体病毒；杨扇舟蛾颗粒体病毒；分月扇舟蛾颗粒体病毒A；分月扇舟蛾颗粒体病毒(河南)；分月扇舟蛾颗粒体病毒B；稻纵卷叶螟颗粒体病毒；苹果异形小卷蛾颗粒体病毒；苹果蠹蛾颗粒体病毒；苹果蠹蛾颗粒体病毒(墨西哥分离株)；小蔗螟颗粒体病毒；夜小卷蛾颗粒体病毒；木薯天蛾颗粒体病毒；葡萄叶斑蛾颗粒体病毒；棉铃虫颗粒体病毒；草安夜蛾颗粒体病毒；南美毛胫夜蛾颗粒体病毒；一点粘虫颗粒体病毒A；Pseudalatia unipuncta颗粒体病毒；一点粘虫颗粒体病毒B；一点粘虫颗粒体病毒；马铃薯块茎蛾颗粒体病毒；印度谷螟颗粒体病毒；小菜蛾颗粒体病毒；草地贪夜蛾颗粒体病毒；斜纹夜蛾颗粒体病毒；粉纹夜蛾颗粒体病毒；粉纹夜蛾颗粒体病毒LBIV-12；八字地老虎颗粒体病毒；飞扬阿夜蛾颗粒体病毒；茶小卷叶蛾颗粒体病毒；警纹地夜蛾颗粒体病毒；跳螳螂颗粒体病毒；茶蚕颗粒体病毒；丫纹夜蛾颗粒体病毒；茶细蛾颗粒体病毒；欧洲云杉卷叶蛾颗粒体病毒；栎绿色卷蛾β杆状病毒；分月扇舟蛾颗粒体病毒；杂食云卷蛾颗粒体病毒；盐泽灯蛾颗粒体病毒；红背地老虎颗粒体病毒；棉铃实夜蛾颗粒体病毒；四叉莜夜蛾颗粒体病毒；美国白蛾颗粒体病毒；黑点刺蛾颗粒体病毒；青铜地老虎颗粒体病毒；三线褐卷蛾颗粒体病毒；Peridorma morpontora颗粒体病毒；菜青虫颗粒体病毒；苜蓿绿叶蛾颗粒体病毒；拟粘液蛾属β杆状病毒；三叶草夜蛾颗粒体病毒；Spodopteraandrogea颗粒体病毒；棉叶虫颗粒体病毒；安第斯马铃薯块茎蛾颗粒体病毒；和毛胫夜蛾属物种颗粒体病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是选自以下组的δ杆 状病毒属病毒：黑须库蚊核型多角体病毒；和黑须库蚊NPV佛罗里达/1997。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是选自以下组的γ 杆状病毒属病毒：红头松叶蜂核型多角体病毒；红头松叶蜂NPV(加拿大株)；欧洲新松叶蜂核型多角体病毒；未分类的γ杆状病毒；和冷杉锯角叶蜂NPV。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是选自以下组的迄今未分类的杆状病毒科病毒：Achaea faber核型多角体病毒；烦扰伊蚊核型多角体病毒；荨麻蛱蝶核型多角体病毒；银纹红袖蝶核型多角体病毒；黄麻桥夜蛾核型多角体病毒；天蚕核型多角体病毒；荨麻舞蛾颗粒体病毒；Aroa discalis核型多角体病毒；对虾杆状病毒；干果斑螟核型多角体病毒；Chaliopsis junodi核型多角体病毒；缘腹盘绒茧蜂杆状病毒；Cynosarga ornata核型多角体病毒；Darna nararia颗粒体病毒；窃达刺蛾颗粒体病毒；落叶松尺蛾核型多角体病毒；锦夜蛾颗粒体病毒；棕尾毒蛾核型多角体病毒；桑毛虫核型多角体病毒；性腺特异性病毒；茶卷叶蛾颗粒体病毒；全须夜蛾核型多角体病毒；Idaea seriata核型多角体病毒；鹿眼蛱蝶颗粒体病毒；栎枯叶蛾核型多角体病毒；奇特望灯蛾核型多角体病毒；油棕榈袋蛾核型多角体病毒；乌夜蛾颗粒体病毒；幽波尺蛾核型多角体病毒；古毒蛾核型多角体病毒；Orgyia mixta核型多角体病毒；Pachytrina philargyria核型多角体病毒；香泽兰灯蛾核型多角体病毒；斑节对虾核型多角体病毒；圆掌舟蛾核型多角体病毒；白钩蛱蝶核型多角体病毒；印度蚕核型多角体病毒；Spilosoma lutea颗粒体病毒；Spodoptera albula核型多角体病毒；黄绿枯叶蛾核型多角体病毒；小垂中国蓝带蚊核型多角体病毒；长尾弄蝶核型多角体病毒；Utetheisa pulchella核型多角体病毒；大西洋赤蛱蝶核型多角体病毒；小红蛱蝶核型多角体病毒；和Wiseana cervinata颗粒体病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA可以是棉花棉褐带卷蛾颗粒体病毒；黄地老虎颗粒体病毒；菜粉蝶颗粒体病毒；欧洲粉蝶颗粒体病毒；云杉色卷蛾颗粒体病毒；西部云杉色卷蛾颗粒体病毒；杨扇舟蛾颗粒体病毒；分月扇舟蛾颗粒体病毒A；分月扇舟蛾颗粒体病毒(河南)；分月扇舟蛾颗粒体病毒B；稻纵卷叶螟颗粒体病毒；苹果异形小卷蛾颗粒体病毒；苹果蠹蛾颗粒体病毒；苹果蠹蛾颗粒体病毒(墨西哥分离株)；小蔗螟颗粒体病毒；夜小卷蛾颗粒体病毒；木薯天蛾颗粒体病毒；葡萄叶斑蛾颗粒体病毒；棉铃虫颗粒体病毒；草安夜蛾颗粒体病毒；南美毛胫夜蛾颗粒体病毒；一点粘虫颗粒体病毒A；Pseudalatia unipuncta颗粒体病毒；一点粘虫颗粒体病毒B；一点粘虫颗粒体病毒；马铃薯块茎蛾颗粒体病毒；印度谷螟颗粒体病毒；小菜蛾颗粒体病毒；草地贪夜蛾颗粒体病毒；斜纹夜蛾颗粒体病毒；粉纹夜蛾颗粒体病毒；粉纹夜蛾颗粒体病毒LBIV-12；八字地老虎颗粒体病毒；未分类的β杆状病毒；飞扬阿夜蛾颗粒体病毒；茶小卷叶蛾颗粒体病毒；警纹地夜蛾颗粒体病毒；跳螳螂颗粒体病毒；茶蚕颗粒体病毒；丫纹夜蛾颗粒体病毒；茶细蛾颗粒体病毒；欧洲云杉卷叶蛾颗粒体病毒；栎绿色卷蛾β杆状病毒；分月扇舟蛾颗粒体病毒；杂食云卷蛾颗粒体病毒；盐泽灯蛾颗粒体病毒；红背地老虎颗粒体病毒；棉铃实夜蛾颗粒体病毒；四叉莜夜蛾颗粒体病毒；美国白蛾颗粒体病毒；黑点刺蛾颗粒体病毒；青铜地老虎颗粒体病毒；三线褐卷蛾颗粒体病毒；Peridorma morpontora颗粒体病毒；菜青虫颗粒体病毒；苜蓿绿叶蛾颗粒体病毒；拟粘液蛾属β杆状病毒；三叶草夜蛾颗粒体病毒；Spodoptera androgea颗粒体病毒；棉叶虫颗粒体病毒；安第斯马铃薯块茎蛾颗粒体病毒；或毛胫夜蛾属物种颗粒体病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是苹果蠹蛾颗粒体病毒。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是苹果蠹蛾颗粒体病毒分离株V22病毒。
组合：细菌/细菌毒素和CRIP
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是细菌。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是从细菌中分离的肽或毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是细菌毒素。
光杆状菌和/或来自它们的毒素
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA可以是从属于致病杆菌属或光杆状菌属的细菌中分离的细菌毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是光杆状菌属毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是选自由以下项组成的组的光杆状菌属毒素：Photorhabdus akhurstii毒素；非共生光杆状菌毒素；非共生光杆状菌非共生亚种毒素；非共生光杆状菌非共生亚种ATCC 43949毒素；澳洲光杆状菌毒素；澳洲光杆状菌DSM 17609毒素；Photorhabdus bodei毒素；Photorhabdus caribbeanensis毒素；Photorhabdus cinerea毒素；海南光杆状菌毒素；Photorhabdus heterorhabditis毒素；Photorhabdus kayaii毒素；Photorhabdus khanii毒素；Photorhabdus khanii NC19毒素；Photorhabdus khanii subsp.guanajuatensis毒素；Photorhabdus kleinii毒素；Photorhabdus laumondii毒素；Photorhabdus laumondii subsp.clarkei毒素；Photorhabdus laumondii subsp.laumondii毒素；Photorhabdus laumondiisubsp.Laumondii TTO1毒素；发光光杆状菌BA1毒素；发光光杆状菌NBAII H75HRPL105毒素；发光光杆状菌NBAII HiPL101毒素；发光光杆状菌发光亚种毒素；发光光杆状菌发光亚种ATCC 29999毒素；发光光杆状菌墨西哥亚种毒素；发光光杆状菌sonorensis亚种毒素；Photorhabdus namnaonensis毒素；Photorhabdus noenieputensis毒素；Photorhabdusstackebrandtii毒素；Photorhabdus tasmaniensis毒素；中温光杆状菌毒素；中温光杆状菌J3毒素；中温光杆状菌phorame亚种毒素；中温光杆状菌中温亚种毒素；中温光杆状菌中温亚种M1021毒素；中温光杆状菌中温亚种Meg1毒素；Photorhabdus thracensis毒素；未分类的光杆状菌毒素；光杆状菌属物种毒素；光杆状菌属物种3014毒素；光杆状菌属物种3240毒素；光杆状菌属物种Az29毒素；光杆状菌属物种BS21毒素；光杆状菌属物种CbKj163毒素；光杆状菌属物种CRCIA-P01毒素；光杆状菌属物种ENY毒素；光杆状菌属物种FL2122毒素；光杆状菌属物种FL480毒素；光杆状菌属物种FsIw96毒素；光杆状菌属物种GDd233毒素；光杆状菌属物种H3086毒素；光杆状菌属物种H3107毒素；光杆状菌属物种H3240毒素；光杆状菌属物种HB301毒素；光杆状菌属物种HB78毒素；光杆状菌属物种HB89毒素；光杆状菌属物种HIT毒素；光杆状菌属物种HO1毒素；光杆状菌属物种HUG-39毒素；光杆状菌属物种IT毒素；光杆状菌属物种JUN毒素；光杆状菌属物种KcTs129毒素；光杆状菌属物种KJ13.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ14.3TH毒素；光杆状菌属物种KJ24.5 TH毒素；光杆状菌属物种KJ29.1TH毒素；光杆状菌属物种KJ37.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ7.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ8.2 TH毒素；光杆状菌属物种KJ9.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ9.2 TH毒素；光杆状菌属物种KK1.3 TH毒素；光杆状菌属物种KK1.4 TH毒素；光杆状菌属物种KMD74毒素；光杆状菌属物种KOH毒素；光杆状菌属物种MID10毒素；光杆状菌属物种MOL毒素；光杆状菌属物种MSW_058毒素；光杆状菌属物种MSW_079毒素；光杆状菌属物种NK2.1 TH毒素；光杆状菌属物种NK2.5 TH毒素；光杆状菌属物种NnMt2h毒素；光杆状菌属物种NP1毒素；光杆状菌属物种OH10毒素；光杆状菌属物种OnIr40毒素；光杆状菌属物种OnKn2毒素；光杆状菌属物种PB10.1TH毒素；光杆状菌属物种PB16.3 TH毒素；光杆状菌属物种PB17.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB17.3 TH毒素；光杆状菌属物种PB2.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB22.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB22.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB32.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB33.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB33.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB37.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB39.2TH毒素；光杆状菌属物种PB4.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB41.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB45.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB47.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB47.3 TH毒素；光杆状菌属物种PB5.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB5.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB50.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB51.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB52.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB54.4TH毒素；光杆状菌属物种PB58.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB58.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB58.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB59.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB6.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB67.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB67.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB68.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB7.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB76.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB76.4TH毒素；光杆状菌属物种PB76.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB78.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB80.3 TH毒素；光杆状菌属物种PB80.4 TH毒素；光杆状菌属物种Pjun毒素；光杆状菌属物种RW14-46毒素；光杆状菌属物种S10-54毒素；光杆状菌属物种S12-55毒素；光杆状菌属物种S14-60毒素；光杆状菌属物种S15-56毒素；光杆状菌属物种S5P8-50毒素；光杆状菌属物种S7-51毒素；光杆状菌属物种S8-52毒素；光杆状菌属物种S9-53毒素；光杆状菌属物种SJ2毒素；光杆状菌属物种SN259毒素；光杆状菌属物种SP1.5 TH毒素；光杆状菌属物种SP16.4 TH毒素；光杆状菌属物种SP21.5TH毒素；光杆状菌属物种SP3.4 TH毒素；光杆状菌属物种SP4.5 TH毒素；光杆状菌属物种SP7.3 TH毒素；光杆状菌属物种TyKb140毒素；光杆状菌属物种UK76毒素；光杆状菌属物种VMG毒素；光杆状菌属物种WA21C毒素；光杆状菌属物种WkSs43毒素；光杆状菌属物种Wx13毒素；光杆状菌属物种X4毒素；光杆状菌属物种YNb90毒素；和光杆状菌属物种ZM毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是发光光杆状菌毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是发光光杆状菌毒素，其中该发光光杆状菌毒素包括发光光杆状菌“毒素复合物a”(Tca)。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是发光光杆状菌毒素，其中该发光光杆状菌毒素包括发光光杆状菌“毒素复合物c”(Tcc)。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是发光光杆状菌毒素，其中该发光光杆状菌毒素包括发光光杆状菌“毒素复合物d”(Tcd)。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是Tca，Tca包括TcaA蛋白(SEQ ID NO:616)、TcaB蛋白(SEQ ID NO:617)、TcaC蛋白(SEQ ID NO:618)和TcaZ蛋白(SEQ ID NO:619)。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是发光光杆状菌“毒素复合物a”(Tca)，其具有与SEQ ID NO:616-619所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
耶尔森氏菌生物体及其产物
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是属于耶尔森氏菌属的一种或多种生物体。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是从属于耶尔森氏菌属的生物体中分离的一种或多种肽。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是下列物种中的一种或多种物种：Yersinia aldovaeyb、Yersinia aleksiciae、伯氏耶尔森氏菌、Yersiniacanariae、小肠结肠炎耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌耶尔森氏菌亚种、小肠结肠炎耶尔森氏菌古北区亚种、嗜虫耶尔森氏菌、弗氏耶尔森氏菌、Yersinia hibernica、中间耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌克氏亚种、克氏耶尔森氏菌rochesterensis亚种、马赛耶尔森氏菌、莫氏耶尔森氏菌、Yersinia nurmii、Yersinia pekkanenii、鼠疫耶尔森氏菌、鼠疫耶尔森氏菌鼠疫亚种、鼠疫耶尔森氏菌中古型亚种、鼠疫耶尔森氏菌东方型亚种、假结核耶尔森菌、假结核耶尔森氏菌鼠疫亚种、假结核耶尔森氏菌假结核亚种、罗氏耶尔森氏菌、鲁氏耶尔森氏菌、类似耶尔森氏菌或Yersinia wautersii。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是从下列物种中的一种或多种物种中分离的一种或多种肽：Yersinia aldovaeyb、Yersinia aleksiciae、伯氏耶尔森氏菌、Yersinia canariae、小肠结肠炎耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌耶尔森氏菌亚种、小肠结肠炎耶尔森氏菌古北区亚种、嗜虫耶尔森氏菌、弗氏耶尔森氏菌、Yersinia hibernica、中间耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌克氏亚种、克氏耶尔森氏菌rochesterensis亚种、马赛耶尔森氏菌、莫氏耶尔森氏菌、Yersinia nurmii、Yersinia pekkanenii、鼠疫耶尔森氏菌、鼠疫耶尔森氏菌鼠疫亚种、鼠疫耶尔森氏菌中古型亚种、鼠疫耶尔森氏菌东方型亚种、假结核耶尔森菌、假结核耶尔森氏菌鼠疫亚种、假结核耶尔森氏菌假结核亚种、罗氏耶尔森氏菌、鲁氏耶尔森氏菌、类似耶尔森氏菌或Yersiniawautersii。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是嗜虫耶尔森氏菌或Yersinia nurmii。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是从嗜虫耶尔森氏菌或Yersinia nurmii中分离的一种或多种肽。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是“Yen-TC”毒素复合物(TC)。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是一种或多种TC蛋白。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是TcA、TcB和TcC。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是嗜虫耶尔森氏菌细菌和/或来自其的毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是一种或多种Yersinia nurmii细菌和/或来自它们的毒素。
在一些实施方案中，本发明的组合或组合物包含一种或多种杀昆虫剂(IA)和一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)，其中IA是一种或多种嗜虫耶尔森氏菌细菌和/或来自它们的毒素，以及一种或多种Yersinia nurmii细菌和/或来自它们的毒素。
组合：Bt毒素、CRIP以及它们的组合
在一些实施方案中，组合或组合物可包含表A中的任一种或多种CRIP，其与IA组编号8(例如，IA编号B124-B150)中所含的一种或多种IA组合。
在一些实施方案中，组合或组合物可包含：(1)以下CRIP中的一者或多者：A1-A68；以及(2)一种或多种Bt肽和/或毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物可包含：(1)以下CRIP中的一者或多者：A1-A68；以及(2)一种或多种Bt肽；其中该组合或组合物还包含另外的药剂(例如，一种或多种如本文所述的杀虫剂和/或杀昆虫剂)。
在一些实施方案中，组合或组合物可包含：(1)以下CRIP中的一者或多者：A1-A68；以及(2)一种或多种Bt肽；其中该组合或组合物还包含赋形剂。
在一些实施方案中，防治昆虫的方法包括：将苏云金芽孢杆菌(Bt)蛋白施用到昆虫所在处；然后将以下CRIP中的一者或多者：A1-A68施用到所述昆虫所在处，其中所述Bt和/或CRIP同时或顺序地施用。
在一些实施方案中，组合和/或组合物可包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68，以及一种或多种Bt毒素，例如Cry蛋白、Cyt蛋白或Vip蛋白，如本文所述和/或本文表中和/或序列表中所列举的。
在一些实施方案中，以下CRIP中的一者或多者：A1-A68可与从苏云金芽孢杆菌分离的蛋白质组合。例如，在一些实施方案中，以下CRIP中的一者或多者：A1-A68可与δ-内毒素(例如，晶体(Cry)毒素和/或溶细胞(Cyt)毒素)；营养期杀昆虫蛋白(Vip)；分泌期杀昆虫蛋白(Sip)；或Bin样毒素组合。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中Bt毒素是伴孢晶体毒素、分泌蛋白、β-外毒素、41.9kDa杀昆虫毒素、sphaericolysin、蜂房杆菌溶素或增效蛋白样蛋白。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该Bt毒素是伴孢晶体毒素，并且其中该伴孢晶体毒素是δ-内毒素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该Bt毒素是δ-内毒素，其为三结构域(3D)Cry家族蛋白、二元Bin样家族毒素、ETX_MTX2样家族毒素、毒素-10家族毒素、气单胞菌溶素家族毒素或溶细胞素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该Bt毒素是δ-内毒素，其为三结构域(3D)Cry毒素、杀蚊Cry毒素(Mtx)、二元样(Bin)毒素或Cyt毒素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该Bt毒素是δ-内毒素，其为三结构域(3D)Cry毒素或Cyt毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68，其与下列Cry蛋白中的一者或多者组合：Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A样、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb样、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H样、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I样、Cry1I样、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1样、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A样、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba样、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8样、Cry8样、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa样、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9样、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A样、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa样、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20样、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43样、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1和/或Cry78Aa1。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68，其与一种或多种Bt毒素组合，其中所述Bt毒素是Cry毒素、Cyt毒素或Vip毒素(例如，本文所述的Cry、Cyt或Vip中的任一者)。
在一些实施方案中，以下CRIP中的一者或多者：A1-A68可与一种或多种Cry蛋白组合，该一种或多种Cry蛋白具有SEQ ID NO:412-461所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68，其与下列Cyt蛋白中的一者或多者组合：Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa样、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba样、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B样、Cyt2Ca1和/或Cyt3Aa1。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68，其与一种或多种Cyt蛋白组合，该一种或多种Cyt蛋白具有SEQ ID NO:462-481所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该Bt毒素是分泌蛋白，该分泌蛋白是营养期杀昆虫蛋白(Vip)、分泌期杀昆虫蛋白(Sip)、Bin样家族蛋白或ETX_MTX2家族蛋白。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该Bt毒素是为Vip的分泌蛋白。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该Bt毒素是Vip，该Vip是Vip 1家族蛋白、Vip2家族蛋白、Vip 3家族蛋白或Vip 4家族蛋白。
在一些实施方案中，以下CRIP中的一者或多者：A1-A68可与下列Vip蛋白中的一者或多者组合：Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4和/或Vip4Aa1。
在一些实施方案中，以下CRIP中的一者或多者：A1-A68可与一种或多种Vip蛋白组合，该一种或多种Vip蛋白具有SEQ ID NO:482-587所示的氨基酸序列。
包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68以及一种或多种Bt肽的任何前述组合或组合物可同时和/或顺序地并且在相同或单独的组合物中施用。CRIP与Bt肽的比率将取决于所针对的昆虫害虫和使用者的需要。
在一些实施方案中，Bt蛋白和CRIP可施用于(Bt蛋白)抗性昆虫。基于干重，Bt与CRIP的比率可选自至少约下列比率：10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000，或这些值中的任何两者的任何组合。组合物中Bt和CRIP的总浓度选自下列百分比浓度：0、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％，或这些值中的任何两者之间的任何范围，并且组合物的剩余百分比由赋形剂组成。
在一些实施方案中，一种或多种CRIP可包括在制剂中，例如，由极性非质子溶剂和/或水组成的制剂，并且/或者其中该极性非质子溶剂以1重量％-99重量％的量存在，该极性质子溶剂以1重量％-99重量％的量存在，并且水以0重量％-98重量％的量存在。在一些实施方案中，该制剂包含CRIP和另一种IA，例如Bt蛋白。在一些实施方案中，Bt蛋白包含在市售产品(例如，
Figure BDA0004014715560003551
)内。当极性非质子溶剂制剂含有MSO时，它们特别有效。MSO是使用大豆油甲酯的甲基化种子油和表面活性剂的混合物，用量为约80％-85％的矿物油与15％-20％的表面活性剂。
在一些实施方案中，组合或组合物可包含苏云金芽孢杆菌(Bt)蛋白和CRIP，其中Bt肽可以是MTX2毒素，例如从球形赖氨酸芽孢杆菌分离的MTX2毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物可包含苏云金芽孢杆菌(Bt)蛋白和CRIP，其中Bt肽可以是Bin样毒素，例如从球形赖氨酸芽孢杆菌分离的Bin样毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物可包含苏云金芽孢杆菌(Bt)蛋白和CRIP，其中Bt肽可从苏云金芽孢杆菌亚种分离。例如，在一些实施方案中，苏云金芽孢杆菌亚种可以是下列亚种之一：鲇泽；鲇泽/太平洋；阿莱；阿马金；安达楼；阿根廷；asturiensis；azorensis；balearica；berliner；bolivia；brasilensis；喀麦隆；加拿大；chanpaisis；中华；科尔默；coreanensis；达尔可他；达姆斯塔特；松蜀；杀虫；杀虫/亚毒；幕虫；fukuokaensis；galechiae；蜡螟；graciosensis；贵阳；higo；华中；iberica；印第安；以色列；以色列/励木；日本；jegathesan；景洪；肯尼亚；kim；kumamtoensis；戈尔斯德；九州；李氏；londrina；malayensis；medellin；墨西哥；mogi；蒙特雷；莫里逊；muju；navarensis；neoleonensis；nigeriensis；novosibirsk；ostriniae；oswaldocruzi；pahangi；巴基斯坦；palmanyolensis；pingluonsis；pirenaica；poloniensis；pondicheriensis；pulsiensis；rongseni；roskildiensis；圣地亚哥；汉城；山东；锡卢；sinensis；sooncheon；猝倒；猝倒/松蜀；亚毒；sumiyoshiensis；sylvestriensis；拟步行甲；thailandensis；汤普逊；苏云金；励木；toguchini；东北；多窝；托马诺夫；vazensis；wratislaviensis；武汉；xiaguangiensis；yosoo；云南；肇东；str.Al Hakam；或konkukian.
在一些实施方案中，组合或组合物可包含苏云金芽孢杆菌(Bt)蛋白和CRIP，其中Bt肽从选自以下组的苏云金芽孢杆菌变种分离：苏云金芽孢杆菌鲇泽变种；苏云金芽孢杆菌鲇泽/太平洋变种；苏云金芽孢杆菌阿莱变种；苏云金芽孢杆菌阿马金变种；苏云金芽孢杆菌安达楼变种；苏云金芽孢杆菌阿根廷变种；苏云金芽孢杆菌asturiensis变种；苏云金芽孢杆菌azorensis变种；苏云金芽孢杆菌balearica变种；苏云金芽孢杆菌berliner变种；苏云金芽孢杆菌bolivia变种；苏云金芽孢杆菌brasilensis变种；苏云金芽孢杆菌喀麦隆变种；苏云金芽孢杆菌加拿大变种；苏云金芽孢杆菌chanpaisis变种；苏云金芽孢杆菌中华变种；苏云金芽孢杆菌科尔默变种；苏云金芽孢杆菌coreanensis变种；苏云金芽孢杆菌达尔可他变种；苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特变种；苏云金芽孢杆菌松蜀变种；苏云金芽孢杆菌杀虫变种；苏云金芽孢杆菌杀虫/亚毒变种；苏云金芽孢杆菌幕虫变种；苏云金芽孢杆菌fukuokaensis变种；苏云金芽孢杆菌galechiae变种；苏云金芽孢杆菌蜡螟变种；苏云金芽孢杆菌graciosensis变种；苏云金芽孢杆菌贵阳变种；苏云金芽孢杆菌higo变种；苏云金芽孢杆菌华中变种；苏云金芽孢杆菌iberica变种；苏云金芽孢杆菌印第安变种；苏云金芽孢杆菌以色列变种；苏云金芽孢杆菌以色列/励木变种；苏云金芽孢杆菌日本变种；苏云金芽孢杆菌jegathesan变种；苏云金芽孢杆菌景洪变种；苏云金芽孢杆菌肯尼亚变种；苏云金芽孢杆菌kim变种；苏云金芽孢杆菌kumamtoensis变种；苏云金芽孢杆菌kunthalanags3变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX24变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX27变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX28变种；苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种；苏云金芽孢杆菌九州变种；苏云金芽孢杆菌李氏变种；苏云金芽孢杆菌londrina变种；苏云金芽孢杆菌malayensis变种；苏云金芽孢杆菌medellin变种；苏云金芽孢杆菌墨西哥变种；苏云金芽孢杆菌mogi变种；苏云金芽孢杆菌蒙特雷变种；苏云金芽孢杆菌莫里逊变种；苏云金芽孢杆菌muju变种；苏云金芽孢杆菌navarensis变种；苏云金芽孢杆菌neoleonensis变种；苏云金芽孢杆菌nigeriensis变种；苏云金芽孢杆菌novosibirsk变种；苏云金芽孢杆菌ostriniae变种；苏云金芽孢杆菌oswaldocruzi变种；苏云金芽孢杆菌pahangi变种；苏云金芽孢杆菌巴基斯坦变种；苏云金芽孢杆菌palmanyolensis变种；苏云金芽孢杆菌pingluonsis变种；苏云金芽孢杆菌pirenaica变种；苏云金芽孢杆菌poloniensis变种；苏云金芽孢杆菌pondicheriensis变种；苏云金芽孢杆菌pulsiensis变种；苏云金芽孢杆菌rongseni变种；苏云金芽孢杆菌roskildiensis变种；苏云金芽孢杆菌圣地亚哥变种；苏云金芽孢杆菌汉城变种；苏云金芽孢杆菌山东变种；苏云金芽孢杆菌锡卢变种；苏云金芽孢杆菌sinensis变种；苏云金芽孢杆菌sooncheon变种；苏云金芽孢杆菌猝倒变种；苏云金芽孢杆菌猝倒/松蜀变种；苏云金芽孢杆菌亚毒变种；苏云金芽孢杆菌sumiyoshiensis变种；苏云金芽孢杆菌sylvestriensis变种；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种；苏云金芽孢杆菌thailandensis变种；苏云金芽孢杆菌汤普逊变种；苏云金芽孢杆菌苏云金变种；苏云金芽孢杆菌励木变种；苏云金芽孢杆菌toguchini变种；苏云金芽孢杆菌东北变种；苏云金芽孢杆菌多窝变种；苏云金芽孢杆菌托马诺夫变种；苏云金芽孢杆菌vazensis变种；苏云金芽孢杆菌wratislaviensis变种；苏云金芽孢杆菌武汉变种；苏云金芽孢杆菌xiaguangiensis变种；苏云金芽孢杆菌yosoo变种；苏云金芽孢杆菌云南变种；苏云金芽孢杆菌肇东变种；苏云金芽孢杆菌str.Al Hakam；苏云金芽孢杆菌T01-328；苏云金芽孢杆菌YBT-1518；或苏云金芽孢杆菌Konkukian变种。
在一些实施方案中，组合或组合物可包含苏云金芽孢杆菌(Bt)蛋白和CRIP，其中Bt肽分离自苏云金芽孢杆菌血清变型。例如，在一些实施方案中，Bt肽可以是选自以下组的苏云金芽孢杆菌血清变型：苏云金芽孢杆菌AKS-7；苏云金芽孢杆菌Bt18247；苏云金芽孢杆菌Bt18679；苏云金芽孢杆菌Bt407；苏云金芽孢杆菌DAR 81934；苏云金芽孢杆菌DB27；苏云金芽孢杆菌F14-1；苏云金芽孢杆菌FC1；苏云金芽孢杆菌FC10；苏云金芽孢杆菌FC2；苏云金芽孢杆菌FC6；苏云金芽孢杆菌FC7；苏云金芽孢杆菌FC8；苏云金芽孢杆菌FC9；苏云金芽孢杆菌HD-771；苏云金芽孢杆菌HD-789；苏云金芽孢杆菌HD1002；苏云金芽孢杆菌IBL 200；苏云金芽孢杆菌IBL 4222；苏云金芽孢杆菌JM-Mgvxx-63；苏云金芽孢杆菌LDC391；苏云金芽孢杆菌LM1212；苏云金芽孢杆菌MC28；苏云金芽孢杆菌Sbt003；苏云金芽孢杆菌鲇泽血清变型；苏云金芽孢杆菌鲇泽/太平洋血清变型；苏云金芽孢杆菌阿莱血清变型；苏云金芽孢杆菌阿马金血清变型；苏云金芽孢杆菌安达楼血清变型；苏云金芽孢杆菌阿根廷血清变型；苏云金芽孢杆菌asturiensis血清变型；苏云金芽孢杆菌azorensis血清变型；苏云金芽孢杆菌balearica血清变型；苏云金芽孢杆菌berliner血清变型；苏云金芽孢杆菌bolivia血清变型；苏云金芽孢杆菌brasilensis血清变型；苏云金芽孢杆菌喀麦隆血清变型；苏云金芽孢杆菌加拿大血清变型；苏云金芽孢杆菌chanpaisis血清变型；苏云金芽孢杆菌中华血清变型；苏云金芽孢杆菌科尔默血清变型；苏云金芽孢杆菌coreanensis血清变型；苏云金芽孢杆菌达尔可他血清变型；苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特血清变型；苏云金芽孢杆菌松蜀血清变型；苏云金芽孢杆菌杀虫血清变型；苏云金芽孢杆菌杀虫/亚毒血清变型；苏云金芽孢杆菌幕虫血清变型；苏云金芽孢杆菌fukuokaensis血清变型；苏云金芽孢杆菌galechiae血清变型；苏云金芽孢杆菌蜡螟血清变型；苏云金芽孢杆菌graciosensis血清变型；苏云金芽孢杆菌贵阳血清变型；苏云金芽孢杆菌higo血清变型；苏云金芽孢杆菌华中血清变型；苏云金芽孢杆菌iberica血清变型；苏云金芽孢杆菌印第安血清变型；苏云金芽孢杆菌以色列血清变型；苏云金芽孢杆菌以色列/励木血清变型；苏云金芽孢杆菌日本血清变型；苏云金芽孢杆菌jegathesan血清变型；苏云金芽孢杆菌景洪血清变型景洪；苏云金芽孢杆菌肯尼亚血清变型；苏云金芽孢杆菌kim血清变型；苏云金芽孢杆菌kumamtoensis血清变型；苏云金芽孢杆菌kunthalanags3血清变型；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX24血清变型；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX27血清变型；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX28血清变型；苏云金芽孢杆菌戈尔斯德血清变型；苏云金芽孢杆菌九州血清变型；苏云金芽孢杆菌李氏血清变型；苏云金芽孢杆菌londrina血清变型；苏云金芽孢杆菌malayensis血清变型；苏云金芽孢杆菌medellin血清变型；苏云金芽孢杆菌墨西哥血清变型；苏云金芽孢杆菌mogi血清变型；苏云金芽孢杆菌蒙特雷血清变型；苏云金芽孢杆菌莫里逊血清变型；苏云金芽孢杆菌muju血清变型；苏云金芽孢杆菌navarensis血清变型；苏云金芽孢杆菌neoleonensis血清变型；苏云金芽孢杆菌nigeriensis血清变型；苏云金芽孢杆菌novosibirsk血清变型；苏云金芽孢杆菌ostriniae血清变型；苏云金芽孢杆菌oswaldocruzi血清变型；苏云金芽孢杆菌pahangi血清变型；苏云金芽孢杆菌巴基斯坦血清变型；苏云金芽孢杆菌palmanyolensis血清变型；苏云金芽孢杆菌pingluonsis血清变型；苏云金芽孢杆菌pirenaica血清变型；苏云金芽孢杆菌poloniensis血清变型；苏云金芽孢杆菌pondicheriensis血清变型；苏云金芽孢杆菌pulsiensis血清变型；苏云金芽孢杆菌rongseni血清变型；苏云金芽孢杆菌roskildiensis血清变型；苏云金芽孢杆菌圣地亚哥血清变型；苏云金芽孢杆菌汉城血清变型；苏云金芽孢杆菌山东血清变型；苏云金芽孢杆菌锡卢血清变型；苏云金芽孢杆菌sinensis血清变型；苏云金芽孢杆菌sooncheon血清变型；苏云金芽孢杆菌猝倒血清变型；苏云金芽孢杆菌猝倒/松蜀血清变型；苏云金芽孢杆菌亚毒血清变型；苏云金芽孢杆菌sumiyoshiensis血清变型；苏云金芽孢杆菌sylvestriensis血清变型；苏云金芽孢杆菌拟步行甲血清变型；苏云金芽孢杆菌thailandensis血清变型；苏云金芽孢杆菌汤普逊血清变型；苏云金芽孢杆菌苏云金血清变型；苏云金芽孢杆菌励木血清变型；苏云金芽孢杆菌toguchini血清变型；苏云金芽孢杆菌东北血清变型；苏云金芽孢杆菌多窝血清变型；苏云金芽孢杆菌托马诺夫血清变型；苏云金芽孢杆菌vazensis血清变型；苏云金芽孢杆菌wratislaviensis血清变型；苏云金芽孢杆菌武汉血清变型；苏云金芽孢杆菌xiaguangiensis血清变型；苏云金芽孢杆菌yosoo血清变型；苏云金芽孢杆菌云南血清变型；苏云金芽孢杆菌肇东血清变型；苏云金芽孢杆菌str.Al Hakam；苏云金芽孢杆菌T01-328；苏云金芽孢杆菌YBT-1518；和苏云金芽孢杆菌Konkukian血清变型。
在一些实施方案中，组合或组合物可包含苏云金芽孢杆菌(Bt)蛋白和CRIP，其中Bt肽分离自：苏云金芽孢杆菌以色列变种、苏云金芽孢杆菌鲇泽变种、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种或苏云金芽孢杆菌tenebrionensis变种。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该组合产生杀昆虫效果；并且其中该Bt毒素是苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)毒素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该组合产生杀昆虫效果；并且其中该Bti毒素是苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144Bti毒素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该组合产生杀昆虫效果；并且其中该Bt毒素是苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)毒素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该组合产生杀昆虫效果；并且其中该Btk毒素是苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19Btk毒素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该组合产生杀昆虫效果；并且其中该Bt毒素是苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)毒素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该组合产生杀昆虫效果；并且其中该Btt毒素是苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176Btt毒素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该组合产生杀昆虫效果；并且其中CRIP与Bt毒素的比率是约10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该组合产生杀昆虫效果；并且其中Bt毒素与CRIP的比率是约1:1至约1:200。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该组合产生杀昆虫效果；并且其中Bt毒素与CRIP的比率是约1:115。
在一些实施方案中，本发明提供了包含至少一种CRIP和至少一种IA的组合，其中CRIP是TVP，IA是苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素；其中该组合产生杀昆虫效果；并且其中TVP包含与根据式(I)的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中该多肽包含相对于如SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列的至少一个氨基酸取代，并且其中X1为A、S或N；X2为R、Q或N；X3为T或P；X4为K或A；X5为R或A；Z1为T或A；X6为K或不存在；并且X7为G或不存在；并且其中如果Z1为T，则TVP为糖基化的。
在一些实施方案中，本文所述的CRIP和本文所述的Bt毒素的任何组合还可包含赋形剂。
包含以下CRIP中的一者或多者：A1-A68和Bt毒素的任何前述组合或组合物可同时和/或顺序地并且在相同或单独的组合物中施用。CRIP与IA(即，一种或多种化学物质、分子、核苷酸、多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、毒素、毒药、毒物、杀昆虫剂、杀虫剂、有机化合物、无机化合物、原核生物或真核生物，以及由该原核生物或真核生物产生的药剂)的比率将取决于所针对的昆虫害虫和使用者的需要。
此外，包含CRIP和Bt毒素的任何前述组合或组合物可与其他化合物同时或依次施用于待处理的作物区或植物。例如，在一些实施方案中，这些化合物可以是肥料、除草剂、冷冻保护剂、表面活性剂、洗涤剂、杀虫皂、休眠油、聚合物和/或定时释放或可生物降解的载体制剂，其允许在单次施用该制剂后对靶区域进行长期投药。其他化合物还可以是选择性除草剂、化学杀昆虫剂、杀病毒剂、杀微生物剂、杀变形虫剂、杀虫剂、杀真菌剂、杀细菌剂、杀线虫剂、杀软体动物剂或几种这些制剂的组合，如果需要，与其他农业上可接受的载体、表面活性剂或在配制领域中通常使用的促进施用的助剂一起使用。在一些实施方案中，合适的载体和助剂可以是固体或者液体，并对应于通常用于配制技术的物质，例如天然或者再生的矿物质、溶剂、分散剂、湿润剂、增粘剂、粘合剂或者肥料。同样，可将任何上述组合、组合物或制剂制备成可食用的“诱饵”或塑造成害虫“陷阱”，以允许靶标害虫摄食或摄取该杀虫制剂。
使用本发明的方法
保护植物、植物部分和种子的方法
在一些实施方案中，本公开包括在农艺和/或非农艺应用中防治无脊椎害虫的方法，包括使无脊椎害虫或其环境、固体表面(包括植物表面或其部分)与生物有效量的一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合接触。
在一些实施方案中，本公开包括在农艺和/或非农艺应用中防治无脊椎害虫的方法，包括使无脊椎害虫或其环境、固体表面(包括植物表面或其部分)与生物有效量的一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合物或组合接触。包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的合适组合物的示例包括配制成组合物的液体溶液、乳液、粉末、颗粒、纳米颗粒、微粒或上述物质的组合，其中一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)存在于与一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)相同的组合物(例如，颗粒组合物的一部分)上或其中，或在分开的颗粒上。
在一些实施方案中，为了实现与本发明的化合物、组合或组合物接触以保护大田作物免受无脊椎害虫的侵害，通常在种植前将该化合物或组合物施用于作物的种子，施用于作物植物的叶子(例如，叶、茎、花、果实)，或者在种植作物之前或之后施用于土壤或其他生长介质。
接触方法的一个实施方案是通过喷涂。另选地，本发明的包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的颗粒组合物可施用于植物叶子或土壤。本发明的化合物还可通过植物吸收有效地递送，方法是通过使植物与包含本发明化合物的组合物接触，该组合物作为浸壤液体制剂、对土壤的颗粒制剂、育苗箱处理剂或移栽浸渍剂施用。值得注意的是本公开组合物的形式为浸壤液体制剂。还值得注意的是用于防治无脊椎害虫的方法，该方法包括使该无脊椎害虫或其环境与生物有效量的一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)接触，或与包含生物有效量的一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合物接触。还值得注意的是，在一些例示性实施方案中，该例示性方法包括其中环境是土壤，并且该组合物作为浸壤制剂施用至该土壤。还值得注意的是，一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)也通过局部施用到侵染场所而有效。其他接触方法包括通过以下方式施用本发明的化合物或组合物：直接喷施和滞留喷施、空气喷施、凝胶、种子包衣、微胶囊化、全身摄入、诱饵、耳标、大丸剂、喷雾器、熏剂、气溶胶、粉剂，以及许多其他方式。接触方法的一个实施方案是包含本发明的化合物或组合物、尺寸上稳定的肥料颗粒、棒或片剂。本发明的化合物也可浸渍到用于制造无脊椎动物防治装置的材料中(例如，昆虫网、施用到衣服上、施用到蜡烛制剂中等)。
在一些实施方案中，包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合也用于种子处理以保护种子免受无脊椎害虫侵害。在本公开和权利要求的上下文中，处理种子是指使种子与生物有效量的包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合接触，该组合通常被配制成本发明的组合物。这种种子处理保护种子免受土壤无脊椎害虫的侵害，并且通常还可保护从发芽的种子发育而来的幼苗的根和与土壤接触的其他植物部分。种子处理也可通过对发育的植物内包含以下物质的组合的易位来提供对叶子的保护：一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)。种子处理可应用于所有类型的种子，包括那些通过遗传转化表达特殊性状的植物将发芽的种子。此外，包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合可转化入植物或其部分，例如植物细胞或植物种子，其已经用对无脊椎害虫有毒的蛋白质诸如苏云金芽孢杆菌毒素或蛋白质晶体，或表达除草剂抗性的蛋白质诸如提供对草甘膦的抗性的草甘膦乙酰转移酶转化。代表性示例包括表达对无脊椎害虫有毒的蛋白质的那些蛋白质，诸如苏云金芽孢杆菌毒素和/或蛋白质晶体，或表达除草剂抗性的那些蛋白质，诸如提供对草甘膦的抗性的草甘膦乙酰转移酶。
种子处理的一种方法是在播种前用包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合(即，作为配制的组合物或组合)对种子喷施或撒粉。配制用于种子处理的组合物通常包含成膜剂或粘合剂。因此，通常，本公开的种子包衣组合物包含生物有效量的包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合，以及成膜剂或粘合剂。种子可通过以下方式来包衣：将可流动的混悬浓缩剂直接喷施到种子的滚床中，然后干燥该种子。另选地，可将诸如润湿的散剂、溶液剂、悬乳剂、水中的可乳化浓缩剂和乳剂的其他制剂类型喷施到种子上。这种工艺尤其可用于将膜包衣施加到种子。各种包衣机器和工艺是可供本领域的技术人员使用的。合适的工艺包括在P.Kosters等人，Seed Treatment:Progress andProspects，1994BCPC Monograph No.57，以及其中列出的参考文献中列出的那些工艺，其公开内容全文以引用方式并入本文。
经处理的种子通常包含含有一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合，其量范围为约0.01g-1kg/100kg种子(即,处理前种子的约0.00001重量％-1重量％)。配制用于种子处理的可流动的混悬剂通常包含约0.5％至约70％的活性成分、约0.5％至约30％的成膜粘合剂、约0.5％至约20％的分散剂、0％至约5％的增稠剂、0％至约5％的颜料和/或染料、0％至约2％的消泡剂、0％至约1％的防腐剂以及0％至约75％的挥发性液体稀释剂。
使用组合和组合物的方法
在一些实施方案中，本发明提供了使用包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合的方法，其中该组合产生杀昆虫效果以防治昆虫，该方法包括，提供包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合；然后将所述组合施用到昆虫所在处。
