JP2023524083A - 殺虫剤の組み合わせ - Google Patents

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Abstract

新しい殺虫剤の組み合わせ、組成物、及びそれらを使用する方法が提供される。本発明は、システインリッチ殺虫ペプチド(CRIP)と、殺虫剤(IA)と、の組み合わせを対象とする。本発明は、昆虫を制御するための当該組み合わせ及び組成物の使用についても記載する。本明細書では、CRIPをコードする遺伝子、CRIPとIAとを含む組成物及び組み合わせ、並びにそれらを使用する害虫の制御に有用な方法を記載する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、2020年5月1日に出願された米国仮出願第63/019,219号の利益及び優先権を主張するものであり、その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
配列表
本出願は、2021年4月28日10:07PMに作成され、本明細書とともに電子的に出願された「225312-491452_ST25.txt」(1.41MB)と題された配列表は、その全体が参照により援用される。
害虫の制御及び/又は根絶のための、システインリッチ殺虫タンパク質(CRIP)、及び殺虫剤(IA)、例えば、化学物質、分子、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、毒素、有毒物質、毒、殺虫剤、農薬、有機化合物、無機化合物、原核生物又は真核生物(及び当該原核生物又は真核生物から生成される物質)の新しい殺虫剤の組み合わせが記載及び主張される。
多数の昆虫は、疾患の媒介生物(vector)である。Anopheles属の蚊は、ジカウイルス、チクングニアウイルス、及びTrypanosoma属の原虫によって引き起こされる疾患であるマラリアの主な媒介生物である。Aedes aegyptiは、黄熱病及びデング熱を引き起こすウイルスの主な媒介生物である。様々なタイプの脳炎の病因である他のウイルスもまた、Aedes spp.の蚊によって運ばれる。フィラリア症を引き起こす寄生性回虫であるWuchereria bancrofti及びBrugia malayiは、通常、Culex、Mansonia、及びAnopheles属の蚊によって広がる。
ホースフライ及びディアフライは、野兎病(Pasteurella tularensis)及び炭疽菌(Bacillus anthracis)の細菌病原体、並びに熱帯アフリカでロア症を引き起こす寄生性回虫(Loa loa)を伝播する可能性がある。
Hippelates属のEye gnatsは、イチゴ腫(Treponema pertenue)を引き起こすスピロヘータ病原体を運ぶことができ、結膜炎(はやり目)も広げる可能性がある。Glossina属のツェツェバエは、アフリカ睡眠病を引き起こす原虫病原体(Trypanosoma gambiense及びT.rhodesiense)を伝染させる。Phlebotomus属のサンドフライは、南アメリカでカリオン病(オロヨ熱(Oroyo fever))を引き起こす細菌(Bartonella bacilliformis)の媒介生物である。アジア及び北アフリカの一部では、それらは、スナバエ熱(パパタチ熱)を引き起こすウイルス病原体、並びにリーシュマニア症を引き起こす原虫病原体(Leishmania spp.)を伝播する。
したがって、食料のために我々が依存する作物を保存し、ヒト及び動物の健康を保護するために、効果的な殺虫剤処理が必要である。
本明細書では、殺虫剤(IA)及びシステインリッチ殺虫ペプチド(CRIP)の組み合わせを記載する。IAは、1つ以上の化学物質、分子、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、毒素、毒性物質、毒、殺虫剤、農薬、有機化合物、無機化合物、原核生物及び/若しくはそれ由来の産物(例えば、細菌毒素)、又は真核生物、及び/若しくはそれ由来の産物(例えば、真菌毒素)である。IAを組み合わせて、単離に使用する任意のIAの相加効果よりも大きい殺虫効果を提供することができる。
CRIPは、一部の実施形態では、ジスルフィド結合を形成することができるシステイン残基を有するペプチド、ポリペプチド、及び/又はタンパク質であり、これらのジスルフィド結合は、多種多様な無関係なタンパク質ファミリーで観察される足場モチーフを生成する。CRIPファミリーに含まれるペプチドの例は、インヒビターシスチンノット(ICK)ペプチドである。ICKペプチドには、殺虫活性を有する多くの分子が含まれる。このようなICKペプチドは、多くの場合、天然に存在する生物学的標的種(通常、ある種の昆虫又はクモ類)に対して毒性がある。多くの場合、ICKペプチドは、サソリ又はクモの毒液などの節足動物起源を有し得る。
本明細書では、IA及びCRIPの新規の殺虫剤の組み合わせを記載する。例えば、本発明は、とりわけ、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含む殺虫効果のある組み合わせ、及びそれらを使用して、食料のために我々が依存する作物を保存し、ヒト及び動物の健康を保護する方法を記載する。
米国仮出願第63/019,219号
本発明は、単独で使用される任意のIA又はCRIPの相加的な殺虫効果よりも大きい殺虫効果を提供するように、CRIP及びIAを組み合わせる方法を記載する。本開示は、殺虫剤耐性昆虫であっても、低用量であっても、昆虫を死滅させ制御するためのCRIP及びIAの組み合わせを作製及び使用する方法を記載する。理論に拘束されることなく、CRIP及びIAに対する我々の理解は、当業者に教示し、植物を保護し、昆虫を制御するための新規の方法、組成物、化合物(タンパク質及びペプチド)、並びに手順を作成することを可能にする。
本開示は、システインリッチ殺虫ペプチド(CRIP)と、殺虫剤(IA)と、を含む組み合わせを記載する。
加えて、本開示は、システインリッチ殺虫ペプチド(CRIP)と、殺虫剤(IA)と、を含む組み合わせを記載し、IAは、細菌毒素、真菌毒素、レクチン、Azadirachta indica化合物、ホウ素化合物、ウイルス、又はそれらの組み合わせであり、CRIPは、U1-アガトキシン-Ta1bペプチド、U1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)、イソギンチャク毒素、Av3バリアントポリペプチド(AVP)、Phoneutria毒素、又はアトラコトキシン(Atracotoxin)(ACTX)である。
更に、本開示は、システインリッチ殺虫ペプチド(CRIP)と殺虫剤(IA)とを含む組み合わせを含み、賦形剤を更に含む組成物を記載する。
更に、本開示は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、を含む組み合わせを記載する。
更に、本開示は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、を含む組み合わせを記載する。
更に、本開示は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3バリアントポリペプチド(AVP)と、を含む組み合わせを記載する。
更に、本開示は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、を含む組み合わせを記載する。
更に、本開示は、Beauveria bassiana株ANT-03胞子と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含む組み合わせを記載する。
更に、本開示は、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176株から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含む組み合わせを記載する。
更に、本開示は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含む組み合わせを記載する。
更に、本開示は、Bacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含む組み合わせを記載する。
更に、本開示は、Photorhabdus luminescens毒素と、ACTXと、を含む組み合わせを記載し、Photorhabdus luminescens毒素が、TcaA(配列番号616)、TcaB(配列番号617)、TcaC(配列番号618)、及びTcaZ(配列番号619)を含むPhotorhabdus luminescens毒素複合体(Tca)であり、ACTXペプチドが、U+2-ACTX-Hv1a毒素(配列番号61)である。
更に、本開示は、Galanthus nivalis凝集素(GNA)と、ACTXと、を含む組み合わせを記載し、GNAは、配列番号35に示されるアミノ酸配列を有し、ACTXペプチドが、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素である。
更に、本開示は、アザジラクチンと、ACTXと、を含む組み合わせを記載し、アザジラクチンが、化学式:C354416を有し、ACTXが、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素である。
更に、本開示は、ホウ酸化合物と、ACTXと、を含む組み合わせを記載し、ホウ酸化合物が、HBOの化学式を有し、ACTXペプチドが、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素である。
更に、本開示は、Cydia pomonellaグラニュロウイルス(granulovirus)(CpGV)と、ACTXと、を含む組み合わせを記載し、CpGVが、Cydia pomonellaグラニュロウイルス単離菌V22ウイルスであり、ACTXペプチドが、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素である。
更に、本開示は、システインリッチ殺虫ペプチド(CRIP)と、殺虫剤(IA)と、を含む組み合わせを使用して、昆虫を制御する方法を記載し、当該方法が、少なくとも1つのCRIP及び少なくとも1つのIAの組み合わせを提供することと、システインリッチ殺虫ペプチド(CRIP)と殺虫剤(IA)とを含む組み合わせを昆虫の部位に適用することと、を含む。
更に、本開示は、システインリッチ殺虫ペプチド(CRIP)と、殺虫剤(IA)と、を含む組み合わせを使用して、Bacillus thuringiensis毒素耐性昆虫を制御する方法を記載し、少なくとも1つのCRIP及び少なくとも1つのIAの組み合わせを提供することと、次いで、当該組み合わせを昆虫の部位に適用することと、を含む。
更に、本開示は、駆除、制御、又は抑制する方法を記載し、農薬有効量の、システインリッチ殺虫ペプチド(CRIP)と殺虫剤(IA)とを含む組み合わせを、害虫の部位に、又は害虫による攻撃を受けやすい植物若しくは動物に適用することを含む。
(1)Btiを伴うU+2-ACTX-Hv1a、(2)Bti毒素単独、(3)U+2-ACTX-Hv1a単独、及び(4)対照(水)を使用した飼料混入アッセイ(diet incorporation assay)後のAedes aegypti(蚊)幼虫の24時間の死亡率を示すグラフを示す。 Γ-CNTX-Pn1aと組み合わせたBacillus thuringiensis var.kurstaki毒素(Btk)を用いた葉面噴霧(foliar spray)アッセイ後の、Lepidopteran種ビートアーミーワーム(beet armyworm)(ヨトウムシ)(Spodoptera exigua)の3日間の死亡率を示すグラフを示す。ここで、処理は、(1)Γ-CNTX-Pn1a単独、(2)Btk毒素単独、(3)Γ-CNTX-Pn1a及びBtk毒素の組み合わせ、又は(4)対照(0.125%のVintre、界面活性剤)であった。 BtkとAv3-バリアントポリペプチド(AVP)とを組み合わせた葉面噴霧アッセイ後の、Lepidopteran種、ビートアーミーワーム(Spodoptera exigua)の3日間の死亡率を示すグラフを示す。ここで、(1)AVP単独、(2)Btk毒素単独、(3)AVP及びBtk毒素の両方の組み合わせ、又は(4)対照(0.125%のVintre、界面活性剤)を試験した。ここで試験されたAVPは、AVPbであった。 0、20、40、60、180、及び1260分後の、模擬Lepidopteran腸内環境であるHelicoverpa zea腸抽出物(HGE)におけるWT-Ta1b分解を評価するクロマトグラムを示す。ボックスは、主ピーク及び副ピークを示し、したがって、WT-Ta1bの分解を示す。ネストされた挿入図は、クロマトグラムの拡大図/縮小図を示す。ボックスは、タンパク質分解事象を示すピークを強調しており、2つの肩の存在によって証明され、主ピークの右側にあるより小さい「肩」は、部分的なタンパク質分解事象を実証する。 0、20、40、60、180、及び1260分後の、模擬Lepidopteran腸内環境であるHelicoverpa zea腸抽出物(HGE)におけるTVP-R9Q分解を評価するクロマトグラムを示す。ボックスは、単一ピークの存在を示し、したがって、TVP-R9Qの安定性を示す。ネストされた挿入図は、クロマトグラムの拡大図/縮小図を示す。ここで、単一の主ピークの存在(ボックスで示されている)は、TVP-R9Qペプチドの安定性を示す。 Lepidopteran種Helicoverpa zea(コーンイアワーム(corn earworm)(オオタバコガ))に対してWT-Ta1b、Btk毒素、及びそれらの組み合わせを試験した場合の落葉アッセイの結果を示すグラフを示す。処理は以下の通りであった:(1)WT-Ta1b単独、(2)Btk毒素単独、(3)WT-Ta1b及びBtk毒素の両方の組み合わせ、又は(4)対照(0.125%のVintre、界面活性剤)。ここで、Btk毒素は、「Btk」として示されている。 Lepidopteran種Helicoverpa zea(コーンイアワーム)に対してTVP-R9Q、Btk毒素、及びそれらの組み合わせを試験した場合の落葉アッセイの結果を示すグラフを示す。処理は以下の通りであった:(1)TVP-R9Q単独、(2)Btk毒素単独、(3)TVP-R9Q及びBtk毒素の両方の組み合わせ、又は(4)対照(0.125%のVintre、界面活性剤)。ここで、Btk毒素は、「Btk」として示されている。 Lepidopteran種Helicoverpa zea(コーンイアワーム)に対してWT-Ta1b、Btk毒素、及びそれらの組み合わせを試験した場合の死亡率アッセイの結果を示すグラフを示す。処理は以下の通りであった:(1)WT-Ta1b単独、(2)Btk毒素単独、(3)WT-Ta1b及びBtk毒素の両方の組み合わせ、又は(4)対照(0.125%のVintre、界面活性剤)。ここで、Btk毒素は、「Btk」として示されている。 Lepidopteran種Helicoverpa zea(コーンイアワーム)に対してTVP-R9Q、Btk毒素、及びそれらの組み合わせを試験した場合の死亡率アッセイの結果を示すグラフを示す。処理は以下の通りであった:(1)TVP-R9Q単独、(2)Btk毒素単独、(3)TVP-R9Q及びBtk毒素の両方の組み合わせ、又は(4)対照(0.125%のVintre、界面活性剤)。ここで、Btk毒素は、「Btk」として示されている。 (1)U+2-ACTX-Hv1a単独、(2)Btt毒素単独、(3)U+2-ACTX-Hv1a及びBtt毒素の両方の組み合わせ、又は(4)未処理対照(水)を用いた飼料混入アッセイ後の、Coleoptera種ダークリングビートル(darkling beetle)(ゴミムシダマシ)(Alphitobius diaperinus)の4日間の死亡率を示すグラフを示す。 (1)U+2-ACTX-Hv1a単独、(2)Btt毒素単独、(3)U+2-ACTX-Hv1a及びBtt毒素の両方の組み合わせ、又は(4)未処理対照(水)を噴霧した場合の、コロラドポテトビートル(Colorado potato beetle)(コロラドハムシ)(Leptinotarsa decemlineata)の4日間の死亡率を示すグラフを示す。 以下で処理したコーンイアワームの幼虫における4日目の死亡率を示すグラフを示す:(a)水、(b)Photorhabdus luminescens毒素複合体抽出物単独(4.75% v/v)、(c)10mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(1% w/v)、及び(d)Photorhabdus luminescens毒素複合体抽出物(4.75% w/v)と10mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(1% w/v)。ここで、% w/vは、組成物の総体積のパーセントw/vであり、残りは水である。 (a)0mg/mLのGNA(0% w/v)と0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)(対照)、(b)2.5mg/mLのGNA(0.25% w/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)、(c)0mg/mLのGNA(0% w/v)、5mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.5% w/v)、及び(d)2.5mg/mLのGNA(0.25% w/v)、5mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.5% w/v)による処理後3日目のコーンイアワーム孵化幼虫(neonate)における死亡率を示すグラフを示す。ここで、% w/vは、組成物の総体積のパーセントw/vであり、残りは水である。比例死亡率(proportional mortality)とは、実験の過程で死滅した個々の昆虫の割合(すなわち、個体の総数に対する死んだ個体の数)を指す。 (a)キチナーゼ 0μL/L(0% w/v)、U+2-ACTX-Hv1a 0mg/mL(0% w/v)、スクロース(10% w/v)、(b)キチナーゼ 100μL/L(0.01% w/v)、U+2-ACTX-Hv1a 0mg/mL(0% w/v)、スクロース(10% w/v)、(c)キチナーゼ 0μL/L(0% w/v)、U+2-ACTX-Hv1a 5mg/mL(0.5% w/v)、スクロース(10% w/v)、及び(d)キチナーゼ 100μL/L(0.01% w/v)、U+2-ACTX-Hv1a 5mg/mL(0.5% w/v)、スクロース(10% w/v)による処理後3日目のフォールアーミーワーム(Fall armyworm)(ツマジロクサヨトウ)(Spodoptera frugiperda)幼虫の死亡率を示すグラフを示す。ここで、% w/vは、組成物の総体積のパーセントw/vであり、残りは水である。 昆虫成長制御剤であるアザジラクチンの化学構造を示す。 (a)0μL/Lのアザジラクチン(0% v/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)(対照)、(b)80μL/Lのアザジラクチン(0.008% v/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)、(c)0μL/Lのアザジラクチン(0% v/v)、10mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(1% w/v)、及び(d)80μL/Lのアザジラクチン(0.008% v/v)、10mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(1% w/v)による処理後3日目のコーンイアワーム(Helicoverpa zea)の死亡率を示すグラフを示す。ここで、% w/vは、組成物の総体積のパーセントw/vであり、残りは水である。 以下による処理後3日目のレッサーミールワーム(Lesser mealworm)(ガイマイゴミムシダマシ)(Alphitobius diaperinus)孵化幼虫の死亡率を示すグラフを示す:(a)0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)、0mg/mLのホウ酸(0% w/v)(対照)、(b)0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)、2.5mg/mLのホウ酸(0.25% w/v)、(c)1mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.1% w/v)、0mg/mLのホウ酸(0% w/v)、及び(d)1mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.1% w/v)、2.5mg/mLのホウ酸(0.25% w/v)。ここで、% w/vは、組成物の総体積のパーセントw/vであり、残りは水である。 以下による処理後7日目のコドリングモス(Codling Moths)(コドリンガ)(Cydia pomonella)孵化幼虫における死亡率を示すグラフを示す:(a)0mg/mLのBeauveria bassiana毒素(0% w/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)(対照)、(b)1.2mg/mLのBeauveria bassiana毒素(0.12% w/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)、(c)0mg/mLのBeauveria bassiana毒素、2mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.2% w/v)、及び(d)1.2mg/mLのBeauveria bassiana毒素(0.12% w/v)、2mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.2% w/v)。ここで、% w/vは、組成物の総体積のパーセントw/vであり、残りは水である。 (a)0μL/LのCpGV(0% w/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)(対照)、(b)58.5μL/LのCpGV(0.00585% w/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)、(c)0μL/LのCpGV(0% w/v)、2mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.2% w/v)、及び(d)58.5μL/LのCpGV(0.00585% w/v)、2mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.2% w/v)(ここで、% w/vは、組成物の総体積のパーセントw/vであり、残りは水である)による処理後2日目の孵化幼虫コドリングモス(Cydia pomonella)における死亡率を示すグラフを示す。 NovaluronとU+2-ACTX-Hv1aの飼料混入アッセイの結果を示し、3日後のコーンイアワーム(Helicoverpa zea)における死亡率を評価するグラフを示す。ここに示されるように、コーンイアワーム(Helicoverpa zea)飼料混入アッセイにおいて、NovaluronとU+2-ACTX-Hv1aを組み合わせた場合、相加効果よりも大きい効果を示す証拠はなかった。ここで、「U+2」は、U+2-ACTX-Hv1aを指す。Novaluronの濃度は以下の通りであった:(a)80μL/LのNovaluron(0.008% w/v)、(b)8μL/LのNovaluron(0.0008% w/v)、(c)0.8μL/LのNovaluron(0.00008% w/v)、及び(d)0μL/LのNovaluron(0% w/v)。10pptのスピア(Spear)は、1mg/mL(1% w/v)のU+2-ACTX-Hv1aに対応する。 ナノ粒子及びU+2-ACTX-Hv1aの飼料混入アッセイの結果を示し、3日後のコーンイアワーム(Helicoverpa zea)における死亡率を評価するグラフを示す。ここに示されるように、コーンイアワーム(Helicoverpa zea)飼料混入アッセイにおいて、ナノ粒子とU+2-ACTX-Hv1aを組み合わせた場合、相加効果よりも大きい効果を示す証拠はなかった。ここで、「スピア(Spear)」は、U+2-ACTX-Hv1aを指す。ナノ粒子の濃度は以下の通りであった:(a)50nmのアミノ化シリカ(2700ppm)、(b)50nmのシリカ(2575ppm)、(c)20nmのシリカ(1177ppm)、及び(d)10nmのシリカ(12500ppm)。ここで、「U+2」は、5pptのU+2-ACTX-Hv1a、すなわち、0.5mg/mL(組成物の総体積の0.5% w/v)のU+2-ACTX-Hv1aに対応する。比例死亡率=死んだ昆虫の数を昆虫の総数で割ったもの。「UTC」とは、未処理対照(水)を意味する。 3日後のコーンイアワーム(Helicoverpa zea)に対する、クライオライト及びU+2-ACTX-Hv1aの飼料混入アッセイの死亡率用量応答を示すグラフを示す。ここに示されるように、コーンイアワーム(Helicoverpa zea)飼料混入アッセイにおいて、クライオライトとU+2-ACTX-Hv1aを組み合わせた場合、相加効果よりも大きい効果を示す証拠はなかった。ここで、「U+2」は、U+2-ACTX-Hv1aを指す。ナノ粒子の濃度は以下の通りであった:(a)10000ppm、(b)2000ppm、(c)400ppm、及び(d)0ppm。ここで、10pptの「U+2」(すなわち、U+2-ACTX-Hv1a)は、U+2-ACTX-Hv1aの1mg/mL(組成物の総体積の1% w/v)に対応する。比例死亡率=死んだ昆虫の数を昆虫の総数で割ったもの。
定義
「5’末端」及び「3’末端」は、方向性、すなわち、ヌクレオチドポリマー(例えば、DNA)の末端から末端への配向を指す。ポリヌクレオチドの5’末端は、5位炭素を有するポリヌクレオチドの末端である。
「5’及び3’ホモロジーアーム」又は「5’及び3’アーム」又は「左右のアーム」は、宿主生物の染色体遺伝子座の遺伝子修飾を成功させるために、宿主生物における目的の標的ゲノム配列及び/又は内因性遺伝子と相同に組換える、ベクター及び/又は標的化ベクター中のポリヌクレオチド配列を指す。
「Γ-CNTX-Pn1a」又は「γ-CNTX-Pn1a」又は「ガンマ-CNTX-Pn1a」又は「ガンマ」は、ブラジル武装グモPhoneutria nigriventerに由来する殺虫ニューロトキシンを指す。Γ-CNTX-Pn1aは、N-メチル-D-アスパラギン酸(NMDA)サブタイプのイオンチャネル型グルタミン酸受容体(GRIN)、及びナトリウムチャネルを標的とする。
「ω/κ-HXTX-Hv1a」又は「オメガ/カッパ-HXTX-Hv1a」は、オーストラリアブルーマウンテンファネルウェブスパイダー(Australian Blue Mountain Funnel-web Spider)Hadronyche versutaに由来する殺虫毒素を指す。ω/κ-HXTX-Hv1aは、ACTXペプチドの一種、すなわち、Atracinae科に属するクモから単離された殺虫ICKペプチドのファミリーである。ω/κ-HXTX-Hv1aは、ニコチン性アセチルコリン受容体の正のアロステリック調節因子であり、また、昆虫電位依存性Ca2+チャネル及び電位依存性Kチャネルに対する二重アンタゴニストであり得る。Chambers et al.,Insecticidal spider toxins are high affinity positive allosteric modulators of the nicotinic acetylcholine receptor.FEBS Lett.2019 Jun;593(12):1336-1350、及びWindley et al.,Lethal effects of an insecticidal spider venom peptide involve positive allosteric modulation of insect nicotinic acetylcholine receptors.Neuropharmacology.2017 Dec;127:224-242を参照されたい(これらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に援用される)。
「ACTX」又は「ACTXペプチド」又は「アトラコトキシン」は、Atracinae科に属するクモから単離された殺虫ICKペプチドのファミリーを指す。そのようなクモの1つは、オーストラリアブルーマウンテンファネルウェブスパイダー(Australian Blue Mountains Funnel-web Spider)として知られており、これはHadronyche versutaという学名を有する。この種由来のACTXペプチドの2つの例は、オメガ及びUペプチドである。
「ADN1プロモーター」は、Schizosaccharomyces pombe接着欠陥タンパク質1遺伝子に由来するプロモーター配列からなるDNAセグメントを指す。
「アルファ-MFシグナル」又は「αMF分泌シグナル」は、新生組換えポリペプチドを分泌経路に導くタンパク質を指す。
「農業的に許容される担体」は、農薬製剤技術において通常使用される全てのアジュバント、不活性成分、分散剤、界面活性剤、粘着剤、結合剤などを包含し、これらは、農薬製剤の当業者によく知られている。
「農業的に許容される塩」は、本明細書で「薬学的に許容される塩」という用語と同義的に使用される。
「アグロインフェクション」とは、Agrobacteria tumefaciens又はAgrobacteria rhizogenesを使用することによって、DNAが植物細胞に導入される植物形質転換方法を意味する。
「整列」は、2つ以上の配列(例えば、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質配列)の互いの関係を決定する目的で比較する方法を指す。整列は、典型的には、様々なアルゴリズムを適用するコンピュータプログラムによって実行されるが、しかしながら、手動で整列を実行することも可能である。整列プログラムは、典型的には、配列の潜在的な整列を反復し、置換テーブルを使用して整列をスコアリングし、様々な戦略を用いて、潜在的な最適整列スコアに到達する。一般に使用される整列アルゴリズムとしては、CLUSTALW(Thompson J.D.,Higgins D.G.,Gibson T.J.,CLUSTAL W:improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting,position-specific gap penalties and weight matrix choice,Nucleic Acids Research 22:4673-4680,1994を参照)、CLUSTALV(Larkin M.A.,et al.,CLUSTALW2,ClustalW and ClustalX version 2,Bioinformatics 23(21):2947-2948,2007を参照)、Mafft、Kalign、ProbCons、及びT-Coffee(Notredame et al.,T-Coffee:A novel method for multiple sequence alignments,Journal of Molecular Biology 302:205-217,2000を参照)が挙げられるが、これらに限定されない。前述のアルゴリズムのうちの1つ以上を実装する例示的なプログラムとしては、DNAStarからのMegAlign(DNAStar,Inc.3801 Regent St.Madison,Wis.53705)、MUSCLE、T-Coffee、CLUSTALX、CLUSTALV、JalView、Phylip、及びAccelrysからのDiscovery Studio(Accelrys,Inc.,10188 Telesis Ct,Suite 100,San Diego,Calif.92121)が含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、整列は、2つの配列間の類似性を最大化するために、比較される配列の一方又は両方に「位相シフト」及び/又は「ギャップ」を導入することになり、スコアリングは、整列した配列の関連性を定量的に発現するプロセスを指す。
「アルファ-MFシグナル」又は「αMF分泌シグナル」は、新生組換えポリペプチドを分泌経路に導くタンパク質を指す。
「クモ類」は、節足動物のクラスを指す。例えば、一部の実施形態では、クモ類は、クモ、サソリ、マダニ、ダニ、ザトウムシ、又はヒヨケムシを意味することができる。
「Av2」又は「ATX-II」又は「ニューロトキシン2」又は「Anemonia viridis毒素2」又は「δ-AITX-Avd1c」は、Anemonia sulcataの毒液から単離された毒素を指す。Av2ポリペプチドの一例は、配列番号588のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。
「Av3」は、電位依存性ナトリウムチャネルのαサブユニットIII上の受容体部位3を標的にすることができる、イソギンチャクAnemonia viridisから単離されたポリペプチドを指す。Av3ポリペプチドの一例は、配列番号44のアミノ酸配列を有するAv3ポリペプチド(NCBI受託番号P01535.1)である。
「AVP」又は「Av3バリアントポリペプチド」とは、天然に存在しないポリペプチド及び/又はポリヌクレオチド配列を産生するように改変されたバリアントAv3ポリヌクレオチド配列によってコードされるAv3ポリペプチド配列及び/又はポリペプチドを指す。
「BAAS」は、オオムギアルファアミラーゼシグナルペプチドを意味し、ERSPの一例である。BAASの一例は、配列番号37のアミノ酸配列を有するBAAS(NCBI受託番号AAA32925.1)である。
「バイオマス」は、任意の測定された植物性産物を指す。
「バイナリベクター」又は「バイナリ発現ベクター」とは、E.coli株及びアグロバクテリウム株の両方でそれ自体を複製することができる発現ベクターを意味する。また、ベクターは、アグロバクテリウムによってコピーされ、植物細胞内に送達されるように、病原性遺伝子によって認識される、左右の境界配列によって括弧付けされたDNA(しばしばt-DNAと称される)の領域を含有する。
「bp」又は「塩基対」は、互いに結合した2つの化学塩基を含む分子を指す。例えば、DNA分子は、2つの螺旋状の鎖からなり、各鎖は、交互のデオキシリボース及びリン酸基から作られた骨格を有する。各デオキシリボースには、4つの塩基、すなわち、アデニン(A)、シトシン(C)、グアニン(G)、又はチミン(T)のうちの1つが結合し、アデニンは、チミンと塩基対を形成し、シトシンは、グアニンと塩基対を形成する。
「Bt毒素」とは、Bacillus thuringiensis(Bt)-グラム陽性胞子形成細菌、例えば、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、及びBacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)によって産生される発酵固形物、胞子、及び毒素を指す。胞子形成中、Bacillus thuringiensisは、殺虫作用を有するδ-エンドトキシンと呼ばれる結晶タンパク質(すなわち、タンパク質性封入体)を産生する。一部の実施形態では、Bt毒素は、結晶(Cry)タンパク質、細胞溶解性(Cyt)タンパク質、植物性殺虫タンパク質(Vips)、又はBacillus thuringiensisによって産生される他の毒素であり得る。
「Bt耐性の」又は「Bt耐性」又は「Bt耐性昆虫」又は「Bacillus thuringiensis毒素耐性昆虫」は、害虫種に対して使用された場合に予想されるレベルの制御を達成するための産物(例えば、Bt)の度重なる失敗を反映する、害虫集団の感受性の遺伝的変化を指す。
「C末端」は、ポリペプチドの末端に位置する遊離カルボキシル基(すなわち、-COOH)を指す。
「cDNA」又は「コピーDNA」又は「相補的DNA」は、RNAの分子に相補的である分子を指す。一部の実施形態では、cDNAは、一本鎖又は二本鎖のいずれかであり得る。一部の実施形態では、cDNAは、逆転写酵素によって触媒される反応において一本鎖RNA鋳型から合成された二本鎖DNAであり得る。更に他の実施形態では、「cDNA」とは、天然の成熟mRNA種において見出される配列要素の配置を共有する全ての核酸を指し、配列要素は、エキソン並びに3’及び5’非コード領域である。通常、mRNA種は、連続したエキソンを有し、介在するイントロンは、タンパク質をコードする連続したオープンリーディングフレームを生成するために、核内RNAスプライシングによって除去される。一部の実施形態では、「cDNA」は、mRNA鋳型に相補的であり、それに由来するDNAを指す。
「CEW」は、コーンイアワーム(Corn earworm)(オオタバコガ)を指す。
「切断可能なリンカー」については、リンカーを参照されたい。
「クローニング」とは、ある供給源からのDNAセグメント(例えば、通常は目的の遺伝子、例えば、tvp)の挿入、及びそれを別の供給源からのDNAセグメント(例えば、通常はベクター、例えば、プラスミド)と組換えて、通常は組換えDNAを細菌若しくは酵母宿主に形質転換することによって、組換えられたDNA、又は「組換えDNA」を複製するように指示することに関するプロセス及び/又は方法を指す。
「キメラ遺伝子」とは、1つ以上のコード配列の一部に由来する遺伝子をコードして、新しい遺伝子を産生するDNA配列を意味する。
「コード配列」又は「CDS」は、適切な調節配列の制御下に置かれ、かつ必要な転写及び/又は翻訳分子因子の存在下に置かれた場合に、転写(例えば、DNAの場合)又は翻訳(例えば、mRNAの場合)されてペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質になり得る、ポリヌクレオチド又は核酸配列を指す。コード配列の境界は、5’(アミノ)末端の翻訳開始コドン及び3’(カルボキシ)末端の翻訳終止コドンによって決定される。転写終結配列は、通常、コード配列の3’側に位置するであろう。一部の実施形態では、コード配列は、非翻訳領域によって5’末端及び/又は3’末端に隣接され得る。一部の実施形態では、コード配列を使用して、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質産物を産生することができる。一部の実施形態では、コード配列は、別のコード配列又は局在化シグナル(例えば、核局在化シグナル)に融合されても、融合されなくてもよい。一部の実施形態では、コード配列は、ベクター又は発現構築物にクローニングされてもよく、ゲノムに組み込まれてもよく、又はDNA断片として存在してもよい。
「コドン最適化」は、1つ以上の内因性、天然、及び/又は野生型コドンが、最終的には依然として同じアミノ酸をコードするが、対応する宿主において好ましいコドンで置き換えられる遺伝子の産生を指す。
「組み合わせ」とは、2つ以上のアイテムの間の任意の関連付けを指す。関連付けは、空間的、時間的であり得、かつ/又は共通の目的のための2つ以上のアイテムの使用を指すことができる。例えば、組み合わせは、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、CRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせ、及び(2)本明細書に記載される1つ以上の殺虫剤(IA)、の任意の時空間的会合、混合物、又は順列であり得、(1)及び(2)は、害虫である昆虫が、死ぬ、その動きを停止若しくは遅延させる、摂食を停止若しくは遅延させる、その成長を停止若しくは遅延させる、混乱する(例えば、ナビゲーション、食べ物の位置決定、睡眠行動、及び/若しくは交配に関して)、蛹化に失敗する、繁殖を妨げる、かつ/又は昆虫が子孫を産むことを妨げる、かつ/若しくは昆虫が稔性の子孫を産むことを妨げるように、害虫である昆虫を制御又は駆除するという共通の目的のために使用される。
文脈が別途明確でない限り、「組み合わせ」という用語は、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせを、(2)1つ以上の殺虫剤(IA)とともに、任意の順序で、同時に、別々に、又は順次投与することを含み得る。
一部の実施形態では、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、CRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせ、及び(2)1つ以上の殺虫剤(IA)は、害虫、又は害虫が曝露される部位、又は害虫から保護される部位(例えば、植物)が、(1)及び(2)の両方への同時曝露で処理される場合は、「組み合わせ」として、又は「組み合わせで」投与されると見なされることが理解されるであろう。一部の実施形態では、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、CRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせ、及び(2)1つ以上の殺虫剤(IA)の各々は、順次投与され得るか、又は異なるスケジュールに従って投与され得、異なる薬剤の個々の用量は、同時に、又は同じ組成物で投与される必要はない。むしろ、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、CRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)1つ以上の殺虫剤(IA)との両方が、依然として農薬的に有効である(すなわち、殺虫活性を有する)限り、それらは、「組み合わせて」投与されると見なされる。
一部の実施形態では、「組み合わせ」は、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせを、(2)1つ以上の殺虫剤(IA)と、同時に投与することを指す。
一部の実施形態では、「組み合わせ」は、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせを、(2)1つ以上の殺虫剤(IA)と、別個に投与することを指す。
更に他の実施形態では、「組み合わせ」は、(1)1つ以上のCRIP若しくはそれらの薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはそれらの薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせを、(2)1つ以上の殺虫剤(IA)と、任意の順序で連続投与することを指す。
本発明の一部の実施形態では、すなわち、組み合わせの投与が順次又は別々である場合、第2の成分を投与する際の遅延は、全体的な組み合わせ(すなわち、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)1つ以上の殺虫剤(IA)との組み合わせ)の有益な効果を失うようであってはならない。2つ以上の成分の組み合わせが別々に又は順次投与される場合、各成分の投薬レジメンは、他の成分とは異なり、他の成分とは無関係であり得ることが理解されるであろう。
一部の実施形態では、1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせは、1つ以上の殺虫剤(IA)と同じ日に投与され得る。他の実施形態では、1つ以上のCRIP若しくはそれらの薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはそれらの薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせは、1つ以上の殺虫剤(IA)と同じ週に、又は同じ月に投与され得る。
一部の実施形態では、組み合わせは、「混合物」であり得る。本明細書で使用される場合、「混合物」は、2つ以上の薬剤の組み合わせを指し、例えば、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせが、(2)1つ以上の殺虫剤(IA)と、互いに物理的及び/又は化学的に接触している。
「相補的」とは、当業者に理解されるように、2つのポリヌクレオチドの相互作用表面のトポロジー的な適合性又は互いの一致を指す。したがって、2つの配列は、互いにハイブリダイズして、安定した逆平行二本鎖核酸構造を形成することができる場合、互いに「相補的である」。第1のポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、第2のポリヌクレオチドのポリヌクレオチド結合パートナーのヌクレオチド配列と実質的に同一である場合、又は第1のポリヌクレオチドが、厳密なハイブリダイズ条件下で第2のポリヌクレオチドにハイブリダイズすることができる場合、第1のポリヌクレオチドは、第2のポリヌクレオチドに相補的である。したがって、配列が5’-TATAC-3’であるポリヌクレオチドは、配列が5’-GTATA-3’であるポリヌクレオチドに相補的である。
「条件培地」とは、細胞によって使用され、かつ細胞由来物質が濃縮されているが細胞を含まない、細胞培養培地を意味する。
「イモガイ(cone shell)」又は「コーンスネイル(cone snail)」又は「コーン(cone)」は、捕食性海洋腹足類のイモガイ属に属する生物を指す。例えば、一部の実施形態では、イモガイは、以下の種のうちの1つであり得る:Conus amadis、Conus catus、Conus ermineus、Conus geographus、Conus gloriamaris、Conus kinoshitai、Conus magus、Conus marmoreus、Conus purpurascens、Conus stercusmuscarum、Conus striatus、Conus textile、又はConus tulipa。
「コノトキシン」は、イモガイから単離された毒素を指し、ニューロンのコミュニケーションを妨げることによって作用する。例えば、一部の実施形態では、コノトキシンは、α-、ω-、μ-、δ-、又はκ-コノトキシンであり得る。簡潔に、α-コノトキシン(及びαA-及びφ-コノトキシン)は、ニコチン性リガンド依存性チャネルを標的とし、ω-コノトキシンは、電位依存性カルシウムチャネルを標的とし、μ-コノトキシンは、電位依存性ナトリウムチャネルを標的とし、δ-コノトキシンは、電位依存性ナトリウムチャネルを標的とし、κ-コノトキシンは、電位依存性カリウムチャネルを標的とする。
「コピー数」は、宿主細胞内にいつでも存在する、ベクター、発現カセット、増幅ユニット、遺伝子、又は実際には任意の定義されたヌクレオチド配列の同一のコピーの数を指す。例えば、一部の実施形態では、遺伝子又は別の定義された染色体ヌクレオチド配列は、染色体上に1つ、2つ、又はそれ以上のコピーで存在することができる。自律複製ベクターは、1つの宿主細胞当たり1つ又は数百のコピーで存在することができる。
「CRIP」は、システインリッチ殺虫ペプチドを指す。CRIPは、システイン残基に富むペプチドであり、一部の実施形態では、かかるシステイン残基間にジスルフィド結合を形成するように動作可能である。一部の実施形態では、CRIPは、少なくとも10のアミノ酸を有するタンパク質又はペプチドのうち、少なくとも4つ、時には6つ、時には8つのシステインアミノ酸を含有し、システインは、2つ、3つ、又は4つのジスルフィド結合を形成する。一部の実施形態では、ジスルフィド結合は、殺虫ペプチドのフォールディング、三次元構造、及び活性に寄与する。システイン-システインジスルフィド結合、及びそれらが形成する三次元構造は、これらの殺虫ペプチドの殺虫性質において重要な役割を果たす。一部の実施形態では、CRIPは、インヒビターシスチンノット(ICK)モチーフを含んでいても、含んでいなくてもよい。例えば、一部の実施形態では、ICKモチーフを有するCRIPは、クモ由来のACTXペプチドであってもよく、他の実施形態では、ICKモチーフを有しないCRIP、すなわち、非ICK CRIPは、イソギンチャクから単離されたAv2及びAv3のようなペプチドであってもよい。非ICK CRIPは、2~4個のジスルフィド結合を形成する4~8個のシステインを有することができる。これらのシステイン-システインジスルフィド結合が安定化された毒性ペプチド(CRIP)は、環境に曝露された場合、顕著な安定性を有することができる。多くのCRIPは、クモ、サソリ、ヘビ、及び海貝、及びイソギンチャクなどの有毒動物から単離されており、それらは、昆虫に対して毒性がある。
「CRIP構築物」は、動作可能に連結されたポリペプチドセグメント(例えば、CRIP-殺虫タンパク質)のペプチド、ポリペプチド、及び/又はモチーフの三次元配置/配向を指す。例えば、CRIP発現ORFは、CRIP、小胞体シグナルペプチド(ERSP)、リンカーペプチド(L)、翻訳安定化タンパク質(STA)、又はそれらの任意の組み合わせのうちの1つ以上を含み得る。本明細書で使用される場合、「CRIP構築物」という用語は、構造モチーフの指定及び/又は配向を説明するために使用される。言い換えれば、CRIP構築物は、所与のCRIP発現ORF内に含まれる構成要素又はモチーフの配置及び配向を記載する。例えば、一部の実施形態では、CRIP構築物は、限定されないが、以下のCRIP-殺虫タンパク質のうちの1つの配向を記載する:ERSP-CRIP、ERSP-(CRIP)、ERSP-CRIP-L、ERSP-(CRIP)-L、ERSP-(CRIP-L)、ERSP-L-CRIP、ERSP-L-(CRIP)、ERSP-(L-CRIP)、ERSP-STA-CRIP、ERSP-STA-(CRIP)、ERSP-CRIP-STA、ERSP-(CRIP)-STA、ERSP-(STA-CRIP)、ERSP-(CRIP-STA)、ERSP-L-CRIP-STA、ERSP-L-STA-CRIP、ERSP-L-(CRIP-STA)、ERSP-L-(STA-CRIP)、ERSP-L-(CRIP)-STA、ERSP-(L-CRIP)-STA、ERSP-(L-STA-CRIP)、ERSP-(L-CRIP-STA)、ERSP-(L-STA)-CRIP、ERSP-(L-CRIP)-STA、ERSP-STA-L-CRIP、ERSP-STA-CRIP-L、ERSP-STA-L-(CRIP)、ERSP-(STA-L)-CRIP、ERSP-STA-(L-CRIP)、ERSP-(STA-L-CRIP)、ERSP-STA-(CRIP)-L、ERSP-STA-(CRIP-L)、ERSP-(STA-CRIP)-L、ERSP-(STA-CRIP-L)、ERSP-CRIP-L-STA、ERSP-CRIP-STA-L、ERSP-(CRIP)-STA-L、ERSP-(CRIP-L)-STA、ERSP-(CRIP-STA)-L、ERSP-(CRIP-L-STA)、又はERSP-(CRIP-STA-L)(ここで、Nは、1~200の範囲の整数である)。また、「構造モチーフ」も参照されたい。
「CRIP ORFダイアグラム」は、ダイアグラム又は式形式で記載される1つ以上のCRIP ORFの組成物を指す。例えば、「CRIP ORFダイアグラム」は、ORF内に含まれるDNAセグメントに対する頭文字又は略称(short-hand reference)を使用して記載され得る。したがって、一実施例では、「CRIP ORFダイアグラム」は、DNAセグメントを「ersp」(すなわち、ERSPポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列)、「リンカー」又は「L」(すなわち、LINKERポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列)、「sta」(すなわち、STAポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列)、及び「crip」(すなわち、CRIPをコードするポリヌクレオチド配列)として、式形式で図示することによって、ERSP、L、STA、及びCRIPをコードするポリヌクレオチドセグメントを記載することができる。CRIP ORFダイアグラムの例は、「ersp-sta-(リンカー-crip」、又は「ersp-(crip-リンカー-sta」、及び/又はそれらのDNAセグメントの任意の組み合わせである。
「CRIPポリヌクレオチド」とは、1つ以上の非CRIPポリペプチド又はタンパク質に加えて1つ以上のCRIPを含む殺虫タンパク質を発現及び/又はコードするように動作可能なポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド群を指す。
「CRIP-殺虫タンパク質」は、以下からなる任意のタンパク質、ペプチド、ポリペプチド、アミノ酸配列、構成、又は配置を指す:(1)少なくとも1つのCRIP、又は2つ以上のCRIP、及び(2)追加のペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質。ここで、当該追加のペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、以下のうちの1つ以上を行う能力を有する:(a)昆虫がCRIP-殺虫タンパク質に曝露される場合、CRIP単独と比較して、死亡率を増加させる、かつ/若しくは昆虫の成長を阻害すること、(b)当該CRIP-殺虫タンパク質の発現を、例えば、宿主細胞若しくは発現システムにおいて、増加させること、及び/又は(c)CRIP-殺虫タンパク質の翻訳後プロセシングに影響を与えること。
一部の実施形態では、殺虫タンパク質は、本明細書に開示される1つ以上のCRIPを含むことができる。一部の実施形態では、CRIP-殺虫タンパク質は、2つ以上のCRIPを含むポリマーであり得る。一部の実施形態では、殺虫タンパク質は、CRIPホモポリマー(例えば、CRIPが同じである、2つ以上のCRIPモノマー)を含むことができる。一部の実施形態では、殺虫タンパク質は、CRIPヘテロポリマー(例えば、CRIPモノマーが異なる、2つ以上のCRIPモノマー)を含むことができる。
一部の実施形態では、CRIP-殺虫タンパク質は、適切にフォールディングした場合、又はその最も自然な熱力学的状態において、1種類以上の昆虫に対して殺虫活性を発揮するアミノ酸のポリマーであり得る。
一部の実施形態では、CRIP-殺虫タンパク質は、2つ以上のCRIPを含むポリマーであってもよく、CRIPが、リンカーペプチド(例えば、切断可能及び/又は切断不能リンカー)を介して動作可能に連結される。一部の実施形態では、CRIP-殺虫タンパク質は、安定化ドメイン(STA)、小胞体シグナル伝達タンパク質(ERSP)、昆虫切断可能又は昆虫切断不能リンカー(L)、及び/又はそれらの任意の他の組み合わせなどの1つ以上のタンパク質と動作可能に連結された1つ以上のCRIPを指すことができる。一部の実施形態では、CRIP-殺虫タンパク質は、(1)野生型CRIPタンパク質、及び(2)追加のペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質(例えば、ERSP、リンカー、STA、UBI、又はヒスチジンタグ若しくは同様のマーカー)を含む天然に存在しないタンパク質であり得る。
「培養」又は「細胞培養」は、人工的なインビトロ環境における細胞の維持を指す。
「培養」は、様々な種類の培地上又は様々な種類の培地中での生物の増殖を指す。例えば、「培養」という用語は、液体培地又は固体培地における、好適な条件下での細胞集団の増殖を意味することができる。一部の実施形態では、培養とは、目的の異種ポリペプチド及び/又は他の所望の最終産物(典型的には、容器又はリアクター内での)発酵性組換え産生を指す。
「シスチン」とは、酸化されたシステイン二量体を指す。シスチンは、2つのシステイン分子の酸化を介して得られる硫黄含有アミノ酸であり、ジスルフィド結合で連結される。
「規定培地」とは、既知の化学成分で構成されるが、粗製タンパク質性抽出物又は酵母抽出物若しくはペプトンなどの副産物を含まない培地を意味する。
「縮重」又は「コドン縮重」は、1つのアミノ酸が異なるヌクレオチドコドンによってコードされ得る現象を指す。したがって、タンパク質又はポリペプチドをコードする核酸分子の核酸配列は、縮重により変化し得る。遺伝コードの縮重の結果として、多くの核酸配列は、特定の活性を有する所与のポリペプチドをコードすることができ、そのような機能的に等価なバリアントが本明細書に企図される。
「デスメチルリモシンB」は、[(5R,7R,8R,9R,10R,13S,17S)-17-[(3R)-5-ヒドロキシオキソラン-3-イル]-4,4,8,10,13-ペンタメチル-3,16-ジオキソ-6,7,9,11,12,17-ヘキサヒドロ-5H-シクロペンタ[a]フェナントレン-7-イル]アセテートを指す。
「ジスルフィド結合」は、側鎖上の2つのチオール基のカップリングによって誘導される2つのシステインアミノ酸間の共有結合を意味する。
「DNA」は、デオキシリボ核酸を指し、一本鎖又は二本鎖形態で配置することができる、1つ以上のデオキシリボヌクレオチド又はヌクレオチド(すなわち、アデニン[A]、グアニン[G]、チミン[T]、又はシトシン[C])のポリマーを含む。例えば、1つ以上のヌクレオチドが、ポリヌクレオチドを生成する。
「dNTP」は、DNA及びRNAを構成するヌクレオシド三リン酸を指す。
「二重発現カセット」は、同じベクター上に含まれる2つの異種ポリペプチドの発現カセットを指す。
「二重導入遺伝子ペプチド発現ベクター」又は「二重導入遺伝子発現ベクター」は、異種ポリペプチド発現カセットの2つのコピーを含む酵母発現ベクターを意味する。
「内因性」は、天然に存在する、及び/又は生物に存在するポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、又はプロセス、例えば、特定の遺伝子操作の前に宿主細胞に既に存在する分子又は活性を指す。
「エンハンサーエレメント」は、プロモーターに動作可能に連結されたDNA配列を指し、これは、エンハンサーエレメントの不在下でプロモーターから生じる転写活性と比較して、プロモーター上で増加した転写活性を発揮することができる。
「ER」又は「小胞体」は、いくつかの翻訳後修飾プロセスが生じる、全ての真核生物に共通の細胞内小器官である。
「ERSP」又は「小胞体シグナルペプチド」は、CRIPをコードするmRNA分子のタンパク質翻訳中に、宿主細胞のシグナル認識粒子によって認識及び結合されるアミノ酸のN末端配列であり、これは、タンパク質翻訳のリボソーム/mRNA複合体を細胞質内のERに移動させる。結果として、タンパク質翻訳が、それがERとドッキングするまで休止し、そこで、それが続き、得られたタンパク質がERに注入される。
「ersp」は、ペプチドERSPをコードするポリヌクレオチドを指す。
「ER輸送」とは、翻訳後修飾、選別及び輸送のために、細胞で発現されたタンパク質のERへの輸送を意味する。
「賦形剤」とは、本発明の活性成分(すなわち、CRIP又はCRIP-殺昆虫性タンパク質)とともに(例えば、同時に)、又はそれに続いて製剤化される、任意の薬理学的に不活性な、天然の、若しくは合成の成分又は物質を指す。一部の実施形態では、賦形剤は、本発明のCRIP又はCRIP-殺虫タンパク質とともに投与することができる、かつ/又は本発明の組成物の調製に有用である、任意の添加剤、アジュバント、結合剤、増量剤、担体、コーティング剤、希釈剤、崩壊剤、充填剤、滑剤、潤滑剤、防腐剤、ビヒクル、又はそれらの組み合わせであり得る。賦形剤には、非毒性で組成物の他の成分と相互作用しない当該技術分野において既知の任意のそのような材料が含まれる。一部の実施形態では、賦形剤は、組成物を増量する目的で組成物を調製する場合(したがって、しばしば増量剤、充填剤、又は希釈剤と称される)、CRIP又はCRIP-殺虫タンパク質とともに製剤化することができる。他の実施形態では、賦形剤を使用して、吸収及び/又は溶解性を促進するなど、最終剤形中の活性成分を増強することができる。更に他の実施形態では、賦形剤を使用して、安定性を提供するか、又は汚染(例えば、微生物汚染)を防止することができる。他の実施形態では、賦形剤を使用して、組成物(例えば、乾燥顆粒状又は乾燥流動性粉末の物理形態である組成物)に物理的特性を付与することができる。賦形剤への言及は、1つ及び2つ以上のかかる賦形剤の両方を含む。好適な医薬賦形剤は、Remington’s Pharmaceutical Sciences,by E.W.Martinに記載されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
「発現カセット」とは、(1)目的のDNA配列(例えば、CRIPをコードするように動作可能なポリヌクレオチド)、及び以下のうちの1つ以上を指す:(2)プロモーター、ターミネーター、及び/若しくはエンハンサーエレメント、(3)適切なmRNA安定化ポリアデニル化シグナル、(4)内部リボソーム侵入部位(IRES)、(5)イントロン、並びに/又は(6)転写後調節エレメント。(1)と、(2)~(6)のうちの少なくとも1つとの組み合わせは、「発現カセット」と称される。一部の実施形態では、ベクターにクローニングされた多数の発現カセットが存在し得る。例えば、一部の実施形態では、CRIPをコードするように動作可能なポリヌクレオチドを含む第1の発現カセットが存在し得る。代替的な実施形態では、CRIPをコードするように動作可能なポリヌクレオチドをそれぞれ含む、2つの発現カセット(すなわち、二重発現カセット)が存在する。他の実施形態では、CRIPをコードするように動作可能な3つの発現カセット(すなわち、三重発現カセット)が存在する。一部の実施形態では、二重発現カセットは、第2の発現カセットを、第1の発現カセットを含有するベクターにサブクローニングすることによって生成され得る。一部の実施形態では、三重発現カセットは、第3の発現カセットを、第1の発現カセット及び第2の発現カセットを含むベクターにサブクローニングすることによって生成され得る。発現カセット及びクローニング技術に関する方法は、当該技術分野で周知であり、本明細書に記載されている。また、CRIP発現カセットも参照されたい。
「発現ORF」は、タンパク質複合体をコードするヌクレオチドを意味し、ORFのヌクレオチドとして定義される。
「FECT」は、コーティングタンパク質遺伝子及び三重遺伝子ブロックを排除したフォックステールモザイクウイルスを使用した一過性植物発現システムを意味する。
「発酵ビール(fermentation beer)」とは、形質転換された宿主細胞(例えば、本発明のCRIPを発現するように動作可能な酵母細胞)に接種され、それによって消費された、使用済みの発酵培地(すなわち、生物を除去した後の発酵培地上清)を指す。一部の実施形態では、発酵ビールは、形質転換された宿主細胞の発酵後に回収される溶液を指す。「発酵」という用語は、広義には、発酵産物(例えば、本発明の1つ以上のペプチド)を産生するために、制御された条件(例えば、温度、酸素、pH、栄養素など)下での微生物による有機物質(例えば、炭素基質)の酵素的及び嫌気的又は好気的分解を指す。発酵は、本明細書で使用される場合、典型的には、嫌気条件下で生じるプロセスを記載するが、本明細書で使用される「発酵」という用語は、酸素の存在下で生じるプロセスでも生じ得るため、この用語が厳密な嫌気条件に限定されることを意図するものではない。
「発酵固体」は、酵母ベースの発酵プロセス中に発酵ビールから残る固体(溶解されたものを含む)を指し、本質的に、約200kDa~約1kDaの分子量カットオフを有する塩、複合タンパク質源、ビタミン、及び追加の酵母副産物からなる。
「GFP」は、クラゲ、Aequorea victoriaからの緑色蛍光タンパク質を意味する。
「HIS」又は「His」は、ヒスチジンを指す。例えば、一部の実施形態では、「HIS」又は「His」は、ヒスチジンタグ(例えば、配列番号591に示されるアミノ酸配列を有するヒスチジンタグ)を指し得る。
「相同」とは、2つのポリペプチド間又は2つの核酸分子間の配列類似性又は配列同一性を指す。2つの比較される配列の両方における位置が、同じ塩基又はアミノ酸モノマーサブユニットによって占められている場合(例えば、2つのDNA分子の各々における位置が、アデニンによって占められている場合)、これらの分子は、その位置において相同である。2つの配列間の相同性のパーセントは、2つの配列によって共有される一致する又は相同の位置の数を、比較した位置の数で割って100を掛けた関数である。したがって、一部の実施形態では、「相同」という用語は、2つのポリペプチド分子間、又は2つの核酸分子間の配列類似性を指す。2つの比較される配列の両方における位置が、同じ塩基又はアミノ酸モノマーサブユニットによって占められている場合(例えば、2つのDNA分子の各々における位置が、アデニンによって占められている場合)、これらの分子は、その位置において相同である。2つの配列間の相同性は、2つの配列によって共有される一致する又は相同の位置の数の関数である。例えば、2つの配列において、10個の位置のうちの6個が一致するか又は相同である場合、2つの配列は60%相同である。例として、DNA配列ATTGCC及びTATGGCは、50%の相同性を共有する。
核酸に関して使用される場合、「相同性」という用語は、相補性の程度を指す。部分的な相同性又は完全な相同性(したがって、同一)が存在し得る。「配列同一性」は、2つ以上の核酸の間の関連性の尺度を指し、全比較長を参照して、パーセンテージとして与えられる。同一性の計算は、それぞれのより大きな配列において、同一であり、同じ相対位置にあるそれらのヌクレオチド残基を考慮に入れる。
「相同組換え」とは、DNAのセグメントを、同一の領域を有するか(相同)又はほぼ同様の領域を有する別のセグメントで置換する事象を指す。例えば、一部の実施形態では、「相同組換え」は、ヌクレオチド配列がDNAの2つの類似する分子間又は2つの同一の分子間で交換される遺伝子組換えの一種を指す。簡潔に、相同組換えは、二本鎖切断として知られているDNAの両鎖上で生じる有害な切断を正確に修復するために、細胞によって最も広く使用される。相同組換えは、異なる生物及び細胞型間で大きく異なるが、ほとんどの形態は、同じ基本的なステップを伴い:二本鎖切断が生じた後、切除と呼ばれるプロセスで、切断部の5’末端の周囲のDNAの切片が切断される。それに続いて、鎖侵入ステップでは、切断されたDNA分子の突出3’末端が、次いで、切断されていない類似又は同一のDNA分子に「侵入する」。鎖侵入後、事象の更なる配列は、2つの主な経路、すなわち、二本鎖切断修復経路、又は合成依存性鎖アニーリング経路のいずれかに従ってもよい。相同組換えは、生物の3つのドメイン並びにウイルス全てにわたって保存され、それがほぼ普遍的な生物学的メカニズムであることを示唆している。例えば、一部の実施形態では、相同組換えは、部位特異的組み込み(SSI)配列を使用して生じる場合があり、それによって、ヌクレオチド組成物において実質的に同様の核酸配列間の鎖交換交差事象が存在する。これらの交差事象は、本発明の標的化構築物に含まれる配列(すなわち、SSI配列)と内因性ゲノム核酸配列(例えば、ペプチドサブユニットをコードするポリヌクレオチド)との間で生じ得る。更に、一部の実施形態では、2つ以上の部位特異的相同組換え事象が生じる可能性があり、これは、標的化構築物内に含まれる核酸配列が、内在性ゲノム配列内に存在する特定の配列を置き換えた置換事象をもたらすであろう。
「ICKモチーフ」又は「ICKモチーフタンパク質」又は「インヒビターシスチンノットモチーフ」又は「ICKペプチド」又は「シスチンノットモチーフ」又は「シスチンノットペプチド」は、3つのジスルフィド架橋を有する少なくとも6つのハーフシスチンコアアミノ酸を有する16~60のアミノ酸ペプチドを指し、3つのジスルフィド架橋が共有結合であり、6つのハーフシスチン残基のうちの共有結合性ジスルフィド結合は、N末端アミノ酸から始まる6つのハーフシスチンコアアミノ酸の1番目及び4番目、2番目及び5番目、並びに3番目及び6番目のハーフシスチンの間にある。一般に、この種類のペプチドは、通常、モチーフの4番目のコアハーフシスチンと6番目のコアハーフシスチンとの間に位置する残基で構成されるベータヘアピン二次構造を含み、ヘアピンが、モチーフの3つのジスルフィド結合によって提供される構造的架橋によって安定化される。追加のシステイン/シスチン又はハーフシスチンアミノ酸が、インヒビターシスチンノットモチーフ内に存在し得ることに留意されたい。
「ick」は、ICKモチーフタンパク質をコードするヌクレオチドを意味する。
「ICKモチーフタンパク質発現ORF」又は「発現ORF」とは、ICKモチーフタンパク質複合体をコードするヌクレオチドを意味し、ORFにおけるヌクレオチドとして定義される。
「ICKモチーフタンパク質発現ベクター」又は「ICK発現ベクター」又は「ICKモチーフ発現ベクター」とは、発現ORFを含むバイナリベクターを意味する。また、バイナリベクターは、ORF及びそれがコードするタンパク質の発現を促進するために、発現ORFの周囲の必要な転写プロモーター及びターミネーター配列を含む。
「同一性」とは、2つ以上のポリペプチド配列間又は2つ以上のポリヌクレオチド配列間の関係を指し、当該配列を比較することによって決定される。「同一性」という用語はまた、場合によっては、かかる配列のストリング間の一致によって決定される、ポリペプチド配列間又はポリヌクレオチド配列間の配列関連性の程度を意味する。「同一性」及び「類似性」は、限定されないが、以下に記載される当業者に既知の無数の方法のうちのいずれか1つによって、容易に計算することができ、Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.,ed.,Oxford University Press,New York,1988、Biocomputing:Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.,ed.,Academic Press,New York,1993、Computer Analysis of Sequence Data,Part 1,Griffin,A.M.,and Griffin,H.G.,eds.,Humana Press,New Jersey,1994、Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press,1987、及びSequence Analysis Primer,Gribskov,M.and Devereux,J.,eds.,M Stockton Press,New York,1991、並びにCarillo,H.,and Lipman,D.,SIAM J.Applied Math.,48:1073(1988)が含まれるが、これらに限定されない(これらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に援用される)。更に、同一性及び類似性を決定する方法は、公開されているコンピュータプログラムに成文化されている。例えば、一部の実施形態では、2つの配列間の同一性及び類似性を決定する方法には、GCGプログラムパッケージ(Devereux,J.,et al.,Nucleic Acids Research 12(1):387(1984))、BLASTP、BLASTN、及びFASTA(Altschul,S.F.et al.,J.Molec.Biol.215:403-410(1990))が含まれるが、これらに限定されない。BLAST Xプログラムは、NCBI及び他のソース(BLAST Manual,Altschul,S.,etal.NCBI,NLM NIH Bethesda,Md20894;Altschul,S.,et al.J.Mol.Biol.215:403-410(1990))から公開されている(これらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に援用される)。
「IGER」は、実際の1文字コードの配列に基づいて、短いペプチドの名称を意味する。これは、介在リンカーの一例である。
「インビボ」とは、天然環境(例えば、動物又は細胞)、及び天然環境内で生じるプロセス又は反応を指す。
「不活性」とは、何かが使用状態にない、例えば、休眠状態である、及び/又は機能していない状態を指す。例えば、遺伝子の文脈で使用される場合、又は遺伝子に関して言及される場合、不活性という用語は、当該遺伝子が、もはや遺伝子産物を能動的に合成しないか、当該遺伝子産物をタンパク質に翻訳しないか、又はその他、当該遺伝子にその正常な機能を行なわせないことを意味する。例えば、一部の実施形態では、不活性という用語は、遺伝子がRNAを転写することの失敗、RNAプロセシングの失敗(例えば、プレmRNAプロセシング、RNAスプライシング、若しくは他の転写後修飾)、非コードRNA成熟化への干渉、RNA輸送への干渉(例えば、核から細胞質へ)、翻訳への干渉、タンパク質折りたたみ、転座、タンパク質輸送、並びに/又は分子ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、転写因子、調節因子、阻害因子、若しくは前述のプロセスのうちのいずれかに寄与する他の因子のうちのいずれかへの阻害及び/若しくは干渉を指すことができる。
「動作不能」とは、機能していない、機能不全、又はもはや機能することができない状態を指す。例えば、遺伝子の文脈で使用される場合、又は遺伝子を指す場合、動作不能という用語は、当該遺伝子が、永続的又は一過的にのいずれかで、もはやいつものように動作することができないことを意味する。例えば、一部の実施形態では、「動作不能」とは、遺伝子が、もはや遺伝子産物を合成することができないか、当該遺伝子産物をタンパク質に翻訳しないか、又はその他、遺伝子がその正常な機能を行うことができないことを意味する。例えば、一部の実施形態では、動作不能という用語は、遺伝子がRNAを転写することの失敗、RNAプロセシングの失敗(例えば、プレmRNAプロセシング、RNAスプライシング、若しくは他の転写後修飾)、非コードRNA成熟化への干渉、RNA輸送への干渉(例えば、核から細胞質へ)、翻訳への干渉、タンパク質折りたたみ、転座、タンパク質輸送、並びに/又は分子ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、転写因子、調節因子、阻害因子、若しくは前述のプロセスのうちのいずれかに寄与する他の因子のうちのいずれかへの阻害及び/若しくは干渉を指すことができる。
「昆虫」には、「昆虫綱」綱の全ての生物が含まれる。「前成虫(pre-adult)」という用語は、成虫期以前の生物の任意の形態を指し、例えば、卵、幼虫、及び若虫が含まれる。本明細書で使用される場合、「昆虫」という用語は、ダニを含むいずれの節足動物及び線形動物、並びに全ての作物、野菜、及び木に蔓延することが知られている昆虫を指し、林業、園芸、及び農業の分野において害虫と見なされる昆虫を含む。本明細書に開示される方法で保護され得る特定の作物の例は、ダイズ、トウモロコシ、ワタ、アルファルファ、及び野菜作物である。特定の作物及び昆虫のリストを、ここに示す。
「昆虫腸内環境」又は「腸内環境」とは、昆虫又は昆虫の幼虫の前腸、中腸、又は後腸内で見出される特定のpH及びプロテイナーゼ条件を意味する。
「昆虫血リンパ環境」とは、昆虫又は昆虫の幼虫内で見出される特定のpH及びプロテイナーゼ条件を意味する。
「殺虫活性」とは、昆虫を、化合物、物質、若しくはペプチドに曝露した際又は後、昆虫が、死ぬ、その動きを停止若しくは遅延させる、その摂食を停止若しくは遅延させる、その成長を停止若しくは遅延させる、混乱する(例えば、ナビゲーション、食べ物の位置決定、睡眠行動、及び/若しくは交配に関して)、蛹化に失敗する、繁殖を妨げる、かつ/又は昆虫が子孫を産むことを妨げる、かつ/若しくは昆虫が稔性の子孫を産むことを妨げる。
「殺虫剤」又は「IA」又は「薬剤」は、1つ以上の化学物質、分子、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、RNA、DNA、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、脂質、糖脂質、酵素、毒素、毒性物質、毒、殺虫剤、農薬、有機化合物、無機化合物、ウイルス、原核生物、又は真核生物(及び当該原核生物又は真核生物から産生される薬剤)を指す。一部の実施形態では、IAには、RNAi、消化中毒剤、0型キチン生合成阻害剤、1型キチン生合成阻害剤、昆虫ウイルス、Azadirachta indicaインディカから単離された化合物、未知のMOAを有する化合物、細菌(及びそれ由来の産物)、真菌(及びそれ由来の産物)、線虫(及びそれ由来の産物)、植物抽出物、機械的破壊剤、蛍光増白剤、シリカナノスフィア、キチナーゼ、レクチン、膜侵襲複合体/パーフォリン(MACPF)タンパク質、植物ウイルスコートタンパク質-毒素融合体、グリカン結合ドメイン/毒素融合タンパク質、アセチルコリンエステラーゼ(AchE)阻害剤、GABA作動性クロライドチャネル遮断剤、ナトリウムチャネル調節剤、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAchR)競合調節剤、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAchR)アロステリック調節剤-部位I、グルタミン酸作動性クロライドチャネル(GluCl)アロステリック調節剤、幼若ホルモン模倣体、その他の非特異的(多部位)阻害剤、弦音器官TRPVチャネル調節剤、ダニ成長阻害剤、ミトコンドリアATPシンターゼの阻害剤、プロトン勾配の破壊を介した酸化的リン酸化の脱共役剤、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAchR)チャネル遮断剤、脱皮撹乱剤(双翅類)、エディソン受容体アゴニスト、オクトパミン受容体アゴニスト、ミトコンドリア複合体III電子伝達阻害剤、ミトコンドリア複合体I電子伝達阻害剤、電位依存性ナトリウムチャネル遮断剤、アセチルCoAカルボキシラーゼの阻害剤、ミトコンドリア複合体IV電子伝達阻害剤、ミトコンドリア複合体II電子伝達阻害剤、リアノジン受容体調節剤、弦音器官調節剤-未定義の標的部位、又はGABA作動性クロライドチャネルアロステリック調節剤のカテゴリーから選択されるメンバーが含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、殺虫剤は、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質のポリマーであり得、かかるペプチド-IAは、本明細書に記載されるペプチド及び/又はタンパク質に関する方法のうちのいずれかに従って作製及び/又は使用され得る。
「組み込み発現ベクター」又は「組み込みベクター」とは、それ自体を酵母細胞ゲノムの特定の遺伝子座に挿入し、安定して酵母ゲノムの一部となり得る酵母発現ベクターを意味する。
「殺虫剤耐性の」又は「殺虫剤耐性」又は「殺虫剤耐性昆虫」又は「殺虫剤耐性昆虫」は、害虫種に対して使用された場合に予想されるレベルの制御を達成するための当該殺虫剤の度重なる失敗を反映する、害虫集団の殺虫剤に対する感受性の遺伝的変化を指す。
「介在リンカー」は、タンパク質の異なる部分を分離するタンパク質中の短いペプチド配列、又は上流及び下流のDNA配列を分離するためのORF中のリーディングフレームに配置される短いDNA配列を指す。例えば、一部の実施形態では、介在リンカーを使用して、タンパク質が、翻訳中に、独立した二次構造及び三次構造の形成を達成することを可能にすることができる。一部の実施形態では、介在リンカーは、植物細胞環境、昆虫及び/又はLepidopteran腸内環境、並びに昆虫血リンパ及びLepidopteran血リンパ環境において、切断に耐性又は感受性のいずれかであり得る。
「単離された」は、物及び/又は成分をその天然環境から分離することを指し、例えば、所与の属又は種から単離された毒素は、毒素がその天然環境から分離される(例えば、野生型生物から取り出される)ことを意味する。
「カッパ-ACTXペプチド」は、昆虫カルシウム活性化カリウム(KCa)チャネル(Slo型)を阻害する興奮性毒素を指す。本明細書で使用される場合、「カッパ-ACTXペプチド」とは、オーストラリアブルーマウンテンファネルウェブスパイダー、Hadronyche versuta、又はそれらのバリアントから単離されたペプチドを指し得る。
「kb」は、キロ塩基(すなわち、1000塩基)を指す。本明細書で使用される場合、「kb」という用語は、核酸分子の長さを意味する。例えば、1kbは、1000ヌクレオチド長である核酸分子を指す。1kb長である二本鎖DNAの長さは、2,000ヌクレオチドを含有する(すなわち、各鎖に1,000ヌクレオチド)。あるいは、1kb長の一本鎖RNAの長さは、1,000ヌクレオチドを含有する。
「kDa」は、キロダルトン(1,000ダルトンに等しい単位)を指し、「ダルトン」又は「Da」は、分子量(MW)の単位である。
「ノックイン(knock in)」又は「ノックイン(knock-in)」又は「ノックイン(knocks-in)」又は「ノックイン(knocking-in)」は、内因性遺伝子を、外因性若しくは異種遺伝子又はその一部で置き換えることを指す。例えば、一部の実施形態では、「ノックイン」という用語は、相同組換えによって標的遺伝子座に所望のタンパク質をコードする核酸配列を導入し、それによって、所望のタンパク質を発現させることを指す。一部の実施形態では、「ノックイン」変異は、遺伝子配列を修飾して、機能喪失変異又は機能獲得変異を作製することができる。「ノックイン」という用語は、外来性若しくは異種ポリヌクレオチド配列若しくはその断片がゲノムに導入される手順(例えば、「彼らがノックインを行った」、又は「彼らが異種遺伝子をノックインした」)、あるいは得られた細胞及び/若しくは生物(例えば、「細胞がノックインである」、又は「動物がノックインである」)を指すことができる。
「ノックアウト(Knock out)」又は「ノックアウト(knockout)」又は「ノックアウト(knock-out)」又は「ノックアウト」又は「ノックアウト(knocks-out)」又は「ノックアウト(knocking-out)」は、細胞の内因性DNA配列によってコードされるタンパク質の発現遺伝子産物(例えば、mRNA)の部分的又は完全な抑制を指す。一部の実施形態では、「ノックアウト」は、全遺伝子、又はペプチド、ポリペプチド、若しくはタンパク質をコードする遺伝子の一部の標的化欠失によって達成され得る。結果として、欠失は、遺伝子を不活性に、部分的に不活性に、動作不能に、部分的に動作不能にすることができるか、又はその他、遺伝子が正常に発現する生物全体及び/若しくは細胞の任意の細胞における遺伝子若しくはその産物の発現を減少させることができる。「ノックアウト」という用語は、内因性遺伝子が完全に又は部分的に不活性又は動作不能にされる手順(例えば、「彼らがノックアウトを行った」、又は「彼らが内因性遺伝子をノックアウトした」)、あるいは得られた細胞及び/若しくは生物(例えば、「細胞がノックアウトである」、又は「動物がノックアウトである」)を指すことができる。
「ノックダウン用量50」又は「KD50」は、集団(例えば、Musca domestica(イエバエ)及び/又はAedes aegypti(蚊)の集団)の50%で麻痺又は運動の停止を引き起こすのに必要な用量中央値を指す。
「l」又は「リンカー」は、リンカーペプチドをコードするヌクレオチドを指す。
適切な文脈では、「L」は、翻訳安定化タンパク質(STA)を追加のポリペプチド(例えば、異種ペプチド及び/又は複数の異種ペプチド)と連結するリンカーペプチドを指す。アミノ酸に言及する場合、「L」はまた、ロイシンを意味し得る。
「LAC4プロモーター」又は「Lac4プロモーター」は、K.lactis β-ガラクトシダーゼ遺伝子に由来するプロモーター配列からなるDNAセグメントを指す。LAC4プロモーターは、強力で誘導可能なレポーターであり、酵母に形質転換された外因性遺伝子の発現を駆動するために使用される。
「LAC4ターミネーター」又は「Lac4ターミネーター」は、K.lactis β-ガラクトシダーゼ遺伝子に由来する転写ターミネーター配列からなるDNAセグメントを指す。
「LD20」は、集団の20%を死滅させるのに必要な用量を指す。
「LD50」は、集団の50%を死滅させるのに必要な用量を意味する致死量50を指す。
「Lepidopteran腸内環境」とは、Lepidopteranの昆虫又は幼虫の前腸、中腸、又は後腸内で見出される特定のpH及びプロテイナーゼ条件を意味する。
「Lepidopteran血リンパ環境」とは、Lepidopteranの昆虫又は幼虫内で見られる特定のpH及びプロテイナーゼ条件を意味する。
「リンカー(Linker)」又は「リンカー(LINKER)」又は「ペプチドリンカー」又は「L」又は「介在リンカー」は、2つのペプチドを一緒に連結するように動作可能な短いペプチド配列を指す。リンカーは、上流及び下流のDNA配列を分離するためにORFのリーディングフレーム内に配置される短いDNA配列を指し得る。一部の実施形態では、リンカーは、昆虫プロテアーゼによって切断可能であり得る。一部の実施形態では、リンカーは、タンパク質が、翻訳中に、独立した二次構造及び三次構造の形成を達成することを可能にすることができる。一部の実施形態では、リンカーは、植物細胞環境、昆虫及び/若しくはLepidopteran腸内環境、並びに/又は昆虫血リンパ及びLepidopteran血リンパ環境において、切断に耐性又は感受性のいずれかであり得る。一部の実施形態では、リンカーは、プロテアーゼによって切断され得る。例えば、一部の実施形態では、リンカーは、植物プロテアーゼ(例えば、パパイン、ブロメラン、フィシン、アクチニジン、ジンギバイン、及び/又はカルドシン)、昆虫プロテアーゼ、真菌プロテアーゼ、脊椎動物プロテアーゼ、無脊椎動物プロテアーゼ、細菌プロテアーゼ、哺乳類プロテアーゼ、爬虫類プロテアーゼ、又は鳥類プロテアーゼによって切断され得る。一部の実施形態では、リンカーは、切断可能又は切断不能であり得る。一部の実施形態では、リンカーは、二次領域又は三次領域を含み、各領域は、少なくとも2つの種類のプロテアーゼによって切断可能であり、そのうちの1つが昆虫及び/又は線虫プロテアーゼであり、そのうちのもう1つがヒトプロテアーゼである。一部の実施形態では、リンカーは、(少なくとも)3つの役割(昆虫腸内環境で切断される、植物細胞で切断される、又は意図的に切断されないように設計される)のうちの1つを有することができる。
「培地(medium)」(複数形「培地(media)」)は、細胞培養で細胞を培養するための栄養液を指す。
「MOA」は、作用メカニズムを指す。
「分子量(MW)」は、分子の質量又は重量を指し、典型的には、「ダルトン(Da)」又は「キロダルトン(kDa)」で測定される。一部の実施形態では、MWは、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)、分析用超遠心分離、又は光散乱を使用して計算することができる。一部の実施形態では、SDS-PAGE法は、以下の通りである:目的の試料が、一組の分子量標準を用いてゲル上で分離される。試料を泳動し、次いで、ゲルを所望の染色で処理し、続いて、約2~14時間脱色する。次のステップは、標準及び目的のタンパク質の相対的移動距離(Rf)を決定することである。移行距離は、以下の式を使用して決定することができる。
Figure 2023524083000002
次に、MWの対数は、標準におけるバンドについて得られた値に基づいて決定することができ、例えば、一部の実施形態では、SDS変性ポリペプチドの分子量の対数及びその相対移動距離(Rf)をグラフにプロットする。グラフをプロットした後、導出された値を補間すると、未知のタンパク質バンドの分子量が得られるであろう。
「モチーフ」は、何らかの生物学的有意性を有することに関与し、かつ/又は何らかの効果を発揮するか、又は何らかの生物学的プロセスに関与する、ポリヌクレオチド配列又はポリペプチド配列を指す。
「多重クローニング部位」又は「MCS」は、目的のDNA配列が挿入され得る多数の制限部位を含む、ベクター上に見出されるDNAのセグメントを指す。
「変異体」とは、(例えば、ヌクレオチド配列又はアミノ酸配列において)変化又はバリエーションを有する生物、DNA配列、アミノ酸配列、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質を指し、これにより、当該生物及び/又は配列が、変異体と比較される天然に存在する生物若しくは野生型生物、野生型配列、及び/又は参照配列とは異なるものになる。一部の実施形態では、この変化又はバリエーションは、1つ以上のヌクレオチド及び/又はアミノ酸の置換又は修飾(例えば、欠失又は付加)であり得る。一部の実施形態では、1つ以上のアミノ酸置換又は修飾は保存的であり得る。ここで、「変異体」におけるかかる保存的アミノ酸置換及び/又は修飾は、変異体の非変異型と関連して変異体の活性を実質的に減少させるものではない。例えば、一部の実施形態では、「変異体」は、配列番号によって示されるように、開示される配列及び/又は特許請求される配列を有するペプチドと比較した場合、1つ以上の保存的アミノ酸置換を有する。
「N末端」は、ポリペプチドの始まり又は開始に位置する遊離アミン基(すなわち、-NH)を指す。
「NCBI」は、国立バイオテクノロジー情報センターを指す。
「nm」は、ナノメートルを指す。
「非ICK CRIP」は、2~4個のジスルフィド結合を形成する4~8個のシステインを有するペプチドを指す。非ICKペプチドには、ICKペプチドではないシスチンノットペプチドが含まれる。非ICKペプチドは、ICKとは異なるジスルフィド結合の結合パターンを有し得る。非ICK CRIPの例は、イソギンチャクから単離されたAv2及びAv3などのペプチドであり、これらのイソギンチャクペプチドは、昆虫の末梢神経系(PNS)のナトリウムチャネルを調節する化合物のクラスの例である。
「非極性アミノ酸」は、弱疎水性であり、グリシン、アラニン、プロリン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、及びメチオニンを含むアミノ酸である。グリシン又はglyは、本発明のジペプチドに最も好ましい非極性アミノ酸である。
「正規化ペプチド収率」とは、条件培地中のペプチド収率を、ペプチド収率を測定した時点での対応する細胞密度で割ったものを意味する。ペプチド収率は、単位体積における産生されたペプチドの質量(例えば、mg/リットル若しくはmg/L)で、又はHPLCクロマトグラフにおける産生されたペプチドのUV吸光度ピーク面積(例えば、mAu.sec)で表すことができる。細胞密度は、600nm(OD600)の波長での培養の可視光吸光度で表すことができる。
「OD」は、光学密度を指す。典型的には、分光光度計を使用してODが測定される。細胞集団の経時的な増殖を測定する場合、UV分光法よりもOD600が好ましい。これは、過剰なUV光の下では細胞が損傷を受けることから、600nmの波長で、そうならないようにするためである。
「OD660nm」又は「OD660nm」は、660ナノメートル(nm)での光学密度を指す。
「オメガペプチド」又は「オメガ毒素」、又は「オメガ-ACTX-Hv1a」又は「天然オメガ-ACTX-Hv1a」は全て、オーストラリアブルーマウンテンファネルウェブスパイダーHadronyche versutaとして知られているクモから最初に単離されたACTXペプチドを指す。オメガペプチドは、ニコチン性アセチルコリン受容体の正のアロステリック調節因子であり、また、昆虫の電位依存性Ca2+チャネル及び電位依存性Kチャネルに対する二重アンタゴニストであり得る。Chambers et al.,Insecticidal spider toxins are high affinity positive allosteric modulators of the nicotinic acetylcholine receptor.FEBS Lett.2019 Jun;593(12):1336-1350、及びWindley et al.,Lethal effects of an insecticidal spider venom peptide involve positive allosteric modulation of insect nicotinic acetylcholine receptors.Neuropharmacology.2017 Dec;127:224-242を参照されたい(それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
「1文字コード」とは、タンパク質の一次構造における様々なアミノ酸を区別するために、その1文字コードに列挙されるペプチド配列を意味する:アラニン=A、アルギニン=R、アスパラギン=N、アスパラギン酸=D、アスパラギン又はアスパラギン酸=B、システイン=C、グルタミン酸=E、グルタミン=Q、グルタミン又はグルタミン酸=Z、グリシン=G、ヒスチジン=H、イソロイシン=I、ロイシン=L、リジン=K、メチオニン=M、フェニルアラニン=F、プロリン=P、セリン=S、スレオニン=T、トリプトファン=W、チロシン=Y、及びバリン=V。
「動作可能」とは、使用される能力、何らかを行う能力、及び/又は何らかの機能若しくは結果を達成する能力を指す。例えば、一部の実施形態では、「動作可能な」とは、ポリヌクレオチド、DNA配列、RNA配列、又は他のヌクレオチド配列若しくは遺伝子が、ペプチド、ポリペプチド、及び/又はタンパク質をコードする能力を指す。例えば、一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、タンパク質をコードするように動作可能であってもよく、これは、ポリヌクレオチドが、タンパク質を生成する能力とともにそれを埋め込まれる情報を含むことを意味する(例えば、結果としてタンパク質に翻訳されるmRNAを転写することによって)。
「動作可能に連結された」とは、このように記載された構成要素が、それらが意図された様式で機能することを可能にする関係にある並置を指す。例えば、一部の実施形態では、動作可能に連結されたは、2つ以上のDNA、ペプチド、又はポリペプチド配列を指すことができる。他の実施形態では、動作可能に連結されたとは、一方のDNA配列の転写活性化が他方のDNA配列に作用することができるように、2つの隣接するDNA配列が一緒に配置されることを意味し得る。更に他の実施形態では、「動作可能に連結された」という用語は、2つ以上のペプチド及び/又はポリペプチドを指すことができ、当該2つ以上のペプチド及び/又はポリペプチドは、単一のポリペプチド鎖を生成するような方法で連結されており、あるいは、動作可能に連結されたという用語は、一方のペプチドが他方に対して何らかの効果を及ぼすような方法で連結されている2つ以上のペプチドを指すことができる。更に他の実施形態では、動作可能に連結されたDNA配列は、一方の転写活性化が他方に作用することができるように、2つの隣接DNA配列が一緒に配置されることを指すことができる。
「ORF」又は「オープンリーディングフレーム」は、翻訳開始シグナル(例えば、それぞれ、AUG又はATG)と、1つ以上のポリペプチド配列をコードする既知の終止コドンのうちのいずれか1つ以上との間の、一続きのRNA又はDNA配列を指す。換言すると、ORFは、リボソームが終止コドンに遭遇していないために読み取りを継続する(すなわち、新生タンパク質にアミノ酸を付加する)ことができる限り、RNAコードを翻訳するリボソームの観点から見た参照のフレームを記載する。したがって、「オープンリーディングフレーム」又は「ORF」は、コード配列の翻訳開始コドンと終止コドンとの間のコードされたアミノ酸配列を指す。ここで、「開始コドン」及び「終止コドン」という用語は、それぞれ、タンパク質合成(mRNA翻訳)の開始及び鎖終止を指定するコード配列の3つの隣接するヌクレオチド(すなわち、コドン)の単位を指す。
一部の実施形態では、ORFは、開始コドン(通常、DNAではATG、及びRNAではAUG)で始まり、終止コドン(通常、UAA、UAG、又はUGA)で終わる連続した一繋がりのコドンである。他の実施形態では、ORFは、翻訳開始シグナル(例えば、AUG又はATG)と既知の終止コドンのうちのいずれか1つ以上との間の一続きのRNA配列又はDNA配列であり得、当該一続きのRNA配列又はDNA配列は、1つ以上のポリペプチド配列をコードする。一部の他の実施形態では、ORFは、ATG開始コドンで始まり、TGA、TAA、又はTAG終止コドンで終わるタンパク質をコードするDNA配列であり得る。ORFはまた、DNAがコードする翻訳されたタンパク質を意味し得る。一般に、当業者は、「オープンリーディングフレーム」の最も広い定義が、停止コドンを含まない一連のコドンを単純に企図するという事実に基づいて、「オープンリーディングフレーム」及び「ORF」という用語を「コード配列」という用語と区別する。したがって、ORFはイントロンを含有し得るが、コード配列は、リボソーム翻訳機構によって実際にアミノ酸に翻訳されるコドンに分割され得るそれらのヌクレオチド(例えば、連結されたエキソン)を指すことによって区別される(すなわち、コード配列がイントロンを含まない)。しかしながら、本明細書で使用される場合、「コード配列」、「CDS」、「オープンリーディングフレーム」、及び「ORF」という用語は、互換的に使用される。
「除去組換えの(out-recombined)」又は「除去組換え(out-recombination)」とは、インビボ相同組換え中の、2つの部位特異的組換え部位(例えば、標的ベクターのホモロジーアームに相同である標的遺伝子の5’及び3’ヌクレオチド配列)に隣接した遺伝子及び/又はポリヌクレオチド配列(例えば、内因性遺伝子)の除去を指す。「ノックアウト」を参照されたい。
「傍胞子結晶性毒素(parasporal crystal toxin)」とは、1つ以上のペプチド、ポリペプチド、及び/又はタンパク質を含む双角錐結晶である、傍胞子小体(parasporal body)又は傍胞子結晶(parasporal crystal)の一部であるペプチド、ポリペプチド、及び/又はタンパク質のいずれかを指す。傍胞子小体又は傍胞子結晶が昆虫に摂取されると、この毒素含有傍胞子結晶は、アルカリ性腸液に溶解し、その後、プロ毒素の中腸プロテアーゼを介して切断され、活性ペプチド毒素(例えば、δ-エンドトキシン)が生成される。
「ペプチド発現カセット」又は「発現カセット」とは、生物学的発現システムにおける殺虫タンパク質の転写を完了するために必要な全てのDNAエレメントで構成されるDNA配列を意味する。本明細書に記載の方法では、転写プロモーター、α接合因子シグナル配列をコードするDNA配列、切断部位、殺虫タンパク質導入遺伝子、終止コドン、及び転写ターミネーターが含まれる。
「ペプチド発現ベクター」とは、異種ペプチド導入遺伝子を含む宿主生物の発現ベクターを意味する。
「ペプチド発現酵母株」、「ペプチド発現株」又は「ペプチド産生株」は、異種ペプチドを産生することができる酵母株を意味する。
「ペプチド-IA」は、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、及び/又はタンパク質である殺虫剤を指す。
「ペプチド導入遺伝子」又は「殺虫ペプチド導入遺伝子」又は「殺虫タンパク質導入遺伝子」とは、目的のペプチドをコードするDNA配列を指し、生物学的発現システムにおいて翻訳され得る。
「ペプチド収率」とは、ペプチド発現酵母株の細胞から産生される、条件培地中の殺虫ペプチドの濃度を意味する。これは、単位体積における産生されたペプチドの質量(例えば、mg/リットル若しくはmg/L)で、又はHPLCクロマトグラフにおける産生されたペプチドのUV吸光度ピーク面積(例えば、mAu.sec)で表すことができる。
「囲食膜」とは、昆虫腸内の表層を意味し、消化を可能にしながらも、腸壁を保護し、腸を通って大きな食物粒子が移動するのを助けることができる。
「害虫」には、昆虫、真菌、細菌、線虫、ダニ、マダニなどが含まれるが、これらに限定されない。
「農薬有効量(pesticidally-effective amount)」とは、少なくとも1つの害虫に死をもたらすことができるか、又は害虫の成長、摂食、又は正常な生理学的発生を顕著に低減することができる農薬の量を指す。この量は、例えば、制御される特定の標的害虫、処理される特定の環境、場所、植物、作物、又は農業用地、環境条件、並びに農薬的に有効なポリペプチド組成物の適用の方法、速度、濃度、安定性、及び量などの要因に応じて変化するであろう。製剤はまた、気候条件、環境考慮事項、及び/又は適用の頻度、及び/又は害虫蔓延の重症度に関して変化し得る。
「薬学的に許容される塩」は、農業的に許容される塩と同義であり、本明細書で使用される場合、その酸塩又は塩基塩を作製することによって修飾される化合物を指す。
「植物」は、植物全体、植物組織、植物器官(例えば、葉、茎、根など)、種子、植物細胞、むかご、胚、及びそれらの子孫を意味するものとする。植物細胞は、分化又は未分化であり得る(例えば、カルス、懸濁培養細胞、原形質細胞、葉細胞、根細胞、師部細胞、及び花粉)。
「植物導入遺伝子タンパク質」とは、それをコードするDNA又はRNAが1つ以上の植物細胞に送達された後に植物において発現される異種由来のタンパク質を意味する。
「植物切断可能リンカー」とは、植物プロテアーゼ認識部位を含み、かつ植物細胞におけるタンパク質発現プロセス中に切断され得る、切断可能なリンカーペプチド、又は切断可能なリンカーペプチドをコードするヌクレオチドを意味する。
「植物に組み込まれた保護剤」又は「PIP」は、トランスジェニック植物によって産生される殺虫タンパク質、及び植物がそのタンパク質を産生するのに必要な遺伝物質を意味する。
「プラスミド」は、目的の遺伝子のキャリアとして機能し、生物に形質転換又はトランスフェクトされた場合、宿主生物とは独立してプラスミドに含まれるDNA配列を複製及び発現することができるDNAセグメントを指す。プラスミドは、ベクターの一種であり、「クローニングベクター」(すなわち、DNA断片をクローニングするために、及び/又は何らかの選択を介してプラスミドを担持する宿主集団を選択するために使用される単純なプラスミド)又は「発現プラスミド」(すなわち、大量のポリヌクレオチド及び/又はポリペプチドを産生するために使用されるプラスミド)であり得る。
「極性アミノ酸」は、極性であり、セリン、スレオニン、システイン、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、トリプトファン、及びチロシンを含むアミノ酸であり、好ましい極性アミノ酸は、セリン、スレオニン、システイン、アスパラギン、及びグルタミンであり、セリンが最も好ましい。
「ポリヌクレオチド」は、任意の長さのヌクレオチド(例えば、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、又はその類似体)のポリマー形態(例えば、2つ以上のリボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドの配列)を指す。本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」という用語には、二本鎖及び一本鎖DNA、並びに二本鎖及び一本鎖RNAが含まれ、ポリヌクレオチドの修飾形態及び非修飾形態も含まれる(ポリヌクレオチドに対する修飾及びポリヌクレオチドの修飾は、例えば、メチル化、リン酸化、及び/又はキャッピングを含み得る)。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、遺伝子又は遺伝子断片(例えば、プローブ、プライマー、EST、又はSAGEタグ)、ゲノムDNA、ゲノムDNA断片、エキソン、イントロン、メッセンジャーRNA(mRNA)、トランスファーRNA、リボソームRNA、リボザイム、cDNA、組換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離DNA、任意の配列の単離RNA、核酸プローブ、前述のいずれかのプライマー又は増幅コピーのうちの1つであり得る。
更に他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、遺伝子のオープンリーディングフレームをコードするように動作可能なヌクレオチドのポリマー形態を指すことができる。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、cDNAを指すことができる。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有することができ、既知又は未知の任意の機能を行うことができる。ポリヌクレオチドの構造は、ポリヌクレオチドの方向性を示す、その5’末端若しくは3’末端又は末端によって参照され得る。ポリヌクレオチドの一本鎖中の隣接ヌクレオチドは、典型的には、それらの3’及び5’炭素間のホスホジエステル結合によって連結される。しかしながら、異なるヌクレオチドの結合、例えば、メチレン、ホスホロアミデート結合などを含む結合を使用することもできる。これは、それぞれの5’炭素及び3’炭素が、ポリヌクレオチドのいずれかの末端(これらは5’末端及び3’末端又は末端と呼ばれ得る)で曝露され得ることを意味する。5’末端及び3’末端は、それぞれの末端に結合した化学基のために、ホスホリル(PO)末端及びヒドロキシル(OH)末端と呼ぶこともできる。また、ポリヌクレオチドという用語は、二本鎖分子及び一本鎖分子の両方を指す。別段の指定又は要求がない限り、ポリヌクレオチドを作製又は使用する任意の実施形態は、二本鎖形態と、二本鎖形態を構成することが既知である又は予想される2つの相補的な一本鎖形態の各々との両方を包含する。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びヌクレオチド類似体などの修飾ヌクレオチド(非天然塩基を有するヌクレオチド、アザプリン又はデアザプリンなどの修飾天然塩基を有するヌクレオチドを含む)を含むことができる。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリヌクレオチドの組み立て前又は後に付与され得る。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドはまた、例えば、標識化成分とのコンジュゲーションなどによって、重合後にも、更に修飾され得る。更に、ポリヌクレオチド中のヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断されてもよい。ポリヌクレオチドの1つ以上の末端は、特定の方法でその末端が他のポリヌクレオチドと相互作用する(例えば、共有結合を形成する)ことを防ぐように保護され得るか、又はその他、修飾され得る。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、4つのヌクレオチド塩基:アデニン(A)、シトシン(C)、グアニン(G)、及びチミン(T)の特定の配列で構成され得る。また、ウラシル(U)は、例えば、ポリヌクレオチドがRNAである場合、チミンの自然な置換として存在することもできる。ウラシルは、DNAにも使用され得る。したがって、「配列」という用語は、天然及び非天然塩基を含む、ポリヌクレオチド又は任意の核酸分子のアルファベット表記を指す。
「RNA分子」又はリボ核酸分子という用語は、ピリミジン塩基のうちの1つとして、デオキシリボース糖ではなくリボース糖を有し、典型的には、チミンではなくウラシルを有するポリヌクレオチドを指す。本発明のRNA分子は、一般に、一本鎖であるが、二本鎖であってもよい。RNA試料由来のRNA分子の文脈において、RNA分子は、細胞核、ミトコンドリア、又は葉緑体中のDNAから転写された一本鎖分子を含むことができ、これらは、それが転写されるDNA鎖に相補的なヌクレオチド塩基の直鎖配列を有する。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、1つ以上の異種調節エレメントを更に含むことができる。例えば、一部の実施形態では、調節エレメントは、1つ以上のプロモーター、エンハンサー、サイレンサー、オペレーター、スプライシングシグナル、ポリアデニル化シグナル、終止シグナル、RNA輸送エレメント、内部リボソーム進入部位(IRES)、ポリU配列、又はそれらの組み合わせである。
「転写後遺伝子サイレンシング」、又は「PTGS」は、遺伝子の発現を抑制する生細胞内の細胞プロセスを意味する。
「転写後調節エレメント」は、それが転写された後のmRNAに影響を及ぼすDNAセグメント及び/又はメカニズムである。転写後メカニズムとしては、スプライシング事象、キャッピング、ポリ(A)テールの付加、及び当業者に既知の他のメカニズムが挙げられる。
「プロモーター」は、RNAポリメラーゼが遺伝子の転写に結合し、転写を開始するDNAの領域を指す。
「タンパク質」は、本文書において、「ペプチド」及び/又は「ポリペプチド」と同じ意味を有する。
「比率」とは、一方の値が、他方の値に含まれるか又はその中に含まれる回数を示す、2つの量の間の定量的関係を指す。
「リーディングフレーム」は、二本鎖DNA分子の6つの(各方向に3つの)可能なリーディングフレームのうちの1つを指す。使用されるリーディングフレームは、どのコドンがDNA分子のコード配列内のアミノ酸をコードするために使用されるかを決定する。一部の実施形態では、リーディングフレームは、ポリヌクレオチド及び/又は核酸(例えば、DNA又はRNA)中のヌクレオチドの配列を、連続した重複していないトリプレットのセットに分割する方法である。
「組換えDNA」又は「rDNA」は、2つ以上の異なるDNAセグメントからなるDNAを指す。
「組換えベクター」は、外来DNAが挿入されたDNAプラスミドベクターを意味する。
「調節エレメント」は、核酸配列の発現及び/又はプロセシングの一部の態様を制御する遺伝子エレメントを指す。例えば、一部の実施形態では、調節エレメントは、転写レベル及び転写後レベルで見出すことができる。調節エレメントは、シス調節エレメント(CRE)、又はトランス調節エレメント(TRE)であり得る。一部の実施形態では、調節エレメントは、1つ以上のプロモーター、エンハンサー、サイレンサー、オペレーター、スプライシングシグナル、ポリアデニル化シグナル、終止シグナル、RNA輸送エレメント、内部リボソーム進入部位(IRES)、ポリU配列、及び/又は遺伝子発現に影響を及ぼす(例えば、組織特異的、時間依存的な様式で、発現を増加させるか若しくは減少させ、かつ/又は構成的発現を引き起こす)他のエレメントであり得る。
「制限酵素」又は「制限エンドヌクレアーゼ」は、指定された制限部位でDNAを切断する酵素を指す。例えば、制限酵素は、EcoRI、SacII、又はBstXI制限部位でプラスミドを切断して、プラスミドを直鎖状にすることができ、目的のDNAをライゲーションすることができる。
「制限部位」は、4~8ヌクレオチドの配列を含み、その配列が特定の制限酵素によって認識される、DNA上の位置を指す。
「サランニン」は、殺虫活性を有するAzadirachta indicaから単離された化合物を指す。一部の実施形態では、サラニンは、C3444の分子式、及び596.7g/molの分子量を有する。
「イソギンチャク」は、イソギンチャク目の海洋動物の群を指す。イソギンチャクは、多くのイソギンチャクが有する多彩な外観から、陸生顕花植物であるアネモネにちなんで命名されている。例えば、ある実施形態では、イソギンチャクは、以下の種のうちの1つである:Actinia equine、Anemonia erythraea、Anemonia sulcata、Anemonia viridis、Anthopleura elegantissima、Anthopleura fuscoviridis、Anthopleura xanthogrammica、Bunodosoma caissarum、Bunodosoma cangicum、Bunodosoma granulifera、Heteractis crispa、Parasicyonis actinostoloides、Radianthus paumotensis、又はStoichactis helianthus。
「選択遺伝子」とは、遺伝子修飾生物が選択圧下で増殖するための利点を付与する遺伝子を意味する。
「血清型(serovar)」又は「血清型(serotype)」は、抗原の特徴的なセットによって区別される密接に関連する微生物の群を指す。一部の実施形態では、血清型は、抗原的に及び血清学的に異なる様々な微生物である。
「sp.」は、種を指す。
「ssp.」又は「subsp.」は、亜種を指す。
「サブクローニング」又は「サブクローニングされた」とは、DNAをあるベクターから別のベクターに、通常有利なベクターに移すプロセスを指す。例えば、変異体又はペプチドをコードするポリヌクレオチドを、pKlac1プラスミドにサブクローニングし、その後、pKLAC1プラスミドで形質転換された酵母コロニーを選択することができる。
「SSI」は、文脈依存的である頭文字である。これは、いくつかの文脈では、「部位特異的組み込み」を指すことができ、インビボでの相同組換えが、宿主生物のゲノム内の特定の部位で生じることを可能にする配列を指すように使用される。したがって、一部の実施形態では、「部位特異的組み込み」という用語は、導入遺伝子を宿主生物のゲノム内の標的部位に導くプロセスを指し、目的の遺伝子を宿主生物の予め選択されたゲノム位置に組み込むことを可能にする。しかしながら、他の文脈では、SSIは、「室内表面噴霧(surface spraying indoors)」を指すことができ、これは、壁、窓、床、及び天井などの媒介生物が生息する表面に可変量の殺虫剤を適用する技術である。
「STA」又は「翻訳安定化タンパク質」又は「安定化ドメイン」又は「安定化タンパク質」(本明細書で互換的に使用される)は、タンパク質分解の細胞プロセスによって標的化されることなく細胞内に蓄積することができる十分な三次構造を有するペプチド又はタンパク質を意味する。タンパク質は、5~50アミノ酸長であり得る。翻訳安定化タンパク質は、ORFの殺虫タンパク質又はCRIPをコードする配列と動作可能に連結されるタンパク質のDNA配列によってコードされる。動作可能に連結されたSTAは、CRIPの上流又は下流のいずれかであり得、介在配列がいずれかのDNA配列のフレームシフトをもたらさない限り、2つの配列(STA及びCRIP)間に任意の介在配列を有することができる。翻訳安定化タンパク質はまた、腸壁を横断して昆虫の血リンパへのCRIPの送達を増加させる活性を有してもよい。
「sta」は、翻訳安定化タンパク質をコードするヌクレオチドを意味する。
「構造モチーフ」は、ペプチド及び/又はポリペプチドの三次元配置、及び/又は動作可能に連結されたポリペプチドセグメントの配置を指す。例えば、ERSPモチーフ、STAモチーフ、リンカーモチーフ、及びCRIPポリペプチドモチーフを有するポリペプチドは、ERSP-STA-L-CRIPの全体的な「構造モチーフ」を有する。また、「CRIP構築物」も参照されたい。
「Ta1b」又は「U1-アガトキシン-Ta1b」又は「Ta1bWT」又は「野生型U1-アガトキシン-Ta1b」は、ホボスパイダー(Hobo spider)Eratigena agrestisから単離されたポリペプチドを指す。U1-アガトキシン-Ta1bの一例は、配列番号1のアミノ酸配列を有するポリペプチドである(NCBI受託番号O46167.1)。
「Ta1bバリアントポリヌクレオチド」又は「U1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリヌクレオチド」は、1つ以上のTVPを含む殺虫タンパク質を発現及び/又はコードするように動作可能なポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド群を指す。「U1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリヌクレオチド」という用語は、TVP発現ORFに含まれるU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリヌクレオチド配列を記載するために使用される場合、それがベクターに含まれる場合、及び/又は殺虫タンパク質をコードするポリヌクレオチドを記載する場合、「tvp」及び/又は「Tvp」として記載される。
「毒素」は、毒液及び/又は毒、特に、特定の動物、高等植物、及び病原性細菌によって産生されるタンパク質又はコンジュゲートタンパク質を指す。一般に、「毒素」という用語は、天然物、例えば、サソリ、クモ、ヘビ、毒キノコなどで見出される分子及びペプチドを保持するが、「毒物」という用語は、人工物(man-made products)及び/又は人工物(artificial products)、例えば、人工化学農薬を保持する。しかしながら、本明細書で使用される場合、「毒素」及び「毒性物質」という用語は、同義的に使用される。
「トランスフェクション」及び「形質転換」は、いずれも、宿主生物(例えば、原核生物又は真核生物)に外因性及び/又は異種のDNA又はRNA(例えば、CRIPをコードするポリヌクレオチドを含むベクター)を導入するプロセスを指す。一般に、当業者は、細菌細胞に外因性及び/若しくは異種のDNA又はRNAを導入するプロセスを記載するために「形質転換」という用語を留保することがあり、真核細胞への外因性及び/若しくは異種のDNA又はRNAの導入を記載するプロセスのために「トランスフェクション」という用語を留保することがある。しかしながら、本明細書で使用される場合、「形質転換」及び「トランスフェクション」という用語は、プロセスが、原核生物(例えば、細菌)又は真核生物(例えば、酵母、植物、若しくは動物)への外因性及び/若しくは異種のDNA又はRNAの導入を記載するかどうかに関係なく、同義的に使用される。
「導入遺伝子」は、植物に形質転換されるタンパク質をコードする異種DNA配列を意味する。
「トランスジェニック宿主細胞」とは、遺伝子で形質転換され、追加の選択遺伝子を介してそのトランスジェニック状態について選択された細胞を意味する。
「トランスジェニック植物」とは、植物の全ての細胞がその導入遺伝子を含むように、外来のDNAで形質転換された単一の細胞に由来する植物を意味する。
「一過性発現システム」とは、Agrobacterium tumefaciensベースのシステムを意味し、これは、武装解除植物ウイルスをコードするDNAを、それが発現される植物細胞に送達する。植物ウイルスは、TSPの最大40%の高濃度で目的のタンパク質を発現するように操作されている。
「三重発現カセットは、同一のベクター上に含まれる3つのCRIP発現カセットを指す。
「TRBO」とは、ウイルスコーティングタンパク質遺伝子が除去されたタバコモザイクウイルスを使用した一過性植物発現システムを意味する。
「TSP」又は「全可溶性タンパク質」とは、植物組織試料から抽出され、抽出緩衝液中に可溶化され得るタンパク質の総量を意味する。
「TVP」又は「U1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)」又は「Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)」は、野生型U1-アガトキシン-Ta1bポリペプチド配列及び/又は野生型U1-アガトキシン-Ta1bポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の変異体又はバリアントを指し、天然に存在しないポリペプチド及び/又はポリヌクレオチド配列を生成するように改変されている。配列番号1のアミノ酸配列を有する例示的な野生型U1-アガトキシン-Ta1bポリペプチド配列が本明細書に提供される。例示的な野生型U1-アガトキシン-Ta1b前駆体ポリペプチド配列が本明細書に提供され、配列番号48(NCBI受託番号O46167.1)のアミノ酸配列を有し、シグナル配列「MKLQLMICLVLLPCFFC」(配列番号59)を含む。一部の実施形態では、TVPは、表1に列挙されたアミノ酸配列のうちのいずれかによるアミノ酸配列を有することができる。したがって、「TVP」という用語は、配列番号1に示されるアミノ酸配列と比較して1つ以上の変異を有するペプチドを指す。一部の実施形態では、TVPは、式(I)によるアミノ酸配列を有することができる。
E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X
式(I)
式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T、又はSであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E、又はRであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在である。
一部の実施形態では、TVPは、式(II)によるアミノ酸配列を有し得るか、又はその薬学的に許容される塩である。
E-P-D-E-I-C-R-A-X-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-K-G
式(II)
式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、R又はQであり、Zが、T又はAである。
「U-ACTX-Hv1a」又は「ハイブリッドペプチド」又は「ハイブリッド毒素」又は「ハイブリッド-ACTX-Hv1a」又は「天然ハイブリッドACTX-Hv1a」又は「Uペプチド」又は「U毒素」又は「天然U」又は「天然U-ACTX-Hv1a」は全て、ACTXペプチドを指し、これは、オーストラリアンブルーマウンテンジョウゴグモHadronyche versutaとして知られているクモから発見された。U-ACTX-Hv1aは、ニコチン性アセチルコリン受容体の正のアロステリック調節因子であり、また、昆虫電位依存性Ca2+チャネル及び電位依存性Kチャネルに対する二重アンタゴニストであり得る。Chambers et al.,Insecticidal spider toxins are high affinity positive allosteric modulators of the nicotinic acetylcholine receptor.FEBS Lett.2019 Jun;593(12):1336-1350、及びWindley et al.,Lethal effects of an insecticidal spider venom peptide involve positive allosteric modulation of insect nicotinic acetylcholine receptors.Neuropharmacology.2017 Dec;127:224-242を参照されたい(それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。例示的なU-ACTX-Hv1aペプチドは、配列番号60に提供されている。
「U+2ペプチド」又は「U+2タンパク質」又は「U+2毒素」又は「U+2」又は「U+2-ACTX-Hv1a」又は「Spear」は全て、天然ペプチドに動作可能に連結された追加のジペプチドを有するU-ACTX-Hv1aを指す。Uペプチドに動作可能に連結されている追加のジペプチドは、「+2」又は「プラス2」によって示され、いくつかのペプチドの中から選択することができ、これらのいずれかは、本明細書で考察されるような固有の特性を有する「U+2ペプチド」をもたらし得る。一部の好ましい実施形態では、ジペプチドは、「GS」であり、例示的なU+2-ACTX-Hv1aペプチドは、配列番号61に示されている。
「UBI」は、ユビキチンを指す。例えば、一部の実施形態では、UBIは、Zea maysから単離されたユビキチンモノマーを指すことができる。
「var.」は、変種又は品種を指す。「var.」という用語は、種レベル及び/又は亜種(存在する場合)以下にランク付けされる分類学的カテゴリーを示すために使用される。一部の実施形態では、「var.」という用語は、軽微ではあるが永続的又は遺伝的な特徴において、同じ亜種又は種の他のメンバーとは異なるメンバーを表す。
「バリアント」又は「バリアント配列」又は「バリアントペプチド」とは、1つ以上の保存的アミノ酸置換又は保存的修飾を有するアミノ酸配列を指す。「バリアント」における保存的アミノ酸置換は、バリアントの非可変形態との関連において、バリアントの活性を実質的に減少させない。例えば、一部の実施形態では、「バリアント」は、配列番号によって示される、開示される配列及び/又は特許請求される配列を有するペプチドと比較した場合、1つ以上の保存的アミノ酸置換を有する。
「ベクター」は、目的の外来遺伝子(例えば、crip)を受け入れるDNAセグメントを指す。目的の遺伝子は、「挿入」又は「導入遺伝子」として知られている。
「Vip」又は「VIP」又は「植物性殺虫タンパク質」は、Btの植物的に増殖した株の上清を、考えられる殺虫活性についてスクリーニングして発見されたタンパク質を指す。Vipsは、Cryタンパク質とほとんど又は全く類似していない。特に本文書による使用及び好ましい使用は、Lepidopteran活性を有する、VIP3又はVip3タンパク質と呼ばれてきたものである。Vipは、Bt cryペプチドと同様の作用様式を有すると考えられている。
「ガラス化」は、材料をガラス状非晶質材料に変換するプロセスを指す。ガラス状非晶質固体は、いずれの結晶構造も含まなくてもよい。ガラス転移温度(Tg)でガラス質固体の固化が生じる。
「野生型」又は「WT」は、生物、ポリヌクレオチド配列、及び/又はポリペプチド配列が、その天然に存在する状態又は条件で見出されかつ/又は観察される、表現型及び/又は遺伝子型(すなわち、外観又は配列)を指す。
「酵母発現ベクター」又は「発現ベクター」又は「ベクター」とは、酵母細胞に転写及び翻訳される異種遺伝子及び/又は発現カセットを導入することができるプラスミドを意味する。
「収率」は、ペプチドの産生を指し、収率の増加は、産生量の増加、産生速度の増加、及び収率の平均値又は中央値の増加、及びより高い収率での頻度の増加を意味し得る。「収率」という用語は、「植物の収率」と同様に、植物作物の成長及び/又は生産に関連して使用される場合、植物によって産生されるバイオマスの質及び/又は量を指す。
本明細書全体を通して、特に別段の定めがない限り、又は文脈上別段の定めが必要でない限り、単一のステップ、物質の組成物、一群のステップ、又は一群の物質の組成物は、それらのステップ、物質の組成物、一群のステップ、又は一群の物質の組成物のうちの1つ及び複数(すなわち、1つ以上)を包含するものとみなされなければならない。
本開示は、別段の指示がない限り、分子生物学、微生物学、ウイルス学、組換えDNA技術、固相及び液体核酸合成、溶液中のペプチド合成、固相ペプチド合成、免疫学、細胞培養、及び製剤の従来の技法を使用して、過度の実験なしで実施される。かかる手順は、例えば、Sambrook,Fritsch & Maniatis,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratories,New York,Second Edition(1989),I,II,及びIII巻の全て、DNA Cloning:A Practical Approach,Vols.I and II(D.N.Glover,ed.,1985),IRL Press,Oxford,全てのテキスト、Oligonucleotide Synthesis:A Practical Approach(M.J.Gait,ed,1984)IRL Press,Oxford,全てのテキスト、及び、特に、そこにあるGait,pp1-22、Atkinson et al,pp35-81、Sproat et al,pp 83-115、及びWu et al,pp 135-151による論文、4.Nucleic Acid Hybridization:A Practical Approach(B.D.Hames & S.J.Higgins,eds.,1985)IRL Press,Oxford,全てのテキスト、Immobilized Cells and Enzymes:A Practical Approach(1986)IRL Press,Oxford,全てのテキスト、Perbal,B.,A Practical Guide to Molecular Cloning(1984)、Methods In Enzymology(S.Colowick and N.Kaplan,eds.,Academic Press,Inc.),全てのシリーズ、J.F.Ramalho Ortigao,“The Chemistry of Peptide Synthesis”In:Knowledge database of Access to Virtual Laboratory website(Interactiva,Germany)、Sakakibara,D.,Teichman,J.,Lien,E.Land Fenichel,R.L.(1976).Biochem.Biophys.Res.Commun.73 336-342、Merrifield,R.B.(1963).J.Am.Chem.Soc.85,2149-2154、Barany,G.and Merrifield,R.B.(1979)in“The Peptides”(Gross,E.and Meienhofer,3.eds.),vol.2,pp.1-284,Academic Press,New York.12.Wiinsch,E.,ed.(1974)Synthese von Peptiden in Houben-Weyls Metoden der Organischen Chemie(Muler,E.,ed.),vol.15,4th ed.,Parts 1 and 2,Thieme,Stuttgart、Bodanszky,M.(1984)Principles of Peptide Synthesis,Springer-Verlag,Heidelberg、Bodanszky,M.& Bodanszky,A.(1984)The Practice of Peptide Synthesis,Springer-Verlag,Heidelberg、Bodanszky,M.(1985)Int.J.Peptide Protein Res.25,449-474、Handbook of Experimental Immunology,Vols.I-IV(D.M.Weir and C.C.Blackwell,eds.,1986,Blackwell Scientific Publications)、並びにAnimal Cell Culture:Practical Approach,Third Edition(John R.W.Masters,ed.,2000)に記載されている(これらの参考文献の各々は、それらの全体が参照により本明細書に援用される)。
本明細書全体を通して、文脈上別段の定めが必要でない限り、「含む(comprise)」、又は「含む(comprises)」若しくは「含む(comprising)」などの変形例は、記載されたステップ若しくは要素若しくは整数、又は一群のステップ若しくは要素若しくは整数の包含を意味するが、任意の他のステップ若しくは要素若しくは整数、又は一群の要素若しくは整数の除外を意味するものではないことが理解されるであろう。
本明細書で言及される全ての特許出願、特許、及び刊行物は、各個々の刊行物、特許、又は特許出願が、その全体が参照により援用されることが具体的かつ個別に示されるのと同じ程度に、それらの全体が参照により援用される。また、本明細書で引用される全ての特許出願、特許、及び刊行物は、任意の定義、主題の免責事項、又は否認を除いて、かつ援用された資料が本明細書の開示と矛盾する場合を除いて(その場合は、本開示の文言が支配する)、参照によりその全体が本明細書に援用される。
システインリッチ殺虫タンパク質(CRIP)
本発明は、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含む組み合わせを提供する。いくつかの種類のCRIPが企図され、本明細書で教示される。本発明のCRIPは、本発明の殺虫剤(IA)と組み合わせて使用することができ、以下に詳細に記載される。本発明の組み合わせに好適であり、以下で企図される全てのCRIPには、CRIP-殺虫タンパク質が含まれる。
クモペプチド及び毒素
一部の実施形態では、CRIPは、以下のうちの1つから単離されたクモ毒素ペプチド又はタンパク質であり得る:Phoneutria nigriventer、Allagelena opulenta、Cupiennius salei、Plectreurys tristis、Coremiocnemis valida、Haplopelma huwenum、Agelena orientalis、Allagelena opulenta、Segestria florentina、Apomastus schlingeri、Phoneutria keyserlingi、Macrothele gigas、Macrothele raveni、Missulena bradleyi、Pireneitega luctuosa、Phoneutria reidyi、Illawara wisharti、Eucratoscelus constrictus、Agelenopsis aperta、Hololena curta、Oxyopes lineatus、Brachypelma albiceps、又はBrachypelma smithi。
一部の実施形態では、CRIPは、Hadronyche versuta若しくはブルーマウンテンファネルウェブスパイダー、Hadronyche venenata、Atrax robustus、Atrax formidabilis、又はAtrax infensusから単離され得る。
一部の実施形態では、CRIPは、以下のクモペプチド、ポリペプチド、及び/又は毒素のうちのいずれかであり得る:U+2-ACTX-Hv1a;Γ-CNTX-Pn1a;U13-クテニトキシン(ctenitoxin)-Pn1a、U13-クテニトキシン-Pn1b,U13-クテニトキシン-Pn1c、U1-アガトキシン-Aop1a、U1-クテニトキシン-Cs1a、U1-ネメトキシン-Csp1a、U1-ネメトキシン-Csp1b、U1-ネメトキシン-Csp1c、U1-プレクトキシン-Pt1a、U1-プレクトキシン-Pt1b、U1-プレクトキシン-Pt1c、U1-プレクトキシン-Pt1d、U1-プレクトキシン-Pt1f、U1-セラホトキシン-Cv1a、U1-セラホトキシン-Hh1a_1、U1-セラホトキシン-Hh1a_2、U1-セラホトキシン-Hh1a_3、U1-セラホトキシン-Hh1b、U1-セラホトキシン-Hh1c_1、U1-セラホトキシン-Hh1c_2、U1-セラホトキシン-Hh1d、U1-セラホトキシン-Hh1e、U1-セラホトキシン-Hh1f_1、U1-セラホトキシン-Hh1f_2、U1-セラホトキシン-Hh1f_3、U1-セラホトキシン-Hh1f_4、U1-セラホトキシン-Hh1g、U2-アガトキシン-Ao1a、U2-アガトキシン-Aop1a、U2-クテニトキシン-Cs1a、U2-クテニトキシン-Pn1a、U2-シルタウトキシン-As1a、U2-セゲストリトキシン-Sf1a、U2-セゲストリトキシン-Sf1b、U2-セゲストリトキシン-Sf1c、U2-セゲストリトキシン-Sf1d、U2-セゲストリトキシン-Sf1e、U2-セゲストリトキシン-Sf1f、U2-セゲストリトキシン-Sf1g、U2-セゲストリトキシン-Sf1h、U2-セラホトキシン-Hh1a、U3-シルタウトキシン-As1a、U3-プレクトキシン-Pt1a、U5-クテニトキシン-Pn1a、U7-クテニトキシン-Pk1a、β-ヘキサトキシン-Mg1a、β-ヘキサトキシン-Mr1a、Γ-クテニトキシン-Pn1a、δ-アクチノポジトキシン-Mb1a、δ-アマウロビトキシン-Pl1a、δ-アマウロビトキシン-Pl1b、δ-アマウロビトキシン-Pl1c、δ-アマウロビトキシン-Pl1d、δ-クテニトキシン-Asp2e、δ-クテニトキシン-Pn1a_1、δ-クテニトキシン-Pn1a_2、δ-クテニトキシン-Pn1b、δ-クテニトキシン-Pn2a、δ-クテニトキシン-Pn2b、δ-クテニトキシン-Pn2cδ-クテニトキシン-Pr2d、δ-ヘキサトキシン-Ar1a、δ-ヘキサトキシン-Hv1a、δ-ヘキサトキシン-Hv1b、δ-ヘキサトキシン-Iw1a、δ-ヘキサトキシン-Mg1a、δ-ヘキサトキシン-Mg1b、κ-ヘキサトキシン-Hf1a、κ-ヘキサトキシン-Hv1a、κ-ヘキサトキシン-Hv1b、κ-ヘキサトキシン-Hv1c_1、κ-ヘキサトキシン-Hv1c_2、κ-ヘキサトキシン-Hv1c_3、κ-ヘキサトキシン-Hv1c_4、κ-ヘキサトキシン-Hv1d、κ-ヘキサトキシン-Hv1e、κ-セラホトキシン-Ec2a、κ-セラホトキシン-Ec2b、μ-アガトキシン-Aa1a、μ-アガトキシン-Aa1b、μ-アガトキシン-Aa1c、μ-アガトキシン-Aa1d、μ-アガトキシン-Aa1e、μ-アガトキシン-Aa1f、μ-アガトキシン-Hc1a、μ-アガトキシン-Hc1b、μ-アガトキシン-Hc1c、μ-ヘキサトキシン-Mg1a、μ-ヘキサトキシン-Mg1b、μ-ヘキサトキシン-Mg1c、μ-ヘキサトキシン-Mg2a、μ-セラホトキシン-Hh1a、ω-アクチノポジトキシン-Mb1a、ω-アガトキシン-Aa4a、ω-アガトキシン-Aa4b、ω-アガトキシン-Aa4c、ω-ヘキサトキシン-Ar1a_1、ω-ヘキサトキシン-Ar1a_3、ω-ヘキサトキシン-Ar1b_1、ω-ヘキサトキシン-Ar1d_1、ω-ヘキサトキシン-Ar1d_4、,ω-ヘキサトキシン-Ar1e_1 ω-ヘキサトキシン-Ar1f、ω-ヘキサトキシン-Ar1g_1、ω-ヘキサトキシン-Ar1h、ω-ヘキサトキシン-Ar2a、ω-ヘキサトキシン-Ar2b、ω-ヘキサトキシン-Ar2c、ω-ヘキサトキシン-Ar2d、ω-ヘキサトキシン-Ar2e_1、ω-ヘキサトキシン-Ar2e_2、ω-アトラコトキシン-Asp2a、ω-ヘキサトキシン-Asp2b、ω-ヘキサトキシン-Hf1a、ω-ヘキサトキシン-Hi1a_1、ω-ヘキサトキシン-Hi1a_2、ω-ヘキサトキシン-Hi1a_3、ω-ヘキサトキシン-Hi1b_1、ω-ヘキサトキシン-Hi1b_10、ω-ヘキサトキシン-Hi1b_2、ω-ヘキサトキシン-Hi1b_5、ω-ヘキサトキシン-Hi1b_8、ω-ヘキサトキシン-Hi1c_1、ω-ヘキサトキシン-Hi1c_2、ω-ヘキサトキシン-Hv1a、ω-ヘキサトキシン-Hv1b、ω-ヘキサトキシン-Hv1c、ω-ヘキサトキシン-Hv1d、ω-ヘキサトキシン-Hv1e、ω-ヘキサトキシン-Hv1f、ω-ヘキサトキシン-Hv1g_1、ω-ヘキサトキシン-Hv1g_5ω-ヘキサトキシン-Hv1g_6ω-ヘキサトキシン-Hv2a、ω-ヘキサトキシン-Hv2b_1、ω-ヘキサトキシン-Hv2b_2、ω-ヘキサトキシン-Hv2b_3、ω-ヘキサトキシン-Hv2b_4、ω-ヘキサトキシン-Hv2b_5、ω-ヘキサトキシン-Hv2b_6、ω-ヘキサトキシン-Hv2b_7、ω-ヘキサトキシン-Hv2c、ω-ヘキサトキシン-Hv2d_1、ω-ヘキサトキシン-Hv2d_2、ω-ヘキサトキシン-Hv2d_3、ω-ヘキサトキシン-Hv2e、ω-ヘキサトキシン-Hv2f、ω-ヘキサトキシン-Hv2g、ω-ヘキサトキシン-Hv2h_1、ω-ヘキサトキシン-Hv2h_2、ω-ヘキサトキシン-Hv2i、ω-ヘキサトキシン-Hv2j_1、ω-ヘキサトキシン-Hv2j_2、ω-ヘキサトキシン-Hv2k、ω-ヘキサトキシン-Hv2l、ω-ヘキサトキシン-Hv2m_1、ω-ヘキサトキシン-Hv2m_2、ω-ヘキサトキシン-Hv2m_3、ω-ヘキサトキシン-Hv2n、ω-ヘキサトキシン-Hv2o、ω-ヘキサトキシン-Hvn1a、ω-ヘキサトキシン-Hvn1b_1、ω-ヘキサトキシン-Hvn1b_2、ω-ヘキサトキシン-Hvn1b_3、ω-ヘキサトキシン-Hvn1b_4、ω-ヘキサトキシン-Hvn1b_6、ω-ヘキサトキシン-Iw2a、ω-オキソトキシン-Ol1b、ω-プレクトキシン-Pt1a、ω-セラホトキシン-Asp1a、ω-セラホトキシン-Asp1f、ω-セラホトキシン-Asp1g、ω-セラホトキシン-Ba1a、ω-セラホトキシン-Ba1b、ω-セラホトキシン-Bs1a、ω-セラホトキシン-Bs2a、又はω-セラホトキシン-Hh2a。
一部の実施形態では、CRIPは、配列番号192~278及び281~370のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するクモ毒素ペプチド又はタンパク質であり得る。
一部の実施形態では、CRIPをコードするポリヌクレオチドは、配列番号192~278及び281~370に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有するCRIPをコードすることができる。
ACTXペプチド
一部の実施形態では、CRIPは、ACTXペプチドであり得る。
一部の実施形態では、CRIPは、以下のACTXペプチドのうちの1つ以上であり得る:U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、rκ-ACTX-Hv1c、ω-ACTX-Hv1a、及び/又はω-ACTX-Hv1a+2。
例示的なACTXペプチドは、以下を含む:アミノ酸配列「QYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA」(配列番号60)を有するU-ACTX-Hv1a、アミノ酸配列「GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA」(配列番号61)を有するU+2-ACTX-Hv1a、アミノ酸配列「SPTCIPSGQPCPYNENCCSQSCTFKENENGNTVKRCD」(配列番号62)を有するオメガ-ACTX-Hv1a、アミノ酸配列「GSSPTCIPSGQPCPYNENCCSQSCTFKENENGNTVKRCD」(配列番号63)を有する「ω+2-ACTX-Hv1a+2」(又は「オメガ+2-ACTX-Hv1a」)、及びアミノ酸配列「GSAICTGADRPCAACCPCCPGTSCKAESNGVSYCRKDEP」(配列番号64)を有するカッパ+2-ACTX-Hv1a(又はκ+2-ACTX-Hv1a)。
一部の実施形態では、CRIPは、アミノ酸配列「AICTGADRPCAACCPCCPGTSCKAESNGVSYCRKDEP」(配列番号594)を有する「カッパ-ACTX-Hv1a」(又はκ+2-ACTX-Hv1a)であり得る。
一部の実施形態では、ACTXペプチドは、配列番号60~64、192~370、及び594に対して少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、少なくとも99.9%、又は100%のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
一部の実施形態では、ACTXペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号60~64及び594に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有するACTXペプチドをコードすることができる。
CNTX-Pn1aペプチド
一部の好ましい実施形態では、CRIPは、Γ-CNTX-Pn1a又はγ-CNTX-Pn1a毒素であり得る。Γ-CNTX-Pn1aペプチドは、ブラジル武装グモPhoneutria nigriventerに由来する殺虫ニューロトキシンである。Γ-CNTX-Pn1aは、N-メチル-D-アスパラギン酸(NMDA)サブタイプのイオンチャネル型グルタミン酸受容体(GRIN)、及びナトリウムチャネルを標的とする。例示的な野生型完全長Γ-CNTX-Pn1aペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する:MKVAIVFLSLLVLAFASESIEENREEFPVEESARCADINGACKSDCDCCGDSVTCDCYWSDSCKCRESNFKIGMAIRKKFC(配列番号689)(NCBI受託番号P59367)。「GSCADINGACKSDCDCCGDSVTCDCYWSDSCKCRESNFKIGMAIRKKFC」(配列番号65)のアミノ酸配列を有する、組換え成熟Γ-CNTX-Pn1aペプチドが提供される。
一部の実施形態では、Γ-CNTX-Pn1aペプチドは、配列番号65と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
一部の実施形態では、Γ-CNTX-Pn1aペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号65に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1aペプチドをコードすることができる。
野生型U1-アガトキシン及びTVP
「ホボスパイダー(Hobo spider)」(Eratigena agrestis、旧Tegenaria agrestis)は、Agelenidae科のクモ、すなわちファネルウェブスパイダー(funnel web weaver)のメンバーである毒グモである。Ingale A,Antigenic epitopes prediction and MHC binder of a paralytic insecticidal toxin(ITX-1)of Tegenaria agrestis(hobo spider).4 August 2010 Volume 2010:2 pp 97-103を参照されたい。ホボスパイダーの毒液は、殺虫活性を持っているとされている。Johnson et al.,Novel insecticidal peptides from Tegenaria agrestis spider venom may have a direct effect on the insect central nervous system.Arch Insect Biochem Physiol.1998;38(1):19-31、Klint et al.,Production of Recombinant Disulfide-Rich Venom Peptides for Structural and Functional Analysis via Expression in the Periplasm of E.coli.PLoS One.2013;8(5):e63865を参照されたい。
ホボスパイダーは、Agelenidae科の他のいくつかのクモとともに、殺虫活性を示すアガトキシンを含む毒液を産生する。アガトキシンは、標的種に応じて様々な殺虫効果を誘発することができる化学的に多様な毒素の群であり、例えば、アガトキシンは、Coleoptera、Lepidopteran、及びDipteraにおける遅発性痙性麻痺を引き起こし、イエバエの中枢神経系(CNS)におけるニューロン発火の速度を増加させ(Musca domestica)、他の昆虫(例えば、ホホアカクロバエ(blowfly)、Lucilia cuprina)に対して致死性である。したがって、アガトキシンは、CNSの標的化に関与する。Undheim et al.,Weaponization of a hormone:convergent recruitment of hyperglycemic hormone into the venom of arthropod predators.Structure 23:1283-1292、及びJohnson et al.,Novel insecticidal peptides from Tegenaria agrestis spider venom may have a direct effect on the insect central nervous system.Arch.Insect Biochem.Physiol.38:19-31(1998)を参照されたい。
2つの種類のアガトキシンとしては、ともに螺旋状節足動物神経ペプチド由来(HAND)毒素ファミリーのメンバーであるU1-アガトキシン-Ta1a及びU1-アガトキシン-Ta1bが挙げられる。クモに加えて、これらの毒素は、ムカデ類の毒液中にも見出される。アガトキシンは、古代の脱皮動物ホルモンファミリー、すなわち、イオン輸送ペプチド/甲殻類血糖上昇ホルモン(ITP/CHH)ファミリーの進化的派生物である。Undheim et al.,Weaponization of a hormone:convergent recruitment of hyperglycemic hormone into the venom of arthropod predators.Structure 23:1283-1292、及びJohnson et al.,Novel insecticidal peptides from Tegenaria agrestis spider venom may have a direct effect on the insect central nervous system.Arch.Insect Biochem.Physiol.38:19-31(1998)を参照されたい。
ホボスパイダー由来U1-アガトキシン-Ta1b毒素は、「MKLQLMICLVLLPCFFCEPDEICRARMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYTACHEAQKG(配列番号48)」の完全長アミノ酸配列を有し、アミノ酸位置1~17からのシグナルペプチド、及び位置18~68からの成熟毒素を含む。同文献。タンパク質は、β鎖が存在しない、密に詰まった4つのαヘリックスを含み、成熟毒素の分子量は、5700.39ダルトン(Da)である。同文献。
Eratigena agrestis由来の例示的な成熟野生型U1-アガトキシン-Ta1bポリペプチドが提供され、以下のアミノ酸配列を有する:「EPDEICRARMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYTACHEAQKG」(配列番号1)。
タンパク質プロセシング中、成熟野生型U1-アガトキシン-Ta1b毒素は、C末端グリシンの切除事象を受け、以下のアミノ酸配列が得られる:EPDEICRARMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYTACHEAQK(配列番号60)。その後の翻訳後事象は、C末端アミド化を有する成熟野生型U1-アガトキシン-Ta1b毒素をもたらす。
U1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、何らかの形で野生型U1-アガトキシン-Ta1b(配列番号1)とは異なる変異体又はバリアントであり、例えば、一部の実施形態では、この相違は、野生型U1-アガトキシン-Ta1bをコードするポリヌクレオチドに対するアミノ酸置換、欠失、若しくは付加、又は変化であり得、アミノ酸置換、欠失、若しくは付加をもたらすことができる。このバリエーションの結果は、野生型U1-アガトキシン-Ta1bと比較して、1つ以上の昆虫種に対する増強された殺虫活性を有する、天然に存在しないポリペプチド及び/又はそれをコードするポリヌクレオチド配列である。
一部の実施形態では、TVPは、表1に示されるように、配列番号2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、又は653~654によるアミノ酸配列を有することができる。
Figure 2023524083000003
Figure 2023524083000004
Figure 2023524083000005
Figure 2023524083000006
Figure 2023524083000007
Figure 2023524083000008
Figure 2023524083000009
Figure 2023524083000010
Figure 2023524083000011
Figure 2023524083000012
Figure 2023524083000013
Figure 2023524083000014
一部の実施形態では、配列番号2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、又は653~654による配列を有するポリヌクレオチド配列は、TVPをコードするように動作可能である。例えば、一部の実施形態では、表2に示されるポリヌクレオチドは、TVPをコードするように動作可能である。
Figure 2023524083000015
Figure 2023524083000016
Figure 2023524083000017
Figure 2023524083000018
Figure 2023524083000019
Figure 2023524083000020
Figure 2023524083000021
Figure 2023524083000022
例示的なTVP
TVP、及びTVPをコードするように動作可能なポリヌクレオチドの例示的な記載は、国際出願第PCT/US21/28254号に提供されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
一部の実施形態では、TVPは、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して1つ以上の変異を含む。例えば、一部の実施形態では、TVPは、配列番号1に示されるU1-アガトキシンTa1bの野生型配列と比較して第1、第2、又は第3の変異を有し得る。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、若しくは100%同一であるアミノ酸配列を含むTVP、又はその薬学的に許容される塩であり得る:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T、又はSであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E、又はRであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在である)。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、若しくは100%同一であるアミノ酸配列を含むTVP、又はその薬学的に許容される塩であり得る:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T、又はSであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E、又はRであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、X、X、X、X、又はXに1つのアミノ酸置換を有する)。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、若しくは100%同一であるアミノ酸配列を含むTVP、又はその薬学的に許容される塩であり得る:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列に対して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T、又はSであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E、又はRであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、X、X、X、X、又はXに1つのアミノ酸置換を有し、Xが、グリシンである)。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、若しくは100%同一であるアミノ酸配列を含むTVP、又はその薬学的に許容される塩であり得る:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列に対して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T、又はSであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E、又はRであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、X、X、X、X、又はXに1つのアミノ酸置換を有し、Xが、不在である)。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、若しくは100%同一であるアミノ酸配列を含むTVP、又はその薬学的に許容される塩であり得る:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T、又はSであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E、又はRであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、X、X、X、X、又はXに1つのアミノ酸置換を有し、X及びXが、不在である)。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、若しくは100%同一であるアミノ酸配列を含むTVP、又はその薬学的に許容される塩であり得る:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T、又はSであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E、又はRであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、配列番号2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、又は653~654のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を含む)。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、若しくは100%同一であるアミノ酸配列を含むTVP、又はその薬学的に許容される塩であり得る:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T、又はSであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E、又はRであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、配列番号17~30、54~58、又は655~688のうちのいずれか1つに示されるポリヌクレオチド配列によってコードされる)。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を含むTVPであり得る:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T、又はSであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E、又はRであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、2つ以上のTVPのホモポリマー又はヘテロポリマーを更に含み、各TVPのアミノ酸配列が、同じか又は異なる)。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を含むTVPであり得る:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T、又はSであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E、又はRであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、切断可能又は切断不能リンカーによって分離された2つ以上のTVPを含む融合タンパク質であり、各TVPのアミノ酸配列が、同じか又は異なり得る)。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を含むTVPであり得る:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T、又はSであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E、又はRであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、切断可能又は切断不能リンカーによって分離された2つ以上のTVPを含む融合タンパク質であり、各TVPのアミノ酸配列が、同じか又は異なり得、リンカーが、昆虫の腸又は血リンパ内で切断可能である)。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号61~70のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、若しくは100%同一であるアミノ酸配列を含むTVP、又はその薬学的に許容される塩であり得る:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T、又はSであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E、又はRであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、ZがT又はSの場合、TVPが、グリコシル化されている)。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、アミノ酸配列「EPDEICRAQMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYAACHEAQKG」(配列番号51)と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を含むTVPであり得る。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、以下の式(II)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、若しくは100%同一であるアミノ酸配列を含むTVP、又はその薬学的に許容される塩であり得る:E-P-D-E-I-C-R-A-X-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-K-G(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、R又はQであり、Zが、T又はAである)。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、以下の式(II)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、若しくは100%同一であるアミノ酸配列を含むTVP、又はその薬学的に許容される塩であり得る:E-P-D-E-I-C-R-A-X-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-K-G(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、R又はQであり、Zが、T又はAであり、ZがTである場合、TVPが、グリコシル化されている)。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、以下の式(II)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、若しくは100%同一であるアミノ酸配列を含むTVP、又はその薬学的に許容される塩であり得る:E-P-D-E-I-C-R-A-X-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-K-G(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、R又はQであり、Zが、T又はAであり、Xが、Qであり、Zが、Aである)。
一部の実施形態では、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)は、配列番号2、49、又は51のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、若しくは100%同一であるアミノ酸配列を含むTVP、又はその薬学的に許容される塩であり得る。
一部の実施形態では、TVPは、以下のアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を含み得る:「EPDEICRAQMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYAACHEAQKG」(配列番号51)。
一部の好ましい実施形態では、TVPは、TVP-R9Q/T43A(配列番号51)であり得る。
様々な実施形態では、TVPをコードするポリヌクレオチドを使用して、植物細胞、酵母細胞、又は細菌細胞を形質転換することができる。一部の実施形態では、殺虫TVPトランスジェニックタンパク質は、当業者に既知の任意の様式で、植物又はその一部の表面に噴霧するか、又はその他、適用することができる組成物に製剤化され得る。したがって、宿主細胞、例えば植物細胞における適切な条件下で1つ以上のTVPをコードするように動作可能なDNA構築物が本明細書に提供される。植物細胞の寄生性昆虫による害虫感染を制御するための方法は、本明細書に記載されるTVPをコードするポリヌクレオチドを、組換え技術によって、植物、植物組織、又は植物細胞に投与又は導入することと、当該組換えにより改変された植物、植物組織、又は植物細胞を、害虫に曝露された野外で育てることと、を含む。あるいは、TVPは、TVP及び賦形剤からなる噴霧用組成物に製剤化することができ、感染性昆虫によるTVPの摂取時に有害な効果をもたらすように直接適用することによって、感受性の植物に直接適用することができる。
サソリペプチド及び毒素
一部の実施形態では、CRIPは、以下のサソリペプチド、ポリペプチド、及び/又は毒素のうちのいずれかであり得る:インペラトキシン-A(IpTxa)、カリウムチャネル毒素α-KTx10.2(コバトキシン-2)、カリウムチャネル毒素α-KTx11.1(パラブトキシン-1)、カリウムチャネル毒素α-KTx11.2(パラブトキシン-2)、カリウムチャネル毒素α-KTx11.3(パラブトキシン-10)、カリウムチャネル毒素α-KTx12.1(ブタントキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx12.2(ブタントキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx12.3(ブタントキシン様ペプチド)、カリウムチャネル毒素α-KTx15.1(ペプチドAa1)、カリウムチャネル毒素α-KTx15.3(毒素AmmTX3)、カリウムチャネル毒素α-KTx15.6(ディスクレピン)、カリウムチャネル毒素α-KTx16.1(タムロトキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx19.1(ニューロトキシンBmBKTx1)、カリウムチャネル毒素α-KTx1.3(イベリオトキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx1.4(リンバトキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx1.7(Lqh15-1)、カリウムチャネル毒素α-KTx1.9(ホンゴトキシン-2)、カリウムチャネル毒素α-KTx1.10(パラブトキシン-3)、カリウムチャネル毒素α-KTx1.11(スロトキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx1.13(カリブドトキシンC)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.1(ノキシウストキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.2(マルガトキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.3(CllTx1)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.4(ノキシウストキシン-2)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.5(ホンゴトキシン-1)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.6(ホンゴトキシン-3)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.7(CllTx2)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.8(毒素Ce1)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.9(毒素Ce2)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.10(毒素Ce3)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.11(毒素Ce4)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.12(毒素Ce5)、カリウムチャネル毒素α-KTx3.1(カリオトキシン-1)、カリウムチャネル毒素α-KTx3.2(アジトキシン-2)、カリウムチャネル毒素α-KTx3.3(アジトキシン-3)、カリウムチャネル毒素α-KTx3.4(アジトキシン-1)、カリウムチャネル毒素α-KTx3.7(OsK-1)、カリウムチャネル毒素α-KTx3.8(カリブドトキシン様ペプチドBs6)、カリウムチャネル毒素α-KTx3.9(カリオトキシン-3)、カリウムチャネル毒素α-KTx4.1(チチュストキシンK-α)、カリウムチャネル毒素α-KTx4.3(毒素TdK1)、カリウムチャネル毒素α-KTx4.4(毒素Tc30)、カリウムチャネル毒素α-KTx5.1(レイウロトキシン-1)、カリウムチャネル毒素α-KTx5.2(レイウロトキシン様毒素P05)、カリウムチャネル毒素α-KTx5.4(タマピン)、カリウムチャネル毒素α-KTx5.5(タマピン-2)、カリウムチャネル毒素α-KTx6.1(カリウムチャネル遮断毒素1)、カリウムチャネル毒素α-KTx6.2(マウロトキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx6.3(ニューロトキシンHsTX1)、カリウムチャネル毒素α-KTx6.12(アヌロクトキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx6.13(スピノキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx6.14(HgeTx1)、カリウムチャネル毒素α-KTx7.2(毒素PiTX-K-β)、カリウムチャネル毒素γ-KTx1.2(Ergtoxin様タンパク質1)、カリウムチャネル毒素γ-KTx1.3(Ergtoxin様タンパク質1)、カリウムチャネル毒素γ-KTx1.4(Ergtoxin様タンパク質1)、カリウムチャネル毒素γ-KTx1.5(Ergtoxin様タンパク質1)、カリウムチャネル毒素γ-KTx1.6(Ergtoxin様タンパク質1)、カリウムチャネル毒素γ-KTx4.2(Ergtoxin様タンパク質5)、インセクトトキシン-I1、スモールトキシン(ペプチドI)、インセクトトキシン-I3(BeI3)、インセクトトキシン-I4(BeI4)、インセクトトキシン-I5A、ニューロトキシン8(ニューロトキシンVIII)、推定毒素Lqh8/6、ニューロトキシン9(ニューロトキシンIX)、マウロカルシン(MCa)、クロロトキシン様ペプチドBs14(Bs14)、クロロトキシン(CTX)、ニューロトキシンP2、インセクトトキシン-I5(BeI5)、カリウムチャネル毒素α-KTx6.15(ヘミトキシン)、毒素GaTx1、AahIT1、ファオドトキシン、BaIT2、BotIT1、BotIT2、BmK M1、BmK-M2、BmK-M4、BmK-M7、BmK IT-AP、Bom3、Bom4、BjaIT、Bj-xtrIT、BjIT2、LqhaIT、Lqhb1、LqhIT2、LqhdprIT3a、Lgh-xtrIT、Lqh3、Lqh6、Lqh7、LqqIT1、LqqIT2、Lqq3、OD1、Ts1、又はTz1。
一部の実施形態では、CRIPは、配列番号88~191のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するサソリペプチドであり得る。
一部の実施形態では、CRIPは、インペラトキシンであり得る。インペラトキシンは、アフリカサソリ(Pandinus imperator)の毒液に由来するペプチド毒素である。
一部の実施形態では、CRIPは、インペラトキシンであってもよく、インペラトキシンは、インペラトキシンA(IpTx-a)又はそのバリアントである。一部の実施形態では、IpTx-aは、GDCLPHLKRCKADNDCCGKKCKRRGTNAEKRCR(配列番号66)のアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、CRIPは、AaIT1毒素であり得る。タンパク質毒素AalT1は、北アフリカ砂漠サソリ(Androctonus australis)由来のナトリウムチャネル部位4毒素である。例示的なAaIT1毒素は、配列番号88(NCBI受託番号P01497.2)によるアミノ酸配列を有するペプチドである。AaIT1は、部位4毒素であり、活性化反応エネルギー障壁を低下させることによって、昆虫ナトリウムチャネルを強制的に開口する。
一部の実施形態では、サソリペプチドは、配列番号66、88~191と、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、少なくとも99.9%、又は100%のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
一部の実施形態では、サソリペプチド又は毒素をコードするポリヌクレオチドは、配列番号66、88~191に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有するサソリペプチド又は毒素をコードすることができる。
イソギンチャクペプチド及び毒素
一部の実施形態では、CRIPは、イソギンチャクから単離され得る。例えば、一部の実施形態では、イソギンチャクは、Actinia equina、Anemonia erythraea、Anemonia sulcata、Anemonia viridis、Anthopleura elegantissima、Anthopleura fuscoviridis、Anthopleura xanthogrammica、Bunodosoma caissarum、Bunodosoma cangicum、Bunodosoma granulifera、Heteractis crispa、Parasicyonis actinostoloides、Radianthus paumotensis、又はStoichactis helianthusであり得る。更に他の実施形態では、イソギンチャク毒素は、Av2、Av3、又はそのバリアントであり得る。
一部の実施形態では、CRIPは、以下のイソギンチャク毒素のうちの1つであり得る:毒素AETX-1(AETX I)、毒素APETx1、毒素APETx2、降圧タンパク質BDS-1(降圧物質I)、降圧タンパク質BDS-2(降圧物質II)、ニューロトキシンBg-2(Bg II)、ニューロトキシンBg-3(Bg III)、毒素APE1-1、毒素APE1-2、ニューロトキシン1(毒素ATX-I)、ニューロトキシン1(ニューロトキシンI)、ニューロトキシン1(毒素RTX-I)、ニューロトキシン1(毒素SHP-I)、毒素APE2-1、毒素APE2-2、ニューロトキシン-2(毒素ATX-II)、(aka AV2)ニューロトキシン-2(毒素AFT-II)、ニューロトキシン2(毒素RTX-II)、ニューロトキシン2(ニューロトキシンII)、ニューロトキシン3ホモログ(ニューロトキシンIIIホモログ)、ニューロトキシン3(毒素RTX-III)、ニューロトキシン3(ニューロトキシン-III)、ニューロトキシン4(毒素RTX-IV)、ニューロトキシン-5(毒素ATX-V))、ニューロトキシン5(毒素RTX-V)、アントプロイリン-A(毒素AP-A)、アントプロイリン-B(毒素AP-B)、アントプロイリン-C(毒素AP-C)、カリウムチャネル毒素Aek、カリウムチャネル毒素Bgk、主要なニューロトキシンBcIII、ニューロトキシンBcIV、カンギトキシン(CGTX)、カリウムチャネル毒素ShK、毒素PCR1(PCR1-2)、毒素PCR2(PCR2-5)、毒素PCR3(PCR2-1)、毒素PCR4(PCR2-10)、毒素PCR6(PCR3-7)、カンギトキシン-2(カンギトキシンII)、又はカンギトキシン-3(カンギトキシンIII)。
一部の実施形態では、CRIPは、配列番号371~411に示されるアミノ酸配列を有するイソギンチャクペプチドであり得る。
一部の実施形態では、本発明のCRIPは、それ自体を防御するために使用する様々な毒素を有する、イソギンチャクAnemonia viridisに由来する1つ以上のポリペプチドであり得る。Anemonia viridisに由来する毒素のうちの1つは、ニューロトキシン「Av3」である。Av3は、受容体部位3における電位依存性ナトリウム(Na)チャネルの不活性化を阻害し、収縮性麻痺をもたらす、III型イソギンチャク毒素である。Av3毒素が部位3に結合すると、ナトリウムチャネルが不活性化状態になり、不安定化され、次いで、チャネルが開口位置に留まる(Blumenthal et al.,Voltage-gated sodium channel toxins:poisons,probes,and future promise.Cell Biochem Biophys.2003;38(2):215-38を参照されたい)。Av3は、甲殻類及び昆虫のナトリウムチャネルに対して高い選択性を示し、哺乳類のナトリウムチャネルに対して低い選択性を示す(Moran et al.,Sea anemone toxins affecting voltage-gated sodium channels-molecular and evolutionary features,Toxicon.2009 Dec 15;54(8):1089-1101を参照されたい)。配列番号44のアミノ酸配列を有する、Anemonia viridis由来の例示的なAv3ポリペプチドが提供される。
一部の実施形態では、本発明のCRIPは、Av3バリアントポリペプチド(AVP)であり得る。一部の実施形態では、AVPは、以下の配列番号44からのアミノ酸バリエーションを有することができる:配列番号44と比較してR1KのN末端アミノ酸置換(野生型「RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV」から「KSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV」(配列番号45)へのポリペプチド配列の変更)、配列番号44と比較してC末端アミノ酸の欠失(野生型「RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV」から「RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPK」(配列番号46)へのポリペプチド配列の変更)、並びに/又はN末端変異及びC末端変異(N末端アミノ酸が、配列番号44と比較してR1Kの置換を有し得、C末端アミノ酸が、配列番号44と比較して欠失され得る、野生型「RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV」から「KSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPK」(配列番号47)へのポリペプチド配列の変更)。
一部の実施形態では、例示的なAv3ペプチド又はそのバリアントは、「Av3変異体殺虫ポリペプチド並びにその製造及び使用方法」と題する2019年9月13日に出願された本出願人のPCT出願(国際出願PCT/US19/51093号)に記載されており、その開示及びAv3ペプチド又はそのバリアントの開示が記載され、参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の実施形態では、イソギンチャクペプチドは、配列番号44~47及び371~411と、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、少なくとも99.9%、又は100%のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
一部の実施形態では、イソギンチャクペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号44~47及び371~411に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有するイソギンチャクペプチドをコードすることができる。
イモガイペプチド及びコノトキシン
コノトキシンはイモガイから分離された毒素であり、これらの毒素は、ニューロンのコミュニケーションを妨げることによって作用する。コノトキシンの例としては、α-、ω-、μ-、δ-、及びκ-コノトキシンが挙げられる。簡潔に、α-コノトキシン(及びαA-及びφ-コノトキシン)は、ニコチン性リガンド依存性チャネルを標的とし、ω-コノトキシンは、電位依存性カルシウムチャネルを標的とし、μ-コノトキシンは、電位依存性ナトリウムチャネルを標的とし、δ-コノトキシンは、電位依存性ナトリウムチャネルを標的とし、κ-コノトキシンは、電位依存性カリウムチャネルを標的とする。
一部の実施形態では、CRIPは、イモガイ属に属する生物から単離することができ、単離されたペプチドは、コノトキシンである。
一部の実施形態では、CRIPは、Conus amadis、Conus catus、Conus ermineus、Conus geographus、Conus gloriamaris、Conus kinoshitai、Conus magus、Conus marmoreus、Conus purpurascens、Conus stercusmuscarum、Conus striatus、Conus textile、又はConus tulipaから単離され得る。
他のCRIP
一部の実施形態では、CRIPは、節足動物、クモ、サソリ、昆虫、ミツバチ、スズメバチ、ムカデ、甲殻類、爬虫類、ヘビ、トカゲ、両生類、カエル、サンショウウオ、軟体動物、イモガイ、刺胞動物、イソギンチャク、クラゲ、ヒドロ虫、頭足類、タコ、イカ、コウイカ、魚、若しくは哺乳類から産生及び/又は単離される毒素、ペプチド、若しくはタンパク質(別名、毒液若しくは毒ペプチド若しくはタンパク質)であり得る。
一部の実施形態では、CRIPは、ヘビ毒液、又はそれ由来の毒素であり得る。
CRIP-殺虫タンパク質
CRIP-殺虫タンパク質は、以下からなる任意のタンパク質、ペプチド、ポリペプチド、アミノ酸配列、構成、又は配置である:(1)少なくとも1つのCRIP又は2つ以上のCRIP、及び(2)追加の非CRIPペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質(例えば、一部の実施形態では、以下を行う能力を有する:昆虫がCRIP-殺虫タンパク質に曝露される場合、CRIP単独と比較して、死亡率を増加させる、かつ/若しくは昆虫の成長を阻害すること、当該CRIP-殺虫タンパク質の発現を、例えば、宿主細胞若しくは発現システムにおいて、増加させること、及び/又はCRIP-殺虫タンパク質の翻訳後プロセシングに影響を与えること)。
一部の実施形態では、CRIP-殺虫タンパク質は、2つ以上のCRIPを含むポリマーであり得る。一部の実施形態では、CRIP-殺虫タンパク質は、2つ以上のCRIPを含むポリマーであってもよく、CRIPが、リンカーペプチド(例えば、切断可能及び/又は切断不能リンカー)を介して動作可能に連結される。
一部の実施形態では、CRIP-殺虫タンパク質は、安定化ドメイン(STA)、小胞体シグナル伝達タンパク質(ERSP)、昆虫切断可能又は昆虫切断不能リンカー(L)、及び/又はそれらの任意の他の組み合わせなどの1つ以上のタンパク質と動作可能に連結された1つ以上のCRIPを指すことができる。
一部の実施形態では、CRIP-殺虫タンパク質は、(1)野生型CRIPと、(2)追加のペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質(例えば、ERSP、リンカー、STA、UBI、又はヒスチジンタグ若しくは同様のマーカー)と、を含む、天然に存在しないタンパク質であり得る。
一部の実施形態では、CRIP-殺虫タンパク質は、(1)野生型CRIPと、(2)天然に存在しないCRIPと、を含む天然に存在しないタンパク質であり得る。
一部の実施形態では、CRIP-殺虫タンパク質は、(1)野生型CRIPと、(2)天然に存在しないCRIPと、(3)追加のペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質(例えば、ERSP、リンカー、STA、UBI、又はヒスチジンタグ若しくは同様のマーカー)と、を含む、天然に存在しないタンパク質であり得る。
一部の実施形態では、CRIP-殺虫タンパク質は、本明細書に記載のCRIPのうちのいずれかを含むことができる。
一部の実施形態では、殺虫タンパク質は、本明細書に開示される1つ以上のCRIPを含むことができる。一部の実施形態では、殺虫タンパク質は、CRIPホモポリマー(例えば、CRIPが同じである、2つ以上のCRIPモノマー)を含むことができる。一部の実施形態では、殺虫タンパク質は、CRIPヘテロポリマー(例えば、CRIPモノマーが異なる、2つ以上のCRIPモノマー)を含むことができる。
一部の実施形態では、殺虫タンパク質は、切断可能又は切断不能リンカーによって分離された2つ以上のCRIPを含む融合タンパク質を含むことができ、各CRIPのアミノ酸配列は、同じか又は異なり得る。
一部の実施形態では、殺虫タンパク質は、切断可能又は切断不能リンカーによって分離された2つ以上のCRIPを含む融合タンパク質を含むことができ、各CRIPのアミノ酸配列は、同じか又は異なり得、リンカーは、昆虫の腸又は血リンパ内で切断可能である。
一部の実施形態では、殺虫タンパク質は、切断可能又は切断不能リンカーによって分離された2つ以上のCRIPを含む融合タンパク質を含むことができ、各CRIPのアミノ酸配列は、同じか又は異なり得、リンカーは、哺乳動物の腸内で切断可能である。
切断可能及び切断不能リンカーの生成のための例示的な方法は、米国特許出願第15/727,277号、及び国際出願PCT/US2013/030042号に見出すことができる(それらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に援用される)。
CRIP又はペプチド-IAを産生するための方法
タンパク質を産生する方法は当該技術において周知であり、様々な技術が利用可能である。例えば、一部の実施形態では、タンパク質は、組換え法を使用して産生され得るか、又は化学的に合成され得る。本開示は、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、及び他のペプチド殺虫剤(ペプチド-IAs)を産生する方法を提供する。これらの方法は、以下に詳細に記載される。
一部の実施形態では、本発明のCRIPは、タンパク質を産生するための任意の既知の方法を使用して作製することができる。例えば、一部の実施形態では、CRIPは、限定されないが、酵母発現システム又は細菌発現システムなどの組換え発現システムを使用して作製することができる。しかしながら、当業者であれば、他のタンパク質産生の方法が利用可能であることを認識するであろう。
一部の実施形態では、本発明は、組換え発現システムを使用して、CRIPを産生する方法を提供する。
一部の実施形態では、本発明は、CRIPを産生する方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、当該方法は、(a)CRIPをコードするように動作可能なポリヌクレオチド、又はその相補ヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる第1の発現カセットを含むベクターを調製することと、(b)ベクターを宿主細胞(例えば、細菌若しくは酵母、又は昆虫、又は植物細胞、又は動物細胞)に導入することと、(c)CRIPの発現及びその培養培地への分泌を可能にするように動作可能な条件下で、酵母株を培養培地で増殖させることと、を含む。一部の関連する実施形態では、宿主細胞は、酵母細胞である。
本発明は、多種多様な宿主細胞において実施可能である(以下の宿主細胞のセクションを参照されたい)。実際、本発明のエンドユーザーは、自身が選択する任意の宿主細胞において、その教示を実践することができる。したがって、一部の実施形態では、宿主細胞は、エンドユーザーの要件を満たす任意の宿主細胞であってもよく、すなわち、一部の実施形態では、CRIPの発現は、様々な宿主細胞を使用して、かつ本明細書の教示に基づいて達成され得る。例えば、一部の実施形態では、ユーザーは、ある特定の種類の宿主細胞(例えば、酵母細胞又は細菌細胞)を、別のものとは対照的に使用することを望む場合があり、所与の宿主細胞の好みは、可用性からコストまでの範囲であり得る。
例えば、一部の実施形態では、本発明は、CRIPを産生する方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、当該方法は、(a)CRIPをコードするように動作可能なポリヌクレオチド、又はその相補ヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる第1の発現カセットを含むベクターを調製することと、(b)ベクターを宿主細胞(例えば、細菌若しくは酵母、又は昆虫、又は植物細胞、又は動物細胞)に導入することと、(c)CRIPの発現及びその培養培地への分泌を可能にするように動作可能な条件下で、酵母株を培養培地で増殖させることと、を含む。一部の関連する実施形態では、宿主細胞は、酵母細胞である。
野生型CRIPの単離及び変異誘発
CRIP又はペプチド-殺虫剤(ペプチド-IA)は、供給源から直接得ることができる(例えば、当該CRIP又はペプチド-IAを動物から単離すること)。変異体CRIP又はペプチド-IAは、野生型CRIP又はペプチド-IAポリヌクレオチド配列に変異を作製することと、そのCRIP又はペプチド-IAポリヌクレオチド配列を適切なベクターに挿入することと、CRIP又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチドが発現するような方法で宿主生物を形質転換することと、宿主生物を培養して所望の量のCRIP又はペプチド-IAを生成することと、次いで、宿主生物中及び/又はその周辺からCRIP又はペプチド-IAを精製することと、によって生成することができる。
野生型CRIP又はペプチド-IAポリヌクレオチド配列における変異の生成は、当業者に周知の様々な手段によって達成され得る。変異誘発の方法としては、クンケル法、カセット変異誘発、PCR部位特異的変異誘発、「完全殺人(perfect murder)」技術(delitto perfetto)、PCR及び1個のリサイクル可能なマーカーを用いた直接遺伝子欠失及び部位特異的変異誘発、長い相同領域を用いたPCR及び1個のリサイクル可能なマーカーを用いた直接遺伝子欠失及び部位特異的変異誘発、「ポップインポップアウト」法、並びにCRISPR-Cas 9が挙げられる。部位特異的変異誘発の例示的な方法は、Ruvkun & Ausubel,A general method for site-directed mutagenesis in prokaryotes.Nature.1981 Jan 1;289(5793):85-8、Wallace et al.,Oligonucleotide directed mutagenesis of the human beta-globin gene:a general method for producing specific point mutations in cloned DNA.Nucleic Acids Res.1981 Aug 11;9(15):3647-56、Dalbadie-McFarland et al.,Oligonucleotide-directed mutagenesis as a general and powerful method for studies of protein function.Proc Natl Acad Sci U S A.1982 Nov;79(21):6409-13、Bachman.Site-directed mutagenesis.Methods Enzymol.2013;529:241-8、Carey et al.,PCR-mediated site-directed mutagenesis.Cold Spring Harb Protoc.2013 Aug 1;2013(8):738-42、及びCong et al.,Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems.Science.2013 Feb 15;339(6121):819-23に見出すことができる(前述の参考文献の全ての開示は、それらの全体が参照により本明細書に援用される)。
野生型CRIP、例えば、クモ毒素、サソリ毒素、及び/又は他の毒素は、毒液から単離することができる。例えば、クモ毒液は、当業者に既知の技術のいずれかを使用して、クモ(例えば、Eratigena agrestisなどのクモ)の毒腺から単離され得る。例えば、一部の実施形態では、毒液は、米国特許第5,688,764号に記載されている方法に従って、クモから単離することができる(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
野生型CRIP又はペプチド-IAポリヌクレオチド配列は、CRIP又はペプチド-IAポリヌクレオチド配列を対象とするプライマープローブを使用して、ゲノムライブラリーをスクリーニングすることによって得ることができる。あるいは、CRIP若しくはペプチド-IAポリヌクレオチド配列、及び/又は変異体CRIP若しくはペプチド-IAポリヌクレオチド配列は、化学的に合成することができる。例えば、CRIP若しくはペプチド-IAポリヌクレオチド配列、及び/又は変異体CRIP若しくはペプチド-IAポリヌクレオチド配列は、ホスホロアミダイト、トリエステル、ホスファイト、又はH-ホスホネート法などのオリゴヌクレオチド合成方法を使用して生成することができる。Engels,J.W.and Uhlmann,E.(1989),Gene Synthesis(New Synthetic Methods(77)).Angew.Chem.Int.Ed.Engl.,28:716-734を参照されたい(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
CRIP又はペプチド-IAポリヌクレオチドの化学合成
一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチド配列は、市販のポリヌクレオチド合成サービス、例えば、GENEWIZ(登録商標)(例えば、TurboGENE(商標);PriorityGENE、及びFragmentGENE)、又はSIGMA-ALDRICH(登録商標)(例えば、カスタムDNA及びRNAオリゴ設計並びにカスタムDNAオリゴ注文)によって提供されるものなどを使用して、化学的に合成され得る。DNA及び/又はカスタムの化学的に合成されたポリヌクレオチドを生成するための例示的な方法は、当該技術分野において周知であり、1995年2月13日に出願された米国特許第5,736,135号(第08/389,615号)に例示的に提供される(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。また、Agarwal,et al.,Chemical synthesis of polynucleotides.Angew Chem Int Ed Engl.1972 Jun;11(6):451-9、Ohtsuka et al.,Recent developments in the chemical synthesis of polynucleotides.Nucleic Acids Res.1982 Nov 11;10(21):6553-6570、Sondek & Shortle.A general strategy for random insertion and substitution mutagenesis:substoichiometric coupling of trinucleotide phosphoramidites.Proc Natl Acad Sci U S A.1992 Apr 15;89(8):3581-3585、Beaucage S.L.,et al.,Advances in the Synthesis of Oligonucleotides by the Phosphoramidite Approach.Tetrahedron,Elsevier Science Publishers,Amsterdam,NL,vol.48,No.12,1992,pp.2223-2311、Agrawal(1993)Protocols for Oligonucleotides and Analogs:Synthesis and Properties;Methods in Molecular Biology Vol.20も参照されたい(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
化学合成ポリヌクレオチドは、当該配列内のヌクレオチドの配置(すなわち、シトシン[C]、グアニン[G]、アデニン[A]、又はチミン[T]分子の配置)に基づいて、所望のポリペプチドを生成するように調整されたDNA配列を生成することを可能にし、化学合成されたDNAポリヌクレオチドから転写されるmRNA配列は、mRNA配列のコドンに対応する各アミノ酸のアミノ酸配列に翻訳され得る。したがって、mRNA配列から翻訳されるポリペプチド鎖のアミノ酸組成物は、20個のアミノ酸のうちのどのアミノ酸が伸長するポリペプチドに付加されるかを決定する基礎となるコドンを変更することによって変化させることができる。したがって、挿入、置換、欠失、及びフレームシフトなどのDNAにおける変異が、基礎となるコドンに応じて、アミノ酸の挿入、置換、又は欠失を引き起こし得る。
化学的に合成されたDNAポリヌクレオチド配列及び/又は変異誘発を介して改変された野生型DNAポリヌクレオチド配列からCRIP又はペプチド-IAを得るには、そのDNA配列を適切なベクターにクローニングすることによって達成することができる。利用可能な様々な発現ベクター、宿主生物、及び当業者に既知のクローニング戦略が存在する。例えば、ベクターは、プラスミドであってもよく、転写及び翻訳される異種遺伝子及び/又は発現カセットを、酵母細胞に導入することができる。「ベクター」という用語は、担体核酸分子を指すように使用され、それに核酸配列を挿入して、それが複製され得る細胞に導入することができる。ベクターは、複製起点(ORI)、選択を可能にする抗生物質耐性を付与する遺伝子、複数のクローニング部位、プロモーター領域、非細菌トランスフェクションのための選択マーカー、及びプライマー結合部位などの「ベクターエレメント」を含み得る。核酸配列は、「外因性」であり得、これは、ベクターが導入される細胞に対して外来性であること、又は配列が、細胞における配列に相同であるが、配列が通常見出されない宿主細胞の核酸内の位置にあることを意味する。ベクターには、プラスミド、コスミド、ウイルス(バクテリオファージ、動物ウイルス、及び植物ウイルス)、及び人工染色体(例えば、YAC)が含まれる。当業者は、Sambrook et al.,1989及びAusubel et al.,1996(これらはともに、参照により本明細書に援用される)に記載されている標準的な組換え技術を通してベクターを構築するための十分な装備があるであろう。CRIP又はペプチド-IAポリヌクレオチドをコードすることに加えて、ベクターは、標的化分子をコードすることができる。標的分子は、所望の核酸を特定の組織、細胞、又は他の位置に導くものである。
ベクター及び形質転換
一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAポリヌクレオチドは、様々なクローニング戦略、並びに当業者に容易に入手可能な市販のクローニングキット及び材料を使用して、ベクターにクローニングされ得る。例えば、CRIP又はペプチド-IAポリヌクレオチドは、戦略(例えば、SnapFast、Gateway、TOPO、Gibson、LIC、InFusionHD、又はElectra戦略)を使用して、ベクターにクローニングされ得る。多数のベクターが市販されており、CRIP又はペプチド-IAを産生するために使用することができる。例えば、CRIP又はペプチド-IAポリヌクレオチドは、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)と、pCR(商標)II-TOPOベクター又はPCR(商標)2.1-TOPO(登録商標)ベクター(InvitrogenからのTOPO(登録商標)TAクローニング(登録商標)キットとして市販されている)を組み合わせて使用して、5分間、室温で生成することができ、次いで、TOPO(登録商標)反応物を、コンピテント細胞に形質転換することができ、その後、色の変化に基づいて選択することができる(Janke et al.,A versatile toolbox for PCR-based tagging of yeast genes:new fluorescent proteins,more markers and promoter substitution cassettes.Yeast.2004 Aug;21(11):947-62を参照のこと。また、Adams et al.Methods in Yeast Genetics.Cold Spring Harbor,NY,1997も参照されたい。この開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチドは、プラスミド、コスミド、ウイルス(バクテリオファージ、動物ウイルス、及び植物ウイルス)、及び/又は人工染色体(例えば、YAC)などのベクターにクローニングされ得る。
一部の実施形態では、以下を行うことによって、CRIP又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチドを、宿主としてE.coliを使用して、ベクター(例えば、プラスミドベクター)に挿入することができる:目的のDNAセグメントを挿入できるようにするために、必要な制限酵素を使用して、約2~5μgのベクターDNAを消化し、続いて、一晩インキュベーションして完全な消化を達成する(自己ライゲーション/再環化を回避するために、アルカリホスファターゼを使用して、5’末端を脱リン酸化することができる)。消化されたベクターを、ゲル精製する。次に、PCRを介して、目的のDNAセグメント(例えば、CRIP又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチド)を増幅し、当業者に既知の技術を使用して(例えば、PCRクリーンアップキットを使用することによって)、PCR反応物から、いずれの過剰の酵素、プライマー、取り込まれていないdNTP、不完全長の失敗したPCR産物、及び/又は塩を除去する。約20ngのベクター、約100~1,000ng又は目的のDNAセグメント、2μLの10×緩衝液(すなわち、30mMのTris-HCl、4mMのMgCl、26μMのNAD、1mMのDTT、50μg/mlのBSA、pH8;25℃で保存)、1μLのT4 DNAリガーゼを含む混合物を作製し、HOを添加して全て総体積を20μLにすることによって、目的のDNAセグメントを、ベクターにライゲーションする。次いで、ライゲーション反応混合物を、室温で2時間、又は16℃で一晩インキュベートすることができる。次いで、ライゲーション反応物(すなわち、約1μL)を、例えば、エレクトロポレーション又は化学的方法を使用することによって、コンピテント細胞に形質転換することができる。次いで、コロニーPCRを実施して、目的のDNAセグメントを含むベクターを特定することができる。
一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチドは、他のDNAセグメントとともに、CRIP又はペプチド-IA発現ORFを構成し、宿主酵母細胞からの分泌のために設計することができる。CRIP又はペプチド-IA発現ORFを設計する例示的な方法は、以下の通りである:ORFは、シグナルペプチド配列から始まり、続いて、Kex2切断部位(リジン-アルギニン)をコードするDNA配列、続いて、CRIP又はペプチド-IAポリヌクレオチド導入遺伝子(5’末端にグリシン-セリンコドン、最後に、3’末端に終止コドンが付加される)であり得る。次いで、これらの全てのエレメントを、単一のオープンリーディングフレーム(ORF)として、酵母細胞において融合ペプチドに発現させる。α接合因子(αMF)シグナル配列は、組換え酵母の内因性分泌経路を介した組換え殺虫ペプチドの代謝プロセスを促進するために最も頻繁に使用され、すなわち、発現された融合ペプチドは、典型的には、小胞体内に入り、α接合因子シグナル配列が、シグナルペプチダーゼ活性によって除去され、次いで、得られた殺虫プロペプチドが、ゴルジ装置に輸送され、上述のリジン-アルギニンジペプチドが、Kex2エンドプロテアーゼによって完全に除去され、その後、成熟ポリペプチド(すなわち、CRIP又はペプチド-IA)が、細胞から分泌される。
一部の実施形態では、組換え酵母細胞におけるポリペプチド発現レベルは、特定の宿主酵母種に基づいてコドンを最適化することによって増強され得る。所与の宿主生物の内因性オープンリーディングフレームで観察される自然に発生するコドンの頻度は、必ずしも高効率発現のために最適化する必要はない。更に、異なる酵母種(例えば、Kluyveromyces lactis、Pichia pastoris、Saccharomyces cerevisiaeなど)は、高効率発現のために異なる最適コドンを有する。したがって、シグナル配列をコードする配列エレメント、Kex2切断部位、及びCRIP又はペプチド-IAを含むCRIP又はペプチド-IA発現ORFについては、それらが組換え酵母細胞において1つの融合ペプチドとして最初に翻訳されるため、コドン最適化が考慮されるべきである。
一部の実施形態では、コドン最適化されたCRIP又はペプチド-IA発現ORFを、酵母発現用の酵母特異的発現ベクターにライゲーションすることができる。エピソームベクター及び組み込みベクターを含む、酵母発現用に利用可能な多くの発現ベクターがあり、これらは通常、特定の酵母株のために設計されている。ペプチド産生に使用される特定の酵母発現システムを考慮して、適切な発現ベクターを慎重に選択する必要がある。一部の実施形態では、組み込みベクターを使用することができ、これは、形質転換された酵母細胞の染色体に組み込まれ、細胞の分裂及び増殖のサイクルを通して安定に維持される。組み込みDNA配列は、形質転換された酵母種における標的ゲノムDNA遺伝子座と相同であり、かかる組み込み配列としては、pLAC4、25S rDNA、pAOX1、及びTRP2などが挙げられる。殺虫ペプチド導入遺伝子の位置は、組み込みDNA配列(挿入ベクター)に隣接していてもよく、又は組み込みDNA配列(置換ベクター)内であってもよい。
一部の実施形態では、発現ベクターは、E.coliにおけるDNA調製のためのE.coliエレメント(例えば、E.coli複製起点、抗生物質選択マーカーなど)を含み得る。一部の実施形態では、ベクターは、目的の導入遺伝子の発現に必要な一連の配列エレメント(例えば、転写プロモーター、ターミネーター、酵母選択マーカー、宿主酵母DNAに相同な組み込みDNA配列など)を含み得る。天然及び操作されたプロモーター(例えば、pLAC4、pAOX1、pUPP、pADH1、pTEF、pGal1などの酵母プロモーター及びその他)を含む、多くの好適な酵母プロモーターがあり、一部の実施形態で使用することができる。
一部の実施形態では、アセトアミドプロトトロフィー選択、ゼオシン耐性選択、ジェネティシン耐性選択、ノウルセオトリシン耐性選択、ウラシル欠失選択、及び/又は他の選択方法などの選択方法を使用してもよい。例えば、一部の実施形態では、Aspergillus nidulansのamdS遺伝子を、選択マーカーとして使用することができる。選択マーカーを使用するための例示的な方法は、米国特許第6,548,285号(1997年4月3日出願)、同第6,165,715号(1998年6月22日出願)、及び同第6,110,707号(1997年1月17日出願)に見出すことができる(それらの開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチドは、pKLAC1プラスミドに挿入され得る。pKLAC1は、New England Biolabs(登録商標)Inc.(アイテム番号(NEB#E1000)から市販されている。pKLAC1は、酵母Kluyveromyces lactisにおける組換えタンパク質(例えば、CRIP又はペプチド-IA)の高レベル発現を達成するように設計される。pKLAC1プラスミドは、単独で、又はK.lactisタンパク質発現キットの一部として注文することができる。pKLAC1プラスミドは、SacII又はBstXI制限酵素を使用して、線状化することができ、αMF分泌シグナルの下流にMCSを有する。αMF分泌シグナルは、組換えタンパク質を分泌経路に導き、次いで、Kex2により切断され、例えば、CRIP又はペプチド-IAが得られる。Kex2は、カルシウム依存性セリンプロテアーゼであり、分泌経路のプロタンパク質の活性化に関与し、市販されている(PeproTech(登録商標);アイテム番号450-45)。
一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチドでライゲーションされたpKLAC1プラスミドで形質転換された酵母コロニーの選択に続いて、CRIP又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチドを、pKlac1プラスミドに挿入するか、又はpKlac1プラスミドにサブクローニングすることができる。CRIP又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチドでライゲーションされたpKLAC1プラスミドで形質転換された酵母(例えば、K.lactis)は、形質転換された酵母細胞が、その唯一の窒素源としてアセトアミドを含有するYCB培地での増殖することを可能にするアセトアミダーゼ(amdS)に基づいて選択され得る。CRIP又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチドでライゲーションされたpKLAC1プラスミドで形質転換された陽性の酵母コロニーを特定する。
一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチドを、当業者が容易に入手することができる他の市販のプラスミド及び/又はベクターに挿入することができ、例えば、プラスミドは、Addgene(非営利プラスミドレポジトリ)、GenScript(登録商標)、Takara(登録商標)、Qiagen(登録商標)、及びPromega(商標)から入手可能である。
一部の実施形態では、TVPをコードするポリヌクレオチドを、当業者が容易に入手することができる他の市販のプラスミド及び/又はベクターに挿入することができ、例えば、プラスミドは、Addgene(非営利プラスミドレポジトリ)、GenScript(登録商標)、Takara(登録商標)、Qiagen(登録商標)、及びPromega(商標)から入手可能である。
一部の実施形態では、1つ以上のCRIP発現カセットで形質転換された酵母細胞は、CRIPを、酵母培養で、1リットルの培地当たり少なくとも70mg/L、少なくとも80mg/L、少なくとも90mg/L、少なくとも100mg/L、少なくとも110mg/L、少なくとも120mg/L、少なくとも130mg/L、少なくとも140mg/L、少なくとも150mg/L、少なくとも160mg/L、少なくとも170mg/L、少なくとも180mg/L、少なくとも190mg/L 200mg/L、少なくとも500mg/L、少なくとも750mg/L、少なくとも1,000mg/L、少なくとも1,250mg/L、少なくとも1,500mg/L、少なくとも1,750mg/L、少なくとも2,000mg/L、少なくとも2,500mg/L、少なくとも3,000mg/L、少なくとも3,500mg/L、少なくとも4,000mg/L、少なくとも4,500mg/L、少なくとも5,000mg/L、少なくとも5,500mg/L、少なくとも少なくとも6,000mg/L、少なくとも6,500mg/L、少なくとも7,000mg/L、少なくとも7,500mg/L、少なくとも8,000mg/L、少なくとも8,500mg/L、少なくとも9,000mg/L、少なくとも9,500mg/L、少なくとも10,000mg/L、少なくとも11,000mg/L、少なくとも12,000mg/L、少なくとも12,500mg/L、少なくとも13,000mg/L、少なくとも14,000mg/L、少なくとも15,000mg/L、少なくとも16,000mg/L、少なくとも17,000mg/L、少なくとも17,500mg/L、少なくとも18,000mg/L、少なくとも19,000mg/L、少なくとも20,000mg/L、少なくとも25,000mg/L、少なくとも30,000mg/L、少なくとも40,000mg/L、少なくとも50,000mg/L、少なくとも60,000mg/L、少なくとも70,000mg/L、少なくとも80,000mg/L、少なくとも90,000mg/L、又は少なくとも100,000mg/LのCRIPの収率で、産生することができる。
一部の実施形態では、CRIPを発現するように動作可能なポリヌクレオチドを含む1つ以上の発現カセットを、ベクターに挿入して、1リットルの培地(酵母発酵液の上清)当たり約100mg/LのCRIP~約100,000mg/L、約110mg/L~約100,000mg/L、約120mg/L~約100,000mg/L、約130mg/L~約100,000mg/L、約140mg/L~約100,000mg/L、約150mg/L~約100,000mg/L、約160mg/L~約100,000mg/L、約170mg/L~約100,000mg/L、約180mg/L~約100,000mg/L、約190mg/L~約100,000mg/L、約200mg/L~約100,000mg/L、約250mg/L~約100,000mg/L、約500mg/L~約100,000mg/L、約750mg/L~約100,000mg/L、約1000mg/L~約100,000mg/L、約1000mg/L~約100,000mg/L、約1500mg/L~約100,000mg/L、約2000mg/L~約100,000mg/L、約2500mg/L~約100,000mg/L、約3000mg/L~約100,000mg/L、約3500mg/L~約100,000mg/L、約4000mg/L~約100,000mg/L、約4500mg/L~約100,000mg/L、約5000mg/L~約100,000mg/L、約5500mg/L~約100,000mg/L、約6000mg/L~約100,000mg/L、約6500mg/L~約100,000mg/L、約7000mg/L~約100,000mg/L、約7500mg/L~約100,000mg/L、約8000mg/L~約100,000mg/L、約8500mg/L~約100,000mg/L、約9000mg/L~約100,000mg/L、約9500mg/L~約100,000mg/L、約10000mg/L~約100,000mg/L、約10500mg/L~約100,000mg/L、約11000mg/L~約100,000mg/L、約11500mg/L~約100,000mg/L、約12000mg/L~約100,000mg/L、約12500mg/L~約100,000mg/L、約13000mg/L~約100,000mg/L、約13500mg/L~約100,000mg/L、約14000mg/L~約100,000mg/L、約14500mg/L~約100,000mg/L、約15000mg/L~約100,000mg/L、約15500mg/L~約100,000mg/L、約16000mg/L~約100,000mg/L、約16500mg/L~約100,000mg/L、約17000mg/L~約100,000mg/L、約17500mg/L~約100,000mg/L、約18000mg/L~約100,000mg/L、約18500mg/L~約100,000mg/L、約19000mg/L~約100,000mg/L、約19500mg/L~約100,000mg/L、約20000mg/L~約100,000mg/L、約20500mg/L~約100,000mg/L、約21000mg/L~約100,000mg/L、約21500mg/L~約100,000mg/L、約22000mg/L~約100,000mg/L、約22500mg/L~約100,000mg/L、約23000mg/L~約100,000mg/L、約23500mg/L~約100,000mg/L、約24000mg/L~約100,000mg/L、約24500mg/L~約100,000mg/L、約25000mg/L~約100,000mg/L、約25500mg/L~約100,000mg/L、約26000mg/L~約100,000mg/L、約26500mg/L~約100,000mg/L、約27000mg/L~約100,000mg/L、約27500mg/L~約100,000mg/L、約28000mg/L~約100,000mg/L、約28500mg/L~約100,000mg/L、約29000mg/L~約100,000mg/L、約29500mg/L~約100,000mg/L、約30000mg/L~約100,000mg/L、約30500mg/L~約100,000mg/L、約31000mg/L~約100,000mg/L、約31500mg/L~約100,000mg/L、約32000mg/L~約100,000mg/L、約32500mg/L~約100,000mg/L、約33000mg/L~約100,000mg/L、約33500mg/L~約100,000mg/L、約34000mg/L~約100,000mg/L、約34500mg/L~約100,000mg/L、約35000mg/L~約100,000mg/L、約35500mg/L~約100,000mg/L、約36000mg/L~約100,000mg/L、約36500mg/L~約100,000mg/L、約37000mg/L~約100,000mg/L、約37500mg/L~約100,000mg/L、約38000mg/L~約100,000mg/L、約38500mg/L~約100,000mg/L、約39000mg/L~約100,000mg/L、約39500mg/L~約100,000mg/L、約40000mg/L~約100,000mg/L、約40500mg/L~約100,000mg/L、約41000mg/L~約100,000mg/L、約41500mg/L~約100,000mg/L、約42000mg/L~約100,000mg/L、約42500mg/L~約100,000mg/L、約43000mg/L~約100,000mg/L、約43500mg/L~約100,000mg/L、約44000mg/L~約100,000mg/L、約44500mg/L~約100,000mg/L、約45000mg/L~約100,000mg/L、約45500mg/L~約100,000mg/L、約46000mg/L~約100,000mg/L、約46500mg/L~約100,000mg/L、約47000mg/L~約100,000mg/L、約47500mg/L~約100,000mg/L、約48000mg/L~約100,000mg/L、約48500mg/L~約100,000mg/L、約49000mg/L~約100,000mg/L、約49500mg/L~約100,000mg/L、約50000mg/L~約100,000mg/L、約50500mg/L~約100,000mg/L、約51000mg/L~約100,000mg/L、約51500mg/L~約100,000mg/L、約52000mg/L~約100,000mg/L、約52500mg/L~約100,000mg/L、約53000mg/L~約100,000mg/L、約53500mg/L~約100,000mg/L、約54000mg/L~約100,000mg/L、約54500mg/L~約100,000mg/L、約55000mg/L~約100,000mg/L、約55500mg/L~約100,000mg/L、約56000mg/L~約100,000mg/L、約56500mg/L~約100,000mg/L、約57000mg/L~約100,000mg/L、約57500mg/L~約100,000mg/L、約58000mg/L~約100,000mg/L、約58500mg/L~約100,000mg/L、約59000mg/L~約100,000mg/L、約59500mg/L~約100,000mg/L、約60000mg/L~約100,000mg/L、約60500mg/L~約100,000mg/L、約61000mg/L~約100,000mg/L、約61500mg/L~約100,000mg/L、約62000mg/L~約100,000mg/L、約62500mg/L~約100,000mg/L、約63000mg/L~約100,000mg/L、約63500mg/L~約100,000mg/L、約64000mg/L~約100,000mg/L、約64500mg/L~約100,000mg/L、約65000mg/L~約100,000mg/L、約65500mg/L~約100,000mg/L、約66000mg/L~約100,000mg/L、約66500mg/L~約100,000mg/L、約67000mg/L~約100,000mg/L、約67500mg/L~約100,000mg/L、約68000mg/L~約100,000mg/L、約68500mg/L~約100,000mg/L、約69000mg/L~約100,000mg/L、約69500mg/L~約100,000mg/L、約70000mg/L~約100,000mg/L、約70500mg/L~約100,000mg/L、約71000mg/L~約100,000mg/L、約71500mg/L~約100,000mg/L、約72000mg/L~約100,000mg/L、約72500mg/L~約100,000mg/L、約73000mg/L~約100,000mg/L、約73500mg/L~約100,000mg/L、約74000mg/L~約100,000mg/L、約74500mg/L~約100,000mg/L、約75000mg/L~約100,000mg/L、約75500mg/L~約100,000mg/L、約76000mg/L~約100,000mg/L、約76500mg/L~約100,000mg/L、約77000mg/L~約100,000mg/L、約77500mg/L~約100,000mg/L、約78000mg/L~約100,000mg/L、約78500mg/L~約100,000mg/L、約79000mg/L~約100,000mg/L、約79500mg/L~約100,000mg/L、約80000mg/L~約100,000mg/L、約80500mg/L~約100,000mg/L、約81000mg/L~約100,000mg/L、約81500mg/L~約100,000mg/L、約82000mg/L~約100,000mg/L、約82500mg/L~約100,000mg/L、約83000mg/L~約100,000mg/L、約83500mg/L~約100,000mg/L、約84000mg/L~約100,000mg/L、約84500mg/L~約100,000mg/L、約85000mg/L~約100,000mg/L、約85500mg/L~約100,000mg/L、約86000mg/L~約100,000mg/L、約86500mg/L~約100,000mg/L、約87000mg/L~約100,000mg/L、約87500mg/L~約100,000mg/L、約88000mg/L~約100,000mg/L、約88500mg/L~約100,000mg/L、約89000mg/L~約100,000mg/L、約89500mg/L~約100,000mg/L、約90000mg/L~約100,000mg/L、約90500mg/L~約100,000mg/L、約91000mg/L~約100,000mg/L、約91500mg/L~約100,000mg/L、約92000mg/L~約100,000mg/L、約92500mg/L~約100,000mg/L、約93000mg/L~約100,000mg/L、約93500mg/L~約100,000mg/L、約94000mg/L~約100,000mg/L、約94500mg/L~約100,000mg/L、約95000mg/L~約100,000mg/L、約95500mg/L~約100,000mg/L、約96000mg/L~約100,000mg/L、約96500mg/L~約100,000mg/L、約97000mg/L~約100,000mg/L、約97500mg/L~約100,000mg/L、約98000mg/L~約100,000mg/L、約98500mg/L~約100,000mg/L、約99000mg/L~約100,
000mg/L、又は約99500mg/L~約100,000mg/LのCRIPの範囲の収率をもたらすことができる。
一部の実施形態では、CRIPを発現するように動作可能なポリヌクレオチドを含む1つ以上の発現カセットを、ベクターに挿入して、1リットルの培地(酵母発酵液の上清)当たり約100mg/LのCRIP~約100,000mg/L、約100mg/L~約99500mg/L、約100mg/L~約99000mg/L、約100mg/L~約98500mg/L、約100mg/L~約98000mg/L、約100mg/L~約97500mg/L、約100mg/L~約97000mg/L、約100mg/L~約96500mg/L、約100mg/L~約96000mg/L、約100mg/L~約95500mg/L、約100mg/L~約95000mg/L、約100mg/L~約94500mg/L、約100mg/L~約94000mg/L、約100mg/L~約93500mg/L、約100mg/L~約93000mg/L、約100mg/L~約92500mg/L、約100mg/L~約92000mg/L、約100mg/L~約91500mg/L、約100mg/L~約91000mg/L、約100mg/L~約90500mg/L、約100mg/L~約90000mg/L、約100mg/L~約89500mg/L、約100mg/L~約89000mg/L、約100mg/L~約88500mg/L、約100mg/L~約88000mg/L、約100mg/L~約87500mg/L、約100mg/L~約87000mg/L、約100mg/L~約86500mg/L、約100mg/L~約86000mg/L、約100mg/L~約85500mg/L、約100mg/L~約85000mg/L、約100mg/L~約84500mg/L、約100mg/L~約84000mg/L、約100mg/L~約83500mg/L、約100mg/L~約83000mg/L、約100mg/L~約82500mg/L、約100mg/L~約82000mg/L、約100mg/L~約81500mg/L、約100mg/L~約81000mg/L、約100mg/L~約80500mg/L、約100mg/L~約80000mg/L、約100mg/L~約79500mg/L、約100mg/L~約79000mg/L、約100mg/L~約78500mg/L、約100mg/L~約78000mg/L、約100mg/L~約77500mg/L、約100mg/L~約77000mg/L、約100mg/L~約76500mg/L、約100mg/L~約76000mg/L、約100mg/L~約75500mg/L、約100mg/L~約75000mg/L、約100mg/L~約74500mg/L、約100mg/L~約74000mg/L、約100mg/L~約73500mg/L、約100mg/L~約73000mg/L、約100mg/L~約72500mg/L、約100mg/L~約72000mg/L、約100mg/L~約71500mg/L、約100mg/L~約71000mg/L、約100mg/L~約70500mg/L、約100mg/L~約70000mg/L、約100mg/L~約69500mg/L、約100mg/L~約69000mg/L、約100mg/L~約68500mg/L、約100mg/L~約68000mg/L、約100mg/L~約67500mg/L、約100mg/L~約67000mg/L、約100mg/L~約66500mg/L、約100mg/L~約66000mg/L、約100mg/L~約65500mg/L、約100mg/L~約65000mg/L、約100mg/L~約64500mg/L、約100mg/L~約64000mg/L、約100mg/L~約63500mg/L、約100mg/L~約63000mg/L、約100mg/L~約62500mg/L、約100mg/L~約62000mg/L、約100mg/L~約61500mg/L、約100mg/L~約61000mg/L、約100mg/L~約60500mg/L、約100mg/L~約60000mg/L、約100mg/L~約59500mg/L、約100mg/L~約59000mg/L、約100mg/L~約58500mg/L、約100mg/L~約58000mg/L、約100mg/L~約57500mg/L、約100mg/L~約57000mg/L、約100mg/L~約56500mg/L、約100mg/L~約56000mg/L、約100mg/L~約55500mg/L、約100mg/L~約55000mg/L、約100mg/L~約54500mg/L、約100mg/L~約54000mg/L、約100mg/L~約53500mg/L、約100mg/L~約53000mg/L、約100mg/L~約52500mg/L、約100mg/L~約52000mg/L、約100mg/L~約51500mg/L、約100mg/L~約51000mg/L、約100mg/L~約50500mg/L、約100mg/L~約50000mg/L、約100mg/L~約49500mg/L、約100mg/L~約49000mg/L、約100mg/L~約48500mg/L、約100mg/L~約48000mg/L、約100mg/L~約47500mg/L、約100mg/L~約47000mg/L、約100mg/L~約46500mg/L、約100mg/L~約46000mg/L、約100mg/L~約45500mg/L、約100mg/L~約45000mg/L、約100mg/L~約44500mg/L、約100mg/L~約44000mg/L、約100mg/L~約43500mg/L、約100mg/L~約43000mg/L、約100mg/L~約42500mg/L、約100mg/L~約42000mg/L、約100mg/L~約41500mg/L、約100mg/L~約41000mg/L、約100mg/L~約40500mg/L、約100mg/L~約40000mg/L、約100mg/L~約39500mg/L、約100mg/L~約39000mg/L、約100mg/L~約38500mg/L、約100mg/L~約38000mg/L、約100mg/L~約37500mg/L、約100mg/L~約37000mg/L、約100mg/L~約36500mg/L、約100mg/L~約36000mg/L、約100mg/L~約35500mg/L、約100mg/L~約35000mg/L、約100mg/L~約34500mg/L、約100mg/L~約34000mg/L、約100mg/L~約33500mg/L、約100mg/L~約33000mg/L、約100mg/L~約32500mg/L、約100mg/L~約32000mg/L、約100mg/L~約31500mg/L、約100mg/L~約31000mg/L、約100mg/L~約30500mg/L、約100mg/L~約30000mg/L、約100mg/L~約29500mg/L、約100mg/L~約29000mg/L、約100mg/L~約28500mg/L、約100mg/L~約28000mg/L、約100mg/L~約27500mg/L、約100mg/L~約27000mg/L、約100mg/L~約26500mg/L、約100mg/L~約26000mg/L、約100mg/L~約25500mg/L、約100mg/L~約25000mg/L、約100mg/L~約24500mg/L、約100mg/L~約24000mg/L、約100mg/L~約23500mg/L、約100mg/L~約23000mg/L、約100mg/L~約22500mg/L、約100mg/L~約22000mg/L、約100mg/L~約21500mg/L、約100mg/L~約21000mg/L、約100mg/L~約20500mg/L、約100mg/L~約20000mg/L、約100mg/L~約19500mg/L、約100mg/L~約19000mg/L、約100mg/L~約18500mg/L、約100mg/L~約18000mg/L、約100mg/L~約17500mg/L、約100mg/L~約17000mg/L、約100mg/L~約16500mg/L、約100mg/L~約16000mg/L、約100mg/L~約15500mg/L、約100mg/L~約15000mg/L、約100mg/L~約14500mg/L、約100mg/L~約14000mg/L、約100mg/L~約13500mg/L、約100mg/L~約13000mg/L、約100mg/L~約12500mg/L、約100mg/L~約12000mg/L、約100mg/L~約11500mg/L、約100mg/L~約11000mg/L、約100mg/L~約10500mg/L、約100mg/L~約10000mg/L、約100mg/L~約9500mg/L、約100mg/L~約9000mg/L、約100mg/L~約8500mg/L、約100mg/L~約8000mg/L、約100mg/L~約7500mg/L、約100mg/L~約7000mg/L、約100mg/L~約6500mg/L、約100mg/L~約6000mg/L、約100mg/L~約5500mg/L、約100mg/L~約5000mg/L、約100mg/L~約4500mg/L、約100mg/L~約4000mg/L、約100mg/L~約3500mg/L、約100mg/L~約3000mg/L、約100mg/L~約2500mg/L、約100mg/L~約2000mg/L、約100mg/L~約1500mg/L、約100mg/L~約1000mg/L、約100mg/L~約1000mg/L、約100mg/L~約750mg/L、約100mg/L~約500mg/L、約100mg/L~約250mg/L、約100mg/L~約100mg/L、又は約100mg/L~約110mg/LのCRIPの範囲の収率をもたらすことができる。
CRIP又はペプチド-IAをコードするDNAポリヌクレオチド配列に加えて、調節エレメントとして知られている既知の追加のDNAセグメントを、外来のDNA又は導入遺伝子の発現の増強を可能にするベクターにクローニングすることができる。かかる追加のDNAセグメントの例としては、(1)プロモーター、ターミネーター、及び/又はエンハンサーエレメント、(2)適切なmRNA安定化ポリアデニル化シグナル、(3)内部リボソーム侵入部位(IRES)、(4)イントロン、並びに(5)転写後調節エレメントが挙げられる。目的のDNAセグメントと、前述のシス作用性エレメントのうちのいずれか1つとの組み合わせは、「発現カセット」と呼ばれる。
単一発現カセットは、前述の調節エレメントのうちの1つ以上と、CRIP又はペプチド-IAを発現するように動作可能なポリヌクレオチドと、を含むことができる。例えば、一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IA発現カセットは、CRIP又はペプチド-IAを発現するように動作可能なポリヌクレオチドと、α-MFシグナル、Kex2部位、LAC4ターミネーター、ADN1プロモーター、並びに5’末端及び3’末端上のLAC4プロモーターに隣接するアセトアミダーゼ(amdS)選択マーカーと、を含むことができる。
一部の実施形態では、ベクターにクローニングされた多数の発現カセットが存在し得る。例えば、一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAを発現するように動作可能なポリヌクレオチドを含む第1の発現カセットが存在し得る。代替的な実施形態では、CRIP又はペプチド-IAをコードするように動作可能な2つの発現カセット(すなわち、二重発現カセット)が存在する。他の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAをコードするように動作可能な3つの発現カセット(すなわち、三重発現カセット)が存在する。
一部の実施形態では、二重発現カセットは、第2のCRIP又はペプチド-IA発現カセットを、第1のCRIP又はペプチド-IA発現カセットを含むベクターにサブクローニングすることによって生成することができる。
一部の実施形態では、三重発現カセットは、第3のCRIP又はペプチド-IA発現カセットを、第1及び第2のCRIP又はペプチド-IA発現カセットを含むベクターにサブクローニングすることによって生成することができる。
一部の実施形態では、1つ以上のCRIP又はペプチド-IA発現カセットで形質転換された酵母細胞は、CRIPを、酵母培養で、1リットルの培地当たり少なくとも70mg/L、少なくとも80mg/L、少なくとも90mg/L、少なくとも100mg/L、少なくとも110mg/L、少なくとも120mg/L、少なくとも130mg/L、少なくとも140mg/L、少なくとも150mg/L、少なくとも160mg/L、少なくとも170mg/L、少なくとも180mg/L、少なくとも190mg/L 200mg/L、少なくとも500mg/L、少なくとも750mg/L、少なくとも1,000mg/L、少なくとも1,250mg/L、少なくとも1,500mg/L、少なくとも1,750mg/L、少なくとも2,000mg/L、少なくとも2,500mg/L、少なくとも3,000mg/L、少なくとも3,500mg/L、少なくとも4,000mg/L、少なくとも4,500mg/L、少なくとも5,000mg/L、少なくとも5,500mg/L、少なくとも少なくとも6,000mg/L、少なくとも6,500mg/L、少なくとも7,000mg/L、少なくとも7,500mg/L、少なくとも8,000mg/L、少なくとも8,500mg/L、少なくとも9,000mg/L、少なくとも9,500mg/L、少なくとも10,000mg/L、少なくとも11,000mg/L、少なくとも12,000mg/L、少なくとも12,500mg/L、少なくとも13,000mg/L、少なくとも14,000mg/L、少なくとも15,000mg/L、少なくとも16,000mg/L、少なくとも17,000mg/L、少なくとも17,500mg/L、少なくとも18,000mg/L、少なくとも19,000mg/L、少なくとも20,000mg/L、少なくとも25,000mg/L、少なくとも30,000mg/L、少なくとも40,000mg/L、少なくとも50,000mg/L、少なくとも60,000mg/L、少なくとも70,000mg/L、少なくとも80,000mg/L、少なくとも90,000mg/L、又は少なくとも100,000mg/LのCRIP又はペプチド-IAの収率で、CRIP又はペプチド-IAを産生することができる。
一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAを発現するように動作可能なポリヌクレオチドを含む1つ以上の発現カセットを、ベクター(例えば、pKlac1プラスミド)に挿入して、約100mg/LのCRIP又はペプチド-IA(酵母発酵液の上清)の収率をもたらすことができる。例えば、一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAを発現するように動作可能なポリヌクレオチドを含む2つの発現カセットを、ベクター(例えば、pKS482プラスミド)に挿入して、約2g/LのCRIP又はペプチド-IA(酵母発酵液の上清)の収率をもたらすことができる。あるいは、一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAを発現するように動作可能なポリヌクレオチドを含む3つの発現カセットを、ベクター(例えば、pKlac1Tプラスミド)に挿入してもよい。
一部の実施形態では、K.lactisゲノムへの最適化されたCRIP又はペプチド-IA導入遺伝子の1つ以上のコピーの組み込みを可能にするために、複数のCRIP又はペプチド-IA発現カセットを、酵母にトランスフェクトすることができる。複数のCRIP又はペプチド-IA発現カセットをK.lactisゲノムに導入する例示的な方法は、以下の通りである:インタクトのLAC4プロモーターエレメント、コドン最適化CRIP又はペプチド-IA発現ORFエレメント、及びpLAC4ターミネーターエレメントを含む、CRIP又はペプチド-IA発現カセットのDNA配列を合成する。インタクトの発現カセットを、pKS477のpLAC4ターミネーターの下流にある、pKlac1ベクターのSal IとKpn I制限部位との間にライゲーションして、二重導入遺伝子CRIP又はペプチド-IA発現ベクターpKS482を得る。次いで、二重導入遺伝子ベクターpKS482を、Sac II制限エンドヌクレアーゼを使用して線状化し、エレクトロポレーションによって、K.lactisのYCT306株に形質転換する。次いで、得られた酵母コロニーを、5mMのアセトアミドを補充したYCB寒天プレート上で増殖させる(アセトアミダーゼ発現細胞のみが、アセトアミドを窒素の代謝源として効率的に使用することができる)。酵母コロニーを評価するために、pKS482酵母プレートから、約100~400個のコロニーを採取してもよい。コロニーからの接種物を、炭素源として2%の糖アルコールを添加した2.2mLのK.lactis規定培地で各々培養する。培養物を、23.5℃で、280rpmで振盪しながら、6日間インキュベートし、この時点で、培養物中の細胞密度は、600nmでの光吸光度(OD600)によって示されるように、最大レベルに達する。次いで、細胞を、4,000rpmで10分間遠心分離することによって培養物から除去し、得られた上清(条件培地)を、HPLC収率分析用に、0.2μM膜を通して濾過する。
ペプチドを化学的に合成する
ペプチド合成又は化学合成又はペプチド及び/又はポリペプチドを使用して、CRIP又はペプチド-IAを生成することができる。これらの方法は、当業者によって、及び/又は商業ベンダー(例えば、GenScript(登録商標);Piscataway,New Jersey)の使用を通して実施され得る。例えば、一部の実施形態では、化学的ペプチド合成は、液相ペプチド合成(LPPS)、又は固相ペプチド合成(SPPS)を使用して達成され得る。
一部の実施形態では、ペプチド合成は、後続アミノ酸のカルボキシル基を先行アミノ酸のN末端にカップリングすることで、新生ポリペプチド鎖が生成される戦略(自然界で見られるポリペプチド合成の種類とは反対のプロセス)を使用することによって、一般に達成され得る。
ペプチドの脱保護は、ポリペプチドの化学合成における重要な最初のステップである。ペプチドの脱保護は、アミノ酸の官能基が望ましくない若しくは非特異的な反応又は副反応に関与するのを防ぐために、化学物質を使用することによってアミノ酸の反応性基をブロックするプロセスであり、言い換えれば、アミノ酸が、これらの望ましくない反応に関与することから「保護される」。
ペプチド鎖を合成する前に、アミノ酸を「脱保護」して、鎖が形成される(すなわち、アミノ酸が結合する)ことを可能にしなければならない。N末端を保護するために使用される化学物質としては、9-フルオレニルメトキシカルボニル(Fmoc)、及びtert-ブトキシカルボニル(Boc)が挙げられ、それらの各々は、それぞれ、穏和な塩基(例えば、ピペリジン)及び適度に強い酸(例えば、トリフルオロ酢酸(TFA))の使用を介して除去することができる。
必要なC末端保護剤は、使用される化学ペプチド合成戦略の種類に依存する。例えば、LPPSは、C末端アミノ酸の保護を必要とするが、SPPSは、保護基として作用する固体支持体を必要としない。側鎖アミノ酸は、個々のペプチド配列及びN末端保護戦略に基づいて変化するいくつかの異なる保護基の使用を必要とする。しかしながら、典型的には、側鎖アミノ酸に使用される保護基は、tert-ブチル(tBu)又はベンジル(Bzl)保護基に基づく。
ペプチド合成手順の次のステップは、アミノ酸のカップリングである。アミノ酸のカップリングを実現するには、入ってくるアミノ酸のC末端カルボン酸を活性化しなければならない。これは、入ってくるアミノ酸のカルボキシル基と反応してO-アシルイソ尿素中間体を形成する、ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)又はジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)などのカルボジイミドを使用して達成することができる。その後、O-アシルイソ尿素中間体は、伸長するペプチド鎖のN末端上の一級アミノ基を介する求核攻撃によって置換される。カルボジイミドによって生成された反応性中間体は、アミノ酸のラセミ化をもたらすことができる。アミノ酸のラセミ化を回避するために、O-アシルイソ尿素中間体と反応するために、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt)などの試薬を添加する。使用され得る他のカップル剤としては、追加の活性化塩基を有する2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HBTU)、及びベンゾトリアゾール-1-イル-オキシ-トリス(ジメチルアミノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(BOP)が挙げられる。最後に、アミノ酸の脱保護及びカップリングがそれに続く。
合成プロセスの終了時に、ポリペプチドからの保護基の除去(通常、酸分解を介して起こるプロセス)が行われなければならない。どの試薬がペプチド切断に必要なのかを決定することは、使用する保護スキームと全体的な合成方法との関係による。例えば、一部の実施形態では、臭化水素(HBr)、フッ化水素(HF)、又はトリフルオロメタンスルホン酸(TFMSA)を使用して、Bzl基及びBoc基を切断することができる。代替的には、他の実施形態では、TFAなどのそれほど強くない酸により、tBut基及びFmoc基の酸分解がもたらされ得る。最後に、ペプチドは、ペプチドの生理化学的特徴(例えば、電荷、サイズ、疎水性など)に基づいて精製することができる。ペプチドを精製するために使用することができる技術としては、逆相クロマトグラフィー(RPC)、サイズ排除クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)、及びイオン交換クロマトグラフィー(IEC)を含む精製技術が挙げられる。