在一些实施方案中，本发明提供了使用包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)；并且其中该组合产生杀昆虫效果以防治昆虫，其中该昆虫选自由以下项组成的组：葡萄蔓天蛾(天蛾幼虫)(Eumorpha achemon)；苜蓿粉蝶(Colias eurytheme)；粉斑螟蛾(Caudra cautella)；白条卷叶蛾(Amorbia humerosana)；粘虫(灰翅夜蛾属(Spodoptera)物种，例如甜菜夜蛾、草地贪夜蛾、棉叶虫、美洲粘虫(Pseudaletia unipuncta))；朝鲜蓟羽蛾(Platyptilia carduidactyla)；杜鹃花毛虫(Datana major)；结草虫(常绿树蓑蛾(Thyridopteryx ephemeraeformis))；香蕉蛾(木豹蛾(Hypercompe scribonia))；香蕉弄蝶(Erionota thrax)；黑头长翅卷蛾(Acleris gloverana)；加州槲蛾(Phryganidiacalifornica)；春尺蠖(Paleacrita merriccata)；樱小食心虫(Grapholita packardi)；圹水螟(Nymphula stagnata)；柑橘地老虎(Xylomyges curialis)；苹果蠹蛾(Cydiapomonella)；蔓越莓果虫(Acrobasis vaccinii)；卷心菜薄翅野螟(Evergestisrimosalis)；切根虫(夜蛾科(Noctuid)物种，小地老虎(Agrotis ipsilon))；冷杉合毒蛾(Orgyia pseudotsugata)；木薯天蛾(天蛾幼虫)(Erinnyis ello)；榆树尺蠖(Ennomossubsignaria)；欧洲葡萄蔓蛾(Lobesia botrana)；欧洲弄蝶(Thymelicus lineola)(EssexSkipper)；美国白蛾(Melissopus latiferreanus)；蔷薇黄卷蛾(Archips rosanus)；果树黄卷蛾(Archips argyrospilia)、葡萄卷叶蛾(Paralobesia viteana)；荷兰石竹小卷蛾(Platynota stultana)；葡萄叶雕叶虫(Harrisina americana)(仅为步行虫科(ground))；苜蓿绿夜蛾(Plathypena scabra)；绿条纹枫虫(Dryocampa rubicunda)；Gummosos-Batrachedra Comosae(Hodges)；舞毒蛾(Lymantria dispar)；铁杉尺蠖(Lambdinafiscellaria)；天蛾幼虫(烟草天蛾属(Manduca)物种)；菜粉蝶(Pieris rapae)；玉米天蚕蛾(Automeris io)；贾克松色卷蛾(Choristoneura pinus)；苹果浅褐卷叶蛾(Epiphyaspostvittana)；甜瓜绢野螟(Diaphania hyalinata)；含羞草雕蛾(Homadaulaanisocentra)；蔷薇斜条卷叶蛾(Choristoneura rosaceana)；欧洲夹竹桃蛾(Syntomeidaepilais)；荷兰石竹小卷蛾(Playnota stultana)；杂食尺蠖(Sabulodes aegrotata)；大凤蝶(Papilio cresphontes)；桔带卷蛾(Argyrotaenia citrana)；梨小食心虫(Grapholitamolesta)；桃枝麦蛾(Anarsia lineatella)；松蝴蝶(Neophasia menapia)；美洲棉铃虫；红带卷蛾(Argyrotaenia velutinana)；红疣天社蛾(Schizura concinna)；RindwormComplex(各种鳞翅目昆虫(Leps.))；鞍背刺蛾毛虫(Sibine stimulea)；鞍突毛虫(Heterocampa guttivitta)；盐泽灯蛾(Estigmene acrea)；草地螟(草螟属(Crambus)物种)；尺蠖(Ennomos subsignaria)；秋星尺蠖(Alsophila pometaria)；云杉色卷蛾(Choristoneura fumiferana)；黄褐天幕毛虫(各种枯叶蛾科)；菠萝褐灰蝶(Geyr)(Theclabasilides)；烟草天蛾；烟草粉斑螟(Ephestia elutella)；簇状苹果芽蛾(Platynotaidaeusalis)；桃蚜蛾(Anarsia lineatella)；疆夜蛾(Peridroma saucia)；杂色卷叶蛾(Platynota flavedana)；黎豆夜蛾(Anticarsia gemmatalis)；胡桃毛虫(Datanaintegerrima)；结网毛虫(Hyphantria cunea)；西部栎柳毒蛾(Orgyia vetusta)；南方玉米螟(Diatraea crambidoides)；玉米穗虫；甘薯小象虫；胡椒茎象甲；桔根象甲；草莓根象甲；美核桃象甲；榛象甲；稻水象甲；苜蓿叶象甲；车轴草叶象；茶枝小蠹虫；根象；甘蔗犀金龟；咖啡果小蠹；一年生蓝草象甲(Listronotus maculicollis)；亚洲花园甲虫(Maladeracastanea)；欧洲金龟子(Rhizotroqus majalis)；绿花金龟(Cotinis nitida)；日本丽金龟(Popillia japonica)；五月甲虫或六月甲虫(六月鳃角金龟(Phyllophaga)物种)；北方独角仙(Cyclocephala borealis)；东方丽金龟(Anomala orientalis)；南方独角仙(Cyclocephala lurida)；谷象(象甲总科(Curculionoidea))；埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟(Chilo suppressalis)；尖音库蚊；致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)；玉米根虫(Diabrotica virgifera)；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)；亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)；欧洲玉米螟(Ostrinia nubilalis)；棉红铃虫(Pectinophora gossypiella)；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲(Xanthogalerucaluteola)。
在一些实施方案中，本发明提供了使用包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合的方法；并且其中该组合产生杀昆虫效果以防治苏云金芽孢杆菌毒素抗性昆虫，该方法包括，提供包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合；然后将所述组合施用到昆虫所在处。
在一些实施方案中，本发明提供了使用包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)，其中该组合产生杀昆虫效果以防治苏云金芽孢杆菌毒素抗性昆虫，其中该苏云金芽孢杆菌毒素抗性昆虫选自由以下项组成的组：埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟；尖音库蚊；致倦库蚊；玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；棉红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，包括将杀虫有效量的包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合施用到害虫所在处或易受害虫攻击的植物或动物，其中该组合产生杀昆虫效果；其中每种杀昆虫肽的组合产生杀昆虫效果。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，包括将杀虫有效量的包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合施用到害虫所在处或易受害虫攻击的植物或动物；其中每种杀昆虫肽的组合产生杀昆虫效果；其中该害虫选自由以下项组成的组：葡萄蔓天蛾(天蛾幼虫)；苜蓿粉蝶；粉斑螟蛾；白条卷叶蛾；粘虫(灰翅夜蛾属物种，例如甜菜夜蛾、草地贪夜蛾、棉叶虫、美洲粘虫；朝鲜蓟羽蛾；杜鹃花毛虫；结草虫(常绿树蓑蛾)；香蕉蛾(木豹蛾)；香蕉弄蝶；黑头长翅卷蛾；加州槲蛾；春尺蠖；樱小食心虫；圹水螟；柑橘地老虎；苹果蠹蛾；蔓越莓果虫；卷心菜薄翅野螟；切根虫(夜蛾科物种，小地老虎)；冷杉合毒蛾；木薯天蛾(天蛾幼虫)；榆树尺蠖；欧洲葡萄蔓蛾；欧洲弄蝶；美国白蛾；蔷薇黄卷蛾；果树黄卷蛾、葡萄卷叶蛾；荷兰石竹小卷蛾；葡萄叶雕叶虫(仅为步行虫科)；苜蓿绿夜蛾；绿条纹枫虫；Gummosos-Batrachedra Comosae(Hodges)；舞毒蛾；铁杉尺蠖；天蛾幼虫(烟草天蛾属物种)；菜粉蝶；玉米天蚕蛾；贾克松色卷蛾；苹果浅褐卷叶蛾；甜瓜绢野螟；含羞草雕蛾；蔷薇斜条卷叶蛾；欧洲夹竹桃蛾；荷兰石竹小卷蛾；杂食尺蠖；大凤蝶；桔带卷蛾；梨小食心虫；桃枝麦蛾；松蝴蝶；美洲棉铃虫；红带卷蛾；红疣天社蛾；Rindworm Complex(各种鳞翅目昆虫)；鞍背刺蛾毛虫；鞍突毛虫；盐泽灯蛾；草地螟(草螟属物种)；尺蠖；秋星尺蠖；云杉色卷蛾；黄褐天幕毛虫(各种枯叶蛾科)；菠萝褐灰蝶(Geyr)；烟草天蛾；烟草粉斑螟；簇状苹果芽蛾；桃蚜蛾；疆夜蛾；杂色卷叶蛾；黎豆夜蛾；胡桃毛虫；结网毛虫；西部栎柳毒蛾；南方玉米螟；玉米穗虫；甘薯小象虫；胡椒茎象甲；桔根象甲；草莓根象甲；美核桃象甲；榛象甲；稻水象甲；苜蓿叶象甲；车轴草叶象；茶枝小蠹虫；根象；甘蔗犀金龟；咖啡果小蠹；一年生蓝草象甲；亚洲花园甲虫；欧洲金龟子；绿花金龟；日本丽金龟；五月甲虫或六月甲虫(六月鳃角金龟物种)；北方独角仙；东方丽金龟；南方独角仙；谷象(象甲总科)；埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟；尖音库蚊；致倦库蚊；玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；棉红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，包括将杀虫有效量的包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A68)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合施用到害虫所在处或易受害虫攻击的植物或动物；其中每种杀昆虫肽的组合产生杀昆虫效果；其中该害虫选自由以下项组成的组：埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟；尖音库蚊；致倦库蚊；玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；棉红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲。
组合：Bt毒素和WT-Ta1b的示例性组合
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及细菌毒素，其中该细菌毒素是苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分离自以下项的一种或多种发酵固体、孢子或毒素：苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)；苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)；苏云金芽孢杆菌鲇泽变种；苏云金芽孢杆菌鲇泽/太平洋变种；苏云金芽孢杆菌阿莱变种；苏云金芽孢杆菌阿马金变种；苏云金芽孢杆菌安达楼变种；苏云金芽孢杆菌阿根廷变种；苏云金芽孢杆菌asturiensis变种；苏云金芽孢杆菌azorensis变种；苏云金芽孢杆菌balearica变种；苏云金芽孢杆菌berliner变种；苏云金芽孢杆菌bolivia变种；苏云金芽孢杆菌brasilensis变种；苏云金芽孢杆菌喀麦隆变种；苏云金芽孢杆菌加拿大变种；苏云金芽孢杆菌chanpaisis变种；苏云金芽孢杆菌中华变种；苏云金芽孢杆菌科尔默变种；苏云金芽孢杆菌coreanensis变种；苏云金芽孢杆菌达尔可他变种；苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特变种；苏云金芽孢杆菌松蜀变种；苏云金芽孢杆菌杀虫变种；苏云金芽孢杆菌杀虫/亚毒变种；苏云金芽孢杆菌幕虫变种；苏云金芽孢杆菌fukuokaensis变种；苏云金芽孢杆菌galechiae变种；苏云金芽孢杆菌蜡螟变种；苏云金芽孢杆菌graciosensis变种；苏云金芽孢杆菌贵阳变种；苏云金芽孢杆菌higo变种；苏云金芽孢杆菌华中变种；苏云金芽孢杆菌iberica变种；苏云金芽孢杆菌印第安变种；苏云金芽孢杆菌以色列/励木变种；苏云金芽孢杆菌日本变种；苏云金芽孢杆菌jegathesan变种；苏云金芽孢杆菌景洪变种；苏云金芽孢杆菌肯尼亚变种；苏云金芽孢杆菌kim变种；苏云金芽孢杆菌kumamtoensis变种；苏云金芽孢杆菌kunthalanags3变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX24变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX27变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX28变种；苏云金芽孢杆菌九州变种；苏云金芽孢杆菌李氏变种；苏云金芽孢杆菌londrina变种；苏云金芽孢杆菌malayensis变种；苏云金芽孢杆菌medellin变种；苏云金芽孢杆菌墨西哥变种；苏云金芽孢杆菌mogi变种；苏云金芽孢杆菌蒙特雷变种；苏云金芽孢杆菌莫里逊变种；苏云金芽孢杆菌muju变种；苏云金芽孢杆菌navarensis变种；苏云金芽孢杆菌neoleonensis变种；苏云金芽孢杆菌nigeriensis变种；苏云金芽孢杆菌novosibirsk变种；苏云金芽孢杆菌ostriniae变种；苏云金芽孢杆菌oswaldocruzi变种；苏云金芽孢杆菌pahangi变种；苏云金芽孢杆菌巴基斯坦变种；苏云金芽孢杆菌palmanyolensis变种；苏云金芽孢杆菌pingluonsis变种；苏云金芽孢杆菌pirenaica变种；苏云金芽孢杆菌poloniensis变种；苏云金芽孢杆菌pondicheriensis变种；苏云金芽孢杆菌pulsiensis变种；苏云金芽孢杆菌rongseni变种；苏云金芽孢杆菌roskildiensis变种；苏云金芽孢杆菌圣地亚哥变种；苏云金芽孢杆菌汉城变种；苏云金芽孢杆菌山东变种；苏云金芽孢杆菌锡卢变种；苏云金芽孢杆菌sinensis变种；苏云金芽孢杆菌sooncheon变种；苏云金芽孢杆菌猝倒变种；苏云金芽孢杆菌猝倒/松蜀变种；苏云金芽孢杆菌亚毒变种；苏云金芽孢杆菌sumiyoshiensis变种；苏云金芽孢杆菌sylvestriensis变种；苏云金芽孢杆菌thailandensis变种；苏云金芽孢杆菌汤普逊变种；苏云金芽孢杆菌苏云金变种；苏云金芽孢杆菌励木变种；苏云金芽孢杆菌toguchini变种；苏云金芽孢杆菌东北变种；苏云金芽孢杆菌多窝变种；苏云金芽孢杆菌托马诺夫变种；苏云金芽孢杆菌vazensis变种；苏云金芽孢杆菌wratislaviensis变种；苏云金芽孢杆菌武汉变种；苏云金芽孢杆菌xiaguangiensis变种；苏云金芽孢杆菌yosoo变种；苏云金芽孢杆菌云南变种；苏云金芽孢杆菌肇东变种；和苏云金芽孢杆菌konkukian变种毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分离自以下项的一种或多种发酵固体、孢子或毒素：苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)；苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及Bt毒素，其中Bt毒素是伴孢晶体毒素、分泌蛋白、β-外毒素、41.9kDa杀昆虫毒素、sphaericolysin、蜂房杆菌溶素或增效蛋白样蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及伴孢晶体毒素，其中该伴孢晶体毒素是δ-内毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry家族蛋白、二元Bin样家族毒素、ETX_MTX2样家族毒素、毒素-10家族毒素、气单胞菌溶素家族毒素或溶细胞素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry毒素、杀蚊Cry毒素(Mtx)、二元样(Bin)毒素或Cyt毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry毒素或Cyt毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素选自由以下项组成的组：Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A样、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb样、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H样、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I样、Cry1I样、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1样、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A样、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba样、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8样、Cry8样、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa样、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9样、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A样、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa样、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20样、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43样、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1或Cry78Aa1、Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa样、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba样、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B样、Cyt2Ca1和Cyt3Aa1。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及Cry毒素或Cyt毒素，其中该Cry毒素或Cyt毒素具有根据SEQ ID NO:412-481的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白，其中该分泌蛋白是营养期杀昆虫蛋白(Vip)、分泌期杀昆虫蛋白(Sip)、Bin样家族蛋白或ETX_MTX2家族蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白，并且其中该分泌蛋白是Vip。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及Vip，其中该Vip是Vip 1家族蛋白、Vip 2家族蛋白、Vip 3家族蛋白或Vip 4家族蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及Vip，其中该Vip选自由以下项组成的组：Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4和Vip4Aa1。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及Vip，其中该Vip蛋白具有根据SEQ ID NO:482-587所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19、苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176和苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素；以及具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，以及从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
组合：Bt毒素和TVP的示例性组合
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及细菌毒素，其中该细菌毒素是苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分离自以下项的一种或多种发酵固体、孢子或毒素：苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)；苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)；苏云金芽孢杆菌鲇泽变种；苏云金芽孢杆菌鲇泽/太平洋变种；苏云金芽孢杆菌阿莱变种；苏云金芽孢杆菌阿马金变种；苏云金芽孢杆菌安达楼变种；苏云金芽孢杆菌阿根廷变种；苏云金芽孢杆菌asturiensis变种；苏云金芽孢杆菌azorensis变种；苏云金芽孢杆菌balearica变种；苏云金芽孢杆菌berliner变种；苏云金芽孢杆菌bolivia变种；苏云金芽孢杆菌brasilensis变种；苏云金芽孢杆菌喀麦隆变种；苏云金芽孢杆菌加拿大变种；苏云金芽孢杆菌chanpaisis变种；苏云金芽孢杆菌中华变种；苏云金芽孢杆菌科尔默变种；苏云金芽孢杆菌coreanensis变种；苏云金芽孢杆菌达尔可他变种；苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特变种；苏云金芽孢杆菌松蜀变种；苏云金芽孢杆菌杀虫变种；苏云金芽孢杆菌杀虫/亚毒变种；苏云金芽孢杆菌幕虫变种；苏云金芽孢杆菌fukuokaensis变种；苏云金芽孢杆菌galechiae变种；苏云金芽孢杆菌蜡螟变种；苏云金芽孢杆菌graciosensis变种；苏云金芽孢杆菌贵阳变种；苏云金芽孢杆菌higo变种；苏云金芽孢杆菌华中变种；苏云金芽孢杆菌iberica变种；苏云金芽孢杆菌印第安变种；苏云金芽孢杆菌以色列/励木变种；苏云金芽孢杆菌日本变种；苏云金芽孢杆菌jegathesan变种；苏云金芽孢杆菌景洪变种；苏云金芽孢杆菌肯尼亚变种；苏云金芽孢杆菌kim变种；苏云金芽孢杆菌kumamtoensis变种；苏云金芽孢杆菌kunthalanags3变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX24变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX27变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX28变种；苏云金芽孢杆菌九州变种；苏云金芽孢杆菌李氏变种；苏云金芽孢杆菌londrina变种；苏云金芽孢杆菌malayensis变种；苏云金芽孢杆菌medellin变种；苏云金芽孢杆菌墨西哥变种；苏云金芽孢杆菌mogi变种；苏云金芽孢杆菌蒙特雷变种；苏云金芽孢杆菌莫里逊变种；苏云金芽孢杆菌muju变种；苏云金芽孢杆菌navarensis变种；苏云金芽孢杆菌neoleonensis变种；苏云金芽孢杆菌nigeriensis变种；苏云金芽孢杆菌novosibirsk变种；苏云金芽孢杆菌ostriniae变种；苏云金芽孢杆菌oswaldocruzi变种；苏云金芽孢杆菌pahangi变种；苏云金芽孢杆菌巴基斯坦变种；苏云金芽孢杆菌palmanyolensis变种；苏云金芽孢杆菌pingluonsis变种；苏云金芽孢杆菌pirenaica变种；苏云金芽孢杆菌poloniensis变种；苏云金芽孢杆菌pondicheriensis变种；苏云金芽孢杆菌pulsiensis变种；苏云金芽孢杆菌rongseni变种；苏云金芽孢杆菌roskildiensis变种；苏云金芽孢杆菌圣地亚哥变种；苏云金芽孢杆菌汉城变种；苏云金芽孢杆菌山东变种；苏云金芽孢杆菌锡卢变种；苏云金芽孢杆菌sinensis变种；苏云金芽孢杆菌sooncheon变种；苏云金芽孢杆菌猝倒变种；苏云金芽孢杆菌猝倒/松蜀变种；苏云金芽孢杆菌亚毒变种；苏云金芽孢杆菌sumiyoshiensis变种；苏云金芽孢杆菌sylvestriensis变种；苏云金芽孢杆菌thailandensis变种；苏云金芽孢杆菌汤普逊变种；苏云金芽孢杆菌苏云金变种；苏云金芽孢杆菌励木变种；苏云金芽孢杆菌toguchini变种；苏云金芽孢杆菌东北变种；苏云金芽孢杆菌多窝变种；苏云金芽孢杆菌托马诺夫变种；苏云金芽孢杆菌vazensis变种；苏云金芽孢杆菌wratislaviensis变种；苏云金芽孢杆菌武汉变种；苏云金芽孢杆菌xiaguangiensis变种；苏云金芽孢杆菌yosoo变种；苏云金芽孢杆菌云南变种；苏云金芽孢杆菌肇东变种；和苏云金芽孢杆菌konkukian变种毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分离自以下项的一种或多种发酵固体、孢子或毒素：苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)；苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及Bt毒素，其中Bt毒素是伴孢晶体毒素、分泌蛋白、β-外毒素、41.9kDa杀昆虫毒素、sphaericolysin、蜂房杆菌溶素或增效蛋白样蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及伴孢晶体毒素，其中该伴孢晶体毒素是δ-内毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry家族蛋白、二元Bin样家族毒素、ETX_MTX2样家族毒素、毒素-10家族毒素、气单胞菌溶素家族毒素或溶细胞素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry毒素、杀蚊Cry毒素(Mtx)、二元样(Bin)毒素或Cyt毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry毒素或Cyt毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素选自由以下项组成的组：Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A样、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb样、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H样、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I样、Cry1I样、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1样、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A样、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba样、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8样、Cry8样、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa样、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9样、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A样、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa样、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20样、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43样、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1或Cry78Aa1、Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa样、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba样、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B样、Cyt2Ca1和Cyt3Aa1。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及Cry毒素或Cyt毒素，其中该Cry毒素或Cyt毒素具有根据SEQ IDNO:412-481所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白，其中该分泌蛋白是营养期杀昆虫蛋白(Vip)、分泌期杀昆虫蛋白(Sip)、Bin样家族蛋白或ETX_MTX2家族蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白，并且其中该分泌蛋白是Vip。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及Vip，其中该Vip是Vip 1家族蛋白、Vip 2家族蛋白、Vip 3家族蛋白或Vip 4家族蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及Vip，其中该Vip选自由以下项组成的组：Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4和Vip4Aa1。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及Vip，其中该Vip蛋白具有根据SEQ ID NO:482-587所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19、苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176和苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素；以及具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19、苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176和苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素；以及具有根据SEQ ID NO:51所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:51所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:51所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:51所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:51所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，以及从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
组合：Bt毒素和AVP的示例性组合
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及细菌毒素，其中该细菌毒素是苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分离自以下项的一种或多种发酵固体、孢子或毒素：苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)；苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)；苏云金芽孢杆菌鲇泽变种；苏云金芽孢杆菌鲇泽/太平洋变种；苏云金芽孢杆菌阿莱变种；苏云金芽孢杆菌阿马金变种；苏云金芽孢杆菌安达楼变种；苏云金芽孢杆菌阿根廷变种；苏云金芽孢杆菌asturiensis变种；苏云金芽孢杆菌azorensis变种；苏云金芽孢杆菌balearica变种；苏云金芽孢杆菌berliner变种；苏云金芽孢杆菌bolivia变种；苏云金芽孢杆菌brasilensis变种；苏云金芽孢杆菌喀麦隆变种；苏云金芽孢杆菌加拿大变种；苏云金芽孢杆菌chanpaisis变种；苏云金芽孢杆菌中华变种；苏云金芽孢杆菌科尔默变种；苏云金芽孢杆菌coreanensis变种；苏云金芽孢杆菌达尔可他变种；苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特变种；苏云金芽孢杆菌松蜀变种；苏云金芽孢杆菌杀虫变种；苏云金芽孢杆菌杀虫/亚毒变种；苏云金芽孢杆菌幕虫变种；苏云金芽孢杆菌fukuokaensis变种；苏云金芽孢杆菌galechiae变种；苏云金芽孢杆菌蜡螟变种；苏云金芽孢杆菌graciosensis变种；苏云金芽孢杆菌贵阳变种；苏云金芽孢杆菌higo变种；苏云金芽孢杆菌华中变种；苏云金芽孢杆菌iberica变种；苏云金芽孢杆菌印第安变种；苏云金芽孢杆菌以色列/励木变种；苏云金芽孢杆菌日本变种；苏云金芽孢杆菌jegathesan变种；苏云金芽孢杆菌景洪变种；苏云金芽孢杆菌肯尼亚变种；苏云金芽孢杆菌kim变种；苏云金芽孢杆菌kumamtoensis变种；苏云金芽孢杆菌kunthalanags3变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX24变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX27变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX28变种；苏云金芽孢杆菌九州变种；苏云金芽孢杆菌李氏变种；苏云金芽孢杆菌londrina变种；苏云金芽孢杆菌malayensis变种；苏云金芽孢杆菌medellin变种；苏云金芽孢杆菌墨西哥变种；苏云金芽孢杆菌mogi变种；苏云金芽孢杆菌蒙特雷变种；苏云金芽孢杆菌莫里逊变种；苏云金芽孢杆菌muju变种；苏云金芽孢杆菌navarensis变种；苏云金芽孢杆菌neoleonensis变种；苏云金芽孢杆菌nigeriensis变种；苏云金芽孢杆菌novosibirsk变种；苏云金芽孢杆菌ostriniae变种；苏云金芽孢杆菌oswaldocruzi变种；苏云金芽孢杆菌pahangi变种；苏云金芽孢杆菌巴基斯坦变种；苏云金芽孢杆菌palmanyolensis变种；苏云金芽孢杆菌pingluonsis变种；苏云金芽孢杆菌pirenaica变种；苏云金芽孢杆菌poloniensis变种；苏云金芽孢杆菌pondicheriensis变种；苏云金芽孢杆菌pulsiensis变种；苏云金芽孢杆菌rongseni变种；苏云金芽孢杆菌roskildiensis变种；苏云金芽孢杆菌圣地亚哥变种；苏云金芽孢杆菌汉城变种；苏云金芽孢杆菌山东变种；苏云金芽孢杆菌锡卢变种；苏云金芽孢杆菌sinensis变种；苏云金芽孢杆菌sooncheon变种；苏云金芽孢杆菌猝倒变种；苏云金芽孢杆菌猝倒/松蜀变种；苏云金芽孢杆菌亚毒变种；苏云金芽孢杆菌sumiyoshiensis变种；苏云金芽孢杆菌sylvestriensis变种；苏云金芽孢杆菌thailandensis变种；苏云金芽孢杆菌汤普逊变种；苏云金芽孢杆菌苏云金变种；苏云金芽孢杆菌励木变种；苏云金芽孢杆菌toguchini变种；苏云金芽孢杆菌东北变种；苏云金芽孢杆菌多窝变种；苏云金芽孢杆菌托马诺夫变种；苏云金芽孢杆菌vazensis变种；苏云金芽孢杆菌wratislaviensis变种；苏云金芽孢杆菌武汉变种；苏云金芽孢杆菌xiaguangiensis变种；苏云金芽孢杆菌yosoo变种；苏云金芽孢杆菌云南变种；苏云金芽孢杆菌肇东变种；和苏云金芽孢杆菌konkukian变种毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分离自以下项的一种或多种发酵固体、孢子或毒素：苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)；苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及Bt毒素，其中Bt毒素是伴孢晶体毒素、分泌蛋白、β-外毒素、41.9kDa杀昆虫毒素、sphaericolysin、蜂房杆菌溶素或增效蛋白样蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及伴孢晶体毒素，其中该伴孢晶体毒素是δ-内毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry家族蛋白、二元Bin样家族毒素、ETX_MTX2样家族毒素、毒素-10家族毒素、气单胞菌溶素家族毒素或溶细胞素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry毒素、杀蚊Cry毒素(Mtx)、二元样(Bin)毒素或Cyt毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry毒素或Cyt毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素选自由以下项组成的组：Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A样、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb样、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H样、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I样、Cry1I样、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1样、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A样、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba样、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8样、Cry8样、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa样、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9样、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A样、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa样、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20样、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43样、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1或Cry78Aa1、Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa样、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba样、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B样、Cyt2Ca1和Cyt3Aa1。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及Cry毒素或Cyt毒素，其中该Cry毒素或Cyt毒素具有根据SEQ ID NO:412-481所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白，其中该分泌蛋白是营养期杀昆虫蛋白(Vip)、分泌期杀昆虫蛋白(Sip)、Bin样家族蛋白或ETX_MTX2家族蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白，并且其中该分泌蛋白是Vip。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及Vip，其中该Vip是Vip 1家族蛋白、Vip 2家族蛋白、Vip 3家族蛋白或Vip 4家族蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及Vip，其中该Vip选自由以下项组成的组：Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4和Vip4Aa1。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及Vip，其中该Vip蛋白具有根据SEQ ID NO:482-587所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19、苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176和苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素；以及具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，以及从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
组合：Bt毒素和Γ-CNTX-Pn1a的示例性组合
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及细菌毒素，其中该细菌毒素是苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分离自以下项的一种或多种发酵固体、孢子或毒素：苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)；苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)；苏云金芽孢杆菌鲇泽变种；苏云金芽孢杆菌鲇泽/太平洋变种；苏云金芽孢杆菌阿莱变种；苏云金芽孢杆菌阿马金变种；苏云金芽孢杆菌安达楼变种；苏云金芽孢杆菌阿根廷变种；苏云金芽孢杆菌asturiensis变种；苏云金芽孢杆菌azorensis变种；苏云金芽孢杆菌balearica变种；苏云金芽孢杆菌berliner变种；苏云金芽孢杆菌bolivia变种；苏云金芽孢杆菌brasilensis变种；苏云金芽孢杆菌喀麦隆变种；苏云金芽孢杆菌加拿大变种；苏云金芽孢杆菌chanpaisis变种；苏云金芽孢杆菌中华变种；苏云金芽孢杆菌科尔默变种；苏云金芽孢杆菌coreanensis变种；苏云金芽孢杆菌达尔可他变种；苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特变种；苏云金芽孢杆菌松蜀变种；苏云金芽孢杆菌杀虫变种；苏云金芽孢杆菌杀虫/亚毒变种；苏云金芽孢杆菌幕虫变种；苏云金芽孢杆菌fukuokaensis变种；苏云金芽孢杆菌galechiae变种；苏云金芽孢杆菌蜡螟变种；苏云金芽孢杆菌graciosensis变种；苏云金芽孢杆菌贵阳变种；苏云金芽孢杆菌higo变种；苏云金芽孢杆菌华中变种；苏云金芽孢杆菌iberica变种；苏云金芽孢杆菌印第安变种；苏云金芽孢杆菌以色列/励木变种；苏云金芽孢杆菌日本变种；苏云金芽孢杆菌jegathesan变种；苏云金芽孢杆菌景洪变种；苏云金芽孢杆菌肯尼亚变种；苏云金芽孢杆菌kim变种；苏云金芽孢杆菌kumamtoensis变种；苏云金芽孢杆菌kunthalanags3变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX24变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX27变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX28变种；苏云金芽孢杆菌九州变种；苏云金芽孢杆菌李氏变种；苏云金芽孢杆菌londrina变种；苏云金芽孢杆菌malayensis变种；苏云金芽孢杆菌medellin变种；苏云金芽孢杆菌墨西哥变种；苏云金芽孢杆菌mogi变种；苏云金芽孢杆菌蒙特雷变种；苏云金芽孢杆菌莫里逊变种；苏云金芽孢杆菌muju变种；苏云金芽孢杆菌navarensis变种；苏云金芽孢杆菌neoleonensis变种；苏云金芽孢杆菌nigeriensis变种；苏云金芽孢杆菌novosibirsk变种；苏云金芽孢杆菌ostriniae变种；苏云金芽孢杆菌oswaldocruzi变种；苏云金芽孢杆菌pahangi变种；苏云金芽孢杆菌巴基斯坦变种；苏云金芽孢杆菌palmanyolensis变种；苏云金芽孢杆菌pingluonsis变种；苏云金芽孢杆菌pirenaica变种；苏云金芽孢杆菌poloniensis变种；苏云金芽孢杆菌pondicheriensis变种；苏云金芽孢杆菌pulsiensis变种；苏云金芽孢杆菌rongseni变种；苏云金芽孢杆菌roskildiensis变种；苏云金芽孢杆菌圣地亚哥变种；苏云金芽孢杆菌汉城变种；苏云金芽孢杆菌山东变种；苏云金芽孢杆菌锡卢变种；苏云金芽孢杆菌sinensis变种；苏云金芽孢杆菌sooncheon变种；苏云金芽孢杆菌猝倒变种；苏云金芽孢杆菌猝倒/松蜀变种；苏云金芽孢杆菌亚毒变种；苏云金芽孢杆菌sumiyoshiensis变种；苏云金芽孢杆菌sylvestriensis变种；苏云金芽孢杆菌thailandensis变种；苏云金芽孢杆菌汤普逊变种；苏云金芽孢杆菌苏云金变种；苏云金芽孢杆菌励木变种；苏云金芽孢杆菌toguchini变种；苏云金芽孢杆菌东北变种；苏云金芽孢杆菌多窝变种；苏云金芽孢杆菌托马诺夫变种；苏云金芽孢杆菌vazensis变种；苏云金芽孢杆菌wratislaviensis变种；苏云金芽孢杆菌武汉变种；苏云金芽孢杆菌xiaguangiensis变种；苏云金芽孢杆菌yosoo变种；苏云金芽孢杆菌云南变种；苏云金芽孢杆菌肇东变种；和苏云金芽孢杆菌konkukian变种毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分离自以下项的一种或多种发酵固体、孢子或毒素：苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)；苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及Bt毒素，其中Bt毒素是伴孢晶体毒素、分泌蛋白、β-外毒素、41.9kDa杀昆虫毒素、sphaericolysin、蜂房杆菌溶素或增效蛋白样蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及伴孢晶体毒素，其中该伴孢晶体毒素是δ-内毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry家族蛋白、二元Bin样家族毒素、ETX_MTX2样家族毒素、毒素-10家族毒素、气单胞菌溶素家族毒素或溶细胞素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry毒素、杀蚊Cry毒素(Mtx)、二元样(Bin)毒素或Cyt毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry毒素或Cyt毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素选自由以下项组成的组：Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A样、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb样、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H样、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I样、Cry1I样、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1样、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A样、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba样、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8样、Cry8样、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa样、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9样、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A样、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa样、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20样、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43样、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1或Cry78Aa1、Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa样、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba样、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B样、Cyt2Ca1和Cyt3Aa1。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及Cry毒素或Cyt毒素，其中该Cry毒素或Cyt毒素具有根据SEQ ID NO:412-481所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白，其中该分泌蛋白是营养期杀昆虫蛋白(Vip)、分泌期杀昆虫蛋白(Sip)、Bin样家族蛋白或ETX_MTX2家族蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白，并且其中该分泌蛋白是Vip。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及Vip，其中该Vip是Vip 1家族蛋白、Vip2家族蛋白、Vip 3家族蛋白或Vip 4家族蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及Vip，其中该Vip选自由以下项组成的组：Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4和Vip4Aa1。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及Vip，其中该Vip蛋白具有根据SEQ ID NO:482-587所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19、苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176和苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素；以及具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，以及具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素，以及从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
组合：真菌毒素和U+2-ACTX-Hv1a的示例性组合