ペプチド合成の例示的な方法は、Anderson G.W.and McGregor A.C.(1957)T-butyloxycarbonylamino acids and their use in peptide synthesis.Journal of the American Chemical Society.79,6180-3、Carpino L.A.(1957)Oxidative reactions of hydrazines.Iv.Elimination of nitrogen from 1,1-disubstituted-2-arenesulfonhydrazides1-4.Journal of the American Chemical Society.79,4427-31、McKay F.C.and Albertson N.F.(1957)New amine-masking groups for peptide synthesis.Journal of the American Chemical Society.79,4686-90、Merrifield R.B.(1963)Solid phase peptide synthesis.I.The synthesis of a tetrapeptide.Journal of the American Chemical Society.85,2149-54、Carpino L.A.and Han G.Y.(1972)9-fluorenylmethoxycarbonyl amino-protecting group.The Journal of Organic Chemistry.37,3404-9、及びA Lloyd-Williams P.et al.(1997)Chemical approaches to the synthesis of peptides and proteins.Boca Raton:CRC Press.278、米国特許第3,714,140号(1971年3月16日出願)、同第4,411,994号(1978年6月8日出願)、同第7,785,832号(2006年1月20日出願)、同第8,314,208号(2006年2月10日出願)、及び同第10,442,834号(2015年10月2日出願)、並びに米国特許出願第2005/0165215号(2004年12月23日出願)に見出すことができる(それらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に援用される)。
ポリヌクレオチド、ペプチド、及びCRIPを生成する更なる例示的な方法は、米国特許出願公開第2015/0148288A1号に見出すことができる(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
本明細書に記載の方法のうちのいずれかは、本明細書に記載のCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAのうちのいずれかを生成するために使用することができる。
細胞培養技術及び形質転換技術
「形質転換」及び「トランスフェクション」という用語は、ともに、宿主生物に外因性及び/又は異種のDNA又はRNAを導入するプロセスを記載する。一般に、当業者は、細菌細胞に外因性及び/若しくは異種のDNA又はRNAを導入するプロセスを記載するために「形質転換」という用語を留保することがあり、真核細胞への外因性及び/若しくは異種のDNA又はRNAの導入を記載するプロセスのために「トランスフェクション」という用語を留保することがある。しかしながら、本明細書で使用される場合、「形質転換」及び「トランスフェクション」という用語は、プロセスが、原核生物(例えば、細菌)又は真核生物(例えば、酵母、植物、若しくは動物)への外因性及び/若しくは異種のDNA又はRNAの導入を記載するかどうかに関係なく、同義的に使用される。
一部の実施形態では、宿主細胞は、以下の方法を使用して形質転換され得る:エレクトロポレーション、細胞圧搾、マイクロインジェクション、インペイルフェクション、静水圧の使用、ソノポレーション、光学トランスフェクション、継続注入、リポフェクション、ウイルスの使用による(例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスウイルス、及びレトロウイルス)、化学ホスフェート法、DEAE-デキストラン又はポリエチレンイミン(PEI)を介したエンドサイトーシス、プロトプラスト融合、流体力学的送達、マグネトフェクション、ヌクレオインフェクション、及び/又はその他の方法。トランスフェクション及び/又は形質転換技術に関する例示的な方法は、Makrides(2003),Gene Transfer and Expression in Mammalian Cells,Elvesier、Wong,TK & Neumann,E.Electric field mediated gene transfer.Biochem.Biophys.Res.Commun.107,584-587(1982)、Potter & Heller,Transfection by Electroporation.Curr Protoc Mol Biol.2003 May;CHAPTER:Unit-9.3、Kim & Eberwine,Mammalian cell transfection:the present and the future.Anal Bioanal Chem.2010 Aug;397(8):3173-3178に見出すことができる(これらの参考文献の各々は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
エレクトロポレーションは、細胞に電気を印加し、細胞膜を透過性にして、その結果、細胞に外因性DNAを導入することが可能になる技術である。エレクトロポレーションは、当業者に容易に知られており、エレクトロポレーションを達成するために必要なツール及びデバイスが市販されている(例えば、Gene Pulser Xcell(商標)エレクトロポレーションシステム、Bio-Rad(登録商標)、Neon(登録商標)エレクトロポレーション用トランスフェクションシステム、Thermo-Fisher Scientific、及び他のツール及び/又はデバイス)。エレクトロポレーションの例示的な方法は、Potter & Heller,Transfection by Electroporation.Curr Protoc Mol Biol.2003 May;CHAPTER:Unit-9.3、Saito(2015)Electroporation Methods in Neuroscience.Springer press、Pakhomov et al.,(2017)Advanced Electroporation Techniques in Biology and Medicine.Taylor & Francisに示されている(これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の実施形態では、エレクトロポレーションを使用して、CRIP又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを、酵母に導入することができる。例えば、CRIP又はペプチド-IAが、pKlac1プラスミドにクローニングされ、エレクトロポレーションを介してK.lactis細胞に形質転換される。これは、好適な酵母種(例えば、Kluyveromyces lactis、Kluyveromyces marxianus、Saccharomyces cerevisiae、Pichia pastorisなど)を、約10~200mLの酵母抽出物ペプトンデキストロース(YEPD)に接種し、30℃のシェーカー上で、酵母培養の初期の対数増殖期(例えば、約0.6~2×10細胞/mL)までインキュベーションすることによって達成することができる。酵母を、滅菌遠心チューブに回収し、4℃で、3000rpmで5分間遠心分離し(注記:手順中に細胞を冷したままにする)、細胞を、40mLの氷冷滅菌脱イオン水で洗浄し、細胞を、23,000rpmで5分間ペレット化する。洗浄ステップを繰り返し、細胞を、20mLの1Mの発酵性糖(例えば、ガラクトース、マルトース、ラトトリオース(latotriose)、スクロース、フルクトース、若しくはグルコース)及び/又は糖アルコール(例えば、エリスリトール、水素化デンプン加水分解物、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、及びキシリトール)に再懸濁し、続いて、3,000rpmで5分間スピンダウンする。細胞を、適量の氷冷1Mの発酵性糖(例えば、ガラクトース、マルトース、ラトトリオース、スクロース、フルクトース、若しくはグルコース)及び/又は糖アルコール(例えば、エリスリトール、水素化デンプン加水分解物、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、及びキシリトール)で再懸濁して、最終細胞密度を3×10細胞/mLにする。40μlの酵母懸濁液を、予冷した0.2cmのエレクトロポレーションキュベット(注記:試料がアルミニウムキュベットの両側に接触していることを確認する)中にCRIP又はペプチド-IAをコードする線状ポリヌクレオチド(約1μg)を含む約1~4μlのベクターと混合する。RC回路の最適な時定数(5ms)で、2000Vの単一のパルスを提供して、次いで、細胞を、0.5mLのYEDと0.5mLの1Mの発酵性糖(例えば、ガラクトース、マルトース、ラトトリオース、スクロース、フルクトース、若しくはグルコース)及び/又は糖アルコール(例えば、エリスリトール、水素化デンプン加水分解物、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、及びキシリトール)との混合液中で回復させ、次いで、選択プレート上に広げた。
一部の実施形態では、エレクトロポレーションを使用して、CRIP又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを、以下によって植物プロトプラストに導入することができる:植物プロトプラスト溶液(例えば、約8mLの10mMの2-[N-モルホリノ]エタンスルホン酸(MES)(pH5.5)、0.01%(w/v)のペクチラーゼ、1%(w/v)のマセロザイム、40mMのCaCl、及び0.4Mのマンニトール)中の滅菌植物材料をインキュベートし、混合物を、ロータリーシェーカーに約3~6時間、30℃で添加して、プロトプラストを生成する。80μmメッシュのナイロンスクリーン濾過によりデブリを除去する。約4mlの植物エレクトロポレーション緩衝液(例えば、5mMのCaCl、0.4Mのマンニトール、及びPBS)でスクリーンをリンスする。滅菌15mLコニカル遠心チューブ中でプロトプラストを合わせ、次いで、約300×gで約5分間遠心分離する。遠心分離後、上清を廃棄し、5mLの植物エレクトロポレーション緩衝液で洗浄する。プロトプラストを、植物エレクトロポレーション緩衝液中に、1mLの液体当たり約1.5×10~2×10mLのプロトプラストで再懸濁さする。約0.5mLのプロトプラスト懸濁液を、1つ以上のエレクトロポレーションキューブに移し、氷上にセットし、ベクターを添加する(注記:安定した形質転換のために、ベクターは、上記の制限方法のいずれかを使用して線状化され、約1~10μgのベクターが使用される。一過性発現の場合、ベクターは、そのスーパーコイル状態で保持されてもよく、約10~40μgのベクターが使用され得る)。ベクターとプロトプラスト懸濁液を混合する。キュベットをエレクトロポレーション装置に配置し、約1~2kVで1回以上電撃を与える(最初に、反応を最適化しながら、3~25μFの容量を使用してもよい)。キュベットを氷に戻し、形質転換された細胞を、完全培地中に20倍希釈する。約48時間後、プロトプラストを回収する。
宿主細胞
本発明の方法、組成物、CRIP及びペプチド-IAは、任意の細胞型(例えば、真核細胞又は原核細胞)において実施され得る。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、原核生物である。例えば、一部の実施形態では、宿主細胞は、グラム陰性又はグラム陽性生物などの古細菌又は真正細菌であり得る。有用な細菌の例としては、大腸菌属(例えば、E.coli)、バチルス属(例えば、B.subtilis)、腸内細菌、シュードモナス属種(例えば、P.aeruginosa)、Salmonella typhimurium、Serratia marcescans、クレブシエラ属、プロテウス属、シゲラ属、根粒菌属、ビトレオシラ属、又はパラコッカス属が挙げられる。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、単細胞性の細胞であり得る。例えば、一部の実施形態では、宿主細胞は、グラム陽性細菌などの細菌細胞であり得る。
一部の実施形態では、宿主細胞は、以下からなる属から選択される細菌であり得る:Candidatus Chloracidobacterium、Arthrobacter、Corynebacterium、Frankia、Micrococcus、Mycobacterium、Propionibacterium、Streptomyces、Aquifex Bacteroides、Porphyromonas、Bacteroides、Porphyromonas、Flavobacterium、Chlamydia、Prosthecobacter、Verrucomicrobium、Chloroflexus、Chroococcus、Merismopedia、Synechococcus、Anabaena、Nostoc、Spirulina、Trichodesmium、Pleurocapsa、Prochlorococcus、Prochloron、Bacillus、Listeria、Staphylococcus、Clostridium、Dehalobacter、Epulopiscium、Ruminococcus、Enterococcus、Lactobacillus、Streptococcus、Erysipelothrix、Mycoplasma、Leptospirillum、Nitrospira、Thermodesulfobacterium、Gemmata、Pirellula、Planctomyces、Caulobacter、Agrobacterium、Bradyrhizobium、Brucella、Methylobacterium、Prosthecomicrobium、Rhizobium、Rhodopseudomonas、Sinorhizobium、Rhodobacter、Roseobacter、Acetobacter、Rhodospirillum、Rickettsia、Rickettsia conorii、Mitochondria、Wolbachia、Erythrobacter、Erythromicrobium、Sphingomonas、Alcaligenes、Burkholderia、Leptothrix、Sphaerotilus、Thiobacillus、Neisseria、Nitrosomonas、Gallionella、Spirillum、Azoarcus、Aeromonas、Succinomonas、Succinivibrio、Ruminobacter、Nitrosococcus、Thiocapsa、Enterobacter、Escherichia、Klebsiella、Salmonella、Shigella、Wigglesworthia、Yersinia、Coxiella、Legionella、Halomonas、Pasteurella、Acinetobacter、Azotobacter、Pseudomonas、Psychrobacter、Beggiatoa、Thiomargarita、Vibrio、Xanthomonas、Bdellovibrio、Campylobacter、Helicobacter、Myxococcus、Desulfosarcina、Geobacter、Desulfuromonas、Borrelia、Leptospira、Treponema、Petrotoga、Thermotoga、Deinococcus、又はThermus。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、以下の細菌種のうちの1つから選択され得る:Bacillus alkalophilus、Bacillus amyloliquefaciens、Bacillus brevis、Bacillus circulans、Bacillus coagulans、Bacillus lautus、Bacillus lentus、Bacillus licheniformis、Bacillus megaterium、Bacillus stearothermophilus、Bacillus subtilis、Bacillus thuringiensis、Streptomyces lividans、Streptomyces murinus、Streptomyces coelicolor、Streptomyces albicans、Streptomyces griseus、Streptomyces plicatosporus、Escherichia albertii、Escherichia blattae、Escherichia coli、Escherichia fergusonii、Escherichia hermannii、Escherichia senegalensis、Escherichia vulneris、Pseudomonas abietaniphila、Pseudomonas agarici、Pseudomonas agarolyticus、Pseudomonas alcaliphila、Pseudomonas alginovora、Pseudomonas andersonii、Pseudomonas antarctica、Pseudomonas asplenii、Pseudomonas azelaica、Pseudomonas batumici、Pseudomonas borealis、Pseudomonas brassicacearum、Pseudomonas chloritidismutans、Pseudomonas cremoricolorata、Pseudomonas diterpeniphila、Pseudomonas filiscindens、Pseudomonas frederiksbergensis、Pseudomonas gingeri、Pseudomonas graminis、Pseudomonas grimontii、Pseudomonas halodenitrificans、Pseudomonas halophila、Pseudomonas hibiscicola、Pseudomonas hydrogenovora、Pseudomonas indica、Pseudomonas japonica、Pseudomonas jessenii、Pseudomonas kilonensis、Pseudomonas koreensis、Pseudomonas lini、Pseudomonas lurida、Pseudomonas lutea、Pseudomonas marginata、Pseudomonas meridiana、Pseudomonas mesoacidophila、Pseudomonas pachastrellae、Pseudomonas palleroniana、Pseudomonas parafulva、Pseudomonas pavonanceae、Pseudomonas proteolyica、Pseudomonas psychrophila、Pseudomonas psychrotolerans、Pseudomonas pudica、Pseudomonas rathonis、Pseudomonas reactans、Pseudomonas rhizosphaerae、Pseudomonas salmononii、Pseudomonas thermaerum、Pseudomonas thermocarboxydovorans、Pseudomonas thermotolerans、Pseudomonas thivervalensis、Pseudomonas umsongensis、Pseudomonas vancouverensis、Pseudomonas wisconsinensis、Pseudomonas xanthomarina Pseudomonas xiamenensis、Pseudomonas aeruginosa、Pseudomonas alcaligenes、Pseudomonas anguilliseptica、Pseudomonas citronellolis、Pseudomonas flavescens、Pseudomonas jinjuensis、Pseudomonas mendocina、Pseudomonas nitroreducens、Pseudomonas oleovorans、Pseudomonas pseudoalcaligenes、Pseudomonas resinovorans、Pseudomonas straminae、Pseudomonas aurantiaca、Pseudomonas chlororaphis、Pseudomonas fragi、Pseudomonas lundensis、Pseudomonas taetrolens Pseudomonas azotoformans、Pseudomonas brenneri、Pseudomonas cedrina、Pseudomonas congelans、Pseudomonas corrugata、Pseudomonas costantinii、Pseudomonas extremorientalis、Pseudomonas fluorescens、Pseudomonas fulgida、Pseudomonas gessardii、Pseudomonas libanensis、Pseudomonas mandelii、Pseudomonas marginalis、Pseudomonas mediterranea、Pseudomonas migulae、Pseudomonas mucidolens、Pseudomonas orientalis、Pseudomonas poae、Pseudomonas rhodesiae、Pseudomonas synxantha、Pseudomonas tolaasii、Pseudomonas trivialis、Pseudomonas veronii Pseudomonas denitrificans、Pseudomonas pertucinogena、Pseudomonas fulva、Pseudomonas monteilii、Pseudomonas mosselii、Pseudomonas oryzihabitans、Pseudomonas plecoglossicida、Pseudomonas putida、Pseudomonas balearica、Pseudomonas luteola、又はPseudomonas stutzeri。Pseudomonas avellanae、Pseudomonas cannabina、Pseudomonas caricapapyae、Pseudomonas cichorii、Pseudomonas coronafaciens、Pseudomonas fuscovaginae、Pseudomonas tremae、又はPseudomonas viridiflava。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、真核生物であり得る。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、以下のクレードに属する細胞であり得る:オピストコンタ、緑色植物(例えば、藻類及び植物)、アメーボゾア、ケルコゾア、アルベオラータ、鞭毛虫、ヘテロコンタ、ディシクリスタータ、又はエクスカバータ。
一部の実施形態では、本明細書に記載の手順及び方法は、例えば、後生動物、襟鞭毛虫、又は真菌である宿主細胞を使用して達成することができる。
一部の実施形態では、本明細書に記載の手順及び方法は、真菌である宿主細胞を使用して達成することができる。例えば、一部の実施形態では、宿主細胞は、以下の真核生物門に属する細胞であり得る:子嚢菌門、担子菌門、ツボカビ門、微胞子虫門、又は接合菌門。
一部の実施形態では、本明細書に記載の手順及び方法は、以下の属のうちの1つに属する真菌である宿主細胞を使用して達成することができる:Aspergillus、Cladosporium、Magnaporthe、Morchella、Neurospora、Penicillium、Saccharomyces、Cryptococcus、又はUstilago。
一部の実施形態では、本明細書に記載の手順及び方法は、以下の種のうちの1つに属する真菌である宿主細胞を使用して達成することができる:Saccharomyces cerevisiae、Saccharomyces boulardi、Saccharomyces uvarum、Aspergillus flavus、A.terreus、A.awamori、Cladosporium elatum、Cl.Herbarum、Cl.Sphaerospermum、及びCl.Cladosporioides、Magnaporthe grise、Magnaporthe oryzae、Magnaporthe rhizophila、Morchella deliciosa、Morchella esculenta、Morchella conica、Neurospora crassa、Neurospora intermedia、Neurospora tetrasperma、Penicillium notatum、Penicillium chrysogenum、Penicillium roquefortii、or Penicillium simplicissimum。
一部の実施形態では、本明細書に記載の手順及び方法は、Kluyveromyces lactis、Kluyveromyces marxianus、Saccharomyces cerevisiae、又はPichia pastorisである宿主細胞を使用して達成することができる。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、以下の属のうちの1つに属する真菌であり得る:Aspergillus、Cladosporium、Magnaporthe、Morchella、Neurospora、Penicillium、Saccharomyces、Cryptococcus、又はUstilago。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、Saccharomycetaceae科のメンバーであり得る。例えば、一部の実施形態では、宿主細胞は、以下のSaccharomycetaceae科内の属のうちの1つであり得る:Brettanomyces、Candida、Citeromyces、Cyniclomyces、Debaryomyces、Issatchenkia、Kazachstania、Kluyveromyces、Komagataella、Kuraishia、Lachancea、Lodderomyces、Nakaseomyces、Pachysolen、Pichia、Saccharomyces、Spathaspora、Tetrapisispora、Vanderwaltozyma、Torulaspora、Williopsis、Zygosaccharomyces、又はZygotorulaspora。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、以下のうちの1つであり得る:Aspergillus flavus、Aspergillus terreus、Aspergillus awamori、Cladosporium elatum、Cladosporium Herbarum、Cladosporium Sphaerospermum、Cladosporium cladosporioides、Magnaporthe grisea、Magnaporthe oryzae、Magnaporthe rhizophila、Morchella deliciosa、Morchella esculenta、Morchella conica、Neurospora crassa、Neurospora intermedia、Neurospora tetrasperma、Penicillium notatum、Penicillium chrysogenum、Penicillium roquefortii、又はPenicillium simplicissimum。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、カンジダ属内の種であり得る。例えば、宿主細胞は、以下のうちの1つであり得る:Candida albicans、Candida ascalaphidarum、Candida amphixiae、Candida antarctica、Candida argentea、Candida atlantica、Candida atmosphaerica、Candida auris、Candida blankii、Candida blattae、Candida bracarensis、Candida bromeliacearum、Candida carpophila、Candida carvajalis、Candida cerambycidarum、Candida chauliodes、Candida corydalis、Candida dosseyi、Candida dubliniensis、Candida ergatensis、Candida fructus、Candida glabrata、Candida fermentati、Candida guilliermondii、Candida haemulonii、Candida humilis、Candida insectamens、Candida insectorum、Candida intermedia、Candida jeffresii、又はCandida kefyr。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、クリベロマイセス属内の種であり得る。例えば、宿主細胞は、以下のうちの1つであり得る:Kluyveromyces aestuarii、Kluyveromyces dobzhanskii、Kluyveromyces lactis、Kluyveromyces marxianus、Kluyveromyces nonfermentans、又はKluyveromyces wickerhamii。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、ピキア属内の種であり得る。例えば、宿主細胞は、以下のうちの1つであり得る:Pichia farinose、Pichia anomala、Pichia heedii、Pichia guilliermondii、Pichia kluyveri、Pichia membranifaciens、Pichia norvegensis、Pichia ohmeri、Pichia pastoris、Pichia methanolica、又はPichia subpelliculosa。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、サッカロマイセス属内の種であり得る。例えば、宿主細胞は、以下のうちの1つであり得る:Saccharomyces arboricolus、Saccharomyces bayanus、Saccharomyces bulderi、Saccharomyces cariocanus、Saccharomyces cariocus、Saccharomyces cerevisiae、Saccharomyces cerevisiae var boulardii、Saccharomyces chevalieri、Saccharomyces dairenensis、Saccharomyces ellipsoideus、Saccharomyces eubayanus、Saccharomyces exiguous、Saccharomyces florentinus、Saccharomyces fragilis、Saccharomyces kudriavzevii、Saccharomyces martiniae、Saccharomyces mikatae、Saccharomyces monacensis、Saccharomyces norbensis、Saccharomyces paradoxus、Saccharomyces pastorianus、Saccharomyces spencerorum、Saccharomyces turicensis、Saccharomyces unisporus、Saccharomyces uvarum、又はSaccharomyces zonatus。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、以下のうちの1つであり得る:Saccharomyces cerevisiae、Pichia pastoris、Pichia methanolica、Schizosaccharomyces pombe、又はHansenula anomala。
組換えCRIP又はペプチド-IAを生成するための宿主生物としての酵母細胞の使用は、当業者に周知の例外的な方法である。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物は、酵母の任意の種(Saccharomyces、Pichia、Kluyveromyces、Hansenula、Yarrowia、又はSchizosaccharomyces属の任意の種を含むが、これらに限定されない)を用いて実施することができ、Saccharomyces種には、Saccharomycesの任意の種が含まれ、例えば、Saccharomyces cerevisiae種は、以下の株から選択される:INVSc1、YNN27、S150-2B、W303-1B、CG25、W3124、JRY188、BJ5464、AH22、GRF18、W303-1A、及びBJ3505。一部の実施形態では、ピキア属種のメンバーには、ピキア属の任意の種が含まれ(例えば、ピキア属種Pichia pastoris)、例えば、Pichia pastorisは、以下の株から選択される:Bg08、Y-11430、X-33、GS115、GS190、JC220、JC254、GS200、JC227、JC300、JC301、JC302、JC303、JC304、JC305、JC306、JC307、JC308、YJN165、KM71、MC100-3、SMD1163、SMD1165、SMD1168、GS241、MS105、任意のpep4ノックアウト株及び任意のprb1ノックアウト株、並びに以下の株から選択されるPichia pastoris:Bg08、X-33、SMD1168、及びKM71。一部の実施形態では、任意のクリベロマイセス属種を使用して、本明細書に記載の方法を達成することができ、クリベロマイセス属の任意の種(例えば、Kluyveromyces lactis)が含まれ、本発明者らの教示として、Kluyveromyces lactisの染色は、以下の株であり得るが、必ずしもこれらから選択する必要はない:GG799、YCT306、YCT284、YCT389、YCT390、YCT569、YCT598、NRRL Y-1140、MW98-8C、MS1、CBS293.91、Y721、MD2/1、PM6-7A、WM37、K6、K7、22AR1、22A295-1、SD11、MG1/2、MSK110、JA6、CMK5、HP101、HP108、及びPM6-3C、加えて、Kluyveromyces lactis種は、GG799、YCT306、及びNRRL Y-1140から選択される。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、Aspergillus oryzaeであり得る。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、Aspergillus japonicasであり得る。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、Aspergillus nigerであり得る。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、Bacillus licheniformisであり得る。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、Bacillus subtilisであり得る。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するために使用される宿主細胞は、Trichoderma reeseiであり得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載の手順及び方法は、酵母である宿主細胞を使用して達成することができる。酵母は、Hansenulaの任意の種を含むが、これらに限定されず、Hansenulaの任意の種、及び好ましくはHansenula polymorphaが含まれる。一部の実施形態では、本明細書に記載の手順及び方法は、酵母の任意の種で達成することができ、Yarrowiaの任意の種、例えば、Yarrowia lipolyticaが含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、本明細書に記載の手順及び方法は、酵母の任意の種で達成することができ、Schizosaccharomycesの任意の種を含むが、これらに限定されず、Schizosaccharomycesの任意の種、及び好ましくはSchizosaccharomyces pombeが含まれる。
酵母細胞培養
一部の実施形態では、酵母種、例えば、Kluyveromyces lactis、Saccharomyces cerevisiae、Pichia pastoris、及びその他を、宿主生物として使用することができる。酵母細胞培養技術は、当業者に周知である。酵母細胞培養の例示的な方法は、Evans,Yeast Protocols.Springer(1996)、Bill,Recombinant Protein Production in Yeast.Springer(2012)、Hagan et al.,Fission Yeast:A Laboratory Manual,CSH Press(2016)、Konishi et al.,Improvement of the transformation efficiency of Saccharomyces cerevisiae by altering carbon sources in pre-culture.Biosci Biotechnol Biochem.2014;78(6):1090-3、Dymond,Saccharomyces cerevisiae growth media.Methods Enzymol.2013;533:191-204、Looke et al.,Extraction of genomic DNA from yeasts for PCR-based applications.Biotechniques.2011 May;50(5):325-8、及びRomanos et al.,Culture of yeast for the production of heterologous proteins.Curr Protoc Cell Biol.2014 Sep 2;64:20.9.1-16に見出すことができる(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
酵母細胞発酵培地及びストックのレシピは、以下のように記載される:(1)MSM培地のレシピ:2g/Lのクエン酸ナトリウム二水和物、1g/Lの硫酸カルシウム二水和物(0.79g/Lの無水硫酸カルシウム)、42.9g/Lのリン酸一カリウム、5.17g/Lの硫酸アンモニウム、14.33g/Lの硫酸カリウム、11.7g/Lの硫酸マグネシウム七水和物、2mL/LのPTM1微量塩溶液、0.4ppmのビオチン(500×、200ppmストックから)、1~2%の純粋なグリセロール又は他の炭素源。(2)PTM1微量塩溶液:硫酸銅-5HO 6.0g、ヨウ化ナトリウム 0.08g、硫酸マンガン-HO 3.0g、モリブデン酸ナトリウム-2HO 0.2g、ホウ酸 0.02g、塩化コバルト 0.5g、塩化亜鉛 20.0g、硫酸鉄-7HO 65.0g、ビオチン 0.2g、硫酸 5.0ml、水を添加し最終体積を1リットルにする。K.lactis規定培地(DMSor)の例示的な組成物は、次の通りである:11.83g/L KHPO、2.299g/L KHPO、20g/Lの発酵性糖(例えば、ガラクトース、マルトース、ラトトリオース、スクロース、フルクトース、若しくはグルコース)及び/又は糖アルコール(例えば、エリスリトール、水素化デンプン加水分解物、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、及びキシリトール)、1g/L MgSO.7HO、10g/L(NH)SO、0.33g/L CaCl2.2HO、1g/L NaCl、1g/L KCl、5mg/L CuSO.5HO、30mg/L MnSO.HO、10mg/L ZnCl、1mg/L KI、2mg/L CoCl.6HO、8mg/L NaMoO.2HO、0.4mg/L HBO、15mg/L FeCl.6HO、0.8mg/L ビオチン、20mg/L パントテン酸カルシウム、15mg/L チアミン、16mg/L ミオイノシトール、10mg/L ニコチン酸、及び4mg/L ピリドキシン。
酵母細胞は、48ウェルのディープウェルプレートで培養することができる(接種後、滅菌透気性カバーで密封する)。プレート上で培養された酵母(例えば、K.lactis)のコロニーを採取し、ウェル当たり2.2mLの培地(DMSorで構成される)を含むディープウェルプレートに接種することができる。接種されたディープウェルプレートは、冷蔵インキュベーターシェーカー内で280rpmで振盪しながら、23.5℃で6日間増殖され得る。接種後6日目に、条件培地を、4000rpmで10分間の遠心分離によって回収する必要がある。続いて、0.22μM膜を備えた濾過プレートを使用して濾過し、濾過された培地をHPLC分析にかける。
酵母形質転換、ペプチド精製、及び分析
酵母形質転換の例示的な方法は次の通りである:CRIP ORF、CRIP-殺虫タンパク質ORF、又はペプチド-IA ORFを担持する発現ベクターを、酵母細胞に形質転換する。まず、発現ベクターは、通常、相同組換えを介した染色体への組み込みを促進するために、特異的な制限酵素切断によって線状化される。次いで、線状発現ベクターは、形質転換の化学的方法又はエレクトロポレーション法によって酵母細胞に形質転換され、相同組換えにより酵母ゲノムの標的遺伝子座に組み込まれる。組み込みは、同じ染色体遺伝子座で複数回行われ得る。したがって、形質転換された酵母細胞のゲノムは、CRIP又はペプチド-IA発現カセットを複数のコピー含み得る。正常に形質転換された酵母細胞は、発現ベクターに操作され、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IA ORFが酵母染色体にともに組み込まれる選択的マーカーを有利にする増殖条件を使用して特定することができる。そのようなマーカーの例としては、限定されないが、アセトアミドプロトトロフィー、ゼオシン耐性、ジェネティシン耐性、ノウルセオトリシン耐性、及びウラシルプロトトロフィーが挙げられる。
予測不可能で可変的な要因の影響により(例えば、遺伝子及び遺伝子ネットワークのエピジェネティック修飾、並びに形質転換手順を受ける集団の個々の細胞で生じる組み込み事象の数の変動)、所与の形質転換プロセスの個々の酵母コロニーは、CRIP ORF、CRIP-殺虫タンパク質ORF、又はペプチド-IA ORFを生成する能力が異なるであろう。したがって、CRIP又はペプチド-IA導入遺伝子を担持するトランスジェニック酵母コロニーは、高収率株についてスクリーニングされるべきである。かかるスクリーニングのための2つの有効な方法は(各々、その後の分析のための条件培地試料を提供するトランスジェニック酵母の小規模培養の増殖に依存する)、逆相HPLC又はイエバエ注射手順を使用して、陽性トランスジェニック酵母コロニーからの条件培地試料を分析する。
トランスジェニック酵母培養は、各チューブに5~10mLの規定培地を添加した14mL丸底ポリプロピレン培養チューブを使用して行うか、又は各ウェルに2.2mLの規定培地を添加した48ウェルのディープウェル培養プレートで行うことができる。粗製タンパク質性抽出物又は副産物(例えば、酵母抽出物若しくはペプトン)を含まない規定培地を培養に使用して、その後のスクリーニングステップのために回収された条件培地中のタンパク質のバックグラウンドを減らす。培養は、最大細胞密度に達するまで、約5~6日間、最適な温度(例えば、K.lactisの場合は23.5℃)で実施される。ここで、CRIP又はペプチド-IAが、形質転換酵母細胞によって産生され、細胞から増殖培地に分泌されるであろう。スクリーニングのための試料を調製するために、細胞を遠心分離によって培養物から除去し、上清を条件培地として回収し、次いで、0.22μmフィルター膜を通して濾過することによって浄化し、次いで、株スクリーニングの準備をする。
一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAで形質転換された陽性酵母コロニーは、推定酵母コロニーの逆相HPLC(rpHPLC)スクリーニングを介してスクリーニングすることができる。このスクリーニング方法では、C18の結合相を有するHPLC分析用カラムを使用することができる。移動相溶媒としてアセトニトリル及び水を使用し、ペプチド検出には220nmに設定された紫外線吸光度検出器を使用する。適量の条件培地試料をrpHPLCシステムにロードし、移動相溶媒の線形勾配で溶出する。HPLCクロマトグラフにおける殺虫ペプチドの対応するピーク面積を使用して、条件培地中のCRIP又はペプチド-IA濃度を定量化する。既知の量の純粋なCRIP又はペプチド-IAを、同じHPLCプロトコルで、同じrpHPLCカラムを通して実行して、ペプチドの保持時間を確認し、定量化のための標準的なペプチドHPLC曲線を生成する。
陽性K.lactis細胞の例示的な逆相HPLCスクリーニングプロセスは、以下の通りである:CRIP ORF、CRIP-殺虫タンパク質ORF、又はペプチド-IA ORFを発現ベクターpKLAC1に挿入し、K.lactis株YCT306(New England Biolabs,Ipswich,MA,USAから)に形質転換することができる。pKLAC1ベクターは、組み込み発現ベクターである。CRIP又はペプチド-IA導入遺伝子がpKLAC1にクローニングされ、YCT306に形質転換されたら、それらの発現を、LAC4プロモーターによって制御した。得られた形質転換コロニーは、α接合因子シグナルペプチド、Kex2切断部位、及び成熟CRIP又はペプチド-IAを含むプレプロペプチドを産生した。α接合因子シグナルペプチドは、プレプロペプチドを内因性分泌経路に入るように誘導し、成熟CRIP又はペプチド-IAが、増殖培地に放出される。
一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IA発現のためのコドン最適化は、2ラウンドで行われ得る。例えば、第1のラウンドでは、高発現DNA配列、CRIP又はペプチド-IA発現ORFの複数のバリアントのいくつかの共通の特徴に基づいて、発現α接合因子シグナルペプチド、Kex2切断部位、及びCRIP又はペプチド-IAが設計され、それらの発現レベルが、K.lactisのYCT306株で評価され、初期K.lactis発現アルゴリズムをもたらされる。最適化の第2のラウンドでは、追加のバリアントCRIP又はペプチド-IAの発現ORFが、初期K.lactis発現アルゴリズムに基づいて設計されて、K.lactis発現アルゴリズムが更に微調整され、K.lactisにおけるCRIP又はペプチド-IA発現のための最良のORFが特定され得る。一部の実施形態では、前述の最適化から得られたDNA配列は、α-MFシグナルペプチド、Kex2切断部位、及びCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAをコードするオープンリーディングフレームを有することができる。これらを、Hind III及びNot I制限部位を使用してpKLAC1ベクターにクローニングして、CRIP又はペプチド-IA発現ベクターを得ることができる。
一部の実施形態では、酵母、Pichia pastorisは、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IA発現カセットで形質転換され得る。P.pastorisを形質転換するための例示的な方法は、以下の通りである:ベクターであるpJUGαKR及びpJUZαKRを使用して、CRIP又はペプチド-IAをP.pastorisに形質転換することができる。pJUGαKR及びpJUZαKRベクターは、Biogrammatics,Carlsbad,California,USAから入手可能である。両方のベクターは、組み込みベクターであり、ウラシルホスホリボシルトランスフェラーゼプロモーター(pUPP)を使用して、異種導入遺伝子の発現を増強する。ベクター間の唯一の違いは、pJUGαKRが宿主酵母にG418耐性を提供するのに対して、pJUZαKRがゼオシン耐性を提供することである。CRIP又はペプチド-IAをコードする相補オリゴヌクレオチドの対を、2つの酵母発現ベクターへのサブクローニング用に設計及び合成する。ハイブリダイゼーション反応は、対応する相補オリゴヌクレオチドを、30mMのNaCl、10mMのTris-Cl(pH8)(全て最終濃度)中で、20μMの最終濃度に混合し、次いで、95℃で20分間インキュベートし、続いて、92℃から始めて17℃で終わり、温度が20分毎に3℃の低下するように9時間インキュベートする。ハイブリダイゼーション反応により、CRIP又はペプチド-IAをコードするDNA断片がもたらされる。2つのP.pastorisベクターを、BsaI-HF制限酵素で消化し、次いで、この反応の二本鎖DNA産物を、標準的な手順を使用して線状化P.pastorisベクターにサブクローニングする。サブクローンの配列の検証後、プラスミドのアリコートを、P.pastoris株Bg08へのエレクトロポレーションによってトランスフェクトする。得られた形質転換酵母は、操作されたエレメントによってベクターpJUZαKR及びpJUGαKRにそれぞれ付与されるゼオシン又はG418に対する耐性に基づいて選択され、本明細書に記載されるように、培養及びスクリーニングされ得る。
ORF及びその構成要素の詳細な記載を以下に提供する。
酵母ペプチド収率のスクリーニング及び評価
ペプチド収率は、当業者に既知の方法(例えば、キャピラリーゲル電気泳動(CGE)、ウエスタンブロット分析など)のいずれかによって決定することができる。活性アッセイは、本明細書に記載され、当該技術分野で既知であるように、ペプチド収率に関する情報を提供することもできる。一部の実施形態では、これら又は当該技術分野で既知の任意の他の方法を使用して、ペプチド収率を評価することができる。
定量化アッセイ
一部の実施形態では、限定されないが、CRIPペプチド収率は、以下を使用して測定することができる:HPLC、質量分析(MS)及び関連技術、LC/MS/MS、逆相タンパク質アレイ(RPPA)、免疫組織化学、ELISA、懸濁ビーズアレイ、質量分析、ドットブロット、SDS-PAGE、キャピラリーゲル電気泳動(CGE)、ウエスタンブロット分析、Bradfordアッセイ、260nmでのUV吸収の測定、Lowryアッセイ、Smith銅/ビシンコニン酸アッセイ、分泌アッセイ、Pierceタンパク質アッセイ、ビウレット反応など。タンパク質定量化の例示的な方法は、Stoscheck,C.1990“Quantification of Protein”Methods in Enzymology ,182:50-68、Lowry,O.Rosebrough,A.,Farr,A.and Randall,R.1951 J.Biol.Chem.193:265、Smith,P.et al.,(1985)Anal.Biochem.150:76-85;Bradford,M.1976“A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding”Anal.Biochem.72:248-254、Cabib,E.and Polacheck,I.1984“Protein assay for dilute solutions.”Methods in Enzymology,104:318-328、Turcanu,Victor;Williams,Neil A.(2001).”Cell identification and isolation on the basis of cytokine secretion:A novel tool for investigating immune responses.”Nature Medicine.7(3):373-376、米国特許第6,391,649号に提供されている(それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
他の実施形態では、CRIPペプチド収率は、以下を含むが、これらに限定されない方法を使用して定量化及び/又は評価することができる:培養物の体積当たりの組換えタンパク質質量(例えば、培養物1リットル当たりのグラム若しくはミリグラムタンパク質)、細胞溶解後に得られる組換えタンパク質不溶性沈殿物の割合若しくは分率(例えば、上清から抽出された組換えタンパク質の量/不溶性成分中のタンパク質の量)、活性タンパク質の割合若しくは分率(例えば、タンパク質量で使用のための活性タンパク質の量/分析)、総細胞タンパク質(tcp)の割合若しくは分率、並びに/又はタンパク質の量/細胞及び乾燥バイオマスの割合若しくは比率。
一部の実施形態では、収率が培養体積に関して発現され、特に、異なる培養物間の収率が比較されている場合、培養細胞密度が考慮され得る。
一部の実施形態では、本発明は、総細胞タンパク質(tcp)の少なくとも約5%、少なくとも約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、又はそれ以上である異種ポリペプチドを産生する方法を提供する。「総細胞タンパク質の割合(%)」は、凝集細胞タンパク質の割合としての、宿主細胞における異種ポリペプチドの量である。総細胞タンパク質の割合の決定は、当該技術分野で周知である。
「総細胞タンパク質(tcp)」又は「総細胞タンパク質の割合(% tcp)」は、凝集細胞タンパク質の割合としての、宿主細胞におけるタンパク質又はポリペプチドの量である。総細胞タンパク質の割合を決定するための方法は、当該技術分野で周知である。
一部の実施形態では、HPLCを使用して、ペプチド収率を定量化することができる。例えば、一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAの収率は、Onyxモノリシック4.5×100mm C18逆相分析用HPLCカラム及びオートインジェクターを備えたAgilent 1100 HPLCシステムを使用して評価することができる。Onyxモノリシック4.5×100mm C18逆相分析用HPLCカラム及びオートインジェクターを備えたAgilent 1100 HPLCシステムの例示的な使用は、以下の通りである。形質転換K.lactis細胞由来の濾過した条件培地試料を、Onyxモノリシック4.5×100mm C18逆相分析用HPLCカラム及び自動注入器を備えたAgilent 1100 HPLCシステムを使用して、HPLC分析に使用される2つの移動相溶媒を構成するHPLCグレードの水と0.1%のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリルとを分析することによって分析する。CRIP又はペプチド-IAの両方のピーク面積を、HPLCクロマトグラフを使用して分析し、次いで、条件培地中のペプチド濃度を計算するために使用し、正規化されたペプチド収率としての(OD600の測定によって決定される)対応する最終細胞密度に更に正規化することができる。
活性アッセイ
一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAで形質転換された陽性酵母コロニーは、イエバエ注射アッセイを使用してスクリーニングすることができる。CRIP又はペプチド-IAは、測定された用量で背側胸部の体壁を通して注射した場合、イエバエを麻痺/殺傷することができる。CRIP又はペプチド-IAの有効性は、ペプチドの麻痺量/致死量の中央値(PD50/LD50)によって定義することができ、これは、それぞれ、注射されたイエバエの50%のノックダウン率又は死亡率をもたらす。純粋なCRIP又はペプチド-IAは、通常、イエバエ注射アッセイで使用され、PD50/LD50値が決定され得る標準的な用量反応曲線を生成する。純粋なCRIP又はペプチド-IAの標準用量応答曲線の分析からのPD50/LD50値を使用して、形質転換酵母によって産生されたCRIP又はペプチド-IAの定量化は、イエバエ注射アッセイ(対応する条件培地の段階希釈液を用いて行われる)を使用して達成され得る。
例示的なイエバエ注射バイオアッセイは、以下の通りである:条件培地を段階希釈して、イエバエ注射バイオアッセイから完全な用量反応曲線を生成する。注射前に、成体イエバエ(Musca domestica)をCOで固定化し、注射用に12~18mgのイエバエを選択する。1ccシリンジと30ゲージ針を装填したマイクロアプリケーターを使用して、ハエ1匹当たり0.5μLの段階希釈した条件培地試料を、背側胸部の体壁を通してイエバエに注射する。注射したイエバエを、蓋の上に湿らせた濾紙及び呼吸孔を備えた密閉容器に配置し、それらを、注射24時間後に、ノックダウン率又は死亡率のスコアリングによって調べる。正規化した収率を算出する。ペプチド収率は、条件培地中のmg/Lの単位のペプチド濃度を意味する。しかしながら、ペプチド収率は、株の産生速度を正確に比較するには必ずしも十分ではない。個々の株は、異なる増殖速度を有し得る。したがって、培養物を回収すると、異なる培養物は、細胞密度が異なり得る。より高い産生速度を有する別の株よりも、株のペプチド産生速度が低い場合でさえ、高い細胞密度を有する培養物は、培地中により高い濃度のペプチドを産生し得る。したがって、「正規化された収率」という用語は、ペプチド収率を、対応する培養物の細胞密度で割ることによって作成され、これにより、株間のペプチド産生速度のより良い比較が可能になる。細胞密度は、600nmの光の吸光度によって、「A」(吸光度単位)の単位で表される。
CRIP又はペプチド-IAによる形質転換を経た酵母コロニーをスクリーニングすることで、数百の潜在的なコロニーから高収率の酵母株を特定することができる。本明細書に記載の最適化された発酵培地及び発酵条件を使用した場合、これらの株をバイオリアクターで発酵させると、少なくとも最大4g/L、又は少なくとも最大3g/L、又は少なくとも最大2g/LのCRIP又はペプチド-IAの収率が達成され得る。より高い産生速度(mg/Lで表示)は、約100mg/L~約100,000mg/L、若しくは約100mg/L~約90,000mg/L、若しくは約100mg/L~約80,000mg/L、若しくは約100mg/L~約70,000mg/L、若しくは約100mg/L~約60,000mg/L、若しくは約100mg/L~約50,000mg/L、若しくは約100mg/L~約40,000mg/L、若しくは約100mg/L~約30,000mg/L、若しくは約100mg/L~約20,000mg/L、若しくは約100mg/L~約17,500mg/L、若しくは約100mg/L~約15,000mg/L、若しくは約100mg/L~約12,500mg/L、若しくは約100mg/L~約10,000mg/L、若しくは約100mg/L~約9,000mg/L、若しくは約100mg/L~約8,000mg/L、若しくは約100mg/L~約7,000mg/L、若しくは約100mg/L~約6,000mg/L、若しくは約100mg/L~約5,000mg/L、若しくは約100mg/L~約3,000mg/L、若しくは約100mg/L~2,000mg/L、若しくは約100mg/L~1,500mg/L、若しくは約100mg/L~1,000mg/L、若しくは約100mg/L~750mg/L、若しくは約100mg/L~500mg/L、若しくは約150mg/L~100,000mg/L、若しくは約200mg/L~100,000mg/L、若しくは約300mg/L~100,000mg/L、若しくは約400mg/L~100,000mg/L、若しくは約500mg/L~100,000mg/L、若しくは約750mg/L~100,000mg/L、若しくは約1,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約1,250mg/L~100,000mg/L、若しくは約1,500mg/L~100,000mg/L、若しくは約2,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約2,500mg/L~100,000mg/L、若しくは約3,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約3,500mg/L~100,000mg/L、若しくは約4,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約4,500mg/L~100,000mg/L、若しくは約5,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約6,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約7,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約8,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約9,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約10,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約12,500mg/L~100,000mg/L、若しくは約15,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約17,500mg/L~100,000mg/L、若しくは約20,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約30,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約40,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約50,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約60,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約70,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約80,000mg/L~100,000mg/L、若しくは約90,000mg/L~100,000mg/L程度、又は提供された任意の値のいずれかの範囲、あるいは変換前にペプチドを産生するために使用した同じ若しくは類似の産生方法を使用して変換前のペプチドで達成され得る収率よりも更に高い収率であり得る。
前述の方法のいずれかを使用及び/又は調整して、CRIP及び/又はペプチド-IA(例えば、かかる方法に供される殺虫剤、例えば、アミノ酸、ペプチド、及び/又はタンパク質のポリマー)を生成することができる。例えば、前述の方法のいずれかを使用して、限定されないが、ACTXペプチド(例えば、U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、rκ-ACTX-Hv1c、ω-ACTX-Hv1a、及び/又はω-ACTX-Hv1a+2)、Γ-CNTX-Pn1a、U1-アガトキシン-Ta1b、TVP、Av2、Av3、AVP、及び/又はBt毒素(例えば、Cry毒素、Cyt毒素、若しくはVip)を含む、本明細書に記載のCRIP又はペプチド-IAのいずれかを産生、生成、作製、発現、転写、翻訳、合成、又はその他、作製することができる。
培養条件及び発酵条件
細胞培養技術は、当該技術分野で周知である。一部の実施形態では、培養方法及び/又は材料は、必ず選択された宿主細胞に基づく適応を必要とするであろう、かつ、かかる適応(例えば、pH、温度、培地含有物などを改変すること)は、当業者に周知である。一部の実施形態では、任意の既知の培養技術を用いて、本発明のCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを生成することができる。
例示的な培養方法は、米国特許第3,933,590号、同第3,946,780号、同第4,988,623号、同第5,153,131号、同第5,153,133号、同第5,155,034号、同第5,316,905号、同第5,330,908号、同第6,159,724号、同第7,419,801号、同第9,320,816号、同第9,714,408号、及び同第10,563,169号に提供されている(それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。
酵母培養
酵母細胞培養技術は、当業者に周知である。酵母細胞培養の例示的な方法は、Evans,Yeast Protocols.Springer(1996)、Bill,Recombinant Protein Production in Yeast.Springer(2012)、Hagan et al.,Fission Yeast:A Laboratory Manual,CSH Press(2016)、Konishi et al.,Improvement of the transformation efficiency of Saccharomyces cerevisiae by altering carbon sources in pre-culture.Biosci Biotechnol Biochem.2014;78(6):1090-3、Dymond,Saccharomyces cerevisiae growth media.Methods Enzymol.2013;533:191-204、Looke et al.,Extraction of genomic DNA from yeasts for PCR-based applications.Biotechniques.2011 May;50(5):325-8、及びRomanos et al.,Culture of yeast for the production of heterologous proteins.Curr Protoc Cell Biol.2014 Sep 2;64:20.9.1-16に見出すことができる(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
酵母は、様々な培地で培養することができ、例えば、一部の実施形態では、酵母は、最少培地、YPD培地、酵母合成ドロップアウト培地、酵母窒素源基礎培地(YNB、アミノ酸の有無)、YEPD培地、ADE D培地、ADE DS培地、LEU D培地、HIS D培地、又はミネラル塩培地で培養することができる。
一部の実施形態では、酵母は最少培地で培養され得る。一部の実施形態では、最少培地成分は、2%の糖、リン酸緩衝液(pH6.0)、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、硫酸アンモニウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸銅、硫酸マンガン、塩化亜鉛、ヨウ化カリウム、塩化コバルト、モリブデン酸ナトリウム、ホウ酸、塩化鉄、ビオチン、パントテン酸カルシウム、チアミン、ミオイノシトール、ニコチン酸、及びピリドキシンを含み得る。
一部の実施形態では、酵母は、YPD培地で培養することができる。YPD培地は、細菌学的ペプトン、酵母抽出物、及びグルコースを含む。
一部の実施形態では、酵母を、酵母合成ドロップアウト培地で培養することができ、これを使用して、必要な成分を欠く培地で当該形質転換体が増殖することを可能にするプラスミドで形質転換された、特定の培地成分なしでは増殖することができない栄養要求性変異株を区別することができる。
一部の実施形態では、酵母は、窒素、ビタミン、微量元素、及び塩類を含む酵母窒素源基礎培地(アミノ酸を含む又は含まないYNB)を使用して培養することができる。
一部の実施形態では、培地は、YEPD培地、例えば、2%のD-グルコース、2%のバクトペプトン(Difco Laboratories,Detroit,MI)、1%のバクト酵母抽出物(Difco)、0.004%のアデニン、及び0.006%のL-ロイシンを含む培地、又はそのバリエーションであってもよく、炭素源が、糖アルコール(例えば、グリセロール若しくはソルビトール)である。
一部の実施形態では、培地は、ADE D培地、例えば、0.056%-Ade-Trp-Thr粉末、アミノ酸を含まない0.67%の酵母窒素源基本培地、2%のD-グルコース、及び0.5%の200×トリプトファンスレオニン溶液を含む培地、又はそのバリエーションであってもよく、炭素源が、糖アルコール(例えば、グリセロール若しくはソルビトール)である。
一部の実施形態では、培地は、ADE DS”培地、例えば、0.056%-Ade-Trp-Thr粉末、アミノ酸を含まない0.67%の酵母窒素源基本培地、2%のD-グルコース、0.5%の200×トリプトファンスレオニン溶液、及び18.22%のD-ソルビトールを含む培地、又はそのバリエーションであってもよく、炭素源が、完全に糖アルコール(例えば、グリセロール若しくはソルビトール)である。
一部の実施形態では、培地は、LEU D培地、例えば、0.052%-Leu-Trp-Thr粉末、アミノ酸を含まない0.67%の酵母窒素源基本培地、2%のD-グルコース、及び0.5%の200×トリプトファンスレオニン溶液を含む培地、又はそのバリエーションであってもよく、炭素源が、糖アルコール(例えば、グリセロール若しくはソルビトール)である。
一部の実施形態では、培地は、HIS D培地、例えば、0.052%-His-Trp-Thr粉末、アミノ酸を含まない0.67%の酵母窒素源基本培地、2%のD-グルコース、及び0.5%の200×トリプトファンスレオニン溶液を含む培地、又はそのバリエーションであってもよく、炭素源が、糖アルコール(例えば、グリセロール若しくはソルビトール)である。
一部の実施形態では、ミネラル塩培地を使用することができる。ミネラル塩培地は、ミネラル塩と、炭素源(例えば、グルコース、スクロース、又はグリセロール)と、からなる。ミネラル塩培地の例としては、例えば、M9培地、シュードモナス培地(ATCC 179)、及びDavisーMingioli培地が挙げられる。Davis & Mingioli(1950)J.Bact.60:17-28を参照されたい。ミネラル塩培地を作製するために使用されるミネラル塩には、例えば、リン酸カリウム、硫酸アンモニウム又は塩化アンモニウム、硫酸マグネシウム又は塩化マグネシウム、及び微量ミネラル(例えば、塩化カルシウム、ホウ酸塩、並びに鉄、銅、マンガン、及び亜鉛の硫酸塩)の中から選択されるものが含まれる。典型的には、ペプトン、トリプトン、アミノ酸、又は酵母抽出物などの有機窒素源は、ミネラル塩培地には含まれない。代わりに、無機窒素源が使用され、これは、例えば、アンモニウム塩、アンモニア水溶液、及び気体アンモニアの中から選択され得る。ミネラル塩培地は、典型的には、炭素源としてグルコース又はグリセロールを含む。
ミネラル塩培地と比較して、最少培地はまた、ミネラル塩及び炭素源を含むこともできるが、例えば、低レベルのアミノ酸、ビタミン、ペプトン、又は他の成分を補充することができる(ただし、これらは非常に最小レベルで添加される)。培地は、当該技術分野で、例えば、米国特許出願公開第2006/0040352号(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)に記載されている方法を使用して調製することができる。本発明の方法に有用な培養手順及びミネラル塩培地の詳細は、Riesenberg,D et al.,1991,“High cell density cultivation of Escherichia coli at controlled specific growth rate,”J.Biotechnol.20(1):17-27によって記載されている。
一部の実施形態では、Kluyveromyces lactisは、2%のグルコース、ガラクトース、ソルビトール、又はグリセロールを唯一の炭素源として補充した最少培地で増殖される。培養物は、β-ガラクトシダーゼ測定の場合、30℃で、対数増殖中期(24~48時間)までインキュベートし、又は異種タンパク質発現の場合、23.5℃で6日間インキュベートする。
一部の実施形態では、酵母細胞は、48ウェルのディープウェルプレートで培養することができる(接種後、滅菌透気性カバーで密封する)。プレート上で培養された酵母(例えば、K.lactis)のコロニーを採取し、ウェル当たり2.2mLの培地(DMSorで構成される)を含むディープウェルプレートに接種することができる。接種されたディープウェルプレートは、冷蔵インキュベーターシェーカー内で280rpmで振盪しながら、23.5℃で6日間増殖され得る。接種後6日目に、条件培地を、4000rpmで10分間の遠心分離によって回収する必要がある。続いて、0.22μM膜を備えた濾過プレートを使用して濾過し、濾過された培地をHPLC分析にかける。
一部の実施形態では、酵母種(例えば、Kluyveromyces lactis、Saccharomyces cerevisiae、Pichia pastoris、及びその他)、宿主生物として使用することができ、及び/又は本明細書に記載の方法を使用して修飾される酵母。
温度及びpH条件は、培養の段階及び選択された宿主細胞種に応じて異なる。細胞培養における温度及びpHなどの変数は、当業者には容易に知られている。
pHレベルは、酵母の培養において重要である。当業者は、培養プロセスには、酵母培養の開始だけでなく、培養の維持も含まれることを理解するであろう。酵母培養は、任意のpHレベルで開始され得るが、酵母培養の培地は、経時的により酸性になる(すなわち、pHが低下する)傾向があるため、培養プロセス中にpHレベルを監視するために注意が必要である。
本発明の一部の実施形態では、酵母は、使用される酵母の種、培養の段階、及び/又は温度に基づいて要求されるpHレベルの培地で増殖される。したがって、一部の実施形態では、pHレベルは、約2~約10の範囲内に入り得る。当業者は、ほとんどの微生物にとって最適なpHが中性点(pH7.0)付近であることを認識するであろう。しかしながら、一部の実施形態では、いくつかの真菌種が、酸性環境を好む。したがって、一部の実施形態では、pHは、2~6.5の範囲であり得る。一部の実施形態では、pHは、約4~約4.5の範囲であり得る。いくつかの真菌種(例えば、カビ)は、約2~約8.5のpHで増殖することができるが、酸性pHを好む。Mountney & Gould,Practical food microbiology and technology.1988.Ed.3、及びPena et al.,Effects of high medium pH on growth,metabolism and transport in Saccharomyces cerevisiae.FEMS Yeast Res.2015 Mar;15(2):fou005を参照されたい。
他の実施形態では、pHは、約5.7~5.9、5.8~6.0、5.9~6.1、6.0~6.2、6.1~6.3、6.2~6.5、6.4~6.7、6.5~6.8、6.6~6.9、6.7~7.0、6.8~7.1、6.9~7.2、7.0~7.3、7.1~7.4、7.2~7.5、7.3~7.6、7.4~7.7、7.5~7.8、7.6~7.9、7.7~8.0、7.8~8.1、7.9~8.2、8.0~8.3、8.1~8.4、8.2~8.5、8.3~8.6、8.4~8.7、又は8.5~8.8である。
一部の実施形態では、培地のpHは、少なくとも5.5であり得る。他の態様では、培地は、約5.5のpHレベルを有し得る。他の態様では、培地は、4~8のpHレベルを有し得る。場合によっては、培養は、5.5~8のpHレベルで維持される。他の態様では、培地は、6~8のpHレベルを有する。場合によっては、培地は、6~8のpHレベルで維持されるpHレベルを有する。一部の実施形態では、酵母は、6.1~8.1のpHレベルで増殖及び/又は維持される。一部の実施形態では、酵母は、6.2~8.2のpHレベルで増殖及び/又は維持される。一部の実施形態では、酵母は、6.3~8.3のpHレベルで増殖及び/又は維持される。一部の実施形態では、酵母は、6.4~8.4のpHレベルで増殖及び/又は維持される。一部の実施形態では、酵母は、5.5~8.5のpHレベルで増殖及び/又は維持される。一部の実施形態では、酵母は、6.5~8.5のpHレベルで増殖及び/又は維持される。一部の実施形態では、酵母は、約5.6、5.7、5.8、又は5.9のpHレベルで増殖される。一部の実施形態では、酵母は、約6のpHレベルで増殖される。一部の実施形態では、酵母は、約6.5のpHレベルで増殖される。一部の実施形態では、酵母は、約6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、又は7.0のpHレベルで増殖される。一部の実施形態では、酵母は、約7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、又は8.0のpHレベルで増殖される。一部の実施形態では、酵母は、8を超えるレベルで増殖される。
一部の実施形態では、培地のpHは、pH2~8.5の範囲であり得る。特定の実施形態では、pHは、約4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7又は8.8である。
酵母培養の例示的な方法は、「抑制性酵母プロモーター」と題する米国特許第5,436,136号(出願:12/20/1991、譲受人:Ciba-Geigy Corporation)、「酵母発現システム、酵母においてポリペプチドを産生する方法、及びそれに関連する組成物」と題する米国特許第6,645,739号(出願:07/26/2001、譲受人:Phoenix Pharmacologies,Inc.,Lexington,KY)、及び「酵母用培地」と題する米国特許第10,023,836号(出願:08/23/2013、譲受人:Yamaguchi University)に見出すことができる(それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
発酵
本発明は、任意の発酵形式での宿主生物の培養を企図する。例えば、バッチ、フェッドバッチ、半連続、及び連続発酵モードを、本明細書で用いることができる。
発酵は、任意のスケールで実行することができる。本発明に従って企図される方法及び技術は、任意のスケールでの組換えタンパク質発現に有用である。したがって、一部の実施形態では、例えば、マイクロリットルスケール、ミリリットルスケール、センチリットルスケール、及びデシリットルスケール発酵体積を使用してもよく、1リットルスケール及びより大きな発酵体積を使用してもよい。
一部の実施形態では、発酵体積は、約1リットル以上である。例えば、一部の実施形態では、発酵体積は、約1リットル~約100リットルである。一部の実施形態では、発酵体積は、約1リットル、約2リットル、約3リットル、約4リットル、約5リットル、約6リットル、約7リットル、約8リットル、約9リットル、又は約10リットルである。一部の実施形態では、発酵体積は、約1リットル~約5リットル、約1リットル~約10リットル、約1リットル~約25リットル、約1リットル~約50リットル、約1リットル~約75リットル、約10リットル~約25リットル、約25リットル~約50リットル、又は約50リットル~約100リットルである。他の実施形態では、発酵体積は、5リットル、10リットル、15リットル、20リットル、25リットル、50リットル、75リットル、100リットル、200リットル、500リットル、1,000リットル、2,000リットル、5,000リットル、10,000リットル、又は50,000リットル以上である。
一部の実施形態では、発酵培地は、細胞の増殖及び/又は維持に使用される栄養溶液であり得る。限定されないが、この溶液は、通常、次のカテゴリーのうちの1つ以上から少なくとも1つの成分を提供する:(1)エネルギー源(通常、炭素源(例えば、グルコース)の形態)、(2)全ての必須アミノ酸(通常、20個のアミノ酸の基本セット)、(3)低濃度で必要なビタミン及び/又は他の有機化合物、(4)遊離脂肪酸又は脂質(例えば、リノール酸)、及び(5)微量元素(微量元素は、典型的には、非常に低い濃度で(通常、マイクロモル濃度範囲で)必要とされる無機化合物又は天然に存在する元素として定義される)。
一部の実施形態では、発酵培地は、本明細書に記載の細胞培養培地又は任意の他の培地と同じであり得る。一部の実施形態では、発酵培地は、細胞培養培地とは異なる場合がある。一部の実施形態では、発酵培地は、タンパク質の大規模産生に適合するように修飾され得る。
一部の実施形態では、発酵培地は、以下のカテゴリーのうちのいずれかから1つ以上の成分を選択的に補充することができる:(1)ホルモン及び他の増殖因子(例えば、血清、インスリン、トランスフェリンなど)、(2)塩(例えば、マグネシウム、カルシウム、及びリン酸)、(3)緩衝液(例えば、HEPES)、(4)ヌクレオシド及び塩基(例えば、アデノシン、チミジンなど)、(5)タンパク質及び組織加水分解物(例えば、精製ゼラチン、植物材料、又は動物性副産物から得ることができるペプトン又はペプトン混合物)、(6)抗生物質(例えば、ゲンタマイシン)、並びに(7)細胞保護剤(例えば、プルロニック(登録商標)ポリオール)。
一部の実施形態では、発酵培地のpHは、当業者に既知のpH緩衝液及び方法を使用して維持することができる。発酵中のpHの制御は、アンモニア水を使用して達成することもできる。一部の実施形態では、発酵培地のpHは、使用される生物の好ましいpHに基づいて選択されるであろう。したがって、一部の実施形態では、宿主細胞及び温度に応じて、pHは、約1~約10の範囲であり得る。
一部の実施形態では、発酵培地のpHは、2~8.5のpHの範囲であり得る。特定の実施形態では、pHは、約4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7又は8.8である。
他の実施形態では、pHは、約5.7~5.9、5.8~6.0、5.9~6.1、6.0~6.2、6.1~6.3、6.2~6.5、6.4~6.7、6.5~6.8、6.6~6.9、6.7~7.0、6.8~7.1、6.9~7.2、7.0~7.3、7.1~7.4、7.2~7.5、7.3~7.6、7.4~7.7、7.5~7.8、7.6~7.9、7.7~8.0、7.8~8.1、7.9~8.2、8.0~8.3、8.1~8.4、8.2~8.5、8.3~8.6、8.4~8.7、又は8.5~8.8である。
一部の実施形態では、例えば、Escherichia coli(E.coli)が使用される場合、最適なpH範囲は、温度に応じて、6.5~7.5である。
他の実施形態では、例えば、酵母菌株が使用される場合、pHは、約4.0~8.0の範囲であり得る。
一部の実施形態では、中性pH(すなわち、約7.0のpH)を使用することができる。
当業者は、発酵中に、基質及び代謝化合物の変換及び生成の結果として、pHレベルがドリフトし得ることを認識するであろう。
一部の実施形態では、発酵培地は、pHの変化を回避するために、緩衝液又は他の化学物質を補充することができる。例えば、一部の実施形態では、例えば、工業プロセス中のいくつかの酵母種において生じる酸性化合物の生成を中和するために、Ca(OH)、CaCO、NaOH、又はNHOHの添加を発酵培地に添加することができる。
温度は、発酵プロセスにおける別の重要な考慮事項であり、pHの考慮事項と同様に、温度は選択された宿主細胞の種類に依存する。
一部の実施形態では、発酵温度は、約4℃~約42℃で維持される。特定の実施形態では、発酵温度は、約4℃、約5℃、約6℃、約7℃、約8℃、約9℃、約10℃、約11℃、約12℃、約13℃、約14℃、約15℃、約16℃、約17℃、約18℃、約19℃、約20℃、約21℃、約22℃、約23℃、約24℃、約25℃、約26℃、約27℃、約28℃、約29℃、約30℃、約31℃、約32℃、約33℃、約34℃、約35℃、約36℃、約37℃、約38℃、約39℃、約40℃、約41℃、又は約42℃である。
他の実施形態では、発酵温度は、約25℃~約27℃、約25℃~約28℃、約25℃~約29℃、約25℃~約30℃、約25℃~約31℃、約25℃~約32℃、約25℃~約33℃、約26℃~約28℃、約26℃~約29℃、約26℃~約30℃、約26℃~約31℃、約26℃~約32℃、約27℃~約29℃、約27℃~約30℃、約27℃~約31℃、約27℃~約32℃、約26℃~約33℃、約28℃~約30℃、約28℃~約31℃、約28℃~約32℃、約29℃~約31℃、約29℃~約32℃、約29℃~約33℃、約30℃~約32℃、約30℃~約33℃、約31℃~約33℃、約31℃~約32℃、約30℃~約33℃、又は約32℃~約33℃で維持される。
他の実施形態では、温度は、発酵中に、例えば、発酵の段階に応じて変化する。
発酵は、当業者に既知の様々な微生物で達成され得る。CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAのスケールアップした産生に好適な微生物は、本明細書に列挙される任意の微生物を含む。一部の実施形態では、微生物の非限定的な例としては、サッカロマイセス属種(S.cerevisiae(パン酵母)、S.distaticus、S.uvarumが含まれるが、これらに限定されない)、クリベロマイセス属(K.marxianus、K.fragilisが含まれるが、これらに限定されない)、カンジダ属(C.pseudotropicalis及びC.brassicaeが含まれるが、これらに限定されない)、Pichia stipitis(Candida shehataeの近縁種)、クラビスポラ属(C.lusitaniae及びC.opuntiaeが含まれるが、これらに限定されない)、パキソレン属(P.tannophilusが含まれるが、これに限定されない)、ブレタノマイセス属(例えば、B.clauseniiが含まれるが、これに限定されない)の株が挙げられる。他の好適な微生物としては、例えば、Zymomonas mobilis、Clostridium spp.(C.thermocellum、C.saccharobutylacetonicum、C.saccharobutylicum、C.Puniceum、C.beijernckii、及びC.acetobutylicumを含むが、これらに限定されない)、Moniliella pollinis、Moniliella megachiliensis、Lactobacillus spp.、Yarrowia lipolytica、Aureobasidium sp.、Trichosporonoides sp.、Trigonopsis variabilis、Trichosporon sp.、Moniliellaacetoabutans sp.、Typhula variabilis、Candida magnolias、Ustilaginomycetes sp.、Pseudozyma tsukubaensis、酵母種(Zygosaccharomyces、Debaryomyces、Hansenula、及びPichia属)、並びにDematioid属Torulaの真菌が挙げられる。例えば、Philippidis,G.P.,1996,Cellulose bioconversion technology,in Handbook on Bioethanol:Production and Utilization,Wyman,C.E.,ed.,Taylor & Francis,Washington,D.C.,179-212を参照されたい。
発酵培地は、宿主細胞及び/又はエンドユーザーのニーズに応じて選択され得る。炭素以外の任意の必要な補助剤も、適切な濃度で含まれ得、単独で、又は複合窒素源などの別の補助剤若しくは培地との混合物として導入される。
酵母発酵
酵母を使用する発酵方法は、当業者に周知である。一部の実施形態では、本明細書に提供される方法に従ってバッチ発酵を使用することができ、他の実施形態では、連続発酵手順を使用することができる。
一部の実施形態では、発酵のバッチ法を使用して、本発明のCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生することができる。簡潔に、発酵のバッチ法とは、閉鎖系を用いて行われる発酵の種類を指し、培地の組成物は、発酵の開始時に決定され、発酵中に人為的な変化を受けない(すなわち、培地は、発酵の開始時に1つ以上の酵母細胞を接種され、使用者によって中断されずに発酵が進行する)。典型的には、バッチ発酵システムでは、システムの代謝産物及びバイオマス組成は、発酵が停止するまで常に変化する。バッチ培養では、酵母細胞は、静的誘導期を経て、高増殖の対数期に至り、最後に、増殖速度が減少又は停止する静止期に至る。そのままにすると、静止期の酵母細胞は、最終的に死滅する。バッチ法では、対数期の酵母細胞は、一般に、最終産物の合成の大部分を担う。
一部の実施形態では、フェッドバッチ発酵を使用して、本発明のCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生することができる。簡潔に、フェッドバッチ発酵は、典型的なバッチ法(上記)に類似しているが、フェッドバッチ法では、発酵が進むにつれて、基質が徐々に追加される。フェードバッチ発酵は、異化産物抑制が酵母細胞の代謝を阻害し得る場合、また、培地中に限られた量の基質があることが望ましい場合に有用である。一般に、フェッドバッチシステムにおける基質濃度の測定は、pH、溶存酸素、廃棄ガス(例えば、CO)の分圧などの代謝を反映する測定可能な要因の変化に基づいて推定される。
一部の実施形態では、フェッドバッチ発酵手順を使用して、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを以下のように産生することができる:5g/Lのリン酸カリウム、2.5g/Lの塩化アンモニウム、0.5g/Lの硫酸マグネシウム、及び30g/Lのコーンスティープリカー、並びに20g/Lの濃度の最初の第1の炭素源及び第2の炭素源を含む5Lのブロスを使用して、N/CO混合物でスパージされた10Lのバイオリアクター中で産生生物(例えば、改変酵母細胞)を培養する。改変酵母細胞が増殖し、炭素源を利用するにつれて、次いで、追加の70%の炭素源混合物が、炭素源の消費とほぼ釣り合う速度で、バイオリアクターに供給される。バイオリアクターの温度は、概して30℃に維持される。増殖は、約24時間又はそれ以上続き、異種ペプチドが所望の濃度に達する(例えば、細胞密度が約5~10g/Lである)。培養期間が完了したら、発酵槽の内容物を遠心分離機などの細胞分離ユニットに通して、細胞及び細胞デブリを除去し、発酵ブロスを生成物分離ユニットに移すことができる。異種ペプチドの単離は、当該技術分野で周知の標準的な分離手順によって行われ得る。
一部の実施形態では、連続発酵を使用して、本発明のCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生することができる。簡潔に、連続発酵とは、開放系を用いた発酵を指し、バイオリアクターに発酵培地を連続的に添加し、ほぼ等量の条件培地を同時に除去して加工する。連続発酵は、概して、培養物を高密度で維持し、酵母細胞は、主に対数増殖期にある。典型的には、連続発酵法は、定常状態の増殖条件を維持するために行われ、培地の回収による酵母細胞の損失は、発酵における細胞増殖速度と釣り合う必要がある。
一部の実施形態では、連続発酵法を使用して、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを以下のように産生することができる:改変酵母株は、バイオリアクター装置及び培地組成を使用して培養することができるが、最初の第1の炭素源及び第2の炭素源が、例えば、約30~50g/Lである。炭素源が枯渇した場合、同じ組成のフィード培地は、約0.5L/時間~1L/時間の速度で連続的に供給され、液体は、同じ速度で回収される。バイオリアクター中の異種ペプチドの濃度は、細胞密度とともに概して一定のままである。温度は、概して、30℃に維持され、pHは、必要に応じて、濃NaOH及び濃HClを使用して、概して、約4.5に維持される。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生する場合、バイオリアクターは、標的化合物の濃度の一貫性を確保するために、毎日又は必要に応じて試料を採取して、例えば、約1ヶ月間連続的に動作させることができる。連続モードでは、新しい供給培地が供給されるにつれて、発酵槽の内容物が常に除去される。次に、細胞、培地、及び異種ペプチドを含む出口流を、細胞及び細胞デブリの除去の有無にかかわらず、連続的な生成物分離手順に供することができ、当該技術分野で周知の連続的な分離方法によって実施して、目的のペプチドから有機生成物を分離することができる。
一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを発現するように動作可能な酵母細胞は、例えば、好気性バイオリアクターにおける供給バッチプロセスを使用して増殖することができる。簡潔に、リアクターは、炭素源及び他の試薬を含む培地で約20%~約70%の容量に充填される。温度及びpHは、本明細書に記載の1つ以上の化学物質を使用して維持される。酸素レベルは、撹拌しながら断続的に空気を吹き込むことによって維持される。
例えば、一部の実施形態では、本発明は、好気性バイオリアクターにおける供給バッチプロセスを使用する方法を提供し、リアクターは、約20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、又は70%の容量に充填される。
一部の実施形態では、本発明は、好気性バイオリアクターを使用して、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを産生するフェッドバッチ発酵方法を提供し、培地は、富栄養培養培地である。例えば、一部の実施形態では、炭素源は、グルコース、ソルビトール、又はラクトースであり得る。
一部の実施形態では、グルコースの量は、約2g/L、3g/L、4g/L、5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L、11g/L、12g/L、13g/L、14g/L、15g/L、16g/L、17g/L、18g/L、19g/L、20g/L、21g/L、22g/L、23g/L、24g/L、25g/L、26g/L、27g/L、28g/L、29g/L、又は30g/Lの培地であり得る。
一部の実施形態では、ソルビトールの量は、約2g/L、3g/L、4g/L、5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L、11g/L、12g/L、13g/L、14g/L、15g/L、16g/L、17g/L、18g/L、19g/L、20g/L、21g/L、22g/L、23g/L、24g/L、25g/L、26g/L、27g/L、28g/L、29g/L、又は30g/Lの培地であり得る。
一部の実施形態では、ラクトースの量は、約2g/L、3g/L、4g/L、5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L、11g/L、12g/L、13g/L、14g/L、15g/L、16g/L、17g/L、18g/L、19g/L、20g/L、21g/L、22g/L、23g/L、24g/L、25g/L、26g/L、27g/L、28g/L、29g/L、又は30g/Lの培地であり得る。
一部の実施形態では、本発明は、好気性バイオリアクターを使用したフェッドバッチ発酵方法を提供し、培地は、リン酸、硫酸カルシウム、硫酸カリウム、硫酸マグネシウム七水和物、水酸化カリウム、及び/又はコーンスティープリカーのうちの1つ以上が補充される。
一部の実施形態では、培地は、培地に対して、約2g/L、3g/L、4g/L、5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L、11g/L、12g/L、13g/L、14g/L、15g/L、16g/L、17g/L、18g/L、19g/L、20g/L、21g/L、22g/L、23g/L、24g/L、25g/L、26g/L、27g/L、28g/L、29g/L、又は30g/Lの量のリン酸が補充され得る。
一部の実施形態では、培地は、培地に対して、約0.05g/L、0.15g/L、0.25g/L、0.35g/L、0.45g/L、0.55g/L、0.65g/L、0.75g/L、0.85g/L、0.95g/L、1.05g/L、1.15g/L、1.25g/L、1.35g/L、1.45g/L、1.55g/L、1.65g/L、1.75g/L、1.85g/L、1.95g/L、2.05g/L、2.15g/L、2.25g/L、2.35g/L、2.45g/L、2.55g/L、2.65g/L、2.75g/L、2.85g/L、又は2.95g/Lの量の硫酸カルシウムが補充され得る。
一部の実施形態では、培地は、培地に対して、約2g/L、2.5g/L、3g/L、3.5g/L、4g/L、4.5g/L、5g/L、5.5g/L、6g/L、6.5g/L、7g/L、7.5g/L、8g/L、8.5g/L、9g/L、9.5g/L、10g/L、10.5g/L、11g/L、11.5g/L、12g/L、12.5g/L、13g/L、13.5g/L、14g/L、14.5g/L、15g/L、15.5g/L、16g/L、16.5g/L、17g/L、17.5g/L、18g/L、18.5g/L、19g/L、19.5g/L、又は20g/Lの量の硫酸カリウムが補充され得る。
一部の実施形態では、培地は、培地に対して、約0.25g/L、0.5g/L、0.75g/L、1g/L、1.25g/L、1.5g/L、1.75g/L、2g/L、2.25g/L、2.5g/L、2.75g/L、3g/L、3.25g/L、3.5g/L、3.75g/L、4g/L、4.25g/L、4.5g/L、4.75g/L、5g/L、5.25g/L、5.5g/L、5.75g/L、6g/L、6.25g/L、6.5g/L、6.75g/L、7g/L、7.25g/L、7.5g/L、7.75g/L、8g/L、8.25g/L、8.5g/L、8.75g/L、9g/L、9.25g/L、9.5g/L、9.75g/L、10g/L、10.25g/L、10.5g/L、10.75g/L、11g/L、11.25g/L、11.5g/L、11.75g/L、12g/L、12.25g/L、12.5g/L、12.75g/L、13g/L、13.25g/L、13.5g/L、13.75g/L、14g/L、14.25g/L、14.5g/L、14.75g/L、又は15g/Lの量の硫酸マグネシウム七水和物が補充され得る。
一部の実施形態では、培地は、培地に対して、約0.25g/L、0.5g/L、0.75g/L、1g/L、1.25g/L、1.5g/L、1.75g/L、2g/L、2.25g/L、2.5g/L、2.75g/L、3g/L、3.25g/L、3.5g/L、3.75g/L、4g/L、4.25g/L、4.5g/L、4.75g/L、5g/L、5.25g/L、5.5g/L、5.75g/L、6g/L、6.25g/L、6.5g/L、6.75g/L、又は7g/Lの量の水酸化カリウムが補充され得る。
一部の実施形態では、培地は、培地に対して、約5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L、11g/L、12g/L、13g/L、14g/L、15g/L、16g/L、17g/L、18g/L、19g/L、20g/L、21g/L、22g/L、23g/L、24g/L、25g/L、26g/L、27g/L、28g/L、29g/L、30g/L、31g/L、32g/L、33g/L、34g/L、35g/L、36g/L、37g/L、38g/L、39g/L、40g/L、41g/L、42g/L、43g/L、44g/L、45g/L、46g/L、47g/L、48g/L、49g/L、50g/L、51g/L、52g/L、53g/L、54g/L、55g/L、56g/L、57g/L、58g/L、59g/L、60g/L、61g/L、62g/L、63g/L、64g/L、65g/L、66g/L、67g/L、68g/L、69g/L、又は70g/Lの量のコーンスティープリカーが補充され得る。
一部の実施形態では、リアクターの温度を、約15℃~約45℃に維持することができる。一部の実施形態では、リアクターは、約20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、又は40℃の温度を有することができる。
一部の実施形態では、pHは、約3~約6のレベルを有することができる。一部の実施形態では、pHは、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、又は6.0であり得る。
一部の実施形態では、pHは、1つ以上の化学物質の添加を介して一定レベルで維持することができる。例えば、一部の実施形態では、水酸化アンモニウムを添加して、pHを維持することができる。一部の実施形態では、水酸化アンモニウムは、約5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、又は20%の水酸化アンモニウムである、培地中の水酸化アンモニウムのレベルに添加され得る。
一部の実施形態では、酸素レベルは、スパージングによって維持され得る。例えば、一部の実施形態では、溶存酸素は、0.5~1.5体積/体積/分で空気をスパージングすることによって、及び10~30%の設定点を維持するように撹拌を増やすことによって、一定レベルで維持され得る。
一部の実施形態では、リアクターの接種は、約2.5g/L~約50g/Lの炭素源(例えば、グルコース、ソルビトール、又はラクトース)を含む一晩の種培養に基づいて達成され得る。一部の実施形態では、一晩の種培養は、コーンスティープリカー、例えば、約2.5g/L~約50g/Lのコーンスティープリカーを含み得る。
一部の実施形態では、接種率は、初期充填体積の約5~20%の範囲であり得る。接種後、リアクターに、リアクターが充填され、かつ/又は所望の上清ペプチド濃度に達するまで、選択された炭素源の約50%~約80%の溶液を供給することができる。一部の実施形態では、リアクターを充填するのに必要な時間は、約86時間~約160時間の範囲であり得る。一部の実施形態では、所望のペプチド濃度に到達するのに必要な量は、約0.8g/L~約1.2g/Lの範囲であり得る。発酵が完了したら、内容物は、材料の意図された用途に応じて、細胞分離ユニットを通過し、任意選択的に濃縮され得る。
酵母発酵培地の更なるレシピが本明細書に提供される。
酵母細胞発酵培地及びストックのレシピは、以下のように記載される:(1)MSM培地のレシピ:2g/Lのクエン酸ナトリウム二水和物、1g/Lの硫酸カルシウム二水和物(0.79g/Lの無水硫酸カルシウム)、42.9g/Lのリン酸一カリウム、5.17g/Lの硫酸アンモニウム、14.33g/Lの硫酸カリウム、11.7g/Lの硫酸マグネシウム七水和物、2mL/LのPTM1微量塩溶液、0.4ppmのビオチン(500×、200ppmストックから)、1~2%の純粋なグリセロール又は他の炭素源。(2)PTM1微量塩溶液:硫酸銅-5HO 6.0g、ヨウ化ナトリウム 0.08g、硫酸マンガン-HO 3.0g、モリブデン酸ナトリウム-2HO 0.2g、ホウ酸 0.02g、塩化コバルト 0.5g、塩化亜鉛 20.0g、硫酸鉄-7HO 65.0g、ビオチン 0.2g、硫酸 5.0ml、水を添加し最終体積を1リットルにする。K.lactis規定培地(DMSor)の例示的な組成物は、次の通りである:11.83g/L KHPO、2.299g/L KHPO、20g/Lの発酵性糖(例えば、ガラクトース、マルトース、ラトトリオース、スクロース、フルクトース、若しくはグルコース)及び/又は糖アルコール(例えば、エリスリトール、水素化デンプン加水分解物、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、及びキシリトール)、1g/L MgSO.7HO、10g/L(NH)SO、0.33g/L CaCl2.2HO、1g/L NaCl、1g/L KCl、5mg/L CuSO.5HO、30mg/L MnSO.HO、10mg/L ZnCl、1mg/L KI、2mg/L CoCl.6HO、8mg/L NaMoO.2HO、0.4mg/L HBO、15mg/L FeCl.6HO、0.8mg/L ビオチン、20mg/L パントテン酸カルシウム、15mg/L チアミン、16mg/L ミオイノシトール、10mg/L ニコチン酸、及び4mg/L ピリドキシン。
ペプチド分解
タンパク質、ポリペプチド、及びペプチドは、生体試料及び溶液の両方で分解する(例えば、細胞培養及び/又は発酵中)。ペプチド分解(例えば、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAの分解)を検出する方法は、当該技術分野で周知である。(例えば、発酵中に)ペプチド分解を検出する既知の方法のいずれも、本明細書で使用され得る。
一部の実施形態では、ペプチド分解は、同位体標識技術、液体クロマトグラフィー/質量分析(LC/MS)、HPLC、放射性アミノ酸の取り込み及びその後の検出(例えば、シンチレーションカウンティングを介した検出)、レポータータンパク質(例えば、検出可能なタンパク質)の使用(例えば、蛍光、分光学、発光測定などによる)、1つ以上の生物発光タンパク質及び/又は蛍光タンパク質及び/又はそれらの融合体の蛍光強度、パルスチェイス分析(例えば、放射性アミノ酸で細胞をパルス標識し、続いて、未標識前駆体で追跡しながら標識されたタンパク質が減衰し、タンパク質の合成を抑止し、経時的に総タンパク質レベルの減衰を測定する)、シクロヘキシミドチェイスアッセイを使用して検出することができる。
一部の実施形態では、アッセイを使用して、ペプチド分解を検出することができる。試料を、ペプチドの分解を介して生成された該試料中の遊離一級アミンと反応するように動作可能である非蛍光化合物と接触させ、これが次いで、定量化及び標準物質と比較され得る蛍光シグナルを生成する。本開示による遊離アミンの蛍光タグとして利用され得る非蛍光化合物の例は、3-(4-カルボキシベンゾイル)キノリン-2-カルボキシアルデヒド(CBQCA)、フルオレスカミン、及びo-フタルジアルデヒドである。
一部の実施形態では、レポータータンパク質から読み出されたシグナルを決定する方法は、レポータータンパク質の性質に依存する。例えば、蛍光レポータータンパク質について、読み出されたシグナルは、蛍光シグナルの強度に対応する。読み出されたシグナルは、例えば、分光法、蛍光測定法、光測定法、及び/又は発光測定法に基づく方法及び検出システムを使用して測定することができる。そのような方法及び検出システムは、当該技術分野で周知である。
一部の実施形態では、当業者に既知の標準的な免疫学的手順を使用して、ペプチド分解を検出することができる。例えば、一部の実施形態では、ペプチド分解は、検出可能な抗体を用いるイムノアッセイを使用して、試料中で検出され得る。そのような免疫アッセイには、例えば、凝集アッセイ、ELISA、Pandexミクロ蛍光測定アッセイ、フローサイトメトリー、血清診断アッセイ、及び免疫組織化学的染色手順が含まれ、これらは全て、当該技術分野で周知である。一部の実施形態では、1つの試料中のレベル(例えば、蛍光)は、標準物質と比較することができる。抗体は、当該技術分野で周知の様々な手段によって検出可能になり得る。例えば、検出可能なマーカーは、抗体に直接又は間接的に結合することができる。有用なマーカーとしては、例えば、放射性ヌクレオチド、酵素、フルオロゲン、クロモゲン、及び化学発光標識が挙げられる。
ペプチド分解を検出する例示的な方法は、米国特許第5,766,927号、同第7,504,253号、同第9,201,073号、同第9,429,566号、米国特許出願第2012/0028286号、Eldeeb et al.,A molecular toolbox for studying protein degradation in mammalian cells.J Neurochem.2019 Nov;151(4):520-533、及びBuchanan et al.,Cycloheximide Chase Analysis of Protein Degradation in Saccharomyces cerevisiae.J Vis Exp.2016;(110):53975に提供されている(それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
植物又はその一部へのCRIPの組み込み
本明細書に記載のCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、及びペプチド-IA、及び/又は本明細書に記載の少なくとも1つのCRIP若しくはペプチド-IAを含む殺虫タンパク質は、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IA、及び/又はそれをコードするポリヌクレオチド配列の安定した発現又は一過性発現のいずれかのために、植物、植物組織、植物細胞、植物種子、及び/又はその植物部分に組み込むことができる。
一部の実施形態では、CRIP又はペプチド-IAは、当該技術分野で既知の組換え技術を使用して、植物に組み込むことができる。一部の実施形態では、少なくとも1つのCRIP又はペプチド-IAを含むCRIP又はペプチド-IA又は殺虫タンパク質は、1つ以上のCRIP又はペプチド-IAモノマーを含むことができる殺虫タンパク質の形態であってもよい。他の実施形態では、少なくとも1つのCRIP又はペプチド-IAを含む殺虫タンパク質はまた、1つ以上の非CRIP又は非IAポリペプチド若しくはタンパク質(例えば、1つ以上のCRIP又はペプチド-IAに動作可能に連結された小胞体シグナルペプチド)を含み得る。
トランスジェニック植物、植物組織、植物細胞、及び植物種子に関して本セクションで使用される場合、「CRIP」又は「ペプチド-IA」という用語はまた、1つ以上の非CRIP又は非IAペプチド、ポリペプチド、若しくはタンパク質に加えて、1つ以上のCRIP又はペプチド-IAを含む殺虫タンパク質を包含し、「CRIPポリヌクレオチド」又は「IAポリヌクレオチド」も同様に、1つ以上の非CRIP又は非IAポリペプチド若しくはタンパク質に加えて、1つ以上のCRIP又はペプチド-IAを含む殺虫タンパク質を発現及び/又はコードするように動作可能なポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド群を包含するように使用される。
CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを植物に組み込むこと(すなわち、CRIP又はペプチド-IAを発現するトランスジェニック植物を作製すること)の目標は、昆虫によって摂取される植物組織で発現されたトランスジェニックCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAの昆虫の消費を介して、害虫に殺虫タンパク質を送達することである。昆虫(例えば、トランスジェニック植物を餌とする昆虫)がその食物からCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAを摂取すると、摂取されたCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAは、その成長を阻害し、その動きを損なわせ、又は更に昆虫を死滅させる能力を有し得る。したがって、CRIP、CRIP-殺昆虫タンパク質、若しくはペプチド-IAのポリヌクレオチド、及び/又はCRIP、CRIP-殺昆虫タンパク質、若しくはペプチド-IAのポリペプチドを発現するトランスジェニック植物は、様々な植物組織(表皮(例えば、葉肉)、周皮、篩部、木部、柔組織、厚角組織、一次分裂組織、二次分裂組織が含まれるが、これらに限定されない))において、当該CRIP、CRIP-殺昆虫タンパク質、若しくはペプチド-IAのポリヌクレオチド/ポリペプチドを発現することができる。例えば、一部の実施形態では、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAをコードするポリヌクレオチド配列は、ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼプロモーターを含む調節領域に動作可能に連結され得、植物の葉肉組織におけるCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IAの発現をもたらす。
CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IA、及び/又はCRIP/ペプチド-IAを発現するように動作可能なポリヌクレオチドを発現するトランスジェニック植物は、当業者に周知の様々な方法及びプロトコルのうちのいずれか1つによって生成され得る。本発明のかかる方法は、ヌクレオチド構築物を植物に導入するための特定の方法を使用する必要はなく、ヌクレオチド構築物が植物の少なくとも1つの細胞の内部にアクセスすることができることのみを必要とする。ヌクレオチド構築物を植物に導入するための方法は、当該技術分野で既知であり、安定的形質転換方法、一過性形質転換方法、及びウイルス媒介性方法が含まれるが、これらに限定されない。「トランスジェニック植物」又は「形質転換植物」又は「安定的に形質転換した」植物、若しくは細胞、若しくは組織は、外因性核酸配列又はDNA断片が植物細胞に取り込まれた、又は組み込まれた植物を指す。これらの核酸配列には、外因性であるか、又は非形質転換植物細胞に存在しない配列、並びに内因性であるか、又は非形質転換植物細胞に存在し得る配列が含まれる。「異種」とは、概して、細胞又はそれらが存在する天然ゲノムの一部に対して内在性ではなく、感染、トランスフェクション、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、マイクロプロジェクションなどによって細胞に付加された核酸配列を指す。
植物細胞の形質転換は、当該技術分野で既知のいくつかの技術のうちの1つによって達成することができる。典型的には、目的の外因性又は異種のペプチド若しくはポリペプチド(例えば、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はペプチド-IA)を発現する構築物は、遺伝子の転写を駆動するプロモーター、並びに転写終結及びポリアデニル化を可能にする3’非翻訳領域を含むであろう。そのような構築物の設計及び構成は、当該技術分野で周知である。一部の実施形態では、遺伝子は、得られるペプチドが分泌されるように操作され得るか、又はその他、植物細胞内の特定の領域及び/又はオルガネラに標的化され得る。例えば、遺伝子は、ペプチドの小胞体への移行を促進するために、シグナルペプチドを含むように操作され得る。イントロンのmRNAプロセシングが発現に必要とされるように、イントロンを含むように植物発現カセットを操作することも好ましい場合がある。
典型的には、植物発現カセットを、植物形質転換ベクターに挿入することができる。この植物形質転換ベクターは、植物の形質転換を達成するために必要な1つ以上のDNAベクターを含み得る。例えば、2つ以上の連続したDNAセグメントからなる植物形質転換ベクターを利用することは、当該技術分野で一般的な方法である。これらのベクターは、当該技術分野において「バイナリベクター」と称されることが多い。バイナリベクター、並びにヘルパープラスミドを伴うベクターは、最も多くの場合、アグロバクテリウム媒介性形質転換に使用され、効率的な形質転換を達成するために必要なDNAセグメントのサイズ及び複雑性はかなり大きく、機能を別々のDNA分子上に分けることが有利である。バイナリベクターは、典型的には、プラスミドベクターを含み、これには、T-DNA導入に必要なシス作用性配列(例えば、左縁及び右縁)である、植物細胞で発現され得るように操作される選択マーカーと、「目的の遺伝子」(トランスジェニック植物の生成が望まれる植物細胞で発現され得るように操作される遺伝子)と、が含まれる。このプラスミドベクター上にも、細菌の複製に必要な配列が存在する。シス作用性配列は、植物細胞への効率的な導入及びそこでの発現を可能にする様式で配置される。例えば、選択マーカー遺伝子及びCRIP/ペプチド-IAは、左縁と右縁との間に位置する。多くの場合、第2のプラスミドベクターは、アグロバクテリウムから植物細胞へのT-DNA導入を媒介するトランス作用性因子を含む。このプラスミドは、多くの場合、当該技術分野で理解されているように、アグロバクテリウムによる植物細胞の感染、及び境界配列での切断によるDNAの導入、及びウイルス媒介性DNA導入を可能にする病原性機能(Vir遺伝子)を含む(Hellens and Mullineaux(2000)Trends in Plant Science 5:446-451)。いくつかの種類のアグロバクテリウム株(例えば、LBA4404、GV3101、EHA101、EHA105など)を植物の形質転換に使用することができる。第2のプラスミドベクターは、他の方法(例えば、マイクロプロジェクション、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、ポリエチレングリコール)によって植物を形質転換するのに必要ではない。
一般に、植物形質転換方法は、異種DNAを標的植物細胞(例えば、未熟又は成熟胚、浮遊培養物、未分化カルス、プロトプラストなど)に導入し、続いて、(選択マーカー遺伝子に応じて)適切に選択された最大閾値レベルを適用して、形質転換された植物細胞を未形質転換細胞集団の群から回収することを含む。外植片は、通常、新鮮に供給される同じ培地に移され、いつものように培養される。続いて、形質転換された細胞を、最大閾値レベルの選択剤を補充した再生培地上に置いた後、苗条に分化させる。次いで、苗条は、根付いた苗条又は小植物を回収するための選択発根培地に移される。次いで、トランスジェニック小植物は、成熟植物に成長し、稔性種子を産生する(例えば、Hiei et al.(1994)The Plant Journal 6:271-282、Ishida et al.(1996)Nature Biotechnology 14:745-750)。外植片は、通常、新鮮に供給される同じ培地に移され、いつものように培養される。トランスジェニック植物を生成するための技術及び方法の一般的な記載は、Ayres and Park(1994)Critical Reviews in Plant Science 13:219-239、及びBommineni and Jauhar(1997)Maydica 42:107-120に見出される。形質転換された材料は多くの細胞を含むため、形質転換細胞及び非形質転換細胞の両方が、対象となる標的カルス、組織、又は細胞群の任意の部分に存在する。非形質転換細胞を死滅させ、形質転換細胞の増殖を可能にする能力により、形質転換された植物培養物がもたらされる。多くの場合、形質転換された植物細胞を迅速に回収し、トランスジェニック植物の生成を成功させるには、非形質転換細胞を除去する能力が制約となる。
形質転換プロトコル、並びにヌクレオチド配列を植物に導入するためのプロトコルは、形質転換の標的となる植物又は植物細胞の種類(すなわち、単子葉植物又は双子葉植物)に応じて異なる場合がある。トランスジェニック植物の生成は、これらに限定されないが、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、直接遺伝子導入、アグロバクテリウムによる植物細胞への異種DNAの導入(アグロバクテリウム媒介性形質転換)、粒子に付着させた異種外来DNAによる植物細胞の衝撃、弾道粒子加速、エアロゾルビーム形質転換、Lec1形質転換、及びDNAを導入するための様々な他の非粒子直接媒介性方法を含むいくつかの方法のうちの1つによって行われ得る。例示的な形質転換プロトコルは、米国出願公開第2001/0026941号、米国特許第4,945,050号、国際公開第91/00915号、及び米国出願公開第2002/015066号に開示されている(それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
葉緑体はまた、容易に形質転換され得、葉緑体の形質転換に関する方法が、当該技術分野で既知である。例えば、Svab et al.(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:8526-8530、Svab and Maliga(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:913-917、Svab and Maliga(1993)EMBO J.12:601-606を参照されたい(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。葉緑体形質転換の方法は、選択マーカーを含むDNAの粒子銃送達及び相同組換えによるプラスチドゲノムへのDNAの標的化に依存する。加えて、プラスチド形質転換は、核コード及びプラスチド指向性RNAポリメラーゼの組織特異的発現によるサイレントプラスチド媒介性導入遺伝子のトランス活性化によって達成され得る。かかるシステムは、McBride et al.(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91:7301-7305に報告されている。
異種外来DNAを植物細胞に組み込んだ後、当業者は次いで、培地中に最大閾値レベルの適切な選択化学物質/試薬(例えば、抗生物質)を適用し、非形質転換細胞を死滅させ、当該生存細胞を定期的に新鮮な培地に移すことによって、この選択処理から生き残る推定上の形質転換細胞を分離し、増殖させることができる。連続的な継代及び適切な選択による負荷によって、当業者は、プラスミドベクターで形質転換された細胞を特定し、増殖させる。次いで、分子及び生化学的方法を使用して、トランスジェニック植物のゲノムに組み込まれた目的の異種遺伝子の存在を確認することができる。
形質転換された細胞を、当業者に既知の従来の方法に従って、植物へと成長させることができる。例えば、McCormick et al.(1986)Plant Cell Reports 5:81-84を参照されたい(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。次いで、これらの植物を成長させ、同じ形質転換株又は異なる株のいずれかで受粉させ、得られたハイブリッドは、特定された所望の表現型特徴の構成的発現を有する。2世代以上を増殖させて、所望の表現型特徴の発現が安定に維持され、遺伝することを確実にし、次いで、所望の表現型特徴の発現が確実に達成されるように種子を採取することができる。このようにして、本開示は、本発明のヌクレオチド構築物(例えば、それらのゲノムに安定して組み込まれた本発明の発現カセット)を有する形質転換種子(「トランスジェニック種子」とも称される)を提供する。
様々な実施形態では、本開示は、上記のように、昆虫プロテアーゼ、プロテアーゼ、及びペプチダーゼ(本明細書では「プロテアーゼ」と総称する)の基質として作用する、少なくとも1つのCRIP/ペプチド-IAを含む殺虫タンパク質を提供する。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるCRIP若しくはペプチド-IA及び/又はCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、若しくはペプチド-IAを含む組成物の発現を受容し得るトランスジェニック植物若しくはその部分には、アルファルファ、バナナ、オオムギ、マメ、ブロッコリー、キャベツ、キャノーラ、ニンジン、キャッサバ、トウゴマ、カリフラワー、セロリ、ヒヨコマメ、ハクサイ、柑橘類、ココナッツ、コーヒー、トウモロコシ、クローバー、ワタ、カボチャ、キュウリ、ベイマツ、ナス、ユーカリ、アマ、ニンニク、ブドウ、ホップ、ニラ、レタス、タエダマツ、アワ、メロン、ナッツ、カラスムギ、オリーブ、タマネギ、観賞植物、ヤシ、牧草、エンドウ豆、ピーナッツ、コショウ、キマメ、マツ、ジャガイモ、ポプラ、カボチャ、ラジアータパイン、ダイコン、ナタネ、イネ、台木、ライムギ、ベニバナ、灌木、モロコシ、サザンパイン、ダイズ、ホウレンソウ、カボチャ、イチゴ、サトウダイコン、サトウキビ、ヒマワリ、スイートコーン、モミジバフウスイートガム、サツマイモ、スイッチグラス、チャ、タバコ、トマト、ライコムギ、芝草、スイカ、コムギ植物が含まれ得る。一部の実施形態では、トランスジェニック植物は、本明細書に記載のDNA構築物で最初に形質転換された細胞から成長し得る。他の実施形態では、トランスジェニック植物は、特定の組織又は植物部分(例えば、葉、茎、花、萼片、果実、根、若しくは種子、又はそれらの組み合わせ)において、コードされたCRIP/ペプチド-IA組成物を発現することができる。
前述の植物組み込み方法/技術のうちのいずれかを使用して、CRIP及び/又はペプチド-IA(例えば、かかる方法に供される殺虫剤、例えば、アミノ酸、ペプチド、及び/又はタンパク質のポリマー)を産生することができる。例えば、前述の方法のいずれかを使用して、限定されないが、ACTXペプチド(例えば、U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、rκ-ACTX-Hv1c、ω-ACTX-Hv1a、及び/又はω-ACTX-Hv1a+2)、Γ-CNTX-Pn1a、U1-アガトキシン-Ta1b、TVP、Av2、Av3、AVP、及び/又はBt毒素(例えば、Cry毒素、Cyt毒素、若しくはVip)を含む、本明細書に記載のCRIP又はペプチド-IAのいずれかを産生、生成、作製、発現、転写、翻訳、合成、又はその他、作製することができる。
切断可能なリンカー及び切断不能リンカーを有するタンパク質
一部の実施形態では、少なくとも1つのCRIP(又はペプチド-IA)を含む殺虫タンパク質は、切断可能ペプチドに動作可能に連結され得る。他の実施形態では、少なくとも1つのCRIP(又はペプチド-IA)を含む殺虫タンパク質は、切断不能ペプチドに動作可能に連結され得る。
一部の実施形態では、少なくとも1つのCRIP/ペプチド-IAを含む殺虫タンパク質は、2つ以上の切断可能ペプチドを有することができ、殺虫タンパク質は、昆虫切断可能リンカー(L)を含み、昆虫切断可能リンカーは、(CRIP-L)(式中、「n」は、1~200、又は1~100、又は1~10の範囲の整数である)を含む構築物とインフレームで融合される。別の実施形態では、本明細書に記載される少なくとも1つのCRIPを含む殺虫タンパク質は、昆虫切断可能リンカー(L)及び/又はリピート構築物(L-CRIP)若しくは(CRIP-L)(式中、「n」は、1~200、又は1~100、又は1~10の範囲の整数である)と動作可能に連結されているCRIPと動作可能に連結された小胞体シグナルペプチド(ERSP)を含む。
様々な実施形態では、例示的な殺虫タンパク質は、(ERSP)-(CRIP-L)、(ERSP)-(L)-(CRIP-L)、(ERSP)-(L-CRIP)、(ERSP)-(L-CRIP)-(L)である(式中、「n」は、1~200、又は1~100、又は1~10の範囲の整数である)。上述の様々な関連する実施形態では、CRIPは、前述のU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチドであり、Lは、切断不能又は切断可能ペプチドであり、nは、1~200の範囲の整数、好ましくは、1~100の範囲の整数、より好ましくは、1~10の範囲の整数である。一部の実施形態では、殺虫タンパク質は、同じ若しくは異なるCRIPペプチド、及び同じ若しくは異なる昆虫切断可能ペプチドを含むことができる。一部の実施形態では、C末端CRIPは、昆虫腸管環境において切断されるように動作可能である切断可能ペプチドと、そのC末端で動作可能に連結されている。一部の実施形態では、N末端CRIPは、昆虫腸管環境において切断されるように動作可能である切断可能ペプチドと、そのN末端で動作可能に連結されている。
昆虫腸内環境で見出される利用可能なプロテアーゼ及びペプチダーゼのうちのいくつかは、これらの酵素がしばしば空間的及び時間的に発現されるため、昆虫の生活環に依存する。昆虫の消化器系は、消化管及びそれに関連する腺で構成される。食物が口に入り、分泌物と混合される(消化プロテアーゼ及びペプチダーゼが含まれる場合と含まれない場合がある)。前腸及び後腸は、外胚葉起源である。前腸は、概して、生食(raw food)の貯蔵庫としての役割を果たす。前腸からは、食物の個別のボーラスが中腸(midgut)(中腸(mesenteron)又は胃)に入る。中腸は、食物栄養素の消化及び吸収の部位である。概して、中腸における特定のプロテアーゼ及びペプチダーゼの存在は、腸のpHに従う。ヒトの胃腸系における特定のプロテアーゼ及びペプチダーゼには、ペプシン、トリプシン、キモトリプシン、エラスターゼ、カルボキシペプチダーゼ、アミノペプチダーゼ、及びジペプチダーゼが含まれ得る。
昆虫の腸内環境は、ペプチド及びタンパク質が消化中に分解される草食動物種における消化器系の領域を含む。昆虫の腸内環境で見出される利用可能なプロテアーゼ及びペプチダーゼのうちのいくつかは、以下を含み得る:(1)セリンプロテアーゼ、(2)システインプロテアーゼ、(3)アスパラギン酸プロテアーゼ、及び(4)メタロプロテアーゼ。
植物食性昆虫の消化器系における2つの主なプロテアーゼのクラスは、セリンプロテアーゼ及びシステインプロテアーゼである。Murdockら(1987)は、Coleopteraに属する様々な害虫の中腸酵素の詳細な研究を行った。Srinivasanら(2008)は、Lepidopteraに属する様々な害虫の中腸酵素に関して報告している。セリンプロテアーゼは、幼虫の腸内環境を支配し、Lepidopteraにおいて、総消化活性の約95%に寄与するが、Coleoptera種では、システインプロテアーゼを含むより広範囲の主な腸内プロテアーゼを有することが知られている。
パパインファミリーは、多種多様な活性を有するペプチダーゼを含み、広い特異性を有するエンドペプチダーゼ(例えば、パパイン)、非常に狭い特異性を有するエンドペプチダーゼ(例えば、グリシルエンドペプチダーゼ)、アミノペプチダーゼ、ジペプチジルペプチダーゼ、並びにエンドペプチダーゼ及びエキソペプチダーゼの両方の活性を有するペプチダーゼ(例えば、カテプシンB及びH)が含まれる。様々な昆虫の中腸に見出される他の例示的なプロテアーゼとしては、トリプシン様酵素、例えば、トリプシン及びキモトリプシン、ペプシン、カルボキシペプチダーゼ-B及びアミノトリペプチダーゼが挙げられる。
セリンプロテアーゼは、ほぼ全ての動物及び微生物に広く分布している(Joanitti et al.,2006)。高等生物では、2%近くの遺伝子がこれらの酵素をコードしている(Barrette-Ng et al.,2003)。セリンプロテアーゼは、宿主生物の維持及び生存に本質的に不可欠であり、多くの生物学的プロセスにおいて重要な役割を果たす。セリンプロテアーゼは、従来、それらの基質特異性によって、特に、P1の残基が:トリプシン様(P1で好ましくはLys/Arg)、キモトリプシン様(P1でPhe/Tyr/Leuなどの大きな疎水性残基)、又はエラスターゼ様(P1でAla/Valなどの小さな疎水性残基)であるかによって(Tyndall et.al.,2005による改訂)、分類されている。セリンプロテアーゼは、タンパク質分解酵素の1つのクラスであり、その中心的な触媒機構が、3つの不変残基、アスパラギン酸、ヒスチジン、及び特有の反応性セリン(後に「触媒三残基(catalytic triad)」という名前が生まれた)で構成される。Asp-His-Ser三残基は、少なくとも4つの異なる構造的文脈で見出すことができる(Hedstrom,2002)。これら4つのクランのセリンプロテアーゼは、キモトリプシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼY、及びClpプロテアーゼに代表される。キモトリプシン様クランの3つのセリンプロテアーゼは、キモトリプシン、トリプシン、及びエラスターゼであり、最も詳細に研究されている。より最近では、Ser-His-Glu、Ser-Lys/His、His-Ser-His、及びN末端Serを含む、消化におけるそれらの役割に対して、新規の触媒三残基及び二残基を有するセリンプロテアーゼが発見されている。
昆虫の腸内環境で見出される、よく研究された消化酵素のクラスの1つは、システインプロテアーゼのクラスである。「システインプロテアーゼ」という用語は、酵素の触媒部位にシステイン残基の高反応性チオール基を有するプロテアーゼを記載することが意図される。多くの植物食性昆虫及び植物寄生線虫が、少なくとも一部、タンパク質消化のために中腸システインプロテアーゼに依存しているという証拠がある。これらには、Hemiptera、特に、スカッシュバグ(squash bug)(Anasa tristis)、グリーンスティンクバグ(green stink bug)(Acrosternum hilare)、Riptortus clavatus、及びこれまでに調べられたほぼ全てのColeoptera、特に、コロラドポテトビートル(Colorado potato beetle)(Leptinotarsa deaemlineata)、スリーラインドポテトビートル(three-lined potato beetle)(Lema trilineata)、アスパラガスビートル(asparagus beetle)(Crioceris asparagi)、メキシカンビーンビートル(Mexican bean beetle)(Epilachna varivestis)、レッドフラワービートル(red flour beetle)(Triolium castaneum)、コンフーズドフラワービートル(confused flour beetle)(Tribolium confusum)、フリービートル(flea beetle)(Chaetocnema spp.、Haltica spp.、及びEpitrix spp.)、コーンルートワーム(corn rootworm)(Diabrotica Spp.)、カウピーウィービル(cowpea weevil)(Callosobruchus aculatue)、ボールウィービル(boll weevil)(Antonomus grandis)、ライスウィービル(rice weevil)(Sitophilus oryza)、メイズウィービル(maize weevil)(Sitophilus zeamais)、グレイニイウィービル(granary weevil)(Sitophilus granarius)、エジプシャンアルファルファウィービル(Egyptian alfalfa weevil)(Hypera postica)、ビーンウィービル(bean weevil)(Acanthoseelides obtectus)、レッサーグレインボーア(lesser grain borer)(Rhyzopertha dominica)、イエローミールワーム(yellow meal worm)(Tenebrio molitor)、Thysanoptera、特に、ウエスタンフラワートリプ(western flower thrip)(Franklini ella occidentalis)、Diptera、特に、leafminer spp.(Liriomyza trifolii)、植物寄生性線虫、特に、ポテトシスト線虫(potato cyst nematode)(Globodera spp.)、ビートシスト線虫(beet cyst nematode)(Heterodera schachtii)、及びルートノット線虫(root knot nematode)(Meloidogyne spp.)が含まれるが、これらに限定されない。
消化酵素の別のクラスは、アスパラギン酸プロテアーゼである。「アスパラギン酸プロテアーゼ」という用語は、酵素の触媒部位に2つの反応性の高いアスパラギン酸残基を保有し、ほとんどの場合、ペプスタチン(ほぼ全ての既知のアスパラギン酸プロテアーゼの低分子量阻害剤)によるその特異的阻害を特徴とするプロテアーゼを記載することを意図している。多くの植物食性昆虫は、タンパク質消化のために、部分的には中腸のアスパラギン酸プロテアーゼに依存しているという証拠がある(ほとんどの場合、システインプロテアーゼとともに)。これらには、Hemiptera、特に、(Rhodnius prolixus)、及びトコジラミ(bedbug)(Cimex spp.)、及びPhymatidae、Pentatomidae、Lygaeidae、及びBelostomatidae科のメンバー、Coleoptera(Meloidae、Chrysomelidae、Coccinelidae、及びBruchidaeの科で、全てCucujiformiaシリーズに属する、特に、コロラドポテトビートル(Colorado potato beetle)(Leptinotarsa decemlineata)、スリーラインドポテトビートル(three-lined potato beetle)(Lematri lineata)、サザン及びウエスタンコーンルートワーム(southern and western corn rootworm)(Diabrotica undecimpunctata及びD.virgifera)、ボールウィービル(boll weevil)(Anthonomus grandis)、スカッシュバグ(squash bug)(Anasatristis)、フリービートル(flea beetle)(Phyllotreta crucifera)、ブルーチッドビートル(bruchid beetle)(Callosobruchus maculatus)、メキシカンビーンビートル(Mexican bean beetle)(Epilachna varivestis)、ソイビーンリーフマイナー(soybean leafminer)(Odontota horni)、マージンドブリスタービートル(margined blister beetle)(Epicauta pestifera)、及びレッドフラワービートル(red flour beetle)(Triolium castaneum)、Diptera、特に、イエバエ(Musca domestica)が含まれるが、これらに限定されない(Terra and Ferreira(1994)Comn.Biochem.Physiol.109B:1-62、Wolfson and Murdock(1990)J.Chem.Ecol.16:1089-1102)。
植物へのポリヌクレオチドの組み込み
トランスジェニック植物における異種ポリペプチドの発現に関する課題は、宿主生物における発現時に導入されたポリペプチドの所望の効果(例えば、殺虫活性)を維持することである。かかる効果を維持する1つの方法は、動作可能に連結された小胞体シグナルペプチド(ERSP)の使用を通して、適切なタンパク質フォールディングの可能性を高めることである。トランスジェニックタンパク質の効果を維持する別の方法は、翻訳安定化タンパク質(STA)を組み込むことである。
小胞体シグナルペプチド(ERSP)
組換えタンパク質のERへの細胞内標的化は、当該組換えタンパク質に動作可能に連結されたERSPの使用を通して達成することができ、これにより、かかるタンパク質の正しいアセンブリ及び/又はフォールディング、並びに植物におけるこれらの組換えタンパク質の高レベルの蓄積を可能にする。宿主タンパク質の細胞内貯蔵への区画化に関する例示的な方法は、McCormick et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96(2):703-708,1999、Staub et al.,Nature Biotechnology 18:333-338,2000、Conrad et al.,Plant Mol.Biol.38:101-109,1998、及び Stoger et al.,Plant Mol.Biol.42:583-590,2000に記載されている(それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。したがって、組換えタンパク質の正しいアセンブリ及び/又はフォールディングを達成する1つの方法は、目的の組換えタンパク質に小胞体シグナルペプチド(ERSP)を動作可能に連結することである。
一部の実施形態では、小胞体シグナルペプチド(ERSP)を含むペプチドは、CRIP(ERSP-CRIPと称される)に動作可能に連結され得、当該ERSPは、当該ペプチドのN末端であり、そのERSPペプチドは、3~60アミノ酸長、5~50アミノ酸長、20~30アミノ酸長であり、かつ/又はそのペプチドが、BAAS、又はタバコエクステンシンシグナルペプチド若しくは改変タバコエクステンシンシグナルペプチド、又はJun a 3(Juniperus asheiのシグナルペプチド)である。例えば、一部の実施形態では、植物は、小胞体シグナルペプチド(ERSP)及び/又はCRIPとして本明細書に記載されるペプチドのうちのいずれかをコードするヌクレオチドで形質転換され得る。
一部の実施形態では、小胞体シグナルペプチド(ERSP)を含むタンパク質は、CRIPに動作可能に連結され、ERSP-L-CRIP又はERSP-CRIP-Lと称される介在リンカーペプチド(L又はリンカー)に動作可能に連結され得る。ここで、当該ERSPは、当該タンパク質のN末端であり、当該L又はリンカーは、CRIPのN末端側(上流)又はCRIPのC末端側(下流)のいずれかにあり得る。ERSP-L-CRIP、又はERSP-CRIP-Lと称されるタンパク質は、本明細書に記載のERSP又はCRIPのうちのいずれかを含み、当該Lが、切断不能リンカーペプチド又は切断可能リンカーペプチドであり得、これは、タンパク質発現プロセス中に植物細胞内で切断可能であり得るか、又は昆虫腸内環境及び血リンパ環境で切断可能であり得、以下の配列を含む、本文書によって記載又は教示される介在リンカーペプチド(LINKER)のうちのいずれかからなる:IGER(配列番号31)、EEKKN(配列番号32)、及びETMFKHGL(配列番号33)。
一部の実施形態では、小胞体シグナルペプチド(ERSP)を含むタンパク質は、CRIPに動作可能に連結され得、これが次に、翻訳安定化タンパク質(STA)に動作可能に連結され得る。ここで、この構成は、ERSP-STA-CRIP又はERSP-CRIP-STAと称され、当該ERSPは、当該タンパク質のN末端であり、当該STAは、CRIPのN末端側(上流)又はCRIPのC末端側(下流)のいずれかにあり得る。一部の実施形態では、ERSP-STA-CRIP又はERSP-CRIP-STAと称されるタンパク質は、本明細書に記載のERSP又はCRIPのいずれかを含み、STAに動作可能に連結され得る。STAは、例えば、本文書に記載又は教示される翻訳安定化タンパク質のうちのいずれかであり、GFP(緑色蛍光タンパク質;配列番号34;NCBI受託番号P42212)、又はJun a 3(Juniperus ashei;配列番号36;NCBI受託番号P81295.1)が含まれる。
植物は、例えば、上述のトランスフェクション方法のうちのいずれかを使用して、CRIP、又は1つ以上のCRIPと1つ以上の非CRIPペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質とを含む殺虫タンパク質をコードするDNA配列で一過的又は安定的にトランスフェクトされ得る。あるいは、植物は、ERSP、LINKER、及び/又はポリヌクレオチドをコードするSTAタンパク質に動作可能に連結されたCRIPをコードするポリヌクレオチドでトランスフェクトされ得る。例えば、一部の実施形態では、トランスジェニック植物又は植物ゲノムをトランスフェクトして、小胞体シグナルペプチド(ERSP)、CRIP、及び/又は介在リンカーペプチド(LINKER、L)をコードするポリヌクレオチド配列を組み込むことができ、したがって、異種DNAから転写されたmRNAが形質転換植物で発現される。
本開示は、任意の植物種の形質転換に使用され得、単子葉植物及び双子葉植物を含むが、これらに限定されない。トランスジェニックアプローチ又はPEPが特に有用であろう作物としては、アルファルファ、ワタ、トマト、トウモロコシ、コムギ、トウモロコシ、スイートコーン、ルーサン、ダイズ、モロコシ、エンドウ、アマニ、ベニバナ、ナタネ、セイヨウアブラナ、イネ、ダイズ、オオムギ、ヒマワリ、木(針葉樹及び落葉樹を含む)、花(商業的に栽培されるもの、温室で栽培されるものを含む)、ハウチワマメ、スイッチグラス、サトウキビ、ジャガイモ、トマト、タバコ、ジュウジバナ、ピーマン、サトウダイコン、オオムギ、及びセイヨウアブラナ、アブラナ属種、ライムギ、アワ、ピーナッツ、サツマイモ、キャッサヤ(cassaya)、コーヒー、ココナッツ、パイナップル、柑橘類、カカオ、チャ、バナナ、アボカド、イチジク、グアバ、マンゴー、オリーブ、カセイ、パパイア、カシュー、マカダミア、アーモンド、カラスムギ、野菜、観賞植物又は針葉樹が挙げられるが、これらに限定されない。
一部の実施形態では、本明細書に記載のCRIP発現オープンリーディングフレーム(ORF)は、ポリヌクレオチド配列であり、植物がmRNAを発現することを可能にし、それが次に、ペプチドに翻訳され、発現され、適切にフォールディングされ、並びに/又は、当該タンパク質が1つ以上の害虫を阻害及び/若しくは死滅させるのに十分な用量を提供する程度に蓄積されるであろう。一実施形態では、タンパク質CRIP発現ORFの例は、システインリッチ殺虫タンパク質(crip)、「ersp」(すなわち、ERSPポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列)、「リンカー」(すなわち、LINKERポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列)、「sta」(すなわち、STAポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列)、又はこれらの任意の組み合わせせであり得、以下の式の形式で記載することができる。
ersp-sta-(リンカー-crip、又はersp-(crip-リンカー-sta
ポリヌクレオチド式の前述の例示的な実施形態は、以下のタンパク質複合体をもたらすであろう:ERSP-STA-(LINKER-CRIP(4つの可能なペプチド成分が含まれ、各成分がダッシュ符号で区切られている)。erspのヌクレオチド成分は、植物小胞体輸送シグナルペプチド(ERSP)をコードするポリヌクレオチドセグメントである。staの成分は、翻訳安定化タンパク質(STA)をコードするポリヌクレオチドセグメントであり、これは、植物において発現されるCRIPの蓄積を助けるが、一部の実施形態では、staの包含は、CRIP発現ORFに必要ではない場合がある。リンカーの成分は、介在リンカーペプチド(L又はLINKER)をコードするポリヌクレオチドセグメントであり、ORFに含まれる他の成分及び翻訳安定化タンパク質とCRIPを分ける。下付き文字「i」は、一部の実施形態では、異なる種類のリンカーペプチドが、CRIP発現ORFに使用され得ることを示す。成分「crip」は、CRIPをコードするポリヌクレオチドセグメントを示す。下付き文字「j」は、異なるCRIPポリヌクレオチドが、CRIP発現ORFに含まれ得ることを示す。例えば、一部の実施形態では、CRIPポリヌクレオチド配列は、アミノ酸置換又はアミノ酸欠失を有するCRIPをコードすることができる。「(リンカー-crip」に示される下付き文字「n」は、介在リンカーペプチド及びCRIPをコードするヌクレオチドの構造が、同じCRIP発現ORFの同じオープンリーディングフレーム内で「n」回繰り返され得ることを示す。ここで、「n」は、1~10の任意の整数であり得、「n」は、1~10であり得、具体的には、「n」は、1、2、3、4、又は5であり得、一部の実施形態では、「n」は、6、7、8、9、又は10である。繰り返しは、異なる介在リンカー(LINKER)及び異なるCRIPをコードするポリヌクレオチドセグメントを含むことができる。同じCRIP発現ORF内の繰り返しを含む異なるポリヌクレオチドセグメントは、全て同じ翻訳フレーム内にある。一部の実施形態では、CRIP発現ORFにstaポリヌクレオチドを含めることは必要ではない場合がある。例えば、erspポリヌクレオチド配列は、リンカーなしでCRIPバリアントポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドに直接連結され得る。
前述の例示的な式において、ポリペプチド「CRIP」をコードするポリヌクレオチド「crip」は、本明細書に記載される任意のCRIPをコードするポリヌクレオチド配列であり得る。例えば、一部の実施形態では、「crip」ポリヌクレオチドは、CRIPをコードすることができ、ACTXペプチド(例えば、U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、rκ-ACTX-Hv1c、ω-ACTX-Hv1a、及び/又はω-ACTX-Hv1a+2)、Γ-CNTX-Pn1a、U1-アガトキシン-Ta1b、TVP、Av2、Av3、又はAVPが含まれるが、これらに限定されない。加えて、前述の式を使用して、Bt毒素(例えば、Cry毒素、Cyt毒素、又はVip)などのペプチド-IA(例えば、かかる方法に供される殺虫剤、例えば、アミノ酸、ペプチド、又はタンパク質のポリマー)をコードすることもできる。
前述の例示的な式において、ポリペプチド「CRIP」をコードするポリヌクレオチド「crip」は、本明細書に記載される任意のCRIPをコードするポリヌクレオチド配列であり得、例えば、CRIPが、配列番号192~370のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するクモペプチド、配列番号60~64、192~370、及び594のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するACTXペプチド(例えば、U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、κ-ACTX-Hv1a、κ+2-ACTX-Hv1a、ω-ACTX-Hv1a、及び/若しくはω+2-ACTX-Hv1a)、配列番号65のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a、配列番号1に示されるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチド、配列番号2~15、49~53、2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、若しくは653~654のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)、配列番号66、88~191のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するサソリペプチド、配列番号371~411のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するイソギンチャクペプチド、配列番号44に示されるアミノ酸配列を有するAnemonia viridis由来のAv3ポリペプチド、配列番号45~47のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するAv3バリアントポリペプチド(AVP)、又はコノトキシンと、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、少なくとも99.9%、若しくは100%のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、CRIP ORFは、その5’末端のerspから始まる。CRIPが、トランスジェニック植物から発現される場合、適切にフォールディングされ、機能するためには、CRIPをコードするポリヌクレオチドとインフレームで融合されたerspヌクレオチドを有する必要がある。細胞翻訳プロセス中、翻訳されたERSPは、シグナル認識粒子と呼ばれる細胞成分と結合することによって、翻訳されているCRIPを植物細胞の小胞体膜(ER)に挿入するように指示することができる。ER内で、ERSPペプチドは、シグナルペプチダーゼによって切断され、CRIPは、ERに放出され、CRIPが、翻訳後修飾プロセス(例えば、ジスルフィド結合の形成)中に適切にフォールディングされる。追加の保持タンパク質シグナルなしで、タンパク質は、ERを介してゴルジ装置に輸送され、そこで最終的には、形質膜の外側に、アポプラスト空間に分泌される。CRIPは、アポプラスト空間に効率的に蓄積して、植物における殺虫用量に到達することができる。
ERSPペプチドは、植物翻訳CRIP複合体のN末端領域にあり、ERSP部分は、約3~60個のアミノ酸で構成される。一部の実施形態では、それは、5~50個のアミノ酸である。一部の実施形態では、それは、10~40個のアミノ酸であるが、ほとんどの場合、15~20、20~25、又は25~30個のアミノ酸で構成される。ERSPは、これがタンパク質の輸送を指示することから、いわゆるシグナルペプチドである。シグナルペプチドはまた、標的化シグナル、シグナル配列、輸送ペプチド、又は局在化シグナルとも呼ばれることがある。ER輸送のためのシグナルペプチドは、多くの場合、15~30個のアミノ酸残基長であり、正に荷電したアミノ末端、それに隣接する疎水性残基のコア、及び極性であるが無荷電のカルボキシ末端領域からなる三者構成を有する。(Zimmermann,et al,“Protein translocation across the ER membrane,”Biochimica et Biohysica Acta,2011,1808:912-924)。
多くのERSPが知られている。ERSPは、植物ERSPに由来するものである必要はなく、非植物ERSPが、本明細書に記載される手順で機能する。しかしながら、多くの植物ERSPがよく知られており、ここでは、いくつかの植物由来ERSPについて記載する。例えば、BAASは、植物、Hordeum vulgareに由来し、以下のアミノ酸配列を有する:MANKHLSLSLFLVLLGLSASLASG(配列番号37)。
植物ERSPは、植物のアポプラスト空間に発現及び放出されることが既知のタンパク質のゲノム配列から選択され、これには、BAAS、ニンジンエクステンシン、及びタバコPR1などの例が含まれる。以下の参考文献は、更なる記載を提供する(参照によりその全体が本明細書に援用される)。De Loose,M.et al.“The extensin signal peptide allows secretion of a heterologous protein from protoplasts”Gene,99(1991)95-100(De Loose,M.らは、Nicotiana plumbaginifoliaからのエクステンションコード遺伝子の構造解析を記載し、その配列は、タンパク質の小胞体への移行のための典型的なシグナルペプチドを含む)、Chen,M.H.et al.“Signal peptide-dependent targeting of a rice alpha-amylase and cargo proteins to plastids and extracellular compartments of plant cells”Plant Physiology,2004 Jul;135(3):1367-77.Epub 2004 Jul 2.(Chen,M.H.らは、トランスジェニックタバコにおいて、シグナルペプチドの有無でα-アミラーゼの発現を分析することによって、植物細胞におけるα-アミラーゼの細胞内局在を研究した)。これらの参考文献及び他の文献は、本明細書に記載の方法、手順、並びにペプチド、タンパク質、及びヌクレオチド複合体、及び構築物において使用され得るシグナルペプチドを教示及び開示する。
タバコエクステンシンのシグナルペプチドモチーフは、ERSPである(Memelink et al,the Plant Journal,1993,V4:1011-1022;また、Pogue GP et al,Plant Biotechnology Journal,2010,V8:638-654も参照されたい)。一部の実施形態では、CRIP ORFは、タバコエクステンシンのシグナルペプチドモチーフを有することができる。一実施形態では、CRIP ORFは、配列番号38によるエクステンシンモチーフを有することができる。別の実施形態では、CRIP ORFは、配列番号39に記載のエクステンシンモチーフを有することができる。
エクステンシンのシグナルモチーフを有する実施形態を生成する方法の例示的な実施例は、以下の通りである。エクステンシンモチーフをコードするDNA配列は、4つの合成DNAプライマーを有するオリゴ伸長PCRを使用して設計され(例えば、配列番号40又は配列番号41に示されるDNA配列)。制限部位(例えば、5’末端のPac I制限部位、及び3’末端のGFP配列の5’末端)の末端部位は、鋳型として機能するエクステンシンDNA配列を用いたPCRにより付加され、断片が得られる。断片は、フォワードPCRプライマーとして使用され、CRIP ORF(例えば、pFECTベクターに含まれる「gfp-l-CRIP」)をコードするDNA配列を増幅し、したがって、ERSPがエクステンシンである「ERSP-GFP-L-CRIP」をコードする(N’端末からC’端末へ)CRIP ORFを産生する。次いで、得られたDNA配列を、FECTベクターのPac I及びAvr II制限部位にクローニングして、GFP融合CRIPの一過性植物発現のためのpFECT-CRIPベクターを生成することができる。
一部の実施形態では、例示的な発現システムは、CRIP ORFを含むFECT発現ベクターを、アグロバクテリウムGV3101に形質転換し、形質転換されたGV3101を、CRIP ORFの一過性発現のためにタバコ葉に注射することを含み得る。
翻訳安定化タンパク質(STA)
翻訳安定化タンパク質(STA)は、植物組織において、CRIPの量を増加させることができる。CRIP ORFのうちの1つであるERSP-CRIPは、トランスフェクトされた植物において適切にフォールディングされたCRIPを発現するのに十分であるが、一部の実施形態では、害虫の被害から植物を効果的に保護するには、植物で発現されたCRIPが蓄積することが必要であり得る。適切に構築されたCRIP ORFのトランスフェクションにより、トランスジェニック植物は、より多くの量の正しくフォールディングされたCRIPを発現及び蓄積することができる。植物がより多くの量の適切にフォールディングされたCRIPを蓄積するとき、植物は、植物を攻撃及び摂食する害虫に対して、より容易に抵抗、阻害、及び/又は殺傷することができる。トランスジェニック組織におけるポリペプチドの蓄積を増加させる1つの方法は、翻訳安定化タンパク質(STA)の使用によるものである。翻訳安定化タンパク質を使用して、植物組織中のCRIPの蓄積を有意に増加させ、したがって、害虫耐性に関してCRIPでトランスフェクトされた植物の有効性を増加させることができる。翻訳安定化タンパク質は、タンパク質分解の細胞プロセスによって標的化されることなく、細胞内に蓄積することができる十分な三次構造を有するタンパク質である。以下の式は、U1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリヌクレオチド配列と融合された安定化タンパク質をコードするCRIP ORFの例の1つを記載する。
ersp-sta-l-crip又はersp-crip-l-sta
一部の実施形態では、翻訳安定化タンパク質は、別のタンパク質のドメインであり得るか、又はタンパク質配列全体を含み得る。一部の実施形態では、翻訳安定化タンパク質は、5~50個のアミノ酸、50~250個のアミノ酸(例えば、GNA)、250~750個のアミノ酸(例えば、キチナーゼ)、及び750~1500個のアミノ酸(例えば、エンハンシン)であり得る。
タンパク質又はタンパク質ドメインは、翻訳安定化以外に有用な特徴を有しないタンパク質を含み得るか、又は翻訳安定化に加えて他の有用な形質を有し得る。翻訳安定化タンパク質の一実施形態は、CRIPを伴う融合タンパク質のポリマーであってもよい。翻訳安定化タンパク質の使用を例示するために、翻訳安定化タンパク質の具体的な例が本明細書に提供される。この例は、本開示又は特許請求の範囲を限定することを何ら意図するものではない。有用な翻訳安定化タンパク質は当該技術において周知であり、この種類の任意のタンパク質を本明細書に開示されるように使用することができる。ペプチドの産生を評価及び試験するための手順は、当該技術分野で既知であり、本明細書に記載される。1つの翻訳安定化タンパク質の一例は、緑色蛍光タンパク質(GFP)(配列番号34;NCBI受託番号P42212.1)である。
翻訳安定化タンパク質の更なる例は、以下の参考文献に見出すことができる(それらの開示は、参照によりそれらの全体が組み込まれる):Kramer,K.J.et al.“Sequence of a cDNA and expression of the gene encoding epidermal and gut chitinases of Manduca sexta”Insect Biochemistry and Molecular Biology,Vol.23,Issue 6,September 1993,pp.691-701.(Kramer,K.J.らは、タバコスズメガManduca sextaからキチナーゼをコードするcDNAを単離し、配列決定した)、Hashimoto,Y.et al.“Location and nucleotide sequence of the gene encoding the viral enhancing factor of the Trichoplusia ni granulosis virus”Journal of General Virology,(1991),72,2645-2651.(Hashimoto,Y.らはTrichoplusia ni granulosisウイルスのウイルス増強因子をコードする遺伝子をクローニングし、完全なヌクレオチド配列を決定した)。これらの参考文献及び他の文献は、本明細書に記載の方法、手順、並びにペプチド、タンパク質、及びヌクレオチド複合体、及び構築物において使用され得る翻訳安定化タンパク質を教示及び開示する。
一部の実施形態では、CRIP ORFは、STA(例えば、Jun a 3)を含むCRIP ORFを使用して、植物(例えば、タバコ植物Nicotiana benthamiana)に形質転換され得る。成熟Jun a 3は、約30kDaの植物防御タンパク質であり、一部の人々に対してアレルゲンでもある。Jun a 3は、Juniperus ashei樹によって産生され、一部の実施形態では、翻訳安定化タンパク質(STA)として使用され得る。一部の実施形態では、Jun a 3のアミノ酸配列は、配列番号36に示される配列であり得る。他の実施形態では、Jun a 3アミノ酸配列は、配列番号42に示される配列であり得る。
リンカー
リンカータンパク質は、CRIP ORFを構成する異なるモチーフの適切なフォールディングを補助する。本発明に記載のCRIP ORFはまた、CRIP(crip)をコードするポリヌクレオチド配列と翻訳安定化タンパク質(sta)をコードするポリヌクレオチド配列との間に介在リンカーペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を組み込むか、又は発現ORFが複数のCRIPドメイン発現を含む場合、CRIPをコードする複数のポリヌクレオチド配列をコードするポリヌクレオチド配列の間に介在リンカーペプチドをコードするポリヌクレオチド配列(すなわち、(l-crip)若しくは(crip-l))を組み込む。介在リンカーペプチド(LINKERS又はL)は、発現したCRIP複合体の異なる部分を分離し、発現プロセス中の複合体の異なる部分の適切なフォールディングを助ける。発現されたCRIP複合体において、異なる機能性ドメインを分離するために、異なる介在リンカーペプチドが関与し得る。一部の実施形態では、LINKERは、CRIPに結合され、この二価基は、保護される植物において、適切にフォールディングされたCRIPの蓄積を促進するために、最大10回(N=1~10)、場合によっては10回超繰り返すことができる。
一部の実施形態では、介在リンカーペプチドは、1~30アミノ酸長であり得る。しかし、必ずしも植物で発現されたCRIPに必須な成分ではない。切断可能なリンカーペプチドを、CRIP ORFに設計して、形質転換された植物で発現されたCRIP複合体から適切なCRIPが放出され、害虫の被害に関してCRIPが植物に与える保護を改善することができる。ある種類の介在リンカーペプチドは、植物切断可能リンカーペプチドである。この種類のリンカーペプチドは、植物の翻訳後修飾中に発現されたCRIP ORF複合体から完全に除去することができる。したがって、一部の実施形態では、この種類の介在リンカーペプチドによって連結された適切にフォールディングされたCRIPは、植物において翻訳後修飾中に発現されたCRIP ORF複合体から、植物細胞に放出され得る。
別の種類の切断可能な介在リンカーペプチドは、植物において発現プロセス中に切断可能ではない。しかしながら、セリンプロテアーゼ、スレオニンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ、又は金属プロテアーゼに特異的なプロテアーゼ切断部位を有する。切断可能なリンカーペプチドの種類は、昆虫及びLepidopteranの腸内環境並びに/又は昆虫及びLepidopteranの血リンパ環境で見出されるプロテアーゼによって消化されて、昆虫の腸内又は血リンパ中にCRIPを放出することができる。本開示によって教示される情報を使用して、本発明で有用であろうLINKERの他の例を作製又は見出すことは、当業者にとって日常的なことであるはずである。
一部の実施形態では、CRIP ORFは、「IGER」(配列番号31)のアミノ酸コードを有する、切断可能な種類の介在リンカー(例えば、配列番号31に列挙されるもの)を含むことができる。この介在リンカー又はLINKERの分子量は、473.53ダルトンである。他の実施形態では、介在リンカーペプチド(LINKER)は、任意の種類のプロテアーゼ切断部位、すなわち、切断不能な介在リンカーペプチド、例えば、リンカー「ETMFKHGL」(配列番号33)を含まないものであってもよい。
一部の実施形態では、CRIP-殺虫タンパク質は、2つ以上の切断可能なペプチドを有することができ、殺虫タンパク質は、昆虫切断可能リンカー(L)を含み、昆虫切断可能リンカーが、(CRIP-L)(式中、「n」は、1~200、又は1~100、又は1~10の範囲の整数である)を含む構築物とインフレームで融合される。別の実施形態では、本明細書に記載されるCRIP-殺虫タンパク質は、昆虫切断可能リンカー(L)及び/又はリピート構築物(L-CRIP)若しくは(CRIP-L)(式中、「n」は、1~200、又は1~100、又は1~10の範囲の整数である)と動作可能に連結されているCRIPと動作可能に連結された小胞体シグナルペプチド(ERSP)を含む。
一部の実施形態では、小胞体シグナルペプチド(ERSP)を含むタンパク質は、CRIP及び介在リンカーペプチド(L又はリンカー)に動作可能に連結され得る(かかる構築物は、ERSP-L-CRIP又はERSP-CRIP-Lと称される)。ここで、当該ERSPは、当該タンパク質のN末端であり、当該L又はリンカーは、CRIPのN末端側(上流)又はCRIPのC末端側(下流)のいずれかにあり得る。本明細書に記載のERSP又はCRIPのうちのいずれかを含む、ERSP-L-CRIP、又はERSP-CRIP-Lと称されるタンパク質は、リンカー「L」を有し得、これは、切断不能リンカーペプチド又は切断可能リンカーペプチドであり得、タンパク質発現プロセス中に植物細胞内で切断可能であり得るか、又は昆虫腸内環境及び/若しくは血リンパ環境で切断可能であり得る。
前述のリンカーの例示的な記載、及びそれを作製及び使用する方法は、米国特許出願公開第2018/0362598A1号に提供されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
介在リンカーペプチドの他の例は、以下の参考文献に見出すことができる(それらの開示は、参照によりそれらの全体が組み込まれる):植物で発現されるセリンプロテイナーゼインヒビター前駆体は、Heath et al.“Characterization of the protease processing sites in a multidomain proteinase inhibitor precursor from Nicotiana alata”European Journal of Biochemistry,1995;230:250-257において、6つの同じリンカーペプチドによって分離された5つの同種タンパク質インヒビターを含むことが見出された。6つの異なるリンカーによる緑色蛍光タンパク質のフォールディング挙動の比較は、Chang,H.C.et al.“De novo folding of GFP fusion proteins:high efficiency in eukaryotes but not in bacteria”Journal of Molecular Biology,2005 Oct 21;353(2):397-409において調査されている。ヒトGalNAc-TsファミリーのアイソフォームであるGalNAc-T2は、N.benthamiana plants by Daskalova,S.M.et al.“Engineering of N.benthamiana L.plants for production of N-acetylgalactosamine-glycosylated proteins”BMC Biotechnology,2010 Aug 24;10:62において、発現時に、その局在及び機能が保持されることが示された。内因性プラスチドタンパク質がストロミュールを通って移動する能力は、Kwok,E.Y.et al.“GFP-labelled Rubisco and aspartate aminotransferase are present in plastid stromules and traffic between plastids”Journal of Experimental Botany,2004 Mar;55(397):595-604.Epub 2004 Jan 30に示されている。タバコモザイクウイルス(TMV)ビリオンの表面の操作に関する報告は、蚊のデカペプチドホルモンであるトリプシン調節性卵形性阻害因子(TMOF)を用いて、Borovsky,D.et al.“Expression of Aedes trypsin-modulating oostatic factor on the virion of TMV:A potential larvicide”Proc Natl Acad Sci,2006 December 12;103(50):18963-18968によって作製された。これらの参考文献及び他の文献は、本明細書に記載の方法、手順、並びにペプチド、タンパク質、及びヌクレオチド複合体、及び構築物において使用され得る介在リンカーを教示及び開示する。
CRIP ORF及びCRIP構築物
「CRIP ORF」は、CRIP、及び/又は1つ以上の安定化タンパク質、分泌シグナル、又は標的指向性シグナル(例えば、ERSP又はSTA)をコードするヌクレオチドを指し、翻訳される能力を有するORFのヌクレオチドとして定義される。したがって、「CRIP ORFダイアグラム」は、ダイアグラム又は式形式で記載される1つ以上のCRIP ORFの組成物を指す。例えば、「CRIP ORFダイアグラム」は、発現ORF内に含まれるDNAセグメントに対する頭文字又は略称を使用して記載され得る。したがって、一実施例では、「CRIP ORFダイアグラム」は、DNAセグメントを「ersp」(すなわち、ERSPポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列)、「リンカー」又は「L」(すなわち、LINKERポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列)、「sta」(すなわち、STAポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列)、及び「crip」(すなわち、CRIPをコードするポリヌクレオチド配列)として、式形式で図示することによって、ERSP、LINKER、STA、及びCRIPをコードするポリヌクレオチドセグメントを記載することができる。CRIP ORFダイアグラムの例は、「ersp-sta-(リンカー-crip」、又は「ersp-(crip-リンカー-sta」、及び/又はそれらのDNAセグメントの任意の組み合わせである。
以下の式は、ERSP、STA、リンカー、及びCRIPをコードするCRIP ORFの2つの例を記載する。
ersp-sta-l-crip又はersp-crip-l-sta
一部の実施形態では、本明細書に記載のCRIPオープンリーディングフレーム(ORF)は、ポリヌクレオチド配列であり、植物がmRNAを発現することを可能にし、それが次に、ペプチドに翻訳され、適切にフォールディングされ、並びに/又は、当該タンパク質が1つ以上の害虫を阻害及び/若しくは死滅させるのに十分な用量を提供する程度に蓄積されるであろう。一実施形態では、タンパク質CRIP ORFの例は、CRIP(crip)をコードするポリヌクレオチド、「ersp」(すなわち、ERSPポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列)、「リンカー」(すなわち、LINKERポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列)、「sta」(すなわち、STAポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列)、又はこれらの任意の組み合わせであり得、以下の式形式で記載することができる。
ersp-sta-(リンカー-crip、又はersp-(crip-リンカー-sta
ポリヌクレオチド式の前述の例示的な実施形態は、以下のタンパク質複合体をもたらすであろう:ERSP-STA-(LINKER-CRIP(4つの可能なペプチド成分が含まれ、各成分がダッシュ符号で区切られている)。erspのヌクレオチド成分は、植物小胞体輸送シグナルペプチド(ERSP)をコードするポリヌクレオチドセグメントである。staの成分は、翻訳安定化タンパク質(STA)をコードするポリヌクレオチドセグメントであり、これは、植物において発現されるCRIPの蓄積を助けるが、一部の実施形態では、staの包含は、CRIP ORFに必要ではない場合がある。リンカーの成分は、介在リンカーペプチド(L又はLINKER)をコードするポリヌクレオチドセグメントであり、ORFに含まれる他の成分及び翻訳安定化タンパク質からCRIPを分ける。下付き文字「i」は、一部の実施形態では、異なる種類のリンカーペプチドが、CRIP ORFに使用され得ることを示す。成分「crip」は、CRIPをコードするポリヌクレオチドセグメントを示す。下付き文字「j」は、異なるポリヌクレオチドが、CRIP ORFに含まれ得ることを示す。例えば、一部の実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、異なるアミノ酸置換を有するCRIPをコードすることができる。「(リンカー-crip」に示される下付き文字「n」は、介在リンカーペプチド及びCRIPをコードするヌクレオチドの構造が、同じCRIP ORFの同じオープンリーディングフレーム内で「n」回繰り返され得ることを示す。ここで、「n」は、1~10の任意の整数であり得、「n」は、1~10であり得、具体的には、「n」は、1、2、3、4、又は5であり得、一部の実施形態では、「n」は、6、7、8、9、又は10である。繰り返しは、異なる介在リンカー(LINKER)及び異なるCRIPをコードするポリヌクレオチドセグメントを含むことができる。同じCRIP ORF内の繰り返しを含む異なるポリヌクレオチドセグメントは、全て同じ翻訳フレーム内にある。一部の実施形態では、CRIP ORFにstaポリヌクレオチドを含めることは必要ではない場合がある。例えば、erspポリヌクレオチド配列は、リンカーなしでCRIPバリアントポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドに直接連結され得る。
前述の例示的な式において、ポリペプチド「CRIP」をコードするポリヌクレオチド「crip」は、本明細書に記載される任意のCRIPをコードするポリヌクレオチド配列であり得、例えば、CRIPが、配列番号192~370のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するクモペプチド、配列番号60~64、192~370、及び594のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するACTXペプチド(例えば、U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、κ-ACTX-Hv1a、κ+2-ACTX-Hv1a、ω-ACTX-Hv1a、及び/若しくはω+2-ACTX-Hv1a)、配列番号65のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a、配列番号1に示されるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチド、配列番号2~15、49~53、2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、若しくは653~654のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)、配列番号66、88~191のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するサソリペプチド、配列番号371~411のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するイソギンチャクペプチド、配列番号44に示されるアミノ酸配列を有するAnemonia viridis由来のAv3ポリペプチド、配列番号45~47のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するAv3バリアントポリペプチド(AVP)、又はコノトキシンと、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、若しくは100%同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下のCRIP構築物の配向及び/又は配置を有するCRIP-殺虫タンパク質をコードするように動作可能である:ERSP-CRIP、ERSP-(CRIP)、ERSP-CRIP-L、ERSP-(CRIP)-L、ERSP-(CRIP-L)、ERSP-L-CRIP、ERSP-L-(CRIP)、ERSP-(L-CRIP)、ERSP-STA-CRIP、ERSP-STA-(CRIP)、ERSP-CRIP-STA、ERSP-(CRIP)-STA、ERSP-(STA-CRIP)、ERSP-(CRIP-STA)、ERSP-L-CRIP-STA、ERSP-L-STA-CRIP、ERSP-L-(CRIP-STA)、ERSP-L-(STA-CRIP)、ERSP-L-(CRIP)-STA、ERSP-(L-CRIP)-STA、ERSP-(L-STA-CRIP)、ERSP-(L-CRIP-STA)、ERSP-(L-STA)-CRIP、ERSP-(L-CRIP)-STA、ERSP-STA-L-CRIP、ERSP-STA-CRIP-L、ERSP-STA-L-(CRIP)、ERSP-(STA-L)-CRIP、ERSP-STA-(L-CRIP)、ERSP-(STA-L-CRIP)、ERSP-STA-(CRIP)-L、ERSP-STA-(CRIP-L)、ERSP-(STA-CRIP)-L、ERSP-(STA-CRIP-L)、ERSP-CRIP-L-STA、ERSP-CRIP-STA-L、ERSP-(CRIP)-STA-L、ERSP-(CRIP-L)-STA、ERSP-(CRIP-STA)-L、ERSP-(CRIP-L-STA)、又はERSP-(CRIP-STA-L)(ここで、Nは、1~200の範囲の整数である)。
一部の実施形態では、本明細書に記載のCRIP ORF及び/又はCRIP構築物のいずれかは、組換え的に産生され得る。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載のCRIP ORF及び/又はCRIP構築物のうちのいずれかは、細胞培養で(例えば、酵母細胞によって)産生され得る。
前述の方法のうちのいずれか、及び/又は本明細書に記載の方法のうちのいずれかを使用して、植物又はその植物部分に、本明細書に記載されるCRIP又はCRIP-殺虫タンパク質(例えば、同様に本明細書に記載される配列番号2~15、49~53、又は77~110のアミノ酸配列を有する1つ以上のCRIP又はCRIP-殺虫タンパク質)のうちのいずれか1つ以上を発現するように動作可能な1つ以上のポリヌクレオチドを組み込むことができる。
本開示は、任意の植物種の形質転換に使用され得、単子葉植物及び双子葉植物を含むが、これらに限定されない。トランスジェニックアプローチ又はPEPが特に有用であろう作物としては、アルファルファ、ワタ、トマト、トウモロコシ、コムギ、トウモロコシ、スイートコーン、ルーサン、ダイズ、モロコシ、エンドウ、アマニ、ベニバナ、ナタネ、セイヨウアブラナ、イネ、ダイズ、オオムギ、ヒマワリ、木(針葉樹及び落葉樹を含む)、花(商業的に栽培されるもの、温室で栽培されるものを含む)、ハウチワマメ、スイッチグラス、サトウキビ、ジャガイモ、トマト、タバコ、ジュウジバナ、ピーマン、サトウダイコン、オオムギ、及びセイヨウアブラナ、アブラナ属種、ライムギ、アワ、ピーナッツ、サツマイモ、キャッサヤ、コーヒー、ココナッツ、パイナップル、柑橘類、カカオ、チャ、バナナ、アボカド、イチジク、グアバ、マンゴー、オリーブ、カセイ、パパイア、カシュー、マカダミア、アーモンド、カラスムギ、野菜、観賞植物又は針葉樹が挙げられるが、これらに限定されない。
ポリヌクレオチドによる植物の形質転換
一部の実施形態では、上記及び本明細書に記載のCRIP ORF及びCRIP構築物は、CRIPが植物において一過的又は安定的に発現されるように、任意の植物発現ベクターにクローニングされ得る。
一過性植物発現システムを使用して、いくつかの成分の必要性、いくつかの成分のコドン最適化、各成分の順序の最適化などを含む、植物におけるいくつかの特定のCRIP発現のためのCRIP ORFの構造を速やかに最適化することができる。一過性植物発現ベクターは、多くの場合、植物ウイルスゲノムに由来する。植物ウイルスベクターは、植物ウイルスの感染性により、植物における外来遺伝子の発現が迅速かつ高レベルであるという利点を提供する。植物ウイルスゲノムの全長をベクターとして使用することができるが、多くの場合、ウイルス成分(例えば、コートタンパク質)を欠失させ、その場所に、トランスジェニックORFがサブクローニングされる。かかる部位にCRIP ORFをサブクローニングして、ウイルスベクターを作製することができる。これらのウイルスベクターは、それ自体が感染性であるため、例えば、植物の創傷、噴霧などを介して、機械的に植物に導入することができる。また、アグロインフェクション、クラウンゴール細菌Agrobacterium tumefaciens又は毛状根細菌Agrobacterium rhizogenesのT-DNAにウイルスベクターをクローニングすることによって、植物にトランスフェクトすることもできる。このベクターにおけるCRIPの発現は、RNAウイルスの複製によって制御され、複製のためのmRNAへのウイルスの翻訳は、強力なウイルスプロモーター(例えば、カリフラワーモザイクウイルス由来の35Sプロモーター)によって制御される。CRIP ORFを有するウイルスベクターは、通常、E.coli株及びアグロバクテリウム株の両方でそれ自体を複製することができるバイナリベクターにおいて、T-DNA領域にクローニングされる。植物の一過性トランスフェクションは、CRIP発現用のウイルスベクターを含むアグロバクテリウム細胞を植物の葉に浸潤させることによって行うことができる。一時的な形質転換植物では、転写後遺伝子サイレンシング(PTGS)により、短期間で外来タンパク質の発現が停止することが一般的である。時に、PTGS抑制タンパク質遺伝子は、CRIP ORFとともに、発現を駆動する同じ種類のウイルスベクターで、一過的に、植物に共形質転換される必要がある。これにより、植物におけるCRIPの発現が改善され、長続きする。最も一般的に使用されているPTGS抑制タンパク質は、トマトブッシースタントウイルス(TBSV)から発見されたP19タンパク質である。
一部の実施形態では、植物の一過性トランスフェクションは、CRIPをコードするポリヌクレオチドを、容易に入手可能なベクターのうちのいずれか1つと組換えることによって達成することができ(上記参照)、マーカー又はシグナルを使用して確認することができる(例えば、GFP発光)。一部の実施形態では、一過的にトランスフェクトされた植物は、CRIPをコードするポリヌクレオチドを、ベクターのGFP-ハイブリッド融合タンパク質をコードするDNAと組換え、標的化発現用に設計された異なるFECTベクターを使用して、当該ベクターを植物(例えば、タバコ)にトランスフェクションすることによって作製され得る。一部の実施形態では、CRIPをコードするポリヌクレオチドは、APO蓄積(アポプラスト局在)のためのpFECTベクター、CYTO蓄積(細胞質局在)のためのpFECTベクター、又はER蓄積(小胞体体局在)のためのerspベクターとともにpFECTベクターを用いて組換えることができる。
例示的な一過性植物形質転換戦略は、その高効率性、容易性、及び低コストにより、植物ウイルスベクターを使用したアグロインフェクションである。一部の実施形態では、タバコモザイクウイルスの過剰発現システム(TRBO,Lindbo JA,Plant Physiology,2007,V145:1232-1240を参照)を使用して、CRIPを用いて植物を一過的に形質転換することができる。TRBO DNAベクターは、アグロインフェクションのためのT-DNA領域を有し、これは、CaMV 35Sプロモーターを含み、ウイルスコーティングタンパク質をコードする遺伝子を用いずに、タバコモザイクウイルスRNAの発現を駆動する。更に、このシステムは、「非武装(disarmed)」ウイルスゲノムを使用し、したがって、植物から植物へのウイルスの伝播を効果的に防ぐことができる。
別の実施形態では、FECTウイルス一過性植物発現システムを使用して、CRIPを用いて植物を一過的に形質転換することができる(Liu Z & Kearney CM,BMC Biotechnology,2010,10:88を参照されたい)。FECTベクターは、アグロインフェクションのためのT-DNA領域を含み、これは、CaMV 35Sプロモーターを含み、ウイルスコーティングタンパク質及びトリプル遺伝子ブロックをコードする遺伝子を用いずに、フォックステールモザイクウイルスRNAの発現を駆動する。更に、このシステムは、「非武装(disarmed)」ウイルスゲノムを使用し、したがって、植物から植物へのウイルスの伝播を効果的に防ぐことができる。導入された異種遺伝子を効率的に発現させるために、FECT発現システムは、導入されたT-DNAの転写後遺伝子サイレンシング(PTGS)を防ぐために、トマトブッシースタントウイルス由来のRNAサイレンシングサプレッサータンパク質であるP19を更に共発現させる必要がある(TRBO発現システムは、P19の共発現を必要としない)。
一部の実施形態では、CRIP ORFは、一連の翻訳的に融合された構造モチーフをコードするように設計することができ、以下のように記載することができる:N’-ERSP-STA-L-CRIP-C’(式中、「N’」及び「C’」は、それぞれN末端アミノ酸及びC末端アミノ酸を示し、ERSPモチーフは、オオムギαアミラーゼシグナルペプチド(BAAS)(配列番号37)であり得、安定化タンパク質(STA)は、GFP(配列番号34)であり得、リンカーペプチド「L」は、IGER(配列番号31)であり得る)。一部の実施形態では、ersp-sta-l-CRIP ORFは、制限部位(例えば、5’末端のPac I制限部位、及び3’末端のAvr II制限部位)を含むように化学的に合成され得る。一部の実施形態では、CRIP ORFをFECT発現ベクター(pFECT)のPac I及びAvr II制限部位にクローニングして、FECT一過性植物発現システム(pFECT-CRIP)のためのU1-アガトキシン-Ta1bバリアント発現ベクターを生成することができる。FECT発現システムにおける発現を最大化するために、一部の実施形態は、共形質転換のために生成されたRNAサイレンシングサプレッサータンパク質P19(pFECT-P19)を発現するFECTベクターを有し得る。
一部の実施形態では、U1-アガトキシン-Ta1bバリアント発現ベクターは、TRBO一過性植物発現システムで使用するために、例えば、日常的なPCR手順を実施し、上記のCRIP ORFの3’末端にNot I制限部位を付加し、次いで、CRIP ORFをTRBO発現ベクターのPac I及びNot I制限部位にクローニングすることによって組換えることができる(pTRBO-CRIP)。
一部の実施形態では、Agrobacterium tumefaciens株(例えば、市販のGV3101細胞)は、1つ以上の一過性発現システム(例えば、FECT及びTRBO発現システム)を使用して、植物組織(例えば、タバコ葉)におけるCRIP ORFの一過性発現のために使用することができる。このような一過性トランスフェクションプロトコルの例示的な実施例としては、以下が挙げられる:GV3101の一晩培養を使用して、200mLのLuria-Bertani(LB)培地を接種することができる。細胞を、OD600が0.5~0.8の対数増殖期まで増殖させ、次いで、細胞を、4℃で、5000rpmで10分間遠心分離することによってペレット化することができる。次いで、細胞を、10mLの予冷したTE緩衝液(10mMのTris-HCl、1mMのEDTA、pH8.0)で1回洗浄し、次いで、20mLのLB培地に再懸濁することができる。次いで、GV3101の細胞再懸濁液を、250μL画分で1.5mLのマイクロチューブにアリコートすることができる。次いで、アリコートを、液体窒素中で急速凍結し、将来の形質転換用に-80℃で保存することができる。次いで、pFECT-CRIP及びpTRBO-CRIPベクターは、以下のように、凍結融解法を使用して、コンピテントGV3101細胞に形質転換することができる:保存されたコンピテントGV3101細胞を氷上で解凍し、1~5μgの純粋なDNA(pFECT-CRIP又はpTRBO-CRIPベクター)と混合する。細胞-DNA混合物を、氷上で5分間保持し、-80℃に5分間移し、37℃の水浴中で5分間インキュベートする。次いで、凍結融解処理された細胞を、1mLのLB培地に希釈し、揺動台上で、室温で、2~4時間振盪する。次いで、細胞-DNA混合物の200μLのアリコートを、適切な抗生物質(10μg/mLのリファンピシン、25μg/mLのゲンタマイシン、及び50μg/mLのカナマイシンを、pFECT-CRIP形質転換及びpTRBO-CRIP形質転換の両方に使用することができる)を含むLB寒天プレート上に広げ、28℃で2日間インキュベートする。次いで、得られた形質転換コロニーを採取し、形質転換DNAを分析するための適切な抗生物質を含む6mLのLB培地のアリコート中で培養し、形質転換GV3101細胞のグリセロールストックを作製する。
一部の実施形態では、植物組織(例えば、タバコ葉)の一過性形質転換は、針なしの3mL注射器を用いて葉注射を使用して実行され得る。例示的な一実施例では、形質転換GV3101細胞を、(上記のように)適切な抗生物質とともにLBプレート上に画線し、28℃で2日間インキュベートする。形質転換GV3101細胞のコロニーを、5mlのLB-MESA培地(10mMのMES、及び20μMのアセトシリンゴン、並びに上記の同じ抗生物質を補充したLB培地)に接種し、28℃で一晩増殖させる。一晩培養した細胞を、5000rpmで10分間遠心分離することによって回収し、最終OD600が1.0で、誘導培地(10mMのMES、10mMのMgCl、100μMのアセトシリンゴン)に再懸濁する。次いで、細胞を誘導培地中で2時間、室温で一晩インキュベートすることで、タバコ葉の一過性形質転換の準備が整う。処理された細胞は、針が装着されていない3mLシリンジを使用した注射によって、Nicotiana benthamiana植物についている葉の下側に浸潤させることができる。
一部の実施形態では、一過性形質転換は、GV3101細胞の1つの集団をpFECT-CRIP又はpTRBO-CRIPでトランスフェクトし、別の集団をpFECT-P19でトランスフェクトし、2つの細胞集団を、3mL注射器を用いた注射によって、タバコ葉の浸潤のために、等量で一緒に混合することによって達成され得る。
CRIPをコードするように動作可能なポリヌクレオチドの安定した組み込みは、本開示でも可能であり、例えば、CRIP ORFは、安定した植物形質転換技術を使用して植物ゲノムに組み込むこともでき、したがって、CRIPは、植物において安定して発現され、形質転換された植物を世代から世代へと保護することができる。植物の安定した形質転換のために、CRIP発現ベクターは、環状又は線状であり得る。CRIP ORF、CRIP発現カセット、及び/又は安定した植物形質転換のためのCRIPをコードするポリヌクレオチドを有するベクターは、当業者に既知であるものに基づいて、並びに/又はGene Designer 2.0(Atum Bio)、VectorBuilder(Cyagen)、SnapGene(登録商標)ビューア、GeneArt(商標)プラスミド構築サービス(Thermo-Fisher Scientific)、及び/若しくは他の市販のプラスミド設計サービスなどの予測ベクター設計ツールを使用することによって、植物における最適な発現のために慎重に設計されるべきである。Tolmachov,Designing plasmid vectors.Methods Mol Biol.2009;542:117-29を参照されたい。CRIPの発現は、通常、トランスジェニック植物の一部又は全ての細胞における転写を促進するプロモーターによって制御される。プロモーターは、強力な植物ウイルスプロモーター、例えば、カリフラワーモザイクウイルス(CaMV)由来の構成的35Sプロモーターであり得る。また、プロモーターは、強力な植物プロモーター、例えば、Arabidopsis thaliana由来のヒドロペルオキシドリアーゼプロモーター(pHPL)、ダイズ由来のGlycine maxポリユビキチン(Gmubi)プロモーター、異なる植物種(イネ、トウモロコシ、ジャガイモなど)由来のユビキチンプロモーターなどであり得る。植物転写ターミネーターは、多くの場合、RNAポリメラーゼ及びmRNAの転写を停止させるために、ORFの終止コドンの後にあるが多い。CRIPの発現を評価するために、レポーター遺伝子(例えば、GUSストレイニングアッセイのためのβ-グルクロニダーゼ遺伝子(GUS)、紫外線下で緑色蛍光を検出するための緑色蛍光タンパク質(GFP)遺伝子)をCRIP発現ベクターに含めることができる。形質転換植物を選択するために、CRIP発現ベクターには、通常、選択マーカー遺伝子が含まれる。一部の実施形態では、マーカー遺伝子発現産物は、特定の抗生物質(例えば、カナマイシン、ハイグロマイシン)又は特定の除草剤(例えば、グリホサートなど)に対する耐性を、形質転換植物に提供することができる。植物形質転換にアグロインフェクション技術を採用する場合、T-DNA部分を植物に輸送するために、T-DNAの左縁及び右縁の配列もCRIP発現ベクターに含まれる。
構築されたCRIP発現ベクターは、多くのトランスフェクション技術を使用して、植物細胞又は組織にトランスフェクションすることができる。アグロインフェクションは、Agrobacterium tumefaciens株又はAgrobacterium rhizogenes系統を使用して、植物を形質転換する非常に人気のある方法である。粒子衝撃(遺伝子銃又は微粒子銃とも呼ばれる)技術は、植物トランスフェクションの非常に一般的な方法でもある。他のあまり一般的ではないトランスフェクション方法としては、組織エレクトロポレーション、炭化ケイ素ウィスカー、DNAの直接注入などが挙げられる。トランスフェクション後、トランスフェクトされた植物細胞又は組織を、植物再生培地に配置し、トランスフェクトされた植物細胞又は組織を、トランスジェニック植物に再生させる。
形質転換植物の評価は、DNAレベル、RNAレベル、及びタンパク質レベルで達成することができる。安定して形質転換された植物は、これらの全てのレベルで評価することができ、一過的に形質転換された植物は、通常、タンパク質レベルでのみ評価される。CRIP ORFが、安定して形質転換された植物のゲノムに組み込まれていることを確実にするために、ゲノムDNAを、安定して形質転換された植物組織から抽出し、PCR又はサザンブロットを使用して分析することができる。安定して形質転換された植物におけるCRIPの発現は、例えば、ノーザンブロット又はRT-PCRを使用して、形質転換された植物組織から抽出された総mRNAを分析することによって、RNAレベルで評価することができる。形質転換された植物におけるCRIPの発現は、タンパク質レベルで直接評価することもできる。形質転換植物におけるCRIPの発現を評価するための多くの方法がある。CRIP ORFにレポーター遺伝子が含まれる場合、レポーター遺伝子アッセイを行うことができる。例えば、一部の実施形態では、GUSレポーター遺伝子発現用のGUSストレイニングアッセイ、GFPレポーター遺伝子発現用の緑色蛍光検出アッセイ、ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現用のルシフェラーゼアッセイ、及び/又は他のレポーター技術を用いてもよい。
一部の実施形態では、総タンパク質は、Bradfordアッセイを使用してCRIPの発現を直接評価し、試料中の総タンパク質レベルを評価するために、形質転換された植物組織から抽出することができる。
一部の実施形態では、分析用HPLCクロマトグラフィー技術、ウエスタンブロット技術、又はiELISAアッセイを採用して、形質転換された植物組織から抽出された総タンパク質試料中のCRIPを定性的又は定量的に評価することができる。CRIP発現はまた、形質転換された植物組織から抽出された総タンパク質試料を、昆虫バイオアッセイで使用することによって評価することもできる。例えば、一部の実施形態では、形質転換された植物組織又は形質転換された植物自体全体を、昆虫バイオアッセイで使用して、CRIPの発現及びそれが植物を保護する能力を評価することができる。
一部の実施形態では、本発明の植物、植物組織、植物細胞、植物種子、又はその一部は、1つ以上のCRIP又はそれをコードするポリヌクレオチドを含むことができる。
一部の実施形態では、本発明の植物、植物組織、植物細胞、植物種子、又はその一部は、1つ以上のCRIP又はそれをコードするポリヌクレオチドを含むことができ、当該CRIPは、本明細書に記載される任意のCRIPである。例えば、一部の実施形態では、植物、植物組織、植物細胞、植物種子、又はその一部は、CRIPを含むことができ、CRIPには、以下のうちの1つ以上が含まれるが、これらに限定されない:ACTXペプチド(例えば、U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、rκ-ACTX-Hv1c、ω-ACTX-Hv1a、及び/又はω-ACTX-Hv1a+2)、Γ-CNTX-Pn1a、U1-アガトキシン-Ta1b、TVP、Av2、Av3、又はAVP。加えて、本方法及び技術を使用して、Bt毒素(例えば、Cry毒素、Cyt毒素、又はVip)などのペプチド-IA(例えば、かかる方法に供される殺虫剤、例えば、アミノ酸、ペプチド、又はタンパク質のポリマー)を含む、植物、植物組織、植物細胞、植物種子、又はその一部を生成することができる。
一部の実施形態では、本発明の植物、植物組織、植物細胞、植物種子、又はその一部は、1つ以上のCRIP、又はそれをコードするポリヌクレオチドを含むことができ、当該CRIPが、配列番号192~370のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するクモペプチド、配列番号60~64、192~370、及び594のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するACTXペプチド(例えば、U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、κ-ACTX-Hv1a、κ+2-ACTX-Hv1a、ω-ACTX-Hv1a、及び/若しくはω+2-ACTX-Hv1a)、配列番号65のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a、配列番号1に示されるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチド、配列番号2~15、49~53、2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、若しくは653~654のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)、配列番号66、88~191のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するサソリペプチド、配列番号371~411のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するイソギンチャクペプチド、配列番号44に示されるアミノ酸配列を有するAnemonia viridis由来のAv3ポリペプチド、配列番号45~47のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するAv3バリアントポリペプチド(AVP)、又はコノトキシンと、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、少なくとも99.9%、若しくは100%のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
CRIPによる形質転換の成功の確認
植物細胞への異種外来DNAの導入後、植物ゲノムにおける異種遺伝子の形質転換又は組み込みは、組み込まれた遺伝子と関連する核酸、タンパク質、及び代謝産物の分析などの様々な方法によって確認される。
PCR分析は、土壌に移植する前の初期段階で組み込まれた遺伝子の存在について、形質転換された細胞、組織、又は苗条をスクリーニングする迅速な方法である(Sambrook and Russell(2001)Molecular Cloning:A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.)。PCRは、目的の遺伝子又はアグロバクテリウムベクターバックグラウンドなどに特異的なオリゴヌクレオチドプライマーを使用して行われる。
植物の形質転換は、ゲノムDNAのサザンブロット分析によって確認することができる(Sambrook and Russell,2001,上記)。一般に、全DNAは、形質転換された植物から抽出され、適切な制限酵素で消化され、アガロースゲル中で分画され、ニトロセルロース又はナイロン膜に移される。次いで、膜又は「ブロット」を、例えば、放射標識32P標的DNA断片でプローブして、標準的な技術に従って、植物ゲノムに導入された遺伝子の組み込みを確認する(Sambrook and Russell,2001,上記)。
ノーザンブロット分析では、RNAを形質転換植物の特定の組織から単離し、ホルムアルデヒドアガロースゲル中で分画し、当該技術分野で日常的に使用される標準的な手順に従って、ナイロンフィルター上にブロットする(Sambrook and Russell,2001,上記)。次いで、CRIPをコードするポリヌクレオチドによってコードされるRNAの発現は、当該技術分野で既知の方法(Sambrook and Russell,2001,上記)によって、フィルターをCRIPに由来する放射性プローブにハイブリダイゼーションすることによって試験する。
トランスジェニック植物について、ウエスタンブロット、生化学的アッセイなどを行って、CRIP上に存在する1つ以上のエピトープに結合する抗体を使用して、標準的な手順によって(Sambrook and Russell,2001、上記)、CRIP遺伝子によってコードされるタンパク質の存在を確認してもよい。
植物形質転換の成功を決定するために、例えば、クロラムフェニコールに対する耐性、アミノグリコシドG418、ハイグロマイシンなどのいくつかのマーカーが開発されている。葉緑体代謝に関与する産物をコードする他の遺伝子も、選択マーカーとして使用することができる。例えば、グリホサート、ブロモキシニル、又はイミダゾリノンなどの植物除草剤に耐性を提供する遺伝子は、特定の用途を見出すことができる。かかる遺伝子が報告されている(Stalker et al.(1985)J.Biol.Chem.263:6310-6314(ブロモキシニル耐性ニトリラーゼ遺伝子)、及びSathasivan et al.(1990)Nucl.Acids Res.18:2188(AHASイミダゾリノン耐性遺伝子))。更に、本明細書に開示される遺伝子は、細菌、酵母、又は植物細胞の形質転換を評価するためのマーカーとして有用である。植物、植物器官(例えば、葉、茎、根など)、種子、植物細胞、むかご、胚、又はその子孫における導入遺伝子の存在を検出するための方法は、当該技術分野で周知である。一実施形態では、導入遺伝子の存在は、農薬活性を試験することによって検出される。
CRIP及び/又はU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリヌクレオチドを発現する稔性植物は、農薬活性について試験され得、植物は、更なる育種のために選択される最適な活性を示す。害虫活性をアッセイする方法は、当該技術分野で利用可能である。一般に、タンパク質は混合され、摂食アッセイで使用される。例えば、Marrone et al.(1985)J.of Economic Entomology 78:290-293を参照されたい。
一部の実施形態では、一過性トランスフェクション手順の成功を評価することは、レポーター遺伝子(例えば、GFP)の発現に基づいて決定することができる。一部の実施形態では、GFPは、FECT及び/又はTRBOベクターで形質転換されたタバコ葉において、UV光下で検出され得る。
一部の実施形態では、CRIP発現は、植物(例えば、タバコ)において定量的に評価され得る。タバコ植物におけるCRIP定量化を示す例示的な手順は以下の通りである:100mgの形質転換された葉組織のディスクを、1000μLピペット先端の大きな開口部で葉をパンチすることによって採取する。採取した葉組織を、直径5/32インチのステンレス鋼研削球を含む2mLマイクロチューブに入れ、-80℃で1時間凍結し、Troemner-Talboysハイスループットホモジナイザーを使用してホモジナイズする。次に、750μLの氷冷TSP-SE1抽出溶液(50mMのリン酸ナトリウム溶液、1:100希釈プロテアーゼ阻害剤カクテル、1mMのEDTA、10mMのDIECA、8%のPVPP、pH7.0)をチューブに添加し、ボルテックスする。次いで、マイクロチューブを、室温で15分間静置し、次いで、4℃で、16,000gで15分間遠心分離する。得られた上清を100μLを採取し、底部に空の受け皿Costarマイクロタイタープレートを備えた0.45μm Millipore MultiScreenフィルターマイクロタイタープレート中のSephadex G-50充填済みカラムにロードする。次いで、マイクロタイタープレートを、4℃で、800gで2分間遠心分離する。次いで、得られた濾液(タバコ葉の総可溶性タンパク質抽出物(TSP抽出物)と呼ぶ)は、定量分析の準備が整う。
一部の実施形態では、TSP抽出物の総可溶性タンパク質濃度は、Pierce Coomassie Plusタンパク質アッセイを使用して推定することができる。既知の濃度のBSAタンパク質標準を使用して、タンパク質定量化の標準曲線を作成することができる。例えば、2μLの各TSP抽出物を、Coomassie Plusタンパク質アッセイキットの200μLの発色試薬(CPPA試薬)に混合し、10分間インキュベートすることができる。次いで、制御ソフトウェアとしてSoftMax Proを使用して、SpectroMax-M2プレートリーダーを使用して、OD595を読み取ることによって発色反応を評価することができる。総可溶性タンパク質の濃度は、FECT及びTRBOを介して形質転換された植物からのTSP抽出物中で、それぞれ約0.788±0.20μg/μL又は約0.533±0.03μg/μLであり得、その結果を使用して、iELISAアッセイについて、TSP(%TSP)中の発現されたU1-アガトキシン-Ta1bバリアントペプチドの割合を計算することができる。
一部の実施形態では、間接ELISA(iELISA)アッセイを使用して、FECT及び/又はTRBO発現システムで一過的に形質転換されたタバコ葉におけるCRIP含有量を定量的に評価することができる。iELISAを使用してCRIPを定量化する例示的な実施例は、次の通りである:5μLの葉TSP抽出物を、Immulon 2HD 96ウェルプレートのウェル内で、95μLのCB2溶液(Immunochemistry Technologies)で希釈し、必要に応じて、段階希釈を行う。次いで、抽出試料から得られた葉タンパク質を、暗所で、室温で3時間ウェル壁をコーティングし、次いでその後、CB2溶液を除去する。各ウェルを、200μLのPBS(Gibco)で2回洗浄する。150μLのブロッキング溶液(5%の脱脂粉乳を含むPBS中のBlock BSA)を各ウェルに添加し、暗所で、室温で1時間インキュベートする。ブロッキング溶液を除去した後、ウェルのPBS洗浄、100μLのCRIPに対する一次抗体(カスタム抗体はProMab Biotechnologies,Inc.から市販されている;GenScript(登録商標);又は当業者に容易に入手可能な知識を使用して調製される)。ブロッキング溶液中に1:250希釈で希釈された抗体を各ウェルに添加し、暗所で、室温で1時間インキュベートする。一次抗体を除去し、各ウェルをPBSで4回洗浄する。100μLのHRPコンジュゲート二次抗体(すなわち、一次抗体を生成するために使用した宿主種に対する抗体;ブロッキング溶液中で1:1000希釈で使用される)を各ウェルに添加し、暗所で1時間室温でインキュベートする。二次抗体を除去し、ウェルを100μLのPBSで洗浄する。基質溶液(ABTSペルオキシダーゼ基質溶液Aと溶液Bとの1:1混合物、KPL)を各ウェルに添加し、十分な発色が明らかになるまで発色反応を進める。100μLのペルオキシダーゼ停止溶液を各ウェルに添加して、反応を停止させる。プレート内の各反応混合物の光吸光度を、SpectroMax-M2プレートリーダーを使用して405nmで読み取り、SoftMax Proを対照ソフトウェアとして使用する。純粋なCRIP試料の既知の濃度を段階希釈し、iELISAアッセイで上述したのと同じ方法で処理して、定量分析のための質量-吸光度標準曲線を生成することができる。発現されたCRIPは、FECT形質転換タバコからの葉TSP抽出物では約3.09±1.83ng/μLで、及びTRBO形質転換タバコからの葉TSP抽出物では約3.56±0.74ng/μLで、iELISAによって検出することができる。あるいは、発現されたCRIPは、FECT形質転換植物では、約0.40%の総可溶性タンパク質(%TSP)であり、TRBO形質転換植物では、約0.67%のTSPであり得る。
殺虫剤(IA)
殺虫剤(IA)は、少なくとも幾分の殺虫活性を有する化学物質、分子、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、毒素、有毒物質、毒、殺虫剤、農薬、有機化合物、無機化合物、原核生物又は真核生物(及び当該原核生物又は真核生物から生成される物質)である。
一部の実施形態では、IAは、殺虫活性を示す任意の1つ以上の化学物質、分子、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、毒、殺虫剤、農薬、有機化合物、無機化合物、又はそれらの組み合わせであり得る。
一部の実施形態では、IAは、殺虫活性を示す原核生物、真核生物、又はそれらから産生される物質であり得る。
一部の実施形態では、IAは、以下のカテゴリーから選択されるメンバーが含まれるが、これらに限定されない:RNAi、消化中毒剤、0型キチン生合成阻害剤、1型キチン生合成阻害剤、昆虫ウイルス、Azadirachta indicaインディカから単離された化合物、未知のMOAを有する化合物、細菌(及びそれ由来の産物)、真菌(及びそれ由来の産物)、線虫(及びそれ由来の産物)、植物抽出物、機械的破壊剤、蛍光増白剤、シリカナノスフィア、キチナーゼ、レクチン、膜侵襲複合体/パーフォリン(MACPF)タンパク質、植物ウイルスコートタンパク質-毒素融合体、グリカン結合ドメイン/毒素融合タンパク質、アセチルコリンエステラーゼ(AchE)阻害剤、GABA作動性クロライドチャネル遮断剤、ナトリウムチャネル調節剤、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAchR)競合調節剤、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAchR)アロステリック調節剤-部位I、グルタミン酸作動性クロライドチャネル(GluCl)アロステリック調節剤、幼若ホルモン模倣体、その他の非特異的(多部位)阻害剤、弦音器官TRPVチャネル調節剤、ダニ成長阻害剤、ミトコンドリアATPシンターゼの阻害剤、プロトン勾配の破壊を介した酸化的リン酸化の脱共役剤、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAchR)チャネル遮断剤、脱皮撹乱剤(双翅類)、エディソン受容体アゴニスト、オクトパミン受容体アゴニスト、ミトコンドリア複合体III電子伝達阻害剤、ミトコンドリア複合体I電子伝達阻害剤、電位依存性ナトリウムチャネル遮断剤、アセチルCoAカルボキシラーゼの阻害剤、ミトコンドリア複合体IV電子伝達阻害剤、ミトコンドリア複合体II電子伝達阻害剤、リアノジン受容体調節剤、弦音器官調節剤-未定義の標的部位、又はGABA作動性クロライドチャネルアロステリック調節剤。
一部の好ましい実施形態では、殺虫剤(IA)は、以下から選択され得る:RNAi:dsRNAなど(例えば、WupA dsRNA)、食毒:例えば、「パリグリーン」又はアセト亜ヒ酸銅、ヒ酸鉛、ヒ酸カルシウムなどのヒ素、フッ素化合物(例えば、フッ化ナトリウム)、ホウ酸塩(例えば、ホウ砂、ホウ酸、八ホウ酸二ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、メタホウ酸ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム十水和物、酸化ホウ素、炭化ホウ素、窒化ホウ素、三臭化ホウ素、三塩化ホウ素、又は三フッ化ホウ素)、キチン生合成阻害剤0型:例えば、ベンゾイル尿素(例えば、ビストリフルロン、クロルフルアズロン、ジフルベンズロン、フルシクロクスロン、フルフェノクスロン、ヘキサフルムロン、ルフェヌロン、Novaluron、ノビフルムロン、テフルベンズロン、又はトリフルムロン)、キチン生合成阻害剤1型:例えば、ブプロフェジン、昆虫ウイルス:例えば、Baculoviridaeウイルス(例えば、グラニュロウイルス(GV)及び核多角体病ウイルス(NPVS)などのベータバキュロウイルス、例えば、Cydia pomonella(GV)、Thaumatotibia leucotreta(GV)、Anticarsia gemmatalis(MNPV)、又はHelicoverpa armigera(NPV))、及びParvoviridaeウイルス(例えば、Junonia coenia densovirus(JcDNV))、Azadirachta indicaから単離された化合物:例えば、アザジラクチン、アザジラジオン、アザジラジオノリド、デアセチルゲデュニン(Deacetylgedunin)、デアセチルアザジラクチノール(Deacetylazadirachtinol)、デスフラノアザジラジオン、エポキシアザジラジオン、ゲデュニン(Gedunin)、マムーディン(Mahmoodin)、ニームフルイチンA、ニームフルイチンB、ニンボリド、ニンビン、ニモリシノール、酢酸オーチニン、サランニン、サランノール、アルファ-ニモラクトン、ベータ-ニモラクトン、2’,3’-ジヒドロサランニン、3-デアセチルサランニン、6-デアセチルニンビン、7-アセチル-16,17-デヒドロ-16-ヒドロキシネオトリキレノン、7-ベンゾイルニンボシノール、7-デアセチル-7-ベンゾイルエポキシアザジラジオン、7-デアセチル-7-ベンゾイルゲデュニン、7-デアセチル-17-エピニモリシノール、15-ヒドロキシアザジラジオン、17-エピ-17-ヒドロキシアザジラジオン、17-エピアザジラジオン、20,21,22,23-テトラヒドロ-23-オキソアザジロン、22,23-ジヒドロニモシノール、又は28-デオキソニンボリド、MOAが不明な化合物:例えば、ベンゾキシメート、ブロモプロピレート、キノメチオネート、ジコホル、石灰硫黄合剤、ピリダリル、又は硫黄、細菌:発酵固形物、胞子、毒素、及び/又はそれ由来の産物を含む、例えば、Brevibacillus brevis;Brevibacillus brevis毒素(例えば、TIC4670 ベータ膜孔形成タンパク質)、Alcaligenes faecalis;Alcaligenes faecalis毒素(例えば、AfIP-1A/1B)、Pseudomonas chlororaphis;Pseudomonas chlororaphis毒素(例えば、PIP-72Aa)、Yersinia entomophaga(例えば、Yersinia entomophaga MH96)、Yersinia nurmii、Photorhabdus luminescens;Photorhabdus luminescens毒素複合体(Tca)、Burkholderia spp、又はWolbachie pipientis、Bacillus thuringiensis(例えば、Bacillus thuringiensis var.israelensis、Bacillus thuringiensis var.aizawai、Bacillus thuringiensis var.kurstaki、Bacillus thuringiensis var.tenebrionensis、又はBacillus sphaericus)、Bacillus thuringiensis毒素、例えば、傍胞子結晶性毒素(例えば、Cry毒素、Cyt毒素などのδ-エンドトキシン)、又は分泌タンパク質(例えば、植物性殺虫タンパク質(Vip)、分泌型殺虫タンパク質(Sip)、Bin様ファミリータンパク質、又はETX_MTX2ファミリータンパク質)、菌類:その部分及び/又は産物を含む、例えば、Ascomycete真菌、例えば、Cordycipitaceae科の真菌(例えば、Beauveria bassiana若しくはCordyceps bassiana、及び/又はそれ由来の毒素)、Metarhizium anisopliae(例えば、F52株)及びそれ由来の産物、又はPaecilomyces fumosoroseus(例えば、Apopka97株)及びそれ由来の産物、又は線虫Steinernema glaseri及びそれ由来の産物、線虫:例えば、Steinernema glaseri又はHeterorhabditis bacteriophora、植物抽出物:合成物及び/又は抽出物若しくは未精製油を含む、例えば、Dysphania ambrosioides又はアリタソウ抽出物、グリセロールとの脂肪酸モノエステル又はプロパンジオールニーム油、機械的破壊物質:例えば、珪藻土、鉱物、及び/又は合成/天然繊維、蛍光増白剤:例えば、Calcofluor White M2R、シリカナノスフェア:例えば、NanoXactシリカナノスフェア、キチナーゼ:例えば、Streptomyces griseus由来のキチナーゼ、レクチン:例えば、Galanthus nivalis凝集素(GNA)、Sambucus nigraレクチン(SNA)、Maackia amurensis-II(MAL-II)、Erythrina cristagalliレクチン(ECL)、Ricinus communis凝集素-I(RCA)、ピーナッツ凝集素(PNA)、コムギ胚芽凝集素(WGA)、Griffonia simplicifolia-II(GSL-II)、Con A、Lens culinaris凝集素(LCA)、マンノース結合レクチン(MBL)、BanLec、ガレクチン、Phaseolus vulgaris白血球凝集素(PHA-L)、Phaseolus vulgaris赤血球凝集素(PHA-E)、又はチョウセンアサガオレクチン(DSL)、膜侵襲複合体/パーフォリン(MACPF)タンパク質:例えば、シダから分離されたMACPF、又はGNIP1Aa分離型クロモバクテリウム、植物ウイルスコートタンパク質-毒素融合体:例えば、エンドウマメエネーションモザイクウイルス(PEMV)融合体、又はPOC抗アブラムシ、グリカン結合ドメイン/毒素融合タンパク質:例えば、Yersinia entomophaga MH96由来のキチナーゼグリカン結合ドメイン、スノードロップレクチン由来のグリカン結合ドメイン、植物ルテオウイルス由来のグリカン結合ドメイン、及び/又は昆虫Parvoviridae又はBaculoviridaeのウイルス由来のグリカン結合ドメイン。
更に他の実施形態では、殺虫剤(IA)は、以下の群から選択され得る:アセチルコリンエステラーゼ(AchE)阻害剤:例えば、カルバメート(例えば、アラニカルブ、アルジカルブ、ベンジオカルブ、ベンフラカルブ、ブトカルボキシム、ブトキシカルボキシム、カルバリル、カルボフラン、カルボスルファン、エチオフェンカルブ、フェノブカルブ、ホルメタネート、フラチオカルブ、イソプロカルブ、メチオカルブ、メソミル、メトルカルブ、オキサミル、ピリミカルブ、プロポクスル、チオジカルブ、チオファノックス、トリアザメート、トリメタカルブ、XMC、及びキシリルカルブ)、及び有機リン酸塩(例えば、アセフェート、アザメチホス、アジンホスエチル、アジンホスメチル、カズサホス、クロルエトキシホス、クロルフェンビンホス、クロルメホス、クロルピリホス、クロルピリホスメチル、クマホス、シアノホス、デメトン-s-メチル、ダイアジノン、ジクロルボス/ddvp、ジクロトホス、ジメトエート、ジメチルビンホス、ジスルホトン、エペリゾン、エチオン、エトプロホス、ファムフール、フェナミホス、フェニトロチオン、フェンチオン、ホスチアゼート、ヘプテノホス、イソフェンホス、イソキサチオン、マラチオン、メカルバム、メタミドホス、メチダチオン、メビンホス、モノクロトホス、ナレド、オメトエート、オキシデメトンメチル、パラチオン、パラチオンメチル、フェントエート、ホサロン、ホレート、ホスメット、ホスファミドン、ホキシム、プロフェノホス、プロペテタンホス、プロチオホス、ピラクロホス、ピリダフェンチオン、キナルホス、スルホテプ、テブピリムホス、テメホス、テルブホス、テトラクロルビンホス、チオメトン、トリアゾホス、トリクロルホン、バミドチオン、ピリミホスメチル、イミシアホス、及びイソプロピルo-(メトキシアミノチオホスホリル)サリチレート)、GABA依存性クロライドチャネル遮断薬:例えば、シクロジエン有機塩素系化合物(例えば、クロルデン及びエンドスルファン)、及びフェニルピラゾール(フィプロール)(例えば、エチプロール及びフィプロニル)、ナトリウムチャネル調節剤:例えば、ピレスロイド及びピレトリン(例えば、アクリナトリン、アレトリン、d-cis-transアレトリン、d-transアレトリン、ビフェントリン、ビオアレトリン、ビオアレトリンs-シクロペンテニル、ビオレスメトリン、シクロプロトリン、シフルトリン、β-シフルトリン、シハロトリン、λ-シハロトリン、γ-シハロトリン、シペルメトリン、α-シペルメトリン、β-シペルメトリン、θ-シペルメトリン、ζ-シペルメトリン、シフェノトリン[(1r)-トランス異性体]、デルタメトリン、エンペントリン[(ez)-(1r)-異性体]、エスフェンバレレート、エトフェンプロックス、フェンプロパトリン、フェンバレレート、フルシトリネート、フルメトリン、τ-フルバリネート、カダトリン、ピレトリン(ジョチュウギク)、ハルフェンプロックス、フェノトリン[(1r)-trans-異性体]、プラレトリン、レスメトリン、シラフルオフェン、テフルトリン、テトラメトリン、テトラメトリン[(1r)-異性体]、トラロメトリン、トランスフルトリン、及びペルメトリン)、DDT、又はメトキシクロル、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAchR)競合調節剤、例えば、ネオニコチノイド(例えば、アセタミプリド、クロチアニジン、ジノテフラン、イミダクロプリド、ニテンピラム、チアクロプリド、チアメトキサム)、ニコチン、スルホキシミン(例えば、スルホキサフロール)、ブテノリド(例えば、フルピラジフロン)、及びメソイオン(例えば、トリフルメゾピリム)、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAchR)アロステリック調節剤-部位I:例えば、スピノシン(例えば、スピネトラム及びスピノサド)、グルタミン酸依存性クロライドチャネル(GluCl)アロステリック調節剤:例えば、アベルメクチン及びミルベマイシン(例えば、アバメクチン、安息香酸エマメクチン、レピメクチン、及びミルベメクチン)、幼若ホルモン模倣体:例えば、幼若ホルモン類似体(例えば、ヒドロプレン、キノプレン、及びメトプレン)、フェノキシカルブ、及びピリプロキシフェン、その他の非特異的(マルチサイト)阻害剤:例えば、ハロゲン化アルキル(例えば、臭化メチル及び他のハロゲン化アルキル)、クロルピクリン、吐酒石、及びイソチオシアン酸メチル発生剤(例えば、ダゾメット及びメタム)、弦音器官のTRPVチャネル調節剤:例えば、ピリジンアゾメチン誘導体(例えば、ピメトロジン及びピリフルキナゾン)、及びピロペン(例えば、アフィドピロペン)、ダニ成長阻害剤:例えば、クロフェンテジン、ジフロビダジン、ヘキシチアゾクス、及びエトキサゾール、ミトコンドリアATPシンターゼの阻害剤:例えば、ジアフェンチウロン、有機スズ殺ダニ剤(例えば、アゾシクロチン、シヘキサチン、フェンブタチンオキシド)、プロパルギット、及びテトラジホン、プロトン勾配の破壊による酸化的リン酸化の脱共役剤:例えば、ピロール、ジニトロフェノール、及びスルフルラミド(例えば、クロルフェナピル、DNOC、及びスルフルラミド)、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAchR)チャネル遮断剤:例えば、ネライストキシン類似体(例えば、ベンスルタップ、カルタップ塩酸塩、チオシクラム、チオスルタップナトリウム)、脱皮撹乱剤(Dipteran):例えば、シロマジン、エクジソン受容体アゴニスト:例えば、ジアシルヒドラジン(例えば、クロマフェノジド、ハロフェノジド、メトキシフェノジド、及びテブフェノジド)、オクトパミン受容体アゴニスト:例えば、アミトラズ、ミトコンドリア複合体III電子伝達阻害剤:例えば、ヒドラメチルノン、アセキノシル、フルアクリピリム、及びビフェナゼート、ミトコンドリア複合体I電子伝達阻害剤:例えば、METI殺ダニ剤及び殺虫剤(例えば、フェナザキン、フェンピロキシメート、ピリミジフェン、ピリダベン、テブフェンピラド、及びトルフェンピラド)、及びロテノン、電位依存性ナトリウムチャネル遮断剤:例えば、オキサジアジン(例えば、インドキサカルブ)、及びセミカルバゾン(例えば、メタフルミゾン)、アセチルCoAカルボキシラーゼの阻害剤:例えば、テトロン酸及びテトラム酸誘導体(例えば、スピロジクロフェン、スピロメシフェン、スピロピジオン、及びスピロテトラマト)、ミトコンドリア複合体IV電子伝達阻害剤:例えば、リン化物(例えば、リン化アルミニウム、リン化カルシウム、ホスフィン、リン化亜鉛)、及びシアン化物(例えば、シアン化カルシウム、シアン化カリウム、及びシアン化ナトリウム)、ミトコンドリア複合体II電子伝達阻害剤:例えば、β-ケトニトリル誘導体(例えば、シエノピラフェン及びシフルメトフェン)、及びカルボキシアニリド(例えば、ピフルブミド)、リアノジン受容体調節剤:例えば、ジアミン(例えば、クロラントラニリプロール、シアントラニリプロール、シクラニリプロール、フルベンジアミド、及びテトラニリプロール)、弦音器官調節剤-未定義の標的部位:例えば、フロニカミド、又はGABA依存性クロライドチャネルアロステリック調節剤:例えば、メタ-ジアミド及びイソキサゾリン(例えば、ブロフラニリド、フルキサメタミド)。
一部の実施形態では、IAは、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、遺伝子、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、又は酵素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、植物において発現され得る。例えば、一部の実施形態では、植物、植物組織、植物細胞、植物種子、又はその植物部分で発現するように動作可能なIAは、以下のうちの1つ以上を含み得る:ヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、及び/若しくは生物(Bacillus thuringiensis var.israelensis、Bacillus thuringiensis var.aizawai、Bacillus thuringiensis var.kurstaki、Bacillus thuringiensis var.tenebrionensis、及び/若しくはBacillus sphaericusとして知られているもの)から単離されたタンパク質、キチナーゼ、Galanthus nivalis凝集素、WupA dsRNA、TIC4670 β膜孔形成タンパク質、AfIP-1A/1B、PIP-72Aa、ルテオウイルスCP-毒素融合体;Yersinia entomophaga MH96由来のキチナーゼグリカン結合ドメイン、毒素に融合されたスノードロップレクチン由来のグリカン結合ドメイン、及び毒素に融合された昆虫Parvoviridae又はBaculoviridaeコートタンパク質ウイルス由来のグリカン結合ドメイン。
IA:真菌及び真菌毒素
昆虫病原性真菌は、昆虫及び/又は無脊椎動物の寄生虫及び/又は疾患として作用し得る真菌である。その名前が示すように、昆虫病原性真菌は、膜によって明確に区別される核を有する真核生物である。昆虫病原性真菌は、酵母などの単細胞生物(すなわち、単細胞)であり得る。あるいは、それらは、菌糸体を形成する、菌糸として知られる糸状単位を介して多細胞的に形成することができる。菌糸は、横壁によって隔てられた単核又は多核セグメントによって形成される。
菌類の繁殖単位は、胞子又は分生子として知られている。昆虫病原性真菌に関するため、標的昆虫は、通常、これらの生殖単位によって感染する。一般に、昆虫病原性真菌による昆虫の感染は、通常、以下の3つのステップに分類される:(1)昆虫のクチクラでの接着及び胞子発芽、(2)昆虫の血体腔内への侵入、並びに(3)真菌の発生(一般的に、昆虫の死で終わる)。Tanada,Y.,& Kaya,H.K.(1993),Insect Pathology.San Diego.Academic Pressを参照されたい。
簡潔に、病原性の一般的な経路は、以下のように記載される:昆虫病原性真菌がクチクラを貫通すると、それが血体腔に向かい、そこで、菌糸が、菌糸体若しくは出芽胞子及び/又はプロトプラストに変わる。これらはその後、昆虫の体のあらゆる部分に拡散し、最終的には内臓を破壊する。昆虫の死は、栄養不足、昆虫組織の侵入及び破壊、並びに真菌によって産生される有毒物質による代謝の不均衡によって起こる。Gillespie,A.T.and Claydon,N.The use of entomogenous fungi for pest control and the role of toxins in pathogenesis.(1989),Pestic.Sci.,27:203-215を参照されたい。
昆虫の体腔内で、感染の成功は、真菌が急速に成長し、昆虫の内部にある障壁を貫通し、昆虫が産生し得る有毒物質に抵抗する遺伝的潜在能力とその防御メカニズムとに依存するであろう。昆虫の主要な防御メカニズムは、異物の封入及びメラニン化である。
昆虫の免疫障壁が克服されると、真菌は腐生的に増殖し、菌糸塊を形成し、血体腔内で生殖構造を生成する。胞子及び無菌の菌糸は、適切な湿度及び温度の条件下で昆虫から現れる。胞子の生成、放出、分散、生存、及び発芽のプロセスは、環境条件に依存することになる。昆虫の死骸が生み出す膨大な数の胞子は、その大部分が全く生き残れない可能性が高いことを部分的に補っている。A.E.Hajek & R.J St.Leger,Interactions Between Fungal Pathogens and Insect Hosts,Annual Review of Entomology 1994 39:1,293-322を参照されたい。
一部の実施形態では、IAは、昆虫病原性真菌、又はそれに由来する産物、例えば、菌糸、胞子、又は生殖構造であり得る。
一部の実施形態では、IAは、昆虫病原性真菌から産生されるペプチド、タンパク質、又は毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Ascomycete真菌毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Cordycipitaceae科真菌毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Akanthomyces毒素、Ascopolyporus毒素、Beauveria毒素、Beejasamuha毒素、Cordyceps毒素、Coremiopsis毒素、Engyodontium毒素、Gibellula毒素、Hyperdermium毒素、Insecticola毒素、Isaria毒素、Lecanicillium毒素、Microhilum毒素、Phytocordyceps毒素、Pseudogibellula毒素、Rotiferophthora毒素、Simplicillium毒素、又はTorrubiella毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、以下の属から選択される生物又はその毒素であり得る:Beauveria、Metarhizium、Paecilomyces、Lecanicillium、Nomuraea、Isaria、Hirsutella、Sorosporella、Aspergillus、Cordiceps、Entomophthora、Zoophthora、Pandora、Entomophaga、Conidiobolus、及びBasidiobolus。
一部の実施形態では、IAは、Beauveria毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Beauveria alba毒素、Beauveria amorpha毒素、Beauveria arenaria毒素、Beauveria asiatica毒素、Beauveria australis毒素、Beauveria bassiana毒素、Cordyceps bassiana毒素、Beauveria brongniartii毒素、Beauveria brumptii毒素、Beauveria caledonica毒素、Beauveria chiromensis毒素、Beauveria coccorum毒素、Beauveria cretacea毒素、Beauveria cylindrospora毒素、Beauveria delacroixii毒素、Beauveria densa毒素、Beauveria dependens毒素、Beauveria doryphorae毒素、Beauveria effusa毒素、Beauveria epigaea毒素、Beauveria felina毒素、Beauveria geodes毒素、Beauveria globulifera毒素、Beauveria heimii毒素、Beauveria hoplocheli毒素、Beauveria kipukae毒素、Beauveria laxa毒素、Beauveria malawiensis毒素、Beauveria medogensis毒素、Beauveria melolonthae毒素、Beauveria nubicola毒素、Beauveria oryzae毒素、Beauveria paradoxa毒素、Beauveria paranensis毒素、Beauveria parasitica毒素、Beauveria petelotii毒素、Beauveria pseudobassiana毒素、Beauveria rileyi毒素、Beauveria rubra毒素、Beauveria shiotae毒素、Beauveria sobolifera毒素、Beauveria spicata毒素、Beauveria stephanoderis毒素、Beauveria sulfurescens毒素、Beauveria sungii毒素、Beauveria tenella毒素、Beauveria tundrensis毒素、Beauveria velata毒素、Beauveria varroae毒素、Beauveria vermiconia毒素、Beauveria vexans毒素、Beauveria viannai毒素、又はBeauveria virella毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Beauveria bassiana毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、ビューベリシンであり得る。
ビューベリシンは、様々なFusarium種によって産生される真菌毒素であり、並びに真菌Beauveria bassianaによっても産生される。ビューベリシンは、環状ペプチドであり、昆虫、並びにヒト及びマウス細胞株の両方に毒性効果を有する。ビューベリシンの活性は、化合物のイオノフォア特性に起因する。ビューベリシンは、アルカリ金属カチオンと複合体を形成することができ、細胞膜を横断するイオン輸送に影響を与える。更に、ビューベリシンは、コレステロールアセチルトランスフェラーゼの最も強力な阻害剤の1つであることが報告されている。ビューベリシンはまた、アポトーシスによく似た種類の細胞死を誘発することも示されている。間接的な証拠は、ビューベリシンが他のFusarium毒素と協調して作用し、追加の毒性効果を引き起こすことを更に示している。
一部の実施形態では、IAは、化学式C4557を有するビューベリシンであり得る。
一部の実施形態では、IAは、化学式C4659を有する「ビューベリシンA」毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、化学式C4761を有する「ビューベリシンB」毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Beauveria bassiana株ANT-03胞子であり得る。
昆虫を制御及び/又は阻害するための真菌(fungi)及び真菌(fungal)毒素を産生、作製、及び使用する例示的な方法は、「真菌株Beauveria種MTCC5184及びそれ由来の酵素を調製するためのプロセス」と題する米国特許第9,217,140号、「バッタ科の昆虫に対する真菌殺虫剤」と題する米国特許第6,261,553号、「バイオ農薬及び害虫制御のための方法」と題する米国特許第8,709,399号、「ピーカンゾウムシなどの昆虫の制御のための方法及び材料」と題する米国特許第7,241,612号、及び「Beauveria bassianaによるVarroaダニのバイオ制御」と題する米国特許第8,226,938号に記載されている(これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
IA:レクチン
レクチンは、遊離炭水化物及び/又は細胞膜の複合糖質を認識し、特定の方法で可逆的に結合することができるポリペプチドである。レクチンは、グリカン結合タンパク質(GBP)の2つのグループのうちの1つであり、もう一方は、硫酸化グリコサミノグリカン(GAG)結合タンパク質である。動物界、植物界、真菌界、原生生物界、古細菌界、細菌界、及びウイルス界に見出されるレクチンは、由来生物に応じて非常に異なる生物学的機能を有する。例えば、哺乳動物では、内因性レクチンは、細胞-細胞外マトリックス(ECM)、配偶子受精、細胞と細胞の自己認識、胚発生、細胞増殖、分化、シグナル伝達、接着、及び遊走、アポトーシス、宿主-病原体相互作用、免疫調節及び炎症、糖タンパク質フォールディング及びルーティング、有糸分裂誘導、並びに恒常性に関与する。
典型的には、レクチンは、細胞膜又は遊離炭水化物(例えば、多糖類、糖タンパク質、又は糖脂質)に結合している炭水化物に対して高い特異性で可逆的に結合する能力を有する少なくとも1つの非触媒ドメインを有する。このドメインは、炭水化物認識ドメイン(CRD)として知られている。一部の実施形態では、レクチンの例としては、以下が挙げられる:タチナタマメから単離されるコンカナバリンA(ConA)。ConAは、グルコース、マンノース、並びにマンノース及び/又はグルコースのグリコシドに結合する。コムギ胚芽凝集素(WGA)は、N-アセチルグルコサミン及びそのグリコシドに結合する別のレクチンである。アカインゲンマメレクチンは、N-アセチルグルコサミンに結合し、ピーナッツ凝集素は、ガラクトース及びガラクトシドに結合する。レクチンの構造及び生物学の例示的な概説は、Essentials of Glycobiology,3rd edition.Varki A,Cummings RD,Esko JD,et al.,editors.Cold Spring Harbor(NY):Cold Spring Harbor Laboratory Press;2015-2017に見出すことができる。
レクチンは、その多様な役割及び構造により、いくつかの基準に従って分類することができ、例えば、レクチンは、細胞局在に基づいて分類することができる(例えば、細胞外レクチン、細胞内小胞体(ER)レクチン、ゴルジレクチン、細胞質レクチン、膜結合レクチン)。Lakhtin et al.,Lectins of living organisms.The overview.Anaerobe.2011 Dec;17(6):452-5を参照されたい(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
また、構造又は配列の類似性を使用して、レクチンを分類することもできる(例えば、βプリズムレクチン(B型)、カルシウム依存性レクチン(C型)、フィコリン-フィブリノーゲン/コラーゲンドメインを有するレクチン(F型)、ニンニク及びスノードロップレクチン(G型)、ヒアルロナン結合タンパク質又はヒアルアドヘリン(H型)、免疫グロブリンスーパーファミリーレクチン(I型)、ジョコブ及び関連レクチン(J型)、豆類種子レクチン(L型)、αマンノシダーゼ関連レクチン(M型)、ヌクレオチドホスホヒドロラーゼレクチン(N型)、リシンレクチン(R型)、Tachypleus tridentatusレクチン(T型)、コムギ胚芽凝集素レクチン(W型)、ツメガエル卵レクチン(X型))。Kumar et al.,Biological role of lectins:A review.J.Orofac.Sci.2012;4:20-25を参照されたい(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
あるいは、炭水化物特異性を使用してレクチンを分類することもできる。例えば、動物及び植物に基づくもの(例えば、d-マンノース(d-グルコース)結合レクチン、2-アセトアミド-2-デオキシ-グルコース結合レクチン、2-アセトアミド-2-デオキシ-ガラクトース結合レクチン、d-ガラクトース結合レクチン、l-フコース結合レクチン、他のレクチン)、又は全ての生物に基づくもの(例えば、グルコース/マンノース結合レクチン、ガラクトース及びN-アセチル-d-ガラクトサミン結合レクチン、l-フコース結合レクチン、シアル酸結合レクチン)。Goldstein I.J.,& Hayes C.E.The Lectins:Carbohydrate-binding proteins of plants and animals.Adv.Carbohydr.Chem.Biochem.1978;35:127-340;and Kumar et al.,Biological role of lectins:A review.J.Orofac.Sci.2012;4:20-25を参照されたい(それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
レクチンの結合ドメインを特徴付けることは、関連する接触及びタンパク質動態のX線共結晶学、NMR、及びMSマッピング、標識されたハプテンに対する平衡透析、濾過(例えば、膜)による平衡結合、遠心分離(可溶化受容体)を伴うPEGによって停止される平衡結合、多価リガンドの使用、多価受容体プローブの使用、Biacoreリアルタイム動態、並びに/又は細胞接着の速度、例えば、固定化グリカン又は受容体への剪断下での流れを評価することによって達成することができる。