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及真菌毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及真菌毒素，其中该真菌毒素是子囊菌真菌毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及真菌毒素，其中该真菌毒素是刺束梗孢属毒素、多孔囊菌属毒素；白僵菌属毒素；Beejasamuha毒素；冬虫夏草毒素；Coremiopsis毒素；侧齿霉属毒素；球束梗孢属毒素；厚盖霉属毒素；Insecticola毒素；棒束孢属毒素；蜡蚧菌属毒素；Microhilum毒素；Phytocordyceps毒素；拟球束梗孢属毒素；Rotiferophthora毒素；拟青霉属毒素；或虫壳属毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及真菌生物或来自其的毒素，其中所述真菌生物或来自其的毒素选自下列属：白僵菌属；绿僵菌属；拟青霉属；蜡蚧菌属；野村菌属；棒束孢属；被毛孢属；Sorosporella；曲霉属；Cordiceps；虫霉属；虫瘟霉属；帮斗蛤属；噬虫霉属；耳霉属和蛙粪霉属。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及白僵菌毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及下列毒素之一：白色白僵菌毒素；多形白僵菌毒素；Beauveria arenaria毒素；Beauveria asiatica毒素；Beauveria australis毒素；球孢白僵菌毒素；球孢虫草毒素；布朗尼氏白僵菌毒素；Beauveria brumptii毒素；苏格兰白僵菌毒素；凯罗门白僵菌毒素；Beauveria coccorum毒素；Beauveria cretacea毒素；柱孢白僵菌毒素；Beauveriadelacroixii毒素；致密白僵菌毒素；Beauveria dependens毒素；Beauveria doryphorae毒素；Beauveria effusa毒素；Beauveria epigaea毒素；猫棒束孢白僵菌毒素；Beauveriageodes毒素；小球孢白僵菌毒素；Beauveria heimii毒素；Beauveria hoplocheli毒素；Beauveria kipukae毒素；Beauveria laxa毒素；Beauveria malawiensis毒素；Beauveriamedogensis毒素；Beauveria melolonthae毒素；Beauveria nubicola毒素；稻米白僵菌毒素；Beauveria paradoxa毒素；Beauveria paranensis毒素；Beauveria parasitica毒素；Beauveria petelotii毒素；假球孢白僵菌毒素；Beauveria rileyi毒素；Beauveria rubra毒素；Beauveria shiotae毒素；Beauveria sobolifera毒素；Beauveria spicata毒素；Beauveria stephanoderis毒素；Beauveria sulfurescens毒素；Beauveria sungii毒素；纤细白僵菌毒素；Beauveria tundrensis毒素；粘孢白僵菌毒素；伊拉克白僵菌毒素；蠕孢白僵菌毒素；Beauveria vexans毒素；Beauveria viannai毒素；或Beauveria virella毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及球孢白僵菌毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及球孢白僵菌毒素，其中该球孢白僵菌毒素是白僵菌素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及白僵菌素，其中该白僵菌素具有化学式C45H57N3O9。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及白僵菌素，其中该白僵菌素是具有化学式C46H59N3O9的“白僵菌素A”毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及白僵菌素毒素，其中该白僵菌素毒素是具有化学式C45H57N3O9的白僵菌素毒素；具有化学式C46H59N3O9的白僵菌素A毒素；或具有化学式C47H61N3O9的白僵菌素B毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及白僵菌素，其中该白僵菌素是具有化学式C47H61N3O9的“白僵菌素B”毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及球孢白僵菌生物体。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及从球孢白僵菌生物体分离的孢子。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及球孢白僵菌生物体，其中该球孢白僵菌生物体为球孢白僵菌菌株ANT-03。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及从球孢白僵菌生物体分离的孢子，其中该球孢白僵菌孢子是球孢白僵菌菌株ANT-03孢子。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及子囊菌真菌毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及虫草科真菌毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及刺束梗孢属毒素、多孔囊菌属毒素；白僵菌属毒素；Beejasamuha毒素；冬虫夏草毒素；Coremiopsis毒素；侧齿霉属毒素；球束梗孢属毒素；厚盖霉属毒素；Insecticola毒素；棒束孢属毒素；蜡蚧菌属毒素；Microhilum毒素；Phytocordyceps毒素；拟球束梗孢属毒素；Rotiferophthora毒素；拟青霉属毒素；或虫壳属毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：球孢白僵菌菌株ANT-03孢子，以及具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及球孢白僵菌菌株ANT-03孢子，其中该组合或组合物包含一定浓度的球孢白僵菌菌株ANT-03孢子，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及球孢白僵菌菌株ANT-03孢子，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ IDNO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
组合：Bt毒素和U+2-ACTX-Hv1a的示例性组合
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及细菌毒素，其中该细菌毒素是苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分离自以下项的一种或多种发酵固体、孢子或毒素：苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)；苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)；苏云金芽孢杆菌鲇泽变种；苏云金芽孢杆菌鲇泽/太平洋变种；苏云金芽孢杆菌阿莱变种；苏云金芽孢杆菌阿马金变种；苏云金芽孢杆菌安达楼变种；苏云金芽孢杆菌阿根廷变种；苏云金芽孢杆菌asturiensis变种；苏云金芽孢杆菌azorensis变种；苏云金芽孢杆菌balearica变种；苏云金芽孢杆菌berliner变种；苏云金芽孢杆菌bolivia变种；苏云金芽孢杆菌brasilensis变种；苏云金芽孢杆菌喀麦隆变种；苏云金芽孢杆菌加拿大变种；苏云金芽孢杆菌chanpaisis变种；苏云金芽孢杆菌中华变种；苏云金芽孢杆菌科尔默变种；苏云金芽孢杆菌coreanensis变种；苏云金芽孢杆菌达尔可他变种；苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特变种；苏云金芽孢杆菌松蜀变种；苏云金芽孢杆菌杀虫变种；苏云金芽孢杆菌杀虫/亚毒变种；苏云金芽孢杆菌幕虫变种；苏云金芽孢杆菌fukuokaensis变种；苏云金芽孢杆菌galechiae变种；苏云金芽孢杆菌蜡螟变种；苏云金芽孢杆菌graciosensis变种；苏云金芽孢杆菌贵阳变种；苏云金芽孢杆菌higo变种；苏云金芽孢杆菌华中变种；苏云金芽孢杆菌iberica变种；苏云金芽孢杆菌印第安变种；苏云金芽孢杆菌以色列/励木变种；苏云金芽孢杆菌日本变种；苏云金芽孢杆菌jegathesan变种；苏云金芽孢杆菌景洪变种；苏云金芽孢杆菌肯尼亚变种；苏云金芽孢杆菌kim变种；苏云金芽孢杆菌kumamtoensis变种；苏云金芽孢杆菌kunthalanags3变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX24变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX27变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX28变种；苏云金芽孢杆菌九州变种；苏云金芽孢杆菌李氏变种；苏云金芽孢杆菌londrina变种；苏云金芽孢杆菌malayensis变种；苏云金芽孢杆菌medellin变种；苏云金芽孢杆菌墨西哥变种；苏云金芽孢杆菌mogi变种；苏云金芽孢杆菌蒙特雷变种；苏云金芽孢杆菌莫里逊变种；苏云金芽孢杆菌muju变种；苏云金芽孢杆菌navarensis变种；苏云金芽孢杆菌neoleonensis变种；苏云金芽孢杆菌nigeriensis变种；苏云金芽孢杆菌novosibirsk变种；苏云金芽孢杆菌ostriniae变种；苏云金芽孢杆菌oswaldocruzi变种；苏云金芽孢杆菌pahangi变种；苏云金芽孢杆菌巴基斯坦变种；苏云金芽孢杆菌palmanyolensis变种；苏云金芽孢杆菌pingluonsis变种；苏云金芽孢杆菌pirenaica变种；苏云金芽孢杆菌poloniensis变种；苏云金芽孢杆菌pondicheriensis变种；苏云金芽孢杆菌pulsiensis变种；苏云金芽孢杆菌rongseni变种；苏云金芽孢杆菌roskildiensis变种；苏云金芽孢杆菌圣地亚哥变种；苏云金芽孢杆菌汉城变种；苏云金芽孢杆菌山东变种；苏云金芽孢杆菌锡卢变种；苏云金芽孢杆菌sinensis变种；苏云金芽孢杆菌sooncheon变种；苏云金芽孢杆菌猝倒变种；苏云金芽孢杆菌猝倒/松蜀变种；苏云金芽孢杆菌亚毒变种；苏云金芽孢杆菌sumiyoshiensis变种；苏云金芽孢杆菌sylvestriensis变种；苏云金芽孢杆菌thailandensis变种；苏云金芽孢杆菌汤普逊变种；苏云金芽孢杆菌苏云金变种；苏云金芽孢杆菌励木变种；苏云金芽孢杆菌toguchini变种；苏云金芽孢杆菌东北变种；苏云金芽孢杆菌多窝变种；苏云金芽孢杆菌托马诺夫变种；苏云金芽孢杆菌vazensis变种；苏云金芽孢杆菌wratislaviensis变种；苏云金芽孢杆菌武汉变种；苏云金芽孢杆菌xiaguangiensis变种；苏云金芽孢杆菌yosoo变种；苏云金芽孢杆菌云南变种；苏云金芽孢杆菌肇东变种；和苏云金芽孢杆菌konkukian变种毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分离自以下项的一种或多种发酵固体、孢子或毒素：苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)；苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及Bt毒素，其中Bt毒素是伴孢晶体毒素、分泌蛋白、β-外毒素、41.9kDa杀昆虫毒素、sphaericolysin、蜂房杆菌溶素或增效蛋白样蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及伴孢晶体毒素，其中该伴孢晶体毒素是δ-内毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry家族蛋白、二元Bin样家族毒素、ETX_MTX2样家族毒素、毒素-10家族毒素、气单胞菌溶素家族毒素或溶细胞素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry毒素、杀蚊Cry毒素(Mtx)、二元样(Bin)毒素或Cyt毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素为三结构域(3D)Cry毒素或Cyt毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及δ-内毒素，其中该δ-内毒素选自由以下项组成的组：Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A样、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb样、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H样、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I样、Cry1I样、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1样、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A样、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba样、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8样、Cry8样、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa样、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9样、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A样、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa样、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20样、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43样、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1或Cry78Aa1、Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa样、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba样、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B样、Cyt2Ca1和Cyt3Aa1。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及Cry毒素或Cyt毒素，其中该Cry毒素或Cyt毒素具有根据SEQ ID NO:412-481所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白，其中该分泌蛋白是营养期杀昆虫蛋白(Vip)、分泌期杀昆虫蛋白(Sip)、Bin样家族蛋白或ETX_MTX2家族蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及Bt毒素，其中该Bt毒素是分泌蛋白，并且其中该分泌蛋白是Vip。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及Vip，其中该Vip是Vip 1家族蛋白、Vip 2家族蛋白、Vip 3家族蛋白或Vip 4家族蛋白。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及Vip，其中该Vip选自由以下项组成的组：Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4和Vip4Aa1。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及Vip，其中该Vip蛋白具有根据SEQ ID NO:482-587所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19、苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176和苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素；以及具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：从苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：从苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及从苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及从苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的从苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及从苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及从苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，其中该组合或组合物包含一定浓度的从苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
组合：其他细菌毒素和U+2-ACTX-Hv1a的示例性组合
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及细菌毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及细菌毒素，其中该细菌毒素从属于致病杆菌属或光杆状菌属的细菌中分离。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及光杆状菌毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及光杆状菌毒素，其中该光杆状菌毒素选自由以下项组成的组：Photorhabdusakhurstii毒素；非共生光杆状菌毒素；非共生光杆状菌非共生亚种毒素；非共生光杆状菌非共生亚种ATCC 43949毒素；澳洲光杆状菌毒素；澳洲光杆状菌DSM 17609毒素；Photorhabdus bodei毒素；Photorhabdus caribbeanensis毒素；Photorhabdus cinerea毒素；海南光杆状菌毒素；Photorhabdus heterorhabditis毒素；Photorhabdus kayaii毒素；Photorhabdus khanii毒素；Photorhabdus khanii NC19毒素；Photorhabdus khaniisubsp.guanajuatensis毒素；Photorhabdus kleinii毒素；Photorhabdus laumondii毒素；Photorhabdus laumondii subsp.clarkei毒素；Photorhabdus laumondiisubsp.laumondii毒素；Photorhabdus laumondii subsp.Laumondii TTO1毒素；发光光杆状菌BA1毒素；发光光杆状菌NBAII H75HRPL105毒素；发光光杆状菌NBAII HiPL101毒素；发光光杆状菌发光亚种毒素；发光光杆状菌发光亚种ATCC 29999毒素；发光光杆状菌墨西哥亚种毒素；发光光杆状菌sonorensis亚种毒素；Photorhabdus namnaonensis毒素；Photorhabdus noenieputensis毒素；Photorhabdus stackebrandtii毒素；Photorhabdustasmaniensis毒素；中温光杆状菌毒素；中温光杆状菌J3毒素；中温光杆状菌phorame亚种毒素；中温光杆状菌中温亚种毒素；中温光杆状菌中温亚种M1021毒素；中温光杆状菌中温亚种Meg1毒素；Photorhabdus thracensis毒素；未分类的光杆状菌毒素；光杆状菌属物种毒素；光杆状菌属物种3014毒素；光杆状菌属物种3240毒素；光杆状菌属物种Az29毒素；光杆状菌属物种BS21毒素；光杆状菌属物种CbKj163毒素；光杆状菌属物种CRCIA-P01毒素；光杆状菌属物种ENY毒素；光杆状菌属物种FL2122毒素；光杆状菌属物种FL480毒素；光杆状菌属物种FsIw96毒素；光杆状菌属物种GDd233毒素；光杆状菌属物种H3086毒素；光杆状菌属物种H3107毒素；光杆状菌属物种H3240毒素；光杆状菌属物种HB301毒素；光杆状菌属物种HB78毒素；光杆状菌属物种HB89毒素；光杆状菌属物种HIT毒素；光杆状菌属物种HO1毒素；光杆状菌属物种HUG-39毒素；光杆状菌属物种IT毒素；光杆状菌属物种JUN毒素；光杆状菌属物种KcTs129毒素；光杆状菌属物种KJ13.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ14.3 TH毒素；光杆状菌属物种KJ24.5 TH毒素；光杆状菌属物种KJ29.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ37.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ7.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ8.2 TH毒素；光杆状菌属物种KJ9.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ9.2 TH毒素；光杆状菌属物种KK1.3 TH毒素；光杆状菌属物种KK1.4 TH毒素；光杆状菌属物种KMD74毒素；光杆状菌属物种KOH毒素；光杆状菌属物种MID10毒素；光杆状菌属物种MOL毒素；光杆状菌属物种MSW_058毒素；光杆状菌属物种MSW_079毒素；光杆状菌属物种NK2.1 TH毒素；光杆状菌属物种NK2.5 TH毒素；光杆状菌属物种NnMt2h毒素；光杆状菌属物种NP1毒素；光杆状菌属物种OH10毒素；光杆状菌属物种OnIr40毒素；光杆状菌属物种OnKn2毒素；光杆状菌属物种PB10.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB16.3TH毒素；光杆状菌属物种PB17.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB17.3 TH毒素；光杆状菌属物种PB2.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB22.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB22.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB32.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB33.1TH毒素；光杆状菌属物种PB33.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB37.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB39.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB4.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB41.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB45.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB47.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB47.3 TH毒素；光杆状菌属物种PB5.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB5.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB50.4TH毒素；光杆状菌属物种PB51.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB52.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB54.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB58.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB58.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB58.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB59.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB6.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB67.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB67.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB68.1TH毒素；光杆状菌属物种PB7.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB76.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB76.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB76.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB78.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB80.3 TH毒素；光杆状菌属物种PB80.4 TH毒素；光杆状菌属物种Pjun毒素；光杆状菌属物种RW14-46毒素；光杆状菌属物种S10-54毒素；光杆状菌属物种S12-55毒素；光杆状菌属物种S14-60毒素；光杆状菌属物种S15-56毒素；光杆状菌属物种S5P8-50毒素；光杆状菌属物种S7-51毒素；光杆状菌属物种S8-52毒素；光杆状菌属物种S9-53毒素；光杆状菌属物种SJ2毒素；光杆状菌属物种SN259毒素；光杆状菌属物种SP1.5 TH毒素；光杆状菌属物种SP16.4 TH毒素；光杆状菌属物种SP21.5 TH毒素；光杆状菌属物种SP3.4 TH毒素；光杆状菌属物种SP4.5 TH毒素；光杆状菌属物种SP7.3 TH毒素；光杆状菌属物种TyKb140毒素；光杆状菌属物种UK76毒素；光杆状菌属物种VMG毒素；光杆状菌属物种WA21C毒素；光杆状菌属物种WkSs43毒素；光杆状菌属物种Wx13毒素；光杆状菌属物种X4毒素；光杆状菌属物种YNb90毒素；和光杆状菌属物种ZM毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及发光光杆状菌毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及发光光杆状菌毒素，其中该发光光杆状菌毒素包括发光光杆状菌“毒素复合物a”(Tca)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及发光光杆状菌毒素，其中该发光光杆状菌毒素包括发光光杆状菌“毒素复合物c”(Tcc)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及发光光杆状菌毒素，其中该发光光杆状菌毒素包括发光光杆状菌“毒素复合物d”(Tcd)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及发光光杆状菌毒素，该发光光杆状菌毒素包括TcaA蛋白(SEQ ID NO:616)、TcaB蛋白(SEQ ID NO:617)、TcaC蛋白(SEQ ID NO:618)和TcaZ蛋白(SEQ ID NO:619)，或它们的提取物。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及属于耶尔森氏菌属的一种或多种生物体。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及从属于耶尔森氏菌属的生物体中分离的一种或多种肽。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及下列物种中的一种或多种物种：Yersinia aldovaeyb、Yersinia aleksiciae、伯氏耶尔森氏菌、Yersinia canariae、小肠结肠炎耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌耶尔森氏菌亚种、小肠结肠炎耶尔森氏菌古北区亚种、嗜虫耶尔森氏菌、弗氏耶尔森氏菌、Yersiniahibernica、中间耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌克氏亚种、克氏耶尔森氏菌rochesterensis亚种、马赛耶尔森氏菌、莫氏耶尔森氏菌、Yersinia nurmii、Yersiniapekkanenii、鼠疫耶尔森氏菌、鼠疫耶尔森氏菌鼠疫亚种、鼠疫耶尔森氏菌中古型亚种、鼠疫耶尔森氏菌东方型亚种、假结核耶尔森菌、假结核耶尔森氏菌鼠疫亚种、假结核耶尔森氏菌假结核亚种、罗氏耶尔森氏菌、鲁氏耶尔森氏菌、类似耶尔森氏菌或Yersiniawautersii。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及从下列物种中的一种或多种物种中分离的一种或多种肽：Yersinia aldovaeyb、Yersinia aleksiciae、伯氏耶尔森氏菌、Yersinia canariae、小肠结肠炎耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌耶尔森氏菌亚种、小肠结肠炎耶尔森氏菌古北区亚种、嗜虫耶尔森氏菌、弗氏耶尔森氏菌、Yersinia hibernica、中间耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌克氏亚种、克氏耶尔森氏菌rochesterensis亚种、马赛耶尔森氏菌、莫氏耶尔森氏菌、Yersinia nurmii、Yersinia pekkanenii、鼠疫耶尔森氏菌、鼠疫耶尔森氏菌鼠疫亚种、鼠疫耶尔森氏菌中古型亚种、鼠疫耶尔森氏菌东方型亚种、假结核耶尔森菌、假结核耶尔森氏菌鼠疫亚种、假结核耶尔森氏菌假结核亚种、罗氏耶尔森氏菌、鲁氏耶尔森氏菌、类似耶尔森氏菌或Yersinia wautersii。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及嗜虫耶尔森氏菌或Yersinia nurmii。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及从嗜虫耶尔森氏菌或Yersinia nurmii分离的一种或多种肽。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及嗜虫耶尔森氏菌细菌和/或来自它们的毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及一种或多种Yersinia nurmii细菌和/或来自它们的毒素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及发光光杆状菌毒素复合物，该发光光杆状菌毒素复合物包括TcaA蛋白(SEQ ID NO:616)、TcaB蛋白(SEQ ID NO:617)、TcaC蛋白(SEQ ID NO:618)和TcaZ蛋白(SEQ ID NO:619)或它们的提取物，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及发光光杆状菌毒素复合物，该发光光杆状菌毒素复合物包括TcaA蛋白(SEQ ID NO:616)、TcaB蛋白(SEQ ID NO:617)、TcaC蛋白(SEQ ID NO:618)和TcaZ蛋白(SEQ ID NO:619)或它们的提取物，其中该组合或组合物包含一定浓度的发光光杆状菌毒素复合物，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
组合：GNA和U+2-ACTX-Hv1a的示例性组合
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及凝集素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及凝集素，其中该凝集素是下列中的一者或者：雪滴花凝集素(GNA)；西洋接骨木凝集素(SNA)；朝鲜槐-II(MAL-II)；鸡冠刺桐凝集素(ECL)；蓖麻凝集素-I(RCA)；花生凝集素(PNA)；麦胚凝集素(WGA)；单叶加纳籽-II(GSL-II)；Con A；小扁豆凝集素(LCA)；甘露糖结合凝集素(MBL)；BanLec；半乳凝集素；菜豆白细胞凝集素(PHA-L)；菜豆红细胞凝集素(PHA-E)；和/或曼陀罗凝集素(DSL)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及凝集素，其中该凝集素是雪滴花凝集素(GNA)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及凝集素，其中该凝集素具有与SEQ ID NO:35、595-615中任一项所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及凝集素，其中该凝集素具有与以下氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列：“MAKASLLILATIFLGVITPSCLSENILYSGETLPTGGFLSSGSFVFIMQEDCNLVLYNVDKPIWATNTGGLSSDCSLSMQNDGNLVVFTPSNKPIWASNTDGQNGNYVCILQKDRNVVIYGTNRWATGTYTGAVGIPESPPSEKYPSAGKIKLVTAK”(SEQ ID NO:35)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及凝集素，其中该凝集素具有与以下氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列：“MAKASLLILAAIFLGVITPSCLSDNILYSGETLSTGEFLNYGSFVFIMQEDCNLVLYDVDKPIWATNTGGLSRSCFLSMQTDGNLVVYNPSNKPIWASNTGGQNGNYVCILQKDRNVVIYGTDRWATGTHTGLVGIPASPPSEKYPTAGKIKLVTAK”(SEQ ID NO:595)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及具有根据SEQ ID NO:35所示氨基酸序列的氨基酸序列的GNA，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及具有根据SEQ ID NO:595所示氨基酸序列的氨基酸序列的GNA，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及具有根据SEQ ID NO:35所示氨基酸序列的氨基酸序列的GNA，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:35所示氨基酸序列的氨基酸序列的GNA，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及具有根据SEQ ID NO:595所示氨基酸序列的氨基酸序列的GNA，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:595所示氨基酸序列的氨基酸序列的GNA，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
组合：印楝素和U+2-ACTX-Hv1a的示例性组合
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及从印楝(也称为印度楝、印楝树或印度丁香)分离的化合物。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及印楝化合物。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及下列物质中的一者或多者：印楝素；印苦楝二酮；Azadiradionolide；脱乙酰葛杜宁；印楝素B；Desfuranoazadiradione；环氧楝树二酮；葛杜宁；Mahmoodin；Neemfruitin A；Neemfruitin B；印苦楝内酯；印楝宾；Nimolicinol；Ohchinin Acetate；印楝沙兰林；Salannol；alpha-Nimolactone；beta-Nimolactone；2',3'-二氢印楝沙兰林；3-脱乙酰基印楝沙兰林；6-脱乙酰基印楝素；7-Acetyl-16,17-dehydro-16-hydroxyneotrichilenone；7-Benzoylnimbocinol；7-脱乙酰基-7-苯甲酰基环氧楝树二酮；7-脱乙酰基-7-苯甲酰基葛杜宁；7-Deacetyl-17-epinimolicinol；15-羟基印苦楝二酮；17-表-17-羟基印苦楝二酮；17-表印苦楝二酮；20,21,22,23-四氢-23-氧代印苦楝二酮；22,23-Dihydronimocinol；或28-去氧代印苦楝内酯。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及印楝素。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及印楝素，其中该印楝素具有化学式：C35H44O16。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及印楝素，其中该印楝素具有化学式：C35H44O16，其中该组合或组合物包含一定浓度的印楝素，其中该印楝素具有化学式：C35H44O16，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及印楝素，其中该印楝素具有化学式：C35H44O16，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
组合：硼酸和U+2-ACTX-Hv1a的示例性组合
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及硼化合物。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及硼化合物，其中该硼化合物是硼酸、四羟基二硼、硼酸盐、氧化硼、硼烷或任何前述物质的任何组合。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及硼化合物，其中该硼化合物是在水性介质中产生硼氧化物的硼烷和/或硼酸酯。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及硼化合物，其中该硼化合物是硼酸、硼酸盐(例如，碱性硼酸钠(硼砂))或硼酸和硼酸盐的混合物。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及硼化合物，其中该硼化合物是硼酸盐。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及硼酸盐，其中该硼酸盐选自：过硼酸盐、偏硼酸盐、四硼酸盐、八硼酸盐、硼酸酯和它们的任何组合。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及硼化合物，其中该硼化合物是硼酸盐，其中该硼酸盐选自：金属硼酸盐(例如，硼酸钠、硼酸锌和硼酸钾)，诸如十水合四硼酸二钠、四水合八硼酸二钠、偏硼酸钠、一水合过硼酸钠、八硼酸二钠、五水合四硼酸钠、四硼酸钠、偏硼酸铜、硼酸锌、偏硼酸钡和它们的任何组合。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及硼化合物，其中该硼化合物是硼砂(例如，十水合硼酸钠-10mol Na2B4O7.10H2O或五水合硼酸钠-5mol Na2B4O7.5H2O)。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及硼化合物，其中该硼化合物是可以有效量用作硼砂的替代物(或可以有效量与硼砂或彼此组合使用)的硼化合物。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及硼砂。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及硼砂，其中该硼砂选自：无水硼砂(Na2B4O7)；四硼酸铵((NH4)2B4O7.4H2O)；五硼酸铵((NH4)2B10O16.8H2O)；五硼酸钾(K2B10O16.8H2O)；四硼酸钾(K2B4O7.4H2O)；偏硼酸钠((8mol)Na2B2O4.8H2O)；偏硼酸钠((4mol)Na2B2O4.4H2O)；十水合四硼酸二钠(Na2B4O7.10H2O)；五水合四硼酸二钠(Na2B4O7.5H2O)；四水合八硼酸二钠(Na2B8O13.4H2O)；或它们的组合。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及硼化合物，其中该硼化合物选自由以下项组成的组：硼砂、硼酸、八硼酸二钠、硼酸钠、偏硼酸钠、十水合四硼酸钠、氧化硼、碳化硼、氮化硼、三溴化硼、三氯化硼和三氟化硼。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及硼酸。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及硼酸，其中该硼酸具有H3BO3的化学式。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及具有化学式H3BO3的硼酸，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及具有化学式H3BO3的硼酸，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有化学式H3BO3的硼酸，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
组合：病毒和U+2-ACTX-Hv1a的示例性组合
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及在与昆虫物种接触时具有杀昆虫活性的病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及DNA病毒或RNA病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及囊泡病毒、杆状病毒、浓核病毒、昆虫痘病毒、唾液腺肥大病毒、虹彩病毒、裸杆状病毒、多DNA病毒、双顺反子病毒、传染性软腐病病毒、诺达病毒、四病毒或质型多角体病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及来自囊泡病毒科的病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及囊泡病毒属，诸如烟芽夜蛾囊泡病毒3a、烟芽夜蛾囊泡病毒3、烟芽夜蛾囊泡病毒3b、烟芽夜蛾囊泡病毒3c、烟芽夜蛾囊泡病毒3d、烟芽夜蛾囊泡病毒3e、烟芽夜蛾囊泡病毒3f、烟芽夜蛾囊泡病毒3g、烟芽夜蛾囊泡病毒3h、烟芽夜蛾囊泡病毒3j、草地贪夜蛾囊泡病毒1a、粉纹夜蛾囊泡病毒2a、烟芽夜蛾囊泡病毒3i、灰翅夜蛾属囊泡病毒、甜菜夜蛾囊泡病毒5a、草地贪夜蛾囊泡病毒1c、草地贪夜蛾囊泡病毒1d、粉纹夜蛾囊泡病毒2b、粉纹夜蛾囊泡病毒2c、粉纹夜蛾囊泡病毒2d或粉纹夜蛾囊泡病毒6b。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及来自囊泡病毒科的病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及图尔病毒属，诸如美丽双缘姬蜂图尔病毒；美丽双缘姬蜂囊泡病毒4a；或枣瘿蚊图尔病毒2a。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及来自浓核病毒亚科的病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及双义浓核病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及选自以下组的双义浓核病毒：小行星双义浓核病毒1；海星相关浓核病毒；蜚蠊双义浓核病毒1；黑胸大蠊浓核病毒；黑胸大蠊浓核病毒Guo/2000；蜚蠊双义浓核病毒2；德国小蠊浓核病毒1；十足类双义浓核病毒1；红螯螯虾浓核病毒；双翅目双义浓核病毒1；尖音库蚊浓核病毒；半翅目双义浓核病毒1；柑橘粉蚧浓核病毒；半翅目双义浓核病毒2；车前圆尾蚜浓核病毒；半翅目双义浓核病毒3；桃蚜浓核病毒；烟蚜浓核病毒；膜翅目双义浓核病毒1；红火蚁浓核病毒；鳞翅目双义浓核病毒1；大蜡螟浓核病毒；鹿眼蛱蝶浓核病毒；鹿眼蛱蝶浓核病毒pBRJ/1990；罗氏夜蛾浓核病毒；大豆尺夜蛾浓核病毒；直翅目双义浓核病毒1；家蟋蟀浓核病毒；未分类的双义浓核病毒；二斑叶螨相关的双义浓核病毒；未分类的浓核病毒；双义浓核病毒CaaDV1；双义浓核病毒CaaDV2；Atrato Denso样病毒；Atrato Denso样病毒1；浓核病毒SC1065；浓核病毒SC1118；浓核病毒SC116；浓核病毒SC2121；浓核病毒SC2209；浓核病毒SC2228；浓核病毒SC2886；浓核病毒SC3749；浓核病毒SC3908；浓核病毒SC4092；浓核病毒SC444；浓核病毒SC525；柑橘木虱浓核病毒；小蔗螟浓核病毒；狼粪相关浓核病毒；狼粪相关浓核病毒2；或双义浓核病毒属物种。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及来自昆虫痘病毒亚科的病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及甲型昆虫痘病毒；乙型昆虫痘病毒；茧蜂昆虫痘病毒；血黑蝗昆虫痘病毒；或一些迄今未分类的昆虫痘病毒亚科。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及选自以下组的昆虫痘病毒亚科病毒：古铜异丽金龟昆虫痘病毒；茶小卷叶蛾昆虫痘病毒；茶小卷叶蛾昆虫痘病毒“L”；桑灯蛾昆虫痘病毒；双年色卷蛾昆虫痘病毒；云杉色卷蛾昆虫痘病毒；蔷薇斜条卷叶蛾昆虫痘病毒；蔷薇斜条卷叶蛾昆虫痘病毒“L”；棉铃实夜蛾昆虫痘病毒；东方粘虫昆虫痘病毒；东方粘虫昆虫痘病毒“L”；未分类的乙型昆虫痘病毒；长尾潜蝇茧蜂昆虫痘病毒；迁徒蚱蜢昆虫痘病毒“O”；埃及蚂蚱昆虫痘病毒；意大利蝗昆虫痘病毒；细长摇蚊昆虫痘病毒；西伯利亚蝗昆虫痘病毒；茶卷叶蛾昆虫痘病毒；阿根廷蚁昆虫痘病毒1；亚洲小车蝗昆虫痘病毒；或粘虫昆虫痘病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及虹彩病毒科病毒，例如虹彩病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及选自以下组的虹彩病毒科病毒：大蚊虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒31；普通卷甲虫虹色病毒；日本丽金龟虹色病毒；粗糙鼠妇虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒6；双斑蟋虹彩病毒；未分类的虹彩病毒；樱花科毛对虾虹彩病毒；黎豆夜蛾虹色病毒；Armadillidiumdecorum虹色病毒；Barramundi perch虹彩病毒；蓝鳃太阳鱼虹彩病毒；短棘鲾虹彩病毒；红鳍笛鲷虹彩病毒；长体圆鲹虹彩病毒；小牙鲾虹彩病毒；无脊椎动物虹色病毒16；褐新西兰肋翅鳃角金龟虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒2；白粉金黾甲虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒23；非洲独角仙虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒24；东方蜜蜂虹色病毒；无脊椎动物虹色病毒29；黄粉虫虹色病毒；虹彩病毒金目鲈/Quang Ninh/VNM/2008；虹彩病毒IV31；日本海鲈虹彩病毒；有毒兔头鲀虹彩病毒；尖吻鲈虹彩病毒；黑边鲾虹彩病毒；笋壳鱼虹彩病毒；圆眼燕鱼虹彩病毒；三线矶鲈虹彩病毒；鲈鱼虹彩病毒603-2/中国；六指马鲅虹彩病毒；猪西门氏菌虹彩病毒；榆黄莹叶甲虹彩病毒；英国林蛙虹彩病毒1；英国林蛙虹彩病毒2；海银鲷鱼虹彩病毒；黑鱼虹彩病毒；石鲽虹彩病毒603-3/中国；石鲽虹彩病毒724/中国；鲟鱼虹彩病毒；印度狗母鱼虹彩病毒；或Trichoniscus panormidensis虹色病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及裸杆状病毒科病毒，例如，α型裸杆状病毒、β型裸杆状病毒或一些迄今未分类的裸杆状病毒科病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及选自以下组的裸杆状病毒科病毒：双斑蟋裸杆状病毒；椰子犀角金龟裸杆状病毒；玉米穗虫裸杆状病毒；美洲棉铃虫裸杆状病毒2；叉犀金龟属裸杆状病毒；果蝇裸杆状病毒；果蝇属裸杆状病毒RLU-2011；Esparto病毒；欧洲龙虾裸杆状病毒；Kallithea病毒；沼虾属裸杆状病毒CN-SL2011；Mautenbach病毒；褐飞虱内源性裸杆状病毒；斑节对虾裸杆状病毒；沼泽大蚊裸杆状病毒；或Tomelloso病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及选自以下组的传染性软腐病病毒科病毒：柞蚕传染性软腐病病毒；菜蚜病毒；菜蚜病毒-UK；蜜蜂残翅病毒；Kakugo病毒；VDV-1/DWV重组体；瓢虫茧蜂麻痹病毒；茶尺蠖病毒；茶尺蠖小RNA病毒；传染性软化病病毒；传染性软化病病毒(蚕分离株)；全环硬蜱传染性软腐病病毒；牧草盲蝽病毒1；舞毒蛾传染性软腐病病毒1；褐飞虱蜜露病毒1；榕透翅毒蛾病毒；囊状幼虫病病毒；囊状幼虫病病毒CSBV-LN/中国/2009；慢蜂麻痹病毒；甜菜夜蛾传染性软腐病病毒1；甜菜夜蛾传染性软腐病病毒2；瓦螨病毒1；未分类的传染性软腐病病毒；ACTflea传染性软腐病病毒；刺扰伊蚊传染性软腐病病毒；阿蚊属传染性软腐病病毒；蝙蝠传染性软腐病病毒；蜜蜂传染性软腐病病毒1；黑莓传染性软腐病病毒A；黑莓传染性软腐病病毒B；家蚕传染性软腐病病毒；Breves传染性软腐病病毒；小菜蛾传染性软腐病病毒；毛眼林蚁病毒2；褐黄血蜱传染性软腐病病毒；艺神袖蝶传染性软腐病病毒；棉铃虫传染性软腐病病毒；蠓传染性软腐病病毒90C0；亚洲长翼蝠传染性软腐病病毒；Moku病毒；丽蝇蛹集金小蜂病毒；Pirizal传染性软腐病病毒；异沙叶蝉传染性软腐病病毒1；Rondonia传染性软腐病病毒1；Rondonia传染性软腐病病毒2；葡萄带叶蝉传染性软腐病病毒1；葡萄带叶蝉传染性软腐病病毒2；VDV-1/DWV重组体4；墨胸胡蜂Moku病毒；或冠花蟹蛛传染性软腐病病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及来自杆状病毒科的病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及α杆状病毒属、β杆状病毒属、δ杆状病毒属、γ杆状病毒属或迄今未分类的杆状病毒科病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及选自以下组的α杆状病毒属病毒：茶小卷叶蛾核型多角体病毒；小地老虎多核型多角体病毒；黄地老虎核型多角体病毒A；黄地老虎核型多角体病毒B；柞蚕核型多角体病毒；普利柞蚕核型多角体病毒；蓖麻蚕核型多角体病毒；黎豆夜蛾多核型多角体病毒；苜蓿银纹夜蛾多核型多角体病毒；芹菜夜蛾MNPV；苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒；大蜡螟MNPV；小菜蛾多核型多角体病毒；两色髯须夜蛾MNPV；薄荷灰夜蛾MNPV；家蚕核型多角体病毒；野桑蚕核型多角体病毒；野桑蚕核型多角体病毒S2；家蚕核型多角体病毒K1；油桐尺蠖核型多角体病毒；迁粉蝶核型多角体病毒；云杉色卷蛾DEF多核型多角体病毒；云杉色卷蛾多核型多角体病毒；西部云杉色卷蛾α杆状病毒；欧洲云杉卷叶蛾核型多角体病毒；蔷薇斜条卷叶蛾核型多角体病毒；金双斑蛾核型多角体病毒；金双斑蛾SNPV TF1-A；大豆尺蠖核型多角体病毒；大豆尺夜蛾SNPV IE；豆天蛾核型多角体病毒；泡桐茸毒蛾核型多角体病毒；茶尺蠖核型多角体病毒；苹果褐卷蛾核型多角体病毒；茶黄毒蛾核多角体病毒；棉铃虫核型多角体病毒；棉铃虫NPV NNg1；棉铃虫NPV澳大利亚株；棉铃虫核型多角体病毒G4；棉铃虫SNPV；铃夜蛾属SNPV AC53；美洲棉铃虫单核型多角体病毒；新天蚕蛾属物种核型多角体病毒；新天蚕蛾属物种核型多角体病毒；美国白蛾核型多角体病毒；铁杉尺蠖核型多角体病毒；粘虫核型多角体病毒；巴西天蚕蛾核型多角体病毒；巴西天蚕蛾多核型多角体病毒；舞毒蛾多核型多角体病毒；黑角舞蛾核型多角体病毒；甘蓝夜蛾多核型多角体病毒；蓓带夜蛾核型多角体病毒A；蓓带夜蛾核型多角体病毒B；棉铃虫多核型多角体病毒；豆野螟核型多角体病毒；一点粘虫核型多角体病毒；冬尺蠖蛾核型多角体病毒；白斑毒蛾核型多角体病毒；黄杉合毒蛾多核型多角体病毒；斜纹刺蛾核型多角体病毒；Perigonia lusca核型多角体病毒；Perigonialusca单核型多角体病毒；甜菜夜蛾多核型多角体病毒；甜菜夜蛾核型多角体病毒(US株)；草地贪夜蛾多核型多角体病毒；棉叶虫核型多角体病毒；斜纹夜蛾核型多角体病毒；枣尺蠖核型多角体病毒；弧金翅夜蛾核型多角体病毒；粉纹夜蛾单核型多角体病毒；蝙蝠蛾核型多角体病毒；未分类的α杆状病毒；醋栗尺蛾核型多角体病毒；绿尾大蚕蛾核型多角体病毒；棉花棉褐带卷蛾核型多角体病毒；银纹红袖蝶MNPV；警纹地夜蛾核型多角体病毒；小地老虎多衣壳核型多角体病毒；Amorbia cuneacapsa核型多角体病毒；鳄梨卷蛾核型多角体病毒；葡萄天蛾核型多角体病毒；花生灯蛾核型多角体病毒；芹菜夜蛾多核型多角体病毒；多音天蚕核型多角体病毒；黎豆夜蛾核型多角体病毒；春尺蛾核型多角体病毒；绢粉蝶核型多角体病毒；丑巢黄卷蛾核型多角体病毒；蔷薇黄卷蛾核型多角体病毒；蓖麻蚕核型多角体病毒；生菜尺蠖核型多角体病毒；丫纹夜蛾核型多角体病毒；黑点银纹夜蛾核型多角体病毒；双尖顶尺蠖核型多角体病毒；野桑蚕核型多角体病毒；玉米茎蛀褐夜蛾核型多角体病毒；Catposilia pomona核型多角体病毒；翎夜蛾核型多角体病毒；异色卷蛾核型多角体病毒；西枞色卷蛾核型多角体病毒；行军切叶虫核型多角体病毒；大豆尺蠖NPV；粉花凌霄大蚕蛾α杆状病毒；粉花凌霄大蚕蛾核型多角体病毒；Condylorrhiza vestigialis MNPV；Condylorrhiza vestigialis多核型多角体病毒；Cryptophlebia peltastica核型多角体病毒；波纹杂毛虫核型多角体病毒；云杉茸毒蛾核型多角体病毒；思茅松毛虫核型多角体病毒；条纹绢野螟核型多角体病毒；天后银纹袖蝶MNPV tmk1/ARG/2003；天后银纹袖蝶核型多角体病毒；Dirphia peruvianus核型多角体病毒；灰茶尺蠖核型多角体病毒；Epinotiagranitalis核型多角体病毒；半带黄毒蛾核型多角体病毒；云杉吉松叶蜂核型多角体病毒；艺神袖蝶核型多角体病毒；烟青虫核型多角体病毒；南美棉铃虫单核型多角体病毒；点实夜蛾SNPV；玉米穗虫核型多角体病毒；Hemerocampa vetusta核型多角体病毒；新天蚕蛾属α杆状病毒；黄钩尺蛾NPV；大钩翅尺蛾NPV；茶刺蛾核型多角体病毒；鹿眼蛱蝶核型多角体病毒；Leucoma salicis核型多角体病毒；枫首毒蛾多核型多角体病毒；松针毒蛾核型多角体病毒；黑角舞蛾核型多角体病毒2；天幕毛虫属α杆状病毒；苹天幕毛虫核型多角体病毒；加州天幕毛虫核型多角体病毒；西加州天幕毛虫核型多角体病毒；森林天幕毛虫核型多角体病毒；黄褐天幕毛虫核型多角体病毒；蓓带夜蛾核型多角体病毒；娆粉蝶属α杆状病毒；冷杉绿伪尺蛾核型多角体病毒；孔雀蛱蝶核型多角体病毒；橡树尺蠖α杆状病毒；同安钮夜蛾核型多角体病毒；澳古毒蛾核型多角体病毒；灰斑古毒蛾核型多角体病毒；黄杉合毒蛾单衣壳核型多角体病毒；小眼夜蛾核型多角体病毒；疆夜蛾属α杆状病毒；斑色地老虎核型多角体病毒；榕透翅毒蛾核型多角体病毒；加利福尼亚橡树虫核型多角体病毒；Plusia acuta核型多角体病毒；金翅夜蛾核型多角体病毒；小菜蛾核型多角体病毒；拟粘液蛾属α杆状病毒；大豆尺夜蛾核型多角体病毒；澳洲牧场毛虫核型多角体病毒；Rachiplusia nu核型多角体病毒；Rachiplusia nu单核型多角体病毒；眉纹天蚕蛾核型多角体病毒；人纹污灯蛾核型多角体病毒；尘污灯蛾核型多角体病毒；Spilosoma phasma核型多角体病毒；Spodopteracosmioides核型多角体病毒；亚热带粘虫核型多角体病毒；莎草粘虫核型多角体病毒；棉叶虫多衣壳核型多角体病毒；斜纹夜蛾MNPV；斜纹夜蛾核型多角体病毒II；Spodopteraterricola核型多角体病毒；衣蛾核型多角体病毒；金裳凤蝶核型多角体病毒；Wiseanacervinata核型多角体病毒；银纹红袖蝶属物种核型多角体病毒；天幕毛虫属物种α杆状病毒；天幕毛虫属物种核型多角体病毒；娆粉蝶属物种α杆状病毒；或未鉴定的核型多角体病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及选自以下组的β杆状病毒属病毒：棉花棉褐带卷蛾颗粒体病毒；黄地老虎颗粒体病毒；菜粉蝶颗粒体病毒；欧洲粉蝶颗粒体病毒；云杉色卷蛾颗粒体病毒；西部云杉色卷蛾颗粒体病毒；杨扇舟蛾颗粒体病毒；分月扇舟蛾颗粒体病毒A；分月扇舟蛾颗粒体病毒(河南)；分月扇舟蛾颗粒体病毒B；稻纵卷叶螟颗粒体病毒；苹果异形小卷蛾颗粒体病毒；苹果蠹蛾颗粒体病毒；苹果蠹蛾颗粒体病毒(墨西哥分离株)；小蔗螟颗粒体病毒；夜小卷蛾颗粒体病毒；木薯天蛾颗粒体病毒；葡萄叶斑蛾颗粒体病毒；棉铃虫颗粒体病毒；草安夜蛾颗粒体病毒；南美毛胫夜蛾颗粒体病毒；一点粘虫颗粒体病毒A；Pseudalatia unipuncta颗粒体病毒；一点粘虫颗粒体病毒B；一点粘虫颗粒体病毒；马铃薯块茎蛾颗粒体病毒；印度谷螟颗粒体病毒；小菜蛾颗粒体病毒；草地贪夜蛾颗粒体病毒；斜纹夜蛾颗粒体病毒；粉纹夜蛾颗粒体病毒；粉纹夜蛾颗粒体病毒LBIV-12；八字地老虎颗粒体病毒；飞扬阿夜蛾颗粒体病毒；茶小卷叶蛾颗粒体病毒；警纹地夜蛾颗粒体病毒；跳螳螂颗粒体病毒；茶蚕颗粒体病毒；丫纹夜蛾颗粒体病毒；茶细蛾颗粒体病毒；欧洲云杉卷叶蛾颗粒体病毒；栎绿色卷蛾β杆状病毒；分月扇舟蛾颗粒体病毒；杂食云卷蛾颗粒体病毒；盐泽灯蛾颗粒体病毒；红背地老虎颗粒体病毒；棉铃实夜蛾颗粒体病毒；四叉莜夜蛾颗粒体病毒；美国白蛾颗粒体病毒；黑点刺蛾颗粒体病毒；青铜地老虎颗粒体病毒；三线褐卷蛾颗粒体病毒；Peridorma morpontora颗粒体病毒；菜青虫颗粒体病毒；苜蓿绿叶蛾颗粒体病毒；拟粘液蛾属β杆状病毒；三叶草夜蛾颗粒体病毒；Spodoptera androgea颗粒体病毒；棉叶虫颗粒体病毒；安第斯马铃薯块茎蛾颗粒体病毒；或毛胫夜蛾属物种颗粒体病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及选自以下组的δ杆状病毒属病毒：黑须库蚊核型多角体病毒；或黑须库蚊NPV佛罗里达/1997。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及选自以下组的γ杆状病毒属病毒：红头松叶蜂核型多角体病毒；红头松叶蜂NPV(加拿大株)；欧洲新松叶蜂核型多角体病毒；未分类的γ杆状病毒；或冷杉锯角叶蜂NPV。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及选自以下组的迄今未分类的杆状病毒科病毒：Achaea faber核型多角体病毒；烦扰伊蚊核型多角体病毒；荨麻蛱蝶核型多角体病毒；银纹红袖蝶核型多角体病毒；黄麻桥夜蛾核型多角体病毒；天蚕核型多角体病毒；荨麻舞蛾颗粒体病毒；Aroa discalis核型多角体病毒；对虾杆状病毒；干果斑螟核型多角体病毒；Chaliopsis junodi核型多角体病毒；缘腹盘绒茧蜂杆状病毒；Cynosarga ornata核型多角体病毒；Darna nararia颗粒体病毒；窃达刺蛾颗粒体病毒；落叶松尺蛾核型多角体病毒；锦夜蛾颗粒体病毒；棕尾毒蛾核型多角体病毒；桑毛虫核型多角体病毒；性腺特异性病毒；茶卷叶蛾颗粒体病毒；全须夜蛾核型多角体病毒；Idaea seriata核型多角体病毒；鹿眼蛱蝶颗粒体病毒；栎枯叶蛾核型多角体病毒；奇特望灯蛾核型多角体病毒；油棕榈袋蛾核型多角体病毒；乌夜蛾颗粒体病毒；幽波尺蛾核型多角体病毒；古毒蛾核型多角体病毒；Orgyia mixta核型多角体病毒；Pachytrinaphilargyria核型多角体病毒；香泽兰灯蛾核型多角体病毒；斑节对虾核型多角体病毒；圆掌舟蛾核型多角体病毒；白钩蛱蝶核型多角体病毒；印度蚕核型多角体病毒；Spilosomalutea颗粒体病毒；Spodoptera albula核型多角体病毒；黄绿枯叶蛾核型多角体病毒；小垂中国蓝带蚊核型多角体病毒；长尾弄蝶核型多角体病毒；Utetheisa pulchella核型多角体病毒；大西洋赤蛱蝶核型多角体病毒；小红蛱蝶核型多角体病毒；Wiseana cervinata颗粒体病毒；或杆状病毒科物种。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及杆状病毒科病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及β杆状病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及棉花棉褐带卷蛾颗粒体病毒；黄地老虎颗粒体病毒；菜粉蝶颗粒体病毒；欧洲粉蝶颗粒体病毒；云杉色卷蛾颗粒体病毒；西部云杉色卷蛾颗粒体病毒；杨扇舟蛾颗粒体病毒；分月扇舟蛾颗粒体病毒A；分月扇舟蛾颗粒体病毒(河南)；分月扇舟蛾颗粒体病毒B；稻纵卷叶螟颗粒体病毒；苹果异形小卷蛾颗粒体病毒；苹果蠹蛾颗粒体病毒；苹果蠹蛾颗粒体病毒(墨西哥分离株)；小蔗螟颗粒体病毒；夜小卷蛾颗粒体病毒；木薯天蛾颗粒体病毒；葡萄叶斑蛾颗粒体病毒；棉铃虫颗粒体病毒；草安夜蛾颗粒体病毒；南美毛胫夜蛾颗粒体病毒；一点粘虫颗粒体病毒A；Pseudalatia unipuncta颗粒体病毒；一点粘虫颗粒体病毒B；一点粘虫颗粒体病毒；马铃薯块茎蛾颗粒体病毒；印度谷螟颗粒体病毒；小菜蛾颗粒体病毒；草地贪夜蛾颗粒体病毒；斜纹夜蛾颗粒体病毒；粉纹夜蛾颗粒体病毒；粉纹夜蛾颗粒体病毒LBIV-12；八字地老虎颗粒体病毒；未分类的β杆状病毒；飞扬阿夜蛾颗粒体病毒；茶小卷叶蛾颗粒体病毒；警纹地夜蛾颗粒体病毒；跳螳螂颗粒体病毒；茶蚕颗粒体病毒；丫纹夜蛾颗粒体病毒；茶细蛾颗粒体病毒；欧洲云杉卷叶蛾颗粒体病毒；栎绿色卷蛾β杆状病毒；分月扇舟蛾颗粒体病毒；杂食云卷蛾颗粒体病毒；盐泽灯蛾颗粒体病毒；红背地老虎颗粒体病毒；棉铃实夜蛾颗粒体病毒；四叉莜夜蛾颗粒体病毒；美国白蛾颗粒体病毒；黑点刺蛾颗粒体病毒；青铜地老虎颗粒体病毒；三线褐卷蛾颗粒体病毒；Peridorma morpontora颗粒体病毒；菜青虫颗粒体病毒；苜蓿绿叶蛾颗粒体病毒；拟粘液蛾属β杆状病毒；三叶草夜蛾颗粒体病毒；Spodoptera androgea颗粒体病毒；棉叶虫颗粒体病毒；安第斯马铃薯块茎蛾颗粒体病毒；或毛胫夜蛾属物种颗粒体病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及苹果蠹蛾颗粒体病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及苹果蠹蛾颗粒体病毒分离株V22病毒。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及苹果蠹蛾颗粒体病毒分离株V22病毒，其中该组合或组合物包含一定浓度的苹果蠹蛾颗粒体病毒分离株V22病毒，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