レクチン配列、3D X線構造、及びレクチンに関する参考文献は、ウェブサイト:https://www.unilectin.eu/unilectin3D/から入手することができる。Bonnardel et al.,UniLectin3D,a database of carbohydrate binding proteins with curated information on 3D structures and interacting ligands.Nucleic Acids Res.2019 Jan 8;47(D1):D1236-D1244を参照されたい(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
一部の実施形態では、IAは、レクチンであり得る。
一部の実施形態では、IAは、レクチンであり得、当該レクチンは、CRIPに融合されておらず、CRIPに動作可能に連結されてもいない。
一部の実施形態では、IAは、以下のうちの1つであり得る:Galanthus nivalis凝集素(GNA)、Sambucus nigraレクチン(SNA)、Maackia amurensis-II(MAL-II)、Erythrina cristagalliレクチン(ECL)、Ricinus communis凝集素-I(RCA)、ピーナッツ凝集素(PNA)、コムギ胚芽凝集素(WGA)、Griffonia simplicifolia-II(GSL-II)、Con A、Lens culinaris凝集素(LCA)、マンノース結合レクチン(MBL)、BanLec、ガレクチン、Phaseolus vulgaris白血球凝集素(PHA-L)、Phaseolus vulgaris赤血球凝集素(PHA-E)、及びDatura stramoniumレクチン(DSL)。
一部の実施形態では、IAは、表3に列挙されるレクチンのうちの1つ以上であり得る。例えば、一部の実施形態では、レクチンは、配列番号35、595~615のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列又はそのバリアントと、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有することができる。
Figure 2023524083000023
Figure 2023524083000024
Figure 2023524083000025
Figure 2023524083000026
Figure 2023524083000027
Figure 2023524083000028
一部の実施形態では、IAは、配列番号35、595~615のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、少なくとも99.9%、又は100%のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
IA:キチナーゼ
一部の実施形態では、IAは、キチナーゼであり得る。
一部の実施形態では、IAは、Trichoderma viride由来のキチナーゼであり得る。
一部の実施形態では、IAは、配列番号620に示されるアミノ酸配列を有するキチナーゼであり得る。
一部の実施形態では、IAは、キチナーゼであり得、配列番号620のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、少なくとも99.9%、又は100%のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
IA:Azadirachta indica化合物
Azadirachta indica(ニーム、ニムツリー、インディアンライラックとしても知られている)は、マホガニーMeliaceae科の樹木である。インド亜大陸原産のAzadirachta indicaは、典型的には、熱帯及び亜熱帯地域で生育する。
Azadirachta indicaは何世紀にもわたって農薬の供給源として使用されてきた。様々なニーム種子抽出物、特に親水性テトラノルトリテルペノイドであるアザジラクチンを含有する種子抽出物は、様々な目に属する多数の昆虫種の摂食行動、変態(昆虫成長調節[IGR]効果)、繁殖力、及び適合性に影響を与えることが知られている。
アザジラクチンは、ニーム木(Azadirachta indica)から抽出されたリミノイドクラスのテトラノルトリテルペノイド植物性殺虫剤である。これは、高度に酸化されたテトラノルトリテルペノイドであり、エノールエーテル、アセタール、ヘミアセタール、及び四置換オキシラン、並びに様々なカルボン酸エステルを含む、たくさんの酸素官能基を有する。
アザジラクチンは、昆虫ホルモンである「エクジソン」と構造的に類似している。これらのホルモンは、典型的には、昆虫が幼虫から蛹、蛹から成虫へ移行するときの変態の過程を制御する。アザジラクチンは、主に、「エクジソン遮断剤」として作用する。昆虫の重要なホルモンの生成及び放出を遮断する。そのため、昆虫は脱皮することができない。アザジラクチンはまた、昆虫の交尾及び性的コミュニケーションを妨げ、幼虫及び成虫を撃退し、雌が卵を産むのを抑止し、成虫を不妊化し、摂食を抑止することが知られている。
一部の実施形態では、IAは、Azadirachta indica化合物であり得る。
一部の実施形態では、IAは、アザジラクチン、アザジラジオン、アザジラジオノリド、デアセチルゲデュニン、デアセチルアザジラクチノール、デスフラノアザジラジオン、エポキシアザジラジオン、ゲデュニン、マムーディン、ニームフルイチンA、ニームフルイチンB、ニンボリド、ニンビン、ニモリシノール、酢酸オーチニン、サランニン、サランノール、アルファ-ニモラクトン、ベータ-ニモラクトン、2’,3’-ジヒドロサランニン、3-デアセチルサランニン、6-デアセチルニンビン、7-アセチル-16,17-デヒドロ-16-ヒドロキシネオトリキレノン、7-ベンゾイルニンボシノール、7-デアセチル-7-ベンゾイルエポキシアザジラジオン、7-デアセチル-7-ベンゾイルゲデュニン、7-デアセチル-17-エピニモリシノール、15-ヒドロキシアザジラジオン、17-エピ-17-ヒドロキシアザジラジオン、17-エピアザジラジオン、20,21,22,23-テトラヒドロ-23-オキソアザジロン、22,23-ジヒドロニモシノール、又は28-デオキソニンボリドであり得る。
一部の実施形態では、IAは、アザジラクチンであり得る。
一部の実施形態では、IAは、化学式:C354416を有するアザジラクチンであり得る。
アザジラクチンを抽出する例示的な方法は、「アザジラクチン抽出プロセス」と題する米国特許第6,312,738号に開示されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
ニーム種子材料からアザジラクチン濃縮物を産生する例示的な方法は、「ニーム種子材料からアザジラクチン濃縮物を産生する方法」と題するPCT出願第WO1995/002962A1号に開示されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
アザジラクチンを精製する例示的な方法は、「ニーム種子から粉末で精製されたアザジラクチンを調製するためのプロセス及びアザジラクチンを含有する安定した水性組成物」と題する米国特許第5,736,145号に開示されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
アザジラクチンを含む組成物を生成及び保存する例示的な方法は、「アザジラクチンを含有する保存安定性農薬製剤」と題する米国特許第6,811,790号に開示されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
アザジラクチンを作製及び使用する例示的な方法は、「農薬、及び多種多様な害虫を制御する方法」と題する米国特許第9,635,858号に開示されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
例示的なアザジラクチン抽出物及び組成物は、「殺虫性水素化ニーム抽出物」と題する米国特許第4,943,434号、「疎水性抽出ニーム油-新規の殺虫剤」と題する米国特許第5,411,736号、及び「ニーム油及びニームワックス画分に由来する殺虫性組成物」と題する米国特許第5,372,817号に開示されている(それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
IA:ホウ素化合物
一部の実施形態では、IAは、ホウ素化合物であり得る。
一部の実施形態では、IAは、ホウ酸、テトラヒドロキシドジボロン、ホウ酸塩、酸化ホウ素、ボラン、又は前述のいずれかの任意の組み合わせであり得る。
一部の実施形態では、IAは、ボラン及び/又はホウ酸エステルであり得、水性媒体中でホウ素の酸化物を生成する。
一部の実施形態では、ホウ素化合物は、ホウ酸、ホウ酸塩(例えば、塩基性ホウ酸ナトリウム(ホウ砂))、又はホウ酸とホウ酸塩との混合物である。
一部の実施形態では、IAは、ホウ酸塩であり得る。好適なホウ酸塩としては、過ホウ酸塩、メタホウ酸塩、四ホウ酸塩、八ホウ酸塩、ホウ酸エステル、及び前述のいずれかの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。好ましいホウ酸塩としては、金属ホウ酸塩(例えば、ホウ酸ナトリウム、ホウ酸亜鉛、及びホウ酸カリウム)、例えば、四ホウ酸二ナトリウム十水和物、八ホウ酸二ナトリウム四水和物、メタホウ酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム一水和物、八ホウ酸二ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム五水和物、四ホウ酸ナトリウム、メタホウ酸銅、ホウ酸亜鉛、メタホウ酸バリウム、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
一部の実施形態では、IAは、ホウ砂(例えば、ホウ酸ナトリウム十水和物-10mol Na.10HO又はホウ酸ナトリウム五水和物-5mol Na.5HO)であり得る。
他の実施形態では、IAは、ホウ素化合物であり得、ホウ砂の代替物として、有効量で利用され得る(又はホウ砂若しくは互いに組み合わせて、有効量で利用され得る)。例えば、一部の実施形態では、IAは、無水ホウ砂(Na)、四ホウ酸アンモニウム((NH.4HO)、五ホウ酸アンモニウム((NH1016.8HO)、五ホウ酸カリウム(K1016.8HO)、四ホウ酸カリウム(K.4HO)、メタホウ酸ナトリウム((8mol)Na.8HO)、メタホウ酸ナトリウム((4mol)Na.4HO)、四ホウ酸二ナトリウム十水和物(Na.10HO)、四ホウ酸二ナトリウム五水和物(Na.5HO)、八ホウ酸二ナトリウム四水和物(Na13.4HO)、又はそれらの組み合わせであり得る。
一部の実施形態では、IAは、ホウ素化合物であり得、ホウ砂、ホウ酸、八ホウ酸二ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、メタホウ酸ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム十水和物、酸化ホウ素、炭化ホウ素、窒化ホウ素、三臭化ホウ素、三塩化ホウ素、及び三フッ化ホウ素からなる群から選択される。
一部の実施形態では、IAは、ホウ酸であり得る。
一部の実施形態では、IAは、HBOの化学式を有するホウ酸であり得る。
ホウ素化合物及び/又はホウ素含有化合物の生成及び使用を記載する例示的な方法は、「殺虫剤」と題する米国特許第490,688号、「防虫剤」と題する米国特許第1,029,203号、「ローチ錠剤の組成物及び調製方法」と題する米国特許第1,636,688号、「シロアリベイト組成物」と題する米国特許第4,363,798号、「害虫駆除組成物」と題する米国特許第4,959,221号、「害虫制御組成物」と題する米国特許第5,871,780号、及び「二重作用害虫制御製剤及び方法」と題する米国特許第8,778,372号に開示されている(それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
IA:ウイルス
一部の実施形態では、IAは、昆虫種と接触した場合に殺虫活性を有するウイルスであり得る。
一部の実施形態では、IAは、DNAウイルス又はRNAウイルスであり得る。
一部の実施形態では、IAは、アスコウイルス、バキュロウイルス、デンソウイルス、エントモポックスウイルス、ヒトロサウイルス、イリドウイルス、ヌディウイルス、ポリドナウイルス、ジシストロウイルス、イフラウイルス、ノダウイルス、テトラウイルス、又はサイポウイルスであり得る。
Ascoviridae科ウイルス
一部の実施形態では、IAは、Ascoviridae科由来のウイルスであり得る。例えば、一部の実施形態では、IAは、アスコウイルス(例えば、Heliothis virescensアスコウイルス3a、Heliothis virescensアスコウイルス3、Heliothis virescensアスコウイルス3b、Heliothis virescensアスコウイルス3c、Heliothis virescensアスコウイルス3d、Heliothis virescensアスコウイルス3e、Heliothis virescensアスコウイルス3f、Heliothis virescensアスコウイルス3g、Heliothis virescensアスコウイルス3h、Heliothis virescensアスコウイルス3j、Spodoptera frugiperdaアスコウイルス1a、Trichoplusia niアスコウイルス2a、Heliothis virescensアスコウイルス3i、Spodopteraアスコウイルス、Spodoptera exiguaアスコウイルス5a、Spodoptera frugiperdaアスコウイルス1c、Spodoptera frugiperdaアスコウイルス1d、Trichoplusia niアスコウイルス2b、Trichoplusia niアスコウイルス2c、Trichoplusia niアスコウイルス2d、又はTrichoplusia niアスコウイルス6b)であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Ascoviridae科由来のウイルスであり得る。例えば、一部の実施形態では、IAは、ツアーズウイルス、例えば、Diadromus pulchellusツアーズウイルス、Diadromus pulchellusアスコウイルス4a、又はDasineura jujubifoliaツアーズウイルス2aであり得る。
Densovirinae科ウイルス
一部の実施形態では、IAは、Densovirinae科由来のウイルスであり得る。例えば、一部の実施形態では、IAは、アンビデンソウイルスであり得る。
一部の実施形態では、IAは、以下の群から選択されるアンビデンソウイルスであり得る:ヒトデアンビデンソウイルス1、ヒトデ関連デンソウイルス、Blattodeanアンビデンソウイルス1、Periplaneta fuliginosaデンソウイルス、Periplaneta fuliginosaデンソウイルスGuo/2000、Blattodeanアンビデンソウイルス2、Blattella germanicaデンソウイルス1、Decapodアンビデンソウイルス1、Cherax quadricarinatusデンソウイルス、Dipteranアンビデンソウイルス1、Culex pipiensデンソウイルス、Hemipteranアンビデンソウイルス1、Planococcus citriデンソウイルス、Hemipteranアンビデンソウイルス2、Dysaphis plantagineaデンソウイルス、Hemipteranアンビデンソウイルス3、Myzus persicaeデンソウイルス、Myzus persicae nicotianaeデンソウイルス、Hymenopteranアンビデンソウイルス1、Solenopsis invictaデンソウイルス、Lepidopteranアンビデンソウイルス1、Galleria mellonellaデンソウイルス、Junonia coeniaデンソウイルス、Junonia coeniaデンソウイルスpBRJ/1990、Mythimna loreyiデンソウイルス、Pseudoplusia includensデンソウイルス、Orthopteranアンビデンソウイルス1、Acheta domesticaデンソウイルス、未分類のアンビデンソウイルス、Tetranychus urticae関連アンビデンソウイルス、未分類のデンソウイルス、アンビデンソウイルスCaaDV1、アンビデンソウイルスCaaDV2、Atrato Denso様ウイルス、Atrato Denso様ウイルス1、デンソウイルスSC1065、デンソウイルスSC1118、デンソウイルスSC116、デンソウイルスSC2121、デンソウイルスSC2209、デンソウイルスSC2228、デンソウイルスSC2886、デンソウイルスSC3749、デンソウイルスSC3908、デンソウイルスSC4092、デンソウイルスSC444、デンソウイルスSC525、Diaphorina citriデンソウイルス、Diatraea saccharalisデンソウイルス、Lupine feces関連デンソウイルス、Lupine feces関連デンソウイルス2、又はアンビデンソウイルス種。
Entomopoxvirinae科ウイルス
一部の実施形態では、IAは、Entomopoxvirinae科由来のウイルスであり得る。例えば、一部の実施形態では、IAは、アルファエントモポックスウイルス、ベータエントモポックスウイルス、Diachasmimorphaエントモポックスウイルス、Melanoplus sanguinipesエントモポックスウイルス、又はいくつかのこれまで未分類のEntomopoxvirinaeであり得る。
一部の実施形態では、IAは、以下の群から選択されるEntomopoxvirinae科ウイルスであり得る:Anomala cupreaエントモポックスウイルス、Adoxophyes honmaiエントモポックスウイルス、Adoxophyes honmaiエントモポックスウイルス「L」、Amsacta mooreiエントモポックスウイルス、Choristoneura biennisエントモポックスウイルス、Choristoneura fumiferanaエントモポックスウイルス、Choristoneura rosaceanaエントモポックスウイルス、Choristoneura rosaceanaエントモポックスウイルス「L」、Heliothis armigeraエントモポックスウイルス、Mythimna separataエントモポックスウイルス、Mythimna separataエントモポックスウイルス「L」、未分類のベータエントモポックスウイルス、Diachasmimorpha longicaudataエントモポックスウイルス、Melanoplus sanguinipesエントモポックスウイルス「O」、Anacridium aegyptiumエントモポックスウイルス、Calliptamus italicusエントモポックスウイルス、Chironomus decorusエントモポックスウイルス、Gomphocerus sibiricusエントモポックスウイルス、Homona coffeariaエントモポックスウイルス、Linepithema humileエントモポックスウイルス1、Oedaleus asiaticusエントモポックスウイルス、又はPseudaletia separataエントモポックスウイルス。
Iridoviridae科ウイルス
一部の実施形態では、IAは、Iridoviridae科ウイルス(例えば、イリドウイルス)であり得る。
一部の実施形態では、IAは、以下の群から選択されるIridoviridae科ウイルスであり得る:Tipulaイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス31、Armadillidium vulgareイリデッセントウイルス、Popillia japonicaイリデッセントウイルス、Porcellio scaberイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス6、Gryllus bimaculatusイリドウイルス、未分類のイリドウイルス、Acetes erythraeusイリドウイルス、Anticarsia gemmatalisイリデッセントウイルス、Armadillidium decorumイリデッセントウイルス、バラマンディパーチ(Barramundi perch)イリドウイルス、ブルーギルサンフィッシュイリドウイルス、セイタカヒイラギ(Common ponyfish)イリドウイルス、クリムゾンスナッパー(Crimson snapper)イリドウイルス、Decapterus macrosomaイリドウイルス、Gazza minutaイリドウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス16、Costelytra zealandicaイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス2、Sericesthisイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス23、Heteronychus aratorイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス24、Apis ceranaイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス29、Tenebrio molitorイリデッセントウイルス、イリドウイルスバラマンディ/Quang Ninh/VNM/2008、イリドウイルスIV31、スズキ(Japanese sea bass)イリドウイルス、Lagocephalus sceleratusイリドウイルス、Lates calcariferイリドウイルス、Leiognathus splendensイリドウイルス、Marble gobyイリドウイルス、Orbiculate batfishイリドウイルス、Parapristipoma trilineatumイリドウイルス、パーチイリドウイルス603-2/China、Polydactylus sextariusイリドウイルス、Porcellio siculoccidentalisイリデッセントウイルス、Pyrrhalta luteolaイリデッセントウイルス、Rana temporaria United Kingdomイリドウイルス1、Rana temporaria United Kingdomイリドウイルス2、ヘダイ(Silver sea bream)イリドウイルス、ライギョイリドウイルス、イシガレイイリドウイルス603-3/China、イシガレイイリドウイルス724/China、チョウザメイリドウイルス、Synodus indicusイリドウイルス、又はTrichoniscus panormidensisイリデッセントウイルス。
Nudiviridae科ウイルス
一部の実施形態では、IAは、Nudiviridae科ウイルス、例えば、アルファヌディウイルス、ベータヌディウイルス、又はいくつかのこれまで未分類のNudiviridae科ウイルスであり得る。
一部の実施形態では、IAは、以下の群から選択されるNudiviridae科ウイルスであり得る:Gryllus bimaculatusヌディウイルス、Oryctes rhinocerosヌディウイルス、Heliothis zeaヌディウイルス、Helicoverpa zeaヌディウイルス2、Allomyrinaウイルス、Drosophila innubilaヌディウイルス、DrosophilaヌディウイルスRLU-2011、Espartoウイルス、Homarus gammarusヌディウイルス、Kallitheaウイルス、MacrobrachiumヌディウイルスCN-SL2011、Mauternbachウイルス、Nilaparvata lugens内因性ヌディウイルス、Penaeus monodonヌディウイルス、Tipula oleraceaヌディウイルス、又はTomellosoウイルス。
Iflaviridae科ウイルス
一部の実施形態では、IAは、以下の群から選択されるIflaviridae科ウイルスであり得る:Antheraea pernyiイフラウイルス、Brevicoryne brassicaeウイルス、Brevicoryne brassicaeウイルス-UK、Deformed wingウイルス、Kakugoウイルス、VDV-1/DWV組換え、Dinocampus coccinellae麻痺ウイルス、Ectropis obliquaウイルス、Ectropis obliqua picorna様ウイルス、Infectious flacherieウイルス、Infectious flacherieウイルス分離株silkworm、Ixodes holocyclusイフラウイルス、Lygus lineolarisウイルス1、Lymantria disparイフラウイルス1、Nilaparvata lugens honeydewウイルス1、Perina nudaウイルス、Sacbroodウイルス、SacbroodウイルスCSBV-LN/China/2009、Slow bee麻痺ウイルス、Spodoptera exiguaイフラウイルス1、Spodoptera exiguaイフラウイルス2、Varroa destructorウイルス1、未分類のイフラウイルス、ACT fleaイフラウイルス、Aedes vexansイフラウイルス、Armigeresイフラウイルス、コウモリイフラウイルス、ミツバチイフラウイルス1、ブラックベリーイフラウイルスA、ブラックベリーイフラウイルスB、Bombyx moriイフラウイルス、Brevesイフラウイルス、Diamondback mothイフラウイルス、Formica exsectaウイルス2、Haemaphysalis flavaイフラウイルス、Heliconius eratoイフラウイルス、Helicoverpa armigeraイフラウイルス、Midgeイフラウイルス90C0、Miniopterus fuliginosusイフラウイルス、Mokuウイルス、Nasonia vitripennisウイルス、Pirizalイフラウイルス、Psammotettix alienusイフラウイルス1、Rondoniaイフラウイルス1、Rondoniaイフラウイルス2、Scaphoideus titanusイフラウイルス1、Scaphoideus titanusイフラウイルス2、VDV-1/DWV組換え4、Vespa velutina Mokuウイルス、又はXysticus cristatusイフラウイルス。
Baculoviridae科ウイルス
一部の実施形態では、IAは、Baculoviridae科由来のウイルスであり得る。例えば、一部の実施形態では、IAは、アルファバキュロウイルス、ベータバキュロウイルス、デルタバキュロウイルス、ガンマバキュロウイルス、又はこれまで未分類のBaculoviridaeウイルスであり得る。
一部の実施形態では、IAは、以下の群から選択されるアルファバキュロウイルスのウイルスであり得る:Adoxophyes honmai核多角体病ウイルス、Agrotis ipsilon複数型核多角体病ウイルス、Agrotis segetum核多角体病ウイルスA、Agrotis segetum核多角体病ウイルスB、Antheraea pernyi核多角体病ウイルス、Antheraea proylei核多角体病ウイルス、Philosamia cynthia ricini核多角体病ウイルスvirus、Anticarsia gemmatalis複数型核多角体病ウイルス、Autographa californica複数型核多角体病ウイルス、Anagrapha falcifera MNPV、Autographa californica核多角体病ウイルス、Galleria mellonella MNPV、Plutella xylostella複数型核多角体病ウイルス、Rachiplusia nu MNPV、Rachiplusia ou MNPV、Bombyx mori核多角体病ウイルス、Bombyx mandarina核多角体病ウイルス、Bombyx mandarina核多角体病ウイルスS2、Bombyx mori核多角体病ウイルスK1、Buzura suppressaria核多角体病ウイルス、Catopsilia pomona核多角体病ウイルス、Choristoneura fumiferana DEF複数型核多角体病ウイルス、Choristoneura fumiferana複数型核多角体病ウイルス、Choristoneura occidentalisアルファバキュロウイルス、Choristoneura murinana核多角体病ウイルス、Choristoneura rosaceana核多角体病ウイルス、Chrysodeixis chalcites核多角体病ウイルス、Chrysodeixis chalcites SNPV TF1-A、Chrysodeixis includens核多角体病ウイルス、Pseudoplusia includens SNPV IE、Clanis bilineata核多角体病ウイルス、Dasychira pudibunda核多角体病ウイルス、Ectropis obliqua核多角体病ウイルス、Epiphyas postvittana核多角体病ウイルス、Euproctis pseudoconspersa核多角体病ウイルス、Helicoverpa armigera核多角体病ウイルス、Helicoverpa armigera NPV NNg1、Helicoverpa armigera NPV 株Australia、Helicoverpa armigera核多角体病ウイルスG4、Helicoverpa armigera SNPV、Helicoverpa SNPV AC53、Helicoverpa zea単一型核多角体病ウイルス、Hemileuca species核多角体病ウイルス、Hemileuca種核多角体病ウイルス、Hyphantria cunea核多角体病ウイルス、Lambdina fiscellaria核多角体病ウイルス、Leucania separata核多角体病ウイルス、Lonomia obliqua核多角体病ウイルス、Lonomia obliqua複数型核多角体病ウイルス、Lymantria dispar複数型核多角体病ウイルス、Lymantria xylina核多角体病ウイルス、Mamestra brassicae複数型核多角体病ウイルス、Mamestra configurata核多角体病ウイルスA、Mamestra configurata核多角体病ウイルスB、Helicoverpa armigera複数型核多角体病ウイルス、Maruca vitrata核多角体病ウイルス、Mythimna unipuncta核多角体病ウイルス、Operophtera brumata核多角体病ウイルス、Orgyia leucostigma核多角体病ウイルス、Orgyia pseudotsugata複数型核多角体病ウイルス、Oxyplax ochracea核多角体病ウイルス、Perigonia lusca核多角体病ウイルス、Perigonia lusca単一型核多角体病ウイルス、Spodoptera exigua複数型核多角体病ウイルス、Spodoptera exigua核多角体病ウイルス(株US)、Spodoptera frugiperda複数型核多角体病ウイルス、Spodoptera littoralis核多角体病ウイルス、Spodoptera litura核多角体病ウイルス、Sucra jujuba核多角体病ウイルス、Thysanoplusia orichalcea核多角体病ウイルス、Trichoplusia ni単一型核多角体病ウイルス、Wiseana signata核多角体病ウイルス、未分類のアルファバキュロウイルス、Abraxas grossulariata核多角体病ウイルス、Actias selene核多角体病ウイルス、Adoxophyes orana核多角体病ウイルス、Agraulis vanillae MNPV、Agrotis exclamationis核多角体病ウイルス、Agrotis ipsilon複数カプシド核多角体病ウイルス、Amorbia cuneacapsa核多角体病ウイルス、Amorbia cuneana核多角体病ウイルス、Ampelophaga rubiginosa核多角体病ウイルス、Amsacta albistriga核多角体病ウイルス、Anagrapha falcifera複数型核多角体病ウイルス、Antheraea polyphemus核多角体病ウイルス、Anticarsia gemmatalis核多角体病ウイルス、Apocheima cinerarium核多角体病ウイルス、Aporia crataegi核多角体病ウイルス、Archips cerasivoranus核多角体病ウイルス、Archips rosanus核多角体病ウイルス、Attacus ricini核多角体病ウイルス、Autographa biloba核多角体病ウイルス、Autographa gamma核多角体病ウイルス、Autographa nigrisigna核多角体病ウイルス、Boarmia bistortata核多角体病ウイルス、Bombyx mandarina核多角体病ウイルス、Busseola fusca核多角体病ウイルス、Catposilia pomona核多角体病ウイルス、Cerapteryx graminis核多角体病ウイルス、Choristoneura diversana核多角体病ウイルス、Choristoneura occidentalis核多角体病ウイルス、Chorizagrotis auxiliaris核多角体病ウイルス、Chrysodeixis includens NPV、Coloradia pandoraアルファバキュロウイルス、Coloradia pandora核多角体病ウイルス、Condylorrhiza vestigialis MNPV、Condylorrhiza vestigialis複数型核多角体病ウイルス、Cryptophlebia peltastica核多角体病ウイルス、Cyclophragma undans核多角体病ウイルス、Dasychira plagiata核多角体病ウイルス、Dendrolimus kikuchii核多角体病ウイルス、Diaphania pulverulentalis核多角体病ウイルス、Dione juno MNPV tmk1/ARG/2003、Dione juno核多角体病ウイルス、Dirphia peruvianus核多角体病ウイルス、Ectropis grisescens核多角体病ウイルス、Epinotia granitalis核多角体病ウイルス、Euproctis digramma核多角体病ウイルス、Gilpinia hercyniae核多角体病ウイルス、Heliconius erato核多角体病ウイルス、Helicoverpa assulta核多角体病ウイルス、Helicoverpa gelotopoeon単一型核多角体病ウイルス、Heliothis peltigera SNPV、Heliothis zea核多角体病ウイルス、Hemerocampa vetusta核多角体病ウイルス、Hemileucaアルファバキュロウイルス、Hyposidra infixaria NPV、Hyposidra talaca NPV、Iragoides fasciata核多角体病ウイルス、Junonia coenia核多角体病ウイルス、Leucoma salicis核多角体病ウイルス、Lymantria mathura mutiple核多角体病ウイルス、Lymantria monacha核多角体病ウイルス、Lymantria xylina核多角体病ウイルス2、Malacosomaアルファバキュロウイルス、Malacosoma americanum核多角体病ウイルス、Malacosoma californicum核多角体病ウイルス、Malacosoma californicum pluviale核多角体病ウイルス、Malacosoma disstria核多角体病ウイルス、Malacosoma neustria核多角体病ウイルス、Mamestra configurata核多角体病ウイルス、Neophasiaアルファバキュロウイルス、Nepytia phantasmaria核多角体病ウイルス、Nymphalis io核多角体病ウイルス、Oak looperアルファバキュロウイルス、Ophiusa disjungens核多角体病ウイルス、Orgyia anartoides核多角体病ウイルス、Orgyia ericae核多角体病ウイルス、Orgyia pseudotsugata単一カプシド核多角体病ウイルス、Panolis flammea核多角体病ウイルス、Peridromaアルファバキュロウイルス、Peridroma margaritosa核多角体病ウイルス、Perina nuda核多角体病ウイルス、Phryganidia californica核多角体病ウイルス、Plusia acuta核多角体病ウイルス、Plusia orichalcea核多角体病ウイルス、Plutella maculipennis核多角体病ウイルス、Pseudaletiaアルファバキュロウイルス、Pseudoplusia includens核多角体病ウイルス、Pterolocera amplicornis核多角体病ウイルス、Rachiplusia nu核多角体病ウイルス、Rachiplusia nu単一型核多角体病ウイルス、Samia cynthia核多角体病ウイルス、Spilarctia obliqua核多角体病ウイルス、Spilosoma obliqua核多角体病ウイルス、Spilosoma phasma核多角体病ウイルス、Spodoptera cosmioides核多角体病ウイルス、Spodoptera eridania核多角体病ウイルス、Spodoptera exempta核多角体病ウイルス、Spodoptera littoralis複数カプシド核多角体病ウイルス、Spodoptera litura MNPV、Spodoptera litura核多角体病ウイルスII、Spodoptera terricola核多角体病ウイルス、Tineola bisselliella核多角体病ウイルス、Troides aeacus核多角体病ウイルス、Wiseana cervinata核多角体病ウイルス、Agraulis sp.核多角体病ウイルス、Malacosoma sp.アルファバキュロウイルス、Malacosoma sp.核多角体病
ウイルス、Neophasia sp.アルファバキュロウイルス、又は未同定の核多角体病ウイルス。
一部の実施形態では、IAは、以下の群から選択されるベータバキュロウイルスのウイルスであり得る:Adoxophyes oranaグラニュロウイルス、Agrotis segetumグラニュロウイルス、Artogeia rapaeグラニュロウイルス、Pieris brassicaeグラニュロウイルス、Choristoneura fumiferanaグラニュロウイルス、Choristoneura occidentalisグラニュロウイルス、Clostera anachoretaグラニュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルスA、Clostera anastomosisグラニュロウイルスHenan、Clostera anastomosisグラニュロウイルスB、Cnaphalocrocis medinalisグラニュロウイルス、Cryptophlebia leucotretaグラニュロウイルス、Cydia pomonellaグラニュロウイルス、Cydia pomonella顆粒病ウイルス(メキシコ分離株)、Diatraea saccharalisグラニュロウイルス、Epinotia aporemaグラニュロウイルス、Erinnyis elloグラニュロウイルス、Harrisina brilliansグラニュロウイルス、Helicoverpa armigeraグラニュロウイルス、Lacanobia oleraceaグラニュロウイルス、Mocis latipesグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスA、Pseudalatia unipunctaグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスB、Mythimna unipunctaグラニュロウイルス、Phthorimaea operculellaグラニュロウイルス、Plodia interpunctellaグラニュロウイルス、Plutella xylostellaグラニュロウイルス、Spodoptera frugiperdaグラニュロウイルス、Spodoptera lituraグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルスLBIV-12、Xestia c-nigrumグラニュロウイルス、Achaea janataグラニュロウイルス、Adoxophyes honmaiグラニュロウイルス、Agrotis exclamationisグラニュロウイルス、Amelia palloranaグラニュロウイルス、Andraca bipunctataグラニュロウイルス、Autographa gammaグラニュロウイルス、Caloptilia theivoraグラニュロウイルス、Choristoneura murinanaグラニュロウイルス、Choristoneura viridisベータバキュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルス、Cnephasia longanaグラニュロウイルス、Estigmene acreaグラニュロウイルス、Euxoa ochrogasterグラニュロウイルス、Heliothis armigeraグラニュロウイルス、Hoplodrina ambiguaグラニュロウイルス、Hyphantria cuneaグラニュロウイルス、Natada narariaグラニュロウイルス、Nephelodes emmedoniaグラニュロウイルス、Pandemis limitataグラニュロウイルス、Peridorma morpontoraグラニュロウイルス、Pieris rapaeグラニュロウイルス、Plathypena scabraグラニュロウイルス、Pseudaletiaベータバキュロウイルス、Scotogramma trifoliiグラニュロウイルス、Spodoptera androgeaグラニュロウイルス、Spodoptera littoralisグラニュロウイルス、Tecia solanivoraグラニュロウイルス、又はMocis sp.グラニュロウイルス。
一部の実施形態では、IAは、以下の群から選択されるデルタバキュロウイルスのウイルスであり得る:Culex nigripalpus核多角体病ウイルス、又はCulex nigripalpus NPV Florida/1997。
一部の実施形態では、IAは、以下の群から選択されるガンマバキュロウイルスのウイルスであり得る:Neodiprion lecontei核多角体病ウイルス、Neodiprion lecontei NPV(カナダ株)、Neodiprion sertifer核多角体病ウイルス、未分類のガンマバキュロウイルス、又はNeodiprion abietis NPV。
一部の実施形態では、IAは、以下の群から選択される、いくつかのこれまで未分類のBaculoviridaeウイルスであり得る:Achaea faber核多角体病ウイルス、Aedes sollicitans核多角体病ウイルス、Aglais urticae核多角体病ウイルス、Agraulis vanillae核多角体病ウイルス、Anomis sabulifera核多角体病ウイルス、Antheraea yamamai核多角体病ウイルス、Anthophila fabricianaグラニュロウイルス、Aroa discalis核多角体病ウイルス、Baculovirus penaei、Cadra cautella核多角体病ウイルス、Chaliopsis junodi核多角体病ウイルス、Cotesia marginiventrisバキュロウイルス、Cynosarga ornata核多角体病ウイルス、Darna narariaグラニュロウイルス、Darna trimaグラニュロウイルス、Erannis defoliaria核多角体病ウイルス、Euplexia luciparaグラニュロウイルス、Euproctis chrysorrhoea核多角体病ウイルス、Euproctis similis核多角体病ウイルス、性腺特異的ウイルス、Homona coffeariaグラニュロウイルス、Hyblaea puera核多角体病ウイルス、Idaea seriata核多角体病ウイルス、Junonia coeniaグラニュロウイルス、Lasiocampa quercus核多角体病ウイルス、Lemyra imparilis核多角体病ウイルス、Mahasena corbetti核多角体病ウイルス、Melanchra persicariaeグラニュロウイルス、Operophtera bruceata核多角体病ウイルス、Orgyia antiqua核多角体病ウイルス、Orgyia mixta核多角体病ウイルス、Pachytrina philargyria核多角体病ウイルス、Pareuchaetes pseudoinsulata核多角体病ウイルス、Penaeus monodon核多角体病ウイルス、Phalera bucephala核多角体病ウイルス、Polygonia c-album核多角体病ウイルス、Samia ricini核多角体病ウイルス、Spilosoma luteaグラニュロウイルス、Spodoptera albula核多角体病ウイルス、Trabala vishnou核多角体病ウイルス、Uranotaenia sapphirina核多角体病ウイルス、Urbanus proteus核多角体病ウイルス、Utetheisa pulchella核多角体病ウイルス、Vanessa atalanta核多角体病ウイルス、Vanessa cardui核多角体病ウイルス、Wiseana cervinataグラニュロウイルス、又はBaculoviridae sp。
一部の実施形態では、IAは、Baculoviridaeウイルスであり得る。
一部の実施形態では、IAは、ベータバキュロウイルスであり得る。
一部の実施形態では、IAは、Adoxophyes oranaグラニュロウイルス、Agrotis segetumグラニュロウイルス、Artogeia rapaeグラニュロウイルス、Pieris brassicaeグラニュロウイルス、Choristoneura fumiferanaグラニュロウイルス、Choristoneura occidentalisグラニュロウイルス、Clostera anachoretaグラニュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルスA、Clostera anastomosisグラニュロウイルスHenan、Clostera anastomosisグラニュロウイルスB、Cnaphalocrocis medinalisグラニュロウイルス、Cryptophlebia leucotretaグラニュロウイルス、Cydia pomonellaグラニュロウイルス、Cydia pomonella granulosis virus(メキシコ分離株)、Diatraea saccharalisグラニュロウイルス、Epinotia aporemaグラニュロウイルス、Erinnyis elloグラニュロウイルス、Harrisina brilliansグラニュロウイルス、Helicoverpa armigeraグラニュロウイルス、Lacanobia oleraceaグラニュロウイルス、Mocis latipesグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスA、Pseudalatia unipunctaグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスB、Mythimna unipunctaグラニュロウイルス、Phthorimaea operculellaグラニュロウイルス、Plodia interpunctellaグラニュロウイルス、Plutella xylostellaグラニュロウイルス、Spodoptera frugiperdaグラニュロウイルス、Spodoptera lituraグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルスLBIV-12、Xestia c-nigrumグラニュロウイルス、未分類のベータバキュロウイルス、Achaea janataグラニュロウイルス、Adoxophyes honmaiグラニュロウイルス、Agrotis exclamationisグラニュロウイルス、Amelia palloranaグラニュロウイルス、Andraca bipunctataグラニュロウイルス、Autographa gammaグラニュロウイルス、Caloptilia theivoraグラニュロウイルス、Choristoneura murinanaグラニュロウイルス、Choristoneura viridisベータバキュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルス、Cnephasia longanaグラニュロウイルス、Estigmene acreaグラニュロウイルス、Euxoa ochrogasterグラニュロウイルス、Heliothis armigeraグラニュロウイルス、Hoplodrina ambiguaグラニュロウイルス、Hyphantria cuneaグラニュロウイルス、Natada narariaグラニュロウイルス、Nephelodes emmedoniaグラニュロウイルス、Pandemis limitataグラニュロウイルス、Peridorma morpontoraグラニュロウイルス、Pieris rapaeグラニュロウイルス、Plathypena scabraグラニュロウイルス、Pseudaletiaベータバキュロウイルス、Scotogramma trifoliiグラニュロウイルス、Spodoptera androgeaグラニュロウイルス、Spodoptera littoralisグラニュロウイルス、Tecia solanivoraグラニュロウイルス、又はMocis sp.グラニュロウイルスであり得る。
一部の実施形態では、IAは、Cydia pomonellaグラニュロウイルスであり得る。
一部の実施形態では、IAは、Cydia pomonellaグラニュロウイルス分離株V22ウイルスであり得る。
Cydia pomonellaグラニュロウイルスの例示的な完全ゲノムは、NCBI受託番号NC_002816.1を有する。また、Lugue et al.,The complete sequence of the Cydia pomonella granulovirus genome.J Gen Virol.2001 Oct;82(Pt 10):2531-2547も参照されたい(それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
例示的な昆虫ウイルス、昆虫ウイルス配列、並びにそれらを作製及び使用するための方法は、「殺虫剤組成物及びその調製プロセス」と題する米国特許第5,560,909号、「農産物を昆虫から保護するための新規ウイルス組成物」と題する米国特許第5,023,182号、「環境における宿主間伝染の能力が低下した組換え昆虫ウイルス及び当該ウイルスを生成する方法」と題する米国特許第6,130,074号、「昆虫ウイルス及び植物を保護にけるそれらの使用」と題する米国特許第6,177,075号、「昆虫細胞におけるアデノ随伴ウイルスの産生」と題する米国特許第7,271,002号、「害虫を制御するためのバキュロウイルス」と題する米国特許第6,042,843号、「宿主昆虫のウイルス感染を増強するポリペプチドをコードするDNA配列」と題するWIPO公開第WO1997/008197A1号、並びに「昆虫のウイルス、配列、殺虫性組成物、及び方法」と題する米国特許第5,858,353号に記載されている(それらの記事は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
IA:細菌及び細菌毒素
一部の実施形態では、IAは、昆虫と接触したときに殺虫活性を有する細菌であり得る。
一部の実施形態では、IAは、細菌から単離されたペプチド又は毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、細菌毒素であり得る。
Photorhabdus及び/又はその毒素
一部の実施形態では、IAは、Xenorhabdus属又はPhotorhabdus属に属する細菌から単離された細菌毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Photorhabdus毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、以下からなる群から選択されるPhotorhabdus毒素であり得る:Photorhabdus akhurstii毒素、Photorhabdus asymbiotica毒素、Photorhabdus asymbiotica subsp.asymbiotica毒素、Photorhabdus asymbiotica subsp.asymbiotica ATCC 43949毒素、Photorhabdus australis毒素、Photorhabdus australis DSM 17609毒素、Photorhabdus bodei毒素、Photorhabdus caribbeanensis毒素、Photorhabdus cinerea毒素、Photorhabdus hainanensis毒素、Photorhabdus heterorhabditis毒素、Photorhabdus kayaii毒素、Photorhabdus khanii毒素、Photorhabdus khanii NC19毒素、Photorhabdus khanii subsp.guanajuatensis毒素、Photorhabdus kleinii毒素、Photorhabdus laumondii毒素、Photorhabdus laumondii subsp.clarkei毒素、Photorhabdus laumondii subsp.laumondii毒素、Photorhabdus laumondii subsp.laumondii TTO1毒素、Photorhabdus luminescens毒素、Photorhabdus luminescens BA1毒素、Photorhabdus luminescens NBAII H75HRPL105毒素、Photorhabdus luminescens NBAII HiPL101毒素、Photorhabdus luminescens subsp.luminescens毒素、Photorhabdus luminescens subsp.luminescens ATCC 29999毒素、Photorhabdus luminescens subsp.mexicana毒素、Photorhabdus luminescens subsp.sonorensis毒素、Photorhabdus namnaonensis毒素、Photorhabdus noenieputensis毒素、Photorhabdus stackebrandtii毒素、Photorhabdus tasmaniensis毒素、Photorhabdus temperata毒素、Photorhabdus temperata J3毒素、Photorhabdus temperata subsp.phorame毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata M1021毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata Meg1毒素、Photorhabdus thracensis毒素、未分類のPhotorhabdus毒素、Photorhabdus sp.毒素、Photorhabdus sp.3014毒素、Photorhabdus sp.3240毒素、Photorhabdus sp.Az29毒素、Photorhabdus sp.BS21毒素、Photorhabdus sp.CbKj163毒素、Photorhabdus sp.CRCIA-P01毒素、Photorhabdus sp.ENY毒素、Photorhabdus sp.FL2122毒素、Photorhabdus sp.FL480毒素、Photorhabdus sp.FsIw96毒素、Photorhabdus sp.GDd233毒素、Photorhabdus sp.H3086毒素、Photorhabdus sp.H3107毒素、Photorhabdus sp.H3240毒素、Photorhabdus sp.HB301毒素、Photorhabdus sp.HB78毒素、Photorhabdus sp.HB89毒素、Photorhabdus sp.HIT毒素、Photorhabdus sp.HO1毒素、Photorhabdus sp.HUG-39毒素、Photorhabdus sp.IT毒素、Photorhabdus sp.JUN毒素、Photorhabdus sp.KcTs129毒素、Photorhabdus sp.KJ13.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ14.3 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ24.5 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ29.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ37.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ7.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ8.2 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ9.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ9.2 TH毒素、Photorhabdus sp.KK1.3 TH毒素、Photorhabdus sp.KK1.4 TH毒素、Photorhabdus sp.KMD74毒素、Photorhabdus sp.KOH毒素、Photorhabdus sp.MID10毒素、Photorhabdus sp.MOL毒素、Photorhabdus sp.MSW_058毒素、Photorhabdus sp.MSW_079毒素、Photorhabdus sp.NK2.1 TH毒素、Photorhabdus sp.NK2.5 TH毒素、Photorhabdus sp.NnMt2h毒素、Photorhabdus sp.NP1毒素、Photorhabdus sp.OH10毒素、Photorhabdus sp.OnIr40毒素、Photorhabdus sp.OnKn2毒素、Photorhabdus sp.PB10.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB16.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB17.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB17.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB2.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB22.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB22.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB32.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB33.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB33.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB37.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB39.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB4.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB41.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB45.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB47.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB47.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB5.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB5.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB50.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB51.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB52.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB54.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB59.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB6.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB67.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB67.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB68.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB7.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB78.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB80.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB80.4 TH毒素、Photorhabdus sp.Pjun毒素、Photorhabdus sp.RW14-46毒素、Photorhabdus sp.S10-54毒素、Photorhabdus sp.S12-55毒素、Photorhabdus sp.S14-60毒素、Photorhabdus sp.S15-56毒素、Photorhabdus sp.S5P8-50毒素、Photorhabdus sp.S7-51毒素、Photorhabdus sp.S8-52毒素、Photorhabdus sp.S9-53毒素、Photorhabdus sp.SJ2毒素、Photorhabdus sp.SN259毒素、Photorhabdus sp.SP1.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP16.4 TH毒素、Photorhabdus sp.SP21.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP3.4 TH毒素、Photorhabdus sp.SP4.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP7.3 TH毒素、Photorhabdus sp.TyKb140毒素、Photorhabdus sp.UK76毒素、Photorhabdus sp.VMG毒素、Photorhabdus sp.WA21C毒素、Photorhabdus sp.WkSs43毒素、Photorhabdus sp.Wx13毒素、Photorhabdus sp.X4毒素、Photorhabdus sp.YNb90毒素、及びPhotorhabdus sp.ZM毒素。
一部の実施形態では、IAは、Photorhabdus luminescens毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Photorhabdus luminescens毒素であり得、Photorhabdus luminescens毒素が、Photorhabdus luminescens「毒素複合体a」(Tca)を含む。
一部の実施形態では、IAは、Photorhabdus luminescens毒素であり得、Photorhabdus luminescens毒素が、Photorhabdus luminescens「毒素複合体c」(Tcc)を含む。
一部の実施形態では、IAは、Photorhabdus luminescens毒素であり得、Photorhabdus luminescens毒素が、Photorhabdus luminescens「毒素複合体d」(Tcd)を含む。
一部の実施形態では、IAは、Tcaであり得、TcaAタンパク質(配列番号616)、TcaBタンパク質(配列番号617)、TcaCタンパク質(配列番号618)、及びTcaZタンパク質(配列番号619)を含む。
例示的なPhotorhabdus luminescens毒素ペプチド、ヌクレオチド、配列、及びそれらを作製及び使用する方法は、「害虫制御のためのTCタンパク質の混合及び一致」と題する米国特許第7,491,698号、「Photorhabdus luminescens由来の殺虫性毒素及びそれをコードする核酸配列」と題する米国特許第6,281,413号、「細菌Xenorhabdus nematophilus及びPhotorhabdus luminescens由来の毒素タンパク質」と題する米国特許第6,630,619号、「Photorhabdus由来の殺虫タンパク質毒素」と題する米国特許第6,528,484号、「Photorhabdus luminescensのtcdゲノム領域由来のDNA配列」と題する米国特許第7,777,100号、「Photorhabdus luminescens由来のDNA配列」と題する米国特許第7,161,062号、「Photorhabdus由来の殺虫タンパク質毒素」と題する米国出願公開第2003/0207806号、「Photorhabdus luminescens株tt01ゲノムの配列及び使用」と題する米国出願公開第2007/0020625A1号、「Photorhabdus luminescens W-14由来のtcdB2タンパク質」と題する米国特許第7,268,275号に記載されている(それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
エルシニア生物、及びそれ由来の産物
一部の実施形態では、IAは、エルシニア属に属する1つ以上の生物であり得る。
一部の実施形態では、IAは、エルシニア属に属する生物から単離された1つ以上のペプチドであり得る。
一部の実施形態では、IAは、以下の種のうちの1つ以上であり得る:Yersinia aldovaeyb、Yersinia aleksiciae、Yersinia bercovieri、Yersinia canariae、Yersinia enterocolitica、Yersinia enterocolitica subsp.enterocolitica、Yersinia enterocolitica subsp.palearctica、Yersinia entomophaga、Yersinia frederiksenii、Yersinia hibernica、Yersinia intermedia、Yersinia kristensenii、Yersinia kristensenii subsp.kristensenii、Yersinia kristensenii subsp.rochesterensis、Yersinia massiliensis、Yersinia mollaretii、Yersinia nurmii、Yersinia pekkanenii、Yersinia pestis、Yersinia pestis subsp.pestis、Yersinia pestis subsp.medievalis、Yersinia pestis subsp.orientalis、Yersinia pseudotuberculosis、Yersinia pseudotuberculosis subsp.pestis、Yersinia pseudotuberculosis subsp.pseudotuberculosis、Yersinia rohdei、Yersinia ruckeri、Yersinia similis、又はYersinia wautersii。
一部の実施形態では、IAは、以下の種のうちの1つ以上から単離された1つ以上のペプチドであり得る:Yersinia aldovaeyb、Yersinia aleksiciae、Yersinia bercovieri、Yersinia canariae、Yersinia enterocolitica、Yersinia enterocolitica subsp.enterocolitica、Yersinia enterocolitica subsp.palearctica、Yersinia entomophaga、Yersinia frederiksenii、Yersinia hibernica、Yersinia intermedia、Yersinia kristensenii、Yersinia kristensenii subsp.kristensenii、Yersinia kristensenii subsp.rochesterensis、Yersinia massiliensis、Yersinia mollaretii、Yersinia nurmii、Yersinia pekkanenii、Yersinia pestis、Yersinia pestis subsp.pestis、Yersinia pestis subsp.medievalis、Yersinia pestis subsp.orientalis、Yersinia pseudotuberculosis、Yersinia pseudotuberculosis subsp.pestis、Yersinia pseudotuberculosis subsp.pseudotuberculosis、Yersinia rohdei、Yersinia ruckeri、Yersinia similis、又はYersinia wautersii。
一部の実施形態では、IAは、Yersinia entomophaga又はYersinia nurmiiであり得る。
一部の実施形態では、IAは、Yersinia entomophaga又はYersinia nurmiiから単離された1つ以上のペプチドであり得る。
簡潔に、Yersinia entomophagaは、ニュージーランドグラスグラブの罹患した幼虫から単離されたグラム陰性桿状非芽胞形成細菌である。同様に、Yersinia nurmiiもグラム陰性の桿状株であるが、改良された環境下で包装されたブロイラー肉に由来する。Hurst et al.,The main virulence determinant of Yersinia entomophaga MH96 is a broad-host-range toxin complex active against insects.J Bacteriol.2011 Apr;193(8):1966-80;and Landsberg et al.,3D structure of the Yersinia entomophaga toxin complex and implications for insecticidal activity.Proc Natl Acad Sci U S A.2011 Dec 20;108(51):20544-9を参照されたい。
一部の実施形態では、IAは、Yersinia entomophaga細菌、及び/又はそれ由来の毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、1つ以上のYersinia nurmii細菌、及び/又はそれ由来の毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、1つ以上のYersinia entomophaga細菌及び/又はそれ由来の毒素、並びに1つ以上のYersinia nurmii細菌及び/又はそれ由来の毒素であり得る。
Yersinia含有及びYersinia毒素含有混合物を作製及び使用する例示的な方法は、「COMBINATIONS OF YERSINIA ENTOMOPHAGA AND PESTICIDES OR OTHER SUBSTANCES」と題するPCT出願第WO2018/175677A1号(譲受人:Novozymes Bioag A/S)に開示されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
Bacillus thuringiensis菌及びそれ由来の産物
「Bt」は、Bacillus thuringiensisと呼ばれる細菌の頭文字である。Bt細菌は、多くの昆虫に対して毒性があるペプチドのファミリーを産生する。Bt毒性ペプチドは、2つの主要なクラスである細胞溶解素(Cyt)と結晶Btタンパク質(Cry)とに分類される傍胞子結晶タンパク質封入体(通常、結晶と称される)を産生する能力でよく知られている。1980年代初頭に初めて結晶タンパク質遺伝子のクローニング及び配列決定が行われて以来、他の多くが特徴付けられ、今ではCrickmoreら(1998)の命名法に従って分類されるようになった。一般に、Cytタンパク質は昆虫目のColeoptera(甲虫類)及びDiptera(ハエ類)に対して毒性があり、Cryタンパク質はLepidopteran(蛾類及び蝶類)を標的とする。Cryタンパク質は、中腸(上皮)細胞の膜上の特異的な受容体に結合し、それらの細胞の破裂をもたらす。Cryタンパク質は、それが結合することができる上皮細胞に特異的な受容体を見つけることができない場合、毒性ではない。Bt株は、Cyt及びCryタンパク質の異なる相補体を有することができ、したがって、それらの宿主範囲を定義する。多くのCryタンパク質をコードする遺伝子が特定されている。
現在、目特異性に基づく殺虫Bt傍胞子ペプチドには、以下の4つの主要な病原型がある:Lepidopteran特異的(CryI、現在のCry1)、Coleoptera特異的(CryIII、現在のCry3)、Diptera特異的(CryIV、現在のCry4、Cry10、Cry11、及びCytA、現在のCyt1A)、並びにCryII(現在のCry2)(当時、二重特異的(Lepidopteran及びDiptera)を有することが知られていた唯一のファミリー)。今では、異目間(cross-order)活性が明らかになった。
命名法は、ホロタイプ配列を、分岐の程度に基づいて階級が組み込まれた固有の名前に割り当て、第1の階級(アラビア数字)、第2の階級(大文字)、及び第3の階級(小文字)の間の境界が、およそ95%、78%、及び45%の同一性を表す。第4の階級(別のアラビア数字)は、同一であるか又はわずかに異なる配列を有するホロタイプ毒素遺伝子の独立した単離を示すために使用される。現在、この命名法は、55のcry及び2つのcytファミリーにグループ化される174のホロタイプ配列を区別する(Crickmore,N.,Zeigler,D.R.,Schnepf,E.,Van Rie,J.,Lereclus,D.,Daum,J,Bravo,A.,Dean,D.H.,B.thuringiensis毒素命名法)。これらの結晶タンパク質及びそれらを産生する遺伝子のうちのいずれかを使用して、本発明に好適なBt関連毒素を産生することができる。
本発明の記載には、以下の他の細菌によって産生される高度に関連する結晶タンパク質のファミリーも含まれる:Clostridium bifermentans(Barloy et al.,1996,1998)由来のCry16及びCry17、Bacillus popilliae由来のCry18(Zhang et al.,1997)、Paenibacillus lentimorbis由来のCry43(Yokoyama et al.,2004)、並びにBacillus sphaericusによって産生されるバイナリCry48/Cry49(Jones et al.,2008)。本明細書に含まれるS層タンパク質(Pena et al.,2006)などの他の結晶性又は分泌型殺虫タンパク質は、単一アミノ酸置換によって修飾されたものを除いて、遺伝子改変された結晶タンパク質である(例えば、Lambert et al.,1996)。これらの遺伝子のうちのいずれかを使用して、本発明に好適なBt関連毒素を生成することができる。
天然に存在するアレルバリアントは、以下に概説されるように、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)及びハイブリダイゼーション技術などの周知の分子生物学的技術の使用により特定することができる。バリアントヌクレオチド配列には、合成由来のヌクレオチド配列も含まれ、これは、例えば、部位特異的変異誘発を使用することによって生成されているが、以下に考察されるように、依然として本開示に開示されるBtタンパク質タンパク質をコードしている。本開示に包含されるバリアントタンパク質は、生物活性であり、すなわち、天然タンパク質の所望の生物活性(すなわち、農薬活性)を保持し続ける。「活性を保持する」とは、バリアントが、天然タンパク質の農薬活性の少なくとも約30%、少なくとも約50%、少なくとも約70%、又は少なくとも約80%を有するであろうことが意図される。農薬活性を測定するための方法は、当該技術分野において周知である。例えば、Czapla and Lang(1990)J.Econ.Entomol.83:2480-2485、Andrews et al.(1988)Biochem.J.252:199-206、Marrone et al.(1985)J.of Economic Entomology 78:290-293、及び米国特許第5,743,477号(それらの全ては、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)を参照されたい。また、全ての配列は、参照により具体的に援用される番号によって特定される。
Btタンパク質及び遺伝子の記載は、Bt毒素及び対応する参考文献を含む以下の表に記載されている(その各々は、参照によりその全体が援用される)。
Figure 2023524083000029
Figure 2023524083000030
Figure 2023524083000031
CRIP及びIAを含む新規の混合物、製剤、及び/又は組成物を使用して、害虫(例えば、昆虫)を制御、死滅、及び/又は阻害することができる。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis生物であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis亜種であり得る。例えば、一部の実施形態では、Bacillus thuringiensis亜種は、以下の亜種のうちの1つであり得る:aizawai、aizawai/pacificus、alesti、amagiensis、andalousiensis、argentinensis、asturiensis、azorensis、balearica、berliner、bolivia、brasilensis、cameroun、canadensis、chanpaisis、chinensis、colmeri、coreanensis、dakota、darmstadiensis、dendrolimus、entomocidus、entomocidus/subtoxicus、finitimus、fukuokaensis、galechiae、galleriae、graciosensis、guiyangiensis、higo、huazhongensis、iberica、indiana、israelensis、israelensis/tochigiensis、japonensis、jegathesan、jinghongiensis、kenyae、kim、kumamtoensis、kurstaki、kyushuensis、leesis、londrina、malayensis、medellin、mexicanensis、mogi、monterrey、morrisoni、muju、navarrensis、neoleonensis、nigeriensis、novosibirsk、ostriniae、oswaldocruzi、pahangi、pakistani、palmanyolensis、pingluonsis、pirenaica、poloniensis、pondicheriensis、pulsiensis、rongseni、roskildiensis、san diego、seoulensis、shandongiensis、silo、sinensis、sooncheon、sotto、sotto/dendrolimus、subtoxicus、sumiyoshiensis、sylvestriensis、tenebrionis、thailandensis、thompsoni、thuringiensis、tochigiensis、toguchini、tohokuensis、tolworthi、toumanoffi、vazensis、wratislaviensis、wuhanensis、xiaguangiensis、yosoo、yunnanensis、zhaodongensis、str。Al Hakam、又はkonkukian。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis var.又はvarietasであり得る。例えば、一部の実施形態では、IAは、以下の群から選択されるBacillus thuringiensis var.であり得る:Bacillus thuringiensis var.aizawai、Bacillus thuringiensis var.aizawai/pacificus、Bacillus thuringiensis var.alesti、Bacillus thuringiensis var.amagiensis、Bacillus thuringiensis var.andalousiensis、Bacillus thuringiensis var.argentinensis、Bacillus thuringiensis var.asturiensis、Bacillus thuringiensis var.azorensis、Bacillus thuringiensis var.balearica、Bacillus thuringiensis var.berliner、Bacillus thuringiensis var.bolivia、Bacillus thuringiensis var.brasilensis、Bacillus thuringiensis var.cameroun、Bacillus thuringiensis var.canadensis、Bacillus thuringiensis var.chanpaisis、Bacillus thuringiensis var.chinensis、Bacillus thuringiensis var.colmeri、Bacillus thuringiensis var.coreanensis、Bacillus thuringiensis var.dakota、Bacillus thuringiensis var.darmstadiensis、Bacillus thuringiensis var.dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus/subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.finitimus、Bacillus thuringiensis var.fukuokaensis、Bacillus thuringiensis var.galechiae、Bacillus thuringiensis var.galleriae、Bacillus thuringiensis var.graciosensis、Bacillus thuringiensis var.guiyangiensis、Bacillus thuringiensis var.higo、Bacillus thuringiensis var.huazhongensis、Bacillus thuringiensis var.iberica、Bacillus thuringiensis var.indiana、Bacillus thuringiensis var.israelensis、Bacillus thuringiensis var.israelensis/tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.japonensis、Bacillus thuringiensis var.jegathesan、Bacillus thuringiensis var.jinghongiensis、Bacillus thuringiensis var.kenyae、Bacillus thuringiensis var.kim、Bacillus thuringiensis var.kumamtoensis、Bacillus thuringiensis var.kunthalanags3、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX24、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX27、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX28、Bacillus thuringiensis var.kurstaki、Bacillus thuringiensis var.kyushuensis、Bacillus thuringiensis var.leesis、Bacillus thuringiensis var.londrina、Bacillus thuringiensis var.malayensis、Bacillus thuringiensis var.medellin、Bacillus thuringiensis var.mexicanensis、Bacillus thuringiensis var.mogi、Bacillus thuringiensis var.monterrey、Bacillus thuringiensis var.morrisoni、Bacillus thuringiensis var.muju、Bacillus thuringiensis var.navarrensis、Bacillus thuringiensis var.neoleonensis、Bacillus thuringiensis var.nigeriensis、Bacillus thuringiensis var.novosibirsk、Bacillus thuringiensis var.ostriniae、Bacillus thuringiensis var.oswaldocruzi、Bacillus thuringiensis var.pahangi、Bacillus thuringiensis var.pakistani、Bacillus thuringiensis var.palmanyolensis、Bacillus thuringiensis var.pingluonsis、Bacillus thuringiensis var.pirenaica、Bacillus thuringiensis var.poloniensis、Bacillus thuringiensis var.pondicheriensis、Bacillus thuringiensis var.pulsiensis、Bacillus thuringiensis var.rongseni、Bacillus thuringiensis var.roskildiensis、Bacillus thuringiensis var.san diego、Bacillus thuringiensis var.seoulensis、Bacillus thuringiensis var.shandongiensis、Bacillus thuringiensis var.silo、Bacillus thuringiensis var.sinensis、Bacillus thuringiensis var.sooncheon、Bacillus thuringiensis var.sotto、Bacillus thuringiensis var.sotto/dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.sumiyoshiensis、Bacillus thuringiensis var.sylvestriensis、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis、Bacillus thuringiensis var.thailandensis、Bacillus thuringiensis var.thompsoni、Bacillus thuringiensis var.thuringiensis、Bacillus thuringiensis var.tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.toguchini、Bacillus thuringiensis var.tohokuensis、Bacillus thuringiensis var.tolworthi、Bacillus thuringiensis var.toumanoffi、Bacillus thuringiensis var.vazensis、Bacillus thuringiensis var.wratislaviensis、Bacillus thuringiensis var.wuhanensis、Bacillus thuringiensis var.xiaguangiensis、Bacillus thuringiensis var.yosoo、Bacillus thuringiensis var.yunnanensis、Bacillus thuringiensis var.zhaodongensis、Bacillus thuringiensis str.Al Hakam、Bacillus thuringiensis T01-328、Bacillus thuringiensis YBT-1518、又はBacillus thuringiensis var.konkukian。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis血清型であり得る。例えば、一部の実施形態では、IAは、以下の群から選択されるBacillus thuringiensis血清型であり得る:Bacillus thuringiensis AKS-7、Bacillus thuringiensis Bt18247、Bacillus thuringiensis Bt18679、Bacillus thuringiensis Bt407、Bacillus thuringiensis DAR 81934、Bacillus thuringiensis DB27、Bacillus thuringiensis F14-1、Bacillus thuringiensis FC1、Bacillus thuringiensis FC10、Bacillus thuringiensis FC2、Bacillus thuringiensis FC6、Bacillus thuringiensis FC7、Bacillus thuringiensis FC8、Bacillus thuringiensis FC9、Bacillus thuringiensis HD-771、Bacillus thuringiensis HD-789、Bacillus thuringiensis HD1002、Bacillus thuringiensis IBL 200、Bacillus thuringiensis IBL 4222、Bacillus thuringiensis JM-Mgvxx-63、Bacillus thuringiensis LDC 391、Bacillus thuringiensis LM1212、Bacillus thuringiensis MC28、Bacillus thuringiensis Sbt003、Bacillus thuringiensis血清型aizawai、Bacillus thuringiensis血清型aizawai/pacificus、Bacillus thuringiensis血清型alesti、Bacillus thuringiensis血清型amagiensis、Bacillus thuringiensis血清型andalousiensis、Bacillus thuringiensis血清型argentinensis、Bacillus thuringiensis血清型asturiensis、Bacillus thuringiensis血清型azorensis、Bacillus thuringiensis血清型balearica、Bacillus thuringiensis血清型berliner、Bacillus thuringiensis血清型bolivia、Bacillus thuringiensis血清型brasilensis、Bacillus thuringiensis血清型cameroun、Bacillus thuringiensis血清型canadensis、Bacillus thuringiensis血清型chanpaisis、Bacillus thuringiensis血清型chinensis、Bacillus thuringiensis血清型colmeri、Bacillus thuringiensis血清型coreanensis、Bacillus thuringiensis血清型dakota、Bacillus thuringiensis血清型darmstadiensis、Bacillus thuringiensis血清型dendrolimus、Bacillus thuringiensis血清型entomocidus、Bacillus thuringiensis血清型entomocidus/subtoxicus、Bacillus thuringiensis血清型finitimus、Bacillus thuringiensis血清型fukuokaensis、Bacillus thuringiensis血清型galechiae、Bacillus thuringiensis血清型galleriae、Bacillus thuringiensis血清型graciosensis、Bacillus thuringiensis血清型guiyangiensis、Bacillus thuringiensis血清型higo、Bacillus thuringiensis血清型huazhongensis、Bacillus thuringiensis血清型iberica、Bacillus thuringiensis血清型indiana、Bacillus thuringiensis血清型israelensis、Bacillus thuringiensis血清型israelensis/tochigiensis、Bacillus thuringiensis血清型japonensis、Bacillus thuringiensis血清型jegathesan、Bacillus thuringiensis血清型jinghongiensis、Bacillus thuringiensis血清型kenyae、Bacillus thuringiensis血清型kim、Bacillus thuringiensis血清型kumamtoensis、Bacillus thuringiensis血清型kunthalanags3、Bacillus thuringiensis血清型kunthalaRX24、Bacillus thuringiensis血清型kunthalaRX27、Bacillus thuringiensis血清型kunthalaRX28、Bacillus thuringiensis血清型kurstaki、Bacillus thuringiensis血清型kyushuensis、Bacillus thuringiensis血清型leesis、Bacillus thuringiensis血清型londrina、Bacillus thuringiensis血清型malayensis、Bacillus thuringiensis血清型medellin、Bacillus thuringiensis血清型mexicanensis、Bacillus thuringiensis血清型mogi、Bacillus thuringiensis血清型monterrey、Bacillus thuringiensis血清型morrisoni、Bacillus thuringiensis血清型muju、Bacillus thuringiensis血清型navarrensis、Bacillus thuringiensis血清型neoleonensis、Bacillus thuringiensis血清型nigeriensis、Bacillus thuringiensis血清型novosibirsk、Bacillus thuringiensis血清型ostriniae、Bacillus thuringiensis血清型oswaldocruzi、Bacillus thuringiensis血清型pahangi、Bacillus thuringiensis血清型pakistani、Bacillus thuringiensis血清型palmanyolensis、Bacillus thuringiensis血清型pingluonsis、Bacillus thuringiensis血清型pirenaica、Bacillus thuringiensis血清型poloniensis、Bacillus thuringiensis血清型pondicheriensis、Bacillus thuringiensis血清型pulsiensis、Bacillus thuringiensis血清型rongseni、Bacillus thuringiensis血清型roskildiensis、Bacillus thuringiensis血清型san diego、Bacillus thuringiensis血清型seoulensis、Bacillus thuringiensis血清型shandongiensis、Bacillus thuringiensis血清型silo、Bacillus thuringiensis血清型sinensis、Bacillus thuringiensis血清型sooncheon、Bacillus thuringiensis血清型sotto、Bacillus thuringiensis血清型sotto/dendrolimus、Bacillus thuringiensis血清型subtoxicus、Bacillus thuringiensis血清型sumiyoshiensis、Bacillus thuringiensis血清型sylvestriensis、Bacillus thuringiensis血清型tenebrionis、Bacillus thuringiensis血清型thailandensis、Bacillus thuringiensis血清型thompsoni、Bacillus thuringiensis血清型thuringiensis、Bacillus thuringiensis血清型tochigiensis、Bacillus thuringiensis血清型toguchini、Bacillus thuringiensis血清型tohokuensis、Bacillus thuringiensis血清型tolworthi、Bacillus thuringiensis血清型toumanoffi、Bacillus thuringiensis血清型vazensis、Bacillus thuringiensis血清型wratislaviensis、Bacillus thuringiensis血清型wuhanensis、Bacillus thuringiensis血清型xiaguangiensis、Bacillus thuringiensis血清型yosoo、Bacillus thuringiensis血清型yunnanensis、Bacillus thuringiensis血清型zhaodongensis、Bacillus thuringiensis株。Al Hakam、Bacillus thuringiensis T01-328、Bacillus thuringiensis YBT-1518、及びBacillus thuringiensis血清型konkukian。
一部の好ましい実施形態では、IAは、以下の生物のうちの1つであり得る:Bacillus thuringiensis var.israelensis、Bacillus thuringiensis var.aizawai、Bacillus thuringiensis var.kurstaki、又はBacillus thuringiensis var.tenebrionensis。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensisから単離されたタンパク質であり得る。例えば、一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis var.israelensis、Bacillus thuringiensis var.aizawai、Bacillus thuringiensis var.kurstaki、又はBacillus thuringiensis var.tenebrionensisから単離された毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、MTX2毒素(例えば、Lysinibacillus sphaericusから単離されたMTX2毒素)であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Bin様毒素(例えば、Lysinibacillus sphaericusから単離されたBin様毒素)であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144 Bti毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19 Btk毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176 Btt毒素であり得る。
一部の実施形態では、Bacillus thuringiensisから単離されたIAは、市販の製品に含まれ得る。例えば、一部の実施形態では、IAを含む市販の製品は、Becker Microbial Products,Inc.からのAQUABAC XT(登録商標)、VALENT(登録商標)U.S.A.LLC Agricultural ProductsからのNOVODOR(登録商標)FC、及び/又はAEF Global Inc.からのBioProtec Plus(商標)であり得る。
一部の実施形態では、IAは、1つ以上のBacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19細胞であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19細胞から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、及び/又は殺虫毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、1つ以上のBacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176細胞であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176細胞から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、及び/又は殺虫毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、1つ以上のBacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144細胞であり得る。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144細胞から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、及び/又は殺虫毒素であり得る。
一部の実施形態では、IAは、AQUABAC XT(登録商標)であり得、以下の成分:6~10%(約8%)のBacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144の固形物、胞子、及び殺虫毒素(当該殺虫毒素が、δ-エンドトキシンであり、1,200国際毒性単位(ITU/mg)に相当する(48.4億ITU/ガロン又は12億ITU/リットル))と、約92%の他の/不活性成分と、からなる。
一部の実施形態では、IAは、NOVODOR(登録商標)FC(又は流動性濃縮物)であり得、10%のBacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176の発酵固形物及び可溶物(製品1グラム当たり15,000Leptinotarsa単位(LTU)(製品1クォート当たり1630万LTUに相当)の効力を有する)と、90%の他の/不活性成分と、からなる。
一部の実施形態では、IAは、BioProtec Plus(商標)であり得、14.49%のBacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19の発酵固形物、胞子、及び殺虫毒素(製品1mg当たり17,500キャベッジルーパー単位(CLU)(製品1ガロン当たり760億CLUに相当)の効力を有する)と、85.51%の他の/非活性成分と、からなる。
一部の実施形態では、IAは、Bt毒素であり得、当該Bt毒素が、δ-エンドトキシン(例えば、結晶(Cry)毒素及び/若しくは細胞溶解(Cyt)毒素)、植物性殺虫タンパク質(Vip)、分泌型殺虫タンパク質(Sip)、又はBin様毒素である。
一部の実施形態では、IAは、Bt毒素であり得、配列番号412~587のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、IAは、Cryタンパク質であり得、配列番号412~461のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、IAは、Cytタンパク質であり得、配列番号462~481のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、IAは、Vipであり得、配列番号482~587のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、IAは、以下のCryタンパク質のうちの1つ以上であり得る:Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A様、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb様、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H様、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I様、Cry1I様、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1様、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A様、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba様、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8様、Cry8様、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa、like、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9様、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A様、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa様、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20様、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、
Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43様、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1、及び/又はCry78Aa1。
一部の実施形態では、IAは、任意の本明細書に記載されるCry毒素又は表7に提示されるCry毒素であり得る。
Figure 2023524083000032
Figure 2023524083000033
Figure 2023524083000034
Figure 2023524083000035
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Figure 2023524083000053
Figure 2023524083000054
一部の実施形態では、IAは、以下のCytタンパク質のうちの1つ以上であり得る:Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa様、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba様、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B様、Cyt2Ca1、及び/又はCyt3Aa1。
一部の実施形態では、IAは、任意の本明細書に記載されるCyt毒素又は表8に提示されるCyt毒素であり得る。
Figure 2023524083000055
Figure 2023524083000056
一部の実施形態では、IAは、Vip1、Vip2、Vip3、又はVip4ファミリーに属するタンパク質であり得る。例えば、一部の実施形態では、IAは、以下のVipタンパク質のうちの1つ以上であり得る:Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4、及び/又はVip4Aa1。
一部の実施形態では、IAは、任意の本明細書に記載されるVipタンパク質又は表9に提示されるVipタンパク質であり得る。
Figure 2023524083000057
Figure 2023524083000058
Figure 2023524083000059
Figure 2023524083000060
Figure 2023524083000061
CRIP及びIAの組み合わせ
前述のCRIP又はIAのうちのいずれかが、本発明の混合物及び/又は組成物を作製するために使用され得、当該混合物及び/又は組成物は、少なくとも1つのCRIPと、少なくとも1つの他のIと、を含む。
本明細書で特定されるポリペプチドを参照して記載及び組み込まれるものは、かかる配列と相同性を有するか又は本明細書で言及される上述の配列の相同バリアントであり、本明細書に開示される配列又は参照により援用される配列のうちのいずれかと、少なくとも以下のパーセント同一性:上述の配列で特定されるあらゆる配列及び本出願の配列表にある全ての配列を含む本明細書で特定される任意の他の配列と50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%以上の同一性、又は100%の同一性、を有する全ての相同配列を含む。本明細書において、例えば、50%以上の数を伴って、相同又は相同性という用語が使用される場合、それは、2つのペプチド間のパーセント同一性又はパーセント類似性を意味する。相同又は相同性が、数値パーセントなしで使用される場合、それが、局所毒性及び同様のサイズ(すなわち、相同性が、本明細書で具体的に言及されるペプチド又は上記のように本明細書で参照により特定されるペプチドの100%を超える長さ又は50%より短いの長さである)のように、共通の物理的及び機能的な態様を共有するという点で、進化的又は発生的な態様で密接に関連している2つのペプチド配列を指す。
一部の実施形態では、混合物は、本明細書に記載の任意のCRIPと、本明細書に記載の任意のIAと、からなることができる。
一部の実施形態では、混合物は、1つ以上のIAを、1つ以上のCRIPと組み合わせて含むことができ、混合物が、賦形剤を更に含む。
CRIP及びIAの組み合わせ
一部の実施形態では、表Aに提示されるCRIPのうちのいずれか1つ以上は、表Bに提示されるIAのうちのいずれか1つ以上と組み合わせられ得る。
以下の表A及び表Bは、それぞれ、本発明の好ましいCRIP及びIAを提示する。両方の表には、「グループ番号」及び「グループ名」が提供されている。これらの名称により、所与のCRIP又はIAが属するカテゴリーが特定される。CRIPのグループ番号の前には、ローマ数字の「I」が付される(例えば、I1、I2、I3など)。殺虫剤(IA)のグループ番号の前には、ローマ数字の「II」が付される(例えば、II2、II3、II3など)。更なるレベルの特異性には、「CRIP番号」及び「IA番号」が提供され、これらの名称により、具体的なCRIP又はIAが特定される。CRIP番号の前には、「A」が付される(例えば、A1、A2、A3など)。IA番号の前には、「B」が付される(例えば、B1、B2、B3など)。
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Figure 2023524083000078
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表Aから選択される1つ以上のCRIP又はその組み合わせと、表Bから選択される1つ以上の殺虫剤(IA)又はその組み合わせと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、CRIPグループI1、I2、I3、I4、I5、I6、I7、又はその組み合わせのうちのいずれか1つから選択される1つ以上のCRIPを、IAグループII1、II2、II3、II4、II5、II6、II7、II8、II9、II10、II11、II12、II13、II14、II15、II16、II17、II18、II19、II20、II21、II22、II23、II24、II25、II26、II27、II28、II29、II30、II31、II32、II33、II34、II35、II36、II37、II38、II39、II40、II41、II42、II43、II44、II45のいずれか1つ以上のIA又はその組み合わせと組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20、A21、A22、A23、A24、A25、A26、A27、A28、A29、A30、A31、A32、A33、A34、A35、A36、A37、A38、A39、A40、A41、A42、A43、A44、A45、A46、A47、A48、A49、A50、A51、A52、A53、A54、A55、A56、A57、A58、A59、A60、A61、A62、A63、A64、A65、A66、A67、A68、又はその組み合わせから選択されるCRIPを、B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9、B10、B11、B12、B13、B14、B15、B16、B17、B18、B19、B20、B21、B22、B23、B24、B25、B26、B27、B28、B29、B30、B31、B32、B33、B34、B35、B36、B37、B38、B39、B40、B41、B42、B43、B44、B45、B46、B47、B48、B49、B50、B51、B52、B53、B54、B55、B56、B57、B58、B59、B60、B61、B62、B63、B64、B65、B66、B67、B68、B69、B70、B71、B72、B73、B74、B75、B76、B77、B78、B79、B80、B81、B82、B83、B84、B85、B86、B87、B88、B89、B90、B91、B92、B93、B94、B95、B96、B97、B98、B99、B100、B101、B102、B103、B104、B105、B106、B107、B108、B109、B110、B111、B112、B113、B114、B115、B116、B117、B118、B119、B120、B121、B122、B123、B124、B125、B126、B127、B128、B129、B130、B131、B132、B133、B134、B135、B136、B137、B138、B139、B140、B141、B142、B143、B144、B145、B146、B147、B148、B149、B150、B151、B152、B153、B154、B155、B156、B157、B158、B159、B160、B161、B162、B163、B164、B165、B166、B167、B168、B169、B170、B171、B172、B173、B174、B175、B176、B177、B178、B179、B180、B181、B182、B183、B184、B185、B186、B187、B188、B189、B190、B191、B192、B193、B194、B195、B196、B197、B198、B199、B200、B201、B202、B203、B204、B205、B206、B207、B208、B209、B210、B211、B212、B213、B214、B215、B216、B217、B218、B219、B220、B221、B222、B223、B224、B225、B226、B227、B228、B229、B230、B231、B232、B233、B234、B235、B236、B237、B238、B239、B240、B241、B242、B243、B244、B245、B246、B247、B248、B249、B250、B251、B252、B253、B254、B255、B256、B257、B258、B259、B260、B261、B262、B263、B264、B265、B266、B267、B268、B269、B270、B271、B272、B273、B274、B275、B276、B277、B278、B279、B280、B281、B282、B283、B284、B285、B286、B287、B288、B289、B290、B291、B292、B293、B294、B295、B296、B297、B298、B299、B300、B301、B302、B303、B304、B305、B306、B307、B308、B309、B310、B311、B312、B313、B314、B315、B316、B317、B318、B319、B320、B321、B322、B323、B324、B325、B326、B327、B328、B329、B330、B331、B332、B333、B334、B335、B336、B337、B338、B339、B340、B341、B342、B343、B344、B345、B346、B347、B348、B349、B350、B351、B352、B353、B354、B355、B356、B357、B358、B359、B360、B361、B362、B363、B364、B365、B366、B367、B368、B369、B370、B371、B372、B373、B374、B375、B376、B377、B378、B379、B380、B381、B382、B383、B384、B385、B386、B387、B388、B389、B390、B391、B392、B393、B394、B395、B396、B397、B398、B399、B400、B401、B402、B403、B404、B405、B406、B407、B408、B409、B410、B411、B412、B413、B414、B415、B416、B417、B418、B419、B420、B421、B422、B423、B424、B425、B426、B427、B428、B429、B430、B431、B432、B433、B434、B435、B436、B437、B438、B439、B440、B441、B442、B443、B444、B445、B446、B447、B448、B449、B450、B451、B452、B453、B454、B455、B456、B457、B458、B459、B460、B461、B462、B463、B464、B465、B466、B467、B468、B469、B470、B471、B472、B473、B474、B475、B476、B477、B478、B479、又はその組み合わせから選択されるIAと組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A1を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A2を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A3を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A4を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A5を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A6を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A7を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A8を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A9を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A10を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A11を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A12を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A13を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A14を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A15を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A16を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A17を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A18を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A19を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A20を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A21を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A22を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A23を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A24を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A25を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A26を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A27を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A28を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A29を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A30を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A31を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A32を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A33を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのCRIP A34を、表BのB1~B479からなる群から選択されるいずれか1つ以上の殺虫剤(IA)と組み合わせて、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、表AからのA1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20、A21、A22、A23、A24、A25、A26、A27、A28、A29、A30、A31、A32、A33、A34、A35、A36、A37、A38、A39、A40、A41、A42、A43、A44、A45、A46、A47、A48、A49、A50、A51、A52、A53、A54、A55、A56、A57、A58、A59、A60、A61、A62、A63、A64、A65、A66、A67、又はA68から選択されるCRIPであって、当該CRIPが、それぞれ、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、49、50、51、52、53、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、66、88、588、44、45、46、47、60、61、62、63、64、594、又は65に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるCRIPを、含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。
一部の実施形態では、本発明の混合物は、CRIPと、IAと、を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなり得、CRIPペプチドが、配列番号192~370のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するクモペプチド、配列番号60~64、192~370、及び594のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するACTXペプチド(例えば、U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、κ-ACTX-Hv1a、κ+2-ACTX-Hv1a、ω-ACTX-Hv1a、及び/若しくはω+2-ACTX-Hv1a)、配列番号65のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a、配列番号1に示されるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチド、配列番号2~15、49~53、2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、若しくは653~654のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)、配列番号66、88~191のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するサソリペプチド、配列番号371~411のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するイソギンチャクペプチド、配列番号44に示されるアミノ酸配列を有するAnemonia viridis由来のAv3ポリペプチド、配列番号45~47のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するAv3バリアントポリペプチド(AVP)、又はコノトキシンと、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、少なくとも99.9%、若しくは100%のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなり得、IAが、表Bに列挙されるIAであり、IAが、B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9、B10、B11、B12、B13、B14、B15、B16、B17、B18、B19、B20、B21、B22、B23、B24、B25、B26、B27、B28、B29、B30、B31、B32、B33、B34、B35、B36、B37、B38、B39、B40、B41、B42、B43、B44、B45、B46、B47、B48、B49、B50、B51、B52、B53、B54、B55、B56、B57、B58、B59、B60、B61、B62、B63、B64、B65、B66、B67、B68、B69、B70、B71、B72、B73、B74、B75、B76、B77、B78、B79、B80、B81、B82、B83、B84、B85、B86、B87、B88、B89、B90、B91、B92、B93、B94、B95、B96、B97、B98、B99、B100、B101、B102、B103、B104、B105、B106、B107、B108、B109、B110、B111、B112、B113、B114、B115、B116、B117、B118、B119、B120、B121、B122、B123、B124、B125、B126、B127、B128、B129、B130、B131、B132、B133、B134、B135、B136、B137、B138、B139、B140、B141、B142、B143、B144、B145、B146、B147、B148、B149、B150、B151、B152、B153、B154、B155、B156、B157、B158、B159、B160、B161、B162、B163、B164、B165、B166、B167、B168、B169、B170、B171、B172、B173、B174、B175、B176、B177、B178、B179、B180、B181、B182、B183、B184、B185、B186、B187、B188、B189、B190、B191、B192、B193、B194、B195、B196、B197、B198、B199、B200、B201、B202、B203、B204、B205、B206、B207、B208、B209、B210、B211、B212、B213、B214、B215、B216、B217、B218、B219、B220、B221、B222、B223、B224、B225、B226、B227、B228、B229、B230、B231、B232、B233、B234、B235、B236、B237、B238、B239、B240、B241、B242、B243、B244、B245、B246、B247、B248、B249、B250、B251、B252、B253、B254、B255、B256、B257、B258、B259、B260、B261、B262、B263、B264、B265、B266、B267、B268、B269、B270、B271、B272、B273、B274、B275、B276、B277、B278、B279、B280、B281、B282、B283、B284、B285、B286、B287、B288、B289、B290、B291、B292、B293、B294、B295、B296、B297、B298、B299、B300、B301、B302、B303、B304、B305、B306、B307、B308、B309、B310、B311、B312、B313、B314、B315、B316、B317、B318、B319、B320、B321、B322、B323、B324、B325、B326、B327、B328、B329、B330、B331、B332、B333、B334、B335、B336、B337、B338、B339、B340、B341、B342、B343、B344、B345、B346、B347、B348、B349、B350、B351、B352、B353、B354、B355、B356、B357、B358、B359、B360、B361、B362、B363、B364、B365、B366、B367、B368、B369、B370、B371、B372、B373、B374、B375、B376、B377、B378、B379、B380、B381、B382、B383、B384、B385、B386、B387、B388、B389、B390、B391、B392、B393、B394、B395、B396、B397、B398、B399、B400、B401、B402、B403、B404、B405、B406、B407、B408、B409、B410、B411、B412、B413、B414、B415、B416、B417、B418、B419、B420、B421、B422、B423、B424、B425、B426、B427、B428、B429、B430、B431、B432、B433、B434、B435、B436、B437、B438、B439、B440、B441、B442、B443、B444、B445、B446、B447、B448、B449、B450、B451、B452、B453、B454、B455、B456、B457、B458、B459、B460、B461、B462、B463、B464、B465、B466、B467、B468、B469、B470、B471、B472、B473、B474、B475、B476、B477、B478、B479、又はその組み合わせである。
一部の実施形態では、CRIPとIAの比は、乾燥重量基準で、以下の比:少なくとも約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、若しくは1:10,000、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせから選択することができる。混合物中のCRIP及びIAの総濃度は、以下のパーセント濃度:0、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、若しくは100%、又はこれらの値のうちのいずれか2つの間の任意の範囲から選択され、混合物の残りのパーセントは、賦形剤からなる。
本明細書に記載される、1つ以上のCRIPと、1つ以上のIAと、を含む前述の混合物、組成物、又は製剤のいずれかは、賦形剤を更に含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
1つ以上のCRIPと、1つ以上のIAと、を含む前述の混合物又は組成物のいずれかは、同じ組成物又は別個の組成物のいずれかで、同時に及び/又は順次適用され得る。CRIPとIAの比は、標的とする害虫、及び使用者のニーズに依存するであろう。
更に、1つ以上のCRIPと、1つ以上のIAと、を含む前述の混合物又は組成物のいずれかは、作物領域又は植物に適用され得、他の化合物と同時に又は順次処理される。例えば、一部の実施形態では、これらの他の化合物は、肥料、除草剤、凍結保護剤、界面活性剤、洗剤、殺虫石鹸、休眠油、ポリマー、及び/又は製剤の単回適用後の標的領域の長期投薬を可能にする徐放性若しくは生分解性の担体製剤であり得る。また、他の化合物は、必要に応じて、製剤分野で慣習的に用いられる更なる農業的に許容される担体、界面活性剤、又は適用促進アジュバントとともに、選択的除草剤、化学的殺虫剤、殺ウイルス剤、殺微生物剤、殺アメーバ剤、農薬、殺真菌剤、細殺菌剤、殺線虫剤、殺軟体動物剤、又はこれらの調製物のうちのいくつかの混合物であり得る。一部の実施形態では、好適な担体及びアジュバントは、固体又は液体であり得、製剤技術において通常用いられる物質(例えば、天然又は再生ミネラル物質、溶媒、分散剤、湿潤剤、粘着剤、結合剤、又は肥料に相当する。同様に、前述の混合物、組成物、又は製剤のうちのいずれかは、農薬製剤の標的害虫による摂食又は摂取を可能にするために、食用の「ベイト」に調製され得るか、又は害虫の「トラップ」に加工され得る。
組成物及び製剤
本明細書で使用される場合、「組成物」及び「製剤」という用語は、互換的に使用される。
% v/v、% w/w、及び% w/v
本明細書で使用される場合、「v/v」又は「% v/v」又は「体積当たりの体積」は、溶液の体積濃度を指す(「v/v」は体積当たりの体積を表す)。ここで、v/vは、溶液の両方の成分が液体である場合に使用することができる。例えば、50mLの成分Xを50mLの水で希釈すると、100mLの総体積に50mLの成分Xが存在することになり、したがって、これは、「50% v/vの成分X」として表すことができる。体積当たりの体積パーセント(% v/v)は、以下のように計算される。(溶質の体積(mL)/溶液の体積(100mL));例えば、% v/v=mLの溶質/100mLの溶液。
本明細書で使用される場合、「w/w」又は「% w/w」又は「重量/重量」又は「wt/wt」又は「% wt/wt」は、製剤又は溶液の重量濃度、すなわち、重量/重量パーセント(「w/w」は、重量当たりの重量を表す)を指す。ここで、w/wは、100gの溶液又は混合物中の構成成分のグラム数(g)を表す。例えば、30gの成分X、及び70gの水からなる混合物は、「30% w/wの成分X」として表される。重量当たりの重量パーセント(% w/w)は、以下のように計算される:(溶質の重量(g)/溶液の重量(g))×100、又は(溶質の質量(g)/溶液の質量(g))×100。
本明細書で使用される場合、「w/v」又は「% w/v」又は「体積当たりの重量」は、溶液の質量濃度、すなわち、重量/体積パーセントを指す(「w/v」は体積当たりの重量を表す)。ここで、w/vは、100mLの溶液中の構成成分のグラム(g)の数を表す。例えば、1gの成分Xを使用して、100mLの総体積を構成する場合、「成分Xの1% w/v溶液」が作られている。体積当たりの重量パーセント(% w/v)は、以下のように計算される:(溶質の質量(g)/溶液の体積(mL))×100。
組成物は、(1)CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、その薬学的に許容される塩、又はその組み合わせと、(2)1つ以上の殺虫剤(例えば、農薬組成物は、エアロゾル及び/又はエアロゾル化生成物(例えば、噴霧、燻蒸剤、粉末、粉塵、及び/又はガス)、種子粉衣、経口調製物(例えば、昆虫の餌など)と、から本質的になるか、又はそれからなり、TVP、TVP-殺虫タンパク質、及び/又はTVP ORFを(一過的及び/又は安定的のいずれか)発現及び/又は産生するトランスジェニック生物(例えば、植物又は動物)を含むことができるが、これらに限定されない。
組成物は、粉末、粉塵、ペレット、顆粒、噴霧、エマルション、コロイド、溶液などとして製剤化することができ、ポリペプチドを含む細胞培養物の乾燥、凍結乾燥、均質化、抽出、濾過、遠心分離、沈降、又は濃縮などの従来の手段によって調製することができる。少なくとも1つのかかる農薬ポリペプチドを含有する全てのかかる組成物では、ポリペプチドが、約1重量%~約99重量%の濃度で存在し得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載の農薬組成物は、CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又はその薬学的に許容される塩のいずれかを、所望の農業的に許容される担体とともに、製剤化することによって作製することができる。組成物は、投与前、凍結乾燥(lyophilized)、凍結乾燥(freeze-dried)、乾燥、又は水性担体、培地、又は好適な希釈剤(例えば、生理食塩水及び/若しくは他の緩衝液)などの適切な手段で製剤化され得る。一部の実施形態では、製剤化された組成物は、粉塵材料若しくは粒状材料、又は油(植物油若しくはミネラルオイル)エマルション、若しくは水エマルション、若しくは油/水エマルション中の懸濁液、又は水和剤、又は農業用途に好適な任意の他の担体材料と組み合わせた形態であり得る。好適な農業的担体は、固体又は液体であり得、当該技術分野において周知である。一部の実施形態では、製剤は、1つ以上の固体又は液体アジュバントと混合され得、様々な手段によって、例えば、従来の製剤技術を使用して、農薬組成物を適切なアジュバントと均一に混合、ブレンド、及び/又は粉砕することによって調製され得る。好適な製剤化及び適用方法は、米国特許第6,468,523号に記載されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
一部の実施形態では、組成物は、CRIP又はその薬学的に許容される塩と、殺虫剤と、賦形剤と、を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる。
一部の実施形態では、組成物は、CRIP-殺虫タンパク質又はその薬学的に許容される塩と、殺虫剤と、賦形剤と、を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる。
一部の実施形態では、組成物は、(1)CRIP若しくはその薬学的に許容される塩、CRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)1つ以上の殺虫剤と、(3)賦形剤と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
薬学的に許容される塩
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」及び「農業的に許容される塩」という用語は、同義である。一部の実施形態では、適用可能な場合、本明細書に記載のCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、及び/又は殺虫剤の、薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、結晶形態、並びに個々の異性体、鏡像異性体、互変異性体、ジアステレオマー、及びプロドラッグを利用することができる。
一部の実施形態では、本発明の薬学的に許容される塩は、親化合物の所望の薬理活性を有する。かかる塩には、無機酸で形成される酸付加塩、有機酸で形成される酸付加塩、又は親化合物中に存在する酸性プロトンが金属イオン(例えば、アルカリ金属イオン、アルミニウムイオン)によって置き換えられるときに形成される塩、又は有機塩基(例えば、エタノールアミン)との配位が含まれる。
一部の実施形態では、薬学的に許容される塩は、従来の毒性又は非毒性の塩を含む。例えば、一部の実施形態では、従来の非毒性塩には、フマル酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、塩酸塩などのものが含まれる。一部の実施形態では、本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって親化合物から合成することができる。一部の実施形態では、かかる塩は、これらの化合物の遊離酸形態又は遊離塩基形態を、水中若しくは有機溶媒中若しくはこれら2つの混合物中で、化学量論的な量の適切な塩基又は酸と反応させることによって調製することができる。一部の実施形態では、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、又はアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい。好適な塩のリストは、Remington’s Pharmaceutical Sciences,17th ed.,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,p.1418に見出される(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
一部の実施形態では、薬学的に許容される塩は、塩酸塩、ナトリウム、硫酸塩、酢酸塩、リン酸塩又は二リン酸塩、塩化物、カリウム、マレイン酸塩、カルシウム、クエン酸塩、メシル酸塩、硝酸塩、酒石酸塩、アルミニウム、又はグルコン酸塩のうちの1つであり得る。
一部の実施形態では、塩を形成するために使用することができる薬学的に許容される酸のリストは、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イソ酪酸、乳酸(DL)、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸(-L)、マロン酸、マンデル酸(DL)、メタンスルホン酸、ナフタレン-1,5-ジスルホン酸、ナフタレン-2-スルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、プロプリオン酸(proprionic acid)、ピログルタミン酸(-L)、サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸(+L)、チオシアン酸、トルエンスルホン酸(p)、ウンデシレン酸、1-ヒドロキシ-2-ナフトエ酸、2,2-ジクロロ酢酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、2-オキソグルタル酸、4-アセトアミド安息香酸、4-アミノサリチル酸、酢酸、アジピン酸、アスコルビン酸(L)、アスパラギン酸(L)、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、樟脳酸(+)、樟脳-10-スルホン酸(+)、カプリン酸(デカン酸)、カプロン酸(ヘキサン酸)、カプリン酸(オクタン酸)、炭酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン-1,2-ジスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコヘプトン酸(D)、グルコン酸(D)、グルクロン酸(D)、グルタミン酸、グルタル酸、又はグリセロリン酸を含む。
一部の実施形態では、薬学的に許容される塩は、任意の有機付加塩又は無機付加塩であり得る。
一部の実施形態では、塩は、遊離酸として無機酸及び有機酸を使用することができる。無機酸は、塩酸、臭素酸、硝酸、硫酸、過塩素酸、リン酸などであってもよい。有機酸は、クエン酸、酢酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、グルコン酸、コハク酸、酒石酸、ガラクツロン酸、エンボン酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、シュウ酸、(D)又は(L)リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、4-トルエンスルホン酸、サリチル酸、クエン酸、安息香酸、マロン酸などであってもよい。
一部の実施形態では、塩は、アルカリ金属塩(ナトリウム塩、カリウム塩など)及びアルカリ土類金属塩(カルシウム塩、マグネシウム塩など)を含む。例えば、酸付加塩としては、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、重炭酸塩/炭酸水素塩、重硫酸塩/硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、エシル酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルクロン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩/塩化物、臭化水素塩/臭化物、ヨウ化水素酸塩/ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフタレン酸塩、2-ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロト酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩/リン酸水素塩/リン酸二水素塩、サッカリン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アルミニウム、アルギニン、ベンザチン、カルシウム、コリン、ジエチルアミン、ジオラミン、グリシン、リジン、マグネシウム、メグルミン、オラミン、カリウム、ナトリウム、トロメタミン、亜鉛塩などが挙げられ、なかでも、塩酸塩、トリフルオロ酢酸塩などが使用され得る。
更に他の実施形態では、薬学的に許容される塩は、酢酸、プロピオン酸、酪酸、ギ酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、ステアリン酸、コハク酸、エチルコハク酸、ラクトビオン酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、ラウリル硫酸、リンゴ酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、アジピン酸、システイン、N-アセチルシステイン、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、ヨウ化水素酸、ニコチン酸、シュウ酸、ピクリン酸、チオシアン酸、ウンデカン酸、ポリアクリル酸、又はカルボキシルビニルポリマーなどの酸との塩であり得る。
一部の実施形態では、薬学的に許容される塩は、無機塩基又は有機塩基のいずれかから調製され得る。無機塩基に由来する塩には、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、第一鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム、第二鉄、マンガン塩などが含まれるが、これらに限定されない。好ましい無機塩は、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、及びマグネシウム塩である。有機塩基に由来する塩には、限定されないが、一級、二級、及び三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、並びに環状アミンを含み、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、2-ジメチルアミノエタノール、トロメタミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、N-アルキルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、N-エチルピペリジンなどが挙げられる。好ましい有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、ピペリジン、トロメタミン、及びコリンである。
一部の実施形態では、薬学的に許容される塩は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴わずに、ヒト及び下等動物の組織と接触させて使用するのに好適であり、合理的な利益/リスク比に見合った塩を指す。薬学的に許容される塩は、当該技術分野で周知である。例えば、薬学的に許容される塩は、S.M.BergeらのJ.Pharmaceutical Sciences,66:1-19(1977)に詳細に記載されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
一部の実施形態では、本発明の化合物の最終的な単離及び精製中に、又は遊離塩基の官能基を好適な有機酸と別々に反応させることによって、本発明の塩をインサイツで調製することができる。薬学的に許容される非毒性の酸付加塩の例は、アミノ基の塩であり、無機酸(例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、及び過塩素酸)、又は有機酸(例えば、酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、若しくはマロン酸)と形成されるか、又はイオン交換などの当該技術分野で使用される他の方法を使用することによって形成される。他の薬学的に許容される塩としては、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、3-フェニルピオロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピルビン酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが含まれる。更なる薬学的に許容される塩としては、適切な場合、非毒性のアンモニウム、四級アンモニウム、及びアミンカチオン(ハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩、及びアリールスルホン酸塩などの対イオンを使用して形成される)が挙げられる。
薬学的に許容される塩の例示的な記載は、P.H.Stahl and C.G.Wermuth,(editors),Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties,Selection and Use,John Wiley & Sons,Aug 23,(2002)に提供されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
噴霧用組成物
本発明の噴霧産物の例としては、農業用途のフィールド噴霧用製剤及び居住空間又は商業空間の内部空間で使用するための屋内噴霧が挙げられ得る。一部の実施形態では、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、1つ以上の殺虫剤:B1~B479と、の組み合わせを含む残留噴霧(residual spray)又は空間噴霧(space spray)を使用して、内部空間の害虫を低減又は除去することができる。
室内表面噴霧(surface spraying indoors)(SSI)は、壁、窓、床、天井などの媒介生物がいる室内表面に、可変量の噴霧可能な量の殺虫剤を適用する技術である。可変量の噴霧可能な量の主な目標は、害虫(例えば、ハエ、ノミ、ダニ、又は蚊の媒介生物)の寿命を減少させ、それによって、病気の伝染を軽減又は阻止することである。二次的な影響は、処理領域内の害虫の密度を減少させることである。SSIは、ライム病、サルモネラ、チングニアウイルス、ジカウイルス、及びマラリアなどの媒介害虫疾患を制御するための方法として使用することができ、また、リーシュマニア症及びシャーガス病などの媒介昆虫によって運ばれる寄生虫の管理にも使用することができる。ジカウイルス、チングニアウイルス、マラリアを保有する多くの媒介蚊には、血液を吸った後に家の中にいる内向性(endophilic)の媒介蚊が含まれる。これらの蚊は、特に、(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含む噴霧用組成物による室内表面噴霧(SSI)を通して制御することが容易である。その名が示すように、SSIは、残留殺虫剤による家の壁及び他の表面に組成物を適用することを伴う。
一実施形態では、(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含む組成物は、これらの表面と接触する害虫をノックダウンする。SSIは、人が蚊に噛まれるのを直接防ぐものではない。むしろ、SSIは、通常、蚊が血液を吸った後、噴霧された表面にいる場合、害虫を制御する。したがって、SSIは、他の人への感染の伝播を防止する。効果を発揮するには、ある地域の非常に高い割合(通常、40~80パーセント超)の世帯に、SSIを適用する必要がある。したがって、良好な残留有効性及び許容可能な臭気を有する本発明による噴霧は、一体化された媒介害虫を管理又は制御する溶液の成分として特に好適である。
活性CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又は殺虫剤が、塗料のように住居の表面(例えば、壁又は天井)に結合することを必要とするSSIとは対照的に、例えば、本発明の空間噴霧生成物は、所与の期間にわたって空気中に散布されることが意図された多数の小さな殺虫液滴の生成に依存する。これらの液滴が標的害虫に影響を及ぼす場合、それらは、害虫を制御するのに有効なノックダウン有効用量のCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又は殺虫剤を送達する。空間噴霧を生成するための従来の方法には、熱噴霧(それによって、(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含む組成物の厚い霧の外観を与える高密度の雲が生成される)及び極微量散布(Ultra Low Volume)(ULV)が含まれ、それによって、液滴は、機械式冷エアロゾル発生機によって生成される。エアゾル缶などのすぐに使用できるエアゾルも使用され得る。
広い地域を一度に処理可能であるため、前述の方法は、特定の地域における飛来害虫の個体数を迅速に減少させるための非常に効果的な方法である。また、適用からの残存活性が非常に限られているため、完全に有効にするには、5~7日間隔で繰り返す必要がある。この方法は、害虫の数を迅速に減少させる必要がある流行状況において、特に効果的であり得る。そのため、都市部のデング熱対策キャンペーンで使用することができる。
効果的な空間散布は、一般に、以下の特定の原理に依存する。標的昆虫は、通常、噴霧雲を飛翔している(又は、露出した表面にいる間に影響を受けることがある)。したがって、噴霧液滴と標的昆虫との間の接触の効率が重要である。これは、噴霧液滴が最適な期間空気中に残り、適切な用量の殺虫剤を含むことを確実にすることによって達成される。これら2つの問題は、主に、液滴サイズを最適化することによって対処される。液滴が大きすぎると、急速に地面に落ち、適用中に遭遇した植生又は他の障害物に浸透しない(適用の有効面積を制限する)。これらの大きな液滴の1つが個々の昆虫に影響を与える場合、個々の昆虫ごとに高用量が送達されるため、それは「オーバーキル」でもある。液滴が小さすぎると、空気力学により標的昆虫に付着しないか(衝突しない)、対流によって大気中に上へと運ばれ得る。空間散布を適用するための液滴の最適なサイズは、体積中央径(VMD)が10~25ミクロンの液滴である。
一部の実施形態では、噴霧用組成物は、約0.005重量%~約99重量%の範囲の、表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)の組み合わせを含む量を含有することができる。
一部の実施形態では、噴霧用組成物は、約0.005重量%~約99重量%の範囲の、表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)の組み合わせを含む量を含有することができる。
フォーム
(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含む本発明の活性組成物は、エアロゾルベースの適用として(エアロゾル化フォームの適用を含む)、噴霧製品で利用可能になり得る。加圧缶は、エアロゾルを形成するための典型的なビヒクルである。CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又は使用される殺虫剤と適合性のあるエアロゾル噴射剤。好ましくは、液化ガス式噴射剤が使用される。
好適な噴射剤としては、圧縮空気、二酸化炭素、ブタン、及び窒素が挙げられる。活性化合物組成物中の噴射剤の濃度は、ピリジン組成物の約5重量%~約40重量%、好ましくは、(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含む組成物の約15重量%~約30重量%である。
一実施形態では、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はその薬学的に許容される塩からなる製剤はまた、1つ以上の発泡剤を含み得る。使用され得る発泡剤としては、ラウレス硫酸ナトリウム、コカミドDEA、及びコカミドプロピルベタインが挙げられる。好ましくは、ラウレス硫酸ナトリウム、コカミドDEA、及びコカミドプロピルが、組み合わせて使用される。活性化合物組成物中の発泡剤の濃度は、組成物の約10重量%~約25重量%、より好ましくは、15重量%~20重量%である。
かかる製剤が発泡剤を含まないエアゾル用途で使用される場合、使用する前に直接混合する必要がなく、本発明の活性組成物を使用することができる。しかしながら、発泡剤を含むエアロゾル製剤は、使用直前に混合(すなわち、振盪)する必要がない。加えて、発泡剤を含む製剤を長期間使用する場合、それらは、使用中に定期的に追加の混合を必要とする場合がある。
一部の実施形態では、噴霧用組成物は、約0.005重量%~約99重量%の範囲の、表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)の組み合わせを含む量を含有することができる。
一部の実施形態では、噴霧用組成物は、約0.005重量%~約99重量%の範囲の、表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)の組み合わせを含む量を含有することができる。
燃焼製剤
一部の実施形態では、居住地域はまた、活性CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又は殺虫剤組成物を、ロウソク、スモークコイル、若しくは香片含有組成物などの燃焼製剤(burning formulation)を使用することによって、処理することもできる。例えば、組成物は、「加熱式」芳香剤(air freshener)などの家庭用品に製剤化され得、殺虫性組成物が(例えば、電気的に又は燃焼によって)加熱時に放出される。本発明の活性化合物組成物は、(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含み、エアロゾル、モスキートコイル、及び/又は気化器若しくは噴霧器フォガーとして噴霧製品で利用可能になり得る。
一部の実施形態では、噴霧用組成物は、約0.005重量%~約99重量%の範囲の、表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)の組み合わせを含む量を含有することができる。
一部の実施形態では、噴霧用組成物は、約0.005重量%~約99重量%の範囲の、表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)の組み合わせを含む量を含有することができる。
生地処理
一部の実施形態では、(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含む、農薬的に有効な組成物を含む布地及び衣服を作製することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の高分子材料、繊維、糸、織物、網物、又は基質中のCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又は殺虫剤の濃度は、例えば、0.05~15重量%、好ましくは0.2~10重量%、より好ましくは0.4~8重量%、特に0.5~5重量%、例えば、1~3重量%の比較的広い濃度範囲内で変化させることができる。
同様に、(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)(表面を処理するための、又は繊維、糸、網物、織物をコーティングするための)賦形剤と、の組み合わせを含む組成物の濃度は、例えば、0.1~70重量%、例えば、0.5~50重量%、好ましくは、1~40重量%、より好ましくは、5~30重量%、特に、10~20重量%の比較的広い濃度範囲内で変化させることができる。
CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又は殺虫剤の濃度は、ノックダウン有効性、耐久性、及び毒性に関する要件が満たされるように、適用分野に応じて選択することができる。材料の特性を適応させることもでき、このようにしてカスタマイズされた織物生地を入手することができる。
したがって、有効量のCRIP又は殺虫剤は、特定の使用パターン、制御が最も望まれる害虫、及びCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又は殺虫剤が使用されるであろう環境に依存し得る。したがって、CRIP又は殺虫剤の有効量は、害虫の制御が達成されるのに十分である。
一部の実施形態では、噴霧用組成物は、約0.005重量%~約99重量%の範囲の、表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)の組み合わせを含む量を含有することができる。
一部の実施形態では、噴霧用組成物は、約0.005重量%~約99重量%の範囲の、表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)の組み合わせを含む量を含有することができる。
表面処理組成物
一部の実施形態では、本開示は、(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含む組成物又は製剤を提供し、これは、建物の内部の壁、床、及び天井をコーティングするため、並びに基質又は非生物材料をコーティングするためである。(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含む本発明の組成物は、その目的を念頭に、既知の技術を使用して調製することができる。(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含む組成物の調製は、表面又は他の基質への化合物の結合を促進するための結合剤も含むように製剤化することができる。結合に有用な薬剤は当該技術分野で既知であり、形態がポリマーである傾向がある。特定の多孔性及び/又は結合特性を有する壁面に適用される組成物に好適な結合剤の種類は、繊維、糸、織物、又は網物と比較して異なり、したがって、当業者は、既知の教示に基づいて、所望の表面及び/又は基質に基づいて好適な結合剤を選択するであろう。
典型的な結合剤は、ポリビニルアルコール、修飾デンプン、ポリビニルアクリレート、ポリアクリル、ポリ酢酸ビニルコポリマー、ポリウレタン、及び修飾植物油である。好適な結合剤は、多種多様なポリマー及びコポリマー、並びにそれらの組み合わせに由来するラテックス分散体を含むことができる。本発明の組成物中の結合剤として使用するのに好適なラテックスは、スチレン、アルキルスチレン、イソプレン、ブタジエン、アクリロニトリル、低級アルキルアクリレート、塩化ビニル、塩化ビニリデン、低級カルボン酸、及びα、β-エチレン性不飽和カルボン酸のポリマー及びコポリマーを含み、それらの中で共重合した3つ以上の異なるモノマー種を含むポリマー、並びにシリコーン又はポリウレタンの分散後懸濁液を含む。活性成分を他の表面に結合するためのポリテトラフルオロエチレン(PTFE)ポリマーもまた好適であり得る。
一部の実施形態では、噴霧用組成物は、約0.005重量%~約99重量%の範囲の、表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)の組み合わせを含む量を含有することができる。
一部の実施形態では、噴霧用組成物は、約0.005重量%~約99重量%の範囲の、表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)の組み合わせを含む量を含有することができる。
分散剤
一部の例示的な実施形態では、本開示による殺虫剤製剤は、(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤(例えば、希釈剤又は担体(例えば、水など)、高分子結合剤、並びに/又は追加の成分(例えば、分散剤、重合剤、乳化剤、増粘剤、アルコール、香料、若しくは当該技術分野で既知の噴霧可能な殺虫剤の調製に使用される任意の他の不活性賦形剤))と、の組み合わせを含み得る。
一部の実施形態では、(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含む組成物は、懸濁液又はカプセル懸濁液などのいくつかの異なる形態又は製剤タイプで調製することができる。また、当業者は、特定のCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又は殺虫剤の特性、その使用、及びその適用タイプに基づいて、関連する組成物を調製することができる。例えば、本開示の方法、実施形態、及び他の態様では、使用されるCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又は殺虫剤は、懸濁液製剤又はカプセル懸濁液製剤に封入され得る。封入されたCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又は殺虫剤は、改善された洗浄堅牢性を提供することができ、またより長期間の活性を提供することができる。製剤は、有機系又は水性(好ましくは、水性)であり得る。
一部の実施形態では、噴霧用組成物は、約0.005重量%~約99重量%の範囲の、表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)の組み合わせを含む量を含有することができる。
一部の実施形態では、噴霧用組成物は、約0.005重量%~約99重量%の範囲の、表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)の組み合わせを含む量を含有することができる。
マイクロカプセル化
本開示による組成物及び方法で使用するのに好適なマイクロカプセル化CRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又は殺虫剤は、当該技術分野で既知の任意の好適な技術を用いて調製され得る。例えば、材料をマイクロカプセル化するための様々なプロセスがこれまで開発されてきた。これらのプロセスは、3つのカテゴリー:物理的方法、相分離、及び界面反応に分類することができる。物理的方法のカテゴリーでは、マイクロカプセル壁材料及びコア粒子が物理的に合わされ、壁材料がコア粒子の周りを流れてマイクロカプセルを形成する。相分離のカテゴリーでは、マイクロカプセルは、壁材料が溶解され、(例えば、コアセルベーションによって)連続相から物理的に分離され、コア粒子の周囲に堆積される不混和連続相中でコア材料を乳化又は分散させることによって形成される。界面反応のカテゴリーでは、マイクロカプセルは、不混和連続相でコア材料を乳化又は分散させることによって形成され、次いで、界面重合反応がコア粒子の表面で起こるようにされる。マイクロカプセル中に存在するCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又は殺虫剤の濃度は、マイクロカプセルの0.1~60重量%で変化し得る。
一部の実施形態では、噴霧用組成物は、約0.005重量%~約99重量%の範囲の、表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)の組み合わせを含む量を含有することができる。
一部の実施形態では、噴霧用組成物は、約0.005重量%~約99重量%の範囲の、表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)の組み合わせを含む量を含有することができる。
キット、製剤、分散剤、及びそれらの成分
組成物((1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含む)、方法、実施形態、及び本開示による他の態様で使用される製剤は、全ての成分を水と一緒に混合することによって、任意選択的に、凝集体の好適な混合及び/又は分散を使用することによって、形成され得る。一般に、かかる製剤は、10~70℃、好ましくは、15~50℃、より好ましくは、20~40℃の温度で形成される。CRIP及び(農薬としての)殺虫剤(A)、固体ポリマー(B)、任意選択的な追加の添加剤(D)を使用して、それらを水性成分(C)中に分散させることが可能であり、一般に、(A)、(B)、(C)、及び/又は(D)のうちの1つ以上を含む製剤が可能である。本発明の組成物((1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含む)中に結合剤が存在する場合、水中の高分子結合剤(B)の分散液、並びに先に別々に調製されているCRIP、CRIP-殺虫タンパク質、又は殺虫剤(A)の水性製剤を使用することが好ましい。かかる別個の製剤は、それぞれの製剤に(A)及び/又は(B)を安定化するための追加の添加剤が含まれていてもよい(それらは市販されている)。第2のプロセスステップでは、かかる生製剤及び任意選択的に追加の水(成分(C))を添加する。また、前述のスキームに基づく上記成分の組み合わせも同様に、例えば、(A)及び/又は(B)の予め形成された分散液を使用し、それを固体(A)及び/又は(B)と混合することによって可能である。高分子結合剤(B)の分散液は、化学物質製造業者によって既に作製された既製の分散液であってもよい。
更に、「手作りの」分散液、すなわち、エンドユーザーによって小規模に作製された分散液を使用することも、本発明の範囲内である。かかる分散液は、水中に約20%の結合剤(B)の混合物を提供し、混合物を90℃~100℃の温度に加熱し、混合物を数時間集中的に撹拌することによって作製され得る。本発明によるプロセスのためにエンドユーザーが容易に使用できるように、最終製品として製剤を製造することが可能である。また、当然、濃縮物を製造することも同様に可能であり、これは、エンドユーザーによって、使用のための所望の濃度に、追加の水(C)で希釈され得る。
一実施形態では、組成物((1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含む)は、SSIの適用又はコーティング製剤((1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、の組み合わせを含む)に好適であり、活性成分と、担体(例えば、水)と、を含み、また、分散剤、湿潤剤、凍結防止剤、増粘剤、防腐剤、乳化剤、及び結合剤又は粘着剤から選択される1つ以上の共製剤を含んでもよい。
一部の実施形態では、CRIP又は殺虫剤の例示的な固形製剤は、概して、所望の粒径に粉砕され、例えば、粒径分布d(0.5)が、概して3~20μm、好ましくは5~15μm、特に7~12μmである。
更に、(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)、及び(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)の組み合わせ(A)を含む少なくとも第1の成分と、少なくとも1つの高分子結合剤(B)を含む第2の成分と、を含むキットとして、製剤をエンドユーザーに出荷することが可能であり得る。更なる添加剤(D)が、キットの第3の別個の成分であってもよく、又は成分(A)及び/又は(B)と既に混合されていてもよい。エンドユーザーは、キットの成分に水(C)を添加し、混合するだけで、使用のための製剤を調製することができる。キットの成分は、水中の製剤であってもよい。当然、成分のうちの1つの水性製剤を、他の成分の乾燥製剤と組み合わせることが可能である。一例として、キットは、(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)、及び(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)の組み合わせ(A)、及び任意選択的に水(C)を含む1つの製剤と、少なくとも1つのポリマー結合剤(B)、成分(C)としての水、及び任意選択的に成分(D)の第2の別個の製剤と、からなることができる。
成分(A)、(B)、(C)、及び任意選択的に(D)の濃度は、コーティング/処理に使用される技術に応じて、当業者によって選択される。一般に、(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、の組み合わせ(A)の量は、組成物の重量に基づいて、最大50重量%、好ましくは1~50重量%、例えば、10~40重量%、特に15~30重量%であり得る。ポリマー結合剤(B)の量は、組成物の重量に基づいて、0.01~30重量%、好ましくは0.5~15重量%、より好ましくは1~10重量%、特に1~5重量%の範囲であり得る。追加の成分(D)の量は、存在する場合、一般に、組成物の重量に基づいて、0.1~20重量%、好ましくは0.5~15重量%である。好適な量の顔料及び/又は染料及び/又は香料は、存在する場合、一般に、組成物の重量に基づいて、0.01~5重量%、好ましくは0.1~3重量%、より好ましくは0.2~2重量%である。すぐに使用できる典型的な製剤は、0.1~40パーセント、好ましくは1~30パーセントの成分(A)、(B)、及び任意選択的に(D)を含み、残りの量は水(C)である。エンドユーザーによって希釈される濃縮物の典型的な濃度は、5~70パーセント、好ましくは10~60パーセントの成分(A)、(B)、及び任意選択的に(D)を含み得、残りの量は水(C)である。
表Aに示されるCRIPのセット(すなわち、A1~A68)、若しくは表Bに示される殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)のうちのいずれか、及び/又はそれに関する方法のうちのいずれかを使用して、本明細書に記載される前述の噴霧用組成物、製剤、及び/又はキットのうちのいずれかを作製することができる。
TVP組成物
ガラス化
ガラス化は、ペプチドの反応動態が、硬質で非晶質のガラス状糖マトリックス中のペプチドの固定化を介して遅くなるプロセスを記載する。これにより、ペプチドの分解が劇的に遅くなる。Beyond water activity:recent advances based on an alternative approach to the assessment of food quality and safety,Crit.Rev.Food Sci.Nutr.30(1991)115-360を参照されたい。ペプチドのアンフォールディング及び他の分解のメカニズムは、ペプチドの分子移動度に依存している。したがって、ガラス化はそのような分解を遅らせる。Change et al.,Mechanism of protein stabilization by sugars during freeze-drying and storage:native structure preservation,specific interaction,and/or immobilization in a glassy matrix?,J Pharm.Sci.94(2005)1427-1444、及びG.O.Poinar and R.Hess,Ultrastructure of 40-million-year-old insect tissue,Science 80(215)(1982)1241-1242を参照されたい。
ガラス化の例示的な記載、及びペプチドの安定化におけるその考慮事項は、Mensink et al.,How sugars protect proteins in the solid state and during drying(review):Mechanisms of stabilization in relation to stress conditions.Eur J Pharm Biopharm.2017 May;114:288-295に提供されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
一部の実施形態では、CRIP又はCRIP-殺虫タンパク質(例えば、本発明のTVP)は、ガラス化され得る。例えば、一部の実施形態では、本発明のTVPは、ガラス化プロセスを使用して安定化させることができる。
一部の実施形態では、ガラス化は、糖の使用を介して起こり得る。一部の実施形態では、糖は、トレハロースであり得る。
トレハロース
トレハロースは、2つのα-グルコース単位の間の1,1-グリコシド結合によって形成される二糖である。一部の実施形態では、トレハロースの分子式は、C122211であり、342.3g/molの分子量を有する。
トレハロースは、二糖として、及びいくつかのポリマーにおけるモノマーとしても自然界に見出されるが、しかしながら、いくつかのトレハロース異性体は、自然界には見出されないものが存在する。Elbein et al.,New insights on trehalose:a multifunctional molecule.Glycobiology.2003 Apr;13(4):17R-27Rを参照されたい。
トレハロースは、熱、凍結、及び乾燥などのストレスに対してタンパク質及び細胞を安定化することが示されている。K.Lippert and E.Galinski,Appl.Microbiol.Biotechnol.,1992,37,61-65、J.K.Kaushik and R.Bhat,J.Biol.Chem.,2003,278,26458-26465、R.P.Baptista,S.Pedersen,G.J.Cabrita,D.E.Otzen,J.M.Cabral and E.P.Melo,Biopolymers,2008,89,538-547、Guo et al.,Nat.Biotechnol.,2000,18,168-171、Hengherr et al.,FEBS J.,2008,275,281-288、Crowe et al.,Science,1984,223,701-703、Beattie et al.,Diabetes,1997,46,519-523、P.Sundaramurthi and R.Suryanarayanan,J.Phys.Chem.Lett.,2009,1,510-514、Duong et al.,Appl.Environ.Microbiol.,2006,72,1218-1225.を参照されたい。
実際、一部の動物は、環境ストレスに応答してトレハロースを顕著なレベルまで蓄積し、したがって、生体分子を安定させるトレハロースの能力を強調する。P.Westh and H.Ramlev,J.Exp.Zool.,1991,258,303-311、及びK.A.C.Madin and J.H.Crowe,J.Exp.Zool.,1975,193,335-342を参照されたい。更に、トレハロースは、一般に安全であると見なされ、安定剤としていくつかの医薬品に使用されている。N.K.Jain and I.Roy,Protein Sci.,2009,18,24-36、及びS.Ohtake and Y.J.Wang,J.Pharm.Sci.,2011,100,2020-2053を参照されたい。
トレハロースの使用は、当該技術において周知である。トレハロースは、商業的供給源から容易に入手可能である。例えば、D-(+)-トレハロース二水和物(製品番号T9531)、及びトレハロース(製品番号PHR1344及び1673715)は、Sigma Aldrich(Sigma-Aldrich Corp.St.Louis,MO,USA)から入手可能である。
例示的なトレハロース分子が本明細書で提供され、ケミカルアブストラクトサービス(CAS)登録番号99-20-7(無水)、及びCAS登録番号6138-23-4(二水和物)を有する。本開示の例示的なトレハロース化合物は、PubChem CID番号7427を有する。
ペプチドを安定化するためのトレハロースの使用の例示的な記載は、米国特許第6,165,981号、同第6,171,586号、同第6,991,790号、同第7,956,028号、同第10,273,333号、及び同第10,588,957号に提供されている(それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
組成物中のトレハロースの調製及び使用の例示的な記載は、米国特許第7,678,764号に提供されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
TVP組成物及びその成分の範囲及び記載
本明細書で使用される場合、「製剤」及び「組成物」は同義である。
一部の実施形態では、殺虫剤(IA)及びTVP、TVP-殺虫タンパク質、又はその薬学的に許容される塩を含む製剤は、液体濃縮物、水和剤、又は顆粒製剤であり得る。一部の実施形態では、本明細書に記載のTVP、TVP-殺虫タンパク質、又はその薬学的に許容される塩のいずれかは、以下に記載の製剤のいずれかで使用することができ、例えば、前述のTVP、TVP-殺虫タンパク質、又はその薬学的に許容される塩のいずれかは、製剤(水和剤若しくは顆粒製剤、又は液体濃縮物製剤)に使用することができる。
一部の実施形態では、製剤は、(1)本明細書に記載される1つ以上のIA(例えば、表Bに列挙されるもの)と、(2)TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はその薬学的に許容される塩と、(3)1つ以上の賦形剤(賦形剤は、トレハロース、リン酸二カリウム(KHPO)、リン酸一カリウム(KHPO)、マルトデキストリン、及びBITを含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる)と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の重量の約0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.1%、99.2%、99.3%、99.4%、99.5%、99.6%、99.7%、99.8%、又は99.9%の範囲のトレハロースの濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約99.9%、約1%~約99.9%、約2%~約99.9%、約3%~約99.9%、約4%~約99.9%、約5%~約99.9%、約6%~約99.9%、約7%~約99.9%、約8%~約99.9%、約9%~約99.9%、約10%~約99.9%、約11%~約99.9%、約12%~約99.9%、約13%~約99.9%、約14%~約99.9%、約15%~約99.9%、約16%~約99.9%、約17%~約99.9%、約18%~約99.9%、約19%~約99.9%、約20%~約99.9%、約21%~約99.9%、約22%~約99.9%、約23%~約99.9%、約24%~約99.9%、約25%~約99.9%、約26%~約99.9%、約27%~約99.9%、約28%~約99.9%、約29%~約99.9%、約30%~約99.9%、約31%~約99.9%、約32%~約99.9%、約33%~約99.9%、約34%~約99.9%、約35%~約99.9%、約36%~約99.9%、約37%~約99.9%、約38%~約99.9%、約39%~約99.9%、約40%~約99.9%、約41%~約99.9%、約42%~約99.9%、約43%~約99.9%、約44%~約99.9%、約45%~約99.9%、約46%~約99.9%、約47%~約99.9%、約48%~約99.9%、約49%~約99.9%、約50%~約99.9%、約51%~約99.9%、約52%~約99.9%、約53%~約99.9%、約54%~約99.9%、約55%~約99.9%、約56%~約99.9%、約57%~約99.9%、約58%~約99.9%、約59%~約99.9%、約60%~約99.9%、約61%~約99.9%、約62%~約99.9%、約63%~約99.9%、約64%~約99.9%、約65%~約99.9%、約66%~約99.9%、約67%~約99.9%、約68%~約99.9%、約69%~約99.9%、約70%~約99.9%、約71%~約99.9%、約72%~約99.9%、約73%~約99.9%、約74%~約99.9%、約75%~約99.9%、約76%~約99.9%、約77%~約99.9%、約78%~約99.9%、約79%~約99.9%、約80%~約99.9%、約81%~約99.9%、約82%~約99.9%、約83%~約99.9%、約84%~約99.9%、約85%~約99.9%、約86%~約99.9%、約87%~約99.9%、約88%~約99.9%、約89%~約99.9%、約90%~約99.9%、約91%~約99.9%、約92%~約99.9%、約93%~約99.9%、約94%~約99.9%、約95%~約99.9%、約96%~約99.9%、約97%~約99.9%、約98%~約99.9%、又は約99%~約99.9% wt/wtの範囲のトレハロースの濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約99%、約0.1%~約98%、約0.1%~約97%、約0.1%~約96%、約0.1%~約95%、約0.1%~約94%、約0.1%~約93%、約0.1%~約92%、約0.1%~約91%、約0.1%~約90%、約0.1%~約89%、約0.1%~約88%、約0.1%~約87%、約0.1%~約86%、約0.1%~約85%、約0.1%~約84%、約0.1%~約83%、約0.1%~約82%、約0.1%~約81%、約0.1%~約80%、約0.1%~約79%、約0.1%~約78%、約0.1%~約77%、約0.1%~約76%、約0.1%~約75%、約0.1%~約74%、約0.1%~約73%、約0.1%~約72%、約0.1%~約71%、約0.1%~約70%、約0.1%~約69%、約0.1%~約68%、約0.1%~約67%、約0.1%~約66%、約0.1%~約65%、約0.1%~約64%、約0.1%~約63%、約0.1%~約62%、約0.1%~約61%、約0.1%~約60%、約0.1%~約59%、約0.1%~約58%、約0.1%~約57%、約0.1%~約56%、約0.1%~約55%、約0.1%~約54%、約0.1%~約53%、約0.1%~約52%、約0.1%~約51%、約0.1%~約50%、約0.1%~約49%、約0.1%~約48%、約0.1%~約47%、約0.1%~約46%、約0.1%~約45%、約0.1%~約44%、約0.1%~約43%、約0.1%~約42%、約0.1%~約41%、約0.1%~約40%、約0.1%~約39%、約0.1%~約38%、約0.1%~約37%、約0.1%~約36%、約0.1%~約35%、約0.1%~約34%、約0.1%~約33%、約0.1%~約32%、約0.1%~約31%、約0.1%~約30%、約0.1%~約29%、約0.1%~約28%、約0.1%~約27%、約0.1%~約26%、約0.1%~約25%、約0.1%~約24%、約0.1%~約23%、約0.1%~約22%、約0.1%~約21%、約0.1%~約20%、約0.1%~約19%、約0.1%~約18%、約0.1%~約17%、約0.1%~約16%、約0.1%~約15%、約0.1%~約14%、約0.1%~約13%、約0.1%~約12%、約0.1%~約11%、約0.1%~約10%、約0.1%~約9%、約0.1%~約8%、約0.1%~約7%、約0.1%~約6%、約0.1%~約5%、約0.1%~約4%、約0.1%~約3%、約0.1%~約2%、約0.1%~約1%、又は約0.1%~約0.5% wt/wtの範囲のトレハロースの濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約40%、約0.5%~約40%、約1%~約40%、約2%~約40%、約3%~約40%、約4%~約40%、約5%~約40%、約6%~約40%、約7%~約40%、約8%~約40%、約9%~約40%、約10%~約40%、約11%~約40%、約12%~約40%、約13%~約40%、約14%~約40%、約15%~約40%、約16%~約40%、約17%~約40%、約18%~約40%、約19%~約40%、約20%~約40%、約21%~約40%、約22%~約40%、約23%~約40%、約24%~約40%、約25%~約40%、約26%~約40%、約27%~約40%、約28%~約40%、約29%~約40%、約30%~約40%、約31%~約40%、約32%~約40%、約33%~約40%、約34%~約40%、約35%~約40%、約36%~約40%、約37%~約40%、約38%~約40%、又は約39%~約40% wt/wtの範囲のリン酸二カリウム(KHPO)の濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約40%、約0.1%~約39%、約0.1%~約38%、約0.1%~約37%、約0.1%~約36%、約0.1%~約35%、約0.1%~約34%、約0.1%~約33%、約0.1%~約32%、約0.1%~約31%、約0.1%~約30%、約0.1%~約29%、約0.1%~約28%、約0.1%~約27%、約0.1%~約26%、約0.1%~約25%、約0.1%~約24%、約0.1%~約23%、約0.1%~約22%、約0.1%~約21%、約0.1%~約20%、約0.1%~約19%、約0.1%~約18%、約0.1%~約17%、約0.1%~約16%、約0.1%~約15%、約0.1%~約14%、約0.1%~約13%、約0.1%~約12%、約0.1%~約11%、約0.1%~約10%、約0.1%~約9%、約0.1%~約8%、約0.1%~約7%、約0.1%~約6%、約0.1%~約5%、約0.1%~約4%、約0.1%~約3%、約0.1%~約2%、約0.1%~約1%、又は約0.1%~約0.5% wt/wtの範囲のリン酸二カリウム(KHPO)の濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約20%、約0.5%~約20%、約1%~約20%、約2%~約20%、約3%~約20%、約4%~約20%、約5%~約20%、約6%~約20%、約7%~約20%、約8%~約20%、約9%~約20%、約10%~約20%、約11%~約20%、約12%~約20%、約13%~約20%、約14%~約20%、約15%~約20%、約16%~約20%、約17%~約20%、約18%~約20%、又は約19%~約20% wt/wtの範囲のリン酸一カリウム(KHPO)の濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約20%、約0.1%~約19%、約0.1%~約18%、約0.1%~約17%、約0.1%~約16%、約0.1%~約15%、約0.1%~約14%、約0.1%~約13%、約0.1%~約12%、約0.1%~約11%、約0.1%~約10%、約0.1%~約9%、約0.1%~約8%、約0.1%~約7%、約0.1%~約6%、約0.1%~約5%、約0.1%~約4%、約0.1%~約3%、約0.1%~約2%、約0.1%~約1%、又は約0.1%~約0.5% wt/wtの範囲のリン酸一カリウム(KHPO)の濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約99.9%、約1%~約99.9%、約2%~約99.9%、約3%~約99.9%、約4%~約99.9%、約5%~約99.9%、約6%~約99.9%、約7%~約99.9%、約8%~約99.9%、約9%~約99.9%、約10%~約99.9%、約11%~約99.9%、約12%~約99.9%、約13%~約99.9%、約14%~約99.9%、約15%~約99.9%、約16%~約99.9%、約17%~約99.9%、約18%~約99.9%、約19%~約99.9%、約20%~約99.9%、約21%~約99.9%、約22%~約99.9%、約23%~約99.9%、約24%~約99.9%、約25%~約99.9%、約26%~約99.9%、約27%~約99.9%、約28%~約99.9%、約29%~約99.9%、約30%~約99.9%、約31%~約99.9%、約32%~約99.9%、約33%~約99.9%、約34%~約99.9%、約35%~約99.9%、約36%~約99.9%、約37%~約99.9%、約38%~約99.9%、約39%~約99.9%、約40%~約99.9%、約41%~約99.9%、約42%~約99.9%、約43%~約99.9%、約44%~約99.9%、約45%~約99.9%、約46%~約99.9%、約47%~約99.9%、約48%~約99.9%、約49%~約99.9%、約50%~約99.9%、約51%~約99.9%、約52%~約99.9%、約53%~約99.9%、約54%~約99.9%、約55%~約99.9%、約56%~約99.9%、約57%~約99.9%、約58%~約99.9%、約59%~約99.9%、約60%~約99.9%、約61%~約99.9%、約62%~約99.9%、約63%~約99.9%、約64%~約99.9%、約65%~約99.9%、約66%~約99.9%、約67%~約99.9%、約68%~約99.9%、約69%~約99.9%、約70%~約99.9%、約71%~約99.9%、約72%~約99.9%、約73%~約99.9%、約74%~約99.9%、約75%~約99.9%、約76%~約99.9%、約77%~約99.9%、約78%~約99.9%、約79%~約99.9%、約80%~約99.9%、約81%~約99.9%、約82%~約99.9%、約83%~約99.9%、約84%~約99.9%、約85%~約99.9%、約86%~約99.9%、約87%~約99.9%、約88%~約99.9%、約89%~約99.9%、約90%~約99.9%、約91%~約99.9%、約92%~約99.9%、約93%~約99.9%、約94%~約99.9%、約95%~約99.9%、約96%~約99.9%、約97%~約99.9%、約98%~約99.9%、又は約99%~約99.9% wt/wtの範囲のマルトデキストリンの濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約99%、約0.1%~約98%、約0.1%~約97%、約0.1%~約96%、約0.1%~約95%、約0.1%~約94%、約0.1%~約93%、約0.1%~約92%、約0.1%~約91%、約0.1%~約90%、約0.1%~約89%、約0.1%~約88%、約0.1%~約87%、約0.1%~約86%、約0.1%~約85%、約0.1%~約84%、約0.1%~約83%、約0.1%~約82%、約0.1%~約81%、約0.1%~約80%、約0.1%~約79%、約0.1%~約78%、約0.1%~約77%、約0.1%~約76%、約0.1%~約75%、約0.1%~約74%、約0.1%~約73%、約0.1%~約72%、約0.1%~約71%、約0.1%~約70%、約0.1%~約69%、約0.1%~約68%、約0.1%~約67%、約0.1%~約66%、約0.1%~約65%、約0.1%~約64%、約0.1%~約63%、約0.1%~約62%、約0.1%~約61%、約0.1%~約60%、約0.1%~約59%、約0.1%~約58%、約0.1%~約57%、約0.1%~約56%、約0.1%~約55%、約0.1%~約54%、約0.1%~約53%、約0.1%~約52%、約0.1%~約51%、約0.1%~約50%、約0.1%~約49%、約0.1%~約48%、約0.1%~約47%、約0.1%~約46%、約0.1%~約45%、約0.1%~約44%、約0.1%~約43%、約0.1%~約42%、約0.1%~約41%、約0.1%~約40%、約0.1%~約39%、約0.1%~約38%、約0.1%~約37%、約0.1%~約36%、約0.1%~約35%、約0.1%~約34%、約0.1%~約33%、約0.1%~約32%、約0.1%~約31%、約0.1%~約30%、約0.1%~約29%、約0.1%~約28%、約0.1%~約27%、約0.1%~約26%、約0.1%~約25%、約0.1%~約24%、約0.1%~約23%、約0.1%~約22%、約0.1%~約21%、約0.1%~約20%、約0.1%~約19%、約0.1%~約18%、約0.1%~約17%、約0.1%~約16%、約0.1%~約15%、約0.1%~約14%、約0.1%~約13%、約0.1%~約12%、約0.1%~約11%、約0.1%~約10%、約0.1%~約9%、約0.1%~約8%、約0.1%~約7%、約0.1%~約6%、約0.1%~約5%、約0.1%~約4%、約0.1%~約3%、約0.1%~約2%、約0.1%~約1%、又は約0.1%~約0.5% wt/wtの範囲のマルトデキストリンの濃度を含む。
一部の実施形態では、マルトデキストリンは、全製剤の約2%~約20%、約3%~約20%、約4%~約20%、約5%~約20%、約6%~約20%、約7%~約20%、約8%~約20%、約9%~約20%、約10%~約20%、約11%~約20%、約12%~約20%、約13%~約20%、約14%~約20%、約15%~約20%、約16%~約20%、約17%~約20%、約18%~約20%、又は約19%~約20% wt/wtの範囲のデキストロース当量を有することができる。
一部の実施形態では、マルトデキストリンは、全製剤の約2%~約20%、約2%~約19%、約2%~約18%、約2%~約17%、約2%~約16%、約2%~約15%、約2%~約14%、約2%~約13%、約2%~約12%、約2%~約11%、約2%~約10%、約2%~約9%、約2%~約8%、約2%~約7%、約2%~約6%、約2%~約5%、約2%~約4%、又は2%~約3% wt/wtの範囲のデキストロース当量を有することができる。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.01%~約1%、約0.025%~約1%、約0.05%~約1%、約0.075%~約1%、約0.1%~約1%、約0.125%~約1%、約0.15%~約1%、約0.175%~約1%、約0.2%~約1%、約0.225%~約1%、約0.25%~約1%、約0.275%~約1%、約0.3%~約1%、約0.325%~約1%、約0.35%~約1%、約0.375%~約1%、約0.4%~約1%、約0.425%~約1%、約0.45%~約1%、約0.475%~約1%、約0.5%~約1%、約0.525%~約1%、約0.55%~約1%、約0.575%~約1%、約0.6%~約1%、約0.625%~約1%、約0.65%~約1%、約0.675%~約1%、約0.7%~約1%、約0.725%~約1%、約0.75%~約1%、約0.775%~約1%、約0.8%~約1%、約0.825%~約1%、約0.85%~約1%、約0.875%~約1%、約0.9%~約1%、約0.925%~約1%、約0.95%~約1%、又は約0.975%~約1% wt/wtの範囲のベンゾイソチアゾリノン(BIT)の濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.01%~約1%、約0.01%~約0.975%、約0.01%~約0.95%、約0.01%~約0.925%、約0.01%~約0.9%、約0.01%~約0.875%、約0.01%~約0.85%、約0.01%~約0.825%、約0.01%~約0.8%、約0.01%~約0.775%、約0.01%~約0.75%、約0.01%~約0.725%、約0.01%~約0.7%、約0.01%~約0.675%、約0.01%~約0.65%、約0.01%~約0.625%、約0.01%~約0.6%、約0.01%~約0.575%、約0.01%~約0.55%、約0.01%~約0.525%、約0.01%~約0.5%、約0.01%~約0.475%、約0.01%~約0.45%、約0.01%~約0.425%、約0.01%~約0.4%、約0.01%~約0.375%、約0.01%~約0.35%、約0.01%~約0.325%、約0.01%~約0.3%、約0.01%~約0.275%、約0.01%~約0.25%、約0.01%~約0.225%、約0.01%~約0.2%、約0.01%~約0.175%、約0.01%~約0.15%、約0.01%~約0.125%、約0.01%~約0.1%、約0.01%~約0.075%、約0.01%~約0.05%、又は約0.01%~約0.025% wt/wtの範囲のベンゾイソチアゾリノン(BIT)の濃度を含む。
一部の実施形態では、BITは、1,2-ベンジイソチアゾリン-3-オンであり得る。例示的な1,2-ベンジイソチアゾリン-3-オンが本明細書に提供され、CAS番号2634-33-5を有する。1,2-ベンジソチアゾリン-3-オンの作製方法を記載する例示的な記載は、WIPO公開第WO2014/173716A1号に提供されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。加えて、1,2-ベンジソチアゾリン-3-オンは、商業ベンダー、例えば、PROXEL(登録商標)AQ防腐剤から容易に入手可能であり、1,2-ベンジソチアゾリン-3-オンの9.25%水溶液は、Lonza Group Ltd.Muenchensteinerstrasse 38,CH-4002 Basel,Switzerlandから入手可能である。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約1%、約0.125%~約1%、約0.15%~約1%、約0.175%~約1%、約0.2%~約1%、約0.225%~約1%、約0.25%~約1%、約0.275%~約1%、約0.3%~約1%、約0.325%~約1%、約0.35%~約1%、約0.375%~約1%、約0.4%~約1%、約0.425%~約1%、約0.45%~約1%、約0.475%~約1%、約0.5%~約1%、約0.525%~約1%、約0.55%~約1%、約0.575%~約1%、約0.6%~約1%、約0.625%~約1%、約0.65%~約1%、約0.675%~約1%、約0.7%~約1%、約0.725%~約1%、約0.75%~約1%、約0.775%~約1%、約0.8%~約1%、約0.825%~約1%、約0.85%~約1%、約0.875%~約1%、約0.9%~約1%、約0.925%~約1%、約0.95%~約1%、又は約0.975%~約1% wt/wtの範囲のリグノスルホネートの濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約1%、約0.1%~約0.975%、約0.1%~約0.95%、約0.1%~約0.925%、約0.1%~約0.9%、約0.1%~約0.875%、約0.1%~約0.85%、約0.1%~約0.825%、約0.1%~約0.8%、約0.1%~約0.775%、約0.1%~約0.75%、約0.1%~約0.725%、約0.1%~約0.7%、約0.1%~約0.675%、約0.1%~約0.65%、約0.1%~約0.625%、約0.1%~約0.6%、約0.1%~約0.575%、約0.1%~約0.55%、約0.1%~約0.525%、約0.1%~約0.5%、約0.1%~約0.475%、約0.1%~約0.45%、約0.1%~約0.425%、約0.1%~約0.4%、約0.1%~約0.375%、約0.1%~約0.35%、約0.1%~約0.325%、約0.1%~約0.3%、約0.1%~約0.275%、約0.1%~約0.25%、約0.1%~約0.225%、約0.1%~約0.2%、約0.1%~約0.175%、約0.1%~約0.15%、又は約0.1%~約0.125% wt/wtの範囲のリグノスルホネートの濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約1%、約0.125%~約1%、約0.15%~約1%、約0.175%~約1%、約0.2%~約1%、約0.225%~約1%、約0.25%~約1%、約0.275%~約1%、約0.3%~約1%、約0.325%~約1%、約0.35%~約1%、約0.375%~約1%、約0.4%~約1%、約0.425%~約1%、約0.45%~約1%、約0.475%~約1%、約0.5%~約1%、約0.525%~約1%、約0.55%~約1%、約0.575%~約1%、約0.6%~約1%、約0.625%~約1%、約0.65%~約1%、約0.675%~約1%、約0.7%~約1%、約0.725%~約1%、約0.75%~約1%、約0.775%~約1%、約0.8%~約1%、約0.825%~約1%、約0.85%~約1%、約0.875%~約1%、約0.9%~約1%、約0.925%~約1%、約0.95%~約1%、又は約0.975%~約1% wt/wtの範囲の石膏の濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約1%、約0.1%~約0.975%、約0.1%~約0.95%、約0.1%~約0.925%、約0.1%~約0.9%、約0.1%~約0.875%、約0.1%~約0.85%、約0.1%~約0.825%、約0.1%~約0.8%、約0.1%~約0.775%、約0.1%~約0.75%、約0.1%~約0.725%、約0.1%~約0.7%、約0.1%~約0.675%、約0.1%~約0.65%、約0.1%~約0.625%、約0.1%~約0.6%、約0.1%~約0.575%、約0.1%~約0.55%、約0.1%~約0.525%、約0.1%~約0.5%、約0.1%~約0.475%、約0.1%~約0.45%、約0.1%~約0.425%、約0.1%~約0.4%、約0.1%~約0.375%、約0.1%~約0.35%、約0.1%~約0.325%、約0.1%~約0.3%、約0.1%~約0.275%、約0.1%~約0.25%、約0.1%~約0.225%、約0.1%~約0.2%、約0.1%~約0.175%、約0.1%~約0.15%、又は約0.1%~約0.125% wt/wtの範囲の石膏の濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.5%~約8%、約0.75%~約8%、約1%~約8%、約1.25%~約8%、約1.5%~約8%、約1.75%~約8%、約2%~約8%、約2.25%~約8%、約2.5%~約8%、約2.75%~約8%、約3%~約8%、約3.25%~約8%、約3.5%~約8%、約3.75%~約8%、約4%~約8%、約4.25%~約8%、約4.5%~約8%、約4.75%~約8%、約5%~約8%、約5.25%~約8%、約5.5%~約8%、約5.75%~約8%、約6%~約8%、約6.25%~約8%、約6.5%~約8%、約6.75%~約8%、約7%~約8%、約7.25%~約8%、約7.5%~約8%、又は約7.75%~約8% wt/wtの範囲のソルビトールの濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.5%~約8%、約0.5%~約7.75%、約0.5%~約7.5%、約0.5%~約7.25%、約0.5%~約7%、約0.5%~約6.75%、約0.5%~約6.5%、約0.5%~約6.25%、約0.5%~約6%、約0.5%~約5.75%、約0.5%~約5.5%、約0.5%~約5.25%、約0.5%~約5%、約0.5%~約4.75%、約0.5%~約4.5%、約0.5%~約4.25%、約0.5%~約4%、約0.5%~約3.75%、約0.5%~約3.5%、約0.5%~約3.25%、約0.5%~約3%、約0.5%~約2.75%、約0.5%~約2.5%、約0.5%~約2.25%、約0.5%~約2%、約0.5%~約1.75%、約0.5%~約1.5%、約0.5%~約1.25%、約0.5%~約1%、又は約0.5%~約0.75% wt/wtの範囲のソルビトールの濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約1%、約0.125%~約1%、約0.15%~約1%、約0.175%~約1%、約0.2%~約1%、約0.225%~約1%、約0.25%~約1%、約0.275%~約1%、約0.3%~約1%、約0.325%~約1%、約0.35%~約1%、約0.375%~約1%、約0.4%~約1%、約0.425%~約1%、約0.45%~約1%、約0.475%~約1%、約0.5%~約1%、約0.525%~約1%、約0.55%~約1%、約0.575%~約1%、約0.6%~約1%、約0.625%~約1%、約0.65%~約1%、約0.675%~約1%、約0.7%~約1%、約0.725%~約1%、約0.75%~約1%、約0.775%~約1%、約0.8%~約1%、約0.825%~約1%、約0.85%~約1%、約0.875%~約1%、約0.9%~約1%、約0.925%~約1%、約0.95%~約1%、又は約0.975%~約1% wt/wtの範囲の安息香酸ナトリウムの濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約1%、約0.1%~約0.975%、約0.1%~約0.95%、約0.1%~約0.925%、約0.1%~約0.9%、約0.1%~約0.875%、約0.1%~約0.85%、約0.1%~約0.825%、約0.1%~約0.8%、約0.1%~約0.775%、約0.1%~約0.75%、約0.1%~約0.725%、約0.1%~約0.7%、約0.1%~約0.675%、約0.1%~約0.65%、約0.1%~約0.625%、約0.1%~約0.6%、約0.1%~約0.575%、約0.1%~約0.55%、約0.1%~約0.525%、約0.1%~約0.5%、約0.1%~約0.475%、約0.1%~約0.45%、約0.1%~約0.425%、約0.1%~約0.4%、約0.1%~約0.375%、約0.1%~約0.35%、約0.1%~約0.325%、約0.1%~約0.3%、約0.1%~約0.275%、約0.1%~約0.25%、約0.1%~約0.225%、約0.1%~約0.2%、約0.1%~約0.175%、約0.1%~約0.15%、又は約0.1%~約0.125% wt/wtの範囲の安息香酸ナトリウムの濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約1%、約0.125%~約1%、約0.15%~約1%、約0.175%~約1%、約0.2%~約1%、約0.225%~約1%、約0.25%~約1%、約0.275%~約1%、約0.3%~約1%、約0.325%~約1%、約0.35%~約1%、約0.375%~約1%、約0.4%~約1%、約0.425%~約1%、約0.45%~約1%、約0.475%~約1%、約0.5%~約1%、約0.525%~約1%、約0.55%~約1%、約0.575%~約1%、約0.6%~約1%、約0.625%~約1%、約0.65%~約1%、約0.675%~約1%、約0.7%~約1%、約0.725%~約1%、約0.75%~約1%、約0.775%~約1%、約0.8%~約1%、約0.825%~約1%、約0.85%~約1%、約0.875%~約1%、約0.9%~約1%、約0.925%~約1%、約0.95%~約1%、又は約0.975%~約1% wt/wtの範囲のソルビン酸カリウムの濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約1%、約0.1%~約0.975%、約0.1%~約0.95%、約0.1%~約0.925%、約0.1%~約0.9%、約0.1%~約0.875%、約0.1%~約0.85%、約0.1%~約0.825%、約0.1%~約0.8%、約0.1%~約0.775%、約0.1%~約0.75%、約0.1%~約0.725%、約0.1%~約0.7%、約0.1%~約0.675%、約0.1%~約0.65%、約0.1%~約0.625%、約0.1%~約0.6%、約0.1%~約0.575%、約0.1%~約0.55%、約0.1%~約0.525%、約0.1%~約0.5%、約0.1%~約0.475%、約0.1%~約0.45%、約0.1%~約0.425%、約0.1%~約0.4%、約0.1%~約0.375%、約0.1%~約0.35%、約0.1%~約0.325%、約0.1%~約0.3%、約0.1%~約0.275%、約0.1%~約0.25%、約0.1%~約0.225%、約0.1%~約0.2%、約0.1%~約0.175%、約0.1%~約0.15%、又は約0.1%~約0.125% wt/wtの範囲のソルビン酸カリウムの濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約1%、約0.125%~約1%、約0.15%~約1%、約0.175%~約1%、約0.2%~約1%、約0.225%~約1%、約0.25%~約1%、約0.275%~約1%、約0.3%~約1%、約0.325%~約1%、約0.35%~約1%、約0.375%~約1%、約0.4%~約1%、約0.425%~約1%、約0.45%~約1%、約0.475%~約1%、約0.5%~約1%、約0.525%~約1%、約0.55%~約1%、約0.575%~約1%、約0.6%~約1%、約0.625%~約1%、約0.65%~約1%、約0.675%~約1%、約0.7%~約1%、約0.725%~約1%、約0.75%~約1%、約0.775%~約1%、約0.8%~約1%、約0.825%~約1%、約0.85%~約1%、約0.875%~約1%、約0.9%~約1%、約0.925%~約1%、約0.95%~約1%、又は約0.975%~約1% wt/wtの範囲のEDTAの濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、全製剤の約0.1%~約1%、約0.1%~約0.975%、約0.1%~約0.95%、約0.1%~約0.925%、約0.1%~約0.9%、約0.1%~約0.875%、約0.1%~約0.85%、約0.1%~約0.825%、約0.1%~約0.8%、約0.1%~約0.775%、約0.1%~約0.75%、約0.1%~約0.725%、約0.1%~約0.7%、約0.1%~約0.675%、約0.1%~約0.65%、約0.1%~約0.625%、約0.1%~約0.6%、約0.1%~約0.575%、約0.1%~約0.55%、約0.1%~約0.525%、約0.1%~約0.5%、約0.1%~約0.475%、約0.1%~約0.45%、約0.1%~約0.425%、約0.1%~約0.4%、約0.1%~約0.375%、約0.1%~約0.35%、約0.1%~約0.325%、約0.1%~約0.3%、約0.1%~約0.275%、約0.1%~約0.25%、約0.1%~約0.225%、約0.1%~約0.2%、約0.1%~約0.175%、約0.1%~約0.15%、又は約0.1%~約0.125% wt/wtの範囲のEDTAの濃度を含む。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、約5~約11、約5.5~約11、約6~約11、約6.5~約11、約7~約11、約7.5~約11、約8~約11、約8.5~約11、約9~約11、約9.5~約11、約10~約11、又は約10.5~約11の範囲のpHで製剤化することができる。
一部の実施形態では、本発明の製剤は、約5~約11、約5~約10.5、約5~約10、約5~約9.5、約5~約9、約5~約8.5、約5~約8、約5~約7.5、約5~約7、約5~約6.5、約5~約6、又は約5~約5.5の範囲のpHで製剤化することができる。
一部の実施形態では、製剤は、顆粒形態(顆粒製剤)に製剤化することができる。粒状製剤を生成する方法は、当該技術分野で周知であり、以下が含まれる:結晶化、沈殿、パンコーティング、流動床コーティング、造粒(例えば、流動床造粒)、回転霧化、押出、プリル、球状化、微粉砕、ドラム造粒、及び/又は高剪断造粒など。
一部の実施形態では、粒状製剤は、凝集、例えば、噴霧乾燥造粒、再湿造粒、流体床造粒などを介して生成することができる。
一部の実施形態では、造粒のタイプは、流体床造粒であり得る。流体床造粒の例示的な方法は、米国特許第7,582,147号に提供されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
一部の実施形態では、粒状製剤は、流体床造粒を介して生成することができる。
一部の実施形態では、粒状製剤は、活性成分及び不活性成分を流体床中のブランク担体に噴霧することによって生成することができる。
一部の実施形態では、粒状製剤は、活性成分及び不活性成分(賦形剤)をブランク担体上に噴霧し、皿型造粒機で造粒することによって生成することができる。
一部の実施形態では、粒状製剤は、活性粉末及び不活性粉末(すなわち、本明細書に記載の1つ以上の賦形剤)を水とを混合し、その後、成分を押出機に通して造粒することによって生成することができる。
一部の実施形態では、粒状製剤は、活性粉末及び不活性粉末(すなわち、本明細書に記載される1つ以上の賦形剤)を水と混合し、ロール圧縮して造粒することによって生成することができる。
例示的な組み合わせ、組成物、及び製品
本開示は、1つ以上のCRIPと、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含む、組み合わせ、組成物、及び生成物を企図する。
本明細書に記載のCRIP及び本明細書に記載のIA(例えば、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、IA:B1~B479のうちの1つ以上との混合物)を利用する、いずれかの組み合わせ、組み合わせ、産物、ポリペプチド、及び/又は植物を使用して、害虫、それらの成長、及び/又はそれらの作用によって引き起こされる傷害(特に、それらの植物に対する傷害)を制御することができる。
CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、IA:B1~B479のうちの1つ以上と、の組み合わせを含む組成物は、農薬組成物(agrochemical composition)を含むことができる。例えば、一部の実施形態では、農薬組成物は、エアロゾル及び/又はエアロゾル化生成物(例えば、噴霧、燻蒸剤、粉末、粉塵、及び/又はガス)、種子粉衣、経口調製物(例えば、昆虫の餌など)、CRIP及び/又はCRIP ORF(一過的及び/又は安定的のいずれか)、及びペプチド-IAを発現及び/又は産生するトランスジェニック生物(例えば、植物又は動物)を含むことができるが、これらに限定されない。
一部の実施形態では、CRIPA1~A68のうちの1つ以上と、IA:B1~B479のうちの1つ以上と、を含む組み合わせ又は組成物は、本明細書に記載される他の殺虫タンパク質及び/又は農薬と、同時に又は順次使用することができる。
一部の実施形態では、組成物又は組み合わせは、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、IA:B1~B479のうちの1つ以上と、別の生物由来の1つ以上のペプチド又はポリペプチドと、を含む。
例えば、一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、IA:B1~B479のうちの1つ以上と、クモ、サソリ、イソギンチャク、イモガイ、ヘビ、トカゲ、又はクラゲ由来の1つ以上のペプチド又はポリペプチドと、を含むことができる。
一部の実施形態では、本開示の活性成分は、組成物の形態で適用することができ、他の化合物と同時に又は順次処理される作物領域又は植物に適用することができる。これこれらの化合物は、肥料、除草剤、凍結保護剤、界面活性剤、洗剤、殺虫石鹸、休眠油、ポリマー、及び/又は製剤の単回適用後の標的領域の長期投薬を可能にする徐放性若しくは生分解性の担体製剤であり得る。それらはまた、必要に応じて、製剤分野で慣習的に用いられる更なる農業的に許容される担体、界面活性剤、又は適用促進アジュバントとともに、選択的除草剤、化学的殺虫剤、殺ウイルス剤、殺微生物剤、殺アメーバ剤、農薬、殺真菌剤、細殺菌剤、殺線虫剤、殺軟体動物剤、又はこれらの調製物のうちのいくつかの混合物であり得る。好適な担体及びアジュバントは、固体又は液体であり得、製剤技術において通常用いられる物質(例えば、天然又は再生ミネラル物質、溶媒、分散剤、湿潤剤、粘着剤、結合剤、又は肥料に相当する。同様に、製剤は、農薬製剤の標的害虫による摂食又は摂取を可能にするために、食用の「ベイト」に調製され得るか、又は害虫の「トラップ」に加工され得る。
本開示の本明細書に記載の方法によって産生される、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、IA:B1~B479のうちの1つ以上と、の組み合わせを含む本開示の活性成分又は本開示の農薬組成物を適用する方法としては、葉適用、種子コーティング、及び土壌適用が挙げられる。一部の実施形態では、適用の数及び適用の速度は、対応する害虫による蔓延の強度に依存する。
組成物は、粉末、粉塵、ペレット、顆粒、噴霧、エマルション、コロイド、溶液などとして製剤化することができ、ポリペプチドを含む細胞培養物の乾燥、凍結乾燥、均質化、抽出、濾過、遠心分離、沈降、又は濃縮などの従来の手段によって調製することができる。少なくとも1つのかかる農薬ポリペプチドを含有する全てのかかる組成物では、ポリペプチドが、約1重量%~約99重量%の濃度で存在し得る。
一部の実施形態では、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、IA:B1~B479のうちの1つ以上と、の組み合わせを含む組成物は、環境地域に予防的に適用されて、本発明の方法によって所与の地域で死滅する又は数が減少し得る、感受性の害虫(例えば、Lepidopteran及び/又はColeoptera害虫)による蔓延を防止し得る。一部の実施形態では、害虫は、農薬有効量のポリペプチドを摂取するか、又はそれに接触する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の農薬組成物は、細菌、酵母、又は他の細胞、結晶及び/若しくは胞子懸濁液、又は単離されたタンパク質成分のいずれかを、所望の農業的に許容される担体とともに製剤化することによって作製され得る。組成物は、投与前、凍結乾燥(lyophilized)、凍結乾燥(freeze-dried)、乾燥、又は水性担体、培地、又は好適な希釈剤(例えば、生理食塩水及び/若しくは他の緩衝液)などの適切な手段で製剤化され得る。一部の実施形態では、製剤化された組成物は、粉塵材料若しくは粒状材料、又は油(植物油若しくはミネラルオイル)エマルション、若しくは水エマルション、若しくは油/水エマルション中の懸濁液、又は水和剤、又は農業用途に好適な任意の他の担体材料と組み合わせた形態であり得る。好適な農業的担体は、固体又は液体であり得、当該技術分野において周知である。一部の実施形態では、製剤は、1つ以上の固体又は液体アジュバントと混合され得、様々な手段によって、例えば、従来の製剤技術を使用して、農薬組成物を適切なアジュバントと均一に混合、ブレンド、及び/又は粉砕することによって調製され得る。好適な製剤化及び適用方法は、米国特許第6,468,523号に記載されている(参照によりその全体が本明細書に援用される)。
一部の実施形態では、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、IA:B1~B479のうちの1つ以上と、の組み合わせを含む組成物はまた、追加の成分(例えば、除草剤、化学的殺虫剤、殺ウイルス剤、殺微生物剤、殺アメーバ剤、農薬、殺真菌剤、殺細菌剤、殺線虫剤、殺軟体動物剤、ポリペプチド、及び/又は前述のそれらの混合物のうちの1つ以上を含み得る。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせは、製剤(例えば、極性非プロトン性溶媒及び/又は水で構成される製剤)に含まれ得、かつ/又は極性非プロトン性溶媒が1~99重量%の量で存在し、極性プロトン性溶媒が1~99重量%の量で存在し、水が0~98重量%の量で存在する。極性非プロトン性溶媒製剤は、MSOを含有する場合、特に効果的である。MSOは、メチル化種子油と界面活性剤のブレンドであり、約80~85パーセントの量のダイズ油のメチルエステルと15~20パーセントの界面活性剤を使用する。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせは、2つの種類の成分を含み、第1の種類の成分は、殺虫剤(IA)であり、第2の種類の成分は、システインリッチ殺虫ペプチド(CRIP)であり、IAもCRIPも融合タンパク質の一部ではなく、組み合わせが、殺虫効果をもたし、IAとCRIPの比が、約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、又は1:10,000である。
組み合わせ:イソギンチャク毒素及び殺虫剤(IA)
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、1つ以上のイソギンチャク由来のポリペプチドと、を含む。例えば、一部の実施形態では、イソギンチャクポリペプチドは、Actinia equina、Anemonia erythraea、Anemonia sulcata、Anemonia viridis、Anthopleura elegantissima、Anthopleura fuscoviridis、Anthopleura xanthogrammica、Bunodosoma caissarum、Bunodosoma cangicum、Bunodosoma granulifera、Heteractis crispa、Parasicyonis actinostoloides、Radianthus paumotensis、又はStoichactis helianthusから単離され得る。更に他の実施形態では、イソギンチャク毒素は、Av2、Av3、又はそのバリアントであり得る。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、以下のイソギンチャク毒素のうちの1つ以上と、を含む:毒素AETX-1(AETX I)、毒素APETx1、毒素APETx2、降圧タンパク質BDS-1(降圧物質I)、降圧タンパク質BDS-2(降圧物質II)、ニューロトキシンBg-2(Bg II)、ニューロトキシンBg-3(Bg III)、毒素APE1-1、毒素APE1-2、ニューロトキシン1(毒素ATX-I)、ニューロトキシン1(ニューロトキシンI)、ニューロトキシン1(毒素RTX-I)、ニューロトキシン1(毒素SHP-I)、毒素APE2-1、毒素APE2-2、ニューロトキシン-2(毒素ATX-II)、(aka AV2)ニューロトキシン-2(毒素AFT-II)、ニューロトキシン2(毒素RTX-II)、ニューロトキシン2(ニューロトキシンII)、ニューロトキシン3ホモログ(ニューロトキシンIIIホモログ)、ニューロトキシン3(毒素RTX-III)、ニューロトキシン3(ニューロトキシン-III)、ニューロトキシン4(毒素RTX-IV)、ニューロトキシン-5(毒素ATX-V))、ニューロトキシン5(毒素RTX-V)、アントプロイリン-A(毒素AP-A)、アントプロイリン-B(毒素AP-B)、アントプロイリン-C(毒素AP-C)、カリウムチャネル毒素Aek、カリウムチャネル毒素Bgk、主要なニューロトキシンBcIII、ニューロトキシンBcIV、カンギトキシン(CGTX)、カリウムチャネル毒素ShK、毒素PCR1(PCR1-2)、毒素PCR2(PCR2-5)、毒素PCR3(PCR2-1)、毒素PCR4(PCR2-10)、毒素PCR6(PCR3-7)、カンギトキシン-2(カンギトキシンII)、又はカンギトキシン-3(カンギトキシンIII)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、配列番号371~411に示されるアミノ酸配列を有する1つ以上のイソギンチャクポリペプチドと、を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、自らを防御するために使用する様々な毒素を有する、1つ以上のイソギンチャクAnemonia viridis由来のポリペプチドと、を含む。Anemonia viridisに由来する毒素のうちの1つは、ニューロトキシン「Av3」である。Av3は、受容体部位3における電位依存性ナトリウム(Na)チャネルの不活性化を阻害し、収縮性麻痺をもたらす、III型イソギンチャク毒素である。Av3毒素が部位3に結合すると、ナトリウムチャネルが不活性化状態になり、不安定化され、次いで、チャネルが開口位置に留まる(Blumenthal et al.,Voltage-gated sodium channel toxins:poisons,probes,and future promise.Cell Biochem Biophys.2003;38(2):215-38を参照されたい)。Av3は、甲殻類及び昆虫のナトリウムチャネルに対して高い選択性を示し、哺乳類のナトリウムチャネルに対して低い選択性を示す(Moran et al.,Sea anemone toxins affecting voltage-gated sodium channels-molecular and evolutionary features,Toxicon.2009 Dec 15;54(8):1089-1101を参照されたい)。
配列番号44のアミノ酸配列を有する、Anemonia viridis由来の例示的なAv3ポリペプチドが提供される。殺虫剤(IA)とAVP(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の比は、乾燥重量基準で、以下の比:少なくとも約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、若しくは1:10,000、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせから選択することができる。組成物中のAVP及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の総濃度は、以下のパーセント濃度:0、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、若しくは100%、又はこれらの値のうちのいずれか2つの間の任意の範囲から選択され、組成物の残りのパーセントは、賦形剤からなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、1つ以上のイソギンチャクAv3由来のポリペプチド(例えば、Av3バリアントポリペプチド(AVP))と、を含み、以下の配列番号44からのアミノ酸バリエーションを有することができる:配列番号44と比較してR1KのN末端アミノ酸置換(野生型「RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV」から「KSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV」(配列番号45)へのポリペプチド配列の変更)、配列番号44と比較してC末端アミノ酸の欠失(野生型「RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV」から「RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPK」(配列番号46)へのポリペプチド配列の変更)、並びに/又はN末端変異及びC末端変異(N末端アミノ酸が、配列番号44と比較してR1Kの置換を有し得、C末端アミノ酸が、配列番号44と比較して欠失され得る、野生型「RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV」から「KSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPK」(配列番号47)へのポリペプチド配列の変更)。
殺虫剤(IA)とAVP(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の比は、乾燥重量基準で、以下の比:少なくとも約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、若しくは1:10,000、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせから選択することができる。組成物中のAVP及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の総濃度は、以下のパーセント濃度:0、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、若しくは100%、又はこれらの値のうちのいずれか2つの間の任意の範囲から選択され、組成物の残りのパーセントは、賦形剤からなる。
一部の実施形態では、昆虫を制御する方法は、昆虫に、AVPを適用することと、当該昆虫に、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を適用することと、を含む。前述の適用は、同じ組成物又は別個の組成物のいずれかで、同時に及び/又は順次適用することができる。一部の実施形態では、AVP及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)は、殺虫剤耐性昆虫(例えば、Bt耐性昆虫)に適用することができる。殺虫剤(IA)とAVP(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の比は、乾燥重量基準で、以下の比:少なくとも約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、若しくは1:10,000、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせから選択することができる。組成物中のAVP及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の総濃度は、以下のパーセント濃度:0、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、若しくは100%、又はこれらの値のうちのいずれか2つの間の任意の範囲から選択され、組成物の残りのパーセントは、賦形剤からなる。
一部の実施形態では、例示的なAv3ペプチド又はそのバリアントは、「Av3変異体殺虫ポリペプチド並びにその製造及び使用方法」と題する2019年9月13日に出願された本出願人のPCT出願(国際出願PCT/US19/51093号)に記載されており、その開示及びAv3ペプチド又はそのバリアントの開示が記載され、参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、配列番号44~47及び371~411に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有する1つ以上のイソギンチャクペプチドと、を含む。
組み合わせ:クモ毒素及び殺虫剤(IA)
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、クモから得られた、単離された、及び/又はそれに由来する1つ以上のポリペプチドと、を含む。
一部の実施形態では、クモ毒素は、以下の種のうちの1つから単離することができる:Phoneutria nigriventer、Allagelena opulenta、Cupiennius salei、Plectreurys tristis、Coremiocnemis valida、Haplopelma huwenum、Agelena orientalis、Allagelena opulenta、Segestria florentina、Apomastus schlingeri、Phoneutria keyserlingi、Macrothele gigas、Macrothele raveni、Missulena bradleyi、Pireneitega luctuosa、Phoneutria reidyi、Illawara wisharti、Eucratoscelus constrictus、Agelenopsis aperta、Hololena curta、Oxyopes lineatus、Brachypelma albiceps、又はBrachypelma smithi。
一部の実施形態では、クモ毒素は、Hadronyche versuta(オーストラリアブルーマウンテンファネルウェブスパイダーとしても知られる)、Hadronyche venenata、Atrax robustus、Atrax formidabilis、又はAtrax infensusから単離され得る。
一部の実施形態では、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)は、以下のクモ毒素のうちの1つ以上と組み合わせることができる:U13-クテニトキシン-Pn1a、U13-クテニトキシン-Pn1b,U13-クテニトキシン-Pn1c、U1-アガトキシン-Aop1a、U1-クテニトキシン-Cs1a、U1-ネメトキシン-Csp1a、U1-ネメトキシン-Csp1b、U1-ネメトキシン-Csp1c、U1-プレクトキシン-Pt1a、U1-プレクトキシン-Pt1b、U1-プレクトキシン-Pt1c、U1-プレクトキシン-Pt1d、U1-プレクトキシン-Pt1f、U1-セラホトキシン-Cv1a、U1-セラホトキシン-Hh1a_1、U1-セラホトキシン-Hh1a_2、U1-セラホトキシン-Hh1a_3、U1-セラホトキシン-Hh1b、U1-セラホトキシン-Hh1c_1、U1-セラホトキシン-Hh1c_2、U1-セラホトキシン-Hh1d、U1-セラホトキシン-Hh1e、U1-セラホトキシン-Hh1f_1、U1-セラホトキシン-Hh1f_2、U1-セラホトキシン-Hh1f_3、U1-セラホトキシン-Hh1f_4、U1-セラホトキシン-Hh1g、U2-アガトキシン-Ao1a、U2-アガトキシン-Aop1a、U2-クテニトキシン-Cs1a、U2-クテニトキシン-Pn1a、U2-シルタウトキシン-As1a、U2-セゲストリトキシン-Sf1a、U2-セゲストリトキシン-Sf1b、U2-セゲストリトキシン-Sf1c、U2-セゲストリトキシン-Sf1d、U2-セゲストリトキシン-Sf1e、U2-セゲストリトキシン-Sf1f、U2-セゲストリトキシン-Sf1g、U2-セゲストリトキシン-Sf1h、U2-セラホトキシン-Hh1a、U3-シルタウトキシン-As1a、U3-プレクトキシン-Pt1a、U5-クテニトキシン-Pn1a、U7-クテニトキシン-Pk1a、β-ヘキサトキシン-Mg1a、β-ヘキサトキシン-Mr1a、Γ-クテニトキシン-Pn1a、δ-アクチノポジトキシン-Mb1a、δ-アマウロビトキシン-Pl1a、δ-アマウロビトキシン-Pl1b、δ-アマウロビトキシン-Pl1c、δ-アマウロビトキシン-Pl1d、δ-クテニトキシン-Asp2e、δ-クテニトキシン-Pn1a_1、δ-クテニトキシン-Pn1a_2、δ-クテニトキシン-Pn1b、δ-クテニトキシン-Pn2a、δ-クテニトキシン-Pn2b、δ-クテニトキシン-Pn2cδ-クテニトキシン-Pr2d、δ-ヘキサトキシン-Ar1a、δ-ヘキサトキシン-Hv1a、δ-ヘキサトキシン-Hv1b、δ-ヘキサトキシン-Iw1a、δ-ヘキサトキシン-Mg1a、δ-ヘキサトキシン-Mg1b、κ-ヘキサトキシン-Hf1a、κ-ヘキサトキシン-Hv1a、κ-ヘキサトキシン-Hv1b、κ-ヘキサトキシン-Hv1c_1、κ-ヘキサトキシン-Hv1c_2、κ-ヘキサトキシン-Hv1c_3、κ-ヘキサトキシン-Hv1c_4、κ-ヘキサトキシン-Hv1d、κ-ヘキサトキシン-Hv1e、κ-セラホトキシン-Ec2a、κ-セラホトキシン-Ec2b、μ-アガトキシン-Aa1a、μ-アガトキシン-Aa1b、μ-アガトキシン-Aa1c、μ-アガトキシン-Aa1d、μ-アガトキシン-Aa1e、μ-アガトキシン-Aa1f、μ-アガトキシン-Hc1a、μ-アガトキシン-Hc1b、μ-アガトキシン-Hc1c、μ-ヘキサトキシン-Mg1a、μ-ヘキサトキシン-Mg1b、μ-ヘキサトキシン-Mg1c、μ-ヘキサトキシン-Mg2a、μ-セラホトキシン-Hh1a、ω-アクチノポジトキシン-Mb1a、ω-アガトキシン-Aa4a、ω-アガトキシン-Aa4b、ω-アガトキシン-Aa4c、ω-ヘキサトキシン-Ar1a_1、ω-ヘキサトキシン-Ar1a_3、ω-ヘキサトキシン-Ar1b_1、ω-ヘキサトキシン-Ar1d_1、ω-ヘキサトキシン-Ar1d_4、,ω-ヘキサトキシン-Ar1e_1 ω-ヘキサトキシン-Ar1f、ω-ヘキサトキシン-Ar1g_1、ω-ヘキサトキシン-Ar1h、ω-ヘキサトキシン-Ar2a、ω-ヘキサトキシン-Ar2b、ω-ヘキサトキシン-Ar2c、ω-ヘキサトキシン-Ar2d、ω-ヘキサトキシン-Ar2e_1、ω-ヘキサトキシン-Ar2e_2、ω-アトラコトキシン-Asp2a、ω-ヘキサトキシン-Asp2b、ω-ヘキサトキシン-Hf1a、ω-ヘキサトキシン-Hi1a_1、ω-ヘキサトキシン-Hi1a_2、ω-ヘキサトキシン-Hi1a_3、ω-ヘキサトキシン-Hi1b_1、ω-ヘキサトキシン-Hi1b_10、ω-ヘキサトキシン-Hi1b_2、ω-ヘキサトキシン-Hi1b_5、ω-ヘキサトキシン-Hi1b_8、ω-ヘキサトキシン-Hi1c_1、ω-ヘキサトキシン-Hi1c_2、ω-ヘキサトキシン-Hv1a、ω-ヘキサトキシン-Hv1b、ω-ヘキサトキシン-Hv1c、ω-ヘキサトキシン-Hv1d、ω-ヘキサトキシン-Hv1e、ω-ヘキサトキシン-Hv1f、ω-ヘキサトキシン-Hv1g_1、ω-ヘキサトキシン-Hv1g_5ω-ヘキサトキシン-Hv1g_6ω-ヘキサトキシン-Hv2a、ω-ヘキサトキシン-Hv2b_1、ω-ヘキサトキシン-Hv2b_2、ω-ヘキサトキシン-Hv2b_3、ω-ヘキサトキシン-Hv2b_4、ω-ヘキサトキシン-Hv2b_5、ω-ヘキサトキシン-Hv2b_6、ω-ヘキサトキシン-Hv2b_7、ω-ヘキサトキシン-Hv2c、ω-ヘキサトキシン-Hv2d_1、ω-ヘキサトキシン-Hv2d_2、ω-ヘキサトキシン-Hv2d_3、ω-ヘキサトキシン-Hv2e、ω-ヘキサトキシン-Hv2f、ω-ヘキサトキシン-Hv2g、ω-ヘキサトキシン-Hv2h_1、ω-ヘキサトキシン-Hv2h_2、ω-ヘキサトキシン-Hv2i、ω-ヘキサトキシン-Hv2j_1、ω-ヘキサトキシン-Hv2j_2、ω-ヘキサトキシン-Hv2k、ω-ヘキサトキシン-Hv2l、ω-ヘキサトキシン-Hv2m_1、ω-ヘキサトキシン-Hv2m_2、ω-ヘキサトキシン-Hv2m_3、ω-ヘキサトキシン-Hv2n、ω-ヘキサトキシン-Hv2o、ω-ヘキサトキシン-Hvn1a、ω-ヘキサトキシン-Hvn1b_1、ω-ヘキサトキシン-Hvn1b_2、ω-ヘキサトキシン-Hvn1b_3、ω-ヘキサトキシン-Hvn1b_4、ω-ヘキサトキシン-Hvn1b_6、ω-ヘキサトキシン-Iw2a、ω-オキソトキシン-Ol1b、ω-プレクトキシン-Pt1a、ω-セラホトキシン-Asp1a、ω-セラホトキシン-Asp1f、ω-セラホトキシン-Asp1g、ω-セラホトキシン-Ba1a、ω-セラホトキシン-Ba1b、ω-セラホトキシン-Bs1a、ω-セラホトキシン-Bs2a、又はω-セラホトキシン-Hh2a.