在一些实施方案中，组合或组合物包含以下物质，基本上由以下物质组成，或由以下物质组成：具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，以及苹果蠹蛾颗粒体病毒分离株V22病毒，其中该组合或组合物包含一定浓度的具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素，按占总组合物的w/w计，该浓度范围为约0.0001％w/w、0.0005％w/w、0.001％w/w、0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1％w/w、2％w/w、3％w/w、4％w/w、5％w/w、6％w/w、7％w/w、8％w/w、9％w/w、10％w/w、11％w/w、12％w/w、13％w/w、14％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、21％w/w、22％w/w、23％w/w、24％w/w、25％w/w、26％w/w、27％w/w、28％w/w、29％w/w、30％w/w、31％w/w、32％w/w、33％w/w、34％w/w、35％w/w、36％w/w、37％w/w、38％w/w、39％w/w、40％w/w、41％w/w、42％w/w、43％w/w、44％w/w、45％w/w、46％w/w、47％w/w、48％w/w、49％w/w、50％w/w、51％w/w、52％w/w、53％w/w、54％w/w、55％w/w、56％w/w、57％w/w、58％w/w、59％w/w、60％w/w、61％w/w、62％w/w、63％w/w、64％w/w、65％w/w、66％w/w、67％w/w、68％w/w、69％w/w、70％w/w、71％w/w、72％w/w、73％w/w、74％w/w、75％w/w、76％w/w、77％w/w、78％w/w、79％w/w、80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w、99.1％w/w、99.2％w/w、99.3％w/w、99.4％w/w、99.5％w/w、99.6％w/w、99.7％w/w、99.8％w/w或约99.9％w/w。
使用本发明的方法
保护植物、植物部分和种子的方法
在一些实施方案中，本公开提供了在农艺和/或非农艺应用中防治无脊椎害虫的方法，包括使无脊椎害虫或其环境、固体表面(包括植物表面或其部分)与杀虫有效量的以下物质的组合接触：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；以及(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)。
在一些实施方案中，本公开提供了在农艺和/或非农艺应用中防治无脊椎害虫的方法，包括使无脊椎害虫或其环境、固体表面(包括植物表面或其部分)与杀虫有效量的包含以下物质的组合物接触：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；以及(3)一种或多种赋形剂。例如，在一些实施方案中，该组合物可包含：(1)表A中列出的一种或多种CRIP，即A1-A68，(2)表B中列出的一种或多种杀昆虫剂，即B1-B479，以及(3)赋形剂。
合适的组合物的示例包括：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；以及(3)一种或多种赋形剂，包括与非活性成分一起配制成以如下形式递送的所述组合物：液体溶液、乳液、粉末、颗粒、纳米颗粒、微粒或它们的组合。
在一些实施方案中，为了实现与本发明的化合物、混合物或组合物接触以保护大田作物免受无脊椎害虫的侵害，通常在种植前将该化合物或组合物施用于作物的种子，施用于作物植物的叶子(例如，叶、茎、花、果实)，或者在种植作物之前或之后施用于土壤或其他生长介质。
接触方法的一个实施方案是通过喷涂。另选地，包含：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；以及(3)一种或多种赋形剂的颗粒组合物可施用于植物叶子或土壤。本发明的化合物还可通过植物吸收有效地递送，方法是通过使植物与包含本发明化合物的组合物接触，该组合物作为浸壤液体制剂、对土壤的颗粒制剂、育苗箱处理剂或移栽浸渍剂施用。值得注意的是本公开组合物的形式为浸壤液体制剂。还值得注意的是用于防治无脊椎害虫的方法，该方法包括使该无脊椎害虫或其环境与生物有效量的本发明的组合接触。还值得注意的是，在一些例示性实施方案中，该例示性方法考虑土壤环境，其中该组合物作为浸壤制剂施用至该土壤。还值得注意的是，本发明的CRIP和IA的组合也通过局部施用到侵染场所而有效。其他接触方法包括通过以下方式施用本发明的化合物或组合物：直接喷施和滞留喷施、空气喷施、凝胶、种子包衣、微胶囊化、全身摄入、诱饵、耳标、大丸剂、喷雾器、熏剂、气溶胶、粉剂，以及许多其他方式。接触方法的一个实施方案是包含本发明的化合物或组合物、尺寸上稳定的肥料颗粒、棒或片剂。本发明的化合物也可浸渍到用于制造无脊椎动物防治装置的材料中(例如，昆虫网、施用到衣服上、施用到蜡烛制剂中等)。
在一些实施方案中，包含(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；以及任选地(3)一种或多种赋形剂的组合也可用于种子处理以保护种子免受无脊椎害虫侵害。在本公开和权利要求的上下文中，处理种子是指使种子与杀虫有效量的以下物质的组合接触：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；以及(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)，其通常被配制为本发明的组合物。这种种子处理保护种子免受土壤无脊椎害虫的侵害，并且通常还可保护从发芽的种子发育而来的幼苗的根和与土壤接触的其他植物部分。种子处理也可通过对发育的植物内以下物质的易位来提供对叶子的保护：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；以及(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)。种子处理可应用于所有类型的种子，包括那些通过遗传转化表达特殊性状的植物将发芽的种子。此外，在一些实施方案中，CRIP可转化入植物或其部分，例如植物细胞或植物种子，其已经用表达除草剂抗性的蛋白质诸如提供对草甘膦的抗性的草甘膦乙酰转移酶转化。
种子处理的一种方法是在播种前用包含以下物质的组合对种子喷雾或撒粉：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；以及(3)一种或多种赋形剂。配制用于种子处理的组合物通常由本发明的组合和成膜剂或粘合剂组成。因此，通常，本公开的种子包衣组合物由杀虫有效量的以下物质组成：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；以及(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)，以及成膜剂或粘合剂。种子可通过以下方式来包衣：将可流动的混悬浓缩剂直接喷施到种子的滚床中，然后干燥该种子。另选地，可将诸如润湿的散剂、溶液剂、悬乳剂、水中的可乳化浓缩剂和乳剂的其他制剂类型喷施到种子上。这种工艺尤其可用于将膜包衣施加到种子。各种包衣机器和工艺是可供本领域的技术人员使用的。合适的工艺包括在P.Kosters等人，Seed Treatment:Progress andProspects，1994BCPC Monograph No.57，以及其中列出的参考文献中列出的那些工艺，其公开内容全文以引用方式并入本文。
经处理的种子通常包含以下物质的组合：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；以及(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)，其量为每100kg种子约0.01g至1kg(即，处理前种子的约0.00001重量％至1重量％)。配制用于种子处理的可流动的混悬剂通常包含约0.5％至约70％的活性成分、约0.5％至约30％的成膜粘合剂、约0.5％至约20％的分散剂、0％至约5％的增稠剂、0％至约5％的颜料和/或染料、0％至约2％的消泡剂、0％至约1％的防腐剂以及0％至约75％的挥发性液体稀释剂。
使用制剂和组合物的方法
在一些实施方案中，本发明提供了使用组合的方法，该组合包含：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；以及(3)一种或多种赋形剂；其中所述方法包括制备组合物，然后将该组合物施用到昆虫所在处。
在一些实施方案中，本发明提供了使用组合物防治昆虫的方法，所述组合物包含：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；以及(3)一种或多种赋形剂；其中昆虫选自由以下项组成的组：葡萄蔓天蛾(天蛾幼虫)；苜蓿粉蝶；粉斑螟蛾；白条卷叶蛾；粘虫(灰翅夜蛾属物种，例如甜菜夜蛾、草地贪夜蛾、棉叶虫、美洲粘虫；朝鲜蓟羽蛾；杜鹃花毛虫；结草虫(常绿树蓑蛾)；香蕉蛾(木豹蛾)；香蕉弄蝶；黑头长翅卷蛾；加州槲蛾；春尺蠖；樱小食心虫；圹水螟；柑橘地老虎；苹果蠹蛾；蔓越莓果虫；卷心菜薄翅野螟；切根虫(夜蛾科物种，小地老虎)；冷杉合毒蛾；木薯天蛾(天蛾幼虫)；榆树尺蠖；欧洲葡萄蔓蛾；欧洲弄蝶；美国白蛾；蔷薇黄卷蛾；果树黄卷蛾、葡萄卷叶蛾；荷兰石竹小卷蛾；葡萄叶雕叶虫(仅为步行虫科)；苜蓿绿夜蛾；绿条纹枫虫；Gummosos-Batrachedra Comosae(Hodges)；舞毒蛾；铁杉尺蠖；天蛾幼虫(烟草天蛾属物种)；菜粉蝶；玉米天蚕蛾；贾克松色卷蛾；苹果浅褐卷叶蛾；甜瓜绢野螟；含羞草雕蛾；蔷薇斜条卷叶蛾；欧洲夹竹桃蛾；荷兰石竹小卷蛾；杂食尺蠖；大凤蝶；桔带卷蛾；梨小食心虫；桃枝麦蛾；松蝴蝶；美洲棉铃虫；红带卷蛾；红疣天社蛾；Rindworm Complex(各种鳞翅目昆虫)；鞍背刺蛾毛虫；鞍突毛虫；盐泽灯蛾；草地螟(草螟属物种)；尺蠖；秋星尺蠖；云杉色卷蛾；黄褐天幕毛虫(各种枯叶蛾科)；菠萝褐灰蝶(Geyr)；烟草天蛾；烟草粉斑螟；簇状苹果芽蛾；桃蚜蛾；疆夜蛾；杂色卷叶蛾；黎豆夜蛾；胡桃毛虫；结网毛虫；西部栎柳毒蛾；南方玉米螟；玉米穗虫；甘薯小象虫；胡椒茎象甲；桔根象甲；草莓根象甲；美核桃象甲；榛象甲；稻水象甲；苜蓿叶象甲；车轴草叶象；茶枝小蠹虫；根象；甘蔗犀金龟；咖啡果小蠹；一年生蓝草象甲；亚洲花园甲虫；欧洲金龟子；绿花金龟；日本丽金龟；五月甲虫或六月甲虫(六月鳃角金龟物种)；北方独角仙；东方丽金龟；南方独角仙；谷象(象甲总科)；埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟；尖音库蚊；致倦库蚊；玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；棉红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲。
在一些实施方案中，本发明提供了保护植物免受昆虫影响的方法，该方法包括提供表达一种或多种CRIP或编码该一种或多种CRIP的多核苷酸，以及一种或多种肽-IA的植物。
在一些实施方案中，本发明提供了保护植物免受昆虫影响的方法，该方法包括提供表达一种或多种CRIP或编码该一种或多种CRIP的多核苷酸的植物；以及向所述植物施用一种或多种非肽-IA。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；以及(3)一种或多种赋形剂；其中将该组合物施用到害虫所在处，或施用到易受害虫侵袭的植物或动物。
本文所述的任何组合物可用于对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；以及(3)一种或多种赋形剂。
例如，在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；以及(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；其中该CRIP选自表A，即，A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20、A21、A22、A23、A24、A25、A26、A27、A28、A29、A30、A31、A32、A33、A34、A35、A36、A37、A38、A39、A40、A41、A42、A43、A44、A45、A46、A47、A48、A49、A50、A51、A52、A53、A54、A55、A56、A57、A58、A59、A60、A61、A62、A63、A64、A65、A66、A67或A68；其中所述CRIP与分别在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、49、50、51、52、53、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、66、88、588、44、45、46、47、60、61、62、63、64、594或65所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；以及(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；其中该CRIP肽可包含下述肽，基本上由下述肽组成，或者由下述肽组成，该肽与以下肽具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性：具有SEQ ID NO:192-370中任一项所示的氨基酸序列的蜘蛛肽；具有SEQ ID NO:60-64、192-370和594中任一项所示的氨基酸序列的ACTX肽(例如，U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、κ-ACTX-Hv1a、κ+2-ACTX-Hv1a、ω-ACTX-Hv1a和/或ω+2-ACTX-Hv1a)；具有SEQ ID NO:65中任一项所示的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a；具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽；具有SEQ ID NO:2-15、49-53、2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651或653-654中任一项所示的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)；具有SEQID NO:66、88-191中任一项所示的氨基酸序列的蝎肽；具有SEQ ID NO:371-411中任一项所示的氨基酸序列的海葵肽；来自蛇锁海葵的具有SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的Av3多肽；具有SEQ ID NO:45-47中任一项所示的氨基酸序列的Av3变体多肽(AVP)；或芋螺毒素；并且其中IA是表B中列出的IA，并且其中IA是B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9、B10、B11、B12、B13、B14、B15、B16、B17、B18、B19、B20、B21、B22、B23、B24、B25、B26、B27、B28、B29、B30、B31、B32、B33、B34、B35、B36、B37、B38、B39、B40、B41、B42、B43、B44、B45、B46、B47、B48、B49、B50、B51、B52、B53、B54、B55、B56、B57、B58、B59、B60、B61、B62、B63、B64、B65、B66、B67、B68、B69、B70、B71、B72、B73、B74、B75、B76、B77、B78、B79、B80、B81、B82、B83、B84、B85、B86、B87、B88、B89、B90、B91、B92、B93、B94、B95、B96、B97、B98、B99、B100、B101、B102、B103、B104、B105、B106、B107、B108、B109、B110、B111、B112、B113、B114、B115、B116、B117、B118、B119、B120、B121、B122、B123、B124、B125、B126、B127、B128、B129、B130、B131、B132、B133、B134、B135、B136、B137、B138、B139、B140、B141、B142、B143、B144、B145、B146、B147、B148、B149、B150、B151、B152、B153、B154、B155、B156、B157、B158、B159、B160、B161、B162、B163、B164、B165、B166、B167、B168、B169、B170、B171、B172、B173、B174、B175、B176、B177、B178、B179、B180、B181、B182、B183、B184、B185、B186、B187、B188、B189、B190、B191、B192、B193、B194、B195、B196、B197、B198、B199、B200、B201、B202、B203、B204、B205、B206、B207、B208、B209、B210、B211、B212、B213、B214、B215、B216、B217、B218、B219、B220、B221、B222、B223、B224、B225、B226、B227、B228、B229、B230、B231、B232、B233、B234、B235、B236、B237、B238、B239、B240、B241、B242、B243、B244、B245、B246、B247、B248、B249、B250、B251、B252、B253、B254、B255、B256、B257、B258、B259、B260、B261、B262、B263、B264、B265、B266、B267、B268、B269、B270、B271、B272、B273、B274、B275、B276、B277、B278、B279、B280、B281、B282、B283、B284、B285、B286、B287、B288、B289、B290、B291、B292、B293、B294、B295、B296、B297、B298、B299、B300、B301、B302、B303、B304、B305、B306、B307、B308、B309、B310、B311、B312、B313、B314、B315、B316、B317、B318、B319、B320、B321、B322、B323、B324、B325、B326、B327、B328、B329、B330、B331、B332、B333、B334、B335、B336、B337、B338、B339、B340、B341、B342、B343、B344、B345、B346、B347、B348、B349、B350、B351、B352、B353、B354、B355、B356、B357、B358、B359、B360、B361、B362、B363、B364、B365、B366、B367、B368、B369、B370、B371、B372、B373、B374、B375、B376、B377、B378、B379、B380、B381、B382、B383、B384、B385、B386、B387、B388、B389、B390、B391、B392、B393、B394、B395、B396、B397、B398、B399、B400、B401、B402、B403、B404、B405、B406、B407、B408、B409、B410、B411、B412、B413、B414、B415、B416、B417、B418、B419、B420、B421、B422、B423、B424、B425、B426、B427、B428、B429、B430、B431、B432、B433、B434、B435、B436、B437、B438、B439、B440、B441、B442、B443、B444、B445、B446、B447、B448、B449、B450、B451、B452、B453、B454、B455、B456、B457、B458、B459、B460、B461、B462、B463、B464、B465、B466、B467、B468、B469、B470、B471、B472、B473、B474、B475、B476、B477、B478、B479或它们的组合。
使用TVP组合物(式I)的方法
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含：(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的结合物；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP杀昆虫蛋白或它们的组合；以及(2)一种或多种赋形剂。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含：(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP杀昆虫蛋白或它们的组合；以及(2)一种或多种赋形剂，其中该一种或多种赋形剂选自由以下项组成的组：海藻糖、麦芽糖糊精、无水磷酸氢二钾(K2HPO4)、磷酸二氢钾(KH2PO4)、BIT和发酵固体。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含：(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP杀昆虫蛋白或它们的组合；以及(2)一种或多种赋形剂；其中按组合物的总重量计，TVP或TVP杀昆虫蛋白的范围为约2％wt/wt至约16％wt/wt；并且其中海藻糖的范围为约5％wt/wt至约40％wt/wt；BIT的范围为约0.01％wt/wt至约0.1％wt/wt；麦芽糖糊精的范围为约10％wt/wt至约50％wt/wt；无水磷酸氢二钾(K2HPO4)的范围为约1％wt/wt至约5％wt/wt；磷酸二氢钾(KH2PO4)的范围为约0.10％wt/wt至约1％wt/wt；并且发酵固体的范围为约15％wt/wt至约40％wt/wt。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含：(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP杀昆虫蛋白或它们的组合；以及(2)一种或多种赋形剂；其中按组合物的总重量计，TVP或TVP杀昆虫蛋白的范围为约7％wt/wt至约9％wt/wt；并且其中海藻糖的范围为约20％wt/wt至约30％wt/wt；BIT的范围为约0.025％wt/wt至约0.075％wt/wt；麦芽糖糊精的范围为约30％wt/wt至约40％wt/wt；无水磷酸氢二钾(K2HPO4)的范围为约2％wt/wt至约3％wt/wt；磷酸二氢钾(KH2PO4)的范围为约0.2％wt/wt至约0.6％wt/wt；并且发酵固体的范围为约20％wt/wt至约30％wt/wt。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含：(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP杀昆虫蛋白或它们的组合；以及(2)一种或多种赋形剂；其中按组合物的总重量计，TVP或TVP杀昆虫蛋白为约8.5％wt/wt；并且其中海藻糖为约25％wt/wt；BIT为约0.05％wt/wt；麦芽糖糊精为约36.3％wt/wt；无水磷酸氢二钾(K2HPO4)为约2.6％wt/wt；磷酸二氢钾(KH2PO4)为约0.4％wt/wt；并且发酵固体为约26.85％wt/wt。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物基本上由以下组成：(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP或TVP-杀昆虫蛋白质；并且其中该组合物基本上由以下组成：占该组合物总重量的8.5％wt/wt的量的TVP或TVP-杀昆虫蛋白；25％wt/wt的量的海藻糖；0.05％wt/wt的量的BIT；36.3％wt/wt的量的麦芽糖糊精；2.6％wt/wt的量的无水磷酸氢二钾(K2HPO4)；0.4％wt/wt的量的磷酸二氢钾(KH2PO4)；和26.85％wt/wt的量的发酵固体。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP或TVP-杀昆虫蛋白质；并且其中该组合物具有以下量：占该组合物总重量的8.5％wt/wt的量的TVP或TVP杀昆虫蛋白质；25％wt/wt的量的海藻糖；0.05％wt/wt的量的BIT；36.3％wt/wt的量的麦芽糖糊精；2.6％wt/wt的量的无水磷酸氢二钾(K2HPO4)；0.4％wt/wt的量的磷酸二氢钾(KH2PO4)；和26.85％wt/wt的量的发酵固体。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质包含与根据式(I)的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中多肽相对于SEQID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是A、S或N；X2是R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T或S；X3的T或P；X4的K或A；X5是R或A；Z1是T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E或R；X6是K或不存在；并且X7是G或不存在；或它们的药学上可接受的盐；其中该组合物由占该组合物总重量的8.5％wt/wt的量的TVP组成；并且其中该多种赋形剂由以下组成：占该组合物总重量的25％wt/wt的量的海藻糖；0.05％wt/wt的量的BIT；36.3％wt/wt的量的麦芽糖糊精；2.6％wt/wt的磷酸氢二钾(K2HPO4)；0.4％wt/wt的磷酸二氢钾(KH2PO4)；和26.85％wt/wt的量的发酵固体。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中TVP在X1、X2、X3、X4或X5处具有一个氨基酸取代，或它们的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中TVP在X1、X2、X3、X4或X5处具有一个氨基酸取代；并且其中X7是甘氨酸，或它们的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中TVP在X1、X2、X3、X4或X5处具有一个氨基酸取代；并且其中X7不存在，或它们的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中TVP在X1、X2、X3、X4或X5处具有一个氨基酸取代；并且其中X6和X7不存在，或它们的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中TVP包含SEQ ID NO:2-15、49-53、2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651或653-654中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供了对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物由以下组成：(1)TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中TVP由SEQ ID NO:17-30、54-58或655-688中任一项所示的多核苷酸序列或它们的互补核苷酸序列编码。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中TVP进一步包含两种或更多种TVP的均聚物或杂聚物，其中每个TVP的氨基酸序列相同或不同。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中TVP是融合蛋白质，包含由可切割或不可切割接头分离的两个或更多个TVP，并且其中每个TVP的氨基酸序列可相同或不同。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中接头是可切割接头。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中可切割接头在昆虫的肠道或血淋巴内是可切割的。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质包含与根据式(I)的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-X1-X2-M-X3-N-K-E-F-T-Y-X4-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X5-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X6-X7，其中多肽相对于SEQID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是A、S或N；X2是R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T或S；X3的T或P；X4的K或A；X5是R或A；Z1是T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E或R；X6是K或不存在；并且X7是G或不存在；或它们的药学上可接受的盐；其中该组合物由占该组合物总重量的8.5％wt/wt的量的TVP组成；并且其中该多种赋形剂由以下组成：占该组合物总重量的25％wt/wt的量的海藻糖；0.05％wt/wt的量的BIT；36.3％wt/wt的量的麦芽糖糊精；2.6％wt/wt的磷酸氢二钾(K2HPO4)；0.4％wt/wt的磷酸二氢钾(KH2PO4)；和26.85％wt/wt的量的发酵固体；其中如果Z1是T或S，则TVP是糖基化的。
前述TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的药学上可接受的盐中的任一者可用于本文和下文所述的制剂中的任一者中，例如前述TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的药学上可接受的盐中的任一者可用于以下制剂：可湿性粉剂或颗粒剂；或液体浓缩物剂。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括向害虫所在处施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP或TVP-杀昆虫蛋白质；和(2)赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中害虫选自：葡萄蔓天蛾(天蛾幼虫)；苜蓿粉蝶；粉斑螟蛾；白条卷叶蛾；粘虫(灰翅夜蛾属物种，例如甜菜夜蛾、草地贪夜蛾、棉叶虫、美洲粘虫；朝鲜蓟羽蛾；杜鹃花毛虫；结草虫(常绿树蓑蛾)；香蕉蛾(木豹蛾)；香蕉弄蝶；黑头长翅卷蛾；加州槲蛾；春尺蠖；樱小食心虫；圹水螟；柑橘地老虎；苹果蠹蛾；蔓越莓果虫；卷心菜薄翅野螟；切根虫(夜蛾科物种，小地老虎)；冷杉合毒蛾；木薯天蛾(天蛾幼虫)；榆树尺蠖；欧洲葡萄蔓蛾；欧洲弄蝶；美国白蛾；蔷薇黄卷蛾；果树黄卷蛾、葡萄卷叶蛾；荷兰石竹小卷蛾；葡萄叶雕叶虫(仅为步行虫科)；苜蓿绿夜蛾；绿条纹枫虫；Gummosos-Batrachedra Comosae(Hodges)；舞毒蛾；铁杉尺蠖；天蛾幼虫(烟草天蛾属物种)；菜粉蝶；玉米天蚕蛾；贾克松色卷蛾；苹果浅褐卷叶蛾；甜瓜绢野螟；含羞草雕蛾；蔷薇斜条卷叶蛾；欧洲夹竹桃蛾；荷兰石竹小卷蛾；杂食尺蠖；大凤蝶；桔带卷蛾；梨小食心虫；桃枝麦蛾；松蝴蝶；美洲棉铃虫；红带卷蛾；红疣天社蛾；Rindworm Complex(各种鳞翅目昆虫)；鞍背刺蛾毛虫；鞍突毛虫；盐泽灯蛾；草地螟(草螟属物种)；尺蠖；秋星尺蠖；云杉色卷蛾；黄褐天幕毛虫(各种枯叶蛾科)；菠萝褐灰蝶(Geyr)；烟草天蛾；烟草粉斑螟；簇状苹果芽蛾；桃蚜蛾；疆夜蛾；杂色卷叶蛾；黎豆夜蛾；胡桃毛虫；结网毛虫；西部栎柳毒蛾；南方玉米螟；玉米穗虫；甘薯小象虫；胡椒茎象甲；桔根象甲；草莓根象甲；美核桃象甲；榛象甲；稻水象甲；苜蓿叶象甲；车轴草叶象；茶枝小蠹虫；根象；甘蔗犀金龟；咖啡果小蠹；一年生蓝草象甲；亚洲花园甲虫；欧洲金龟子；绿花金龟；日本丽金龟；五月甲虫或六月甲虫(六月鳃角金龟物种)；北方独角仙；东方丽金龟；南方独角仙；谷象(象甲总科)；埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟；尖音库蚊；致倦库蚊；玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；棉红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲。
使用TVP组合物(式II)的方法
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP或TVP-杀昆虫蛋白质；和(2)赋形剂；其中TVP选自本文所述的TVP中的一种或任何组合，例如杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，所述TVP包含与根据式(II)的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-A-X1-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-K-G；其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是R或Q；并且Z1是T或A；并且其中向害虫所在处或易受害虫侵袭的植物或动物施用该组合物。
本文所述的组合物中的任一者都可用于对抗、防治或抑制害虫的方法中，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP或TVP-杀昆虫蛋白质；和(2)赋形剂。
例如，在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的结合物；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP，和一种或多种赋形剂；其中TVP包含与根据式(II)的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-A-X1-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-K-G；其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是R或Q；并且Z1是T或A；或它们的药学上可接受的盐；并且其中该一种或多种赋形剂选自：海藻糖；麦芽糖糊精；麦芽糖；磷酸氢二钾(K2HPO4)；磷酸二氢钾(KH2PO4)；木质素磺酸盐；石膏；山梨醇；苯甲酸钠；山梨酸钾；EDTA；苯并异噻唑啉酮(BIT)；和发酵固体。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含TVP，其中Z1是T，并且TVP是糖基化的，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物由TVP组成，其中X1是Q；并且Z1是A，或它们的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的结合物；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP，其中TVP包含与SEQ IDNO:2、49或51中任一项所示的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP，其中TVP由SEQ ID NO:17、54或56中任一项所示的多核苷酸序列或它们的互补核苷酸序列编码。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP，其中TVP进一步包含两种或更多种TVP的均聚物或杂聚物，其中每个TVP的氨基酸序列相同或不同。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP，其中TVP是融合蛋白质，包含由可切割或不可切割接头分离的两个或更多个TVP，并且其中每个TVP的氨基酸序列可相同或不同。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是具有接头的TVP，其中该接头是可切割接头。
在一些实施方案中，本发明的组合物包含具有可切割接头的TVP，其中该可切割接头在昆虫的肠道或血淋巴内是可切割的。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是具有接头的TVP。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的结合物；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP，和一种或多种赋形剂；其中TVP包含与根据式(II)的氨基酸序列具有至少50％同一性、至少55％同一性、至少60％同一性、至少65％同一性、至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少81％同一性、至少82％同一性、至少83％同一性、至少84％同一性、至少85％同一性、至少86％同一性、至少87％同一性、至少88％同一性、至少89％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、至少99.5％同一性、至少99.6％同一性、至少99.7％同一性、至少99.8％同一性、至少99.9％同一性或100％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-A-X1-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-K-G；其中多肽相对于SEQ ID NO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是R或Q；并且Z1是T或A；或它们的药学上可接受的盐；并且其中该一种或多种赋形剂选自：海藻糖；麦芽糖糊精；麦芽糖；磷酸氢二钾(K2HPO4)；磷酸二氢钾(KH2PO4)；木质素磺酸盐；石膏；山梨醇；苯甲酸钠；山梨酸钾；EDTA；苯并异噻唑啉酮(BIT)；和发酵固体，其中如果Z1是T或S，则TVP是糖基化的。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含：(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的结合物；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP杀昆虫蛋白或它们的组合；以及(2)一种或多种赋形剂。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含：(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP杀昆虫蛋白或它们的组合；以及(2)一种或多种赋形剂，其中该一种或多种赋形剂选自由以下项组成的组：海藻糖、麦芽糖糊精、无水磷酸氢二钾(K2HPO4)、磷酸二氢钾(KH2PO4)、BIT和发酵固体。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含：(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP杀昆虫蛋白或它们的组合；以及(2)一种或多种赋形剂；其中按组合物的总重量计，TVP或TVP杀昆虫蛋白的范围为约2％wt/wt至约16％wt/wt；并且其中海藻糖的范围为约5％wt/wt至约40％wt/wt；BIT的范围为约0.01％wt/wt至约0.1％wt/wt；麦芽糖糊精的范围为约10％wt/wt至约50％wt/wt；无水磷酸氢二钾(K2HPO4)的范围为约1％wt/wt至约5％wt/wt；磷酸二氢钾(KH2PO4)的范围为约0.10％wt/wt至约1％wt/wt；并且发酵固体的范围为约15％wt/wt至约40％wt/wt。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含：(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP杀昆虫蛋白或它们的组合；以及(2)一种或多种赋形剂；其中按组合物的总重量计，TVP或TVP杀昆虫蛋白的范围为约7％wt/wt至约9％wt/wt；并且其中海藻糖的范围为约20％wt/wt至约30％wt/wt；BIT的范围为约0.025％wt/wt至约0.075％wt/wt；麦芽糖糊精的范围为约30％wt/wt至约40％wt/wt；无水磷酸氢二钾(K2HPO4)的范围为约2％wt/wt至约3％wt/wt；磷酸二氢钾(KH2PO4)的范围为约0.2％wt/wt至约0.6％wt/wt；并且发酵固体的范围为约20％wt/wt至约30％wt/wt。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含：(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP杀昆虫蛋白或它们的组合；以及(2)一种或多种赋形剂；其中按组合物的总重量计，TVP或TVP杀昆虫蛋白为约8.5％wt/wt；并且其中海藻糖为约25％wt/wt；BIT为约0.05％wt/wt；麦芽糖糊精为约36.3％wt/wt；无水磷酸氢二钾(K2HPO4)为约2.6％wt/wt；磷酸二氢钾(KH2PO4)为约0.4％wt/wt；并且发酵固体为约26.85％wt/wt。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP；并且其中该组合物包含以下量：占该组合物总重量的8.5％wt/wt的量的TVP或TVP杀昆虫蛋白质；25％wt/wt的量的海藻糖；0.05％wt/wt的量的BIT；36.3％wt/wt的量的麦芽糖糊精；2.6％wt/wt的量的无水磷酸氢二钾(K2HPO4)；0.4％wt/wt的量的磷酸二氢钾(KH2PO4)；和26.85％wt/wt的量的发酵固体。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP；并且其中该组合物包含以下量：占该组合物总重量的8.5％wt/wt的量的TVP或TVP杀昆虫蛋白质；25％wt/wt的量的海藻糖；0.05％wt/wt的量的BIT；36.3％wt/wt的量的麦芽糖糊精；2.6％wt/wt的量的无水磷酸氢二钾(K2HPO4)；0.4％wt/wt的量的磷酸二氢钾(KH2PO4)；和26.85％wt/wt的量的发酵固体。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质包含与根据式(II)的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-A-X1-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-K-G，其中多肽相对于SEQ IDNO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是R或Q；并且Z1是T或A；或它们的药学上可接受的盐；其中该组合物由占该组合物总重量的8.5％wt/wt的量的TVP组成；并且其中该多种赋形剂由以下组成：占该组合物总重量的25％wt/wt的量的海藻糖；0.05％wt/wt的量的BIT；36.3％wt/wt的量的麦芽糖糊精；2.6％wt/wt的磷酸氢二钾(K2HPO4)；0.4％wt/wt的磷酸二氢钾(KH2PO4)；和26.85％wt/wt的量的发酵固体。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中Z1是T，并且TVP是糖基化的，或它们的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中X1是Q；并且Z1是A，或它们的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中TVP包含SEQ ID NO:2、49或51中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中TVP由SEQ ID NO:17、54或56中任一项所示的多核苷酸序列或它们的互补核苷酸序列编码。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中TVP进一步包含两种或更多种TVP的均聚物或杂聚物，其中每个TVP的氨基酸序列相同或不同。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中TVP是融合蛋白质，包含由可切割或不可切割接头分离的两个或更多个TVP，并且其中每个TVP的氨基酸序列可相同或不同。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中接头是可切割接头。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质；其中可切割接头在昆虫的肠道或血淋巴内是可切割的。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括施用杀虫有效量的组合物，该组合物包含(1)杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是TVP、TVP-杀昆虫蛋白质或它们的组合；和(2)多种赋形剂；其中TVP或TVP杀昆虫蛋白质包含与根据式(II)的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列：E-P-D-E-I-C-R-A-X1-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-K-G，其中多肽相对于SEQ IDNO:1所示的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b的野生型序列包含至少一个氨基酸取代，并且其中X1是R或Q；并且Z1是T或A；或它们的药学上可接受的盐；其中该组合物由占该组合物总重量的8.5％wt/wt的量的TVP组成；并且其中该多种赋形剂由以下组成：占该组合物总重量的25％wt/wt的量的海藻糖；0.05％wt/wt的量的BIT；36.3％wt/wt的量的麦芽糖糊精；2.6％wt/wt的磷酸氢二钾(K2HPO4)；0.4％wt/wt的磷酸二氢钾(KH2PO4)；和26.85％wt/wt的量的发酵固体；其中如果Z1是T或S，则TVP是糖基化的。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括向害虫所在处施用杀虫有效量的组合，该组合包含杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，所述TVP包含与SEQ ID NO:2、49或51中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列；或它们的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括向害虫所在处施用杀虫有效量的组合，该组合包含杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，所述TVP包含SEQ ID NO:2、49或51中任一项所示的氨基酸序列；或它们的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括向害虫所在处施用杀虫有效量的组合，该组合包含杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，所述TVP由SEQ ID NO:2、49或51中任一项所示的氨基酸序列组成；或它们的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括向害虫所在处施用杀虫有效量的组合，该组合包含杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，所述TVP包含与SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，或它们的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括向害虫所在处施用杀虫有效量的组合，该组合包含杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，所述TVP包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列；或它们的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括向害虫所在处施用杀虫有效量的组合，该组合包含杀昆虫剂(IA)和CRIP的组合；其中IA是表B中列出的IA，即B1-B479中的任一者或多者；并且其中CRIP是杀昆虫U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)，所述TVP由SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列组成；或它们的药学上可接受的盐。