一部の実施形態では、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)は、配列番号192~278、及び281~370に示されるアミノ酸を有する1つ以上のクモ毒素と組み合わせることができる。
一部の実施形態では、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を、1つ以上のACTXペプチドと組み合わせることができる。
一部の実施形態では、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)は、以下のACTXペプチドのうちの1つ以上と組み合わせることができる:U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、rκ-ACTX-Hv1c、ω-ACTX-Hv1a、及び/又はω-ACTX-Hv1a+2。
例示的なACTXペプチドは、以下を含む:アミノ酸配列「QYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA」(配列番号60)を有するU-ACTX-Hv1a、アミノ酸配列「GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA」(配列番号61)を有するU+2-ACTX-Hv1a、アミノ酸配列「SPTCIPSGQPCPYNENCCSQSCTFKENENGNTVKRCD」(配列番号62)を有するオメガ-ACTX-Hv1a、アミノ酸配列「GSSPTCIPSGQPCPYNENCCSQSCTFKENENGNTVKRCD」(配列番号63)を有するオメガ-ヘキサトキシン-Ar1d、及びアミノ酸配列「GSAICTGADRPCAACCPCCPGTSCKAESNGVSYCRKDEP」(配列番号64)を有するカッパ-ヘキサトキシン-Hv1c。
一部の実施形態では、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B7、B9~B40、及びB42~B479のうちの1つ以上)は、前述の例示的なACTXペプチドのうちの1つ以上と組み合わせることができる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、1つ以上のU-ACTXペプチド、オメガ-ACTXペプチド、及び/又はカッパ-ACTXペプチドと、を含む。殺虫剤(IA)とACTXペプチド(例えば、IA:表BのB1~B7、B9~B40、及びB42~B479のうちの1つ以上)の比は、乾燥重量基準で、以下の比:少なくとも約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、若しくは1:10,000、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせから選択することができる。組成物中のACTX及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の総濃度は、以下のパーセント濃度:0、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、若しくは100%、又はこれらの値のうちのいずれか2つの間の任意の範囲から選択され、組成物の残りのパーセントは、賦形剤からなる。
一部の実施形態では、昆虫を制御する方法は、昆虫に、ACTXペプチドを適用することと、当該昆虫に、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を適用することと、を含む。前述の適用は、同じ組成物又は別個の組成物のいずれかで、同時に及び/又は順次適用することができる。一部の実施形態では、ACTXペプチド及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)は、殺虫剤耐性昆虫(例えば、Bt耐性昆虫)に適用することができる。ACTXペプチドと殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の比は、乾燥重量基準で、以下の比:少なくとも約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、若しくは1:10,000、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせから選択することができる。組成物中のACTXペプチド及び殺虫剤(IA)の総濃度(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の総濃度は、以下のパーセント濃度:0、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、若しくは100%、又はこれらの値のうちのいずれか2つの間の任意の範囲から選択され、組成物の残りのパーセントは、賦形剤からなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、配列番号192~278及び281~370に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有する1つ以上のクモ毒素と、を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B7、B9~B40、及びB42~B479のうちの1つ以上)と、配列番号60~64及び594に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有する1つ以上のACTXペプチドと、を含む。
Γ-CNTX-Pn1a及び殺虫剤(IA)
一部の好ましい実施形態では、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)は、1つ以上のΓ-CNTX-Pn1a又はγ-CNTX-Pn1a毒素と組み合わせることができる。Γ-CNTX-Pn1aペプチドは、ブラジル武装グモPhoneutria nigriventerに由来する殺虫ニューロトキシンである。Γ-CNTX-Pn1aは、N-メチル-D-アスパラギン酸(NMDA)サブタイプのイオンチャネル型グルタミン酸受容体(GRIN)、及びナトリウムチャネルを標的とする。例示的なΓ-CNTX-Pn1aペプチドは、MKVAIVFLSLLVLAFASESIEENREEFPVEESARCADINGACKSDCDCCGDSVTCDCYWSDSCKCRESNFKIGMAIRKKFC(配列番号65)のアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、昆虫を制御する方法は、昆虫に、Γ-CNTX-Pn1aを適用することと、当該昆虫に、IAを適用することと、を含む。前述の適用は、同じ組成物又は別個の組成物のいずれかで、同時に及び/又は順次適用することができる。一部の実施形態では、Γ-CNTX-Pn1a及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を、(Γ-CNTX-Pn1a)耐性昆虫に適用することができる。一部の実施形態では、Γ-CNTX-Pn1a及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を、(Bt毒素)耐性昆虫に適用することができる。Γ-CNTX-Pn1aとIAの比は、乾燥重量基準で、以下の比:少なくとも約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、若しくは1:10,000、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせから選択することができる。組成物中のΓ-CNTX-Pn1a及びTVPの総濃度は、以下のパーセント濃度:0、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、若しくは100%、又はこれらの値のうちのいずれか2つの間の任意の範囲から選択され、組成物の残りのパーセントは、賦形剤からなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Γ-CNTX-Pn1aと、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)との両方を含む。組み合わせ又は組成物は、Γ-CNTX-Pn1aと殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の比が、乾燥重量基準で、以下の比:約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、若しくは1:10,000、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせのほぼ一部又は全てであり得る。一部の実施形態では、組成物は、Γ-CNTX-Pn1aと殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の比が、乾燥重量基準で、以下の比:約0:50、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、0.5:99.5、0.1:99.9、及び0.01:99.99、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせから選択される比を有することができる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、配列番号65に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有する1つ以上のΓ-CNTX-Pn1aペプチドと、を含む。
野生型U1-アガトキシン、TVP、及び殺虫剤(IA)
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%、又は少なくとも95%、又は少なくとも96%、又は少なくとも97%、又は少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%同一であるアミノ酸配列を含む1つ以上のTVPと、を含む:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、又はNであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T又はAであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在である)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%、又は少なくとも95%、又は少なくとも96%、又は少なくとも97%、又は少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%同一であるアミノ酸配列を含む1つ以上のTVPと、を含む:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、又はNであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T又はAであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、X、X、X、X、又はXに1つのアミノ酸置換を有する)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%、又は少なくとも95%、又は少なくとも96%、又は少なくとも97%、又は少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%同一であるアミノ酸配列を含む1つ以上のTVPと、を含む:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、又はNであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T又はAであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、X、X、X、X、又はXに1つのアミノ酸置換を有し、Xが、グリシンである)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%、又は少なくとも95%、又は少なくとも96%、又は少なくとも97%、又は少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%同一であるアミノ酸配列を含む1つ以上のTVPと、を含む:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、又はNであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T又はAであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、X、X、X、X、又はXに1つのアミノ酸置換を有し、Xが、グリシンである)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%、又は少なくとも95%、又は少なくとも96%、又は少なくとも97%、又は少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%同一であるアミノ酸配列を含む1つ以上のTVPと、を含む:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、又はNであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T又はAであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、X、X、X、X、又はXに1つのアミノ酸置換を有し、X及びXが、不在である)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%、又は少なくとも95%、又は少なくとも96%、又は少なくnとも97%、又は少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%同一であるアミノ酸配列を含む1つ以上のTVPと、を含む:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、又はNであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T又はAであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、配列番号2~15又は49~53のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を含む)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%、又は少なくとも95%、又は少なくとも96%、又は少なくとも97%、又は少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%同一であるアミノ酸配列を含む1つ以上のTVPと、を含む:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、又はNであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T又はAであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、配列番号17~30又は54~58のうちのいずれか1つに示されるポリヌクレオチド配列によってコードされる)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%、又は少なくとも95%、又は少なくとも96%、又は少なくとも97%、又は少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%同一であるアミノ酸配列を含む1つ以上のTVPと、を含む:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、又はNであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T又はAであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、2つ以上のTVPのホモポリマー又はヘテロポリマーを更に含み、各TVPのアミノ酸配列が、同じか又は異なる)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%、又は少なくとも95%、又は少なくとも96%、又は少なくとも97%、又は少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%同一であるアミノ酸配列を含む1つ以上のTVPと、を含む:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、又はNであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T又はAであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、切断可能又は切断不能リンカーによって分離された2つ以上のTVPを含む融合タンパク質であり、各TVPのアミノ酸配列が、同じか又は異なり得る)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%、又は少なくとも95%、又は少なくとも96%、又は少なくとも97%、又は少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%同一であるアミノ酸配列を含む1つ以上のTVPと、を含む:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、又はNであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T又はAであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、TVPが、切断可能又は切断不能リンカーによって分離された2つ以上のTVPを含む融合タンパク質であり、各TVPのアミノ酸配列が、同じか又は異なり得、リンカーが、昆虫の腸又は血リンパ内で切断可能である)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、以下の式(I)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%、又は少なくとも95%、又は少なくとも96%、又は少なくとも97%、又は少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%同一であるアミノ酸配列を含む1つ以上のTVPと、を含む:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、又はNであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T又はAであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、ZがTである場合、TVPが、グリコシル化されている)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、配列番号:2~15、49~53、2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、又は653~654に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有する1つ以上のTVPと、を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、配列番号1に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有する1つ以上の野生型U1-アガトキシンTa1bペプチドと、を含む。
組み合わせ:サソリ毒素及び殺虫剤(IA)
一部の実施形態では、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)は、サソリから単離された1つ以上の毒素と組み合わせることができる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、以下の毒素から選択される1つ以上のサソリ毒素と、を含む:インペラトキシン-A(IpTxa)、カリウムチャネル毒素α-KTx10.2(コバトキシン-2)、カリウムチャネル毒素α-KTx11.1(パラブトキシン-1)、カリウムチャネル毒素α-KTx11.2(パラブトキシン-2)、カリウムチャネル毒素α-KTx11.3(パラブトキシン-10)、カリウムチャネル毒素α-KTx12.1(ブタントキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx12.2(ブタントキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx12.3(ブタントキシン様ペプチド)、カリウムチャネル毒素α-KTx15.1(ペプチドAa1)、カリウムチャネル毒素α-KTx15.3(毒素AmmTX3)、カリウムチャネル毒素α-KTx15.6(ディスクレピン)、カリウムチャネル毒素α-KTx16.1(タムロトキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx19.1(ニューロトキシンBmBKTx1)、カリウムチャネル毒素α-KTx1.3(イベリオトキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx1.4(リンバトキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx1.7(Lqh15-1)、カリウムチャネル毒素α-KTx1.9(ホンゴトキシン-2)、カリウムチャネル毒素α-KTx1.10(パラブトキシン-3)、カリウムチャネル毒素α-KTx1.11(スロトキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx1.13(カリブドトキシンC)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.1(ノキシウストキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.2(マルガトキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.3(CllTx1)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.4(ノキシウストキシン-2)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.5(ホンゴトキシン-1)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.6(ホンゴトキシン-3)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.7(CllTx2)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.8(毒素Ce1)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.9(毒素Ce2)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.10(毒素Ce3)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.11(毒素Ce4)、カリウムチャネル毒素α-KTx2.12(毒素Ce5)、カリウムチャネル毒素α-KTx3.1(カリオトキシン-1)、カリウムチャネル毒素α-KTx3.2(アジトキシン-2)、カリウムチャネル毒素α-KTx3.3(アジトキシン-3)、カリウムチャネル毒素α-KTx3.4(アジトキシン-1)、カリウムチャネル毒素α-KTx3.7(OsK-1)、カリウムチャネル毒素α-KTx3.8(カリブドトキシン様ペプチドBs6)、カリウムチャネル毒素α-KTx3.9(カリオトキシン-3)、カリウムチャネル毒素α-KTx4.1(チチュストキシンK-α)、カリウムチャネル毒素α-KTx4.3(毒素TdK1)、カリウムチャネル毒素α-KTx4.4(毒素Tc30)、カリウムチャネル毒素α-KTx5.1(レイウロトキシン-1)、カリウムチャネル毒素α-KTx5.2(レイウロトキシン様毒素P05)、カリウムチャネル毒素α-KTx5.4(タマピン)、カリウムチャネル毒素α-KTx5.5(タマピン-2)、カリウムチャネル毒素α-KTx6.1(カリウムチャネル遮断毒素1)、カリウムチャネル毒素α-KTx6.2(マウロトキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx6.3(ニューロトキシンHsTX1)、カリウムチャネル毒素α-KTx6.12(アヌロクトキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx6.13(スピノキシン)、カリウムチャネル毒素α-KTx6.14(HgeTx1)、カリウムチャネル毒素α-KTx7.2(毒素PiTX-K-β)、カリウムチャネル毒素γ-KTx1.2(Ergtoxin様タンパク質1)、カリウムチャネル毒素γ-KTx1.3(Ergtoxin様タンパク質1)、カリウムチャネル毒素γ-KTx1.4(Ergtoxin様タンパク質1)、カリウムチャネル毒素γ-KTx1.5(Ergtoxin様タンパク質1)、カリウムチャネル毒素γ-KTx1.6(Ergtoxin様タンパク質1)、カリウムチャネル毒素γ-KTx4.2(Ergtoxin様タンパク質5)、インセクトトキシン-I1、スモールトキシン(ペプチドI)、インセクトトキシン-I3(BeI3)、インセクトトキシン-I4(BeI4)、インセクトトキシン-I5A、ニューロトキシン8(ニューロトキシンVIII)、推定毒素Lqh8/6、ニューロトキシン9(ニューロトキシンIX)、マウロカルシン(MCa)、クロロトキシン様ペプチドBs14(Bs14)、クロロトキシン(CTX)、ニューロトキシンP2、インセクトトキシン-I5(BeI5)、カリウムチャネル毒素α-KTx6.15(ヘミトキシン)、毒素GaTx1、AahIT1、ファオドトキシン、BaIT2、BotIT1、BotIT2、BmK M1、BmK-M2、BmK-M4、BmK-M7、BmK IT-AP、Bom3、Bom4、BjaIT、Bj-xtrIT、BjIT2、LqhaIT、Lqhb1、LqhIT2、LqhdprIT3a、Lgh-xtrIT、Lqh3、Lqh6、Lqh7、LqqIT1、LqqIT2、Lqq3、OD1、Ts1、Tz1、又はそれらの組み合わせ。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、1つ以上のサソリ毒素と、を含み、サソリ毒素が、配列番号88~191に示されるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、1つ以上のサソリ毒素と、を含み、毒素が、インペラトキシンであり得る。インペラトキシンは、アフリカサソリ(Pandinus imperator)の毒液に由来するペプチド毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、1つ以上のインペラトキシンと、を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、1つ以上のインペラトキシンと、を含み、インペラトキシンが、インペラトキシンA(IpTx-a)又はそのバリアントである。一部の実施形態では、IpTx-aは、GDCLPHLKRCKADNDCCGKKCKRRGTNAEKRCR(配列番号66)のアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、昆虫を制御する方法は、昆虫に、IpTx-aを適用することと、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を適用することと、を含む。前述の適用は、同じ組成物又は別個の組成物のいずれかで、同時に及び/又は順次適用することができる。一部の実施形態では、IpTx-a及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を、(IpTx-a)耐性昆虫に適用することができる。一部の実施形態では、IpTx-a及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を、(Bt毒素)耐性昆虫に適用することができる。IpTx-aとIAの比は、乾燥重量基準で、以下の比:少なくとも約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、若しくは1:10,000、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせから選択することができる。組成物中のIpTx-a及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の総濃度は、以下のパーセント濃度:0、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、若しくは100%、又はこれらの値のうちのいずれか2つの間の任意の範囲から選択され、組成物の残りのパーセントは、賦形剤からなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、IpTx-aと、殺虫剤(IA)(例えば、1つ以上:表BのB1~B479のうちの1つ以上)との両方を含む。組み合わせ又は組成物は、IpTx-aと殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の比が、乾燥重量基準で、以下の比:約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、若しくは1:10,000、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせのほぼ一部又は全てであり得る。一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、IpTx-aと殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の比が、乾燥重量基準で、以下の比:約0:50、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、0.5:99.5、0.1:99.9、及び0.01:99.99、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせから選択される比を有することができる。
一部の実施形態では、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を、1つ以上のAaIT1毒素と組み合わせることができる。タンパク質毒素AalT1は、北アフリカ砂漠サソリ(Androctonus australis)由来のナトリウムチャネル部位4毒素である。例示的なAaIT1毒素は、配列番号88(NCBI受託番号P01497.2)によるアミノ酸配列を有するペプチドである。AaIT1は、部位4毒素であり、活性化反応エネルギー障壁を低下させることによって、昆虫ナトリウムチャネルを強制的に開口する。
一部の実施形態では、昆虫を制御する方法は、昆虫に、AaIT1を適用することと、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を適用することと、を含む。前述の適用は、同じ組成物又は別個の組成物のいずれかで、同時に及び/又は順次適用することができる。一部の実施形態では、AaIT1及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を、(AaIT1)耐性昆虫に適用することができる。一部の実施形態では、AaIT1及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を、(Bt毒素)耐性昆虫に適用することができる。AaIT1と殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の比は、乾燥重量基準で、以下の比:少なくとも約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、若しくは1:10,000、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせから選択することができる。AaIT1及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の総濃度は、以下のパーセント濃度:0、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、若しくは100%、又はこれらの値のうちのいずれか2つの間の任意の範囲から選択され、組成物の残りのパーセントは、賦形剤からなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、配列番号66、88~191に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有する1つ以上のサソリペプチド又はサソリ毒素と、を含む。
組み合わせ:コノトキシン及び殺虫剤(IA)
コノトキシンはイモガイから分離された毒素であり、これらの毒素は、ニューロンのコミュニケーションを妨げることによって作用する。コノトキシンの例としては、α-、ω-、μ-、δ-、及びκ-コノトキシンが挙げられる。簡潔に、α-コノトキシン(及びαA-及びφ-コノトキシン)は、ニコチン性リガンド依存性チャネルを標的とし、ω-コノトキシンは、電位依存性カルシウムチャネルを標的とし、μ-コノトキシンは、電位依存性ナトリウムチャネルを標的とし、δ-コノトキシンは、電位依存性ナトリウムチャネルを標的とし、κ-コノトキシンは、電位依存性カリウムチャネルを標的とする。
一部の実施形態では、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)は、イモガイ属に属する生物から単離された1つ以上のペプチドと組み合わせることができる。
一部の実施形態では、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)は、イモガイ属に属する生物から単離された1つ以上のペプチドと組み合わせることができ、単離されたペプチドが、コノトキシンである。
一部の実施形態では、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)は、Conus amadis、Conus catus、Conus ermineus、Conus geographus、Conus gloriamaris、Conus kinoshitai、Conus magus、Conus marmoreus、Conus purpurascens、Conus stercusmuscarum、Conus striatus、Conus textile、又はConus tulipaから単離された1つ以上のペプチドと組み合わせることができる。
一部の実施形態では、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)は、1つ以上のα-コノトキシン、αA-コノトキシン、φ-コノトキシン、ω-コノトキシン、μ-コノトキシン、δ-コノトキシン、又はκ-コノトキシンと組み合わせることができる。
一部の実施形態では、昆虫を制御する方法は、昆虫に、コノトキシンを適用することと、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を適用することと、を含む。前述の適用は、同じ組成物又は別個の組成物のいずれかで、同時に及び/又は順次適用することができる。一部の実施形態では、コノトキシン及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を、(コノトキシン)耐性昆虫に適用することができる。一部の実施形態では、コノトキシン及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)を、(Bt毒素)耐性昆虫に適用することができる。コノトキシンと殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の比は、乾燥重量基準で、以下の比:少なくとも約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、若しくは1:10,000、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせから選択することができる。コノトキシン及び殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の総濃度は、以下のパーセント濃度:0、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、若しくは100%、又はこれらの値のうちのいずれか2つの間の任意の範囲から選択され、組成物の残りのパーセントは、賦形剤からなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、コノトキシンと、殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)との両方を含む。組み合わせ又は組成物は、コノトキシンと殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の比が、乾燥重量基準で、以下の比:約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、若しくは1:10,000、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせのほぼ一部又は全てであり得る。一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、コノトキシンと殺虫剤(IA)(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の比が、乾燥重量基準で、以下の比:約0:50、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、0.5:99.5、0.1:99.9、及び0.01:99.99、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせから選択される比を有することができる。
組み合わせ:真菌/真菌毒素及びCRIP
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、昆虫病原性真菌である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、昆虫病原性真菌から産生されるペプチド、タンパク質、又は毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、Ascomycete真菌毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、Cordycipitaceae科真菌毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、Akanthomyces毒素、Ascopolyporus毒素、Beauveria毒素、Beejasamuha毒素、Cordyceps毒素、Coremiopsis毒素、Engyodontium毒素、Gibellula毒素、Hyperdermium毒素、Insecticola毒素、Isaria毒素、Lecanicillium毒素、Microhilum毒素、Phytocordyceps毒素、Pseudogibellula毒素、Rotiferophthora毒素、Simplicillium毒素、又はTorrubiella毒素であり得る。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、以下の属から選択される真菌生物又はその毒素である:Beauveria、Metarhizium、Paecilomyces、Lecanicillium、Nomuraea、Isaria、Hirsutella、Sorosporella、Aspergillus、Cordiceps、Entomophthora、Zoophthora、Pandora、Entomophaga、Conidiobolus、及びBasidiobolus。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、Beauveria毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、以下の毒素のうちの1つである:Beauveria alba毒素、Beauveria amorpha毒素、Beauveria arenaria毒素、Beauveria asiatica毒素、Beauveria australis毒素、Beauveria bassiana毒素、Cordyceps bassiana毒素、Beauveria brongniartii毒素、Beauveria brumptii毒素、Beauveria caledonica毒素、Beauveria chiromensis毒素、Beauveria coccorum毒素、Beauveria cretacea毒素、Beauveria cylindrospora毒素、Beauveria delacroixii毒素、Beauveria densa毒素、Beauveria dependens毒素、Beauveria doryphorae毒素、Beauveria effusa毒素、Beauveria epigaea毒素、Beauveria felina毒素、Beauveria geodes毒素、Beauveria globulifera毒素、Beauveria heimii毒素、Beauveria hoplocheli毒素、Beauveria kipukae毒素、Beauveria laxa毒素、Beauveria malawiensis毒素、Beauveria medogensis毒素、Beauveria melolonthae毒素、Beauveria nubicola毒素、Beauveria oryzae毒素、Beauveria paradoxa毒素、Beauveria paranensis毒素、Beauveria parasitica毒素、Beauveria petelotii毒素、Beauveria pseudobassiana毒素、Beauveria rileyi毒素、Beauveria rubra毒素、Beauveria shiotae毒素、Beauveria sobolifera毒素、Beauveria spicata毒素、Beauveria stephanoderis毒素、Beauveria sulfurescens毒素、Beauveria sungii毒素、Beauveria tenella毒素、Beauveria tundrensis毒素、Beauveria velata毒素、Beauveria varroae毒素、Beauveria vermiconia毒素、Beauveria vexans毒素、Beauveria viannai毒素、又はBeauveria virella毒素。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、Beauveria bassiana毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、ビューベリシンである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、化学式C4557を有するビューベリシンである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、化学式C4659を有する「ビューベリシンA」毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、化学式C4761を有する「ビューベリシンB」毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、Beauveria bassiana株ANT-03胞子である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含み、IAが、Ascomycete真菌毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Cordycipitaceae科の真菌毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Akanthomyces毒素、Ascopolyporus毒素、Beauveria毒素、Beejasamuha毒素、Cordyceps毒素、Coremiopsis毒素、Engyodontium毒素、Gibellula毒素、Hyperdermium毒素、Insecticola毒素、Isaria毒素、Lecanicillium毒素、Microhilum毒素、Phytocordyceps毒素、Pseudogibellula毒素、Rotiferophthora毒素、Simplicillium毒素、又はTorrubiella毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Beauveria毒素である。
組み合わせ:レクチン及びCRIP
一部の実施形態では、本発明の組み合わせは、1つ以上のIAと、1つ以上のCRIPと、を含むことができ、IAが、CRIPに融合されても、動作可能に連結されてもなく、IAが、Galanthus nivalis凝集素(GNA)である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、レクチンである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、レクチンであり、当該レクチンが、CRIPに融合されても、動作可能に連結されてもない。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下のレクチンのうちの1つであり得る:Galanthus nivalis凝集素(GNA)、Sambucus nigraレクチン(SNA)、Maackia amurensis-II(MAL-II)、Erythrina cristagalliレクチン(ECL)、Ricinus communis凝集素-I(RCA)、ピーナッツ凝集素(PNA)、コムギ胚芽凝集素(WGA)、Griffonia simplicifolia-II(GSL-II)、Con A、Lens culinaris凝集素(LCA)、マンノース結合レクチン(MBL)、BanLec、ガレクチン、Phaseolus vulgaris白血球凝集素(PHA-L)、Phaseolus vulgaris赤血球凝集素(PHA-E)、及びDatura stramoniumレクチン(DSL)。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、配列番号35、595~615から選択されるアミノ酸配列を有するレクチン、又はそのバリアントである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下のレクチンのうちの1つである:Galanthus nivalis凝集素(GNA)(配列番号35)、Sambucus nigra(ヨーロピアンエルダー)レクチン(SNA)(配列番号596)、Maackia amurensis(MAL)の種子由来の白血球凝集レクチン(配列番号597)、Erythrina cristagalliレクチン(ECL)(配列番号598)、Ricinus communis凝集素I(RCA)(配列番号599)、ピーナッツ凝集素(PNA)(配列番号600)、凝集素アイソレクチン1(WGA1)(配列番号601)、コンカナバリンA(CNA)前駆体(配列番号602)、ジャカリン様レクチン(A鎖)(配列番号603)、レクチンα-1鎖(配列番号604)、レクチンCaBo(配列番号605)、レクチンConGF(配列番号606)、マンノース特異的レクチンα鎖(配列番号607)、β-ガラクトシド特異的レクチン1(配列番号608)、ガレクチン3(配列番号609)、マンノース/グルコース特異的レクチンCramoll(配列番号610)、β-ガラクトシド特異的レクチン3(配列番号611)、ラクトース結合レクチン2(配列番号612)、ガレクチン1(配列番号613)、α-N-アセチルガラクトサミン特異的レクチン(配列番号614)、ファビン(配列番号615)、又はそれらの組み合わせ。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、配列番号35、595~615のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、少なくとも99.9%、又は100%のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
組み合わせ:キチナーゼ及びCRIP
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、キチナーゼである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Trichoderma viride由来のキチナーゼである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、配列番号620に示されるアミノ酸配列を有するキチナーゼである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、キチナーゼであり得、配列番号620のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、少なくとも99.9%、又は100%のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
組み合わせ:Azadirachta indica化合物及びCRIP
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Azadirachta indica化合物である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、アザジラクチン:アザジラジオン、アザジラジノリド、デアセチルゲデュニン、デアセチルアザジラクチノール、デスフラノアザジラジオン、エポキシアザジラジオン、ゲデュニン、マムーディン、ニームフルイチンA、ニームフルイチンB、ニンボリド、ニンビン、ニモリシノール、酢酸オーチニン、サランニン、サランノール、アルファ-ニモラクトン、ベータ-ニモラクトン、2’,3’-ジヒドロサランニン、3-デアセチルサラニン、6-デアセチルニンビン、7-アセチル-16,17-デヒドロ-16-ヒドロキシネオトリキレノン、7-ベンゾイルニンボシノール、7-デアセチル-7-ベンゾイルエポキシアザジラジオン、7-デアセチル-7-ベンゾイルゲデュニン、7-デアセチル-17-エピニモリシノール、15-ヒドロキシアザジラジオン、17-エピ-17-ヒドロキシアザジラジオン、17-エピアザジラジオン、20,21,22,23-テトラヒドロ-23-オキソアザジロン、22,23-ジヒドロニモシノール、又は28-デオキソニンボリドである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、アザジラクチンである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、化学式:C354416を有するアザジラクチンである。
組み合わせ:ホウ素化合物及びCRIP
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、ホウ素化合物である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、ホウ酸、四水酸化二ホウ素、ホウ酸塩、酸化ホウ素、ボラン、又はそれらの組み合わせである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、水性媒体中でホウ素の酸化物を生成するボラン及び/又はホウ酸エステルである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、ホウ酸、ホウ酸塩(例えば、塩基性ホウ酸ナトリウム(ホウ砂))、又はホウ酸及びホウ酸塩の組み合わせである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、ホウ酸塩である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下のうちの1つである:過ホウ酸塩、メタホウ酸塩、四ホウ酸塩、八ホウ酸塩、ホウ酸エステル、金属ホウ酸塩(例えば、ホウ酸ナトリウム、ホウ酸亜鉛、及びホウ酸カリウム)、四ホウ酸二ナトリウム十水和物、八ホウ酸二ナトリウム四水和物、メタホウ酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム一水和物、八ホウ酸二ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム五水和物、四ホウ酸ナトリウム、メタホウ酸銅、ホウ酸亜鉛、メタホウ酸バリウム、又はそれらの任意の組み合わせ。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、ホウ砂(例えば、ホウ酸ナトリウム十水和物-10mol Na.10HO、又はホウ酸ナトリウム五水和物-5mol Na.5HO)である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、ホウ素化合物であり得、ホウ砂の代替物として、有効量で利用することができる(又はホウ素と若しくは互いに組み合わせて有効量で利用することができる)。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、無水ホウ砂(Na)、四ホウ酸アンモニウム((NH.4HO)、五ホウ酸アンモニウム((NH1016.8HO)、五ホウ酸カリウム(K1016.8HO)、四ホウ酸カリウム(K.4HO)、メタホウ酸ナトリウム((8mol)Na.8HO)、メタホウ酸ナトリウム((4mol)Na.4HO)、四ホウ酸二ナトリウム十水和物(Na.10HO)、四ホウ酸二ナトリウム五水和物(Na.5HO)、八ホウ酸二ナトリウム四水和物(Na13.4HO)、又はそれらの組み合わせである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、ホウ素化合物であり、ホウ砂、ホウ酸、八ホウ酸二ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、メタホウ酸ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム十水和物、酸化ホウ素、炭化ホウ素、窒化ホウ素、三臭化ホウ素、三塩化ホウ素、及び三フッ化ホウ素からなる群から選択される。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、ホウ酸である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、HBOの化学式を有するホウ酸である。
組み合わせ:ウイルス及びCRIP
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Ascoviridae科のウイルスである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、アスコウイルス、例えば、Heliothis virescensアスコウイルス3a、Heliothis virescensアスコウイルス3、Heliothis virescensアスコウイルス3b、Heliothis virescensアスコウイルス3c、Heliothis virescensアスコウイルス3d、Heliothis virescensアスコウイルス3e、Heliothis virescensアスコウイルス3f、Heliothis virescensアスコウイルス3g、Heliothis virescensアスコウイルス3h、Heliothis virescensアスコウイルス3j、Spodoptera frugiperdaアスコウイルス1a、Trichoplusia niアスコウイルス2a、Heliothis virescensアスコウイルス3i、Spodoptera ascovirus、Spodoptera exiguaアスコウイルス5a、Spodoptera frugiperdaアスコウイルス1c、Spodoptera frugiperdaアスコウイルス1d、Trichoplusia niアスコウイルス2b、Trichoplusia niアスコウイルス2c、Trichoplusia niアスコウイルス2d、又はTrichoplusia niアスコウイルス6bである。
一部の実施形態では、IAは、Ascoviridae科由来のウイルスであり得る。例えば、一部の実施形態では、IAは、ツアーズウイルス、例えば、Diadromus pulchellusツアーズウイルス、Diadromus pulchellusアスコウイルス4a、又はDasineura jujubifoliaツアーズウイルス2aであり得る。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Densovirinae科由来のウイルスである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、アンビデンソウイルスである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下の群から選択されるアンビデンソウイルスでありる:ヒトデ関連アンビデンソウイルス1、ヒトデ関連デンソウイルス、Blattodeanアンビデンソウイルス1、Periplaneta fuliginosaデンソウイルス、Periplaneta fuliginosaウイルスデンソウイルスGuo/2000、Blattodeanアンビデンソウイルス2、Blattella germanicaデンソウイルス1、Decapodアンビデンソウイルス1、Cherax quadricarinatusデンソウイルス、Dipteranアンビデンソウイルス1、Culex pipiensデンソウイルス、Hemipteranアンビデンソウイルス1、Planococcus citriデンソウイルス、Hemipteranアンビデンソウイルス2、Dysaphis plantagineaデンソウイルス、Hemipteranアンビデンソウイルス3、Myzus persicaeデンソウイルス、Myzus persicae nicotianaeデンソウイルス、Hymenopteranアンビデンソウイルス1、Solenopsis invictaデンソウイルス、Lepidopteranアンビデンソウイルス1、Galleria mellonellaデンソウイルス、Junonia coeniaデンソウイルス、Junonia coeniaデンソウイルスpBRJ/1990、Mythimna loreyiデンソウイルス、Pseudoplusia includensデンソウイルス、Orthopteranアンビデンソウイルス1、Acheta domesticaデンソウイルス、未分類のアンビデンソウイルス、Tetranychus urticae関連アンビデンソ ウイルス、未分類のデンソウイルス、アンビデンソウイルスCaaDV1、アンビデンソウイルスCaaDV2、Atrato Denso様ウイルス、Atratoデンソ様ウイルス1、デンソウイルスSC1065、デンソウイルスSC1118、デンソウイルスSC116、デンソウイルスSC2121、デンソウイルスSC2209、デンソウイルスSC2228、デンソウイルスSC2886、デンソウイルスSC3749、デンソウイルスSC3908、デンソウイルスSC4092、デンソウイルスSC444、デンソウイルスSC525、Diaphorina citriデンソウイルス、Diatraea saccharalisデンソウイルス、Lupine feces関連デンソウイルス、及びLupine feces関連デンソウイルス2。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Entomopoxvirinae科由来のウイルスである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、アルファエントモポックスウイルス、ベータエントモポックスウイルス、Diachasmimorphaエントモポックスウイルス、Melanoplus sanguinipesエントモポックスウイルス、又はいくつかのこれまで未分類のEntomopoxvirinaeである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下の群から選択されるEntomopoxvirinae科ウイルスである:Anomala cupreaエントモポックスウイルス、Adoxophyes honmaiエントモポックスウイルス、Adoxophyes honmaiエントモポックスウイルス「L」、Amsacta mooreiエントモポックスウイルス、Choristoneura biennisエントモポックスウイルス、Choristoneura fumiferanaエントモポックスウイルス、Choristoneura rosaceanaエントモポックスウイルス、Choristoneura rosaceanaエントモポックスウイルス「L」、Heliothis armigeraエントモポックスウイルス、Mythimna separataエントモポックスウイルス、Mythimna separataエントモポックスウイルス「L」、未分類のBetaentomopoxvirus、Diachasmimorpha longicaudataエントモポックスウイルス、Melanoplus sanguinipesエントモポックスウイルス「O」、Anacridium aegyptiumエントモポックスウイルス、Calliptamus italicusエントモポックスウイルス、Chironomus decorusエントモポックスウイルス、Gomphocerus sibiricusエントモポックスウイルス、Homona coffeariaエントモポックスウイルス、Linepithema humileエントモポックスウイルス 1、Oedaleus asiaticusエントモポックスウイルス、及びPseudaletia separataエントモポックスウイルス。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Iridoviridae科ウイルス、例えば、イリドウイルスである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下の群から選択されるIridoviridae科ウイルスである:Tipulaイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス31、Armadillidium vulgareイリデッセントウイルス、Popillia japonicaイリデッセントウイルス、Porcellio scaberイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス6、Gryllus bimaculatusイリドウイルス、未分類のイリドウイルス、Acetes erythraeusイリドウイルス、Anticarsia gemmatalisイリデッセントウイルス、Armadillidium decorumイリデッセントウイルス、バラマンディパーチイリドウイルス、ブルーギルサンフィッシュイリドウイルス、セイタカヒイラギイリドウイルス、クリムゾンスナッパーイリドウイルス、Decapterus macrosomaイリドウイルス、Gazza minutaイリドウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス16、Costelytra zealandicaイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス2、Sericesthisイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス23、Heteronychus aratorイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス24、Apis ceranaイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス29、Tenebrio molitorイリデッセントウイルス、イリドウイルスbarramundi/Quang Ninh/VNM/2008、イリドウイルスIV31、スズキイリドウイルス、Lagocephalus sceleratusイリドウイルス、Lates calcariferイリドウイルス、Leiognathus splendensイリドウイルス、Marble gobyイリドウイルス、Orbiculate batfishイリドウイルス、Parapristipoma trilineatumイリドウイルス、パーチイリドウイルス603-2/China、Polydactylus sextariusイリドウイルス、Porcellio siculoccidentalisイリデッセントウイルス、Pyrrhalta luteolaイリデッセントウイルス、Rana temporaria United Kingdomイリドウイルス1、Rana temporaria United Kingdomイリドウイルス2、ヘダイイリドウイルス、ライギョイリドウイルス、イシガレイイリドウイルス603-3/China、イシガレイイリドウイルス724/China、チョウザメイリドウイルス、Synodus indicusイリドウイルス、及びTrichoniscus panormidensisイリデッセントウイルス。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Nudiviridae科ウイルス、例えば、アルファヌディウイルス、ベータヌディウイルス、又はいくつかのこれまで未分類のNudiviridae科ウイルスである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下の群から選択されるNudiviridae科ウイルスである:Gryllus bimaculatusヌディウイルス、Oryctes rhinocerosヌディウイルス、Heliothis zeaヌディウイルス、Helicoverpa zeaヌディウイルス2、Allomyrinaウイルス、Drosophila innubilaヌディウイルス、DrosophilaヌディウイルスRLU-2011、Espartoウイルス、Homarus gammarusヌディウイルス、Kallitheaウイルス、MacrobrachiumヌディウイルスCN-SL2011、Mauternbachウイルス、Nilaparvata lugens内因性ヌディウイルス、Penaeus monodonヌディウイルス、Tipula oleraceaヌディウイルス、及びTomellosoウイルス。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下の群から選択されるIflaviridae科ウイルスである:Antheraea pernyiイフラウイルス、Brevicoryne brassicaeウイルス、Brevicoryne brassicaeウイルス-UK、Deformed wingウイルス、Kakugoウイルス、VDV-1/DWV組換え、Dinocampus coccinellae麻痺ウイルス、Ectropis obliquaウイルス、Ectropis obliqua picorna様ウイルス、Infectious flacherieウイルス、Infectious flacherieウイルス分離株silkworm、Ixodes holocyclusイフラウイルス、Lygus lineolarisウイルス1、Lymantria disparイフラウイルス1、Nilaparvata lugens honeydewウイルス1、Perina nudaウイルス、Sacbroodウイルス、SacbroodウイルスCSBV-LN/China/2009、Slow bee麻痺ウイルス、Spodoptera exiguaイフラウイルス1、Spodoptera exiguaイフラウイルス2、Varroa destructorウイルス1、未分類のイフラウイルス、ACT fleaイフラウイルス、Aedes vexansイフラウイルス、Armigeresイフラウイルス、コウモリイフラウイルス、ミツバチイフラウイルス1、ブラックベリーイフラウイルスA、ブラックベリーイフラウイルスB、Bombyx moriイフラウイルス、Brevesイフラウイルス、Diamondback mothイフラウイルス、Formica exsectaウイルス2、Haemaphysalis flavaイフラウイルス、Heliconius eratoイフラウイルス、Helicoverpa armigeraイフラウイルス、Midgeイフラウイルス90C0、Miniopterus fuliginosusイフラウイルス、Mokuウイルス、Nasonia vitripennisウイルス、Pirizalイフラウイルス、Psammotettix alienusイフラウイルス1、Rondoniaイフラウイルス1、Rondoniaイフラウイルス2、Scaphoideus titanusイフラウイルス1、Scaphoideus titanusイフラウイルス2、VDV-1/DWV組換え4、Vespa velutina Mokuウイルス、又はXysticus cristatusイフラウイルス。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Baculoviridae科由来のウイルスである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、アルファバキュロウイルス、ベータバキュロウイルス、デルタバキュロウイルス、ガンマバキュロウイルス、又はこれまで未分類のBaculoviridaeウイルスである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下の群から選択されるアルファバキュロウイルスのウイルスである:Adoxophyes honmai核多角体病ウイルス、Agrotis ipsilon複数型核多角体病ウイルス、Agrotis segetum核多角体病ウイルスA、Agrotis segetum核多角体病ウイルスB、Antheraea pernyi核多角体病ウイルス、Antheraea proylei核多角体病ウイルス、Philosamia cynthia ricini核多角体病ウイルスvirus、Anticarsia gemmatalis複数型核多角体病ウイルス、Autographa californica複数型核多角体病ウイルス、Anagrapha falcifera MNPV、Autographa californica核多角体病ウイルス、Galleria mellonella MNPV、Plutella xylostella複数型核多角体病ウイルス、Rachiplusia nu MNPV、Rachiplusia ou MNPV、Bombyx mori核多角体病ウイルス、Bombyx mandarina核多角体病ウイルス、Bombyx mandarina核多角体病ウイルスS2、Bombyx mori核多角体病ウイルスK1、Buzura suppressaria核多角体病ウイルス、Catopsilia pomona核多角体病ウイルス、Choristoneura fumiferana DEF複数型核多角体病ウイルス、Choristoneura fumiferana複数型核多角体病ウイルス、Choristoneura occidentalisアルファバキュロウイルス、Choristoneura murinana核多角体病ウイルス、Choristoneura rosaceana核多角体病ウイルス、Chrysodeixis chalcites核多角体病ウイルス、Chrysodeixis chalcites SNPV TF1-A、Chrysodeixis includens核多角体病ウイルス、Pseudoplusia includens SNPV IE、Clanis bilineata核多角体病ウイルス、Dasychira pudibunda核多角体病ウイルス、Ectropis obliqua核多角体病ウイルス、Epiphyas postvittana核多角体病ウイルス、Euproctis pseudoconspersa核多角体病ウイルス、Helicoverpa armigera核多角体病ウイルス、Helicoverpa armigera NPV NNg1、Helicoverpa armigera NPV 株Australia、Helicoverpa armigera核多角体病ウイルスG4、Helicoverpa armigera SNPV、Helicoverpa SNPV AC53、Helicoverpa zea単一型核多角体病ウイルス、Hemileuca species核多角体病ウイルス、Hemileuca sp.核多角体病ウイルス、Hyphantria cunea核多角体病ウイルス、Lambdina fiscellaria核多角体病ウイルス、Leucania separata核多角体病ウイルス、Lonomia obliqua核多角体病ウイルス、Lonomia obliqua複数型核多角体病ウイルス、Lymantria dispar複数型核多角体病ウイルス、Lymantria xylina核多角体病ウイルス、Mamestra brassicae複数型核多角体病ウイルス、Mamestra configurata核多角体病ウイルスA、Mamestra configurata核多角体病ウイルスB、Helicoverpa armigera複数型核多角体病ウイルス、Maruca vitrata核多角体病ウイルス、Mythimna unipuncta核多角体病ウイルス、Operophtera brumata核多角体病ウイルス、Orgyia leucostigma核多角体病ウイルス、Orgyia pseudotsugata複数型核多角体病ウイルス、Oxyplax ochracea核多角体病ウイルス、Perigonia lusca核多角体病ウイルス、Perigonia lusca単一型核多角体病ウイルス、Spodoptera exigua複数型核多角体病ウイルス、Spodoptera exigua核多角体病ウイルス(株US)、Spodoptera frugiperda複数型核多角体病ウイルス、Spodoptera littoralis核多角体病ウイルス、Spodoptera litura核多角体病ウイルス、Sucra jujuba核多角体病ウイルス、Thysanoplusia orichalcea核多角体病ウイルス、Trichoplusia ni単一型核多角体病ウイルス、Wiseana signata核多角体病ウイルス、未分類のアルファバキュロウイルス、Abraxas grossulariata核多角体病ウイルス、Actias selene核多角体病ウイルス、Adoxophyes orana核多角体病ウイルス、Agraulis vanillae MNPV、Agrotis exclamationis核多角体病ウイルス、Agrotis ipsilon複数カプシド核多角体病ウイルス、Amorbia cuneacapsa核多角体病ウイルス、Amorbia cuneana核多角体病ウイルス、Ampelophaga rubiginosa核多角体病ウイルス、Amsacta albistriga核多角体病ウイルス、Anagrapha falcifera複数型核多角体病ウイルス、Antheraea polyphemus核多角体病ウイルス、Anticarsia gemmatalis核多角体病ウイルス、Apocheima cinerarium核多角体病ウイルス、Aporia crataegi核多角体病ウイルス、Archips cerasivoranus核多角体病ウイルス、Archips rosanus核多角体病ウイルス、Attacus ricini核多角体病ウイルス、Autographa biloba核多角体病ウイルス、Autographa gamma核多角体病ウイルス、Autographa nigrisigna核多角体病ウイルス、Boarmia bistortata核多角体病ウイルス、Bombyx mandarina核多角体病ウイルス、Busseola fusca核多角体病ウイルス、Catposilia pomona核多角体病ウイルス、Cerapteryx graminis核多角体病ウイルス、Choristoneura diversana核多角体病ウイルス、Choristoneura occidentalis核多角体病ウイルス、Chorizagrotis auxiliaris核多角体病ウイルス、Chrysodeixis includens NPV、Coloradia pandoraアルファバキュロウイルス、Coloradia pandora核多角体病ウイルス、Condylorrhiza vestigialis MNPV、Condylorrhiza vestigialis複数型核多角体病ウイルス、Cryptophlebia peltastica核多角体病ウイルス、Cyclophragma undans核多角体病ウイルス、Dasychira plagiata核多角体病ウイルス、Dendrolimus kikuchii核多角体病ウイルス、Diaphania pulverulentalis核多角体病ウイルス、Dione juno MNPV tmk1/ARG/2003、Dione juno核多角体病ウイルス、Dirphia peruvianus核多角体病ウイルス、Ectropis grisescens核多角体病ウイルス、Epinotia granitalis核多角体病ウイルス、Euproctis digramma核多角体病ウイルス、Gilpinia hercyniae核多角体病ウイルス、Heliconius erato核多角体病ウイルス、Helicoverpa assulta核多角体病ウイルス、Helicoverpa gelotopoeon単一型核多角体病ウイルス、Heliothis peltigera SNPV、Heliothis zea核多角体病ウイルス、Hemerocampa vetusta核多角体病ウイルス、Hemileucaアルファバキュロウイルス、Hyposidra infixaria NPV、Hyposidra talaca NPV、Iragoides fasciata核多角体病ウイルス、Junonia coenia核多角体病ウイルス、Leucoma salicis核多角体病ウイルス、Lymantria mathura mutiple核多角体病ウイルス、Lymantria monacha核多角体病ウイルス、Lymantria xylina核多角体病ウイルス2、Malacosomaアルファバキュロウイルス、Malacosoma americanum核多角体病ウイルス、Malacosoma californicum核多角体病ウイルス、Malacosoma californicum pluviale核多角体病ウイルス、Malacosoma disstria核多角体病ウイルス、Malacosoma neustria核多角体病ウイルス、Mamestra configurata核多角体病ウイルス、Neophasiaアルファバキュロウイルス、Nepytia phantasmaria核多角体病ウイルス、Nymphalis io核多角体病ウイルス、Oak looperアルファバキュロウイルス、Ophiusa disjungens核多角体病ウイルス、Orgyia anartoides核多角体病ウイルス、Orgyia ericae核多角体病ウイルス、Orgyia pseudotsugata単一カプシド核多角体病ウイルス、Panolis flammea核多角体病ウイルス、Peridromaアルファバキュロウイルス、Peridroma margaritosa核多角体病ウイルス、Perina nuda核多角体病ウイルス、Phryganidia californica核多角体病ウイルス、Plusia acuta核多角体病ウイルス、Plusia orichalcea核多角体病ウイルス、Plutella maculipennis核多角体病ウイルス、Pseudaletiaアルファバキュロウイルス、Pseudoplusia includens核多角体病ウイルス、Pterolocera amplicornis核多角体病ウイルス、Rachiplusia nu核多角体病ウイルス、Rachiplusia nu単一型核多角体病ウイルス、Samia cynthia核多角体病ウイルス、Spilarctia obliqua核多角体病ウイルス、Spilosoma obliqua核多角体病ウイルス、Spilosoma phasma核多角体病ウイルス、Spodoptera cosmioides核多角体病ウイルス、Spodoptera eridania核多角体病ウイルス、Spodoptera exempta核多角体病ウイルス、Spodoptera littoralis複数カプシド核多角体病ウイルス、Spodoptera litura MNPV、Spodoptera litura核多角体病ウイルスII、Spodoptera terricola核多角体病ウイルス、Tineola bisselliella核多角体病ウイルス、Troides aeacus核多角体病ウイルス、Wiseana cervinata核多角体
病ウイルス、Agraulis sp.核多角体病ウイルス、Malacosoma sp.アルファバキュロウイルス、Malacosoma sp.核多角体病ウイルス、Neophasia sp.アルファバキュロウイルス、及び未同定の核多角体病ウイルス。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下の群から選択されるベータバキュロウイルスのウイルスである:Adoxophyes oranaグラニュロウイルス、Agrotis segetumグラニュロウイルス、Artogeia rapaeグラニュロウイルス、Pieris brassicaeグラニュロウイルス、Choristoneura fumiferanaグラニュロウイルス、Choristoneura occidentalisグラニュロウイルス、Clostera anachoretaグラニュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルスA、Clostera anastomosisグラニュロウイルスHenan、Clostera anastomosisグラニュロウイルスB、Cnaphalocrocis medinalisグラニュロウイルス、Cryptophlebia leucotretaグラニュロウイルス、Cydia pomonellaグラニュロウイルス、Cydia pomonella顆粒病ウイルス(メキシコ分離株)、Diatraea saccharalisグラニュロウイルス、Epinotia aporemaグラニュロウイルス、Erinnyis elloグラニュロウイルス、Harrisina brilliansグラニュロウイルス、Helicoverpa armigeraグラニュロウイルス、Lacanobia oleraceaグラニュロウイルス、Mocis latipesグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスA、Pseudalatia unipunctaグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスB、Mythimna unipunctaグラニュロウイルス、Phthorimaea operculellaグラニュロウイルス、Plodia interpunctellaグラニュロウイルス、Plutella xylostellaグラニュロウイルス、Spodoptera frugiperdaグラニュロウイルス、Spodoptera lituraグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルスLBIV-12、Xestia c-nigrumグラニュロウイルス、Achaea janataグラニュロウイルス、Adoxophyes honmaiグラニュロウイルス、Agrotis exclamationisグラニュロウイルス、Amelia palloranaグラニュロウイルス、Andraca bipunctataグラニュロウイルス、Autographa gammaグラニュロウイルス、Caloptilia theivoraグラニュロウイルス、Choristoneura murinanaグラニュロウイルス、Choristoneura viridisベータバキュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルス、Cnephasia longanaグラニュロウイルス、Estigmene acreaグラニュロウイルス、Euxoa ochrogasterグラニュロウイルス、Heliothis armigeraグラニュロウイルス、Hoplodrina ambiguaグラニュロウイルス、Hyphantria cuneaグラニュロウイルス、Natada narariaグラニュロウイルス、Nephelodes emmedoniaグラニュロウイルス、Pandemis limitataグラニュロウイルス、Peridorma morpontoraグラニュロウイルス、Pieris rapaeグラニュロウイルス、Plathypena scabraグラニュロウイルス、Pseudaletiaベータバキュロウイルス、Scotogramma trifoliiグラニュロウイルス、Spodoptera androgeaグラニュロウイルス、Spodoptera littoralisグラニュロウイルス、Tecia solanivoraグラニュロウイルス、及びMocis sp.グラニュロウイルス。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下の群から選択されるデルタバキュロウイルスのウイルスである:Culex nigripalpus核多角体病ウイルス、及びCulex nigripalpus NPV Florida/1997。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下の群から選択されるガンマバキュロウイルスウイルスである:Neodiprion lecontei核多角体病ウイルス、Neodiprion lecontei NPV(カナダ株)、Neodiprion sertifer核多角体病ウイルス、未分類のガンマバキュロウイルス、及びNeodiprion abietis NPV。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下の群から選択される、これまで未分類のBaculoviridaeウイルスである:Achaea faber核多角体病ウイルス、Aedes sollicitans核多角体病ウイルス、Aglais urticae核多角体病ウイルス、Agraulis vanillae核多角体病ウイルス、Anomis sabulifera核多角体病ウイルス、Antheraea yamamai核多角体病ウイルス、Anthophila fabricianaグラニュロウイルス、Aroa discalis核多角体病ウイルス、Baculovirus penaei、Cadra cautella核多角体病ウイルス、Chaliopsis junodi核多角体病ウイルス、Cotesia marginiventrisバキュロウイルス、Cynosarga ornata核多角体病ウイルス、Darna narariaグラニュロウイルス、Darna trimaグラニュロウイルス、Erannis defoliaria核多角体病ウイルス、Euplexia luciparaグラニュロウイルス、Euproctis chrysorrhoea核多角体病ウイルス、Euproctis similis核多角体病ウイルス、性腺特異的ウイルス、Homona coffeariaグラニュロウイルス、Hyblaea puera核多角体病ウイルス、Idaea seriata核多角体病ウイルス、Junonia coeniaグラニュロウイルス、Lasiocampa quercus核多角体病ウイルス、Lemyra imparilis核多角体病ウイルス、Mahasena corbetti核多角体病ウイルス、Melanchra persicariaeグラニュロウイルス、Operophtera bruceata核多角体病ウイルス、Orgyia antiqua核多角体病ウイルス、Orgyia mixta核多角体病ウイルス、Pachytrina philargyria核多角体病ウイルス、Pareuchaetes pseudoinsulata核多角体病ウイルス、Penaeus monodon核多角体病ウイルス、Phalera bucephala核多角体病ウイルス、Polygonia c-album核多角体病ウイルス、Samia ricini核多角体病ウイルス、Spilosoma luteaグラニュロウイルス、Spodoptera albula核多角体病ウイルス、Trabala vishnou核多角体病ウイルス、Uranotaenia sapphirina核多角体病ウイルス、Urbanus proteus核多角体病ウイルス、Utetheisa pulchella核多角体病ウイルス、Vanessa atalanta核多角体病ウイルス、Vanessa cardui核多角体病ウイルス、及びWiseana cervinataグラニュロウイルス。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Adoxophyes oranaグラニュロウイルス、Agrotis segetumグラニュロウイルス、Artogeia rapaeグラニュロウイルス、Pieris brassicaeグラニュロウイルス、Choristoneura fumiferanaグラニュロウイルス、Choristoneura occidentalisグラニュロウイルス、Clostera anachoretaグラニュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルスA、Clostera anastomosisグラニュロウイルスHenan、Clostera anastomosisグラニュロウイルスB、Cnaphalocrocis medinalisグラニュロウイルス、Cryptophlebia leucotretaグラニュロウイルス、Cydia pomonellaグラニュロウイルス、Cydia pomonella granulosis virus(メキシコ分離株)、Diatraea saccharalisグラニュロウイルス、Epinotia aporemaグラニュロウイルス、Erinnyis elloグラニュロウイルス、Harrisina brilliansグラニュロウイルス、Helicoverpa armigeraグラニュロウイルス、Lacanobia oleraceaグラニュロウイルス、Mocis latipesグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスA、Pseudalatia unipunctaグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスB、Mythimna unipunctaグラニュロウイルス、Phthorimaea operculellaグラニュロウイルス、Plodia interpunctellaグラニュロウイルス、Plutella xylostellaグラニュロウイルス、Spodoptera frugiperdaグラニュロウイルス、Spodoptera lituraグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルスLBIV-12、Xestia c-nigrumグラニュロウイルス、未分類のベータバキュロウイルス、Achaea janataグラニュロウイルス、Adoxophyes honmaiグラニュロウイルス、Agrotis exclamationisグラニュロウイルス、Amelia palloranaグラニュロウイルス、Andraca bipunctataグラニュロウイルス、Autographa gammaグラニュロウイルス、Caloptilia theivoraグラニュロウイルス、Choristoneura murinanaグラニュロウイルス、Choristoneura viridisベータバキュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルス、Cnephasia longanaグラニュロウイルス、Estigmene acreaグラニュロウイルス、Euxoa ochrogasterグラニュロウイルス、Heliothis armigeraグラニュロウイルス、Hoplodrina ambiguaグラニュロウイルス、Hyphantria cuneaグラニュロウイルス、Natada narariaグラニュロウイルス、Nephelodes emmedoniaグラニュロウイルス、Pandemis limitataグラニュロウイルス、Peridorma morpontoraグラニュロウイルス、Pieris rapaeグラニュロウイルス、Plathypena scabraグラニュロウイルス、Pseudaletiaベータバキュロウイルス、Scotogramma trifoliiグラニュロウイルス、Spodoptera androgeaグラニュロウイルス、Spodoptera littoralisグラニュロウイルス、Tecia solanivoraグラニュロウイルス、又はMocis sp.グラニュロウイルスである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Cydia pomonellaグラニュロウイルスである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Cydia pomonellaグラニュロウイルス分離株V22である。
組み合わせ:細菌/細菌毒素及びCRIP
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、細菌である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、細菌から単離されたペプチド又は毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、細菌毒素である。
Photorhabdus及び/又はその毒素
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Xenorhabdus属又はPhotorhabdus属に属する細菌から単離された細菌毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Photorhabdus毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下からなる群から選択されるPhotorhabdus毒素である:Photorhabdus akhurstii毒素、Photorhabdus asymbiotica毒素、Photorhabdus asymbiotica subsp.asymbiotica毒素、Photorhabdus asymbiotica subsp.asymbiotica ATCC 43949毒素、Photorhabdus australis毒素、Photorhabdus australis DSM 17609毒素、Photorhabdus bodei毒素、Photorhabdus caribbeanensis毒素、Photorhabdus cinerea毒素、Photorhabdus hainanensis毒素、Photorhabdus heterorhabditis毒素、Photorhabdus kayaii毒素、Photorhabdus khanii毒素、Photorhabdus khanii NC19毒素、Photorhabdus khanii subsp.guanajuatensis毒素、Photorhabdus kleinii毒素、Photorhabdus laumondii毒素、Photorhabdus laumondii subsp.clarkei毒素、Photorhabdus laumondii subsp.laumondii毒素、Photorhabdus laumondii subsp.laumondii TTO1毒素、Photorhabdus luminescens毒素、Photorhabdus luminescens BA1毒素、Photorhabdus luminescens NBAII H75HRPL105毒素、Photorhabdus luminescens NBAII HiPL101毒素、Photorhabdus luminescens subsp.luminescens毒素、Photorhabdus luminescens subsp.luminescens ATCC 29999毒素、Photorhabdus luminescens subsp.mexicana毒素、Photorhabdus luminescens subsp.sonorensis毒素、Photorhabdus namnaonensis毒素、Photorhabdus noenieputensis毒素、Photorhabdus stackebrandtii毒素、Photorhabdus tasmaniensis毒素、Photorhabdus temperata毒素、Photorhabdus temperata J3毒素、Photorhabdus temperata subsp.phorame毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata M1021毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata Meg1毒素、Photorhabdus thracensis毒素、未分類のPhotorhabdus毒素、Photorhabdus sp.毒素、Photorhabdus sp.3014毒素、Photorhabdus sp.3240毒素、Photorhabdus sp.Az29毒素、Photorhabdus sp.BS21毒素、Photorhabdus sp.CbKj163毒素、Photorhabdus sp.CRCIA-P01毒素、Photorhabdus sp.ENY毒素、Photorhabdus sp.FL2122毒素、Photorhabdus sp.FL480毒素、Photorhabdus sp.FsIw96毒素、Photorhabdus sp.GDd233毒素、Photorhabdus sp.H3086毒素、Photorhabdus sp.H3107毒素、Photorhabdus sp.H3240毒素、Photorhabdus sp.HB301毒素、Photorhabdus sp.HB78毒素、Photorhabdus sp.HB89毒素、Photorhabdus sp.HIT毒素、Photorhabdus sp.HO1毒素、Photorhabdus sp.HUG-39毒素、Photorhabdus sp.IT毒素、Photorhabdus sp.JUN毒素、Photorhabdus sp.KcTs129毒素、Photorhabdus sp.KJ13.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ14.3 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ24.5 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ29.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ37.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ7.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ8.2 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ9.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ9.2 TH毒素、Photorhabdus sp.KK1.3 TH毒素、Photorhabdus sp.KK1.4 TH毒素、Photorhabdus sp.KMD74毒素、Photorhabdus sp.KOH毒素、Photorhabdus sp.MID10毒素、Photorhabdus sp.MOL毒素、Photorhabdus sp.MSW_058毒素、Photorhabdus sp.MSW_079毒素、Photorhabdus sp.NK2.1 TH毒素、Photorhabdus sp.NK2.5 TH毒素、Photorhabdus sp.NnMt2h毒素、Photorhabdus sp.NP1毒素、Photorhabdus sp.OH10毒素、Photorhabdus sp.OnIr40毒素、Photorhabdus sp.OnKn2毒素、Photorhabdus sp.PB10.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB16.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB17.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB17.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB2.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB22.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB22.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB32.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB33.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB33.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB37.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB39.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB4.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB41.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB45.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB47.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB47.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB5.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB5.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB50.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB51.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB52.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB54.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB59.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB6.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB67.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB67.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB68.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB7.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB78.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB80.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB80.4 TH毒素、Photorhabdus sp.Pjun毒素、Photorhabdus sp.RW14-46毒素、Photorhabdus sp.S10-54毒素、Photorhabdus sp.S12-55毒素、Photorhabdus sp.S14-60毒素、Photorhabdus sp.S15-56毒素、Photorhabdus sp.S5P8-50毒素、Photorhabdus sp.S7-51毒素、Photorhabdus sp.S8-52毒素、Photorhabdus sp.S9-53毒素、Photorhabdus sp.SJ2毒素、Photorhabdus sp.SN259毒素、Photorhabdus sp.SP1.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP16.4 TH毒素、Photorhabdus sp.SP21.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP3.4 TH毒素、Photorhabdus sp.SP4.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP7.3 TH毒素、Photorhabdus sp.TyKb140毒素、Photorhabdus sp.UK76毒素、Photorhabdus sp.VMG毒素、Photorhabdus sp.WA21C毒素、Photorhabdus sp.WkSs43毒素、Photorhabdus sp.Wx13毒素、Photorhabdus sp.X4毒素、Photorhabdus sp.YNb90毒素、及びPhotorhabdus sp.ZM毒素。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Photorhabdus luminescens毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Photorhabdus luminescens毒素であり、Photorhabdus luminescens毒素が、Photorhabdus luminescens「毒素複合体a」(Tca)を含む。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Photorhabdus luminescens毒素であり、Photorhabdus luminescens毒素が、Photorhabdus luminescens「毒素複合体c」(Tcc)を含む。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Photorhabdus luminescens毒素であり、Photorhabdus luminescens毒素が、Photorhabdus luminescens「毒素複合体d」(Tcd)を含む。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、TcaAタンパク質(配列番号616)、TcaBタンパク質(配列番号617)、TcaCタンパク質(配列番号618)、及びTcaZタンパク質(配列番号619)を含むTcaである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上i)と、を含み、IAが、配列番号616~619配列番号に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有するPhotorhabdus luminescens「毒素複合体a」(Tca)である。
エルシニア生物、及びそれ由来の産物
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、エルシニア属に属する1つ以上の生物である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、エルシニア属に属する生物から単離された1つ以上のペプチドである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下の種のうちの1つ以上である:Yersinia aldovaeyb、Yersinia aleksiciae、Yersinia bercovieri、Yersinia canariae、Yersinia enterocolitica、Yersinia enterocolitica subsp.enterocolitica、Yersinia enterocolitica subsp.palearctica、Yersinia entomophaga、Yersinia frederiksenii、Yersinia hibernica、Yersinia intermedia、Yersinia kristensenii、Yersinia kristensenii subsp.kristensenii、Yersinia kristensenii subsp.rochesterensis、Yersinia massiliensis、Yersinia mollaretii、Yersinia nurmii、Yersinia pekkanenii、Yersinia pestis、Yersinia pestis subsp.pestis、Yersinia pestis subsp.medievalis、Yersinia pestis subsp.orientalis、Yersinia pseudotuberculosis、Yersinia pseudotuberculosis subsp.pestis、Yersinia pseudotuberculosis subsp.pseudotuberculosis、Yersinia rohdei、Yersinia ruckeri、Yersinia similis、又はYersinia wautersii。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、以下の種のうちの1つ以上から単離された1つ以上のペプチドである:Yersinia aldovaeyb、Yersinia aleksiciae、Yersinia bercovieri、Yersinia canariae、Yersinia enterocolitica、Yersinia enterocolitica subsp.enterocolitica、Yersinia enterocolitica subsp.palearctica、Yersinia entomophaga、Yersinia frederiksenii、Yersinia hibernica、Yersinia intermedia、Yersinia kristensenii、Yersinia kristensenii subsp.kristensenii、Yersinia kristensenii subsp.rochesterensis、Yersinia massiliensis、Yersinia mollaretii、Yersinia nurmii、Yersinia pekkanenii、Yersinia pestis、Yersinia pestis subsp.pestis、Yersinia pestis subsp.medievalis、Yersinia pestis subsp.orientalis、Yersinia pseudotuberculosis、Yersinia pseudotuberculosis subsp.pestis、Yersinia pseudotuberculosis subsp.pseudotuberculosis、Yersinia rohdei、Yersinia ruckeri、Yersinia similis、又はYersinia wautersii。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Yersinia entomophaga又はYersinia nurmiiである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Yersinia entomophaga又はYersinia nurmiiから単離された1つ以上のペプチドである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、「Yen-TC」毒素複合体(TC)である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、1つ以上のTCタンパク質である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、TcA、TcB、及びTcCである。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、Yersinia entomophaga細菌及び/又はその毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、1つ以上のYersinia nurmii細菌、及び/又はそれ由来の毒素である。
一部の実施形態では、本発明の組み合わせ又は組成物は、1つ以上の殺虫剤(IA)と、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、を含み、IAが、1つ以上のYersinia entomophaga細菌及び/又はそれ由来の毒素、並びに1つ以上のYersinia nurmii細菌及び/又はそれ由来の毒素である。
組み合わせ:Bt毒素、CRIP、及びそれらの組み合わせ
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、表Aのいずれか1つ以上のCRIPを、IAグループ番号8(例えば、IA番号B124~B150)に含まれる1つ以上のIAと組み合わせて含むことができる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、(1)CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、(2)1つ以上のBtペプチド及び/又は毒素と、を含み得る。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、(1)CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、(2)1つ以上のBtペプチドと、を含み、組み合わせ又は組成物が、追加の薬剤(例えば、本明細書に記載される1つ以上の農薬及び/又は殺虫剤)を更に含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、(1)CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、(2)1つ以上のBtペプチドと、を含み、組み合わせ又は組成物が、賦形剤を更に含む。
一部の実施形態では、昆虫を制御する方法は、昆虫の部位に、Bacillus thuringiensis(Bt)タンパク質を適用することと、次いで、昆虫の部位に、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上を適用することと、を含み、当該Bt及び/又はCRIPが、同時に又は順次のいずれかで適用される。
一部の実施形態では、組み合わせ及び/又は組成物は、本明細書に記載される、かつ/又は本明細書の表に列挙される、かつ/又は配列表ある、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、1つ以上のBt毒素(例えば、Cryタンパク質、Cytタンパク質、又はVipタンパク質)と、を含み得る。
一部の実施形態では、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上は、Bacillus thuringiensisから単離されたタンパク質と組み合わせることができる。例えば、一部の実施形態では、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上は、δ-エンドトキシン(例えば、結晶(Cry)毒素及び/又は細胞溶解(Cyt)毒素)、植物性殺虫タンパク質(Vip)、分泌型殺虫タンパク質(Sip)、又はBin様毒素と組み合わせることができる。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、Bt毒素が、傍胞子結晶性毒素(parasporal crystal toxin)、分泌タンパク質、β-エキソトキシン、41.9-kDa殺虫毒素、スフェリコリシン(sphaericolysin)、アルベオリシン(alveolysin)、又はエンハンシン(enhancin)様タンパク質である。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、Bt毒素が、傍胞子結晶性毒素であり、傍胞子結晶性毒素が、δ-エンドトキシンである。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、Bt毒素が、δ-エンドトキシンであり、これは、3ドメイン(3D)Cryファミリータンパク質、バイナリBin様ファミリー毒素、ETX_MTX2様ファミリー毒素、Toxin-10ファミリー毒素、エロリジンファミリー毒素、又は細胞溶解素である。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、Bt毒素が、3ドメイン(3D)Cry毒素、殺蚊Cry毒素(Mtx)、バイナリ様(Bin)毒素、又はCyt毒素であるδ-エンドトキシンである。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、Bt毒素が、3ドメイン(3D)Cry毒素又はCyt毒素であるδ-エンドトキシンである。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上を含み、以下のCryタンパク質のうちの1つ以上と組み合わされる:Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A様、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb様、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H様、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I様、Cry1I様、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1様、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A様、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba様、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8様、Cry8様、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa、like、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9様、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A様、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa様、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20様、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cr
y21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43様、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1、及び/又はCry78Aa1。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上を含み、1つ以上のBt毒素と組み合わされ、当該Bt毒素が、Cry毒素、Cyt毒素、又はVip毒素(例えば、本明細書に記載されるCry、Cyt、又はVipのうちのいずれか)である。
一部の実施形態では、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上は、配列番号412~461に示されるアミノ酸配列を有する1つ以上のCryタンパク質と組み合わせることができる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上を含み、以下のCytタンパク質のうちの1つ以上と組み合わされる:Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa様、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba様、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B様、Cyt2Ca1、及び/又はCyt3Aa1。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上を含み、配列番号462~481に示されるアミノ酸配列を有する1つ以上のCytタンパク質と組み合わされる。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、Bt毒素が、植物性殺虫タンパク質(Vip)、分泌型殺虫タンパク質(Sip)、Bin様ファミリータンパク質、又はETX_MTX2ファミリータンパク質である分泌タンパク質である。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、Bt毒素が、Vipである分泌タンパク質である。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、Bt毒素が、Vip1ファミリータンパク質、Vip2ファミリータンパク質、Vip3ファミリータンパク質、又はVip4ファミリータンパク質であるVipである。
一部の実施形態では、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上は、以下のVipタンパク質のうちの1つ以上と組み合わせることができる:Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4、及び/又はVip4Aa1。
一部の実施形態では、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上は、配列番号482~587に示されるアミノ酸配列を有する1つ以上のVipタンパク質と組み合わせることができる。
CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、1つ以上のBtペプチドと、を含む、前述の組み合わせ又は組成物のいずれも、同じ組成物又は別個の組成物のいずれかで、同時に及び/又は順次適用することができる。CRIPとBtペプチドの比は、標的とする害虫、及び使用者のニーズに依存するであろう。
一部の実施形態では、Btタンパク質及びCRIPは、(Btタンパク質)耐性昆虫に適用することができる。BtとCRIPの比は、乾燥重量基準で、以下の比:少なくとも約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、若しくは1:10,000、又はこれらの値のうちのいずれか2つの任意の組み合わせから選択することができる。組成物中のBt及びCRIPの総濃度は、以下のパーセント濃度:0、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、若しくは100%、又はこれらの値のうちのいずれか2つの間の任意の範囲から選択され、組成物の残りのパーセントは、賦形剤からなる。
一部の実施形態では、1つ以上のCRIPは、製剤(例えば、極性非プロトン性溶媒及び/又は水で構成される製剤)に含まれ得、かつ/又は極性非プロトン性溶媒が1~99重量%の量で存在し、極性プロトン性溶媒が1~99重量%の量で存在し、水が0~98重量%の量で存在する。一部の実施形態では、製剤は、CRIPと、別のIA(例えば、Btタンパク質)と、を含む。一部の実施形態では、Btタンパク質は、市販の製品(例えば、DiPel(登録商標))に含まれている。極性非プロトン性溶媒製剤は、MSOを含有する場合、特に効果的である。MSOは、メチル化種子油と界面活性剤のブレンドであり、約80~85%の量のダイズ油のメチルエステルと15~20%の界面活性剤を使用する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis(Bt)タンパク質と、CRIPと、を含むことができ、Btペプチドが、MTX2毒素(例えば、Lysinibacillus sphaericusから単離されたMTX2毒素)であり得る。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis(Bt)タンパク質と、CRIPと、を含むことができ、Btペプチドが、Bin様毒素(例えば、Lysinibacillus sphaericusから単離されたBin様毒素)であり得る。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis(Bt)タンパク質と、CRIPと、を含むことができ、Btペプチドが、Bacillus thuringiensis亜種から単離され得る。例えば、一部の実施形態では、Bacillus thuringiensis亜種は、以下の亜種のうちの1つであり得る:aizawai、aizawai/pacificus、alesti、amagiensis、andalousiensis、argentinensis、asturiensis、azorensis、balearica、berliner、bolivia、brasilensis、cameroun、canadensis、chanpaisis、chinensis、colmeri、coreanensis、dakota、darmstadiensis、dendrolimus、entomocidus、entomocidus/subtoxicus、finitimus、fukuokaensis、galechiae、galleriae、graciosensis、guiyangiensis、higo、huazhongensis、iberica、indiana、israelensis、israelensis/tochigiensis、japonensis、jegathesan、jinghongiensis、kenyae、kim、kumamtoensis、kurstaki、kyushuensis、leesis、londrina、malayensis、medellin、mexicanensis、mogi、monterrey、morrisoni、muju、navarrensis、neoleonensis、nigeriensis、novosibirsk、ostriniae、oswaldocruzi、pahangi、pakistani、palmanyolensis、pingluonsis、pirenaica、poloniensis、pondicheriensis、pulsiensis、rongseni、roskildiensis、san diego、seoulensis、shandongiensis、silo、sinensis、sooncheon、sotto、sotto/dendrolimus、subtoxicus、sumiyoshiensis、sylvestriensis、tenebrionis、thailandensis、thompsoni、thuringiensis、tochigiensis、toguchini、tohokuensis、tolworthi、toumanoffi、vazensis、wratislaviensis、wuhanensis、xiaguangiensis、yosoo、yunnanensis、zhaodongensis、str。Al Hakam、又はkonkukian。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis(Bt)タンパク質と、CRIPと、を含むことができ、Btペプチドが、以下の群から選択されるBacillus thuringiensis var.から単離される:Bacillus thuringiensis var.aizawai、Bacillus thuringiensis var.aizawai/pacificus、Bacillus thuringiensis var.alesti、Bacillus thuringiensis var.amagiensis、Bacillus thuringiensis var.andalousiensis、Bacillus thuringiensis var.argentinensis、Bacillus thuringiensis var.asturiensis、Bacillus thuringiensis var.azorensis、Bacillus thuringiensis var.balearica、Bacillus thuringiensis var.berliner、Bacillus thuringiensis var.bolivia、Bacillus thuringiensis var.brasilensis、Bacillus thuringiensis var.cameroun、Bacillus thuringiensis var.canadensis、Bacillus thuringiensis var.chanpaisis、Bacillus thuringiensis var.chinensis、Bacillus thuringiensis var.colmeri、Bacillus thuringiensis var.coreanensis、Bacillus thuringiensis var.dakota、Bacillus thuringiensis var.darmstadiensis、Bacillus thuringiensis var.dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus/subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.finitimus、Bacillus thuringiensis var.fukuokaensis、Bacillus thuringiensis var.galechiae、Bacillus thuringiensis var.galleriae、Bacillus thuringiensis var.graciosensis、Bacillus thuringiensis var.guiyangiensis、Bacillus thuringiensis var.higo、Bacillus thuringiensis var.huazhongensis、Bacillus thuringiensis var.iberica、Bacillus thuringiensis var.indiana、Bacillus thuringiensis var.israelensis、Bacillus thuringiensis var.israelensis/tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.japonensis、Bacillus thuringiensis var.jegathesan、Bacillus thuringiensis var.jinghongiensis、Bacillus thuringiensis var.kenyae、Bacillus thuringiensis var.kim、Bacillus thuringiensis var.kumamtoensis、Bacillus thuringiensis var.kunthalanags3、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX24、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX27、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX28、Bacillus thuringiensis var.kurstaki、Bacillus thuringiensis var.kyushuensis、Bacillus thuringiensis var.leesis、Bacillus thuringiensis var.londrina、Bacillus thuringiensis var.malayensis、Bacillus thuringiensis var.medellin、Bacillus thuringiensis var.mexicanensis、Bacillus thuringiensis var.mogi、Bacillus thuringiensis var.monterrey、Bacillus thuringiensis var.morrisoni、Bacillus thuringiensis var.muju、Bacillus thuringiensis var.navarrensis、Bacillus thuringiensis var.neoleonensis、Bacillus thuringiensis var.nigeriensis、Bacillus thuringiensis var.novosibirsk、Bacillus thuringiensis var.ostriniae、Bacillus thuringiensis var.oswaldocruzi、Bacillus thuringiensis var.pahangi、Bacillus thuringiensis var.pakistani、Bacillus thuringiensis var.palmanyolensis、Bacillus thuringiensis var.pingluonsis、Bacillus thuringiensis var.pirenaica、Bacillus thuringiensis var.poloniensis、Bacillus thuringiensis var.pondicheriensis、Bacillus thuringiensis var.pulsiensis、Bacillus thuringiensis var.rongseni、Bacillus thuringiensis var.roskildiensis、Bacillus thuringiensis var.san diego、Bacillus thuringiensis var.seoulensis、Bacillus thuringiensis var.shandongiensis、Bacillus thuringiensis var.silo、Bacillus thuringiensis var.sinensis、Bacillus thuringiensis var.sooncheon、Bacillus thuringiensis var.sotto、Bacillus thuringiensis var.sotto/dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.sumiyoshiensis、Bacillus thuringiensis var.sylvestriensis、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis、Bacillus thuringiensis var.thailandensis、Bacillus thuringiensis var.thompsoni、Bacillus thuringiensis var.thuringiensis、Bacillus thuringiensis var.tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.toguchini、Bacillus thuringiensis var.tohokuensis、Bacillus thuringiensis var.tolworthi、Bacillus thuringiensis var.toumanoffi、Bacillus thuringiensis var.vazensis、Bacillus thuringiensis var.wratislaviensis、Bacillus thuringiensis var.wuhanensis、Bacillus thuringiensis var.xiaguangiensis、Bacillus thuringiensis var.yosoo、Bacillus thuringiensis var.yunnanensis、Bacillus thuringiensis var.zhaodongensis、Bacillus thuringiensis str.Al Hakam、Bacillus thuringiensis T01-328、Bacillus thuringiensis YBT-1518、又はBacillus thuringiensis var.konkukian。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis(Bt)タンパク質と、CRIPと、を含むことができ、Btペプチドが、Bacillus thuringiensis血清型から単離される。例えば、一部の実施形態では、Btペプチドは、以下の群から選択されるBacillus thuringiensis血清型であり得る:Bacillus thuringiensis AKS-7、Bacillus thuringiensis Bt18247、Bacillus thuringiensis Bt18679、Bacillus thuringiensis Bt407、Bacillus thuringiensis DAR 81934、Bacillus thuringiensis DB27、Bacillus thuringiensis F14-1、Bacillus thuringiensis FC1、Bacillus thuringiensis FC10、Bacillus thuringiensis FC2、Bacillus thuringiensis FC6、Bacillus thuringiensis FC7、Bacillus thuringiensis FC8、Bacillus thuringiensis FC9、Bacillus thuringiensis HD-771、Bacillus thuringiensis HD-789、Bacillus thuringiensis HD1002、Bacillus thuringiensis IBL 200、Bacillus thuringiensis IBL 4222、Bacillus thuringiensis JM-Mgvxx-63、Bacillus thuringiensis LDC 391、Bacillus thuringiensis LM1212、Bacillus thuringiensis MC28、Bacillus thuringiensis Sbt003、Bacillus thuringiensis血清型aizawai、Bacillus thuringiensis血清型aizawai/pacificus、Bacillus thuringiensis血清型alesti、Bacillus thuringiensis血清型amagiensis、Bacillus thuringiensis血清型andalousiensis、Bacillus thuringiensis血清型argentinensis、Bacillus thuringiensis血清型asturiensis、Bacillus thuringiensis血清型azorensis、Bacillus thuringiensis血清型balearica、Bacillus thuringiensis血清型berliner、Bacillus thuringiensis血清型bolivia、Bacillus thuringiensis血清型brasilensis、Bacillus thuringiensis血清型cameroun、Bacillus thuringiensis血清型canadensis、Bacillus thuringiensis血清型chanpaisis、Bacillus thuringiensis血清型chinensis、Bacillus thuringiensis血清型colmeri、Bacillus thuringiensis血清型coreanensis、Bacillus thuringiensis血清型dakota、Bacillus thuringiensis血清型darmstadiensis、Bacillus thuringiensis血清型dendrolimus、Bacillus thuringiensis血清型entomocidus、Bacillus thuringiensis血清型entomocidus/subtoxicus、Bacillus thuringiensis血清型finitimus、Bacillus thuringiensis血清型fukuokaensis、Bacillus thuringiensis血清型galechiae、Bacillus thuringiensis血清型galleriae、Bacillus thuringiensis血清型graciosensis、Bacillus thuringiensis血清型guiyangiensis、Bacillus thuringiensis血清型higo、Bacillus thuringiensis血清型huazhongensis、Bacillus thuringiensis血清型iberica、Bacillus thuringiensis血清型indiana、Bacillus thuringiensis血清型israelensis、Bacillus thuringiensis血清型israelensis/tochigiensis、Bacillus thuringiensis血清型japonensis、Bacillus thuringiensis血清型jegathesan、Bacillus thuringiensis血清型jinghongiensis、Bacillus thuringiensis血清型kenyae、Bacillus thuringiensis血清型kim、Bacillus thuringiensis血清型kumamtoensis、Bacillus thuringiensis血清型kunthalanags3、Bacillus thuringiensis血清型kunthalaRX24、Bacillus thuringiensis血清型kunthalaRX27、Bacillus thuringiensis血清型kunthalaRX28、Bacillus thuringiensis血清型kurstaki、Bacillus thuringiensis血清型kyushuensis、Bacillus thuringiensis血清型leesis、Bacillus thuringiensis血清型londrina、Bacillus thuringiensis血清型malayensis、Bacillus thuringiensis血清型medellin、Bacillus thuringiensis血清型mexicanensis、Bacillus thuringiensis血清型mogi、Bacillus thuringiensis血清型monterrey、Bacillus thuringiensis血清型morrisoni、Bacillus thuringiensis血清型muju、Bacillus thuringiensis血清型navarrensis、Bacillus thuringiensis血清型neoleonensis、Bacillus thuringiensis血清型nigeriensis、Bacillus thuringiensis血清型novosibirsk、Bacillus thuringiensis血清型ostriniae、Bacillus thuringiensis血清型oswaldocruzi、Bacillus thuringiensis血清型pahangi、Bacillus thuringiensis血清型pakistani、Bacillus thuringiensis血清型palmanyolensis、Bacillus thuringiensis血清型pingluonsis、Bacillus thuringiensis血清型pirenaica、Bacillus thuringiensis血清型poloniensis、Bacillus thuringiensis血清型pondicheriensis、Bacillus thuringiensis血清型pulsiensis、Bacillus thuringiensis血清型rongseni、Bacillus thuringiensis血清型roskildiensis、Bacillus thuringiensis血清型san diego、Bacillus thuringiensis血清型seoulensis、Bacillus thuringiensis血清型shandongiensis、Bacillus thuringiensis血清型silo、Bacillus thuringiensis血清型sinensis、Bacillus thuringiensis血清型sooncheon、Bacillus thuringiensis血清型sotto、Bacillus thuringiensis血清型sotto/dendrolimus、Bacillus thuringiensis血清型subtoxicus、Bacillus thuringiensis血清型sumiyoshiensis、Bacillus thuringiensis血清型sylvestriensis、Bacillus thuringiensis血清型tenebrionis、Bacillus thuringiensis血清型thailandensis、Bacillus thuringiensis血清型thompsoni、Bacillus thuringiensis血清型thuringiensis、Bacillus thuringiensis血清型tochigiensis、Bacillus thuringiensis血清型toguchini、Bacillus thuringiensis血清型tohokuensis、Bacillus thuringiensis血清型tolworthi、Bacillus thuringiensis血清型toumanoffi、Bacillus thuringiensis血清型vazensis、Bacillus thuringiensis血清型wratislaviensis、Bacillus thuringiensis血清型wuhanensis、Bacillus thuringiensis血清型xiaguangiensis、Bacillus thuringiensis血清型yosoo、Bacillus thuringiensis血清型yunnanensis、Bacillus thuringiensis血清型zhaodongensis、Bacillus thuringiensis株。Al Hakam、Bacillus thuringiensis T01-328、Bacillus thuringiensis YBT-1518、及びBacillus thuringiensis血清型konkukian。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis(Bt)タンパク質と、CRIPと、を含むことができ、Btペプチドが、以下から単離される:Bacillus thuringiensis var.israelensis、Bacillus thuringiensis var.aizawai、Bacillus thuringiensis var.kurstaki、又はBacillus thuringiensis var.tenebrionensis。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、組み合わせが、殺虫効果をもたらし、Bt毒素が、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)毒素である。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、組み合わせが、殺虫効果をもたらし、Bti毒素が、Bacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144 Bti毒素である。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、組み合わせが、殺虫効果をもたらし、Bt毒素が、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)毒素である。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、組み合わせが、殺虫効果をもたらし、Btk毒素が、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19 Btk毒素である。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、組み合わせが、殺虫効果をもたらし、Bt毒素が、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)毒素である。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、組み合わせが、殺虫効果をもたらし、Btt毒素が、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176 Btt毒素である。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、組み合わせが、殺虫効果をもたらし、CRIPとBt毒素の比が、約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、又は1:10,000である。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、組み合わせが、殺虫効果をもたらし、Bt毒素とCRIPとの比が、約1:1~約1:200である。
一部の実施形態では、本発明は、CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素と、を含む組み合わせを提供し、組み合わせが、殺虫効果をもたらし、Bt毒素とCRIPの比が、約1:115である。
一部の実施形態では、本発明は、少なくとも1つのCRIPと、少なくとも1つのIAと、を含む組み合わせを提供し、CRIPが、TVPであり、IAが、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素であり、組み合わせが、殺虫効果をもたらし、TVPが、式(I)によるアミノ酸配列と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む:E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z1-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、又はNであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T又はAであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在であり、ZがTである場合、TVPが、グリコシル化されている)。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるCRIPと、本明細書に記載されるBt毒素の組み合わせのうちのいずれかは、賦形剤を更に含むことができる。
CRIP:A1~A68のうちの1つ以上と、Bt毒素とは、同じ組成物又は別個の組成物のいずれかで、同時に及び/又は順次適用することができる。CRIPとIA(すなわち、1つ以上の化学物質、分子、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、毒素、有毒物質、毒、殺虫剤、農薬、有機化合物、無機化合物、原核生物又は真核生物、並びに当該原核生物又は真核生物から生成される物質)の比は、標的とされる害虫、及び使用者のニーズに依存するであろう。
更に、CRIPと、Bt毒素と、を含む前述の組み合わせ又は組成物のいずれかは、作物領域又は植物に適用され得、他の化合物と同時に又は順次処理される。例えば、一部の実施形態では、これらの化合物は、肥料、除草剤、凍結保護剤、界面活性剤、洗剤、殺虫石鹸、休眠油、ポリマー、及び/又は製剤の単回適用後の標的領域の長期投薬を可能にする徐放性若しくは生分解性の担体製剤であり得る。また、他の化合物は、必要に応じて、製剤分野で慣習的に用いられる更なる農業的に許容される担体、界面活性剤、又は適用促進アジュバントとともに、選択的除草剤、化学的殺虫剤、殺ウイルス剤、殺微生物剤、殺アメーバ剤、農薬、殺真菌剤、細殺菌剤、殺線虫剤、殺軟体動物剤、又はこれらの調製物のうちのいくつかの組み合わせであり得る。一部の実施形態では、好適な担体及びアジュバントは、固体又は液体であり得、製剤技術において通常用いられる物質(例えば、天然又は再生ミネラル物質、溶媒、分散剤、湿潤剤、粘着剤、結合剤、又は肥料に相当する。同様に、前述の組み合わせ、組成物、又は製剤のうちのいずれかは、農薬製剤の標的害虫による摂食又は摂取を可能にするために、食用の「ベイト」に調製され得るか、又は害虫の「トラップ」に加工され得る。
本発明の使用方法
植物、植物部分、及び種子を保護するための方法
一部の実施形態では、本開示は、本開示は、農学的及び/又は非農学的用途において有害無脊椎動物(invertebrate pest)を防除するための方法を含み、有害無脊椎動物又その環境(植物表面若しくはその一部を含む固体表面)を、生物学的有効量の、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の組み合わせと接触させることを含む。
一部の実施形態では、本開示は、本開示は、農学的及び/又は非農学的用途において有害無脊椎動物(invertebrate pest)を防除するための方法を含み、有害無脊椎動物又その環境(植物表面若しくはその一部を含む固体表面)を、生物学的有効量の組成物、又は1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の組み合わせと接触させることを含む。1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む好適な組成物の例としては、組成物に製剤化される液体溶液、エマルション、粉末、顆粒、ナノ粒子、マイクロ粒子、又は上述の組み合わせが挙げられ、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上が、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と同じ組成物上又は組成物中に存在する(例えば、粒状組成物の一部若しくは別個の顆粒で)。
一部の実施形態では、有害無脊椎動物から畑作物を保護するための本発明の化合物、組み合わせ、又は組成物との接触を達成するために、化合物又は組成物は、典型的には、作物を植える前の作物の種子、作物植物の葉(例えば、葉、茎、花、果実)、又は作物が植えられる前若しくは植えられた後の土壌若しくは他の成長培地に適用される。
接触方法の一実施形態は、噴霧による方法である。あるいは、1つ以上のCRIP(例えば、本発明のCRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む粒状組成物を、植物の葉又は土壌に適用することができる。本発明の化合物はまた、植物を本発明の化合物を含む組成物と接触させることによって、植物の取り込みを通して効果的に送達され得、組成物が、液体製剤の土壌ドレンチ(soil drench)、土壌への顆粒製剤、育苗箱(nursery box)処理、又は移植ディップ(dip of transplant)として適用される。注目すべきは、土壌ドレンチ液体製剤の形態の本開示の組成物である。また、有害無脊椎動物を制御するための方法も注目に値し、有害無脊椎動物又はその環境を、生物学的有効量の1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)及び1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と接触させるか、又は生物学的有効量の1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)の組み合わせと接触させることを含む。更に注目すべきは、一部の例示的な実施形態では、例示的な方法は、環境が土壌である場合、組成物を土壌ドレンチ製剤として土壌に適用することを含む。更に注目すべきは、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)及び1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)はまた、蔓延部位(locus of infestation)に局所的に適用することが有効である。他の接触方法としては、直接及び残留噴霧、空中散布、ゲル、シードコーティング、マイクロカプセル化、浸透性摂取、ベイト、耳タグ、ボーラス、噴霧器、燻蒸剤、エアロゾル、粉塵、及び多くの他のものによる本発明の化合物又は組成物の適用が挙げられる。接触方法の一実施形態は、本発明の化合物又は組成物を含む寸法的に安定な肥料顆粒、スティック、又は錠剤である。本発明の化合物は、無脊椎動物制御デバイス(例えば、防虫ネット、衣類への適用、ロウソク製剤への適用など)を製造するための材料に含浸させることもできる。
一部の実施形態では、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせは、有害無脊椎動物から種子を保護するための種子処理にも有用である。本開示及び特許請求の範囲の文脈において、種子を処理することは、植物を、生物的有効量の1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせ(典型的には、本発明の組成物として製剤化されているもの)と接触させることを意味する。この種子処理は、無脊椎動物の土壌害虫から種子を保護し、一般に、発芽する種子から発生する苗の、土壌と接触する根及び他の植物部分も保護することができる。種子処理はまた、発生中の植物内の、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせの転流による葉の保護も提供することができる。種子処理は、全ての種類の種子に適用することができ、特殊な形質を発現するように遺伝的に形質転換された植物が発芽するであろう種子が含まれる。加えて、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせは、既に有害無脊椎動物に対して毒性があるタンパク質(例えば、Bacillus thuringiensis毒素若しくはタンパク質結晶又はグリホサートに耐性を提供するグリホサートアセチルトランスフェラーゼなどの除草剤耐性を発現するもの)で形質転換された植物又はその一部(例えば、植物細胞又は植物種子)に形質転換され得る。代表的な例としては、有害無脊椎動物に対して毒性があるタンパク質を発現するもの(例えば、Bacillus thuringiensis毒素及び/若しくはタンパク質結晶又はグリホサートに耐性をもたらすグリホサートアセチルトランスフェラーゼなどの除草剤耐性を発現するもの)が挙げられる。
種子処理の1つの方法は、種子に、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせ(すなわち、製剤化された組成物又は組み合わせとして)を噴霧又は散布することによる方法である。種子処理のために製剤化された組成物は、一般に、被膜形成剤又は接着剤を含む。したがって、典型的には、本開示の種子コーティング組成物は、生物学的有効量の1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)及び1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、被膜形成剤又は接着剤と、を含む組み合わせを含む。種子は、流動性懸濁液濃縮物を直接種子の転動床に噴霧し、次いで、種子を乾燥させることによってコーティングすることができる。あるいは、他の製剤タイプ(例えば、湿潤粉末、溶液、サスポエマルション、乳化可能な濃縮物、及び水中のエマルション)を種子に噴霧することができる。このプロセスは、種子にフィルムコーティングを適用するために特に有用である。様々なコーティング機及びプロセスが、当業者に利用可能である。好適なプロセスとしては、P.Kosters et al.,Seed Treatment:Progress and Prospects,1994 BCPC Monograph No.57に列挙されているものが挙げられる(それに列挙されている参考文献及びその開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
処理された種子は、典型的には、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせを、100kgの種子当たり約0.01g~1kg(すなわち、処理前の種子の約0.00001~1重量%)の範囲の量で含む。種子処理のために製剤化される流動性懸濁液は、典型的には、約0.5~約70%の活性成分、約0.5~約30%の被膜形成接着剤、約0.5~約20%の分散剤、0~約5%の増粘剤、0~約5%の顔料及び/又は色素、0~約2%の消泡剤、0~約1%の防腐剤、並びに0~約75%の揮発性液体希釈剤を含む。
組み合わせ及び組成物の使用方法
一部の実施形態では、本発明は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせを使用する方法を提供し、組み合わせが、殺虫効果をもたらして、昆虫を制御し、当該方法が、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせを提供することと、次いで、昆虫の部位に、当該組み合わせを適用することと、を含む。