包含(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；和(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)的前述组合中的任一者，可用于本文所述的组合物中的任一者及其使用方法中，即，用于对抗、防治或抑制害虫和/或施用于害虫所在处，其中害虫选自：葡萄蔓天蛾(天蛾幼虫)；苜蓿粉蝶；粉斑螟蛾；白条卷叶蛾；粘虫(灰翅夜蛾属物种，例如甜菜夜蛾、草地贪夜蛾、棉叶虫、美洲粘虫；朝鲜蓟羽蛾；杜鹃花毛虫；结草虫(常绿树蓑蛾)；香蕉蛾(木豹蛾)；香蕉弄蝶；黑头长翅卷蛾；加州槲蛾；春尺蠖；樱小食心虫；圹水螟；柑橘地老虎；苹果蠹蛾；蔓越莓果虫；卷心菜薄翅野螟；切根虫(夜蛾科物种，小地老虎)；冷杉合毒蛾；木薯天蛾(天蛾幼虫)；榆树尺蠖；欧洲葡萄蔓蛾；欧洲弄蝶；美国白蛾；蔷薇黄卷蛾；果树黄卷蛾、葡萄卷叶蛾；荷兰石竹小卷蛾；葡萄叶雕叶虫(仅为步行虫科)；苜蓿绿夜蛾；绿条纹枫虫；Gummosos-BatrachedraComosae(Hodges)；舞毒蛾；铁杉尺蠖；天蛾幼虫(烟草天蛾属物种)；菜粉蝶；玉米天蚕蛾；贾克松色卷蛾；苹果浅褐卷叶蛾；甜瓜绢野螟；含羞草雕蛾；蔷薇斜条卷叶蛾；欧洲夹竹桃蛾；荷兰石竹小卷蛾；杂食尺蠖；大凤蝶；桔带卷蛾；梨小食心虫；桃枝麦蛾；松蝴蝶；美洲棉铃虫；红带卷蛾；红疣天社蛾；Rindworm Complex(各种鳞翅目昆虫)；鞍背刺蛾毛虫；鞍突毛虫；盐泽灯蛾；草地螟(草螟属物种)；尺蠖；秋星尺蠖；云杉色卷蛾；黄褐天幕毛虫(各种枯叶蛾科)；菠萝褐灰蝶(Geyr)；烟草天蛾；烟草粉斑螟；簇状苹果芽蛾；桃蚜蛾；疆夜蛾；杂色卷叶蛾；黎豆夜蛾；胡桃毛虫；结网毛虫；西部栎柳毒蛾；南方玉米螟；玉米穗虫；甘薯小象虫；胡椒茎象甲；桔根象甲；草莓根象甲；美核桃象甲；榛象甲；稻水象甲；苜蓿叶象甲；车轴草叶象；茶枝小蠹虫；根象；甘蔗犀金龟；咖啡果小蠹；一年生蓝草象甲；亚洲花园甲虫；欧洲金龟子；绿花金龟；日本丽金龟；五月甲虫或六月甲虫(六月鳃角金龟物种)；北方独角仙；东方丽金龟；南方独角仙；谷象(象甲总科)；埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟；尖音库蚊；致倦库蚊；玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；棉红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲。
作物和害虫
可通过这些方法防治的具体作物害虫和昆虫包括以下：网翅目(蟑螂)；等翅目(白蚁)；直翅目(蝗虫、草蜢和蟋蟀)；双翅目(普通家蝇、蚊子、采采蝇、大蚊和果蝇)；膜翅目(蚂蚁、黄蜂、蜜蜂、锯蝇、姬蜂和瘿蜂)；虱目(咬虱和吸血虱)；蚤目(蚤)；和半翅目(臭虫和蚜虫)，以及蛛形纲诸如蜱螨(蜱和螨)，和这些生物体各自藏匿的寄生虫。
“害虫”包括，但不限于：昆虫、真菌、细菌、线虫、螨、蜱等。
昆虫害虫包括但不限于选自鞘翅目、双翅目、膜翅目、鳞翅目、食毛目、同翅目、半翅目、直翅目、缨翅目、革翅目、等翅目、虱目、蚤目、毛翅目等的昆虫。更特别地，昆虫害虫包括鞘翅目、鳞翅目和双翅目。
用杀昆虫多肽处理的具有合适的农业、家庭和/或医学/兽医重要性的昆虫包括但不限于下列类别和目的成员：
鞘翅目包括肉食亚目和多食亚目。肉食亚目包括步甲总科和豉甲总科。多食亚目包括水虫总科、隐翅虫总科、菊虎总科、郭公虫总科、叩头虫总科、花甲总科、泥甲总科、丸甲总科、扁甲总科、芫菁总科、花蚤总科、拟步总科、长蠹总科、金龟总科、天牛总科、叶甲总科和象虫总科。步甲总科包括虎甲科、步行虫科和龙虱科。豉甲总科包括豉甲科。水虫总科包括水龟科。隐翅虫总科包括葬甲科和隐翅虫科。菊虎总科包括花萤科和萤科。郭公虫总科包括郭公虫科和皮蠹科。叩头虫总科包括叩头虫科和吉丁科。扁甲总科包括瓢甲科。芫菁总科包括芫菁科。拟步总科包括拟步甲科。金龟总科包括黑蜣科和金龟科。天牛总科包括天牛科。叶甲总科包括叶甲科。象虫总科包括象甲科和小蠹科。
鞘翅目(Coleoptera)的示例包括但不限于：美国大象豆(菜豆象(Acanthoscelides obtectus))、叶甲虫(Agelastica alni)、叩甲(叩头虫(Agrioteslineatus)、黑叩头虫(Agriotes obscurus)、二色叩甲(Agriotes bicolor))、谷物甲虫(米扁虫(Ahasverus advena))、六月金龟子(马铃薯鳃金龟(Amphimallon solstitialis))、家具甲虫(家具窃蠹(Anobium punctatum)、山楂花象(Anthonomus)物种(象鼻虫))、小舌甘菜甲虫(舌甘菜隐食甲(Atomaria linearis))、地毯甲虫(圆皮蠹属(Anthrenus)物种、Attagenus物种)、豇豆象(四纹豆象(Callosobruchus maculates))、油炸水果甲虫(thefried fruit beetle)(酱曲露尾甲(Carpophilus hemipterus))、卷心菜豆荚象甲(白菜籽龟象(Ceutorhynchus assimilis))、油菜冬茎象甲(Ceutorhynchus picitarsis)、金针虫(烟草金针虫(Conoderus vespertinus)、Conoderus falli)、香蕉蛀茎象甲(香蕉根颈象甲(Cosmopolites sordidus))、新西兰草蛴螬(褐新西兰肋翅鳃角金龟(Costelytrazealandica))、六月金龟(绿花金龟(Cotinis nitida))、向日葵茎象甲(密点细枝象(Cylindrocopturus adspersus))、红带皮蠹(火腿皮蠹(Dermestes lardarius))、玉米根虫(玉米根叶甲(Diabrotica virgifera)、美洲玉米根虫(Diabrotica virgiferavirgifera)和巴氏根萤叶甲(Diabrotica barberi))、墨西哥瓢虫(墨西哥豆瓢虫(Epilachna varivestis))、家天牛(Hylotropes bajulus)、苜蓿象鼻虫(紫苜蓿叶象(Hypera postica))、闪亮的蜘蛛甲虫(裸蛛甲(Gibbium psylloides))、烟草窃蠹(烟草甲(Lasioderma serricorne))、科罗拉多马铃薯甲虫(马铃薯甲虫(Leptinotarsadecemlineata))、中华粉蠹甲虫(中华粉蠹(Lyctus)物种)、露尾甲(油菜花露尾甲(Meligethes aeneus))、普通金龟子(大栗鳃金龟(Melolontha melolontha))、美洲蜘蛛甲虫(美洲蜘蛛甲(Mezium americanum))、金黄蛛甲(黄蛛甲(Niptus hololeucus))、谷物甲虫(苏里南锯谷盗(Oryzaephilus surinamensis)和大眼锯谷盗(Oryzaephilusmercator))、葡萄黑象甲(葡萄黑耳喙象(Otiorhynchus sulcatus))、芥末甲虫(辣根猿叶甲(Phaedon cochleariae))、十字花科跳蚤甲虫(蔬菜黄条跳甲(Phyllotretacruciferae))、黄曲条菜跳甲(黄曲条跳甲(Phyllotreta striolata))、卷心菜蒸跳蚤甲虫(白菜茎跳甲(Psylliodes chrysocephala)、标本虫(Ptinus)物种(蛛甲))、谷蠹(米长蠹(borer Rhizopertha dominica))、豌豆和象鼻虫(条纹根瘤象(Sitona lineatus))、稻谷甲虫(米象(Sitophilus oryzae)和谷象(Sitophilus granaries))、红葵花籽象甲(向日葵红色种子象(Smicronyx fulvus))、窃蠹(药材甲(Stegobium paniceum))、黄粉虫甲虫(黄粉虫(Tenebrio molitor))、面粉甲虫(赤拟谷盗(Tribolium castaneum)和杂拟谷盗(Tribolium confusum))、仓库和橱柜甲虫(斑皮蠹属(Trogoderma)物种)和向日葵甲虫(向日葵叶甲(Zygogramma exclamationis))。
革翅目(Dermaptera)(蠼螋)的示例包括但不限于：欧洲蠼螋、普通蠼螋(Forficula auricularia)和条纹蠼螋、溪岸蠼螋(Labidura riparia)。
网翅目(Dictvontera)的示例包括但不限于：东方蟑螂(东方蜚蠊(Blattaorientalis))、德国蟑螂(德国小蠊(Blatella germanica))、马德拉蟑螂(马德拉蜚蠊(Leucophaea maderae))、美洲蟑螂(美洲大蠊(Periplaneta americana))和烟黑蟑螂(黑胸大蠊(Periplaneta fuliginosa))。
Diplonoda的示例包括但不限于：斑点蛇千足虫(具斑马陆(Blaniulusguttulatus))、山蛩虫(Brachydesmus superus)和温室千足虫(温室马陆(Oxidusgracilis))。
双翅目包括长角亚目、角亚目和环裂亚目。长角亚目包括大蚊科、毛蠓科、蚊科、蠓科、摇蚊科、蚋科、毛蚊科和瘿蚊科。角亚目包括水虻科、虻科、剑虻科、食虫虻科、拟食虫虻科、蜂虻科和长足虻科。环裂亚目包括分类无缝组和无缝组。分类无缝组包括蚤蝇科、食蚜蝇科和眼蝇科。分类无缝组包括无瓣类和有瓣类。无瓣类包括斑蝇科、实蝇科、潜蝇科和果蝇科。有瓣类包括虱蝇科、狂蝇科、寄蝇科、花蝇科、蝇科、丽蝇科和麻蝇科。
双翅目(Diptera)的示例包括但不限于：家蝇(普通家蝇)、盾波蝇(噬人瘤蝇(Cordylobia anthropophaga))、吸血蠓(库蠓(Culicoides)物种)、蜂虱蝇(蜂虱(Braula)物种)、甜菜潜叶花蝇(甜菜潜叶蝇(Pegomyia betae))、黑蝇(克蚋属(Cnephia)物种、真蚋属(Eusimulium)物种、蚋属(Simulium)物种)、马蝇(黄蝇属(Cuterebra)物种、胃蝇属(Gastrophilus)物种、狂蝇属(Oestrus)物种)、大蚊(大蚊属(Tipula)物种)、眼虫(潜蝇属(Hippelates)物种)、滋生污秽的苍蝇(丽蝇属(Calliphora)物种、厕蝇属(Fannia)物种、扁角水虻属(Hermetia)物种、丝光绿蝇属(Lucilia)物种、蝇属(Musca)物种、腐蝇属(Muscina)物种、绿蝇属(Phaenicia)物种、伏蝇属(Phormia)物种)、食肉蝇(麻蝇属(Sarcophaga)物种、污蝇属(Wohlfahrtia)物种)；麦秆蝇(黑麦秆蝇(Oscinella frit))、果蝇(Dacus物种、果蝇属(Drosophila)物种)、head and canon蝇(Hydrotea物种)、小麦瘿蚊(黑森瘿蚊(Mayetiola destructor))、牛角水牛蝇(黑角蝇属(Haematobia)物种)、马鹿蝇(斑虻属(Chrysops)物种、麻虻属(Haematopota)物种、虻属(Tabanus)物种)、虱蝇(羊虱蝇属(Lipoptena)物种、拟虱蝇属(Lynchia)物种和伪沼虱蝇属(Pseudolynchia)物种)、地中海果蝇(Ceratitus物种)、蚊子(伊蚊属(Aedes)物种、按蚊属(Anopheles)物种、库蚊属(Culex)物种、鳞蚊属(Psorophora)物种)、白蛉(白蛉属(Phlebotomus)物种、罗蛉属(Lutzomyia)物种)、锥蝇(蛆症金蝇(Chtysomya bezziana)和螺旋锥蝇(Cochliomyiahominivorax))、羊虱蝇(蜱蝇属(Melophagus)物种)；稳蝇(螫蝇属(Stomoxys)物种)、舌蝇(舌蝇属(Glossina)物种)和牛皮蝇(皮下蝇属(Hypoderma)物种)。
等翅目(Isontera)(白蚁)的示例包括但不限于：来自Hodotennitidae、木白蚁科、澳白蚁科、Rhinotennitidae、齿白蚁科、白蚁科和原白蚁科的物种。
半翅目(Heteroptera)的示例包括但不限于：臭虫(温带臭虫(Cimexlectularius))、棉红蝽(Dysdercus intermedius)、Sunn pest(麦扁盾蝽(Eurygasterintegriceps))、牧草盲椿(美国牧草盲蝽(Lyguslineolaris))、喜绿蝽(黑须稻绿蝽(Nezara antennata))、南方绿椿象(稻绿蝽(Nezara viridula))和锥蝽(大锥蝽(Panstrogylus megistus)、Rhodnius ecuadoriensis、Rhodnius pallescans、长红锥蝽(Rhodnius prolixus)、Rhodnius robustus、二分锥蝽(Triatoma dimidiata)、骚扰锥蝽(Triatoma infestans)和泥色锥蝽(Triatoma sordida))。
同翅目(Homoptera)的示例包括但不限于：红圆蚧(肾圆盾蚧(Aonidiellaaurantii))、豆蚜(蚕豆蚜(Aphis fabae))、棉蚜或瓜蚜(瓜蚜(Aphis gossypii))、苹蚜(苹果蚜(Aphis pomi))、桔刺粉虱(茶园黑刺粉虱(Aleurocanthus spiniferus))、夹竹桃圆蚧(常春藤圆盾蚧(Aspidiotus hederae))、甘薯粉虱(烟粉虱(Bemesia tabaci))、菜蚜(甘蓝蚜(Brevicoryne brassicae))、梨黄木虱(梨木虱(Cacopsylla pyricola))、茶藨毛蚜(Cryptomyzus ribis)、葡萄根瘤蚜(根瘤蚜(Daktulosphaira vitifoliae))、桔木虱(柑橘木虱(Diaphorina citri))、马铃薯微叶蝉(马铃薯小绿叶蝉(Empoasca fabae))、蚕豆微叶蝉(茄微叶蝉(Empoasca solana))、藤蔓叶蝉(假眼小绿叶蝉(Empoasca vitis))、绵蚜(苹果绵蚜(Eriosoma lanigerum))、欧洲水果蚧(Eulecanium corni)、梅大尾蚜(桃大尾蚜(Hyalopterus arundinis))、小褐飞虱(灰飞虱(Laodelphax striatellus))、马铃薯蚜(马铃薯长管蚜(Macrosiphum euphorbiae))、绿桃蚜(桃蚜(Myzus persicae))、黑尾叶蝉(水稻黑尾叶蝉(Nephotettix cinticeps))、稻褐飞虱(褐飞虱(Nilaparvata lugens))、成瘿蚜虫(天疱疮(Pemphigus)物种)、蛇麻疣额蚜(指头蚜(Phorodon humuli))、鸟樱桃蚜(禾谷缢管蚜(Rhopalosiphum padi))、茶褐圆蚧(榄珠蜡蚧(Saissetia oleae))、麦二岔蚜(麦二叉蚜(Schizaphis graminum))、燕麦长管蚜(麦长管蚜(Sitobion avenae))和温室白粉虱(温室粉虱(Trialeurodes vaporariorum))。
等足目(Isopoda)的示例包括但不限于：西瓜虫(普通卷甲虫(Armadillidiumvulgare))和普通土虱(栉潮虫(Oniscus asellus))。
鳞翅目包括凤蝶科、粉蝶科、灰蝶科、蛱蝶科、斑蝶科、眼蝶科、弄蝶科、天蛾科、天蚕蛾科、尺蠖娥科、灯蛾科、夜蛾科、毒蛾科、透翅蛾科和谷蝶科。
鳞翅目(Lepidoptera)的示例包括但不限于：苹果小卷蛾(Adoxophyes orana)(棉褐带卷蛾)、小地老虎(Agrotis ipsolon)(小地蚕)、果黄卷蛾(Archips podana)(果树卷蛾)、梨角折蛾(Bucculatrix pyrivorella)(pear leafminer)、棉叶穿孔潜蛾(Bucculatrix thurberiella)(棉叶潜蛾)、松树尺蠖(Bupalus piniarius)(pinelooper)、苹果蠹蛾(Carpocapsa pomonella)(苹果小卷蛾)、水稻二化螟(Chilosuppressalis)(二化螟)、云杉蚜虫(Choristoneura fumiferana)(东方云杉芽虫)、向日葵细卷叶蛾(Cochylis hospes)(带纹向日葵蛾)、西南玉米螟(Diatraea grandiosella)(巨腐玉米螟)、Earls insulana(埃及棉铃虫)、地中海面螟(Euphestia kuehniella)(地中海粉蛾)、环针单纹卷蛾(Eupoecilia ambiguella)(欧洲葡萄浆果蛾)、褐尾蠹(Euproctischrysorrhoea)(棕尾毒蛾)、东方毒蛾(Euproctis subflava)(柿黄青蛾)、蜡螟(Galleriamellonella)(大蜡螟)、棉铃虫蛾(Helicoverpa armigera)(棉花暝蛉)、美洲棉铃虫(Helicoverpa zea)(棉铃虫)、绿棉铃虫(Heliothis virescens)(烟青虫)、褐家蛾(Hofmannophila pseudopretella)(褐织叶蛾)、向日葵斑螟(Homeosoma electellum)(向日葵螟)、茶长卷蛾(Homona magnanima)(茶长卷叶蛾)、斑幕潜叶细蛾(Lithocolletisblancardella)(斑叶潜蝇)、华夏舞毒蛾(Lymantria dispar)(舞毒蛾)、枯叶蛾(Malacosoma neustria)(天幕毛虫)、甘蓝夜蛾(Mamestra brassicae)(菜夜蛾)、蓓带夜蛾(Mamestra configurata)(披肩粘虫)、天蛾幼虫烟草天蛾(Manduca sexta)和番茄天蛾(Manuduca quinquemaculata)、冬尺蛾(Operophtera brumata)(冬尺蠖)、玉米螟(Ostrinia nubilalis)(欧洲玉米螟)、小眼夜蛾(Panolis flammea)(松夜蛾)、棉红铃虫(Pectinophora gossypiella)(红铃虫)、柑橘潜叶蛾(Phyllocnistis citrella)(桔细潜蛾)、欧洲粉蝶(Pieris brassicae)(菜粉蝶)、吊丝虫(Plutella xylostella)(小菜蛾)、Rachiplusia ni(大豆夜蛾)、弗吉尼亚虎蛾(Spilosoma virginica)(黄色飞蛾)、玉米夜蛾(Spodoptera exigua)(甜菜夜蛾)、草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)(秋夜蛾)、棉贪夜蛾(Spodoptera littoralis)(斜纹夜蛾)、斜纹贪夜蛾(Spodoptera litura)(黄地老虎)、Spodoptera praefica(黄条行军虫)、棉大卷叶螟(Sylepta derogata)(棉卷叶暝)、衣蛾(Tineola bisselliella)(负袋夜蛾)、袋衣蛾(Tineola pellionella)(袋谷蛾)、栎绿卷蛾(Tortrix viridana)(欧洲栎绿卷叶蛾)、粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)(菜尺蛾)和苹果巢蛾(Yponomeuta padella)(巢蛾)。
直翅目(Orthoptera)的示例包括但不限于：普通蟋蟀(家蟋蟀(Achetadomesticus))、树蝗虫(树蝗Anacridium物种)、飞蝗(亚洲飞蝗(Locusta migratoria))、双条纹蚱蜢(双带黑蝗(Melanoplus bivittatus))、长额负蝗(Melanoplus dfferentialis)、红腿蚱蜢(红腿蝗(Melanoplus femurrubrum))、迁徙蚱蜢(黑蝗(Melanoplussanguinipes))、北方蝼蛄(六指蝼蛄(Neocurtilla hexadectyla))、红蝗虫(红翅蝗(Nomadacris septemfasciata))、短翅蝼蛄(Scapteriscus abbreviatus)、南美蝼蛄(南方蝼蛄(Scapteriscus borellii))、黄褐色蝼蛄(西印度蝼蛄(Scapteriscus vicinus))和沙漠蝗(沙漠蝗虫(Schistocerca gregaria))。
虱目(Phthiraptera)的示例包括但不限于：牛羽虱(牛毛虱(Bovicola bovis))、咬虱(畜虱属(Damalinia)物种)、猫羽虱(猫虱(Felicola subrostrata))、短鼻牛虱(牛血虱(Haematopinus eloysternus))、尾车专换虱(Haematopinus quadriperiussus)、猪虱(猪血虱(Haematopinus suis))、面虱(绵羊颚虱(Linognathus ovillus))、足虱(羊足颚虱(Linognathus pedalis))、狗吸血虱(棘颚虱(Linognathus setosus))、犊长颚虱(长鼻牛虱(Linognathus vituli))、雏鸡羽虱(鸡体虱(Menacanthus stramineus))、羽虱(鸡羽虱(Menopon gallinae))、体虱(人虱(Pediculus humanus))、阴虱(八角虫(Phthiruspubis))、牛管虱(水牛盲虱(Solenopotes capillatus))和狗啮毛虱(犬啮毛虱(Trichodectes canis))。
啮虫目(Psocoptera)的示例包括但不限于：书虱(嗜卷书虱(Liposcelisbostrychophila)、无色书虱(Liposcelis decolor)、嗜虫书虱(Liposcelis entomophila)和尘虱(Trogium pulsatorium))。蚤目(Siphonaptera)的示例包括但不限于：禽蚤(鸟蚤(Ceratophyllus gallinae))、狗蚤(犬栉头蚤(Ctenocephalides canis))、猫栉头蚤(猫蚤(Ctenocephalides fells))、人蚤(扰蚤(Pulex irritans))和东方鼠蚤(印鼠客蚤(Xenopsylla cheopis))。
综合纲(Symphyla)的示例包括但不限于：花园综合虫(洁幺蚰(Scutigerellaimmaculate))。
缨尾目(Thysanura)的示例包括但不限于：灰银鱼(灰衣鱼(Ctenolepismalongicaudata))、四线衣鱼(Ctenolepisma quadriseriata)、普通银鱼(蠹鱼(Lepismasaccharina))和家衣鱼(Thennobia domestica)；
缨翅目(Thysanoptera)的示例包括但不限于：烟草褐蓟马(烟草蓟马(Frankliniella fusca))、花蓟马(水稻花蓟马(Frankliniella intonsa))、西方花蓟马(西花蓟马(Frankliniella occidentalis))、棉芽蓟马(梳缺花蓟马(Frankliniellaschultzei))、温室条蓟马(温室蓟马(Hercinothrips femoralis))、大豆蓟马(Neohydatothrips variabilis)、凯利柑橘蓟马(柑橘蓟马(Pezothrips kellyanus))、鳄梨蓟马(Scirtothrips perseae)、瓜蓟马(棕榈蓟马(Thrips palmi))和棉蓟马(烟蓟马(Thrips tabaci))。
线虫(Nematodes)的示例包括但不限于：寄生线虫，诸如根结线虫、孢囊线虫和病变线虫，包括线虫属(Heterodera)物种、根结线虫属(Meloidogyne)物种和球形胞囊线虫属(Globodera)物种；特别是孢囊线虫的成员，包括但不限于：大豆胞囊线虫(Heteroderaglycines)(大豆异皮线虫)；甜菜胞囊线虫(Heterodera schachtii)；禾谷胞囊线虫(Heterodera avenae)(燕麦胞囊线虫)；和马铃薯金线虫(Globodera rostochiensis)和马铃薯白线虫(Globodera pailida)(马铃薯孢囊线虫)。病变线虫包括但不限于：短体线虫属(Pratylenchus)物种。
易受包含本公开的一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A34)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合侵袭的其他昆虫物种包括：引起公众和动物健康问题的节肢动物害虫，例如来自蜱、蚤和苍蝇等的蚊子，例如伊蚊属、按蚊属和库蚊属的蚊子。
在一个实施方案中，该组合包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A34)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可用于治疗体外寄生物。体外寄生物包括但不限于：蚤、蜱、疥螨、螨、蚊子、讨厌的咬人苍蝇、虱和包含前述体外寄生物中的一种或多种的组合。术语“蚤”包括蚤目(Siphonaptera)的寄生蚤的常见或偶然种，并且特别是栉头蚤属(Ctenocephalides)类，特别是猫蚤(C.fells)、犬栉头蚤(C.cams)、鼠蚤(印鼠客蚤(Xenopsylla cheopis))和人蚤(扰蚤(Pulexirritans))。
本发明的用于主要作物的昆虫害虫包括但不限于：玉蜀黍：玉米螟(Ostrinianubilalis)欧洲玉米螟；小地老虎(Agrotis ipsilon)小地蚕；美洲棉铃虫(Helicoverpazea)玉米螟蛉；草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)秋夜蛾；西南玉米螟(Diatraeagrandiosella)巨腐玉米螟；小玉米螟(Elasmopalpus lignosellus)小玉米茎蛀虫；小蔗螟(Diatraea saccharalis)甘蔗螟虫；玉米根虫(Diabrotica virgifera)玉米根叶甲；长角叶甲(Diabrotica longicornis barberi)北方玉米根虫；黄瓜十一星叶甲(Diabroticaundecimpunctata howardi)南方玉米根虫；梳爪叩甲属(Melanotus)物种金针虫；北方圆头犀金龟(Cyclocephala borealis)北方蒙面金龟子(白蛴螬)；圆头犀金龟(Cyclocephalaimmaculata)南方圆头犀金甲(白蛴螬)；日本弧丽金龟(Popillia japonica)日本丽金龟；甜菜跳甲(Chaetocnema pulicaria)玉米跳甲；玉米隐喙象(Sphenophorus maidis)玉米象虫；玉米蚜(Rhopalosiphum maidis)玉米缢管蚜；玉蜀黍根蚜(Anuraphis maidiradicis)玉米根蚜；麦长蝽(Blissus leucopterus leucopterus)麦虱；红腿蝗(Melanoplusfemurrubrum)红腿蚱蜢；黑血蝗(Melanoplus sanguinipes)迁徙蚱蜢；灰种蝇(Hylemyaplatura)种蝇；美洲黍潜蝇(Agromyza parvicornis)玉米斑潜蝇；玉米黄呆蓟马(Anaphothrips obscrurus)草地蓟马；窃蚁(Solenopsis milesta)窃叶蚁；棉红蜘蛛(Tetranychus urticae)二斑叶螨；高粱：斑禾草螟(Chilo partellus)高粱蛀虫；草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)秋夜蛾；美洲棉铃虫(Helicoverpa zea)棉铃虫；小玉米螟(Elasmopalpus lignosellus)小玉米茎蛀虫；粒伏地老虎(Feltia subterranea)颗粒地老虎；长毛食叶然金龟(Phyllophaga crinita)白蛴螬；伪金针虫属(Eleodes)、宽胸叩头虫属(Conoderus)和Aeolus物种金针虫；黑角负泥虫(Oulema melanopus)橙足负泥虫；甜菜跳甲(Chaetocnema pulicaria)玉米跳甲；玉米隐喙象(Sphenophorus maidis)玉米象虫；玉米蚜(Rhopalosiphum maidis)玉米缢管蚜；牛鞭草蚜(Sipha flava)蔗黄伪毛蚜；麦长蝽(Blissus leucopterus leucopterus)麦虱；高粱瘿蚊(Contarinia sorghicola)高粱蠓；朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)红叶螨；棉红蜘蛛(Tetranychus urticae)二斑叶螨；小麦：美洲一星粘虫(Pseudaletia unipunctata)粘虫；草地贪夜蛾(Spodopterafrugiperda)秋夜蛾；小玉米螟(Elasmopalpus lignosellus)小玉米茎蛀虫；灰地老虎(Agrotis orthogonia)西方地老虎；小玉米螟(Elasmopalpus lignosellus)小玉米茎蛀虫；黑角负泥虫(Oulema melanopus)橙足负泥虫；北美苜蓿象甲(Hypera punctata)车轴草叶象甲；黄瓜十一星叶甲(Diabrotica undecimpunctata howardi)南方玉米根虫；俄罗斯小麦蚜虫；麦二叉蚜(Schizaphis graminum)麦二岔蚜；麦长管蚜(Macrosiphum avenae)英国谷物蚜虫；红腿蝗(Melanoplus femurrubrum)红腿蚱蜢；异形黑蝗(Melanoplusdifferentialis)长额负蝗；黑血蝗(Melanoplus sanguinipes)迁徙蚱蜢；黑森瘿蚊(Mayetiola destructor)小麦瘿蚊；麦红吸浆虫(Sitodiplosis mosellana)小麦吸浆虫；美洲麦秆蝇(Meromyza americana)麦秆蝇；麦地种蝇(Hylemya coarctata)小麦球茎蝇；烟褐花蓟马(Frankliniella fusca)烟草蓟马；麦茎蜂(Cephus cinctus)小麦茎锯蝇；郁金香瘤瘿螨(Aceria tulipae)小麦卷叶螨；向日葵：向日葵芽蛾(Suleima helianthana)葵花螟；向日葵斑螟(Homoeosoma electellum)向日葵螟；向日葵叶甲(Zygogrammaexclamationis)向日葵甲虫；胡萝卜金龟(Bothyrus gibbosus)胡萝卜甲虫；向日葵籽瘿蚊(Neolasioptera murtfeldtiana)葵花籽蠓；棉花：绿棉铃(Heliothis virescens)棉蚜虫；美洲棉铃虫(Helicoverpa zea)棉铃虫；玉米夜蛾(Spodoptera exigua)甜菜夜蛾；棉红铃虫(Pectinophora gossypiella)红铃虫；苜蓿叶象甲(Anthonomus grandis)棉铃象甲；瓜蚜(Aphis gossypii)棉蚜；棉盲蝽(Pseudatomoscelis seriatus)棉跳盲蝽；纹翅粉虱(Trialeurodes abutilonea)带状翅粉虱；美国牧草盲蝽(Lygus lineolaris)牧草盲蝽；红腿蝗(Melanoplus femurrubrum)红腿蚱蜢；异形黑蝗(Melanoplus differentialis)长额负蝗；烟蓟马(Thrips tabaci)棉蓟马；烟褐花蓟马(Franklinkiella fusca)烟草蓟马；朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)红叶螨；棉红蜘蛛(Tetranychus urticae)二斑叶螨；稻：小蔗螟(Diatraea saccharalis)甘蔗螟虫；草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)秋夜蛾；美洲棉铃虫(Helicoverpa zea)棉铃虫；青铜肖叶甲(Colaspis brunnea)葡萄肖叶甲；稻水象甲(Lissorhoptrus oryzophilus)稻水象；米象(Sitophilus oryzae)稻象虫；二条黑尾叶蝉(Nephotettix nigropictus)稻叶蝉；麦长蝽(Blissus leucopterus)麦虱；拟绿蝽(Acrosternum hilare)喜绿蝽；大豆：大豆尺夜蛾(Pseudoplusia includens)大豆夜蛾；绒毛豆蛾(Anticarsia gemmatalis)梨豆夜蛾；苜蓿绿夜蛾(Plathypena scabra)绿三叶虫；玉米螟(Ostrinia nubilalis)欧洲玉米螟；小地老虎(Agrotis ipsilon)小地蚕；玉米夜蛾(Spodoptera exigua)甜菜夜蛾；绿棉铃虫(Heliothis virescens)棉蚜虫；美洲棉铃虫(Helicoverpa zea)棉铃虫；墨西哥豆瓢虫(Epilachna varivestis)墨西哥瓢虫；桃蚜(Myzus persicae)绿桃蚜；马铃薯小绿叶蝉(Empoasca fabae)马铃薯微叶蝉；拟绿蝽(Acrosternum hilare)喜绿蝽；红腿蝗(Melanoplus femurrubrum)红腿蚱蜢；异形黑蝗(Melanoplus differentialis)长额负蝗；灰种蝇(Hylemya platura)种蝇；豆蓟马(Sericothrips variabilis)大豆蓟马；烟蓟马(Thrips tabaci)棉蓟马；土耳其斯坦叶螨(Tetranychus turkestani)草莓蜘蛛螨；棉红蜘蛛(Tetranychus urticae)二斑叶螨；大 麦：玉米螟(Ostrinia nubilalis)欧洲玉米螟；小地老虎(Agrotis ipsilon)小地蚕；麦二叉蚜(Schizaphis graminum)麦二岔蚜；麦长蝽(Blissus leucopterusleucopterus)麦虱；拟绿蝽(Acrosternum hilare)喜绿蝽；褐蝽(Euschistus servus)褐臭蝽；灰地种蝇(Deliaplatura)种蝇；黑森瘿蚊(Mayetiola destructor)小麦瘿蚊；麦岩螨(Petrobia latens)麦卡腿蜘蛛；油菜籽：甘蓝蚜(Brevicoryne brassicae)菜蚜；蔬菜黄条跳甲(Phyllotretacruciferae)跳甲；蓓带夜蛾(Mamestra configurata)披肩粘虫；吊丝虫(Plutellaxylostella)小菜蛾；蝇属(Delia)物种根蛆。
在一些实施方案中，包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A34)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)可用于处理前述昆虫中的任一者或多者。
易受本发明的结合物和组合物侵袭的昆虫包括但不限于以下：Cyt毒素影响的以下科，诸如：蜚蠊目、鞘翅目、弹尾目、双翅目、棘口目、半翅目、膜翅目、等翅目、鳞翅目、脉翅目、直翅目、小杆目、蚤目和缨翅目。属种如下所示：黑行军虫、小地老虎、黄地老虎、藜豆夜蛾、桔带卷蛾、菜青虫、家桑蚕、非洲茎螟、Cacyreus marshall、二化螟、枞色卷蛾、望江南、C.pinus pinus、C.rosacena、稻纵卷叶螟、可可细蛾、Ctenopsuestis obliquana、苹果蠹蛾、黑脉金斑蝶、甘蔗螟、西南草螟、翠纹钻夜蛾、小玉米螟、非洲茎螟、地中海斑螟、小卷蛾、苹浅褐卷蛾、蜡螟、属—种，美洲棉铃虫、H.punctigera、棉铃虫、绿棉铃虫、美国白蛾、东方铁杉尺蠖、大豆食心虫、葡萄花翅小卷蛾、舞毒蛾、天幕毛虫、甘蓝夜蛾、蓓带夜蛾、烟草天蛾、Marasmia patnalis、豆荚螟、白斑毒蛾、玉米螟、亚洲玉米螟、Pandemis pyrusana、棉红铃虫、咖啡潜叶蛾、马铃薯麦蛾、Pianotortrix octo、Piatynota stultana、欧洲粉蝶、印度谷螟、吊丝虫、大豆夜蛾、两色髯须夜蛾、三化螟、非洲大螟、弗吉尼亚虎蛾、甜菜夜蛾、草地贪夜蛾、棉贪夜蛾、非洲粘虫、斜纹夜蛾、马铃薯块茎蛾、松异舟蛾、粉纹夜蛾、蝙蝠蛾、Wiseana copularis、Wiseana jocosa、蜚蠊目小蠊属、弹尾目奇跳属、弹尾目folsomia、棘口目片形属、半翅目oncopeltrus、半翅目小粉虱属、半翅目长管蚜属、半翅目缢管蚜属、半翅目瘤额蚜属、膜翅目松叶蜂属、膜翅目蜂属、膜翅目长体茧蜂属、膜翅目悬茧蜂属、膜翅目金小蜂属、膜翅目火蚁属、等足目鼠妇属、等足目散白蚁属、直翅目Achta、前气门目叶螨属、小杆目拟丽突属、小杆目新小杆线虫属、小杆目distolabrellus、小杆目panagrellus、小杆目pristionchus、小杆目短体线虫属、小杆目钩口属、小杆目日圆属、小杆目panagrellus、小杆目血矛属、小杆目根结线虫属和蚤目栉首蚤属。
本公开提供了用于植物转化的方法，这些方法可用于转化任何植物物种，包括但不限于单子叶植物和双子叶植物。转基因方法将是特别有用的方法的作物包括但不限于：苜蓿、棉花、番茄、玉蜀黍、小麦、玉米、甜玉米、紫花苜蓿、大豆、高粱、红豌豆、亚麻籽、红花、油菜籽、油菜、稻、大豆、大麦、向日葵、树(包括针叶树和落叶树)、花(包括商业上和温室中生长的那些)、羽扇豆、柳枝稷、甘蔗、马铃薯、番茄、烟草、十字花科植物、胡椒、甜菜、大麦和油菜、芸苔属物种、黑麦、小米、花生、甘薯、木薯、咖啡、椰子、菠萝、柑橘树、可可、茶、香蕉、鳄梨、无花果、番石榴、芒果、橄榄、木瓜、腰果、澳洲坚果、杏仁、燕麦、蔬菜、观赏植物和针叶树。
杀昆虫剂抗性害虫
当害虫群体对杀昆虫剂的敏感性存在可遗传的变化时，发生对杀昆虫剂的抗性；当按预期使用时，在杀昆虫剂不能达到所需结果和/或预期防治程度时，可观察到这种敏感性的变化。交叉抗性描述了害虫对一种杀昆虫剂的抗性，这种抗性继而又赋予对另一种不同杀昆虫剂的抗性—即使在所述害虫没有遇到另一种杀昆虫剂的情况下。关于杀昆虫剂抗药性的信息可在杀昆虫剂抗性行动委员会(IRAC)网站(https://www.irac-online.org/)找到。关于昆虫和其他害虫的杀昆虫剂抗性以及与之相关的杀昆虫剂的报告可在节肢动物杀害虫剂抗性数据库(APRD)(https://www.pesticideresistance.org/)找到。
在一些实施方案中，昆虫和/或害虫可对一种或多种杀昆虫剂具有抗性或至少部分具有抗性。例如，在一些实施方案中，昆虫和/或害虫可对以下杀昆虫剂中的一种或多种具有抗性或至少部分具有抗性：乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制剂(例如氨基甲酸酯，诸如棉铃威、涕灭威、恶虫威、丙硫克百威、丁酮威、酮砜威、西维因、克百威、丁硫克百威、杀虫丹、丁苯威、伐虫脒、呋线威、异丙威、灭虫威、灭多虫、速灭威、杀线威、抗蚜威、残杀威、硫双威、久效威、唑蚜威、混杀威、灭除威和灭杀威；和有机磷酸酯，诸如乙酰甲胺磷、甲基吡啶磷、乙基谷硫磷、甲基谷硫磷、硫线磷、氯氧磷、毒虫威、氯甲磷、毒死蜱、甲基毒死蜱、蝇毒磷、杀螟腈、甲基内吸磷、二嗪农、敌敌畏/ddvp、百治磷、乐果、甲基毒虫畏、乙拌磷、苯硫膦、乙硫磷、灭线磷、伐灭磷、苯胺磷砜、杀螟硫磷、倍硫磷、噻唑磷、庚烯磷、异丙胺磷、异噁唑磷、马拉硫磷、灭蚜蜱、甲胺磷、杀扑磷、福斯金、久效磷、二溴磷、氧乐果、亚砜磷、对硫磷、甲基对硫磷、稻丰散、伏杀磷、甲拌磷、亚胺硫磷、磷胺、辛硫磷、丙溴磷、胺丙畏、丙硫磷、吡唑硫磷、哒嗪硫磷、喹硫磷、硫特普、丁基嘧啶磷、双硫磷、特丁磷、杀虫畏、甲基乙拌磷、三唑磷、敌百虫、蚜灭磷、甲基嘧啶磷、imicyafos和邻-(甲氧基氨基硫代磷酰基)水杨酸异丙酯)；Gaba门控 氯离子通道阻断剂(例如，环戊二烯有机氯，诸如氯丹和硫丹；和苯基吡唑(fiproles)，诸如乙虫腈和芬普尼)；钠通道调节剂(例如拟除虫菊酯和除虫菊酯，诸如氟丙菊酯、丙烯菊酯、右旋反式烯丙菊酯、D-丙烯菊酯、联苯菊酯、烯丙菊酯、二丙烯除虫菊酯、s-环戊烯基、右旋反灭虫菊酯、乙氰菊酯、氟氯氰菊酯、高效氟氯氰菊酯、格林奈、高效氯氟氰菊酯、超高效三氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、右旋反式苯醚菊酯、高效氯氰菊酯、高效反式氯氰菊酯、六氯氰菊酯、环苯氰菊酯[(1r)-反式异构体]、溴氰菊酯、烯炔菊酯[(ez)-(1r)-异构体]、顺式氰戊菊酯、醚菊酯、甲氰菊酯、杀灭菊酯、氟氰菊酯、氟氯苯菊酯、氟胺氰菊酯、kadathrin、除虫菊酯(除虫菊)、苄螨醚、苯醚菊酯[(1r)-反式异构体]、炔丙菊酯、苄呋菊酯、氟硅菊酯、七氟菊酯、胺菊酯、胺菊酯[(1r)-异构体]、四溴菊酯、四氟苯菊酯、苄氯菊酯；滴滴涕和甲氧滴滴涕)；烟碱乙酰胆碱受体(nAchR)竞争性调节剂(例如，新烟碱，诸如啶虫脒、噻虫胺、呋虫胺、吡虫啉、烯啶虫胺、噻虫啉、噻虫嗪；烟碱；砜基亚胺诸如氟啶虫胺腈；丁烯酸内酯诸如氟吡呋喃酮；和mesoionics诸如三氟苯嘧啶)；烟碱乙酰胆碱受体(nAchR)变构调节剂—位点I(例如，多杀菌素诸如乙基多杀菌素和刺糖菌素)；谷氨酸盐门控氯离子通道(GluCl)变构调 节剂(例如，阿维菌素和米尔贝霉素诸如害极灭、埃玛菌素、苯酸盐、lepimectin和弥拜菌素)；保幼激素模拟物(例如，保幼激素类似物诸如烯虫乙酯、烯虫炔酯和烯虫酯；苯氧威；和蚊蝇醚)；各种非特异性(多位点)抑制剂(例如，卤代烷诸如甲基溴和其他卤代烃；氯化苦；氟化物诸如冰晶石和磺酰氟；硼酸盐诸如硼砂、硼酸、氧化硼钠、硼酸钠和偏硼酸钠；吐酒石；和异硫氰酸甲酯诸如棉隆和威百亩)；弦音器官TRPV通道调节剂(例如，吡啶甲亚胺衍生物诸如吡蚜酮、新喹唑啉(间二氮杂苯)类；和芮烯类诸如双丙环虫酯)；螨生长抑制剂(例如，四螨嗪和氟螨嗪，噻螨酮诸如四螨嗪、氟螨嗪和噻螨酮；和乙螨唑)；线粒体ATP合成酶抑 制剂(例如，丁醚脲；有机锡类杀蟎剂诸如三唑锡、三环锡和苯丁锡；克螨特；和三氯杀螨砜)；通过破坏质子梯度的氧化磷酸化解偶联剂(例如，吡咯类、二硝基酚和氟虫胺，例如，溴虫腈、二硝基甲酚和氟虫胺)；烟碱乙酰胆碱受体(nAchR)通道阻断剂(例如，杀蚕毒素类似物诸如杀虫磺、杀螟丹、杀虫环、杀虫双)；蜕皮激素受体激动剂(例如，二芳甲酰基肼类诸如环虫酰肼、氯虫酰肼、甲氧虫酰肼和虫酰肼)；章鱼胺受体激动剂(例如，双甲脒)；线粒体复 合物III电子传递抑制剂(例如，伏蚁腙；灭螨醌；嘧螨酯；和联苯肼酯)；线粒体复合物I电子 传递抑制剂(例如，腺体电子传递抑制杀蟎剂和杀昆虫剂诸如喹螨醚、芬普蟎、嘧螨醚、哒螨灵、吡螨胺和唑虫酰胺；和鱼藤酮)；电压依赖性钠通道阻断剂(例如，噁二嗪类诸如茚虫威；和缩氨基脲诸如氰氟虫腙)；乙酰辅酶A羧化酶抑制剂(例如，特窗酸和特特拉姆酸衍生物诸如螺螨酯、螺甲螨酯、甲氧哌啶乙酯和螺虫乙酯)；线粒体复合物IV电子传递抑制剂(例如，磷化物诸如磷化铝、磷化钙、磷化氢和磷化锌；和氰化物诸如氰化钙、氰化钾和氰化钠)；线 粒体复合物II电子传递抑制剂(例如，β-酮腈衍生物诸如腈吡螨酯和丁氟螨酯；和carboxanilides诸如pyflubumide)；兰尼碱受体调节剂(例如，二酰芳胺诸如氯虫苯甲酰胺、溴氰虫酰胺、环丙苯甲酰胺、氟虫酰胺和四唑虫酰胺)；弦音器官调节剂—未定义的靶位 点(例如，氟啶虫酰胺)；和/或GABA门控氯离子通道变构调节剂(例如，间二酰胺和异噁唑啉诸如溴虫氟苯双酰胺、氟噁唑酰胺)。
在一些实施方案中，昆虫和/或害虫可对本文所述的杀昆虫剂中的任一者或多者具有抗性或至少部分具有抗性。
在一些实施方案中，可向对一种或多种杀昆虫剂具有抗性或至少部分抗性的昆虫和/或害虫所在处施用本发明的组合物、组合和/或方法，所述昆虫和/或害虫选自下列通常已知的昆虫和/或害虫：黄热蚊；玉米螟；二化螟；家蚊；南方家蚊；玉米根叶甲；甘蔗螟；棉蚜虫；棉铃虫；烟青虫；科罗拉多马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆夜蛾；甜菜军虫、小军虫；秋夜蛾；埃及棉叶蝉、粘虫；或粉纹夜蛾。
在一些实施方案中，可向对一种或多种杀昆虫剂具有抗性或至少部分抗性的昆虫和/或害虫所在处施用本发明的组合物、组合和/或方法，其中所选择的所述昆虫和/或害虫是黑蝇或讨厌的苍蝇(例如，毛蠓属(Psychoda)物种和摇蚊属(Chironomus)物种)。
在一些实施方案中，昆虫和/或害虫可对一种或多种杀昆虫剂具有抗性或至少部分抗性，可以是鳞翅目，例如小菜蛾。
在一些实施方案中，可向对一种或多种杀昆虫剂具有抗性或至少部分抗性的昆虫和/或害虫所在处施用本发明的组合物、组合和/或方法，所述昆虫和/或害虫选自：尺蠖；杂食性卷叶蛾；天蛾幼虫；菜粉蝶；小菜蛾；绿色三叶虫；结网虫；盐沼毛虫；粘虫；地老虎；十字条纹菜青虫；豆荚虫；绒毛黧豆毛虫；大豆夜蛾；番茄螟蛉；豆杂色夜蛾；甜瓜蠕虫；Rindwormcomplex；果树卷叶蛾；柑橘地老虎；实夜蛾属(Heliothis)；桔凤蝶；柑橘地老虎；红峰毛虫；黄褐天幕毛虫；美洲白蛾；胡桃天社蛾；星尺蛾；舞毒蛾；杂色卷叶蛾；红带卷叶蛾；丛生苹果蠹蛾；梨小食心虫；榛子卷叶蛾；倾斜卷叶蛾；苹果蠹蛾；树枝蛀虫；葡萄叶食叶虫；葡萄卷叶蛾；Achema天蛾(天蛾幼虫)；桔卷叶蛾；烟青虫；葡萄浆果螟；尺蠖；苜蓿粉蝶；棉铃虫；头蛾；Amorbia蛾；杂食尺蠖；Ello Moth(天蛾幼虫)；玉米天蚕蛾；夹竹桃蛾；杜鹃花毛虫；天蛾幼虫；卷叶蛾；香蕉弄蝶；Batrachedra comosae(Hodges)；线灰蝶蛾；洋蓟羽蛾；蓟蝶；结草虫；春秋尺蠖；榆树尺蠖；加州橡树虫；松蝴蝶；云杉芽虫；鞍状突出毛虫；道格拉斯冷杉毒蛾；西方毒蛾；黑头青虫；合欢巢蛾；杰克松毛虫；鞍背刺蛾毛虫；Greenstriped Mapleworm；或铁杉尺蠖。
在一些实施方案中，昆虫和/或害虫可对一种或多种杀昆虫剂具有抗性或至少部分抗性，可以是科罗拉多马铃薯甲虫或榆黄叶甲。
在一些实施方案中，可向对一种或多种杀昆虫剂具有抗性或至少部分抗性的昆虫和/或害虫所在处施用本发明的组合物、组合和/或方法，所述昆虫和/或害虫选自：Achema天蛾(天蛾幼虫)(葡萄蔓优天蛾(Eumorpha achemon))；苜蓿粉蝶(纹黄豆粉蝶(Coliaseurytheme))；粉斑螟蛾(粉斑螟(Caudra cautella))；Amorbia蛾(Amorbia humerosana)；粘虫(灰翅夜蛾属(Spodoptera属物种，例如甜菜夜蛾、草地贪夜蛾、棉贪夜蛾、一星黏虫)；洋蓟羽蛾(洋葱羽蛾(Platyptilia carduidactyla))；杜鹃花毛虫(Datana major)；结草虫(常绿树蓑蛾(Thyridopteryx ephemeraeformis))；香蕉蛾(木豹蛾(Hypercompescribonia))；香蕉弄蝶(香蕉卷叶虫(Erionota thrax))；黑头芽虫(西部黑头长翅卷蛾(Acleris gloverana))；加州橡树虫(加州槲蛾(Phryganidia californica))；春尺蛾(春尺蠖(Paleacrita merriccata))；樱小卷蛾(樱小食心虫(Grapholita packardi))；中国尺蠖(圹水螟(Nymphula stagnata))；柑橘地老虎(柑橘夜蛾(Xylomyges curialis))；苹果蠹蛾(苹果小卷蛾(Cydia pomonella))；蔓越莓果虫(越橘蜂斑螟(Acrobasis vaccinii))；十字条纹菜青虫(卷心菜薄翅野螟(Evergestis rimosalis))；地老虎(夜蛾(Noctuid)类、小地老虎(Agrotis ipsilon))；道格拉斯冷杉毒蛾(枞树毒蛾(Orgyia pseudotsugata))；Ello Moth(天蛾幼虫)(木薯天蛾(Erinnyis ello))；榆树尺蠖(榆秋黄尺蛾(Ennomossubsignaria))；欧洲葡萄蛾(葡萄花翅小卷蛾(Lobesia botrana))；欧洲弄蝶(无斑豹弄蝶(Thymelicus lineola)(Essex Skipper)；美洲白蛾(Melissopus latiferreanus)；榛子卷叶蛾(蔷薇黄卷蛾(Archips rosanus))；果树卷叶蛾(果树卷叶虫(Archipsargyrospilia))；葡萄浆果螟(葡萄浆果蛾(Paralobesia viteana))；葡萄卷叶蛾(荷兰石竹小卷蛾(Platynota stultana))；葡萄叶食叶虫(葡萄烟翅蛾(Harrisina americana))(仅地栽)；绿色三叶虫(苜蓿绿夜蛾(Plathypena scabra))；Greenstriped Mapleworm(玫瑰栎蚕蛾(Dryocampa rubicunda))；Gummosos-Batrachedra；Comosae(Hodges)；舞毒蛾(华夏舞毒蛾(Lymantria dispar))；铁杉尺蠖(东方铁杉尺蠖(Lambdina fiscellaria))；天蛾幼虫(烟草天蛾属(Manduca物种)；菜粉蝶幼虫(菜粉蝶(Pieris rapae))；玉米天蚕蛾(玉米尺蚕蛾(Automeris io))；杰克松毛虫(贾克松色卷蛾(Choristoneura pinus))；苹果浅褐卷叶蛾(苹淡褐卷蛾(Epiphyas postvittana))；瓜虫(甜瓜绢野螟(Diaphaniahyalinata))；合欢巢蛾(含羞草雕蛾(Homadaula anisocentra))；斜纹卷叶虫(斜条卷叶蛾(Choristoneura rosaceana))；夹竹桃蛾(夹竹桃蛾幼虫(Syntomeida epilais))；杂食性卷叶蛾(杂食卷叶虫(Playnota stultana))；杂食尺蠖(杂食性尺蠖(Sabulodesaegrotata))；桔凤蝶(大黄带凤蝶(Papilio cresphontes))；桔卷叶蛾(桔带卷蛾(Argyrotaenia citrana))；梨小食心虫(东方果蛾(Grapholita molesta))；桃条麦蛾(桃枝麦蛾(Anarsia lineatella))；松蝴蝶(娆粉蝶(Neophasia menapia))；豆荚虫(棉铃虫(Heliocoverpa zea))；红带卷叶蛾(红带卷蛾(Argyrotaenia velutinana))；红峰毛虫(红抚天社蛾(Schizura concinna))；Rindworm Complex(各种Leps.)；鞍背刺蛾毛虫(鞍背毛虫(Sibine stimulea))；鞍状突出毛虫(鞍背天社蛾(Heterocampa guttivitta))；盐沼毛虫(盐泽灯蛾(Estigmene acrea))；草地螟(麦根茎草螟(Crambus)物种)；尺蠖(榆角尺蠖(Ennomos subsignaria))；秋星尺蠖(秋尺蠖(Alsophila pometaria))；云杉卷叶蛾(云杉色卷蛾(Choristoneura fumiferana))；天幕毛虫(各种枯叶蛾)；萝褐灰蝶(Geyr)(菠萝褐灰蝶(Thecla basilides))；烟草天蛾(Manduca sexta)；烟草灰绿斑蛾(烟草粉斑螟(Ephestia elutella))；丛生苹果蠹蛾(簇生苹果芽蛾(Platynota idaeusalis))；树枝蛀虫(桃枝麦蛾(Anarsia lineatella))；豆杂色夜蛾(疆夜蛾(Peridroma saucia))；杂色卷叶蛾(杂色卷叶虫(Platynota flavedana))；绒毛黧豆毛虫(藜豆夜蛾(Anticarsiagemmatalis))；胡桃天社蛾(胡桃毛虫(Datana integerrima))；结网毛虫(美国白蛾(Hyphantria cunea))；西方毒蛾(老古毒蛾(Orgyia vetusta))；南方玉米秆螟(南方玉米螟(Diatraea crambidoides))；玉米穗虫；甘薯小象甲；胡椒茎象甲；桔根象甲；草莓根象甲；美核桃象甲；榛象甲；稻水象甲；苜蓿叶象甲；三叶草象甲；茶枝小蠹虫；根象甲；甘蔗犀金龟；咖啡果蛀虫；一年生蓝草象鼻虫(早熟禾象甲(Listronotus maculicollis))；亚洲园林甲虫(栗马绒金龟(Maladera castanea))；欧金龟(欧洲金龟子(Rhizotroqusmajalis))；绿花金龟(绿六月花金龟(Cotinis nitida))；日本金龟子(日本弧丽金龟(Popillia japonica))；五月或六月甲虫(六月鳃角金龟属(Phyllophaga)物种)；圆头犀金龟(北方圆头犀金龟(Cyclocephala borealis))；东方丽金龟(Anomala orientalis)；南方蒙面金龟子(南方金龟子(Cyclocephala lurida))；象岬(象甲(Curculionoidea))；埃及伊蚊；非洲玉米螟虫；二化螟；尖音库蚊；五带淡色库蚊；美洲玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；绿棉铃虫；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；玉米螟；棉红铃虫；印度谷斑螟；吊丝虫；大豆尺蠖蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；灰翅夜蛾；粉紋夜蛾；或榆叶甲。
在一些实施方案中，可向对一种或多种杀昆虫剂具有抗性或至少部分抗性的昆虫和/或害虫所在处施用本发明的组合物、组合和/或方法，其中所述昆虫和/或害虫是选自以下的甲虫成虫：亚洲园林甲虫(栗马绒金龟(Maladera castanea))；金斑橡树蛀虫(Agriluscoxalis auroguttatus)；绿金龟(绿花金龟(Cotinis nitida))；日本金龟子(日本弧丽金龟(Popillia japonica))；五月或六月甲虫(六月鳃角金龟属(Phyllophaga)物种)；东方丽金龟(Anomala orientalis)；和皂浆果螟(Agrilus prionurus)。
在一些实施方案中，可向对一种或多种杀昆虫剂具有抗性或至少部分抗性的昆虫和/或害虫所在处施用本发明的组合物、组合和/或方法，其中所述昆虫和/或害虫是选自以下的幼虫(一年生白蛴螬)：一年生蓝草象鼻虫(早熟禾象甲(Listronotusmaculicollis))；亚洲园林甲虫(栗马绒金龟(Maladera castanea))；欧金龟(欧洲金龟子(Rhizotroqus majalis))；绿金龟(绿花金龟(Cotinis nitida))；日本金龟子(日本弧丽金龟(Popillia japonica))；五月或六月甲虫(六月鳃角金龟属(Phyllophaga)物种)；圆头犀金龟(北方圆头犀金龟(Cyclocephala borealis))；东方丽金龟(Anomala orientalis)；南方蒙面金龟子(南方金龟子(Cyclocephala lurida))；和象岬(象甲(Curculionoidea))。
Bt毒素抗性害虫
在一些实施方案中，昆虫和/或害虫可对一种或多种杀昆虫剂例如一种或多种Bt毒素具有抗性或至少部分具有抗性。Bt毒素的示例性描述公开于Adang等，2014年，Diversity of bacillus thuringiensis crystal toxins and mechanism of action。载于：Dhadialla,Tarlochan和Gill,Sarjeet编辑，Insect Midgut and InsecticidalProteins，Advances in Insect Physiology，第47卷，Academic Press，第39-87页；以及PCT专利号WO2009076475，这些文献和专利的公开内容全文以引用方式并入本文。
在一些实施方案中，昆虫和/或害虫可对本文所述的Bt毒素中的一种或多种具有抗性或至少部分具有抗性。
在一些实施方案中，昆虫和/或害虫可对Bt毒素具有抗性或至少部分具有抗性。例如，在一些实施方案中，昆虫和/或害虫可对以下毒素具有抗性或至少部分抗性：苏云金芽孢杆菌毒素；苏云金芽孢杆菌Cry11Aa蛋白质；苏云金芽孢杆菌Cry11Ba蛋白质；苏云金芽孢杆菌Cry1Ac蛋白质；苏云金芽孢杆菌Cry1A.105蛋白质；苏云金芽孢杆菌Cry1Aa蛋白质；苏云金芽孢杆菌Cry1Ab蛋白质；苏云金芽孢杆菌Cry1Da蛋白质；苏云金芽孢杆菌Cry1F蛋白质；苏云金芽孢杆菌Cry2A蛋白质；苏云金芽孢杆菌Cry2Ab蛋白质；苏云金芽孢杆菌Cry2Ab2蛋白质；苏云金芽孢杆菌Cry2Ae蛋白质；苏云金芽孢杆菌Cry4Aa蛋白质；苏云金芽孢杆菌Cry4B蛋白质；苏云金芽孢杆菌CryIAa蛋白质；苏云金芽孢杆菌晶体CryIC蛋白质；苏云金芽孢杆菌CryIJa蛋白质；苏云金芽孢杆菌HD73孢子/晶体蛋白质；苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种HD-1蛋白质；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种蛋白质；苏云金芽孢杆菌aizawai变种蛋白质；苏云金芽孢杆菌aizawai变种ATTC SD-1372蛋白质；苏云金芽孢杆菌以色列变种蛋白质；苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种蛋白质；苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(苏云金杆菌)蛋白质；苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Javelin)蛋白质；苏云金芽孢杆菌Vip3A蛋白质；Cry1A.105蛋白质；Cry1Ah蛋白质；Cry1Ba蛋白质；Cry1C蛋白质；Cry1Ca蛋白质；Cry1Ie蛋白质；Cry2Aa蛋白质；Cry3Bb1蛋白质；Cry4Ba蛋白质；或CryIIB蛋白质。
在一些实施方案中，可对Bt毒素具有抗性或至少部分抗性的昆虫和/或害虫可选自以下目：双翅目蚊科；鞘翅目叶甲科；鳞翅目螟蛾科；鳞翅目麦蛾科；鳞翅目螟蛾科；或鳞翅目夜蛾科。
在一些实施方案中，可对Bt毒素具有抗性或至少部分抗性的昆虫和/或害虫可选自以下物种：埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟；尖音库蚊；致倦库蚊；玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；棉红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲。
在一些实施方案中，包含一种或多种CRIP(例如，以下CRIP中的一者或多者：表A中的A1-A34)和一种或多种IA(例如，以下IA中的一者或多者：表B中的B1-B479)的组合可用于处理前述杀昆虫剂抗性昆虫或Bt抗性昆虫中的任一者。
示例性组合和方法
在一些实施方案中，本发明提供了包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(CRIP)和杀昆虫剂(IA)的组合。
在一些实施方案中，本发明提供了包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(CRIP)和杀昆虫剂(IA)的组合，其中IA是细菌毒素；真菌毒素；凝集素；印楝化合物；硼化合物；病毒；或它们的组合。
在一些实施方案中，细菌毒素是苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素或发光光杆菌毒素。
在一些实施方案中，Bt毒素是分离自以下项的一种或多种发酵固体、孢子或毒素：苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)；苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)；苏云金芽孢杆菌鲇泽变种；苏云金芽孢杆菌鲇泽/太平洋变种；苏云金芽孢杆菌阿莱变种；苏云金芽孢杆菌阿马金变种；苏云金芽孢杆菌安达楼变种；苏云金芽孢杆菌阿根廷变种；苏云金芽孢杆菌asturiensis变种；苏云金芽孢杆菌azorensis变种；苏云金芽孢杆菌balearica变种；苏云金芽孢杆菌berliner变种；苏云金芽孢杆菌bolivia变种；苏云金芽孢杆菌brasilensis变种；苏云金芽孢杆菌喀麦隆变种；苏云金芽孢杆菌加拿大变种；苏云金芽孢杆菌chanpaisis变种；苏云金芽孢杆菌中华变种；苏云金芽孢杆菌科尔默变种；苏云金芽孢杆菌coreanensis变种；苏云金芽孢杆菌达尔可他变种；苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特变种；苏云金芽孢杆菌松蜀变种；苏云金芽孢杆菌杀虫变种；苏云金芽孢杆菌杀虫/亚毒变种；苏云金芽孢杆菌幕虫变种；苏云金芽孢杆菌fukuokaensis变种；苏云金芽孢杆菌galechiae变种；苏云金芽孢杆菌蜡螟变种；苏云金芽孢杆菌graciosensis变种；苏云金芽孢杆菌贵阳变种；苏云金芽孢杆菌higo变种；苏云金芽孢杆菌华中变种；苏云金芽孢杆菌iberica变种；苏云金芽孢杆菌印第安变种；苏云金芽孢杆菌以色列/励木变种；苏云金芽孢杆菌日本变种；苏云金芽孢杆菌jegathesan变种；苏云金芽孢杆菌景洪变种；苏云金芽孢杆菌肯尼亚变种；苏云金芽孢杆菌kim变种；苏云金芽孢杆菌kumamtoensis变种；苏云金芽孢杆菌kunthalanags3变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX24变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX27变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX28变种；苏云金芽孢杆菌九州变种；苏云金芽孢杆菌李氏变种；苏云金芽孢杆菌londrina变种；苏云金芽孢杆菌malayensis变种；苏云金芽孢杆菌medellin变种；苏云金芽孢杆菌墨西哥变种；苏云金芽孢杆菌mogi变种；苏云金芽孢杆菌蒙特雷变种；苏云金芽孢杆菌莫里逊变种；苏云金芽孢杆菌muju变种；苏云金芽孢杆菌navarensis变种；苏云金芽孢杆菌neoleonensis变种；苏云金芽孢杆菌nigeriensis变种；苏云金芽孢杆菌novosibirsk变种；苏云金芽孢杆菌ostriniae变种；苏云金芽孢杆菌oswaldocruzi变种；苏云金芽孢杆菌pahangi变种；苏云金芽孢杆菌巴基斯坦变种；苏云金芽孢杆菌palmanyolensis变种；苏云金芽孢杆菌pingluonsis变种；苏云金芽孢杆菌pirenaica变种；苏云金芽孢杆菌poloniensis变种；苏云金芽孢杆菌pondicheriensis变种；苏云金芽孢杆菌pulsiensis变种；苏云金芽孢杆菌rongseni变种；苏云金芽孢杆菌roskildiensis变种；苏云金芽孢杆菌圣地亚哥变种；苏云金芽孢杆菌汉城变种；苏云金芽孢杆菌山东变种；苏云金芽孢杆菌锡卢变种；苏云金芽孢杆菌sinensis变种；苏云金芽孢杆菌sooncheon变种；苏云金芽孢杆菌猝倒变种；苏云金芽孢杆菌猝倒/松蜀变种；苏云金芽孢杆菌亚毒变种；苏云金芽孢杆菌sumiyoshiensis变种；苏云金芽孢杆菌sylvestriensis变种；苏云金芽孢杆菌thailandensis变种；苏云金芽孢杆菌汤普逊变种；苏云金芽孢杆菌苏云金变种；苏云金芽孢杆菌励木变种；苏云金芽孢杆菌toguchini变种；苏云金芽孢杆菌东北变种；苏云金芽孢杆菌多窝变种；苏云金芽孢杆菌托马诺夫变种；苏云金芽孢杆菌vazensis变种；苏云金芽孢杆菌wratislaviensis变种；苏云金芽孢杆菌武汉变种；苏云金芽孢杆菌xiaguangiensis变种；苏云金芽孢杆菌yosoo变种；苏云金芽孢杆菌云南变种；苏云金芽孢杆菌肇东变种；和苏云金芽孢杆菌konkukian变种毒素。
在一些实施方案中，Bt毒素是分离自以下项的一种或多种发酵固体、孢子或毒素：苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)；苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)。
在一些实施方案中，Bt毒素是伴胞晶体毒素、分泌蛋白质、β-外毒素、41.9-kDa杀昆虫毒素、sphaericolysin、蜂房杆菌溶素或增效蛋白样蛋白质。
在一些实施方案中，伴孢晶体毒素是δ-内毒素。
在一些实施方案中，δ-内毒素是三结构域(3D)Cry家族蛋白质、二元Bin样家族毒素、ETX_MTX2-样家族毒素、毒素-10家族毒素、气单胞菌溶素家族毒素或溶细胞素。
在一些实施方案中，δ-内毒素是三结构域(3D)Cry毒素、杀蚊Cry毒素(Mtx)、二元样(Bin)毒素或Cyt毒素。
在一些实施方案中，δ-内毒素是三结构域(3D)Cry毒素或Cyt毒素。
在一些实施方案中，δ-内毒素选自：Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A样、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb样、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H样、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I样、Cry1I样、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1样、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A样、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba样、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8样、Cry8样、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa样、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9样、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A样、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa样、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20样、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43样、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1或Cry78Aa1、Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa样、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba样、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B样、Cyt2Ca1和Cyt3Aa1。
在一些实施方案中，Cry毒素或Cyt毒素具有根据SEQ ID NO:412-481所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，Bt毒素是分泌蛋白质。
在一些实施方案中，分泌蛋白质是植物性杀昆虫蛋白质(Vip)、分泌杀昆虫蛋白质(Sip)、Bin样家族蛋白质或ETX_MTX2家族蛋白质。
在一些实施方案中，分泌蛋白质是Vip。
在一些实施方案中，Vip是Vip1家族蛋白质、Vip2家族蛋白质、Vip3家族蛋白质或Vip4家族蛋白质。
在一些实施方案中，Vip选自：Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4和Vip4Aa1。
在一些实施方案中，Vip蛋白质具有根据SEQ ID NO:482-587所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，细菌毒素是发光光杆菌毒素。
在一些实施方案中，发光光杆状菌毒素选自：Photorhabdus akhurstii毒素；非共生发光光杆状菌毒素；非共生发光光杆状菌非共生亚种毒素；非共生发光光杆状菌非共生亚种ATCC 43949毒素；Photorhabdus australis毒素；Photorhabdus australis DSM17609毒素；Photorhabdus bodei毒素；Photorhabdus caribbeanensis毒素；Photorhabduscinerea毒素；Photorhabdus hainanensis毒素；Photorhabdus heterorhabditis毒素；Photorhabdus kayaii毒素；Photorhabdus khanii毒素；Photorhabdus khanii NC19毒素；Photorhabdus khanii subsp.guanajuatensis毒素；Photorhabdus kleinii毒素；Photorhabdus laumondii毒素；Photorhabdus laumondii subsp.clarkei毒素；Photorhabdus laumondii subsp.laumondii毒素；Photorhabdus laumondiisubsp.laumondii TTO1毒素；发光光杆状菌毒素；发光光杆状菌BA1毒素；发光光杆状菌NBAII H75HRPL105毒素；发光光杆状菌NBAII HiPL101毒素；发光光杆状菌亚种luminescens毒素；发光光杆状菌亚种luminescens ATCC 29999毒素；发光光杆状菌亚种mexicana毒素；发光光杆状菌亚种sonorensis毒素；Photorhabdus namnaonensis毒素；Photorhabdus noenieputensis毒素；Photorhabdus stackebrandtii毒素；Photorhabdustasmaniensis毒素；Photorhabdus temperata毒素；Photorhabdus temperata J3毒素；Photorhabdus temperata subsp.phorame毒素；Photorhabdus temperatasubsp.temperata毒素；Photorhabdus temperata subsp.temperata M1021毒素；Photorhabdus temperata subsp.temperata Meg1毒素；Photorhabdus thracensis毒素；未分类发光光杆状菌毒素；发光光杆状菌属物种毒素；发光光杆状菌3014毒素；发光光杆状菌3240毒素；发光光杆状菌Az29毒素；发光光杆状菌BS21毒素；发光光杆状菌CbKj163毒素；发光光杆状菌CRCIA-P01毒素；发光光杆状菌ENY毒素；发光光杆状菌FL2122毒素；发光光杆状菌FL480毒素；发光光杆状菌FsIw96毒素；发光光杆状菌GDd233毒素；发光光杆状菌H3086毒素；发光光杆状菌H3107毒素；发光光杆状菌H3240毒素；发光光杆状菌HB301毒素；发光光杆状菌HB78毒素；发光光杆状菌HB89毒素；发光光杆状菌HIT毒素；发光光杆状菌HO1毒素；发光光杆状菌HUG-39毒素；发光光杆状菌IT毒素；发光光杆状菌JUN毒素；发光光杆状菌KcTs129毒素；发光光杆状菌KJ13.1TH毒素；发光光杆状菌KJ14.3 TH毒素；发光光杆状菌KJ24.5 TH毒素；发光光杆状菌KJ29.1 TH毒素；发光光杆状菌KJ37.1 TH毒素；发光光杆状菌KJ7.1 TH毒素；发光光杆状菌KJ8.2 TH毒素；发光光杆状菌KJ9.1 TH毒素；发光光杆状菌KJ9.2 TH毒素；发光光杆状菌KK1.3 TH毒素；发光光杆状菌KK1.4 TH毒素；发光光杆状菌KMD74毒素；发光光杆状菌KOH毒素；发光光杆状菌MID10毒素；发光光杆状菌MOL毒素；发光光杆状菌MSW_058毒素；发光光杆状菌MSW_079毒素；发光光杆状菌NK2.1 TH毒素；发光光杆状菌NK2.5 TH毒素；发光光杆状菌NnMt2h毒素；发光光杆状菌NP1毒素；发光光杆状菌OH10毒素；发光光杆状菌OnIr40毒素；发光光杆状菌OnKn2毒素；发光光杆状菌PB10.1 TH毒素；发光光杆状菌PB16.3 TH毒素；发光光杆状菌PB17.1 TH毒素；发光光杆状菌PB17.3 TH毒素；发光光杆状菌PB2.5 TH毒素；发光光杆状菌PB22.4 TH毒素；发光光杆状菌PB22.5 TH毒素；发光光杆状菌PB32.1 TH毒素；发光光杆状菌PB33.1 TH毒素；发光光杆状菌PB33.4 TH毒素；发光光杆状菌PB37.4 TH毒素；发光光杆状菌PB39.2 TH毒素；发光光杆状菌PB4.5 TH毒素；发光光杆状菌PB41.4 TH毒素；发光光杆状菌PB45.5 TH毒素；发光光杆状菌PB47.1TH毒素；发光光杆状菌PB47.3 TH毒素；发光光杆状菌PB5.1 TH毒素；发光光杆状菌PB5.4TH毒素；发光光杆状菌PB50.4 TH毒素；发光光杆状菌PB51.4 TH毒素；发光光杆状菌PB52.2TH毒素；发光光杆状菌PB54.4 TH毒素；发光光杆状菌PB58.2 TH毒素；发光光杆状菌PB58.4TH毒素；发光光杆状菌PB58.5 TH毒素；发光光杆状菌PB59.2 TH毒素；发光光杆状菌PB6.5TH毒素；发光光杆状菌PB67.2 TH毒素；发光光杆状菌PB67.4 TH毒素；发光光杆状菌PB68.1TH毒素；发光光杆状菌PB7.5 TH毒素；发光光杆状菌PB76.1 TH毒素；发光光杆状菌PB76.4TH毒素；发光光杆状菌PB76.5 TH毒素；发光光杆状菌PB78.2 TH毒素；发光光杆状菌PB80.3TH毒素；发光光杆状菌PB80.4 TH毒素；发光光杆状菌Pjun毒素；发光光杆状菌RW14-46毒素；发光光杆状菌S10-54毒素；发光光杆状菌S12-55毒素；发光光杆状菌S14-60毒素；发光光杆状菌S15-56毒素；发光光杆状菌S5P8-50毒素；发光光杆状菌S7-51毒素；发光光杆状菌S8-52毒素；发光光杆状菌S9-53毒素；发光光杆状菌SJ2毒素；发光光杆状菌SN259毒素；发光光杆状菌SP1.5 TH毒素；发光光杆状菌SP16.4 TH毒素；发光光杆状菌SP21.5 TH毒素；发光光杆状菌SP3.4 TH毒素；发光光杆状菌SP4.5 TH毒素；发光光杆状菌SP7.3 TH毒素；发光光杆状菌TyKb140毒素；发光光杆状菌UK76毒素；发光光杆状菌VMG毒素；发光光杆状菌WA21C毒素；发光光杆状菌WkSs43毒素；发光光杆状菌Wx13毒素；发光光杆状菌X4毒素；发光光杆状菌YNb90毒素；和发光光杆状菌ZM毒素。
在一些实施方案中，发光光杆状菌毒素是发光光杆状菌毒素。
在一些实施方案中，真菌毒素是子囊菌真菌毒素。
在一些实施方案中，子囊菌真菌毒素是虫草科真菌毒素。
在一些实施方案中，虫草科真菌毒素是Akanthomyces毒素；Ascopolyporus毒素；白僵菌属毒素；Beejasamuha毒素；冬虫夏草属毒素；Coremiopsis毒素；侧齿霉属毒素；球束梗孢属毒素；Hyperdermium毒素；Insecticola毒素；棒束孢属毒素；蜡蚧菌属毒素；Microhilum毒素；Phytocordyceps毒素；拟球束梗孢属毒素；Rotiferophthora毒素；拟青霉属毒素；或虫壳属毒素。
在一些实施方案中，虫草科真菌毒素是白僵菌属毒素。
在一些实施方案中，白僵菌属毒素是白色白僵菌毒素；多形白僵菌毒素；Beauveria arenaria毒素；Beauveria asiatica毒素；Beauveria australis毒素；球孢白僵菌毒素；球孢虫草毒素；布朗尼氏白僵菌毒素；Beauveria brumptii毒素；苏格兰白僵菌毒素；凯罗门白僵菌毒素；Beauveria coccorum毒素；Beauveria cretacea毒素；柱孢白僵菌毒素；Beauveria delacroixii毒素；致密白僵菌毒素；Beauveria dependens毒素；Beauveria doryphorae毒素；Beauveria effusa毒素；Beauveria epigaea毒素；猫棒束孢白僵菌毒素；Beauveria geodes毒素；小球孢白僵菌毒素；Beauveria heimii毒素；Beauveria hoplocheli毒素；Beauveria kipukae毒素；Beauveria laxa毒素；Beauveriamalawiensis毒素；Beauveria medogensis毒素；Beauveria melolonthae毒素；Beauverianubicola毒素；稻米白僵菌毒素；Beauveria paradoxa毒素；Beauveria paranensis毒素；Beauveria parasitica毒素；Beauveria petelotii毒素；假球孢白僵菌毒素；Beauveriarileyi毒素；Beauveria rubra毒素；Beauveria shiotae毒素；Beauveria sobolifera毒素；Beauveria spicata毒素；Beauveria stephanoderis毒素；Beauveria sulfurescens毒素；Beauveria sungii毒素；纤细白僵菌毒素；Beauveriatundrensis毒素；粘孢白僵菌毒素；伊拉克白僵菌毒素；蠕孢白僵菌毒素；Beauveria vexans毒素；Beauveria viannai毒素；或Beauveria virella毒素。
在一些实施方案中，凝集素选自：雪滴花凝集素(GNA)；西洋接骨木凝集素(SNA)；朝鲜槐-II(MAL-II)；鸡冠刺桐凝集素(ECL)；蓖麻凝集素-I(RCA)；花生凝集素(PNA)；麦胚凝集素(WGA)；单叶加纳籽-II(GSL-II)；Con A；小扁豆凝集素(LCA)；甘露糖结合凝集素(MBL)；BanLec；半乳凝集素；菜豆白细胞凝集素(PHA-L)；菜豆红细胞凝集素(PHA-E)；和/或曼陀罗凝集素(DSL)。
在一些实施方案中，凝集素是GNA。
在一些实施方案中，印楝化合物是印楝素；印苦楝二酮；Azadiradionolide；脱乙酰葛杜宁；印楝素B；Desfuranoazadiradione；环氧楝树二酮；葛杜宁；Mahmoodin；Neemfruitin A；Neemfruitin B；印苦楝内酯；印楝宾；Nimolicinol；Ohchinin Acetate；印楝沙兰林；Salannol；alpha-Nimolactone；beta-Nimolactone；2',3'-二氢印楝沙兰林；3-脱乙酰基印楝沙兰林；6-脱乙酰基印楝素；7-Acetyl-16,17-dehydro-16-hydroxyneotrichilenone；7-Benzoylnimbocinol；7-脱乙酰基-7-苯甲酰基环氧楝树二酮；7-脱乙酰基-7-苯甲酰基葛杜宁；7-Deacetyl-17-epinimolicinol；15-羟基印苦楝二酮；17-表-17-羟基印苦楝二酮；17-表印苦楝二酮；20,21,22,23-四氢-23-氧代印苦楝二酮；22,23-Dihydronimocinol；或28-去氧代印苦楝内酯。
在一些实施方案中，硼化合物选自：硼砂、硼酸、氧化硼钠、硼酸钠、偏硼酸钠、十水合四硼酸钠、氧化硼、碳化硼、氮化硼、三溴化硼、三氯化硼和三氟化硼。
在一些实施方案中，病毒是杆状病毒科病毒。
在一些实施方案中，杆状病毒科病毒是β杆状病毒。
在一些实施方案中，β杆状病毒是棉花棉褐带卷蛾颗粒体病毒；黄地老虎颗粒体病毒；菜粉蝶颗粒体病毒；欧洲粉蝶颗粒体病毒；云杉色卷蛾颗粒体病毒；西部云杉色卷蛾颗粒体病毒；杨扇舟蛾颗粒体病毒；分月扇舟蛾颗粒体病毒A；分月扇舟蛾颗粒体病毒(河南)；分月扇舟蛾颗粒体病毒B；稻纵卷叶螟颗粒体病毒；苹果异形小卷蛾颗粒体病毒；苹果蠹蛾颗粒体病毒；苹果蠹蛾颗粒体病毒(墨西哥分离株)；小蔗螟颗粒体病毒；夜小卷蛾颗粒体病毒；木薯天蛾颗粒体病毒；葡萄叶斑蛾颗粒体病毒；棉铃虫颗粒体病毒；草安夜蛾颗粒体病毒；南美毛胫夜蛾颗粒体病毒；一点粘虫颗粒体病毒A；Pseudalatia unipuncta颗粒体病毒；一点粘虫颗粒体病毒B；一点粘虫颗粒体病毒；马铃薯块茎蛾颗粒体病毒；印度谷螟颗粒体病毒；小菜蛾颗粒体病毒；草地贪夜蛾颗粒体病毒；斜纹夜蛾颗粒体病毒；粉纹夜蛾颗粒体病毒；粉纹夜蛾颗粒体病毒LBIV-12；八字地老虎颗粒体病毒；未分类的β杆状病毒；飞扬阿夜蛾颗粒体病毒；茶小卷叶蛾颗粒体病毒；警纹地夜蛾颗粒体病毒；跳螳螂颗粒体病毒；茶蚕颗粒体病毒；丫纹夜蛾颗粒体病毒；茶细蛾颗粒体病毒；欧洲云杉卷叶蛾颗粒体病毒；栎绿色卷蛾β杆状病毒；分月扇舟蛾颗粒体病毒；杂食云卷蛾颗粒体病毒；盐泽灯蛾颗粒体病毒；红背地老虎颗粒体病毒；棉铃实夜蛾颗粒体病毒；四叉莜夜蛾颗粒体病毒；美国白蛾颗粒体病毒；黑点刺蛾颗粒体病毒；青铜地老虎颗粒体病毒；三线褐卷蛾颗粒体病毒；Peridorma morpontora颗粒体病毒；菜青虫颗粒体病毒；苜蓿绿叶蛾颗粒体病毒；拟粘液蛾属β杆状病毒；三叶草夜蛾颗粒体病毒；Spodoptera androgea颗粒体病毒；棉叶虫颗粒体病毒；安第斯马铃薯块茎蛾颗粒体病毒；或毛胫夜蛾属物种颗粒体病毒。
在一些实施方案中，IA选自：发光光杆状菌毒素；球孢白僵菌毒素；雪滴花凝集素(GNA)；印楝素化合物；硼酸；和苹果蠹蛾颗粒体病毒(CpGV)。
在一些实施方案中，发光光杆状菌毒素包含发光光杆状菌毒素复合物(Tca)。
在一些实施方案中，Tca包括TcaA蛋白质(SEQ ID NO:616)、TcaB蛋白(SEQ ID NO:617)、TcaC蛋白(SEQ ID NO:618)和TcaZ蛋白(SEQ ID NO:619)。
在一些实施方案中，球孢白僵菌毒素是白僵菌素毒素。
在一些实施方案中，白僵菌素毒素是化学式为C45H57N3O9的白僵菌素毒素；，化学式为C46H59N3O9的白僵菌素A毒素；或化学式C47H61N3O9的白僵菌素B毒素。
在一些实施方案中，球孢白僵菌毒素是从球孢白僵菌菌株ANT-03孢子分离的白僵菌素毒素。
在一些实施方案中，GNA具有SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CpGV是苹果蠹蛾颗粒体病毒分离株V22病毒。
在一些实施方案中，IA是从苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素。
在一些实施方案中，IA是从苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素。
在一些实施方案中，IA是从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素。
在一些实施方案中，IA是从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素。
在一些实施方案中，IA是从苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素。
在一些实施方案中，Btt毒素是从苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素。
在一些实施方案中，CRIP是U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽；U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)；海葵毒素；Av3变体多肽(AVP)；巴西游走蛛毒素；或Atracotoxin(ACTX)。
在一些实施方案中，U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽具有与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，TVP具有与SEQ ID NO:2-15、49-53、2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651或653-654中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，TVP具有根据SEQ ID NO:2-15、49-53、2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651或653-654中任一项所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，海葵毒素是Av2毒素或Av3毒素。
在一些实施方案中，Av2毒素具有与SEQ ID NO:588所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，Av2毒素具有根据SEQ ID NO:588所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，Av3毒素具有与SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，Av3毒素具有根据SEQ ID NO:44所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，AVP是AVPa肽、AVPa-C1肽或AVPb肽。
在一些实施方案中，AVPa毒素具有与SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，AVPa毒素具有根据SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，AVPa-C1毒素具有与SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，AVPa-C1毒素具有根据SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，AVPb毒素具有与SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，AVPb毒素具有根据SEQ ID NO:47所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CRIP是ctenitoxin(CNTX)。
在一些实施方案中，CNTX是Γ-CNTX-Pn1a。
在一些实施方案中，Γ-CNTX-Pn1a具有与SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，Γ-CNTX-Pn1a具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CRIP是ACTX。
在一些实施方案中，ACTX是U-ACTX肽、Omega-ACTX肽或Kappa-ACTX肽。
在一些实施方案中，ACTX是U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、κ-ACTX-Hv1a、κ+2-ACTX-Hv1a、ω-ACTX-Hv1a或ω+2-ACTX-Hv1a。
在一些实施方案中，ACTX具有与SEQ ID NO:60-64和594中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，ACTX具有根据SEQ ID NO:60-64和594中任一项所示的氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，ACTX具有与SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，ACTX具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CRIP选自：U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，其具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列；TVP，其具有根据SEQ ID NO:2-15、49-53、2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651或653-654中任一项所示氨基酸序列的氨基酸序列；Av3-变体多肽(AVP)，其具有SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列；Γ-CNTX-Pn1a，其具有SEQID NO:65所示的氨基酸序列；或U+2-ACTX-Hv1a，其具有SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，IA与CRIP的比例是约10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000。
在一些实施方案中，IA是从苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素；并且CRIP是ACTX；并且其中从苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)中分离的一种或多种发酵固体、孢子和毒素与ACTX的比例为约1:1至约1:5000。
在一些实施方案中，从苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素与ACTX的比例为约1:4000。
在一些实施方案中，IA是从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素；并且CRIP是ACTX；并且其中从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素与ACTX的比例为约1:1至约1:10。
在一些实施方案中，从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素与ACTX的比例为约1:9.2。
在一些实施方案中，IA是从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素；并且CRIP是AVP；并且其中从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素与AVP的比例为约1:1至约1:1.5。
在一些实施方案中，从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素与AVP的比例为约1:1.375。
在一些实施方案中，IA是从苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素；并且CRIP是ACTX；并且其中从苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素与ACTX的比例为约1:1至约1:10。
在一些实施方案中，从苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素与ACTX的比例为约1:8.75。
在一些实施方案中，本发明提供了一种包含组合的组合物，该组合包含：(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；和(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；并且进一步包含赋形剂。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ IDNO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ IDNO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ IDNO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3-变体多肽(AVP)。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ IDNO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含球孢白僵菌菌株ANT-03孢子和具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ IDNO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含发光光杆状菌毒素和ACTX；其中发光光杆状菌毒素是发光光杆状菌毒素复合物(Tca)，包括TcaA(SEQ ID NO:616)、TcaB(SEQ ID NO:617)、TcaC(SEQ ID NO:618)和TcaZ(SEQ ID NO:619)；并且其中ACTX肽是U+2-ACTX-Hv1a毒素(SEQ ID NO:61)。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含雪滴花凝集素(GNA)和ACTX；其中GNA具有SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列；并且其中ACTX肽是具有根据SEQ IDNO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
在一些实施方案，本发明提供了一种组合，该组合包含印楝素和ACTX；其中印楝素是具有以下化学式的印楝素：C35H44O16；并且其中ACTX是具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含硼酸化合物和ACTX；其中硼酸化合物具有化学式H3BO3；并且其中ACTX肽是具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
一些实施方案中，本发明提供了一种组合，该组合包含苹果蠹蛾颗粒体病毒(CpGV)和ACTX；其中CpGV是苹果蠹蛾颗粒体病毒分离株V22病毒；并且其中ACTX肽是具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
在一些实施方案中，本发明提供了一种使用组合的方法，该组合包含(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们组合；(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；和(3)一种或多种赋形剂；以防治昆虫，所述方法包括，提供至少一种CRIP和至少一种IA的组合，向昆虫所在处施用该组合。
在一些实施方案中，昆虫选自：葡萄蔓天蛾(天蛾幼虫)；苜蓿粉蝶；粉斑螟蛾；白条卷叶蛾；粘虫(灰翅夜蛾属物种，例如甜菜夜蛾、草地贪夜蛾、棉叶虫、美洲粘虫；朝鲜蓟羽蛾；杜鹃花毛虫；结草虫(常绿树蓑蛾)；香蕉蛾(木豹蛾)；香蕉弄蝶；黑头长翅卷蛾；加州槲蛾；春尺蠖；樱小食心虫；圹水螟；柑橘地老虎；苹果蠹蛾；蔓越莓果虫；卷心菜薄翅野螟；切根虫(夜蛾科物种，小地老虎)；冷杉合毒蛾；木薯天蛾(天蛾幼虫)；榆树尺蠖；欧洲葡萄蔓蛾；欧洲弄蝶；美国白蛾；蔷薇黄卷蛾；果树黄卷蛾、葡萄卷叶蛾；荷兰石竹小卷蛾；葡萄叶雕叶虫(仅为步行虫科)；苜蓿绿夜蛾；绿条纹枫虫；Gummosos-Batrachedra Comosae(Hodges)；舞毒蛾；铁杉尺蠖；天蛾幼虫(烟草天蛾属物种)；菜粉蝶；玉米天蚕蛾；贾克松色卷蛾；苹果浅褐卷叶蛾；甜瓜绢野螟；含羞草雕蛾；蔷薇斜条卷叶蛾；欧洲夹竹桃蛾；荷兰石竹小卷蛾；杂食尺蠖；大凤蝶；桔带卷蛾；梨小食心虫；桃枝麦蛾；松蝴蝶；美洲棉铃虫；红带卷蛾；红疣天社蛾；Rindworm Complex(各种鳞翅目昆虫)；鞍背刺蛾毛虫；鞍突毛虫；盐泽灯蛾；草地螟(草螟属物种)；尺蠖；秋星尺蠖；云杉色卷蛾；黄褐天幕毛虫(各种枯叶蛾科)；菠萝褐灰蝶(Geyr)；烟草天蛾；烟草粉斑螟；簇状苹果芽蛾；桃蚜蛾；疆夜蛾；杂色卷叶蛾；黎豆夜蛾；胡桃毛虫；结网毛虫；西部栎柳毒蛾；南方玉米螟；玉米穗虫；甘薯小象虫；胡椒茎象甲；桔根象甲；草莓根象甲；美核桃象甲；榛象甲；稻水象甲；苜蓿叶象甲；车轴草叶象；茶枝小蠹虫；根象；甘蔗犀金龟；咖啡果小蠹；一年生蓝草象甲；亚洲花园甲虫；欧洲金龟子；绿花金龟；日本丽金龟；五月甲虫或六月甲虫(六月鳃角金龟物种)；北方独角仙；东方丽金龟；南方独角仙；谷象(象甲总科)；埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟；尖音库蚊；致倦库蚊；玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；棉红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲。
在一些实施方案中，本发明提供了一种使用组合的方法，该组合包含(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们组合；(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；和任选的(3)一种或多种赋形剂；以防治苏云金芽孢杆菌-毒素-抗性昆虫，所述方法包括，提供至少一种CRIP和至少一种IA的组合；然后向昆虫所在处施用所示组合。
在一些实施方案中，苏云金芽孢杆菌-毒素-抗性昆虫选自：埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟；尖音库蚊；致倦库蚊；玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；棉红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲。
在一些实施方案中，本发明提供了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括向害虫所在处或易受害虫侵袭的植物或动物施用杀虫有效量的组合，该组合包含(1)一种或多种CRIP，或其药学上可接受的盐；一种或多种CRIP-杀昆虫蛋白，或其药学上可接受的盐；或它们的组合；(2)一种或多种如本文所述的杀昆虫剂(IA)；和任选地(3)一种或多种赋形剂。
在一些实施方案中，害虫选自：葡萄蔓天蛾(天蛾幼虫)；苜蓿粉蝶；粉斑螟蛾；白条卷叶蛾；粘虫(灰翅夜蛾属物种，例如甜菜夜蛾、草地贪夜蛾、棉叶虫、美洲粘虫；朝鲜蓟羽蛾；杜鹃花毛虫；结草虫(常绿树蓑蛾)；香蕉蛾(木豹蛾)；香蕉弄蝶；黑头长翅卷蛾；加州槲蛾；春尺蠖；樱小食心虫；圹水螟；柑橘地老虎；苹果蠹蛾；蔓越莓果虫；卷心菜薄翅野螟；切根虫(夜蛾科物种，小地老虎)；冷杉合毒蛾；木薯天蛾(天蛾幼虫)；榆树尺蠖；欧洲葡萄蔓蛾；欧洲弄蝶；美国白蛾；蔷薇黄卷蛾；果树黄卷蛾、葡萄卷叶蛾；荷兰石竹小卷蛾；葡萄叶雕叶虫(仅为步行虫科)；苜蓿绿夜蛾；绿条纹枫虫；Gummosos-Batrachedra Comosae(Hodges)；舞毒蛾；铁杉尺蠖；天蛾幼虫(烟草天蛾属物种)；菜粉蝶；玉米天蚕蛾；贾克松色卷蛾；苹果浅褐卷叶蛾；甜瓜绢野螟；含羞草雕蛾；蔷薇斜条卷叶蛾；欧洲夹竹桃蛾；荷兰石竹小卷蛾；杂食尺蠖；大凤蝶；桔带卷蛾；梨小食心虫；桃枝麦蛾；松蝴蝶；美洲棉铃虫；红带卷蛾；红疣天社蛾；Rindworm Complex(各种鳞翅目昆虫)；鞍背刺蛾毛虫；鞍突毛虫；盐泽灯蛾；草地螟(草螟属物种)；尺蠖；秋星尺蠖；云杉色卷蛾；黄褐天幕毛虫(各种枯叶蛾科)；菠萝褐灰蝶(Geyr)；烟草天蛾；烟草粉斑螟；簇状苹果芽蛾；桃蚜蛾；疆夜蛾；杂色卷叶蛾；黎豆夜蛾；胡桃毛虫；结网毛虫；西部栎柳毒蛾；南方玉米螟；玉米穗虫；甘薯小象虫；胡椒茎象甲；桔根象甲；草莓根象甲；美核桃象甲；榛象甲；稻水象甲；苜蓿叶象甲；车轴草叶象；茶枝小蠹虫；根象；甘蔗犀金龟；咖啡果小蠹；一年生蓝草象甲；亚洲花园甲虫；欧洲金龟子；绿花金龟；日本丽金龟；五月甲虫或六月甲虫(六月鳃角金龟物种)；北方独角仙；东方丽金龟；南方独角仙；谷象(象甲总科)；埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟；尖音库蚊；致倦库蚊；玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；棉红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲。
在一些实施方案中，害虫选自：埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟；尖音库蚊；致倦库蚊；玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；棉红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲。
实施例
本说明书中的实施例并不旨在并且也不应该用于限制本发明；提供它们仅是为了说明本发明。
实施例1：Bti毒素和U+2-ACTX-Hv1a
在液体溶液测定中评价了苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)毒素和U+2-ACTX-Hv1a的组合对三龄埃及伊蚊(蚊子)幼虫的杀昆虫活性。简而言之，以下任一种的处理：(1)U+2-ACTX-Hv1a与Bti毒素的组合；(2)单独的Bti毒素；(3)单独的U+2-ACTX-Hv1a；或(4)将水(作为未处理的对照)施用于蚊子幼虫，然后评估死亡率。
处理
处理是由以下组分组成的组合物：
(1)Bti毒素(0.25μg/mL或0.25ppm)。为了评价Bti毒素的作用，使用了来自BeckerMicrobial Products,Inc.的AQUABAC
Figure BDA0004014715560005361
AQUABAC
Figure BDA0004014715560005362
由以下成分组成：6％-10％(约8％)苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP144固体、孢子和杀昆虫毒素，其中所述杀昆虫毒素是δ-内毒素，并且相当于1,200国际毒性单位(ITU/mg)(48.4亿ITU/加仑或12亿ITU/升)；以及约92％的其他/非活性成分。AQUABAC
Figure BDA0004014715560005372
可从Becker Microbial Products,Inc.11146N.W.69th Place，Parkland，FL 33076，U.S.A.商购获得；网站：https://beckermicrobialproductsinc.com/；产品代码：27376；EPA注册号62637-1。
(2)U+2-ACTX-Hv1a(1mg/mL)。具有“GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA”(SEQ ID NO:61)的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a(也称为“Spear”)是根据本文所述的方法获得的。
(3)Bti毒素+U+2-ACTX-Hv1a。如上所述制备Bti毒素和U+2-ACTX-Hv1a，并进行组合。最终组合的组合物由以下组分组成：占组合物总体积0.1％w/v的U+2-ACTX-Hv1a；和0.000025％v/v的Bti毒素，其余为水
(4)对照(水)。
产生U+2-ACTX-Hv1a
简而言之，为了获得U+2-ACTX-Hv1a，使用重组乳酸克鲁维酵母表达系统：表达载体pKLAC1和乳酸克鲁维酵母菌株YCT306，两者均可从New England
Figure BDA0004014715560005371
(Ipswich，MA，USA)获得。将可操作以编码U+2-ACTX-Hv1a并受LAC4启动子控制的密码子优化的转基因克隆到pKLAC1和中，并转化到YCT306中。所得转化体产生包含α-交配因子信号肽、Kex2切割位点和成熟U+2-ACTX-Hv1a的前原肽。α-交配因子信号肽引导前原肽通过内源分泌途径，随后成熟的U+2-ACTX-Hv1a被释放到生长培养基中。使用反相HPLC，经由整体式C18柱，使用含0.1％三氟乙酸的水和乙腈作为流动相，从生长培养基中纯化U+2-ACTX-Hv1a。使用20％至40％乙腈的洗脱方案用于U+2-ACTX-Hv1a的纯化，其中U+2-ACTX-Hv1a在34％至36％乙腈范围内洗脱。然后通过将U+2-ACTX-Hv1a肽与表面活性剂混合并聚集，并使用水作为聚集剂，将所得U+2-ACTX-Hv1a肽配制成可湿性颗粒(WG)。制备WG的方法是本领域熟知的。
液体溶液测定
每种处理测试九次(N＝9)。此处，Bti毒素的用量为0.25μg/mL或0.25ppm。本实施例中使用的U+2-ACTX-Hv1a的量为1mg/mL。
为了测试上述处理，确定了由含有30mL水的59mL杯子组成的工作台。在每个杯中加入三龄蚊子幼虫(N＝10)。不提供食物。接着，将给定的处理液加入到杯子中，用盖子密封该杯子。然后将杯子放置在荧光生长灯下的托盘上。每个处理提供三次重复。
在24小时后，U+2-ACTX-Hv1a与Bti毒素的组合产生了令人惊奇的协同效果，为对应于95％的死亡率。另选地，单独的Bti毒素仅导致57％的死亡率，并且单独的U+2-ACTX-Hv1a仅导致4％的死亡率。因此，U+2-ACTX-Hv1a与Bti毒素的组合产生了令人惊讶的协同效果，其大于U+2-ACTX-Hv1a与Bti毒素组合的预期加和效果。图1。
实施例2：Btk毒素和Γ-CNTX-Pn1a
评价苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)毒素和Γ-CNTX-Pn1a的组合在叶喷生物测定中对甜菜夜蛾(玉米夜蛾)的杀昆虫活性。简而言之，以下任一种的处理：将(1)单独的Γ-CNTX-Pn1a；(2)单独的Btk毒素；(3)Γ-CNTX-Pn1a和Btk毒素的组合；或(4)对照(0.125％ Vintre，表面活性剂)，喷洒在叶子上，然后评估死亡率。
处理
处理是由以下组分组成的组合物：
(1)Btk毒素(0.0107％v/v)。为了评价Btk毒素，使用来自AEF Global Inc.的BioProtec PlusTM。BioProtec PlusTM由14.49％苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19的发酵固体、孢子和杀昆虫毒素(其效能为17,500粉纹夜蛾单位(CLU)/mg产品(相当于760亿CLU/加仑产品))；和85.51％其他/非活性成分组成。由14.49％苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19的发酵固体、孢子和杀昆虫毒素组成的BioProtec PlusTM可从AEF Global Inc.(925des calfats，US-QC，Levis，G6Y9E8，Canada)商购获得；网站：http://www.aefglobal.com/en/；CAS号：68038-71-1；批号：31G18。
(2)Γ-CNTX-Pn1a(0.034％w/v、0.152％w/v和0.675％w/v)。具有“GSCADINGACKSDCDCCGDSVTCDCYWSDSCKCRESNFKIGMAIRKKFC”(SEQ ID NO:65)的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a是使用离子交换色谱法并根据下述方法获得的。
(3)Btk毒素+Γ-CNTX-Pn1a。如上所述制备Btk毒素和Γ-CNTX-Pn1a，并进行组合。测试的最终组合的组合物如下：
低剂量Γ-CNTX-Pn1a：占组合物总体积0.034％w/v的Γ-CNTX-Pn1a；0.125％v/vVintre；0.0107％v/v Btk毒素，其余为水。
中等剂量Γ-CNTX-Pn1a：占组合物总体积0.152％w/v的Γ-CNTX-Pn1a；0.125％v/v Vintre；0.0107％v/v Btk毒素，其余为水。
高剂量Γ-CNTX-Pn1a：占组合物总体积0.675％w/v的Γ-CNTX-Pn1a；0.125％v/vVintre；0.0107％v/v Btk毒素，其余为水。
(4)对照(0.125％
Figure BDA0004014715560005391
)。
Figure BDA0004014715560005392
(在此处和上述处理中使用)是一种表面活性剂，由8.92％的乙氧基化醇和91.08％的作为喷雾助剂无效的成分组成(ORO AGRI,Inc，990Trophy Club Dr.，Trophy Club，TX 76262USA)。Vintre可从几个供应商处商购获得，并且是本领域普通技术人员熟知的产品。
产生Γ-CNTX-Pn1a
具有“GSCADINGACKSDCDCCGDSVTCDCYWSDSCKCRESNFKIGMAIRKKFC”(SEQ ID NO:65)的氨基酸序列的DNA构建体Γ-CNTX-Pn1A经密码子优化，并与乳酸克鲁维酵母α交配因子前/原序列(αMF)融合合成，并且连接到pKlac1(New England Biolabs)的NotI和HindIII限制位点。用SacII消化载体以线性化并除去细菌Ori和选择标记，然后电穿孔到电感受态乳酸克鲁维酵母细胞中。在含有乙酰胺作为唯一氮源的选择板上选择多基因拷贝转化体。表达Γ-CNTX-Pn1a的克隆通过HPLC在整体式C18柱(4.6×100mm)上评价，并以2mL min-1的流速和15％至33％乙腈梯度洗脱8分钟。
使用Sephadex C-25树脂通过阳离子交换色谱法纯化Γ-CNTX-Pn1a。上清液与树脂结合，并用递增浓度的氯化钠洗脱。将洗脱物透析、冻干并重悬于水中。
叶喷生物测定
测试苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)毒素与Γ-CNTX-Pn1a的组合对鳞翅目物种玉米夜蛾(甜菜夜蛾)的效果。当使昆虫与(1)单独的Γ-CNTX-Pn1a；(2)单独的Btk毒素；(3)Γ-CNTX-Pn1a和Btk毒素的组合；或(4)对照(0.125％ Vintre，表面活性剂)对抗昆虫时，评估玉米夜蛾的死亡率。
为了测试组合的效果，将长叶莴苣切到30mm直径的盘中，然后使用140ppm漂白溶液灭菌；然后将盘漂洗三次。然后将长叶莴苣盘钉在泡沫聚苯乙烯板上，并喷洒给定的处理剂；将盘翻转，再次喷洒，让其干燥，然后放入工作台。
工作台是含有5mL 1％琼脂的32孔饲养托盘。将一个长叶莴苣盘置于每个孔中，每个叶盘具有单个二龄玉米夜蛾。然后将盘置于28℃培养箱中。在12个盘上测试每个处理，重复三次(N＝36)。
首先，确定Btk毒素的亚致死剂量(即导致约20％的群体被杀死的剂量或约LD20)，以允许当与Btk毒素组合时观察Γ-CNTX-Pn1a。
此处，Btk毒素的亚致死剂量是736ppm(0.736mg/mL)，这导致25％的群体死亡。图2。一旦鉴定了Btk毒素的亚致死剂量，就增加Γ-CNTX-Pn1a的剂量，直到Γ-CNTX-Pn1a+Btk毒素组合达到LD50的量。因此，最终组合的组合物如下：(1)低剂量Γ-CNTX-Pn1a：占组合物总体积0.034％w/v的Γ-CNTX-Pn1a；0.125％v/v Vintre；0.0107％v/v Btk毒素，其余为水；(2)中等剂量Γ-CNTX-Pn1a：占组合物总体积0.152％w/v的Γ-CNTX-Pn1a；0.125％v/vVintre；0.0107％v/v Btk毒素，其余为水；和(3)高剂量Γ-CNTX-Pn1a：占组合物总体积0.675％w/v的Γ-CNTX-Pn1a；0.125％v/v Vintre；0.0107％v/v Btk毒素，其余为水。
如图2中所示，使用1.6mg/mL的Γ-CNTX-Pn1a导致6％的死亡率；然而，当与0.736mg/mL Btk毒素组合时，死亡率跳至28％。同样，使用6.75mg/mL的Γ-CNTX-Pn1a导致3％的死亡率；但是，当与0.736mg/mL Btk毒素组合时，死亡率为50％。本实施例证明Btk毒素和Γ-CNTX-Pn1a的组合产生了意想不到的效果。
实施例3：Btk毒素和AVP
评价苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种(Btk)毒素和Av3-变体多肽(AVP)的组合在叶喷生物测定中对甜菜夜蛾(玉米夜蛾)的杀昆虫活性。简而言之，以下任一种的处理：将(1)单独的AVP；(2)单独的Btk毒素；(3)AVP和Btk毒素的组合；或(4)对照(0.125％ Vintre，表面活性剂)，喷洒在叶子上，然后评估死亡率。
处理
处理是由以下组分组成的组合物：
(1)Btk毒素(800ppm或0.8mg/mL)。为了评价Btk毒素，使用来自AEF Global Inc.的BioProtec PlusTM。BioProtec PlusTM由14.49％苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19的发酵固体、孢子和杀昆虫毒素(其效能为17,500粉纹夜蛾单位(CLU)/mg产品(相当于760亿CLU/加仑产品))；和85.51％其他/非活性成分组成。由14.49％苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19的发酵固体、孢子和杀昆虫毒素组成的BioProtec PlusTM可从AEF Global Inc.(925des calfats，US-QC，Levis，G6Y9E8，Canada)商购获得；网站：http://www.aefglobal.com/en/；CAS号：68038-71-1；批号：31G18。
(2)AVP(1mg/mL、3mg/mL和9mg/mL)。所评价的Av3-变体多肽(AVP)具有“KSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPK”(SEQ ID NO:47)(AVPb)的氨基酸序列。下文详细提供了产生AVP的方法。
(3)Btk毒素+AVP。以如上所述的量制备Btk毒素和AVP，并进行组合。测试的最终组合的组合物如下：
低剂量AVP：占组合物总体积0.1％w/v的AVP；0.125％v/v Vintre；0.0116％v/vBtk毒素，其余为水。
中等剂量AVP：占组合物总体积0.3％w/v的AVP；0.125％v/v Vintre；0.0116％v/vBtk毒素，其余为水。
高剂量AVP：占组合物总体积0.9％w/v的AVP；0.125％v/v Vintre；0.0116％v/vBtk毒素，其余为水。
(4)对照(0.125％
Figure BDA0004014715560005421
)。
Figure BDA0004014715560005422
是一种表面活性剂，由8.92％的乙氧基化醇和91.08％的作为喷雾助剂无效的成分组成(ORO AGRI,Inc，990Trophy Club Dr.，TrophyClub，TX 76262USA)。Vintre可从几个供应商处商购获得，并且是本领域普通技术人员熟知的产品。
产生AVP
如下获得所评价的Av3-变体多肽(AVP)：简而言之，WT-Av3肽，具有氨基酸序列“RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV”(SEQ ID NO:44)，用作模板，并突变产生具有R1K取代和C-末端缺失的肽。所得突变肽是具有氨基酸序列“KSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPK”(SEQ IDNO:47)的AVPb肽。
通过首先产生AVP肽表达载体获得AVPb，该载体基于pKLAC1酵母表达载体(可从NEW ENGLAND
Figure BDA0004014715560005423
获得)生成：AVP表达为分泌肽，乙酰胺酶基因表达为选择标记。pLB102的表达载体通过用限制酶SacII消化而线性化；然后通过电穿孔将线性pLB102质粒转化到乳酸克鲁维酵母细胞中；培养96个所得阳性转化菌落。用于接种2L发酵的生产菌株的种子培养物在含有3％solulys 095K+3％葡萄糖和50μg/mL卡那霉素的种子培养基中进行24小时。然后将30mL种子培养物接种到2L发酵罐中，其中1L分批培养基含有1L基础盐培养基(BMS(g/L)：Solulys 095K 40、抑制剂3519 0.1mL、85％磷酸13mL、CaSO4 0.5、K2SO49.1、MgSO4.7H2O7.5、KOH 2.1、(NH4)2SO4 5、葡萄糖10)与1.2％毕赤氏酵母痕量金属(PTM(g/L)：CuSO4.5H2O 6、NaI 0.08、MgSO4.H2O 3、NaMoO4.2H2O0.2、H3BO3 0.02、CoCl2.6H2O 0.5,ZnCl2 20、FeSO4.6H2O 65、H2SO45mL)和2mL 5％抑制剂7153。分批发酵阶段持续6小时，控制温度27℃，pH 4.80，并且溶解氧为15％。在6小时分批发酵后，温度降至23.5℃，并且开始加入糖醇，并在23.5℃的温度控制下继续120小时，用于发酵过程的剩余部分。以逐渐增加的速率进料补料培养基：3.4mL/小时持续24小时，4.4mL/小时持续30小时，7.2mL/小时持续24小时，8.8mL/小时持续12小时，11mL/小时直到补料培养基被完全消耗。使用反相HPLC，经由整体式C18柱，使用含0.1％三氟乙酸的水和乙腈作为流动相，从发酵啤酒(即废培养基)中纯化AVP。使用20％至40％乙腈的洗脱方案用于AVP的纯化，其中AVP在34％至36％乙腈范围内洗脱。
获得AVP的示例性方法公开于PCT申请号PCT/US2019/051093中，其公开内容全文以引用方式并入本文。
叶喷生物测定
测试Btk毒素与Av3b-变体多肽(AVP)组合对鳞翅目物种玉米夜蛾(甜菜夜蛾)的效果。当使昆虫与(1)单独的AVP；(2)单独的Btk毒素；(3)AVP和Btk毒素两者的组合；或(4)对照(0.125％ Vintre，表面活性剂)对抗昆虫时，评估玉米夜蛾的死亡率。
为了测试组合的效果，将长叶莴苣切到30mm直径的盘中，然后使用140ppm漂白溶液灭菌；然后将盘漂洗三次。然后将长叶莴苣盘钉在泡沫聚苯乙烯板上，并喷洒给定的处理剂；将盘翻转，再次喷洒，让其干燥，然后放入工作台。
工作台是含有5mL 1％琼脂的32孔饲养托盘。将一个长叶莴苣盘置于每个孔中，每个叶盘具有单个二龄玉米夜蛾。然后将盘置于28℃培养箱中。在12个盘上测试每个处理，重复三次(N＝36)。
首先，确定Btk毒素的亚致死剂量(即导致约20％的群体被杀死的剂量或约LD20)，以允许当与Btk毒素组合时观察杀昆虫肽，随后观察两种产物之间的协同作用。
此处，Btk毒素的亚致死剂量是800ppm(0.8mg/mL)，这导致31％的群体死亡。图3。一旦鉴定了这些实验的Btk毒素的亚致死剂量，就增加AVP的剂量，直到AVP+Btk毒素组合达到LD50的量。因此，最终组合的组合物如下：(1)低剂量AVP：占组合物总体积0.1％w/v的AVP；0.125％v/vVintre；0.0116％v/v Btk毒素，其余为水；(2)中间剂量AVP：占组合物总体积0.3％w/v的AVP；0.125％v/v Vintre；0.0116％v/v Btk毒素，其余为水；和(3)高剂量AVP：占组合物总体积0.9％w/v的AVP；0.125％v/vVintre；0.0116％v/v Btk毒素，其余为水。
如图3中所示，使用1.1mg/mL的AVP导致5％的死亡率；然而，当与0.8mg/mL Btk毒素组合时，死亡率增加至50％。类似地，当以3mg/mL的剂量单独使用AVP时，死亡率为11％；然而，当与0.8mg/mL Btk毒素组合时，死亡率增加至67％。最后，单独使用9mg/mL剂量的AVP导致10％的死亡率，但是，当与Btk毒素组合时，死亡率为88％。本实施例证明Btk毒素和AVP的组合产生了意想不到的协同效果，其中该组合产生了超过预期的加和效果。
实施例4：Btk毒素、Ta1b和TVP
在注射测定和叶生物测定中，分别测试了(1)Btk毒素与野生型Ta1b；或(2)Btk毒素与Ta1b-变体多肽(TVP)的组合对鳞翅目物种玉米穗虫(棉铃虫)的效果。
WT-Ta1b和TVP-R9Q
此处评估的CRIP是WT-Ta1b，和Ta1b-变体多肽TVP-R9Q。WT-Ta1b具有如下氨基酸序列：“EPDEICRARMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYTACHEAQKG”(SEQ ID NO:1)；TVP-R9Q具有如下氨基酸序列：
“EPDEICRAQMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYTACHEAQKG”(SEQ ID NO:2)。
为了获得TVP-R9Q肽，将具有氨基酸序列：“EPDEICRARMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYTACHEAQKG”(SEQ ID NO:1)的野生型Ta1b肽用作模板，并且突变第9位残基，导致R9Q取代；因此，TVP-R9Q相对于野生型(SEQ ID NO:1)具有R9Q氨基酸取代。
为了生产WT-Ta1b和TVP-R9Q，将包含可操作以编码WT-Ta1b或TVP-R9Q的核苷酸序列的DNA构建体经密码子优化，并与乳酸克鲁维酵母α交配因子前/原序列(αMF)融合合成，并且连接到pKlac1的NotI和HindIII限制点中。用SacII消化载体以线性化并除去细菌Ori和选择标记，然后电穿孔到电感受态乳酸克鲁维酵母细胞中。在含有乙酰胺作为唯一氮源的选择板上选择多基因拷贝转化体。表达WT-Ta1b或TVP-R9Q的克隆通过HPLC在整体式C18柱(4.6×100mm)上评价，并以2mL min-1的流速和15％至33％乙腈梯度洗脱8分钟。
实施例5：WT-Ta1b和TVP-R9Q的稳定性测定
TVP-R9Q是抗性鳞翅目肠道蛋白酶。简而言之，TVP-R9Q和WT-Ta1b的降解如下进行：对早期五龄棉铃虫幼虫进行解剖，以从其他组织和血淋巴中除去完整的消化道。为了获得铃夜蛾属肠道提取物(HGE)，在肠的内层做一个小切口，以便将肠道内容物收集在管中。将多个切片合并并保持在冰上以立即使用，或储存在-80℃下以供将来使用。
将野生型Ta1b(SEQ ID NO:1)用作模板，并突变第9位氨基酸取代(即R9；SEQ IDNO:1)以产生野生型氨基酸序列(SEQ ID NO:1)的第9位(即R9)的精氨酸被氨基酸Q(TVP-R9Q)取代。将WT-Ta1b和TVP-R9Q对抗铃夜蛾属肠道提取物(HGE)，以模拟鳞翅目肠道环境中的消化。此处，WT-Ta1b和TVP-R9Q与20μL HGE；205μL 30mM Tris-HCl pH8.8(以维持铃夜蛾属肠道环境的碱性pH)；和25μL 15.7mg/mL WT-Ta1b或TVP-R9Q一起温育。
在0分钟、20分钟、40分钟、60分钟、180分钟和1260分钟的时间点收集消化的Ta1b或TVP样品。为了终止消化过程，将82μL Tris-HCl pH 8.8和3μL 25％ HCl加入到样品中，并且立即使用反相HPLC分析消化的TVP的样品以定量TVP峰面积。如图4至图5所示，与WT-Ta1b相比，TVP-R9Q在HGE中是稳定的。
实施例6：Ta1b、TVP-R9Q和Btk毒素的叶测定
为了测试Btk毒素和WT-Ta1b或TVP-R9Q的组合的效果，将长叶莴苣切到30mm直径的盘中，然后使用140ppm漂白溶液灭菌；然后将盘漂洗三次。然后将长叶莴苣盘钉在泡沫聚苯乙烯板上，并喷洒给定的处理剂；将盘翻转，再次喷洒，让其干燥，然后放入工作台。
工作台是含有5mL 1％琼脂的32孔饲养托盘。将一个长叶莴苣盘置于每个孔中，每个叶盘具有单个二龄玉米夜蛾。然后将托盘置于28℃培养箱中。在12个盘上测试每个处理，重复四次实验(N＝48)。
处理
处理是由以下组分组成的喷雾溶液组合物：
(1)WT-Ta1b(储备浓度14.51mg/mL)稀释到0mg/mL、1mg/mL、3mg/mL和9mg/mL的剂量，并与0.25％v/v LoadUp表面活性剂组合，得到最终制剂为0.0％w/v、0.1％w/v、0.3％w/v或0.9％w/v的WT-Ta1b；0.25％v/v的LoadUp，并且其余为水。
(2)TVP-R9Q(储备浓度25.46mg/mL)稀释到0mg/mL、1mg/mL、3mg/mL和9mg/mL的剂量，并与0.25％v/v LoadUp表面活性剂组合，得到最终制剂为占组合物总体积0.0％w/v、0.1％w/v、0.3％w/v或0.9％w/v的TVP-R9Q；0.25％v/v的LoadUp，其余为水。
(3)0.25％LoadUp表面活性剂(对照)。此处以及在上文和下文列举的所有处理中所使用的“LoadUp”是由以下组成的表面活性剂：56.1.0％烷基酚乙氧基化物、丙二醇、烷基胺乙氧基化物和硫酸；和43.9％作为喷雾助剂无效的其他成分。LoadUp可从J.R.SimplotCompany(P.O.Box70013，Boise，ID 83707USA)获得。
(4)Btk毒素(15ppm Btk毒素，或15μL/mL，或0.015mL/mL)。在这种处理中，制剂由占组合物总体积0.0015％v/v的Btk毒素和其余为水组成。
为了评价Btk毒素，使用了商业产品
Figure BDA0004014715560005461
由14.49％苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种(Btk)菌株EVB-113-19的发酵固体、孢子和杀昆虫毒素(其效能为17,500粉纹夜蛾单位(CLU)/mg产品(相当于760亿CLU/加仑产品))；和85.51％其他/非活性成分组成。
Figure BDA0004014715560005462
可从AEF Global Inc.(925des calfats，US-QC，Levis，G6Y9E8，Canada)获得；网站：http://www.aefglobal.com/en/；CAS号：68038-71-1；批号：23J19M。
为了选择在这些实验中使用的
Figure BDA0004014715560005471
的量(即15ppm)，为多个物种确定了
Figure BDA0004014715560005472
的亚致死剂量(即导致大约20％的群体死亡的剂量，或约LD20)。该初始试验揭示了以下物种的
Figure BDA0004014715560005473
的亚致死剂量(约LD20)：粉纹夜蛾＝2.5ppm；秋夜蛾＝383ppm；玉米夜蛾＝87ppm；并且玉米穗虫＝15ppm。
进行确定
Figure BDA0004014715560005475
亚致死剂量的初步工作，以便观察
Figure BDA0004014715560005474
与Ta1b或TVP-R9Q的组合效果，并随后确定它们的组合是否显示出更大的加和效果。
(5)WT-Ta1b+Btk毒素。此处，将WT-Ta1b和Btk毒素组合。将WT-Ta1b的储备浓度(14.51mg/mL)稀释到0mg/mL、1mg/mL、3mg/mL和9mg/mL的剂量，并与0.25％v/v LoadUp表面活性剂和15ppm Btk毒素(
Figure BDA0004014715560005476
参见上文)组合。这导致最终组合物为占组合物总体积0.0％w/v、0.1％w/v、0.3％w/v或0.9％w/v的WT-Ta1b；0.25％v/v的LoadUp；0.0015％v/v的Btk毒素，其余为水。
(6)TVP-R9Q+Btk毒素。此处，将TVP-R9Q和Btk毒素组合。将TVP-R9Q的储备浓度(25.46mg/mL)稀释到0mg/mL、1mg/mL、3mg/mL和9mg/mL的剂量，并与0.25％v/v LoadUp表面活性剂和15ppm Btk毒素(
Figure BDA0004014715560005477
参见上文)组合。这导致最终组合物为占组合物总体积0.0％w/v、0.1％w/v、0.3％w/v或0.9％w/v的WT-Ta1b；0.25％v/v的LoadUp；0.0015％v/v的Btk毒素，其余为水。
然后将前述处理物喷洒在叶盘上。
叶生物测定的结果示于图6至图9中。此处，当TVP-R9Q与Btk毒素组合时，导致脱叶减少和死亡率增加；并且，这些对脱叶和死亡率的效果优于单独的TVP-R9Q、单独的Ta1b或Ta1b与Btk毒素的组合。
如图9所示，在新生玉米穗虫中，TVP-R9Q与亚致死剂量Leprotec组合的LD50是2ppt(标准误差＝0.9)。图9。因此，TVP-R9Q突变在摄入时导致杀昆虫活性相对于WT-Ta1b有较大提高。
实施例7：饮食掺入测定：Btt毒素和U+2-ACTX-Hv1a
在食物掺入测定中评价了苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)毒素和U+2-ACTX-Hv1a的组合对小粉虫(拟步甲)的杀昆虫活性。简而言之，以下任一种的处理：(1)单独的U+2-ACTX-Hv1a；(2)单独的Btt毒素；(3)U+2-ACTX-Hv1a和Btt毒素的组合；或(4)未处理的对照(水)。
拟步甲(小粉虫)(鞘翅目：拟步甲科)，也称为幼虫阶段的暗黑菌虫，是禽舍中严重的害虫。甲虫的幼虫吃地板上的鸡食、粪便和尸体。另外，幼虫被鸡吃掉后是一种载体疾病。并且，幼虫钻入聚苯乙烯泡沫塑料绝缘中，降低了建筑物的热效率。
测试了苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种毒素(Btt毒素)与U+2-ACTX-Hv1a组合的饮食掺入对鞘翅目拟步甲(小粉虫)的效果。在将以下处理中的一者掺入到昆虫的饮食后，评估拟步甲的死亡率：(1)单独的U+2-ACTX-Hv1a；(2)单独的Btt毒素；(3)U+2-ACTX-Hv1a和Btt毒素的组合；或(4)未处理的对照(水)。处理描述如下。
处理
处理是由以下组分组成的组合物：
(1)Btt毒素。为了评价Btt毒素，使用来自
Figure BDA0004014715560005483
U.S.A.LLC AgriculturalProducts的
Figure BDA0004014715560005481
FC。
Figure BDA0004014715560005482
FC(或可流动浓缩物)由10％苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176的发酵固体和可溶物(其效能为15,000马铃薯甲虫单位(LTU)/克产品(相当于1630万LTU/夸脱产品))；和90％其他/非活性成分组成。由苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176的发酵固体和可溶物组成的
Figure BDA0004014715560005484
FC可从
Figure BDA0004014715560005485
U.S.A.LLC Agricultural Products(1333N California Blvd，Suite 600，US-CA，WalnutCreek，94596-8025，U.S.A.)商购获得，网站：https://www.valent.com/；产品代号：96017；列表号：60220；批号：235-222-3L-00。
(2)U+2-ACTX-Hv1a(1mg/mL)。具有“GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA”(SEQ ID NO:61)的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a(也称为“Spear”)根据实施例1中所述的方法获得，尽管是液体制剂。
(3)Btt毒素+U+2-ACTX-Hv1a。如上所述制备Bti毒素和U+2-ACTX-Hv1a，并进行组合。最终组合的组合物如下：
低剂量U+2-ACTX-Hv1a：占组合物总体积0.1％w/v的U+2-ACTX-Hv1a；和0.0040％v/v的Btt毒素，其余为人工南方玉米根虫饮食(Frontier Agricultural Services#F9800B)。
中等剂量U+2-ACTX-Hv1a：占组合物总体积0.3％w/v的U+2-ACTX-Hv1a；和0.0040％v/v的Btt毒素，其余为人工南方玉米根虫饮食(Frontier AgriculturalServices#F9800B)。
高剂量U+2-ACTX-Hv1a：占组合物总体积0.8％w/v的U+2-ACTX-Hv1a；和0.0040％v/v的Btt毒素，其余为人工南方玉米根虫饮食(Frontier Agricultural Services#F9800B)。
(4)对照。水
饮食掺入测定
为了测试组合的效果，创建了包含128孔生物测定托盘的工作台，向每孔中加入两只(N＝2)一龄暗黑菌虫(即每孔2只菌虫)。然后向菌虫提供由南方玉米根虫(SCR)饮食(Frontier Scientific，Newark，DE19713，产品号F9800B)与处理物中的一种混合组成的膳食。该膳食由1mL基于琼脂的SCR饮食与处理物中的一种混合组成。通过将保持在65℃的15mL SCR饮食与10mL 2.5×处理溶液混合来制备储备膳食混合物。然后用通气盖固定孔，并将托盘置于具有以下环境条件的培养箱中：32℃；50％至70％的相对湿度；并且没有灯。完成每个处理条件的四次重复(N＝4)。
接下来，确定Btt毒素的亚致死剂量(即导致约20％的群体被杀死的剂量或约LD20)，以允许当与Btt毒素组合时观察杀昆虫肽，随后观察两种产物之间的协同作用。
此处，Btt毒素的亚致死剂量是400ppm(0.4mg/mL)，这导致18％的群体死亡。图10。一旦鉴定了这些实验的Btt毒素的亚致死剂量，就增加U+2-ACTX-Hv1a的剂量，直到U+2-ACTX-Hv1a+Btt毒素组合达到LD50的量。因此，最终组合的组合物如下：(1)低剂量U+2-ACTX-Hv1a：占组合物总体积0.1％w/v的U+2-ACTX-Hv1a；和0.0040％v/v的Btt毒素，其余为人工南方玉米根虫饮食(Frontier Agricultural Services#F9800B)；(2)中等剂量U+2-ACTX-Hv1a：占组合物总体积0.3％w/v的U+2-ACTX-Hv1a；和0.0040％v/v的Btt毒素，其余为人工南方玉米根虫饮食(Frontier Agricultural Services#F9800B)；和(3)高剂量U+2-ACTX-Hv1a：占组合物总体积0.8％w/v的U+2-ACTX-Hv1a；和0.0040％v/v的Btt毒素，其余为人工南方玉米根虫饮食(Frontier Agricultural Services#F9800B)。
如图10中所示，单独使用1mg/mL的U+2-ACTX-Hv1a导致20％的死亡率；然而，当与0.4mg/mL Btt毒素组合时，死亡率增加至50％。同样，当以3mg/mL的剂量单独使用U+2-ACTX-Hv1a时，死亡率为44％；然而，当与0.4mg/mL Btt毒素组合时，死亡率增加至91％。最后，单独使用8mg/mL剂量的U+2-ACTX-Hv1a导致74％的死亡率。然而，当8.0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a与0.4mg/mL Btt毒素组合时，死亡率增加到95％。本实施例证明Btt毒素和U+2-ACTX-Hv1a的组合产生了意想不到的协同效果，其中该组合产生了超过预期的加和效果。
实施例8：喷雾测定：Btt毒素和U+2-ACTX-Hv1a
进行喷雾测定以便确定使用含有Btt毒素与U+2-ACTX-Hv1a的喷雾对科罗拉多马铃薯甲虫(马铃薯甲虫)死亡率的效果。
将大约16只一龄科罗拉多马铃薯甲虫置于滤纸(Whatman#3，90mm直径)上，滤纸包含在倒置的培养皿(25×100mm)中。接下来，使用微型喷雾瓶(Qosmedix)用2mL含有以下物质的处理溶液向科罗拉多马铃薯甲虫喷雾：水；10ppT(0.01mg/mL的U+2-ACTX-Hv1a；和20ppT(0.02mg/mL)Btt毒素。然后用石蜡膜密封有盖培养皿，并在培养箱中(28℃；50％相对湿度；开灯)储存4小时。用以下对甲虫喷雾：(1)单独的U+2-ACTX-Hv1a；(2)单独的Btt毒素；(3)U+2-ACTX-Hv1a和Btt毒素的组合；或(4)未处理的对照(水)。处理与实施例8中所述的那些相同，尽管配制成喷雾形式。
在喷雾处理后，将单个甲虫转移至饲养托盘的孔中，在那里向它们提供1mL/孔的含有甲醛的人工科罗拉多马铃薯甲虫饮食(Frontier Scientific，Newark，DE 19713，产品号F9380B)。在接下来的4天中，每24小时测量一次死亡率。
如图11所示，在24小时(1天)后，单独用U+2-ACTX-Hv1a处理的甲虫死亡率为4％。单独用Btt毒素处理的甲虫具有2％的死亡率。与单独的U+2-ACTX-Hv1a或Btt毒素的死亡率形成鲜明对比，将U+2-ACTX-Hv1a与Btt毒素组合导致24小时后79％的死亡率。在随后的时间点继续这种协同模式。在48小时(2天)处，单独用U+2-ACTX-Hv1a处理的甲虫具有9％的死亡率。单独用Btt毒素处理的甲虫具有6％的死亡率。通过将U+2-ACTX-Hv1a与Btt毒素组合，48小时处的死亡率增加到81％。在72小时(3天)处，单独用U+2-ACTX-Hv1a处理的甲虫具有7％的死亡率。单独用Btt毒素处理的甲虫具有23％的死亡率。通过将U+2-ACTX-Hv1a与Btt毒素组合，72小时处的死亡率增加到94％。最后，在96小时(4天)处，单独用U+2-ACTX-Hv1a处理的甲虫具有19％的死亡率。单独用Btt毒素处理的甲虫具有68％的死亡率。通过将U+2-ACTX-Hv1a与Btt毒素组合，96小时处的死亡率增加到91％。
实施例9：发光光杆状菌毒素复合物和U+2-ACTX-Hv1a
发光光杆状菌是由嗜菌异小杆线虫携带的强毒昆虫病原体。细菌产生并分泌称为毒素复合物的大蛋白质复合物。蛋白质复合物称为“毒素复合物A”或“Tca”。Tca由四种不同的蛋白质组成：TcaA、TcaB、TcaC和TcaZ。此处，评价了发光光杆状菌毒素和U+2-ACTX-Hv1a的组合的杀昆虫活性。
处理
(1)发光光杆状菌毒素(4.75％v/v)。毒素复合物a(Tca)是通过从美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801University Blvd，Manassas，VA20110，USA)获得发光光杆状菌而获得的。发光杆菌细胞(产品号2999；菌株：Hb[DSM 3368，HB1，NCIB 12670]；贡献者：(Thomas和Poinar)，Boemare等人)按照制造商的推荐进行培养。通过离心细胞并在30分子量截留(MWCO)过滤器上浓缩培养液来纯化毒素复合物。此处使用的Tca复合物提取物由四种不同的蛋白质组成：TcaA(SEQ ID NO:616)、TcaB(SEQ ID NO:617)、TcaC(SEQ ID NO:618)和TcaZ(SEQ ID NO:619)。
(2)U+2-ACTX-Hv1a。具有“GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA”(SEQID NO:61)的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a从
Figure BDA0004014715560005521
-T Liquid Concentrate(批号14143019，
Figure BDA0004014715560005522
4717Campus Drive，Kalamazoo，MI 49008USA)获得。
(3)发光光杆状菌毒素+U+2-ACTX-Hv1a。如上文处理中所述制备/获得发光光杆状菌毒素和U+2-ACTX-Hv1a，并进行组合。最终组合的组合物如下：占组合物总体积1％w/v的U+2-ACTX-Hv1a；和4.75％v/v的发光光杆状菌毒素复合物提取物，其余为水。
(4)对照。水。
饮食掺入测定
对玉米穗虫(棉铃虫)进行饮食掺入生物测定。该生物测定在128孔托盘中进行。向每个孔中填充200μL注入有给定处理的基于琼脂的常规鳞翅目饮食(N＝16，孔/处理)。将一个新生玉米穗虫(棉铃虫)置于每个孔中，并评价它们在四天内的存活。如下应用前述处理：
(a)水；
(b)单独的毒素复合物(4.75％v/v)；
(c)10mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(1％w/v)；和
(d)毒素复合物(4.75％w/v)与10mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(1％w/v)。
如图12所示，在4天后，单独用Tca处理的玉米穗虫幼虫的死亡率为13％。单独用U+2-ACTX-Hv1a处理的玉米穗虫具有19％的死亡率。与单独的Tca或U+2-ACTX-Hv1a的死亡率形成鲜明对比，将U+2-ACTX-Hv1a与Tca毒素组合导致4天后44％的死亡率。
此处的结果提供了发光光杆状菌毒素复合物和U+2-ACTX-Hv1a之间对玉米穗虫的协同作用的证据；即，此处的实施方案证明Tca和U+2-ACTX-Hv1a的组合产生了意想不到的协同效果，其中该组合产生了超过预期的加和效果。
实施例10：雪花莲凝集素(GNA)和ACTX
雪花莲凝集素或雪滴花(GNA)是甘露糖结合蛋白质。此处，使玉米穗虫(CEW)(棉铃虫)新生虫对抗GNA和/或U+2-ACTX-Hv1a溶液，以评估进食后的死亡率。
处理
(1)雪花莲凝集素(GNA)。
具有以下氨基酸序列：“MAKASLLILATIFLGVITPSCLSENILYSGETLPTGGFLSSGSFVFIMQEDCNLVLYNVDKPIWATNTGGLSSDCSLSMQNDGNLVVFTPSNKPIWASNTDGQNGNYVCILQKDRNVVIYGTNRWATGTYTGAVGIPESPPSEKYPSAGKIKLVTAK”并且如SEQ ID NO:35所示的GNA从VectorLaboratories(3390South Service Rd，Burlington，ON L7N3J5，Canada)获得，目录号L-1240。批号ZD1016。如本文所述获得U+2-ACTX-Hv1a。
(2)U+2-ACTX-Hv1a。具有“GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA”(SEQID NO:61)的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a从
Figure BDA0004014715560005532
-T Liquid Concentrate(批号14143019，
Figure BDA0004014715560005531
4717Campus Drive，Kalamazoo，MI 49008USA)获得。
(3)GNA+U+2-ACTX-Hv1a。如上文处理中所述制备/获得GNA和U+2，并进行组合。最终组合的组合物如下：占组合物总体积0.5％w/v的U+2-ACTX-Hv1a；和0.25％w/v的GNA，其余为水。
(4)对照。水。
饮食掺入测定
如下进行饮食掺入测定：首先通过在琼脂顶部创建含有石蜡膜的32孔测定托盘来构建液滴生物测定工作台。接下来，将3μL液滴(3×)置于具有5个CEW新生虫的石蜡膜上。每天补充液滴。每个处理重复4次。
如下应用前述处理：
(a)2.5mg/mL GNA(0.25％w/v)；5mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.5％w/v)；
(b)0mg/mL GNA(0％w/v)；5mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.5％w/v)；
(c)2.5mg/mL GNA(0.25％w/v)；0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)；以及
(d)0mg/mL GNA(0％w/v)；与0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)(对照)。
每天评估幼虫死亡率，持续3天。生物测定第三天的死亡率示于图13。
如图13所示，对照具有20％的基线死亡率。单独的U+2-ACTX-Hv1a(剂量为5mg/mL)导致45％的死亡率。单独的GNA具有15％的死亡率。当减去基线死亡率时，单独的U+2-ACTX-Hv1a的死亡率变为约25％，而GNA的死亡率降至零附近。然而，U+2-ACTX-Hv1a(5mg/mL)和GNA(2.5mg/mL)的组合一起具有协同效果，导致75％的死亡率；并且，当考虑到基线死亡率进行归一化时，U+2-ACTX-Hv1a(5mg/mL)和GNA(2.5mg/mL)的组合的死亡率达到约55％—或大约为单独的U+2-ACTX-Hv1a的量的两倍。
实施例11：几丁质酶和U+2-ACTX-Hv1a
为了评价几丁质酶，使秋夜蛾(草地贪夜蛾)对抗一定剂量的U+2-ACTX-Hv1a和/或几丁质酶，以测试它们单独和组合的效果。
处理
(1)几丁质酶。为了评价几丁质酶，使用来自绿色木霉(Trichoderma viride)的几丁质酶。具有SEQ ID NO:620所示的氨基酸序列的几丁质酶从Sigma Aldrich(3050SpruceStreet，St Louis，MO 63103U.S.A)(产品号C8241-25UN；批号128M4015V)获得。
(2)U+2-ACTX-Hv1a。具有“GSQYCVPVDQPCSLNTQPC CDDATCTQERNENGHTVYYCRA”(SEQID NO:61)的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a从
Figure BDA0004014715560005551
-T Liquid Concentrate(批号14143019，
Figure BDA0004014715560005552
4717Campus Drive，Kalamazoo，MI 49008USA)获得。
(3)几丁质酶+U+2-ACTX-Hv1a。如上文处理中所述制备/获得几丁质酶和U+2-ACTX-Hv1a，并进行组合。最终组合的组合物如下：占组合物总体积0.5％w/v的U+2-ACTX-Hv1a；0.01％w/v的几丁质酶，其余为水。
(4)对照。水。
饮食掺入测定
将含有以下成分浓度的三个液滴(各3μL)提供至32孔托盘中的五只新生秋夜蛾(草地夜蛾)幼虫：
(a)几丁质酶0μL/L(0％w/v)；U+2-ACTX-Hv1a 0mg/mL(0％w/v)；蔗糖(10％w/v)；
(b)几丁质酶100μL/L(0.01％w/v)；U+2-ACTX-Hv1a 0mg/mL(0％w/v)；蔗糖(10％w/v)；
(c)几丁质酶0μL/L(0％w/v)；U+2-ACTX-Hv1a 5mg/mL(0.5％w/v)；蔗糖(10％w/v)；以及
(d)几丁质酶100μL/L(0.01％w/v)；U+2-ACTX-Hv1a 5mg/mL(0.5％w/v)；蔗糖(10％w/v)。
然后在三天后评估死亡率。
如图14所示，未处理对照具有35％的死亡率。这可能是使用脆弱新生虫的结果，和/或反映了在使用昆虫的饮食掺入研究中常见的典型的应激和/或食物或营养缺乏。此处，单独的几丁质酶相对于对照处理(即，35％的死亡率)没有影响。因此，单独的几丁质酶的效果不能说是导致的死亡率比对照增加。另一方面，U+2-ACTX-Hv1a对昆虫显示75％的死亡率。并且，在几丁质酶和U+2-ACTX-Hv1a联合处理中观察到对死亡率的更大加和效果(即85％)。
因此，此处的实施例证明几丁质酶和U+2-ACTX-Hv1a的组合产生了意想不到的协同效果，其中该组合产生了超过预期的加和效果。
实施例12：昆虫生长调节剂(印楝素)和U+2-ACTX-Hv1a
昆虫生长调节剂(IGR)通过干扰幼虫昆虫蜕皮至下一龄的能力而起作用。IGR的作用机制(MoA)是干扰和/或抑制几丁质合酶。
为了测试上述假设，使玉米穗虫(CEW)(棉铃虫)新生虫对抗印楝素，以及印楝素和U+2-ACTX-Hv1a的组合。印楝素是从印度楝树油提取物中得到的杀昆虫剂，具有杀昆虫活性。印楝素具有化学式：C35H44O16，并且化学结构如图15。
处理
(1)印楝素。此处，印楝素是可商购获得的产品
Figure BDA0004014715560005561
4.5，它包含活性成分印楝素。
Figure BDA0004014715560005562
4.5(项目代码：168600；批号：72371909；CAS号：11141-17-6)从美国Certis USA L.L.C.(9145Guilford Road Suite175Columbia，MD 21046)获得。
(2)U+2-ACTX-Hv1a。具有“GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA”(SEQID NO:61)的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a从
Figure BDA0004014715560005563
-T Liquid Concentrate(批号14143019，
Figure BDA0004014715560005564
4717Campus Drive，Kalamazoo，MI 49008USA)获得。
(3)印楝素+U+2-ACTX-Hv1a。如上文处理中所述制备/获得印楝素和U+2-ACTX-Hv1a，并进行组合。最终组合的组合物如下：占组合物总体积1％w/v的U+2-ACTX-Hv1a；0.008％w/v的印楝素，其余为水。
(4)对照。水。
饮食掺入测定
如下应用前述处理：
(a)0μL/L印楝素(0％v/v)；0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)(对照)；
(b)80μL/L印楝素(0.008％v/v)；0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)；
(c)0μL/L印楝素(0％v/v)；10mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(1％w/v)；以及
(c)80μL/L印楝素(0.008％v/v)；10mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(1％w/v)。
生物测定工作台由128孔托盘组成。向每个孔中填充200μL注入有上述处理的基于琼脂的常规鳞翅目饮食；评价每个处理的16个孔(N＝16)。将一个新生玉米穗虫(棉铃虫)置于每个孔中，并评价它们在四天后的存活。
如图16所示，单独使用印楝素导致37.5％的死亡率。单独的U+2-ACTX-Hv1a导致18.75％的死亡率。然而，U+2-ACTX-Hv1a和印楝素的组合导致81.25％的死亡率。因此，与单独使用印楝素相比，所有U+2-ACTX-Hv1a和印楝素处理均观察到较高的玉米穗虫死亡率。
因此，本实施例证明印楝素和U+2-ACTX-Hv1a的组合产生了意想不到的协同效果，其中该组合产生了超过预期的加和效果。
实施例13：各种非特异性抑制剂(硼酸)和U+2-ACTX-Hv1a
各种非特异性(多位点)抑制剂包括硼酸盐，诸如硼砂、硼酸、氧化硼钠、硼酸钠和偏硼酸钠。为了评价各种非特异性抑制剂的效果，对暗黑菌虫(小粉虫)新生虫进行硼酸和/或U+2-ACTX-Hv1a的评价。
处理
(1)硼酸。硼酸(化学式：H3BO3)通过经销商VWR International,Inc.(GoshenParkway 1310,P.O.Box 2656West Chester，PA 19380-0906www.vwr.com)(代码：315181000；CAS 10043-35-3；EC：233-139-2；批号：A0254726)从ThermoFisher Scientific获得。
(2)U+2-ACTX-Hv1a。具有“GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA”(SEQID NO:61)的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a从
Figure BDA0004014715560005581
-T Liquid Concentrate(批号14143019，
Figure BDA0004014715560005582
4717Campus Drive，Kalamazoo，MI 49008USA)获得。
(3)硼酸+U+2-ACTX-Hv1a。如上所述获得硼酸和U+2-ACTX-Hv1a，并进行组合。最终组合的组合物由以下组成：占组合物总体积0.1％w/v的U+2-ACTX-Hv1a；和0.25％w/v的硼酸，其余为水。
(4)对照。水。
饮食掺入测定
处理溶液和浓度如下应用：
(a)0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)；0mg/mL硼酸(0％w/v)(对照)；
(b)0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)；2.5mg/mL硼酸(0.25％w/v)；
(c)1mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.1％w/v)；0mg/mL硼酸(0％w/v)；以及
(d)1mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.1％w/v)；2.5mg/mL硼酸(0.25％w/v)。
生物测定工作台在128孔托盘中进行。向每个孔中加入1mL注入有上述处理中的一者的基于琼脂的南方玉米根虫饮食。每个处理填充十六个孔(N＝16)。然后将一个暗黑菌虫(小粉虫)置于每个孔中，并评价它们在四天内的存活。
如图17所示，单独的硼酸导致10.3％的死亡率，而单独的U+2-ACTX-Hv1a导致20％的死亡率。然而，与单独的硼酸或U+2-ACTX-Hv1a的死亡率形成鲜明对比的是，硼酸和U+2-ACTX-Hv1a的组合导致68.75％的死亡率。
因此，本实施例证明硼酸和U+2-ACTX-Hv1a的组合产生了意想不到的协同效果，其中该组合产生了超过预期的加和效果。
实施例14：昆虫病原真菌和U+2-ACTX-Hv1a
球孢白僵菌是一种感染广泛昆虫的昆虫病原真菌。球孢白僵菌的杀昆虫活性可能来自其分泌的化合物，其继而又降解昆虫表皮。球孢白僵菌分泌的杀昆虫化合物中的一者是白僵菌素。存在三种具有声称的杀昆虫活性的白僵菌素种类：(1)白僵菌素(C45H57N3O9)；(2)白僵菌素A(C46H59N3O9)；和(3)白僵菌素B(C47H61N3O9)。
不受任何特定理论的约束，假设如果被摄入，则由球孢白僵菌与本发明和本文所述的CRIP组合产生的化合物可导致CRIP、白僵菌素和/或其组合的生物利用率和/或杀昆虫效果增加。为了评价上述假设，使苹果小卷蛾(苹果蠹蛾)对抗一定剂量的U+2-ACTX-Hv1a和/或白僵菌素，以测试它们单独和组合的效果。
处理
(1)球孢白僵菌毒素。为了测试球孢白僵菌及其毒素、孢子和/或蛋白质，使用
Figure BDA0004014715560005591
WP。
Figure BDA0004014715560005592
WP是包含20％球孢白僵菌菌株ANT-03孢子和80％其他/非活性成分的制剂。
Figure BDA0004014715560005593
WP(批号：19206-LDBC-719-03；CAS：63428-82-0)可从Anatis Bioprotection Inc.(278,rang Saint-AndréSt-Jacques-le-Mineur，Québec J0J1Z0，Canada)商购获得。
(2)U+2-ACTX-Hv1a。具有“GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA”(SEQID NO:61)的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a从
Figure BDA0004014715560005594
-T Liquid Concentrate(批号14143019，
Figure BDA0004014715560005595
4717Campus Drive，Kalamazoo，MI 49008USA)获得。
(3)球孢白僵菌毒素+U+2-ACTX-Hv1a。如上所述获得球孢白僵菌毒素和U+2-ACTX-Hv1a。并组合。最终组合的组合物由以下组成：占组合物总体积0.2％w/v的U+2-ACTX-Hv1a；和0.12％w/v的球孢白僵菌毒素，其余为水。
(4)对照。水。
饮食掺入测定
如下应用前述处理：
(a)0mg/mL球孢白僵菌毒素(0％w/v)；0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)(对照)；
(b)1.2mg/mL球孢白僵菌毒素(0.12％w/v)；0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)；
(c)0mg/mL球孢白僵菌毒素；2mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.2％w/v)；以及
(d)1.2mg/mL球孢白僵菌毒素(0.12％w/v)；2mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.2％w/v)。
生物测定工作台在128孔托盘中进行。向每个孔中加入200μL注入有上述处理中的一者的基于琼脂的普通鳞翅目饮食。每个处理填充十六个孔(N＝16孔/处理)。然后将一个新生苹果小卷蛾(苹果蠹蛾)置于每个孔中，并评价七天内的存活率。
如图18所示，用0mg/mL的
Figure BDA0004014715560005601
WP与0mg/mL的U+2-ACTX-Hv1a(对照)处理导致18.75％的死亡率。由1.2mg/mL的
Figure BDA0004014715560005602
WP和0mg/mL的U+2-ACTX-Hv1a组成的处理没有导致死亡。用0mg/mL
Figure BDA0004014715560005603
WP和2mg/mL U+2-ACTX-Hv1a处理具有与对照相同的死亡率(18.75％)。令人惊讶的是，将1.2mg/mL的
Figure BDA0004014715560005604
WP与2mg/mL的U+2-ACTX-Hv1a组合的处理导致50％的死亡率。
因此，本实施例证明
Figure BDA0004014715560005605
WP和U+2-ACTX-Hv1a的组合产生了意想不到的协同效果，其中该组合产生了超过预期的加和效果。
实施例15：杆状病毒和U+2-ACTX-Hv1a
杆状病毒科是对节肢动物具有特异性的病毒家族。在杆状病毒科中有一种称为β杆状病毒的属，包括26个种，包括苹果蠹蛾颗粒体病毒。苹果蠹蛾颗粒体病毒(CpGV)是尤其苹果蠹蛾(通常称为苹果小卷蛾)的病毒。苹果小卷蛾幼虫必须摄取苹果蠹蛾颗粒体病毒的病毒包含体(OB)以被感染。包合体是包围和保护感染性核酸颗粒的蛋白质晶格或基质。
(1)苹果蠹蛾颗粒体病毒(CpGV)。为了测试苹果蠹蛾颗粒体病毒，使用
Figure BDA0004014715560005611
HP。
Figure BDA0004014715560005612
HP由Andermatt Biocontrol AG(Stahlermatten 6，CH-6146Grossdietwil，Switzerland；https://www.andermattbiocontrol.com/index.html)制造；并由CertisUSA LLC(9145Guilford Road，Suite 175Columbia，MD21046)在USA分销(https://www.certisusa.com/)。
Figure BDA0004014715560005613
HP(EPA注册号69553-1；EPA认证号70051-CA-001；批号31240799)由下列成分组成：0.06％苹果蠹蛾颗粒体病毒分离株V22；和99.94％其他/非活性成分。
(2)U+2-ACTX-Hv1a。具有“GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA”(SEQID NO:61)的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a从
Figure BDA0004014715560005614
-T Liquid Concentrate(批号14143019，
Figure BDA0004014715560005615
4717Campus Drive，Kalamazoo，MI 49008USA)获得。
(3)CpGV+U+2-ACTX-Hv1a。如上所述获得CpGV和U+2-ACTX-Hv1a，并进行组合。最终组合的组合物由以下组成：占组合物总体积0.2％w/v的U+2-ACTX-Hv1a；和0.0.00585％w/v的CpGV，其余为水。
(4)对照。水。
饮食掺入测定
如下应用前述处理：
(a)0μL/L CpGV(0％w/v)；0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)(对照)；
(b)58.5μL/L CpGV(0.00585％w/v)；0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0％w/v)；
(c)0μL/LCpGV(0％w/v)；2mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.2％w/v)；以及
(d)58.5μL/L CpGV(0.00585％w/v)；2mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(0.2％w/v)。
生物测定工作台在128孔托盘中进行。向每个孔中加入200μL注入有上述处理的基于琼脂的常规鳞翅目饮食。然后每个处理填充十六个孔(N＝16，每个处理)。然后将一个新生苹果小卷蛾(苹果蠹蛾)置于每个孔中，并评价它们七天内的存活率。
如图19所示，0μL/L
Figure BDA0004014715560005621
HP与0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a(对照)以及58.5μL/L
Figure BDA0004014715560005622
HP与0mg/mL U+2-ACTX-Hv1a两者的处理均导致零死亡率。单独使用2mg/mL U+2-ACTX-Hv1a导致9％的死亡率。并且，58.5μL/L的
Figure BDA0004014715560005623
HP与2mg/mL的U+2-ACTX-Hv1a的组合导致38.5％的死亡率。
因此，本实施例证明
Figure BDA0004014715560005624
HP和U+2-ACTX-Hv1a的组合产生了意想不到的协同效果，其中该组合产生了超过预期的加和效果。
实施例16：意外效果
上述实施例(即实施例1至15)显示了意想不到的效果，该效果大于单独的IA或CRIP中的任一种的加和效果。事实上，证明实施例1至15的出乎意料的、更大的加和效果是下面所示的测试结果，其没有显示更大的加和效果。此处，U+2-ACTX-Hv1a和双苯氟脲、纳米颗粒和冰晶石的组合没有产生更大的加和效果。
昆虫生长调节剂(IGR)：双苯氟脲
昆虫生长调节剂(IGR)通过干扰幼虫昆虫蜕皮至下一龄的能力而起作用。通常，IGR的作用机制是干扰和/或抑制几丁质合酶，这可允许杀昆虫肽在昆虫肠道中的生物利用率。双苯氟脲或(±)-1-[3-氯-4-(1,1,2-三氟-2-三氟-甲氧基乙氧基)苯基]-3-(2,6-二氟苯甲酰基)脲(CAS号116714-46-6)是IGR。此处我们测试了双苯氟脲与U+2-ACTX-Hv1a的组合以确定其杀昆虫效果。
双苯氟脲以
Figure BDA0004014715560005625
形式获得，其由10％双苯氟脲和90％其人成分(OHP，Inc.P.O.Box 746Bluffton，South Carolina，29910USA)组成。此处，具有“GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA”(SEQ ID NO:61)的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a从
Figure BDA0004014715560005626
-TLiquid Concentrate(批号14143019，
Figure BDA0004014715560005627
4717Campus Drive，Kalamazoo，MI 49008USA)获得。Pedestal是一种配制的杀昆虫剂，它是影响CHS1的几丁质生物合成的抑制剂。双苯氟脲是IRAC 15集团的一部分。
此处，测试了评价双苯氟脲以下浓度的处理(有和没有U+2-ACTX-Hv1a)：
(a)80μL/L双苯氟脲(0.008％w/v)；
(b)8μL/L双苯氟脲(0.0008％w/v)；
(c)0.8μL/L双苯氟脲(0.00008％w/v)；和
(d)0μL/L双苯氟脲(0％w/v)。
生物测定工作台如下：布置128孔托盘，其中向每个孔中加入200μL注入有上述处理的基于琼脂的常规鳞翅目饮食。此处，每个处理填充16个孔。将一个新生玉米穗虫(棉铃虫)置于每个孔中，并评价它们在四天内的存活。
图20描绘了显示3天后死亡率结果的图。如此处所示，在玉米穗虫(美洲棉铃虫)饮食掺入测定中，没有证据表明当双苯氟脲与U+2-ACTX-Hv1a组合时的效果大于加和效果。
纳米粒子
纳米颗粒诱导紧密连接松弛，并使小鼠能够口服递送胰岛素。当整联蛋白被纳米颗粒结合时，它们可刺激激活MLCK酶的信号传导途径。此处，评价了有和没有5ppt U+2-ACTX-Hv1a(0.5mg/mL)(0.5％w/v)的纳米颗粒溶液。此处，获得了纳米颗粒的NanoXactSilica Nanospheres(nanoCompsix，4878Ronson Ct Ste J，San Diego，CA 92111)形式。
纳米颗粒浓度如下：
(a)50nm胺化二氧化硅(2700ppm)；
(b)50nm二氧化硅(2575ppm)；
(c)20nm二氧化硅(1177ppm)；以及
(d)10nm二氧化硅(12500ppm)。
液滴生物测定工作台在128孔托盘中进行，这些托盘含有琼脂、蜡纸、3μL纳米颗粒溶液和1个新生棉铃虫(玉米穗虫)。此处，每个处理评价16个孔(幼虫)，并且每天进行评价，持续3天，评价比例死亡率。
“比例死亡率”是指在实验过程中杀死的单个昆虫的比例。比例死亡率可根据公式(IV)计算，如下：
Figure BDA0004014715560005641
3天后的死亡率结果示于图21。如图所示，当将纳米颗粒与U+2-ACTX-Hv1a组合时，没有证据表明是更大的加和效果。
胃毒剂
结合U+2-ACTX-Hv1a评价胃毒剂冰晶石。冰晶石(Na3AlF6，六氟铝酸钠)是IRAC第8C族：各种非特异性(多位点)抑制剂。冰晶石溶解在昆虫肠道中，并且氟离子可能引起毒性，然而，它对非靶标诸如脊椎动物(包括哺乳动物)具有低毒性。
使用和不使用10ppt Spear(1mg/mL或1％w/v总组合物)评价冰晶石处理浓度，并且如下：
(a)10000ppm；
(b)2000ppm；
(c)400ppm；和
(d)0ppm。
冰晶石以
Figure BDA0004014715560005642
形式获得，这是一种由96％冰晶石(铝氟化钠)和4％其他成分组成的可商购获得的冰晶石(
Figure BDA0004014715560005643
370 South Main Street，Yuma，Arizona 85364USA)。
生物测定工作台如下：布置128孔托盘，并且向每个孔中加入200μL注入有上述处理的基于琼脂的常规鳞翅目饮食。此处，每个处理填充16个孔。将一个新生玉米穗虫(棉铃虫)置于每个孔中，并评价它们在四天内的存活。
如图22所示，当将冰晶石与U+2-ACTX-Hv1a组合时，没有证据表明是更大的加和效果。

Claims (106)

1.一种组合，包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(CRIP)和杀昆虫剂(IA)。
2.根据权利要求1所述的组合，其中所述IA是细菌毒素、真菌毒素、凝集素、印楝(Azadirachta indica)化合物、硼化合物、病毒或它们的组合。
3.根据权利要求2所述的组合，其中所述细菌毒素是苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)(Bt)毒素或光杆状菌(Photorhabdus)毒素。
4.根据权利要求3所述的组合，其中所述Bt毒素是分离自以下项的一种或多种发酵固体、孢子或毒素：苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)；苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)；苏云金芽孢杆菌鲇泽变种；苏云金芽孢杆菌鲇泽/太平洋变种；苏云金芽孢杆菌阿莱变种；苏云金芽孢杆菌阿马金变种；苏云金芽孢杆菌安达楼变种；苏云金芽孢杆菌阿根廷变种；苏云金芽孢杆菌asturiensis变种；苏云金芽孢杆菌azorensis变种；苏云金芽孢杆菌balearica变种；苏云金芽孢杆菌berliner变种；苏云金芽孢杆菌bolivia变种；苏云金芽孢杆菌brasilensis变种；苏云金芽孢杆菌喀麦隆变种；苏云金芽孢杆菌加拿大变种；苏云金芽孢杆菌chanpaisis变种；苏云金芽孢杆菌中华变种；苏云金芽孢杆菌科尔默变种；苏云金芽孢杆菌coreanensis变种；苏云金芽孢杆菌达尔可他变种；苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特变种；苏云金芽孢杆菌松蜀变种；苏云金芽孢杆菌杀虫变种；苏云金芽孢杆菌杀虫/亚毒变种；苏云金芽孢杆菌幕虫变种；苏云金芽孢杆菌fukuokaensis变种；苏云金芽孢杆菌galechiae变种；苏云金芽孢杆菌蜡螟变种；苏云金芽孢杆菌graciosensis变种；苏云金芽孢杆菌贵阳变种；苏云金芽孢杆菌higo变种；苏云金芽孢杆菌华中变种；苏云金芽孢杆菌iberica变种；苏云金芽孢杆菌印第安变种；苏云金芽孢杆菌以色列/励木变种；苏云金芽孢杆菌日本变种；苏云金芽孢杆菌jegathesan变种；苏云金芽孢杆菌景洪变种；苏云金芽孢杆菌肯尼亚变种；苏云金芽孢杆菌kim变种；苏云金芽孢杆菌kumamtoensis变种；苏云金芽孢杆菌kunthalanags3变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX24变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX27变种；苏云金芽孢杆菌kunthalaRX28变种；苏云金芽孢杆菌九州变种；苏云金芽孢杆菌李氏变种；苏云金芽孢杆菌londrina变种；苏云金芽孢杆菌malayensis变种；苏云金芽孢杆菌medellin变种；苏云金芽孢杆菌墨西哥变种；苏云金芽孢杆菌mogi变种；苏云金芽孢杆菌蒙特雷变种；苏云金芽孢杆菌莫里逊变种；苏云金芽孢杆菌muju变种；苏云金芽孢杆菌navarensis变种；苏云金芽孢杆菌neoleonensis变种；苏云金芽孢杆菌nigeriensis变种；苏云金芽孢杆菌novosibirsk变种；苏云金芽孢杆菌ostriniae变种；苏云金芽孢杆菌oswaldocruzi变种；苏云金芽孢杆菌pahangi变种；苏云金芽孢杆菌巴基斯坦变种；苏云金芽孢杆菌palmanyolensis变种；苏云金芽孢杆菌pingluonsis变种；苏云金芽孢杆菌pirenaica变种；苏云金芽孢杆菌poloniensis变种；苏云金芽孢杆菌pondicheriensis变种；苏云金芽孢杆菌pulsiensis变种；苏云金芽孢杆菌rongseni变种；苏云金芽孢杆菌roskildiensis变种；苏云金芽孢杆菌圣地亚哥变种；苏云金芽孢杆菌汉城变种；苏云金芽孢杆菌山东变种；苏云金芽孢杆菌锡卢变种；苏云金芽孢杆菌sinensis变种；苏云金芽孢杆菌sooncheon变种；苏云金芽孢杆菌猝倒变种；苏云金芽孢杆菌猝倒/松蜀变种；苏云金芽孢杆菌亚毒变种；苏云金芽孢杆菌sumiyoshiensis变种；苏云金芽孢杆菌sylvestriensis变种；苏云金芽孢杆菌thailandensis变种；苏云金芽孢杆菌汤普逊变种；苏云金芽孢杆菌苏云金变种；苏云金芽孢杆菌励木变种；苏云金芽孢杆菌toguchini变种；苏云金芽孢杆菌东北变种；苏云金芽孢杆菌多窝变种；苏云金芽孢杆菌托马诺夫变种；苏云金芽孢杆菌vazensis变种；苏云金芽孢杆菌wratislaviensis变种；苏云金芽孢杆菌武汉变种；苏云金芽孢杆菌xiaguangiensis变种；苏云金芽孢杆菌yosoo变种；苏云金芽孢杆菌云南变种；苏云金芽孢杆菌肇东变种；和苏云金芽孢杆菌konkukian变种毒素。
5.根据权利要求4所述的组合，其中所述Bt毒素是分离自以下项的一种或多种发酵固体、孢子或毒素：苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)；苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)；苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)。
6.根据权利要求5所述的组合，其中所述Bt毒素是伴孢晶体毒素、分泌蛋白、β-外毒素、41.9kDa杀昆虫毒素、sphaericolysin、蜂房杆菌溶素或增效蛋白样蛋白。
7.根据权利要求6所述的组合，其中所述伴孢晶体毒素是δ-内毒素。
8.根据权利要求7所述的组合，其中所述δ-内毒素为三结构域(3D)Cry家族蛋白、二元Bin样家族毒素、ETX_MTX2样家族毒素、毒素-10家族毒素、气单胞菌溶素家族毒素或溶细胞素。
9.根据权利要求8所述的组合，其中所述δ-内毒素为三结构域(3D)Cry毒素、杀蚊Cry毒素(Mtx)、二元样(Bin)毒素或Cyt毒素。
10.根据权利要求9所述的组合，其中所述δ-内毒素为三结构域(3D)Cry毒素或Cyt毒素。
11.根据权利要求10所述的组合，其中所述δ-内毒素选自由以下项组成的组：Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ab样、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A样、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb样、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H样、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I样、Cry1I样、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1样、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A样、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba样、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8样、Cry8样、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa样、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9样、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A样、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa样、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20样、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43样、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1或Cry78Aa1、Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa样、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba样、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B样、Cyt2Ca1和Cyt3Aa1。
12.根据权利要求11所述的组合，其中所述Cry毒素或Cyt毒素具有根据SEQ ID NO:412-481的氨基酸序列。
13.根据权利要求6所述的组合，其中所述Bt毒素是分泌蛋白。
14.根据权利要求13所述的组合，其中所述分泌蛋白是营养期杀昆虫蛋白(Vip)、分泌期杀昆虫蛋白(Sip)、Bin样家族蛋白或ETX_MTX2家族蛋白。
15.根据权利要求14所述的组合，其中所述分泌蛋白是Vip。
16.根据权利要求15所述的组合，其中所述Vip是Vip 1家族蛋白、Vip 2家族蛋白、Vip3家族蛋白或Vip 4家族蛋白。
17.根据权利要求16所述的组合，其中所述Vip选自由以下项组成的组：Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4和Vip4Aa1。
18.根据权利要求17所述的组合，其中所述Vip蛋白具有根据SEQ ID NO:482-587所示氨基酸序列的氨基酸序列。
19.根据权利要求3所述的组合，其中所述细菌毒素是光杆状菌(Photorhabdus)毒素。
20.根据权利要求19所述的组合，其中所述光杆状菌毒素选自由以下项组成的组：Photorhabdus akhurstii毒素；非共生光杆状菌(Photorhabdus asymbiotica)毒素；非共生光杆状菌非共生亚种(Photorhabdus asymbiotica subsp.asymbiotica)毒素；非共生光杆状菌非共生亚种ATCC43949毒素；澳洲光杆状菌(Photorhabdus australis)毒素；澳洲光杆状菌DSM 17609毒素；Photorhabdus bodei毒素；Photorhabdus caribbeanensis毒素；Photorhabdus cinerea毒素；海南光杆状菌(Photorhabdus hainanensis)毒素；Photorhabdus heterorhabditis毒素；Photorhabdus kayaii毒素；Photorhabdus khanii毒素；Photorhabdus khanii NC19毒素；Photorhabdus khanii subsp.guanajuatensis毒素；Photorhabdus kleinii毒素；Photorhabdus laumondii毒素；Photorhabdus laumondiisubsp.clarkei毒素；Photorhabdus laumondii subsp.laumondii毒素；Photorhabduslaumondii subsp.Laumondii TTO1毒素；发光光杆状菌(Photorhabdus luminescens)BA1毒素；发光光杆状菌NBAII H75HRPL105毒素；发光光杆状菌NBAII HiPL101毒素；发光光杆状菌发光亚种(Photorhabdus luminescens subsp.luminescens)毒素；发光光杆状菌发光亚种ATCC 29999毒素；发光光杆状菌墨西哥亚种(Photorhabdus luminescenssubsp.mexicana)毒素；发光光杆状菌sonorensis亚种毒素；Photorhabdus namnaonensis毒素；Photorhabdus noenieputensis毒素；Photorhabdus stackebrandtii毒素；Photorhabdus tasmaniensis毒素；中温光杆状菌(Photorhabdus temperata)毒素；中温光杆状菌J3毒素；中温光杆状菌phorame亚种毒素；中温光杆状菌中温亚种(Photorhabdustemperata subsp.temperata)毒素；中温光杆状菌中温亚种M1021毒素；中温光杆状菌中温亚种Meg1毒素；Photorhabdus thracensis毒素；未分类的光杆状菌毒素；光杆状菌属物种(Photorhabdus sp.)毒素；光杆状菌属物种3014毒素；光杆状菌属物种3240毒素；光杆状菌属物种Az29毒素；光杆状菌属物种BS21毒素；光杆状菌属物种CbKj163毒素；光杆状菌属物种CRCIA-P01毒素；光杆状菌属物种ENY毒素；光杆状菌属物种FL2122毒素；光杆状菌属物种FL480毒素；光杆状菌属物种FsIw96毒素；光杆状菌属物种GDd233毒素；光杆状菌属物种H3086毒素；光杆状菌属物种H3107毒素；光杆状菌属物种H3240毒素；光杆状菌属物种HB301毒素；光杆状菌属物种HB78毒素；光杆状菌属物种HB89毒素；光杆状菌属物种HIT毒素；光杆状菌属物种HO1毒素；光杆状菌属物种HUG-39毒素；光杆状菌属物种IT毒素；光杆状菌属物种JUN毒素；光杆状菌属物种KcTs129毒素；光杆状菌属物种KJ13.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ14.3 TH毒素；光杆状菌属物种KJ24.5 TH毒素；光杆状菌属物种KJ29.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ37.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ7.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ8.2 TH毒素；光杆状菌属物种KJ9.1 TH毒素；光杆状菌属物种KJ9.2 TH毒素；光杆状菌属物种KK1.3TH毒素；光杆状菌属物种KK1.4 TH毒素；光杆状菌属物种KMD74毒素；光杆状菌属物种KOH毒素；光杆状菌属物种MID10毒素；光杆状菌属物种MOL毒素；光杆状菌属物种MSW_058毒素；光杆状菌属物种MSW_079毒素；光杆状菌属物种NK2.1 TH毒素；光杆状菌属物种NK2.5 TH毒素；光杆状菌属物种NnMt2h毒素；光杆状菌属物种NP1毒素；光杆状菌属物种OH10毒素；光杆状菌属物种OnIr40毒素；光杆状菌属物种OnKn2毒素；光杆状菌属物种PB10.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB16.3 TH毒素；光杆状菌属物种PB17.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB17.3 TH毒素；光杆状菌属物种PB2.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB22.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB22.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB32.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB33.1TH毒素；光杆状菌属物种PB33.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB37.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB39.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB4.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB41.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB45.5TH毒素；光杆状菌属物种PB47.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB47.3 TH毒素；光杆状菌属物种PB5.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB5.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB50.4TH毒素；光杆状菌属物种PB51.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB52.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB54.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB58.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB58.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB58.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB59.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB6.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB67.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB67.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB68.1TH毒素；光杆状菌属物种PB7.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB76.1 TH毒素；光杆状菌属物种PB76.4 TH毒素；光杆状菌属物种PB76.5 TH毒素；光杆状菌属物种PB78.2 TH毒素；光杆状菌属物种PB80.3 TH毒素；光杆状菌属物种PB80.4 TH毒素；光杆状菌属物种Pjun毒素；光杆状菌属物种RW14-46毒素；光杆状菌属物种S10-54毒素；光杆状菌属物种S12-55毒素；光杆状菌属物种S14-60毒素；光杆状菌属物种S15-56毒素；光杆状菌属物种S5P8-50毒素；光杆状菌属物种S7-51毒素；光杆状菌属物种S8-52毒素；光杆状菌属物种S9-53毒素；光杆状菌属物种SJ2毒素；光杆状菌属物种SN259毒素；光杆状菌属物种SP1.5 TH毒素；光杆状菌属物种SP16.4 TH毒素；光杆状菌属物种SP21.5 TH毒素；光杆状菌属物种SP3.4 TH毒素；光杆状菌属物种SP4.5 TH毒素；光杆状菌属物种SP7.3 TH毒素；光杆状菌属物种TyKb140毒素；光杆状菌属物种UK76毒素；光杆状菌属物种VMG毒素；光杆状菌属物种WA21C毒素；光杆状菌属物种WkSs43毒素；光杆状菌属物种Wx13毒素；光杆状菌属物种X4毒素；光杆状菌属物种YNb90毒素；和光杆状菌属物种ZM毒素。
21.根据权利要求20所述的组合，其中所述光杆状菌毒素是发光光杆状菌毒素。
22.根据权利要求2所述的组合，其中所述真菌毒素是子囊菌(Ascomycete)真菌毒素。
23.根据权利要求22所述的组合，其中所述子囊菌真菌毒素是虫草(Cordycipitaceae)科真菌毒素。
24.根据权利要求23所述的组合，其中所述虫草科真菌毒素是刺束梗孢属(Akanthomyces)毒素、多孔囊菌属(Ascopolyporus)毒素；白僵菌属(Beauveria)毒素；Beejasamuha毒素；冬虫夏草(Cordyceps)毒素；Coremiopsis毒素；侧齿霉属(Engyodontium)毒素；球束梗孢属(Gibellula)毒素；厚盖霉属(Hyperdermium)毒素；Insecticola毒素；棒束孢属(Isaria)毒素；蜡蚧菌属(Lecanicillium)毒素；Microhilum毒素；Phytocordyceps毒素；拟球束梗孢属(Pseudogibellula)毒素；Rotiferophthora毒素；拟青霉属(Simplicillium)毒素；或虫壳属(Torrubiella)毒素。
25.根据权利要求24所述的组合，其中所述虫草科真菌毒素是白僵菌毒素。
26.根据权利要求25所述的组合，其中所述白僵菌毒素是白色白僵菌(Beauveriaalba)毒素；多形白僵菌(Beauveria amorpha)毒素；Beauveria arenaria毒素；Beauveriaasiatica毒素；Beauveria australis毒素；
球孢白僵菌(Beauveria bassiana)毒素；球孢虫草(Cordyceps bassiana)毒素；布朗尼氏白僵菌(Beauveria brongniartii)毒素；Beauveria brumptii毒素；苏格兰白僵菌(Beauveria caledonica)毒素；凯罗门白僵菌(Beauveria chiromensis)毒素；Beauveriacoccorum毒素；Beauveria cretacea毒素；柱孢白僵菌(Beauveria cylindrospora)毒素；Beauveria delacroixii毒素；致密白僵菌(Beauveria densa)毒素；Beauveria dependens毒素；Beauveria doryphorae毒素；Beauveria effusa毒素；Beauveria epigaea毒素；猫棒束孢白僵菌(Beauveria felina)毒素；Beauveria geodes毒素；小球孢白僵菌(Beauveriaglobulifera)毒素；Beauveria heimii毒素；Beauveria hoplocheli毒素；Beauveriakipukae毒素；Beauveria laxa毒素；Beauveria malawiensis毒素；Beauveria medogensis毒素；Beauveria melolonthae毒素；Beauveria nubicola毒素；稻米白僵菌(Beauveriaoryzae)毒素；Beauveria paradoxa毒素；Beauveria paranensis毒素；Beauveriaparasitica毒素；Beauveria petelotii毒素；假球孢白僵菌(Beauveria pseudobassiana)毒素；Beauveria rileyi毒素；Beauveria rubra毒素；Beauveria shiotae毒素；Beauveriasobolifera毒素；Beauveria spicata毒素；Beauveria stephanoderis毒素；Beauveriasulfurescens毒素；Beauveria sungii毒素；纤细白僵菌(Beauveria tenella)毒素；Beauveria tundrensis毒素；粘孢白僵菌(Beauveria velata)毒素；伊拉克白僵菌(Beauveria varroae)毒素；蠕孢白僵菌(Beauveria vermiconia)毒素；Beauveria vexans毒素；Beauveria viannai毒素；或Beauveria virella毒素。
27.根据权利要求2所述的组合，其中所述凝集素选自由以下项组成的组：雪滴花(Galanthus nivalis)凝集素(GNA)；西洋接骨木(Sambucus nigra)凝集素(SNA)；朝鲜槐(Maackia amurensis)-II(MAL-II)；鸡冠刺桐(Erythrina cristagalli)凝集素(ECL)；蓖麻(Ricinus communis)凝集素-I(RCA)；花生凝集素(PNA)；麦胚凝集素(WGA)；单叶加纳籽(Griffonia simplicifolia)-II(GSL-II)；Con A；小扁豆(Lens culinaris)凝集素(LCA)；甘露糖结合凝集素(MBL)；BanLec；半乳凝集素；菜豆(Phaseolus vulgaris)白细胞凝集素(PHA-L)；菜豆红细胞凝集素(PHA-E)；和曼陀罗(Datura stramonium)凝集素(DSL)。
28.根据权利要求27所述的组合，其中所述凝集素是GNA。
29.根据权利要求2所述的组合，其中所述印楝化合物是印楝素；印苦楝二酮；Azadiradionolide；脱乙酰葛杜宁；印楝素B；Desfuranoazadiradione；环氧楝树二酮；葛杜宁；Mahmoodin；Neemfruitin A；Neemfruitin B；印苦楝内酯；印楝宾；Nimolicinol；Ohchinin Acetate；印楝沙兰林；Salannol；alpha-Nimolactone；beta-Nimolactone；2',3'-二氢印楝沙兰林；3-脱乙酰基印楝沙兰林；6-脱乙酰基印楝素；7-Acetyl-16,17-dehydro-16-hydroxyneotrichilenone；7-Benzoylnimbocinol；7-脱乙酰基-7-苯甲酰基环氧楝树二酮；7-脱乙酰基-7-苯甲酰基葛杜宁；7-Deacetyl-17-epinimolicinol；15-羟基印苦楝二酮；17-表-17-羟基印苦楝二酮；17-表印苦楝二酮；20,21,22,23-四氢-23-氧代印苦楝二酮；22,23-Dihydronimocinol；或28-去氧代印苦楝内酯。
30.根据权利要求2所述的组合，其中所述硼化合物选自由以下项组成的组：硼砂、硼酸、八硼酸二钠、硼酸钠、偏硼酸钠、十水合四硼酸钠、氧化硼、碳化硼、氮化硼、三溴化硼、三氯化硼和三氟化硼。
31.根据权利要求2所述的组合，其中所述病毒是杆状病毒科(Baculoviridae)病毒。
32.根据权利要求31所述的组合，其中所述杆状病毒科病毒是β杆状病毒(Betabaculovirus)。
33.根据权利要求32所述的组合，其中所述β杆状病毒是棉花棉褐带卷蛾(Adoxophyesorana)颗粒体病毒；黄地老虎(Agrotis segetum)颗粒体病毒；菜粉蝶(Artogeia rapae)颗粒体病毒；欧洲粉蝶(Pieris brassicae)颗粒体病毒；云杉色卷蛾(Choristoneurafumiferana)颗粒体病毒；西部云杉色卷蛾(Choristoneura occidentalis)颗粒体病毒；杨扇舟蛾(Clostera anachoreta)颗粒体病毒；分月扇舟蛾(Clostera anastomosis)颗粒体病毒A；分月扇舟蛾(Clostera anastomosis)颗粒体病毒(河南)；分月扇舟蛾(Closteraanastomosis)颗粒体病毒B；稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)颗粒体病毒；苹果异形小卷蛾(Cryptophlebia leucotreta)颗粒体病毒；苹果蠹蛾(Cydia pomonella)颗粒体病毒；苹果蠹蛾(Cydia pomonella)颗粒体病毒(墨西哥分离株)；小蔗螟(Diatraeasaccharalis)颗粒体病毒；夜小卷蛾(Epinotia aporema)颗粒体病毒；木薯天蛾(Erinnyisello)颗粒体病毒；葡萄叶斑蛾(Harrisina brillians)颗粒体病毒；棉铃虫(Helicoverpaarmigera)颗粒体病毒；草安夜蛾(Lacanobia oleracea)颗粒体病毒；南美毛胫夜蛾(Mocislatipes)颗粒体病毒；一点粘虫(Mythimna unipuncta)颗粒体病毒A；Pseudalatiaunipuncta颗粒体病毒；一点粘虫(Mythimna unipuncta)颗粒体病毒B；一点粘虫(Mythimnaunipuncta)颗粒体病毒；马铃薯块茎蛾(Phthorimaea operculella)颗粒体病毒；印度谷螟(Plodia interpunctella)颗粒体病毒；小菜蛾(Plutella xylostella)颗粒体病毒；草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)颗粒体病毒；斜纹夜蛾(Spodoptera litura)颗粒体病毒；粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)颗粒体病毒；粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)颗粒体病毒LBIV-12；八字地老虎(Xestia c-nigrum)颗粒体病毒；未分类的β杆状病毒(Betabaculovirus)；飞扬阿夜蛾(Achaea janata)颗粒体病毒；茶小卷叶蛾(Adoxophyeshonmai)颗粒体病毒；警纹地夜蛾(Agrotis exclamationis)颗粒体病毒；跳螳螂(Ameliapallorana)颗粒体病毒；茶蚕(Andraca bipunctata)颗粒体病毒；丫纹夜蛾(Autographagamma)颗粒体病毒；茶细蛾(Caloptilia theivora)颗粒体病毒；欧洲云杉卷叶蛾(Choristoneura murinana)颗粒体病毒；栎绿色卷蛾(Choristoneura viridis)β杆状病毒；分月扇舟蛾(Clostera anastomosis)颗粒体病毒；杂食云卷蛾(Cnephasia longana)颗粒体病毒；盐泽灯蛾(Estigmene acrea)颗粒体病毒；红背地老虎(Euxoa ochrogaster)颗粒体病毒；棉铃实夜蛾(Heliothis armigera)颗粒体病毒；四叉莜夜蛾(Hoplodrinaambigua)颗粒体病毒；美国白蛾(Hyphantria cunea)颗粒体病毒；黑点刺蛾(Natadanararia)颗粒体病毒；青铜地老虎(Nephelodes emmedonia颗粒体病毒；三线褐卷蛾Pandemis limitata)颗粒体病毒；Peridorma morpontora颗粒体病毒；菜青虫(Pierisrapae)颗粒体病毒；苜蓿绿叶蛾(Plathypena scabra)颗粒体病毒；拟粘液蛾属(Pseudaletia)β杆状病毒；三叶草夜蛾(Scotogramma trifolii)颗粒体病毒；Spodopteraandrogea颗粒体病毒；棉叶虫(Spodoptera littoralis)颗粒体病毒；安第斯马铃薯块茎蛾(Tecia solanivora)颗粒体病毒；或毛胫夜蛾属物种(Mocis sp.)颗粒体病毒。
34.根据权利要求1所述的组合，其中所述IA选自由以下项组成的组：发光光杆状菌毒素；球孢白僵菌毒素；雪滴花凝集素(GNA)；印楝素化合物；硼酸；和苹果蠹蛾颗粒体病毒(CpGV)。
35.根据权利要求34所述的组合，其中所述发光光杆状菌毒素包括发光光杆状菌毒素复合物(Tca)。
36.根据权利要求35所述的组合，其中所述Tca包括TcaA蛋白(SEQ IDNO:616)、TcaB蛋白(SEQ ID NO:617)、TcaC蛋白(SEQ ID NO:618)和TcaZ蛋白(SEQ ID NO:619)。
37.根据权利要求34所述的组合，其中所述球孢白僵菌毒素是白僵菌素毒素。
38.根据权利要求37所述的组合，其中所述白僵菌素毒素是具有化学式C45H57N3O9的白僵菌素毒素；具有化学式C46H59N3O9的白僵菌素A毒素；或具有化学式C47H61N3O9的白僵菌素B毒素。
39.根据权利要求38所述的组合，其中所述球孢白僵菌毒素是从球孢白僵菌菌株ANT-03孢子分离的白僵菌素毒素。
40.根据权利要求34所述的组合，其中所述GNA具有SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列。
41.根据权利要求34所述的组合，其中所述CpGV是苹果蠹蛾颗粒体病毒分离株V22病毒。
42.根据权利要求1所述的组合，其中所述IA是从苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素。
43.根据权利要求42所述的组合，其中所述IA是从苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP144分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素。
44.根据权利要求1所述的组合，其中所述IA是从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素。
45.根据权利要求44所述的组合，其中所述IA是从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素。
46.根据权利要求1所述的组合，其中所述IA是从苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素。
47.根据权利要求46所述的组合，其中所述Btt毒素是从苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素。
48.根据权利要求1-47中任一项所述的组合，其中所述CRIP是U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽、U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)、海葵毒素、Av3变体多肽(AVP)、巴西游走蛛(Phoneutria)毒素或Atracotoxin(ACTX)。
49.根据权利要求48所述的组合，其中所述U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽具有与SEQ IDNO:1所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
50.根据权利要求49所述的组合，其中所述U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽具有根据SEQ IDNO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列。
51.根据权利要求48所述的组合，其中所述TVP具有与SEQ ID NO:2-15、49-53、2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651和653-654中任一项所示氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
52.根据权利要求51所述的组合，其中所述TVP具有根据SEQ ID NO:2-15、49-53、2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651和653-654中任一项所示氨基酸序列的氨基酸序列。
53.根据权利要求48所述的组合，其中所述海葵毒素是Av2毒素或Av3毒素。
54.根据权利要求53所述的组合，其中所述Av2毒素具有与SEQ ID NO:588所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
55.根据权利要求54所述的组合，其中所述Av2毒素具有根据SEQ IDNO:588所示氨基酸序列的氨基酸序列。
56.根据权利要求53所述的组合，其中所述Av3毒素具有与SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
57.根据权利要求56所述的组合，其中所述Av3毒素具有根据SEQ IDNO:44所示氨基酸序列的氨基酸序列。
58.根据权利要求48所述的组合，其中所述AVP是AVPa肽、AVPa-C1肽或AVPb肽。
59.根据权利要求58所述的组合，其中所述AVPa毒素具有与SEQ ID NO:45所示氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
60.根据权利要求59所述的组合，其中所述AVPa毒素具有根据SEQ IDNO:45所示氨基酸序列的氨基酸序列。
61.根据权利要求58所述的组合，其中所述AVPa-C1毒素具有与SEQ IDNO:46所示氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
62.根据权利要求61所述的组合，其中所述AVPa-C1毒素具有根据SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的氨基酸序列。
63.根据权利要求58所述的组合，其中所述AVPb毒素具有与SEQ ID NO:47所示氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
64.根据权利要求63所述的组合，其中所述AVPb毒素具有根据SEQ IDNO:47所示氨基酸序列的氨基酸序列。
65.根据权利要求48所述的组合，其中所述CRIP是ctenitoxin(CNTX)。
66.根据权利要求65所述的组合，其中所述CNTX是Γ-CNTX-Pn1a。
67.根据权利要求66所述的组合，其中所述Γ-CNTX-Pn1a具有与SEQ IDNO:65所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
68.根据权利要求67所述的组合，其中所述Γ-CNTX-Pn1a具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列。
69.根据权利要求48所述的组合，其中所述CRIP是ACTX。
70.根据权利要求69所述的组合，其中所述ACTX是U-ACTX肽、Omega-ACTX肽或Kappa-ACTX肽。
71.根据权利要求69所述的组合，其中所述ACTX是U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、κ-ACTX-Hv1a、κ+2-ACTX-Hv1a、ω-ACTX-Hv1a或ω+2-ACTX-Hv1a。
72.根据权利要求71所述的组合，其中所述ACTX具有与SEQ ID NO:60-64和594中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
73.根据权利要求72所述的组合，其中所述ACTX具有根据SEQ ID NO:60-64和594中任一项所示氨基酸序列的氨基酸序列。
74.根据权利要求69所述的组合，其中所述ACTX具有与SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
75.根据权利要求74所述的组合，其中所述ACTX具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列。
76.根据权利要求1-48中任一项所述的组合，其中所述CRIP选自由以下项组成的组：U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽，其具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列；TVP，其具有根据SEQ ID NO:2-15、49-53、2-15、49-53、621-622、624-628、631-640、642-651和653-654中任一项所示氨基酸序列的氨基酸序列；Av3-变体多肽(AVP)，其具有SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列；Γ-CNTX-Pn1a，其具有SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列；或U+2-ACTX-Hv1a，其具有SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列。
77.根据权利要求1-76中任一项所述的组合，其中所述IA与CRIP的比率是约10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000或1:10,000。
78.根据权利要求77所述的组合，其中所述IA是从苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素；并且所述CRIP是ACTX；并且其中从苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)分离的所述一种或多种发酵固体、孢子和毒素与所述ACTX的比率是约1:1至约1:5000。
79.根据权利要求78所述的组合，其中从苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bti)分离的所述一种或多种发酵固体、孢子或毒素与所述ACTX的比率是约1:4000。
80.根据权利要求77所述的组合，其中所述IA是从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素；并且所述CRIP是ACTX；并且其中从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)分离的所述一种或多种发酵固体、孢子和毒素与所述ACTX的比率是约1:1至约1:10。
81.根据权利要求80所述的组合，其中从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)分离的所述一种或多种发酵固体、孢子或毒素与所述ACTX的比率是约1:9.2。
82.根据权利要求77所述的组合，其中所述IA是从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素；并且所述CRIP是AVP；并且其中从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素与所述AVP的比率是约1:1至约1:1.5。
83.根据权利要求82所述的组合，其中从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种(Btk)分离的所述一种或多种发酵固体、孢子或毒素与所述AVP的比率是约1:1.375。
84.根据权利要求77所述的组合，其中所述IA是从苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素；并且所述CRIP是ACTX；并且其中从所述苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)分离的所述一种或多种发酵固体、孢子和毒素与所述ACTX的比率是约1:1至约1:10。
85.根据权利要求84所述的组合，其中从所述苏云金芽孢杆菌拟步行甲变种(Btt)分离的所述一种或多种发酵固体、孢子或毒素与所述ACTX的比率是约1:8.75。
86.一种组合物，包含根据权利要求1-82中任一项所述的组合，还包含赋形剂。
87.一种组合，包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b肽。
88.一种组合，包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的U1-漏斗网蛛毒素-Ta1b变体多肽(TVP)。
89.一种组合，包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的Av3-变体多肽(AVP)。
90.一种组合，包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的Γ-CNTX-Pn1a毒素。
91.一种组合，包含球孢白僵菌菌株ANT-03孢子和具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
92.一种组合，包含从苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种菌株NB-176中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
93.一种组合，包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株EVB-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
94.一种组合，包含从苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株BMP 144中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
95.一种组合，包含发光光杆状菌毒素和ACTX；其中所述发光光杆状菌毒素是发光光杆状菌毒素复合物(Tca)，所述发光光杆状菌毒素复合物包括TcaA(SEQ ID NO:616)、TcaB(SEQ ID NO:617)、TcaC(SEQ ID NO:618)和TcaZ(SEQ ID NO:619)；并且其中所述ACTX肽是U+2-ACTX-Hv1a毒素(SEQ ID NO:61)。
96.一种组合，包含雪滴花凝集素(GNA)和ACTX；其中所述GNA具有SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列；并且其中所述ACTX肽是具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
97.一种组合，包含印楝素和ACTX；其中所述印楝素是具有以下化学式的印楝素：C35H44O16；并且其中所述ACTX是具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
98.一种组合，包含硼酸化合物和ACTX；其中所述硼酸化合物具有化学式H3BO3；并且其中所述ACTX肽是具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
99.一种组合，包含苹果蠹蛾颗粒体病毒(CpGV)和ACTX；其中所述CpGV是苹果蠹蛾颗粒体病毒分离株V22病毒；并且其中所述ACTX肽是具有根据SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的U+2-ACTX-Hv1a毒素。
100.一种使用根据权利要求1-99中任一项所述的组合来防治昆虫的方法，所述方法包括，提供至少一种CRIP和至少一种IA的组合，将根据权利要求1-105中任一项所述的组合施用到昆虫所在处。
101.根据权利要求100所述的方法，其中所述昆虫选自由以下项组成的组：葡萄蔓天蛾(天蛾幼虫)(Eumorpha achemon)；苜蓿粉蝶(Colias eurytheme)；粉斑螟蛾(Caudracautella)；白条卷叶蛾(Amorbia humerosana)；粘虫(灰翅夜蛾属(Spodoptera)物种，例如甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)、棉叶虫(Spodoptera littoralis)、美洲粘虫(Pseudaletia unipuncta))；朝鲜蓟羽蛾(Platyptilia carduidactyla)；杜鹃花毛虫(Datana major)；结草虫(常绿树蓑蛾(Thyridopteryx ephemeraeformis))；香蕉蛾(木豹蛾(Hypercompe scribonia))；香蕉弄蝶(Erionota thrax)；黑头长翅卷蛾(Acleris gloverana)；加州槲蛾(Phryganidiacalifornica)；春尺蠖(Paleacrita merriccata)；樱小食心虫(Grapholita packardi)；圹水螟(Nymphula stagnata)；柑橘地老虎(Xylomyges curialis)；苹果蠹蛾(Cydiapomonella)；蔓越莓果虫(Acrobasis vaccinii)；卷心菜薄翅野螟(Evergestisrimosalis)；切根虫(夜蛾科(Noctuid)物种，小地老虎(Agrotis ipsilon))；冷杉合毒蛾(Orgyia pseudotsugata)；木薯天蛾(天蛾幼虫)(Erinnyis ello)；榆树尺蠖(Ennomossubsignaria)；欧洲葡萄蔓蛾(Lobesia botrana)；欧洲弄蝶(Thymelicus lineola)(EssexSkipper)；美国白蛾(Melissopus latiferreanus)；蔷薇黄卷蛾(Archips rosanus)；果树黄卷蛾(Archips argyrospilia)、葡萄卷叶蛾(Paralobesia viteana)；荷兰石竹小卷蛾(Platynota stultana)；葡萄叶雕叶虫(Harrisina americana)(仅为步行虫科(ground))；苜蓿绿夜蛾(Plathypena scabra)；绿条纹枫虫(Dryocampa rubicunda)；Gummosos-Batrachedra；Comosae(Hodges)；舞毒蛾(Lymantria dispar)；铁杉尺蠖(Lambdinafiscellaria)；天蛾幼虫(烟草天蛾属(Manduca)物种)；菜粉蝶(Pieris rapae)；玉米天蚕蛾(Automeris io)；贾克松色卷蛾(Choristoneura pinus)；苹果浅褐卷叶蛾(Epiphyaspostvittana)；甜瓜绢野螟(Diaphania hyalinata)；含羞草雕蛾(Homadaulaanisocentra)；蔷薇斜条卷叶蛾(Choristoneura rosaceana)；欧洲夹竹桃蛾(Syntomeidaepilais)；荷兰石竹小卷蛾(Playnota stultana)；杂食尺蠖(Sabulodes aegrotata)；大凤蝶(Papilio cresphontes)；桔带卷蛾(Argyrotaenia citrana)；梨小食心虫(Grapholitamolesta)；桃枝麦蛾(Anarsia lineatella)；松蝴蝶(Neophasia menapia)；美洲棉铃虫(Heliocoverpa zea)；红带卷蛾(Argyrotaenia velutinana)；红疣天社蛾(Schizuraconcinna)；Rindworm Complex(各种鳞翅目昆虫(Leps.))；鞍背刺蛾毛虫(Sibinestimulea)；鞍突毛虫(Heterocampa guttivitta)；盐泽灯蛾(Estigmene acrea)；草地螟(草螟属(Crambus)物种)；尺蠖(Ennomos subsignaria)；秋星尺蠖(Alsophilapometaria)；云杉色卷蛾(Choristoneura fumiferana)；黄褐天幕毛虫(各种枯叶蛾科)；菠萝褐灰蝶(Geyr)(Thecla basilides)；烟草天蛾(Manduca sexta)；烟草粉斑螟(Ephestiaelutella)；簇状苹果芽蛾(Platynota idaeusalis)；桃蚜蛾(Anarsia lineatella)；疆夜蛾(Peridroma saucia)；杂色卷叶蛾(Platynota flavedana)；黎豆夜蛾(Anticarsiagemmatalis)；胡桃毛虫(Datana integerrima)；结网毛虫(Hyphantria cunea)；西部栎柳毒蛾(Orgyia vetusta)；南方玉米螟(Diatraea crambidoides)；玉米穗虫；甘薯小象虫；胡椒茎象甲；桔根象甲；草莓根象甲；美核桃象甲；榛象甲；
稻水象甲；苜蓿叶象甲；车轴草叶象；茶枝小蠹虫；根象；甘蔗犀金龟；
咖啡果小蠹；一年生蓝草象甲(Listronotus maculicollis)；亚洲花园甲虫(Maladeracastanea)；欧洲金龟子(Rhizotroqus majalis)；绿花金龟(Cotinis nitida)；日本丽金龟(Popillia japonica)；五月甲虫或六月甲虫(六月鳃角金龟(Phyllophaga)物种)；北方独角仙(Cyclocephala borealis)；东方丽金龟(Anomala orientalis)；南方独角仙(Cyclocephala lurida)；谷象(象甲总科(Curculionoidea))；埃及伊蚊(Aedes aegypti)；玉米茎蛀褐夜蛾(Busseola fusca)；二化螟(Chilo suppressalis)；尖音库蚊(Culexpipiens)；致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)；玉米根虫(Diabrotica virgifera)；小蔗螟(Diatraea saccharalis)；棉铃虫(Helicoverpa armigera)；美洲棉铃虫(Helicoverpazea)；烟芽夜蛾(Heliothis virescens)；马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)；亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)；欧洲玉米螟(Ostrinia nubilalis)；棉红铃虫(Pectinophora gossypiella)；印度谷螟(Plodia interpunctella)；小菜蛾(Plutellaxylostella)；大豆尺夜蛾(Pseudoplusia includens)；甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)；草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)；棉叶虫(Spodoptera littoralis)；粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)；和榆黄莹叶甲(Xanthogaleruca luteola)。
102.一种使用根据权利要求1-99中任一项所述的组合来防治苏云金芽孢杆菌毒素抗性昆虫的方法，包括，提供至少一种CRIP和至少一种IA的组合；然后将所述组合施用到昆虫所在处。
103.根据权利要求102所述的方法，其中所述苏云金芽孢杆菌毒素抗性昆虫选自由以下项组成的组：埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟；尖音库蚊；致倦库蚊；玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；棉红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲。
104.一种对抗、防治或抑制害虫的方法，包括将杀虫有效量的根据权利要求1-99中任一项所述的组合施用到所述害虫所在处，或施用到易受所述害虫侵袭的植物或动物。
105.根据权利要求104所述的方法，其中所述害虫选自由以下项组成的组：葡萄蔓天蛾(天蛾幼虫)；苜蓿粉蝶；粉斑螟蛾；白条卷叶蛾；粘虫(灰翅夜蛾属物种，例如甜菜夜蛾、草地贪夜蛾、棉叶虫、美洲粘虫；朝鲜蓟羽蛾；杜鹃花毛虫；结草虫(常绿树蓑蛾)；香蕉蛾(木豹蛾)；香蕉弄蝶；黑头长翅卷蛾；加州槲蛾；春尺蠖；樱小食心虫；圹水螟；柑橘地老虎；苹果蠹蛾；蔓越莓果虫；卷心菜薄翅野螟；切根虫(夜蛾科物种，小地老虎)；冷杉合毒蛾；木薯天蛾(天蛾幼虫)；榆树尺蠖；欧洲葡萄蔓蛾；欧洲弄蝶；美国白蛾；蔷薇黄卷蛾；果树黄卷蛾、葡萄卷叶蛾；荷兰石竹小卷蛾；葡萄叶雕叶虫(仅为步行虫科)；苜蓿绿夜蛾；绿条纹枫虫；Gummosos-Batrachedra Comosae(Hodges)；舞毒蛾；铁杉尺蠖；天蛾幼虫(烟草天蛾属物种)；菜粉蝶；玉米天蚕蛾；贾克松色卷蛾；苹果浅褐卷叶蛾；甜瓜绢野螟；含羞草雕蛾；蔷薇斜条卷叶蛾；欧洲夹竹桃蛾；荷兰石竹小卷蛾；杂食尺蠖；大凤蝶；桔带卷蛾；梨小食心虫；桃枝麦蛾；松蝴蝶；美洲棉铃虫；红带卷蛾；红疣天社蛾；Rindworm Complex(各种鳞翅目昆虫)；鞍背刺蛾毛虫；鞍突毛虫；盐泽灯蛾；草地螟(草螟属物种)；尺蠖；秋星尺蠖；云杉色卷蛾；黄褐天幕毛虫(各种枯叶蛾科)；菠萝褐灰蝶(Geyr)；烟草天蛾；烟草粉斑螟；簇状苹果芽蛾；桃蚜蛾；疆夜蛾；杂色卷叶蛾；黎豆夜蛾；胡桃毛虫；结网毛虫；
西部栎柳毒蛾；南方玉米螟；玉米穗虫；甘薯小象虫；胡椒茎象甲；桔根象甲；草莓根象甲；美核桃象甲；榛象甲；稻水象甲；苜蓿叶象甲；车轴草叶象；茶枝小蠹虫；根象；甘蔗犀金龟；咖啡果小蠹；一年生蓝草象甲；亚洲花园甲虫；欧洲金龟子；绿花金龟；日本丽金龟；五月甲虫或六月甲虫(六月鳃角金龟物种)；北方独角仙；东方丽金龟；南方独角仙；
谷象(象甲总科)；埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟；尖音库蚊；致倦库蚊；玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；棉红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲。
106.根据权利要求105所述的方法，其中所述害虫选自由以下项组成的组：埃及伊蚊；玉米茎蛀褐夜蛾；二化螟；尖音库蚊；致倦库蚊；玉米根虫；小蔗螟；棉铃虫；美洲棉铃虫；烟芽夜蛾；马铃薯甲虫；亚洲玉米螟；欧洲玉米螟；棉红铃虫；印度谷螟；小菜蛾；大豆尺夜蛾；甜菜夜蛾；草地贪夜蛾；棉叶虫；粉纹夜蛾；和榆黄莹叶甲。
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