一部の実施形態では、本発明は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせを使用する方法を提供し、組み合わせが、殺虫効果をもたらして、昆虫を制御し、昆虫が、以下からなる群から選択される:アヒマスフィンクスモス(Achema Sphinx Moth)(ホーンワーム(Hornworm))(Eumorpha achemon)、アルファルファキャタピラー(Alfalfa Caterpillar)(Colias eurytheme)、アーモンドモス(Almond Moth)(Caudra cautella)、アモルビアモス(Amorbia Moth)(Amorbia humerosana)、アーミーワーム(Armyworm)(Spodoptera spp.(例えば、exigua、frugiperda、littoralis)、Pseudaletia unipuncta)、アーティチョークプルームモス(Artichoke Plume Moth)(Platyptilia carduidactyla)、アゼリアキャタピラー(Azalea Caterpillar)(Datana major)、バッグワーム(Bagworm)(Thyridopteryx)、ephemeraeformis)、バナナモス(Banana Moth)(Hypercompe scribonia)、バナナスキッパー(Banana Skipper)(Erionota thrax)、ブラックヘディッドバドワーム(Blackheaded Budworm)(Acleris gloverana)、カルフォルニアオークワーム(California Oakworm)(Phryganidia californica)、スプリングキャンカーワーム(Spring Cankerworm)(Paleacrita merriccata)、チェリーフルーツワーム(Cherry Fruitworm)(Grapholita packardi)、チャイナマークモス(China Mark Moth)(Nymphula stagnata)、シトラスカットワーム(Citrus Cutworm)(Xylomyges curialis)、コドリングモス(Codling Moth)(Cydia pomonella)、クランベリーフルーツワーム(Cranberry Fruitworm)(Acrobasis vaccinii)、クロスストライプドキャベッジワーム(Cross-striped Cabbageworm)(Evergestis rimosalis)、カットワーム(Cutworm)(Noctuid種、Agrotis ipsilon)、ダグラスファータソックモス(Douglas Fir Tussock Moth)(Orgyia pseudotsugata)、エルロモス(Ello Moth)(ホーンワーム(Hornworm))(Erinnyis ello)、エルムスパンワーム(Elm Spanworm)(Ennomos subsignaria)、ヨーロピアングレープヴァインモス(European Grapevine Moth)(Lobesia botrana)、ヨーロピアンスキッパー(European Skipper)(Thymelicus lineola(エセックススキッパー)、フォールウェブワーム(Fall Webworm)(Melissopus latiferreanus、フィルバートリーフローラー(Filbert Leafroller)(Archips rosanus、フルーツツリーリーフローラー(Fruittree Leafroller)(Archips argyrospilia、グレープベリーモス(Grape Berry Moth)(Paralobesia viteana、グレープリーフローラー(Grape Leafroller)(Platynota stultana、グレープリーフスケルトナイザー(Grapeleaf Skeletonizer)(Harrisina americana(グラウンドオンリー(ground only))、グリーンクローバーワーム(Green Cloverworm)(Plathypena scabra、グリーンストライプドメープルワーム(Greenstriped Mapleworm)(Dryocampa rubicunda、Gummosos-Batrachedra、Comosae(ホッジ(Hodges))、ジプシーモス(Gypsy Moth)(Lymantria dispar)、ヘムロックルーパー(Hemlock Looper)(Lambdina fiscellaria)、ホーンワーム(Hornworm)(Manduca spp.)、インポーテッドキャベッジワーム(Imported Cabbageworm)(Pieris rapae)、アイオモス(Io Moth)(Automeris io)、ジャックパインバドワーム(Jack Pine Budworm)(Choristoneura pinus)、ライトブラウンアップルモス(Light Brown Apple Moth)(Epiphyas postvittana)、メロンワーム(Melonworm)(Diaphania hyalinata)、ミモザウェブワーム(Mimosa Webworm)(Homadaula anisocentra)、オブリークバンディッドリーフローラー(Obliquebanded Leafroller)(Choristoneura rosaceana)、オリアンダーモス(Oleander Moth)(Syntomeida epilais)、オムニバラスリーフローラー(Omnivorous Leafroller)(Playnota stultana)、オムニバラスルーパー(Omnivorous Looper)(Sabulodes aegrotata)、オレンジドッグ(Orangedog)(Papilio cresphontes)、オレンジトートリクス(Orange Tortrix)(Argyrotaenia citrana)、オリエンタルフルーツモス(Oriental Fruit Moth)(Grapholita molesta)、ピーチツイグボーア(Peach Twig Borer)(Anarsia lineatella)、パインバタフライ(Pine Butterfly)(Neophasia menapia)、ポッドワーム(Podworm)(Heliocoverpa zea)、レッドバンディッドリーフローラー(Redbanded Leafroller)(Argyrotaenia velutinana)、レッドハンプトキャタピラー(Redhumped Caterpillar)(Schizura concinna)、リンドワームコンプレックス(Rindworm Complex)(Various Leps.)、サドルバックキャタピラー(Saddleback Caterpillar)(Sibine stimulea )、サドルプロミネントキャタピラー(Saddle Prominent Caterpillar)(Heterocampa guttivitta)、ソルトマーシュキャタピラー(Saltmarsh Caterpillar)(Estigmene acrea)、ソッドベッドワーム(Sod Webworm)(Crambus spp.)、スパンワーム(Spanworm)(Ennomos subsignaria )、フォールキャンカーワーム(Fall Cankerworm)(Alsophila pometaria)、スプルースバドワーム(Spruce Budworm)(Choristoneura fumiferana)、テントキャタピラー(Tent Caterpillar)(Various Lasiocampidae )、Thecla-Thecla Basilides(Geyr)Thecla basilides)、タバコホーンワーム(Tobacco Hornworm)(Manduca sexta)、タバコモス(Tobacco Moth)(Ephestia elutella)、タフテッドアップルバドモス(Tufted Apple Budmoth)(Platynota idaeusalis)、トゥイグボーア(Twig Borer)(Anarsia lineatella)、ベアリアゲイティドカットワーム(Variegated Cutworm)(Peridroma saucia)、ベアリアゲイティドリーフローラー(Variegated Leafroller)(Platynota flavedana)、ベルベットビーンキャタピラー(Velvetbean Caterpillar)(Anticarsia gemmatalis)、ウォルナットキャタピラー(Walnut Caterpillar)(Datana integerrima)、ウェブワーム(Webworm)(Hyphantria cunea)、ウエスタンタソックモス(Western Tussock Moth)(Orgyia vetusta)、サザンコーンストークボーア(Southern Cornstalk Borer)(Diatraea crambidoides)、コーンイアワーム(Corn Earworm)、スイートポテトウィービル(Sweet potato weevil)、ペッパーウィービル(Pepper weevil)、シトラスルートウィービル(Citrus root weevil)、ストロベリーウィービル(Strawberry root weevil)、ピーカンウィービル(Pecan weevil)、フィルバートウィービル(Filbert weevil)、ライスウォーターウィービル(Ricewater weevil)、アルファルファウィービル(Alfalfa weevil)、クローバーウィービル(Clover weevil)、ティーショット-ホールボーア(Tea shot-hole borer)、ルートウィービル(Root weevil)、シュガーケインビートル(Sugarcane beetle)、コーヒーベリーボーア(Coffee berry borer)、アニュアルブルーグラスウィービル(Annual blue grass weevil)(Listronotus maculicollis)、アジアティックガーデンビートル(Asiatic garden beetle)(Maladera castanea)、ヨーロピアンチェ―ファー(European chafer)(Rhizotroqus majalis)、グリーンジューンビートル(Green June beetle)(Cotinis nitida)、ジャパニーズビートル(Japanese beetle)(Popillia japonica)、メイオアジューンビートル(May or June beetle)(Phyllophaga sp.)、ノーザンマスクドチェ―ファー(Northern masked chafer)(Cyclocephala borealis)、オリエンタルビートル(Oriental beetle)(Anomala orientalis)、サザンマスクドチェ―ファー(Southern masked chafer)(Cyclocephala lurida)、ビルバグ(Billbug)(Curculionoidea)、Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、
Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
一部の実施形態では、本発明は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせを使用する方法を提供し、組み合わせが、殺虫効果をもたらして、Bacillus thuringiensis毒素耐性昆虫を制御し、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせを提供することと、次いで、昆虫の部位に、当該組み合わせを適用することと、を含む。
一部の実施形態では、本発明は、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせを使用する方法を提供し、組み合わせが、殺虫効果をもたらして、Bacillus thuringiensis毒素耐性昆虫を制御し、Bacillus thuringiensis毒素耐性昆虫が、以下からなる群から選択される:Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は抑制する方法を提供し、農薬有効量の、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせを適用することを含み、組み合わせが、害虫の部位に、又は害虫による攻撃を受けやすい植物若しくは動物に、殺虫効果をもたらし、各殺虫ペプチドの組み合わせが、殺虫効果をもたらす。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は抑制する方法を提供し、農薬有効量の、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせを、害虫の部位に、又は害虫による攻撃を受けやすい植物若しくは動物に適用することを含み、各殺虫ペプチドの組み合わせが、殺虫効果をもたらし、害虫が、以下からなる群から選択される:アヒマスフィンクスモス(ホーンワーム)(Eumorpha achemon)、アルファルファキャタピラー(Colias eurytheme)、アーモンドモス(Caudra cautella)、アモルビアモス(Amorbia humerosana)、アーミーワーム(Spodoptera spp.(例えば、exigua、frugiperda、littoralis)、Pseudaletia unipuncta)、アーティチョークプルームモス(Platyptilia carduidactyla)、アゼリアキャタピラー(Datana major)、バッグワーム(Thyridopteryx)、ephemeraeformis)、バナナモス(Hypercompe scribonia)、バナナスキッパー(Erionota thrax)、ブラックヘディッドバドワーム(Acleris gloverana)、カルフォルニアオークワーム(Phryganidia californica)、スプリングキャンカーワーム(Paleacrita merriccata)、チェリーフルーツワーム(Grapholita packardi)、チャイナマークモス(Nymphula stagnata)、シトラスカットワーム(Xylomyges curialis)、コドリングモス(Cydia pomonella)、クランベリーフルーツワーム(Acrobasis vaccinii)、クロスストライプドキャベッジワーム(Evergestis rimosalis)、カットワーム(Noctuid種、Agrotis ipsilon)、ダグラスファータソックモス(Orgyia pseudotsugata)、エルロモス(ホーンワーム)(Erinnyis ello)、エルムスパンワーム(Ennomos subsignaria)、ヨーロピアングレープヴァインモス(Lobesia botrana)、ヨーロピアンスキッパー(Thymelicus lineola(エセックススキッパー)、フォールウェブワーム(Melissopus latiferreanus、フィルバートリーフローラー(Archips rosanus、フルーツツリーリーフローラー(Archips argyrospilia、グレープベリーモス(Paralobesia viteana、グレープリーフローラー(Platynota stultana、グレープリーフスケルトナイザー(Harrisina americana(グラウンドオンリー)、グリーンクローバーワーム(Plathypena scabra、グリーンストライプドメープルワーム(Dryocampa rubicunda、Gummosos-Batrachedra、Comosae(ホッジズ)、ジプシーモス(Lymantria dispar)、ヘムロックルーパー(Lambdina fiscellaria)、ホーンワーム(Manduca spp.)、インポーテッドキャベッジワーム(Pieris rapae)、アイオモス(Automeris io)、ジャックパインバドワーム(Choristoneura pinus)、ライトブラウンアップルモス(Epiphyas postvittana)、メロンワーム(Diaphania hyalinata)、ミモザウェブワーム(Homadaula anisocentra)、オブリークバンディッドリーフローラー(Choristoneura rosaceana)、オリアンダーモス(Syntomeida epilais)、オムニバラスリーフローラー(Playnota stultana)、オムニバラスルーパー(Sabulodes aegrotata)、オレンジドッグ(Papilio cresphontes)、オレンジトートリクス(Argyrotaenia citrana)、オリエンタルフルーツモス(Grapholita molesta)、ピーチツイグボーア(Anarsia lineatella)、パインバタフライ(Neophasia menapia)、ポッドワーム(Heliocoverpa zea)、レッドバンディッドリーフローラー(Argyrotaenia velutinana)、レッドハンプトキャタピラー(Schizura concinna)、リンドワームコンプレックス(Various Leps.)、サドルバックキャタピラー(Sibine stimulea )、サドルプロミネントキャタピラー(Heterocampa guttivitta)、ソルトマーシュキャタピラー(Estigmene acrea)、ソッドベッドワーム(Crambus spp.)、スパンワーム(Ennomos subsignaria )、フォールキャンカーワーム(Alsophila pometaria)、スプルースバドワーム(Choristoneura fumiferana)、テントキャタピラー(Various Lasiocampidae )、Thecla-Thecla Basilides(Geyr)Thecla basilides)、タバコホーンワーム(Manduca sexta)、タバコモス(Ephestia elutella)、タフテッドアップルバドモス(Platynota idaeusalis)、トゥイグボーア(Anarsia lineatella)、ベアリアゲイティドカットワーム(Peridroma saucia)、ベアリアゲイティドリーフローラー(Platynota flavedana)、ベルベットビーンキャタピラー(Anticarsia gemmatalis)、ウォルナットキャタピラー(Datana integerrima)、ウェブワーム(Hyphantria cunea)、ウエスタンタソックモス(Orgyia vetusta)、サザンコーンストークボーア(Diatraea crambidoides)、コーンイアワーム、スイートポテトウィービル、ペッパーウィービル、シトラスルートウィービル、ストロベリーウィービル、ピーカンウィービル、フィルバートウィービル、ライスウォーターウィービル、アルファルファウィービル、クローバーウィービル、ティーショット-ホールボーア、ルートウィービル、シュガーケインビートル、コーヒーベリーボーア、アニュアルブルーグラスウィービル(Listronotus maculicollis)、アジアティックガーデンビートル(Maladera castanea)、ヨーロピアンチェ―ファー(Rhizotroqus majalis)、グリーンジューンビートル(Cotinis nitida)、ジャパニーズビートル(Popillia japonica)、メイオアジューンビートル(Phyllophaga sp.)、ノーザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala borealis)、オリエンタルビートル(Anomala orientalis)、サザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala lurida)、ビルバグ(Curculionoidea)、Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は抑制する方法を提供し、農薬有効量の、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A68のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせを、害虫の部位に、又は害虫による攻撃を受けやすい植物若しくは動物に適用することを含み、各殺虫ペプチドの組み合わせが、殺虫効果をもたらし、害虫が、以下からなる群から選択される:Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
組み合わせ:Bt毒素及びWT-Ta1bの例示的な組み合わせ
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、細菌毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、細菌毒素が、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、以下からなる群から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である:Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)、Bacillus thuringiensis var.aizawai、Bacillus thuringiensis var.aizawai/pacificus、Bacillus thuringiensis var.alesti、Bacillus thuringiensis var.amagiensis、Bacillus thuringiensis var.andalousiensis、Bacillus thuringiensis var.argentinensis、Bacillus thuringiensis var.asturiensis、Bacillus thuringiensis var.azorensis、Bacillus thuringiensis var.balearica、Bacillus thuringiensis var.berliner、Bacillus thuringiensis var.bolivia、Bacillus thuringiensis var.brasilensis、Bacillus thuringiensis var.cameroun、Bacillus thuringiensis var.canadensis、Bacillus thuringiensis var.chanpaisis、Bacillus thuringiensis var.chinensis、Bacillus thuringiensis var.colmeri、Bacillus thuringiensis var.coreanensis、Bacillus thuringiensis var.dakota、Bacillus thuringiensis var.darmstadiensis、Bacillus thuringiensis var.dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus/subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.finitimus、Bacillus thuringiensis var.fukuokaensis、Bacillus thuringiensis var.galechiae、Bacillus thuringiensis var.galleriae、Bacillus thuringiensis var.graciosensis、Bacillus thuringiensis var.guiyangiensis、Bacillus thuringiensis var.higo、Bacillus thuringiensis var.huazhongensis、Bacillus thuringiensis var.iberica、Bacillus thuringiensis var.indiana、Bacillus thuringiensis var.israelensis/tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.japonensis、Bacillus thuringiensis var.jegathesan、Bacillus thuringiensis var.jinghongiensis、Bacillus thuringiensis var.kenyae、Bacillus thuringiensis var.kim、Bacillus thuringiensis var.kumamtoensis、Bacillus thuringiensis var.kunthalanags3、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX24、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX27、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX28、Bacillus thuringiensis var.kyushuensis、Bacillus thuringiensis var.leesis、Bacillus thuringiensis var.londrina、Bacillus thuringiensis var.malayensis、Bacillus thuringiensis var.medellin、Bacillus thuringiensis var.mexicanensis、Bacillus thuringiensis var.mogi、Bacillus thuringiensis var.monterrey、Bacillus thuringiensis var.morrisoni、Bacillus thuringiensis var.muju、Bacillus thuringiensis var.navarrensis、Bacillus thuringiensis var.neoleonensis、Bacillus thuringiensis var.nigeriensis、Bacillus thuringiensis var.novosibirsk、Bacillus thuringiensis var.ostriniae、Bacillus thuringiensis var.oswaldocruzi、Bacillus thuringiensis var.pahangi、Bacillus thuringiensis var.pakistani、Bacillus thuringiensis var.palmanyolensis、Bacillus thuringiensis var.pingluonsis、Bacillus thuringiensis var.pirenaica、Bacillus thuringiensis var.poloniensis、Bacillus thuringiensis var.pondicheriensis、Bacillus thuringiensis var.pulsiensis、Bacillus thuringiensis var.rongseni、Bacillus thuringiensis var.roskildiensis、Bacillus thuringiensis var.san diego、Bacillus thuringiensis var.seoulensis、Bacillus thuringiensis var.shandongiensis、Bacillus thuringiensis var.silo、Bacillus thuringiensis var.sinensis、Bacillus thuringiensis var.sooncheon、Bacillus thuringiensis var.sotto、Bacillus thuringiensis var.sotto/dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.sumiyoshiensis、Bacillus thuringiensis var.sylvestriensis、Bacillus thuringiensis var.thailandensis、Bacillus thuringiensis var.thompsoni、Bacillus thuringiensis var.thuringiensis、Bacillus thuringiensis var.tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.toguchini、Bacillus thuringiensis var.tohokuensis、Bacillus thuringiensis var.tolworthi、Bacillus thuringiensis var.toumanoffi、Bacillus thuringiensis var.vazensis、Bacillus thuringiensis var.wratislaviensis、Bacillus thuringiensis var.wuhanensis、Bacillus thuringiensis var.xiaguangiensis、Bacillus thuringiensis var.yosoo、Bacillus thuringiensis var.yunnanensis、Bacillus thuringiensis var.zhaodongensis、及びBacillus thuringiensis var.konkukian毒素。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、以下からなる群から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である:Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、及びBacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、傍胞子結晶性毒素、分泌タンパク質、β-エキソトキシン、41.9-kDa殺虫毒素、スフェリコリシン、アルベオリシン、又はエンハンシン様タンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、傍胞子結晶性毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、傍胞子結晶性毒素が、δ-エンドトキシンである。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cryファミリータンパク質、バイナリBin様ファミリー毒素、ETX_MTX2様ファミリー毒素、Toxin-10ファミリー毒素、エロリジンファミリー毒素、又は細胞溶解素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cry毒素、殺蚊Cry毒素(Mtx)、バイナリ様(Bin)毒素、又はCyt毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cry毒素又はCyt毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、以下からなる群から選択される:Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A様、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb様、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H様、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I様、Cry1I様、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1様、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A様、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba様、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8様、Cry8様、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa、like、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9様、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A様、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa様、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry2
0Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20様、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43様、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1、又はCry78Aa1、Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa様、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba様、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B様、Cyt2Ca1、及びCyt3Aa1。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、Cry毒素又はCyt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Cry毒素又はCyt毒素が、配列番号412~481によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質であり、分泌タンパク質が、植物性殺虫タンパク質(Vip)、分泌型殺虫タンパク質(Sip)、Bin様ファミリータンパク質、又はETX_MTX2-ファミリータンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質であり、分泌タンパク質が、Vipである。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipが、Vip1ファミリータンパク質、Vip2ファミリータンパク質、Vip3ファミリータンパク質、又はVip4ファミリータンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipが、以下からなる群から選択される:Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4、及びVip4Aa1。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipタンパク質が、配列番号482~587に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176、又はBacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドの濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素の濃度を含む。
組み合わせ:Bt毒素及びTVPの例示的な組み合わせ
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、細菌毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、細菌毒素が、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、以下からなる群から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である:Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)、Bacillus thuringiensis var.aizawai、Bacillus thuringiensis var.aizawai/pacificus、Bacillus thuringiensis var.alesti、Bacillus thuringiensis var.amagiensis、Bacillus thuringiensis var.andalousiensis、Bacillus thuringiensis var.argentinensis、Bacillus thuringiensis var.asturiensis、Bacillus thuringiensis var.azorensis、Bacillus thuringiensis var.balearica、Bacillus thuringiensis var.berliner、Bacillus thuringiensis var.bolivia、Bacillus thuringiensis var.brasilensis、Bacillus thuringiensis var.cameroun、Bacillus thuringiensis var.canadensis、Bacillus thuringiensis var.chanpaisis、Bacillus thuringiensis var.chinensis、Bacillus thuringiensis var.colmeri、Bacillus thuringiensis var.coreanensis、Bacillus thuringiensis var.dakota、Bacillus thuringiensis var.darmstadiensis、Bacillus thuringiensis var.dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus/subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.finitimus、Bacillus thuringiensis var.fukuokaensis、Bacillus thuringiensis var.galechiae、Bacillus thuringiensis var.galleriae、Bacillus thuringiensis var.graciosensis、Bacillus thuringiensis var.guiyangiensis、Bacillus thuringiensis var.higo、Bacillus thuringiensis var.huazhongensis、Bacillus thuringiensis var.iberica、Bacillus thuringiensis var.indiana、Bacillus thuringiensis var.israelensis/tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.japonensis、Bacillus thuringiensis var.jegathesan、Bacillus thuringiensis var.jinghongiensis、Bacillus thuringiensis var.kenyae、Bacillus thuringiensis var.kim、Bacillus thuringiensis var.kumamtoensis、Bacillus thuringiensis var.kunthalanags3、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX24、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX27、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX28、Bacillus thuringiensis var.kyushuensis、Bacillus thuringiensis var.leesis、Bacillus thuringiensis var.londrina、Bacillus thuringiensis var.malayensis、Bacillus thuringiensis var.medellin、Bacillus thuringiensis var.mexicanensis、Bacillus thuringiensis var.mogi、Bacillus thuringiensis var.monterrey、Bacillus thuringiensis var.morrisoni、Bacillus thuringiensis var.muju、Bacillus thuringiensis var.navarrensis、Bacillus thuringiensis var.neoleonensis、Bacillus thuringiensis var.nigeriensis、Bacillus thuringiensis var.novosibirsk、Bacillus thuringiensis var.ostriniae、Bacillus thuringiensis var.oswaldocruzi、Bacillus thuringiensis var.pahangi、Bacillus thuringiensis var.pakistani、Bacillus thuringiensis var.palmanyolensis、Bacillus thuringiensis var.pingluonsis、Bacillus thuringiensis var.pirenaica、Bacillus thuringiensis var.poloniensis、Bacillus thuringiensis var.pondicheriensis、Bacillus thuringiensis var.pulsiensis、Bacillus thuringiensis var.rongseni、Bacillus thuringiensis var.roskildiensis、Bacillus thuringiensis var.san diego、Bacillus thuringiensis var.seoulensis、Bacillus thuringiensis var.shandongiensis、Bacillus thuringiensis var.silo、Bacillus thuringiensis var.sinensis、Bacillus thuringiensis var.sooncheon、Bacillus thuringiensis var.sotto、Bacillus thuringiensis var.sotto/dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.sumiyoshiensis、Bacillus thuringiensis var.sylvestriensis、Bacillus thuringiensis var.thailandensis、Bacillus thuringiensis var.thompsoni、Bacillus thuringiensis var.thuringiensis、Bacillus thuringiensis var.tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.toguchini、Bacillus thuringiensis var.tohokuensis、Bacillus thuringiensis var.tolworthi、Bacillus thuringiensis var.toumanoffi、Bacillus thuringiensis var.vazensis、Bacillus thuringiensis var.wratislaviensis、Bacillus thuringiensis var.wuhanensis、Bacillus thuringiensis var.xiaguangiensis、Bacillus thuringiensis var.yosoo、Bacillus thuringiensis var.yunnanensis、Bacillus thuringiensis var.zhaodongensis、及びBacillus thuringiensis var.konkukian毒素。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、以下からなる群から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である:Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、及びBacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、傍胞子結晶性毒素、分泌タンパク質、β-エキソトキシン、41.9-kDa殺虫毒素、スフェリコリシン、アルベオリシン、又はエンハンシン様タンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、傍胞子結晶性毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、傍胞子結晶性毒素が、δ-エンドトキシンである。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cryファミリータンパク質、バイナリBin様ファミリー毒素、ETX_MTX2様ファミリー毒素、Toxin-10ファミリー毒素、エロリジンファミリー毒素、又は細胞溶解素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cry毒素、殺蚊Cry毒素(Mtx)、バイナリ様(Bin)毒素、又はCyt毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cry毒素又はCyt毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、以下からなる群から選択される:Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A様、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb様、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H様、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I様、Cry1I様、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1様、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A様、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba様、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8様、Cry8様、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa、like、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9様、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A様、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa様、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1
、Cry19Ca1、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20様、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43様、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1、又はCry78Aa1、Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa様、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba様、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B様、Cyt2Ca1、及びCyt3Aa1。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、Cry毒素又はCyt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Cry毒素又はCyt毒素が、配列番号412~481によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質であり、分泌タンパク質が、植物性殺虫タンパク質(Vip)、分泌型殺虫タンパク質(Sip)、Bin様ファミリータンパク質、又はETX_MTX2ファミリータンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質であり、分泌タンパク質が、Vipである。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipが、Vip1ファミリータンパク質、Vip2ファミリータンパク質、Vip3ファミリータンパク質、又はVip4ファミリータンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipが、以下からなる群から選択される:Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4、及びVip4Aa1。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipタンパク質が、配列番号482~587に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176、又はBacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176、又はBacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号51に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号51に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号51に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号51に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号51に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素の濃度を含む。
組み合わせ:Bt毒素及びAVPの例示的な組み合わせ
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、細菌毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、細菌毒素が、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、以下からなる群から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である:Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)、Bacillus thuringiensis var.aizawai、Bacillus thuringiensis var.aizawai/pacificus、Bacillus thuringiensis var.alesti、Bacillus thuringiensis var.amagiensis、Bacillus thuringiensis var.andalousiensis、Bacillus thuringiensis var.argentinensis、Bacillus thuringiensis var.asturiensis、Bacillus thuringiensis var.azorensis、Bacillus thuringiensis var.balearica、Bacillus thuringiensis var.berliner、Bacillus thuringiensis var.bolivia、Bacillus thuringiensis var.brasilensis、Bacillus thuringiensis var.cameroun、Bacillus thuringiensis var.canadensis、Bacillus thuringiensis var.chanpaisis、Bacillus thuringiensis var.chinensis、Bacillus thuringiensis var.colmeri、Bacillus thuringiensis var.coreanensis、Bacillus thuringiensis var.dakota、Bacillus thuringiensis var.darmstadiensis、Bacillus thuringiensis var.dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus/subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.finitimus、Bacillus thuringiensis var.fukuokaensis、Bacillus thuringiensis var.galechiae、Bacillus thuringiensis var.galleriae、Bacillus thuringiensis var.graciosensis、Bacillus thuringiensis var.guiyangiensis、Bacillus thuringiensis var.higo、Bacillus thuringiensis var.huazhongensis、Bacillus thuringiensis var.iberica、Bacillus thuringiensis var.indiana、Bacillus thuringiensis var.israelensis/tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.japonensis、Bacillus thuringiensis var.jegathesan、Bacillus thuringiensis var.jinghongiensis、Bacillus thuringiensis var.kenyae、Bacillus thuringiensis var.kim、Bacillus thuringiensis var.kumamtoensis、Bacillus thuringiensis var.kunthalanags3、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX24、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX27、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX28、Bacillus thuringiensis var.kyushuensis、Bacillus thuringiensis var.leesis、Bacillus thuringiensis var.londrina、Bacillus thuringiensis var.malayensis、Bacillus thuringiensis var.medellin、Bacillus thuringiensis var.mexicanensis、Bacillus thuringiensis var.mogi、Bacillus thuringiensis var.monterrey、Bacillus thuringiensis var.morrisoni、Bacillus thuringiensis var.muju、Bacillus thuringiensis var.navarrensis、Bacillus thuringiensis var.neoleonensis、Bacillus thuringiensis var.nigeriensis、Bacillus thuringiensis var.novosibirsk、Bacillus thuringiensis var.ostriniae、Bacillus thuringiensis var.oswaldocruzi、Bacillus thuringiensis var.pahangi、Bacillus thuringiensis var.pakistani、Bacillus thuringiensis var.palmanyolensis、Bacillus thuringiensis var.pingluonsis、Bacillus thuringiensis var.pirenaica、Bacillus thuringiensis var.poloniensis、Bacillus thuringiensis var.pondicheriensis、Bacillus thuringiensis var.pulsiensis、Bacillus thuringiensis var.rongseni、Bacillus thuringiensis var.roskildiensis、Bacillus thuringiensis var.san diego、Bacillus thuringiensis var.seoulensis、Bacillus thuringiensis var.shandongiensis、Bacillus thuringiensis var.silo、Bacillus thuringiensis var.sinensis、Bacillus thuringiensis var.sooncheon、Bacillus thuringiensis var.sotto、Bacillus thuringiensis var.sotto/dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.sumiyoshiensis、Bacillus thuringiensis var.sylvestriensis、Bacillus thuringiensis var.thailandensis、Bacillus thuringiensis var.thompsoni、Bacillus thuringiensis var.thuringiensis、Bacillus thuringiensis var.tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.toguchini、Bacillus thuringiensis var.tohokuensis、Bacillus thuringiensis var.tolworthi、Bacillus thuringiensis var.toumanoffi、Bacillus thuringiensis var.vazensis、Bacillus thuringiensis var.wratislaviensis、Bacillus thuringiensis var.wuhanensis、Bacillus thuringiensis var.xiaguangiensis、Bacillus thuringiensis var.yosoo、Bacillus thuringiensis var.yunnanensis、Bacillus thuringiensis var.zhaodongensis、及びBacillus thuringiensis var.konkukian毒素。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、以下からなる群から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である:Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、及びBacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、傍胞子結晶性毒素、分泌タンパク質、β-エキソトキシン、41.9-kDa殺虫毒素、スフェリコリシン、アルベオリシン、又はエンハンシン様タンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、傍胞子結晶性毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、傍胞子結晶性毒素が、δ-エンドトキシンである。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cryファミリータンパク質、バイナリBin様ファミリー毒素、ETX_MTX2様ファミリー毒素、Toxin-10ファミリー毒素、エロリジンファミリー毒素、又は細胞溶解素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cry毒素、殺蚊Cry毒素(Mtx)、バイナリ様(Bin)毒素、又はCyt毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cry毒素又はCyt毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、以下からなる群から選択される:Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A様、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb様、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H様、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I様、Cry1I様、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1様、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A様、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba様、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8様、Cry8様、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa、like、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9様、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A様、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa様、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1
、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20様、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43様、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1、又はCry78Aa1、Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa様、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba様、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B様、Cyt2Ca1、及びCyt3Aa1。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、Cry毒素又はCyt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Cry毒素又はCyt毒素が、配列番号412~481によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質であり、分泌タンパク質が、植物性殺虫タンパク質(Vip)、分泌型殺虫タンパク質(Sip)、Bin様ファミリータンパク質、又はETX_MTX2ファミリータンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質であり、分泌タンパク質が、Vipである。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipが、Vip1ファミリータンパク質、Vip2ファミリータンパク質、Vip3ファミリータンパク質、又はVip4ファミリータンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipが、以下からなる群から選択される:Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4、及びVip4Aa1。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipタンパク質が、配列番号482~587に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176、又はBacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)の濃度を含む。
組み合わせ:Bt毒素及びΓ-CNTX-Pn1aの例示的な組み合わせ
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、細菌毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、細菌毒素が、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、以下からなる群から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である:Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)、Bacillus thuringiensis var.aizawai、Bacillus thuringiensis var.aizawai/pacificus、Bacillus thuringiensis var.alesti、Bacillus thuringiensis var.amagiensis、Bacillus thuringiensis var.andalousiensis、Bacillus thuringiensis var.argentinensis、Bacillus thuringiensis var.asturiensis、Bacillus thuringiensis var.azorensis、Bacillus thuringiensis var.balearica、Bacillus thuringiensis var.berliner、Bacillus thuringiensis var.bolivia、Bacillus thuringiensis var.brasilensis、Bacillus thuringiensis var.cameroun、Bacillus thuringiensis var.canadensis、Bacillus thuringiensis var.chanpaisis、Bacillus thuringiensis var.chinensis、Bacillus thuringiensis var.colmeri、Bacillus thuringiensis var.coreanensis、Bacillus thuringiensis var.dakota、Bacillus thuringiensis var.darmstadiensis、Bacillus thuringiensis var.dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus/subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.finitimus、Bacillus thuringiensis var.fukuokaensis、Bacillus thuringiensis var.galechiae、Bacillus thuringiensis var.galleriae、Bacillus thuringiensis var.graciosensis、Bacillus thuringiensis var.guiyangiensis、Bacillus thuringiensis var.higo、Bacillus thuringiensis var.huazhongensis、Bacillus thuringiensis var.iberica、Bacillus thuringiensis var.indiana、Bacillus thuringiensis var.israelensis/tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.japonensis、Bacillus thuringiensis var.jegathesan、Bacillus thuringiensis var.jinghongiensis、Bacillus thuringiensis var.kenyae、Bacillus thuringiensis var.kim、Bacillus thuringiensis var.kumamtoensis、Bacillus thuringiensis var.kunthalanags3、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX24、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX27、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX28、Bacillus thuringiensis var.kyushuensis、Bacillus thuringiensis var.leesis、Bacillus thuringiensis var.londrina、Bacillus thuringiensis var.malayensis、Bacillus thuringiensis var.medellin、Bacillus thuringiensis var.mexicanensis、Bacillus thuringiensis var.mogi、Bacillus thuringiensis var.monterrey、Bacillus thuringiensis var.morrisoni、Bacillus thuringiensis var.muju、Bacillus thuringiensis var.navarrensis、Bacillus thuringiensis var.neoleonensis、Bacillus thuringiensis var.nigeriensis、Bacillus thuringiensis var.novosibirsk、Bacillus thuringiensis var.ostriniae、Bacillus thuringiensis var.oswaldocruzi、Bacillus thuringiensis var.pahangi、Bacillus thuringiensis var.pakistani、Bacillus thuringiensis var.palmanyolensis、Bacillus thuringiensis var.pingluonsis、Bacillus thuringiensis var.pirenaica、Bacillus thuringiensis var.poloniensis、Bacillus thuringiensis var.pondicheriensis、Bacillus thuringiensis var.pulsiensis、Bacillus thuringiensis var.rongseni、Bacillus thuringiensis var.roskildiensis、Bacillus thuringiensis var.san diego、Bacillus thuringiensis var.seoulensis、Bacillus thuringiensis var.shandongiensis、Bacillus thuringiensis var.silo、Bacillus thuringiensis var.sinensis、Bacillus thuringiensis var.sooncheon、Bacillus thuringiensis var.sotto、Bacillus thuringiensis var.sotto/dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.sumiyoshiensis、Bacillus thuringiensis var.sylvestriensis、Bacillus thuringiensis var.thailandensis、Bacillus thuringiensis var.thompsoni、Bacillus thuringiensis var.thuringiensis、Bacillus thuringiensis var.tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.toguchini、Bacillus thuringiensis var.tohokuensis、Bacillus thuringiensis var.tolworthi、Bacillus thuringiensis var.toumanoffi、Bacillus thuringiensis var.vazensis、Bacillus thuringiensis var.wratislaviensis、Bacillus thuringiensis var.wuhanensis、Bacillus thuringiensis var.xiaguangiensis、Bacillus thuringiensis var.yosoo、Bacillus thuringiensis var.yunnanensis、Bacillus thuringiensis var.zhaodongensis、及びBacillus thuringiensis var.konkukian毒素。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、以下からなる群から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である:Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、及びBacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、傍胞子結晶性毒素、分泌タンパク質、β-エキソトキシン、41.9-kDa殺虫毒素、スフェリコリシン、アルベオリシン、又はエンハンシン様タンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、傍胞子結晶性毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、傍胞子結晶性毒素が、δ-エンドトキシンである。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cryファミリータンパク質、バイナリBin様ファミリー毒素、ETX_MTX2様ファミリー毒素、Toxin-10ファミリー毒素、エロリジンファミリー毒素、又は細胞溶解素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cry毒素、殺蚊Cry毒素(Mtx)、バイナリ様(Bin)毒素、又はCyt毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cry毒素又はCyt毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、以下からなる群から選択される:Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A様、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb様、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H様、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I様、Cry1I様、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1様、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A様、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba様、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8様、Cry8様、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa、like、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9様、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A様、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa様、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry20A
a1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20様、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43様、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1、又はCry78Aa1、Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa様、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba様、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B様、Cyt2Ca1、及びCyt3Aa1。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、Cry毒素又はCyt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Cry毒素又はCyt毒素が、配列番号412~481によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質であり、分泌タンパク質が、植物性殺虫タンパク質(Vip)、分泌型殺虫タンパク質(Sip)、Bin様ファミリータンパク質、又はETX_MTX2-ファミリータンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質であり、分泌タンパク質が、Vipである。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipが、Vip1ファミリータンパク質、Vip2ファミリータンパク質、Vip3ファミリータンパク質、又はVip4ファミリータンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipが、以下からなる群から選択される:Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4、及びVip4Aa1。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipタンパク質が、配列番号482~587に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176、又はBacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素の濃度を含む。
組み合わせ:真菌毒素及びU+2-ACTX-Hv1aの例示的な組み合わせ
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、真菌毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、真菌毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、真菌毒素が、Ascomycete真菌毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、真菌毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、真菌毒素が、Akanthomyces毒素、Ascopolyporus毒素、Beauveria毒素、Beejasamuha毒素、Cordyceps毒素、Coremiopsis毒素、Engyodontium毒素、Gibellula毒素、Hyperdermium毒素、Insecticola毒素、Isaria毒素、Lecanicillium毒素、Microhilum毒素、Phytocordyceps毒素、Pseudogibellula毒素、Rotiferophthora毒素、Simplicillium毒素、又はTorrubiella毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、真菌生物又はそれ由来の毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、真菌生物又はそれ由来の毒素が、以下の属から選択される:Beauveria、Metarhizium、Paecilomyces、Lecanicillium、Nomuraea、Isaria、Hirsutella、Sorosporella、Aspergillus、Cordiceps、Entomophthora、Zoophthora、Pandora、Entomophaga、Conidiobolus、及びBasidiobolus。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Beauveria毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、以下の毒素のうちの1つと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる:Beauveria alba毒素、Beauveria amorpha毒素、Beauveria arenaria毒素、Beauveria asiatica毒素、Beauveria australis毒素、Beauveria bassiana毒素、Cordyceps bassiana毒素、Beauveria brongniartii毒素、Beauveria brumptii毒素、Beauveria caledonica毒素、Beauveria chiromensis毒素、Beauveria coccorum毒素、Beauveria cretacea毒素、Beauveria cylindrospora毒素、Beauveria delacroixii毒素、Beauveria densa毒素、Beauveria dependens毒素、Beauveria doryphorae毒素、Beauveria effusa毒素、Beauveria epigaea毒素、Beauveria felina毒素、Beauveria geodes毒素、Beauveria globulifera毒素、Beauveria heimii毒素、Beauveria hoplocheli毒素、Beauveria kipukae毒素、Beauveria laxa毒素、Beauveria malawiensis毒素、Beauveria medogensis毒素、Beauveria melolonthae毒素、Beauveria nubicola毒素、Beauveria oryzae毒素、Beauveria paradoxa毒素、Beauveria paranensis毒素、Beauveria parasitica毒素、Beauveria petelotii毒素、Beauveria pseudobassiana毒素、Beauveria rileyi毒素、Beauveria rubra毒素、Beauveria shiotae毒素、Beauveria sobolifera毒素、Beauveria spicata毒素、Beauveria stephanoderis毒素、Beauveria sulfurescens毒素、Beauveria sungii毒素、Beauveria tenella毒素、Beauveria tundrensis毒素、Beauveria velata毒素、Beauveria varroae毒素、Beauveria vermiconia毒素、Beauveria vexans毒素、Beauveria viannai毒素、又はBeauveria virella毒素。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Beauveria bassiana毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Beauveria bassiana毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Beauveria bassiana毒素が、ビューベリシンである。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ビューベリシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、ビューベリシンが、化学式C4557を有する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ビューベリシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、ビューベリシンが、化学式C4659を有する「ビューベリシンA」毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Beauveria毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、ビューベリシン毒素が、化学式C4557を有するビューベリシン毒素、化学式C4659を有するビューベリシンA毒素、又は化学式C4761を有するビューベリシンB毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ビューベリシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、ビューベリシンが、化学式C4761を有する「ビューベリシンB」毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Beauveria bassiana生物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Beauveria bassiana生物から単離された胞子と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Beauveria bassiana生物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Beauveria bassiana生物が、Beauveria bassiana株ANT-03である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Beauveria bassiana生物から単離された胞子と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Beauveria bassiana胞子が、Beauveria bassiana株ANT-03胞子である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Ascomycete真菌毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Cordycipitaceae科真菌毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Akanthomyces毒素、Ascopolyporus毒素、Beauveria毒素、Beejasamuha毒素、Cordyceps毒素、Coremiopsis毒素、Engyodontium毒素、Gibellula毒素、Hyperdermium毒素、Insecticola毒素、Isaria毒素、Lecanicillium毒素、Microhilum毒素、Phytocordyceps毒素、Pseudogibellula毒素、Rotiferophthora毒素、Simplicillium毒素、又はTorrubiella毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Beauveria bassiana株ANT-03胞子と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Beauveria bassiana株ANT-03胞子と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、Beauveria bassiana株ANT-03胞子の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Beauveria bassiana株ANT-03胞子と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素の濃度を含む。
組み合わせ:Bt毒素及びU+2-ACTX-Hv1aの例示的な組み合わせ
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、細菌毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、細菌毒素が、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、以下からなる群から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である:Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)、Bacillus thuringiensis var.aizawai、Bacillus thuringiensis var.aizawai/pacificus、Bacillus thuringiensis var.alesti、Bacillus thuringiensis var.amagiensis、Bacillus thuringiensis var.andalousiensis、Bacillus thuringiensis var.argentinensis、Bacillus thuringiensis var.asturiensis、Bacillus thuringiensis var.azorensis、Bacillus thuringiensis var.balearica、Bacillus thuringiensis var.berliner、Bacillus thuringiensis var.bolivia、Bacillus thuringiensis var.brasilensis、Bacillus thuringiensis var.cameroun、Bacillus thuringiensis var.canadensis、Bacillus thuringiensis var.chanpaisis、Bacillus thuringiensis var.chinensis、Bacillus thuringiensis var.colmeri、Bacillus thuringiensis var.coreanensis、Bacillus thuringiensis var.dakota、Bacillus thuringiensis var.darmstadiensis、Bacillus thuringiensis var.dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus/subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.finitimus、Bacillus thuringiensis var.fukuokaensis、Bacillus thuringiensis var.galechiae、Bacillus thuringiensis var.galleriae、Bacillus thuringiensis var.graciosensis、Bacillus thuringiensis var.guiyangiensis、Bacillus thuringiensis var.higo、Bacillus thuringiensis var.huazhongensis、Bacillus thuringiensis var.iberica、Bacillus thuringiensis var.indiana、Bacillus thuringiensis var.israelensis/tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.japonensis、Bacillus thuringiensis var.jegathesan、Bacillus thuringiensis var.jinghongiensis、Bacillus thuringiensis var.kenyae、Bacillus thuringiensis var.kim、Bacillus thuringiensis var.kumamtoensis、Bacillus thuringiensis var.kunthalanags3、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX24、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX27、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX28、Bacillus thuringiensis var.kyushuensis、Bacillus thuringiensis var.leesis、Bacillus thuringiensis var.londrina、Bacillus thuringiensis var.malayensis、Bacillus thuringiensis var.medellin、Bacillus thuringiensis var.mexicanensis、Bacillus thuringiensis var.mogi、Bacillus thuringiensis var.monterrey、Bacillus thuringiensis var.morrisoni、Bacillus thuringiensis var.muju、Bacillus thuringiensis var.navarrensis、Bacillus thuringiensis var.neoleonensis、Bacillus thuringiensis var.nigeriensis、Bacillus thuringiensis var.novosibirsk、Bacillus thuringiensis var.ostriniae、Bacillus thuringiensis var.oswaldocruzi、Bacillus thuringiensis var.pahangi、Bacillus thuringiensis var.pakistani、Bacillus thuringiensis var.palmanyolensis、Bacillus thuringiensis var.pingluonsis、Bacillus thuringiensis var.pirenaica、Bacillus thuringiensis var.poloniensis、Bacillus thuringiensis var.pondicheriensis、Bacillus thuringiensis var.pulsiensis、Bacillus thuringiensis var.rongseni、Bacillus thuringiensis var.roskildiensis、Bacillus thuringiensis var.san diego、Bacillus thuringiensis var.seoulensis、Bacillus thuringiensis var.shandongiensis、Bacillus thuringiensis var.silo、Bacillus thuringiensis var.sinensis、Bacillus thuringiensis var.sooncheon、Bacillus thuringiensis var.sotto、Bacillus thuringiensis var.sotto/dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.sumiyoshiensis、Bacillus thuringiensis var.sylvestriensis、Bacillus thuringiensis var.thailandensis、Bacillus thuringiensis var.thompsoni、Bacillus thuringiensis var.thuringiensis、Bacillus thuringiensis var.tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.toguchini、Bacillus thuringiensis var.tohokuensis、Bacillus thuringiensis var.tolworthi、Bacillus thuringiensis var.toumanoffi、Bacillus thuringiensis var.vazensis、Bacillus thuringiensis var.wratislaviensis、Bacillus thuringiensis var.wuhanensis、Bacillus thuringiensis var.xiaguangiensis、Bacillus thuringiensis var.yosoo、Bacillus thuringiensis var.yunnanensis、Bacillus thuringiensis var.zhaodongensis、及びBacillus thuringiensis var.konkukian毒素。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、以下からなる群から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である:Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、及びBacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、傍胞子結晶性毒素、分泌タンパク質、β-エキソトキシン、41.9-kDa殺虫毒素、スフェリコリシン、アルベオリシン、又はエンハンシン様タンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、傍胞子結晶性毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、傍胞子結晶性毒素が、δ-エンドトキシンである。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cryファミリータンパク質、バイナリBin様ファミリー毒素、ETX_MTX2様ファミリー毒素、Toxin-10ファミリー毒素、エロリジンファミリー毒素、又は細胞溶解素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cry毒素、殺蚊Cry毒素(Mtx)、バイナリ様(Bin)毒素、又はCyt毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cry毒素又はCyt毒素である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、δ-エンドトキシンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、δ-エンドトキシンが、以下からなる群から選択される:Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A様、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb様、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H様、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I様、Cry1I様、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1様、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A様、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba様、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8様、Cry8様、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa、like、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9様、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A様、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa様、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry2
0Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20様、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43様、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1、又はCry78Aa1、Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa様、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba様、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B様、Cyt2Ca1、及びCyt3Aa1。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Cry毒素又はCyt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Cry毒素又はCyt毒素が、配列番号412~481によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質であり、分泌タンパク質が、植物性殺虫タンパク質(Vip)、分泌型殺虫タンパク質(Sip)、Bin様ファミリータンパク質、又はETX_MTX2-ファミリータンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Bt毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Bt毒素が、分泌タンパク質であり、分泌タンパク質が、Vipである。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipが、Vip1ファミリータンパク質、Vip2ファミリータンパク質、Vip3ファミリータンパク質、又はVip4ファミリータンパク質である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipが、以下からなる群から選択される:Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4、及びVip4Aa1。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Vipと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Vipタンパク質が、配列番号482~587に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176、又はBacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、Bacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Bacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Bacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、Bacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素の濃度を含む。
組み合わせ:他の細菌毒素及びU+2-ACTX-Hv1aの例示的な組み合わせ
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、細菌毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、細菌毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、細菌毒素が、Xenorhabdus属、又はPhotorhabdus属に属する細菌から単離される。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Photorhabdus毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Photorhabdus毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Photorhabdus毒素が、以下からなる群から選択される:Photorhabdus akhurstii毒素、Photorhabdus asymbiotica毒素、Photorhabdus asymbiotica subsp.asymbiotica毒素、Photorhabdus asymbiotica subsp.asymbiotica ATCC 43949毒素、Photorhabdus australis毒素、Photorhabdus australis DSM 17609毒素、Photorhabdus bodei毒素、Photorhabdus caribbeanensis毒素、Photorhabdus cinerea毒素、Photorhabdus hainanensis毒素、Photorhabdus heterorhabditis毒素、Photorhabdus kayaii毒素、Photorhabdus khanii毒素、Photorhabdus khanii NC19毒素、Photorhabdus khanii subsp.guanajuatensis毒素、Photorhabdus kleinii毒素、Photorhabdus laumondii毒素、Photorhabdus laumondii subsp.clarkei毒素、Photorhabdus laumondii subsp.laumondii毒素、Photorhabdus laumondii subsp.laumondii TTO1毒素、Photorhabdus luminescens毒素、Photorhabdus luminescens BA1毒素、Photorhabdus luminescens NBAII H75HRPL105毒素、Photorhabdus luminescens NBAII HiPL101毒素、Photorhabdus luminescens subsp.luminescens毒素、Photorhabdus luminescens subsp.luminescens ATCC 29999毒素、Photorhabdus luminescens subsp.mexicana毒素、Photorhabdus luminescens subsp.sonorensis毒素、Photorhabdus namnaonensis毒素、Photorhabdus noenieputensis毒素、Photorhabdus stackebrandtii毒素、Photorhabdus tasmaniensis毒素、Photorhabdus temperata毒素、Photorhabdus temperata J3毒素、Photorhabdus temperata subsp.phorame毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata M1021毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata Meg1毒素、Photorhabdus thracensis毒素、未分類のPhotorhabdus毒素、Photorhabdus sp.毒素、Photorhabdus sp.3014毒素、Photorhabdus sp.3240毒素、Photorhabdus sp.Az29毒素、Photorhabdus sp.BS21毒素、Photorhabdus sp.CbKj163毒素、Photorhabdus sp.CRCIA-P01毒素、Photorhabdus sp.ENY毒素、Photorhabdus sp.FL2122毒素、Photorhabdus sp.FL480毒素、Photorhabdus sp.FsIw96毒素、Photorhabdus sp.GDd233毒素、Photorhabdus sp.H3086毒素、Photorhabdus sp.H3107毒素、Photorhabdus sp.H3240毒素、Photorhabdus sp.HB301毒素、Photorhabdus sp.HB78毒素、Photorhabdus sp.HB89毒素、Photorhabdus sp.HIT毒素、Photorhabdus sp.HO1毒素、Photorhabdus sp.HUG-39毒素、Photorhabdus sp.IT毒素、Photorhabdus sp.JUN毒素、Photorhabdus sp.KcTs129毒素、Photorhabdus sp.KJ13.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ14.3 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ24.5 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ29.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ37.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ7.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ8.2 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ9.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ9.2 TH毒素、Photorhabdus sp.KK1.3 TH毒素、Photorhabdus sp.KK1.4 TH毒素、Photorhabdus sp.KMD74毒素、Photorhabdus sp.KOH毒素、Photorhabdus sp.MID10毒素、Photorhabdus sp.MOL毒素、Photorhabdus sp.MSW_058毒素、Photorhabdus sp.MSW_079毒素、Photorhabdus sp.NK2.1 TH毒素、Photorhabdus sp.NK2.5 TH毒素、Photorhabdus sp.NnMt2h毒素、Photorhabdus sp.NP1毒素、Photorhabdus sp.OH10毒素、Photorhabdus sp.OnIr40毒素、Photorhabdus sp.OnKn2毒素、Photorhabdus sp.PB10.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB16.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB17.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB17.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB2.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB22.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB22.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB32.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB33.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB33.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB37.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB39.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB4.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB41.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB45.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB47.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB47.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB5.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB5.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB50.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB51.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB52.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB54.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB59.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB6.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB67.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB67.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB68.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB7.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB78.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB80.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB80.4 TH毒素、Photorhabdus sp.Pjun毒素、Photorhabdus sp.RW14-46毒素、Photorhabdus sp.S10-54毒素、Photorhabdus sp.S12-55毒素、Photorhabdus sp.S14-60毒素、Photorhabdus sp.S15-56毒素、Photorhabdus sp.S5P8-50毒素、Photorhabdus sp.S7-51毒素、Photorhabdus sp.S8-52毒素、Photorhabdus sp.S9-53毒素、Photorhabdus sp.SJ2毒素、Photorhabdus sp.SN259毒素、Photorhabdus sp.SP1.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP16.4 TH毒素、Photorhabdus sp.SP21.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP3.4 TH毒素、Photorhabdus sp.SP4.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP7.3 TH毒素、Photorhabdus sp.TyKb140毒素、Photorhabdus sp.UK76毒素、Photorhabdus sp.VMG毒素、Photorhabdus sp.WA21C毒素、Photorhabdus sp.WkSs43毒素、Photorhabdus sp.Wx13毒素、Photorhabdus sp.X4毒素、Photorhabdus sp.YNb90毒素、及びPhotorhabdus sp.ZM毒素。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Photorhabdus luminescens毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Photorhabdus luminescens毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Photorhabdus luminescens毒素が、Photorhabdus luminescens「毒素複合体a」(Tca)を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Photorhabdus luminescens毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Photorhabdus luminescens毒素が、Photorhabdus luminescens「毒素複合体c」(Tcc)を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Photorhabdus luminescens毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、Photorhabdus luminescens毒素が、Photorhabdus luminescens「毒素複合体d」(Tcd)を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、TcaAタンパク質(配列番号616)、TcaBタンパク質(配列番号617)、TcaCタンパク質(配列番号618)、及びTcaZタンパク質(配列番号619)を含むPhotorhabdus luminescens毒素又はその抽出物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Yersinia属に属する1つ以上の生物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Yersinia属に属する生物から単離された1つ以上のペプチドと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、以下の種のうちの1つ以上と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる:Yersinia aldovaeyb、Yersinia aleksiciae、Yersinia bercovieri、Yersinia canariae、Yersinia enterocolitica、Yersinia enterocolitica subsp.enterocolitica、Yersinia enterocolitica subsp.palearctica、Yersinia entomophaga、Yersinia frederiksenii、Yersinia hibernica、Yersinia intermedia、Yersinia kristensenii、Yersinia kristensenii subsp.kristensenii、Yersinia kristensenii subsp.rochesterensis、Yersinia massiliensis、Yersinia mollaretii、Yersinia nurmii、Yersinia pekkanenii、Yersinia pestis、Yersinia pestis subsp.pestis、Yersinia pestis subsp.medievalis、Yersinia pestis subsp.orientalis、Yersinia pseudotuberculosis、Yersinia pseudotuberculosis subsp.pestis、Yersinia pseudotuberculosis subsp.pseudotuberculosis、Yersinia rohdei、Yersinia ruckeri、Yersinia similis、又はYersinia wautersii。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、以下の種のうちの1つ以上から単離された1つ以上のペプチドと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる:Yersinia aldovaeyb、Yersinia aleksiciae、Yersinia bercovieri、Yersinia canariae、Yersinia enterocolitica、Yersinia enterocolitica subsp.enterocolitica、Yersinia enterocolitica subsp.palearctica、Yersinia entomophaga、Yersinia frederiksenii、Yersinia hibernica、Yersinia intermedia、Yersinia kristensenii、Yersinia kristensenii subsp.kristensenii、Yersinia kristensenii subsp.rochesterensis、Yersinia massiliensis、Yersinia mollaretii、Yersinia nurmii、Yersinia pekkanenii、Yersinia pestis、Yersinia pestis subsp.pestis、Yersinia pestis subsp.medievalis、Yersinia pestis subsp.orientalis、Yersinia pseudotuberculosis、Yersinia pseudotuberculosis subsp.pestis、Yersinia pseudotuberculosis subsp.pseudotuberculosis、Yersinia rohdei、Yersinia ruckeri、Yersinia similis、又はYersinia wautersii。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Yersinia entomophaga又はYersinia nurmiiと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Yersinia entomophaga又はYersinia nurmiiから単離された1つ以上のペプチドと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Yersinia entomophaga細菌及び/又はそれ由来の毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、1つ以上のYersinia nurmii細菌及び/又はそれ由来の毒素と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、TcaAタンパク質(配列番号616)、TcaBタンパク質(配列番号617)、TcaCタンパク質(配列番号618)、及びTcaZタンパク質(配列番号619)、又はそれらの抽出物を含むPhotorhabdus luminescens毒素複合体と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、TcaAタンパク質(配列番号616)、TcaBタンパク質(配列番号617)、TcaCタンパク質(配列番号618)、及びTcaZタンパク質(配列番号619)、又はそれらの抽出物を含むPhotorhabdus luminescens毒素複合体と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、Photorhabdus luminescens毒素複合体の濃度を含む。
組み合わせ:GNA及びU+2-ACTX-Hv1aの例示的な組み合わせ
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、レクチンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、レクチンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、レクチンが、以下のうちの1つ以上である:Galanthus nivalis凝集素(GNA)、Sambucus nigraレクチン(SNA)、Maackia amurensis-II(MAL-II)、Erythrina cristagalliレクチン(ECL)、Ricinus communis凝集素-I(RCA)、ピーナッツ凝集素(PNA)、コムギ胚芽凝集素(WGA)、Griffonia simplicifolia-II(GSL-II)、Con A、Lens culinaris凝集素(LCA)、マンノース結合レクチン(MBL)、BanLec、ガレクチン、Phaseolus vulgaris白血球凝集素(PHA-L)、Phaseolus vulgaris赤血球凝集素(PHA-E)、及びDatura stramoniumレクチン(DSL)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、レクチンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、レクチンが、Galanthus nivalis凝集素(GNA)である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、レクチンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、レクチンが、配列番号35、595~615のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、レクチンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、レクチンが、以下のアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有する:「MAKASLLILATIFLGVITPSCLSENILYSGETLPTGGFLSSGSFVFIMQEDCNLVLYNVDKPIWATNTGGLSSDCSLSMQNDGNLVVFTPSNKPIWASNTDGQNGNYVCILQKDRNVVIYGTNRWATGTYTGAVGIPESPPSEKYPSAGKIKLVTAK」(配列番号:35)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、レクチンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、レクチンが、以下のアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有する:「MAKASLLILAAIFLGVITPSCLSDNILYSGETLSTGEFLNYGSFVFIMQEDCNLVLYDVDKPIWATNTGGLSRSCFLSMQTDGNLVVYNPSNKPIWASNTGGQNGNYVCILQKDRNVVIYGTDRWATGTHTGLVGIPASPPSEKYPTAGKIKLVTAK」(配列番号595)。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、配列番号35に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するGNAと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、配列番号595に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するGNAと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、配列番号35に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するGNAと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号35に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するGNAの濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、配列番号595に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するGNAと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号595に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するGNAの濃度を含む。
組み合わせ:アザジラクチン及びU+2-ACTX-Hv1aの例示的な組み合わせ
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Azadirachta indica(ニーム、ニムツリー、インディアンライラックとしても知られている)から単離された化合物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Azadirachta indica化合物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、以下のうちの1つ以上と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる:アザジラクチン、アザジラジオン、アザジラジオノリド、デアセチルゲデュニン、デアセチルアザジラクチノール、デスフラノアザジラジオン、エポキシアザジラジオン、ゲデュニン、マムーディン、ニームフルイチンA、ニームフルイチンB、ニンボリド、ニンビン、ニモリシノール、酢酸オーチニン、サランニン、サランノール、アルファ-ニモラクトン、ベータ-ニモラクトン、2’,3’-ジヒドロサラニン、3-デアセチルサランニン、6-デアセチルニンビン、7-アセチル-16,17-デヒドロ-16-ヒドロキシネオトリキレノン、7-ベンゾイルニンボシノール、7-デアセチル-7-ベンゾイルエポキシアザジラジオン、7-デアセチル-7-ベンゾイルゲデュニン、7-デアセチル-17-エピニモリシノール、15-ヒドロキシアザジラジオン、17-エピ-17-ヒドロキシアザジラジオン、17-エピアザジラジオン、20,21,22,23-テトラヒドロ-23-オキソアザジロン、22,23-ジヒドロニモシノール、又は28-デオキソニンボリド。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、アザジラクチンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、アザジラクチンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、アザジラクチンが、化学式C354416を有するアザジラクチンであり得る。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、アザジラクチンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、アザジラクチンが、化学式C354416を有し、組み合わせ又は組成物が、アザジラクチンの濃度を含み、アザジラクチンが、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の化学式:C354416を有する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、アザジラクチンと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、アザジラクチンが、化学式C354416を有し、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素の濃度を含む。
組み合わせ:ホウ酸及びU+2-ACTX-Hv1aの例示的な組み合わせ
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ホウ素化合物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ホウ素化合物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、ホウ素化合物が、ホウ酸、テトラヒドロキシジボロン、ホウ酸塩、酸化ホウ素、ボラン、又は前述のうちのいずれかの任意の組み合わせである。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ホウ素化合物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、ホウ素化合物が、水性媒体中でホウ素の酸化物を生成するボラン及び/又はホウ酸エステルである。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ホウ素化合物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、ホウ素化合物が、ホウ酸、ホウ酸塩(例えば、塩基性ホウ酸ナトリウム(ホウ砂))、又はホウ酸及びホウ酸塩の混合物である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ホウ素化合物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、ホウ素化合物が、ホウ酸塩である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ホウ酸塩と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、ホウ酸塩が、過ホウ酸塩、メタホウ酸塩、四ホウ酸塩、八ホウ酸塩、ホウ酸エステル、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ホウ素化合物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、ホウ素化合物が、ホウ酸塩であり、ホウ酸塩が、金属ホウ酸塩(例えば、ホウ酸ナトリウム、ホウ酸亜鉛、及びホウ酸カリウム)、例えば、四ホウ酸二ナトリウム十水和物、八ホウ酸二ナトリウム四水和物、メタホウ酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム一水和物、八ホウ酸二ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム五水和物、四ホウ酸ナトリウム、メタホウ酸銅、ホウ酸亜鉛、メタホウ酸バリウム、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ホウ素化合物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、ホウ素化合物が、ホウ砂(例えば、ホウ酸ナトリウム十水和物-10mol Na.10HO又はホウ酸ナトリウム五水和物-5mol Na.5HO)である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ホウ素化合物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、ホウ素化合物が、ホウ砂の代替物として、有効量で利用することができる(又はホウ素と若しくは互いに組み合わせて有効量で利用することができる)ホウ素化合物である。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ホウ砂と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素、及びホウ砂からなるか、本質的になるか、又はそれからなり、ホウ砂が、無水ホウ砂(Na)、四ホウ酸アンモニウム((NH.4HO)、五ホウ酸アンモニウム((NH1016.8HO)、五ホウ酸カリウム(K1016.8HO)、四ホウ酸カリウム(K.4HO)、メタホウ酸ナトリウム((8mol)Na.8HO)、メタホウ酸ナトリウム((4mol)Na.4HO)、四ホウ酸二ナトリウム十水和物(Na.10HO)、四ホウ酸二ナトリウム五水和物(Na.5HO)、八ホウ酸二ナトリウム四水和物(Na13.4HO)、又はそれらの組み合わせから選択される。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ホウ素化合物と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、ホウ素化合物が、ホウ砂、ホウ酸、八ホウ酸二ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、メタホウ酸ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム十水和物、酸化ホウ素、炭化ホウ素、窒化ホウ素、三臭化ホウ素、三塩化ホウ素、及び三フッ化ホウ素からなる群から選択される。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ホウ酸と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ホウ酸と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、ホウ酸が、HBOの化学式を有する。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、HBOの化学式を有するホウ酸と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、U+2-ACTX-Hv1a毒素の濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、HBOの化学式を有するホウ酸と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、HBOの化学式を有するホウ酸の濃度を含む。
組み合わせ:ウイルス及びU+2-ACTX-Hv1aの例示的な組み合わせ
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、昆虫種と接触した場合に殺虫活性を有するウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、DNAウイルス又はRNAウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、アスコウイルス、バキュロウイルス、デンソウイルス、エントモポックスウイルス、ヒトロサウイルス、イリドウイルス、ヌディウイルス、ポリドナウイルス、ジシストロウイルス、イフラウイルス、ノダウイルス、テトラウイルス、又はサイポウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Ascoviridae科由来のウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、アスコウイルス(例えば、Heliothis virescensアスコウイルス3a、Heliothis virescensアスコウイルス3、Heliothis virescensアスコウイルス3b、Heliothis virescensアスコウイルス3c、Heliothis virescensアスコウイルス3d、Heliothis virescensアスコウイルス3e、Heliothis virescensアスコウイルス3f、Heliothis virescensアスコウイルス3g、Heliothis virescensアスコウイルス3h、Heliothis virescensアスコウイルス3j、Spodoptera frugiperdaアスコウイルス1a、Trichoplusia niアスコウイルス2a、Heliothis virescensアスコウイルス3i、Spodoptera ascovirus、Spodoptera exiguaアスコウイルス5a、Spodoptera frugiperdaアスコウイルス1c、Spodoptera frugiperdaアスコウイルス1d、Trichoplusia niアスコウイルス2b、Trichoplusia niアスコウイルス2c、Trichoplusia niアスコウイルス2d、又はTrichoplusia niアスコウイルス6b)と、からなるか、本質的になるか、又はそれらからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Ascoviridae科由来のウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ツアーズウイルス(例えば、Diadromus pulchellusツアーズウイルス、Diadromus pulchellusアスコウイルス4a、又はDasineura jujubifoliaツアーズウイルス2a)と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Densovirinae科由来のウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、アンビデンソウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、以下の群から選択されるアンビデンソウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる:ヒトデアンビデンソウイルス1、ヒトデ関連デンソウイルス、Blattodeanアンビデンソウイルス1、Periplaneta fuliginosaデンソウイルス、Periplaneta fuliginosaデンソウイルスGuo/2000、Blattodeanアンビデンソウイルス2、Blattella germanicaデンソウイルス1、Decapodアンビデンソウイルス1、Cherax quadricarinatusデンソウイルス、Dipteranアンビデンソウイルス1、Culex pipiensデンソウイルス、Hemipteranアンビデンソウイルス1、Planococcus citriデンソウイルス、Hemipteranアンビデンソウイルス2、Dysaphis plantagineaデンソウイルス、Hemipteranアンビデンソウイルス3、Myzus persicaeデンソウイルス、Myzus persicae nicotianaeデンソウイルス、Hymenopteranアンビデンソウイルス1、Solenopsis invictaデンソウイルス、Lepidopteranアンビデンソウイルス1、Galleria mellonellaデンソウイルス、Junonia coeniaデンソウイルス、Junonia coeniaデンソウイルスpBRJ/1990、Mythimna loreyiデンソウイルス、Pseudoplusia includensデンソウイルス、Orthopteranアンビデンソウイルス1、Acheta domesticaデンソウイルス、未分類のアンビデンソウイルス、Tetranychus urticae関連アンビデンソウイルス、未分類のデンソウイルス、アンビデンソウイルスCaaDV1、アンビデンソウイルスCaaDV2、Atrato Denso様ウイルス、Atrato Denso様ウイルス1、デンソウイルスSC1065、デンソウイルスSC1118、デンソウイルスSC116、デンソウイルスSC2121、デンソウイルスSC2209、デンソウイルスSC2228、デンソウイルスSC2886、デンソウイルスSC3749、デンソウイルスSC3908、デンソウイルスSC4092、デンソウイルスSC444、デンソウイルスSC525、Diaphorina citriデンソウイルス、Diatraea saccharalisデンソウイルス、Lupine feces関連デンソウイルス、Lupine feces関連デンソウイルス2、又はアンビデンソウイルス種。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Entomopoxvirinae科由来のウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、アルファエントモポックスウイルス、ベータエントモポックスウイルス、Diachasmimorphaエントモポックスウイルス、Melanoplus sanguinipesエントモポックスウイルス、又はいくつかのこれまで未分類のEntomopoxvirinaeと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、以下の群から選択されるEntomopoxvirinae科ウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる:Anomala cupreaエントモポックスウイルス、Adoxophyes honmaiエントモポックスウイルス、Adoxophyes honmaiエントモポックスウイルス「L」、Amsacta mooreiエントモポックスウイルス、Choristoneura biennisエントモポックスウイルス、Choristoneura fumiferanaエントモポックスウイルス、Choristoneura rosaceanaエントモポックスウイルス、Choristoneura rosaceanaエントモポックスウイルス「L」、Heliothis armigeraエントモポックスウイルス、Mythimna separataエントモポックスウイルス、Mythimna separataエントモポックスウイルス「L」、未分類のベータエントモポックスウイルス、Diachasmimorpha longicaudataエントモポックスウイルス、Melanoplus sanguinipesエントモポックスウイルス「O」、Anacridium aegyptiumエントモポックスウイルス、Calliptamus italicusエントモポックスウイルス、Chironomus decorusエントモポックスウイルス、Gomphocerus sibiricusエントモポックスウイルス、Homona coffeariaエントモポックスウイルス、Linepithema humileエントモポックスウイルス1、Oedaleus asiaticusエントモポックスウイルス、又はPseudaletia separataエントモポックスウイルス。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Iridoviridae科ウイルス(例えば、イリドウイルス)と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、以下の群から選択されるIridoviridae科ウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる:Tipulaイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス31、Armadillidium vulgareイリデッセントウイルス、Popillia japonicaイリデッセントウイルス、Porcellio scaberイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス6、Gryllus bimaculatusイリドウイルス、未分類のイリドウイルス、Acetes erythraeusイリドウイルス、Anticarsia gemmatalisイリデッセントウイルス、Armadillidium decorumイリデッセントウイルス、バラマンディパーチイリドウイルス、ブルーギルサンフィッシュイリドウイルス、セイタカヒイラギイリドウイルス、クリムゾンスナッパーイリドウイルス、Decapterus macrosomaイリドウイルス、Gazza minutaイリドウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス16、Costelytra zealandicaイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス2、Sericesthisイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス23、Heteronychus aratorイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス24、Apis ceranaイリデッセントウイルス、無脊椎動物イリデッセントウイルス29、Tenebrio molitorイリデッセントウイルス、イリドウイルスbarramundi/Quang Ninh/VNM/2008、イリドウイルスIV31、スズキイリドウイルス、Lagocephalus sceleratusイリドウイルス、Lates calcariferイリドウイルス、Leiognathus splendensイリドウイルス、Marble gobyイリドウイルス、Orbiculate batfishイリドウイルス、Parapristipoma trilineatumイリドウイルス、パーチイリドウイルス603-2/China、Polydactylus sextariusイリドウイルス、Porcellio siculoccidentalisイリデッセントウイルス、Pyrrhalta luteolaイリデッセントウイルス、Rana temporaria United Kingdomイリドウイルス1、Rana temporaria United Kingdomイリドウイルス2、ヘダイイリドウイルス、ライギョイリドウイルス、イシガレイイリドウイルス603-3/China、イシガレイイリドウイルス724/China、チョウザメイリドウイルス、Synodus indicusイリドウイルス、又はTrichoniscus panormidensisイリデッセントウイルス。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Nudiviridae科ウイルス(例えば、アルファヌディウイルス、ベータヌディウイルス、又はいくつかのこれまで未分類のNudiviridae科ウイルス)と、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、以下の群から選択されるNudiviridae科ウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる:Gryllus bimaculatusヌディウイルス、Oryctes rhinocerosヌディウイルス、Heliothis zeaヌディウイルス、Helicoverpa zeaヌディウイルス2、Allomyrinaウイルス、Drosophila innubilaヌディウイルス、DrosophilaヌディウイルスRLU-2011、Espartoウイルス、Homarus gammarusヌディウイルス、Kallitheaウイルス、MacrobrachiumヌディウイルスCN-SL2011、Mauternbachウイルス、Nilaparvata lugens内因性ヌディウイルス、Penaeus monodonヌディウイルス、Tipula oleraceaヌディウイルス、又はTomellosoウイルス。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、以下の群から選択されるIflaviridae科ウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる:Antheraea pernyiイフラウイルス、Brevicoryne brassicaeウイルス、Brevicoryne brassicaeウイルス-UK、Deformed wingウイルス、Kakugoウイルス、VDV-1/DWV組換え、Dinocampus coccinellae麻痺ウイルス、Ectropis obliquaウイルス、Ectropis obliqua picorna様ウイルス、Infectious flacherieウイルス、Infectious flacherieウイルス分離株silkworm、Ixodes holocyclusイフラウイルス、Lygus lineolarisウイルス1、Lymantria disparイフラウイルス1、Nilaparvata lugens honeydewウイルス1、Perina nudaウイルス、Sacbroodウイルス、SacbroodウイルスCSBV-LN/China/2009、Slow bee麻痺ウイルス、Spodoptera exiguaイフラウイルス1、Spodoptera exiguaイフラウイルス2、Varroa destructorウイルス1、未分類のイフラウイルス、ACT fleaイフラウイルス、Aedes vexansイフラウイルス、Armigeresイフラウイルス、コウモリイフラウイルス、ミツバチイフラウイルス1、ブラックベリーイフラウイルスA、ブラックベリーイフラウイルスB、Bombyx moriイフラウイルス、Brevesイフラウイルス、Diamondback mothイフラウイルス、Formica exsectaウイルス2、Haemaphysalis flavaイフラウイルス、Heliconius eratoイフラウイルス、Helicoverpa armigeraイフラウイルス、Midgeイフラウイルス90C0、Miniopterus fuliginosusイフラウイルス、Mokuウイルス、Nasonia vitripennisウイルス、Pirizalイフラウイルス、Psammotettix alienusイフラウイルス1、Rondoniaイフラウイルス1、Rondoniaイフラウイルス2、Scaphoideus titanusイフラウイルス1、Scaphoideus titanusイフラウイルス2、VDV-1/DWV組換え4、Vespa velutina Mokuウイルス、又はXysticus cristatusイフラウイルス。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Baculoviridae科由来のウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、アルファバキュロウイルス、ベータバキュロウイルス、デルタバキュロウイルス、ガンマバキュロウイルス、又はこれまで未分類のBaculoviridaeウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、以下の群から選択されるアルファバキュロウイルスのウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる:Adoxophyes honmai核多角体病ウイルス、Agrotis ipsilon複数型核多角体病ウイルス、Agrotis segetum核多角体病ウイルスA、Agrotis segetum核多角体病ウイルスB、Antheraea pernyi核多角体病ウイルス、Antheraea proylei核多角体病ウイルス、Philosamia cynthia ricini核多角体病ウイルスvirus、Anticarsia gemmatalis複数型核多角体病ウイルス、Autographa californica複数型核多角体病ウイルス、Anagrapha falcifera MNPV、Autographa californica核多角体病ウイルス、Galleria mellonella MNPV、Plutella xylostella複数型核多角体病ウイルス、Rachiplusia nu MNPV、Rachiplusia ou MNPV、Bombyx mori核多角体病ウイルス、Bombyx mandarina核多角体病ウイルス、Bombyx mandarina核多角体病ウイルスS2、Bombyx mori核多角体病ウイルスK1、Buzura suppressaria核多角体病ウイルス、Catopsilia pomona核多角体病ウイルス、Choristoneura fumiferana DEF複数型核多角体病ウイルス、Choristoneura fumiferana複数型核多角体病ウイルス、Choristoneura occidentalisアルファバキュロウイルス、Choristoneura murinana核多角体病ウイルス、Choristoneura rosaceana核多角体病ウイルス、Chrysodeixis chalcites核多角体病ウイルス、Chrysodeixis chalcites SNPV TF1-A、Chrysodeixis includens核多角体病ウイルス、Pseudoplusia includens SNPV IE、Clanis bilineata核多角体病ウイルス、Dasychira pudibunda核多角体病ウイルス、Ectropis obliqua核多角体病ウイルス、Epiphyas postvittana核多角体病ウイルス、Euproctis pseudoconspersa核多角体病ウイルス、Helicoverpa armigera核多角体病ウイルス、Helicoverpa armigera NPV NNg1、Helicoverpa armigera NPV 株Australia、Helicoverpa armigera核多角体病ウイルスG4、Helicoverpa armigera SNPV、Helicoverpa SNPV AC53、Helicoverpa zea単一型核多角体病ウイルス、Hemileuca species核多角体病ウイルス、Hemileuca種核多角体病ウイルス、Hyphantria cunea核多角体病ウイルス、Lambdina fiscellaria核多角体病ウイルス、Leucania separata核多角体病ウイルス、Lonomia obliqua核多角体病ウイルス、Lonomia obliqua複数型核多角体病ウイルス、Lymantria dispar複数型核多角体病ウイルス、Lymantria xylina核多角体病ウイルス、Mamestra brassicae複数型核多角体病ウイルス、Mamestra configurata核多角体病ウイルスA、Mamestra configurata核多角体病ウイルスB、Helicoverpa armigera複数型核多角体病ウイルス、Maruca vitrata核多角体病ウイルス、Mythimna unipuncta核多角体病ウイルス、Operophtera brumata核多角体病ウイルス、Orgyia leucostigma核多角体病ウイルス、Orgyia pseudotsugata複数型核多角体病ウイルス、Oxyplax ochracea核多角体病ウイルス、Perigonia lusca核多角体病ウイルス、Perigonia lusca単一型核多角体病ウイルス、Spodoptera exigua複数型核多角体病ウイルス、Spodoptera exigua核多角体病ウイルス(株US)、Spodoptera frugiperda複数型核多角体病ウイルス、Spodoptera littoralis核多角体病ウイルス、Spodoptera litura核多角体病ウイルス、Sucra jujuba核多角体病ウイルス、Thysanoplusia orichalcea核多角体病ウイルス、Trichoplusia ni単一型核多角体病ウイルス、Wiseana signata核多角体病ウイルス、未分類のアルファバキュロウイルス、Abraxas grossulariata核多角体病ウイルス、Actias selene核多角体病ウイルス、Adoxophyes orana核多角体病ウイルス、Agraulis vanillae MNPV、Agrotis exclamationis核多角体病ウイルス、Agrotis ipsilon複数カプシド核多角体病ウイルス、Amorbia cuneacapsa核多角体病ウイルス、Amorbia cuneana核多角体病ウイルス、Ampelophaga rubiginosa核多角体病ウイルス、Amsacta albistriga核多角体病ウイルス、Anagrapha falcifera複数型核多角体病ウイルス、Antheraea polyphemus核多角体病ウイルス、Anticarsia gemmatalis核多角体病ウイルス、Apocheima cinerarium核多角体病ウイルス、Aporia crataegi核多角体病ウイルス、Archips cerasivoranus核多角体病ウイルス、Archips rosanus核多角体病ウイルス、Attacus ricini核多角体病ウイルス、Autographa biloba核多角体病ウイルス、Autographa gamma核多角体病ウイルス、Autographa nigrisigna核多角体病ウイルス、Boarmia bistortata核多角体病ウイルス、Bombyx mandarina核多角体病ウイルス、Busseola fusca核多角体病ウイルス、Catposilia pomona核多角体病ウイルス、Cerapteryx graminis核多角体病ウイルス、Choristoneura diversana核多角体病ウイルス、Choristoneura occidentalis核多角体病ウイルス、Chorizagrotis auxiliaris核多角体病ウイルス、Chrysodeixis includens NPV、Coloradia pandoraアルファバキュロウイルス、Coloradia pandora核多角体病ウイルス、Condylorrhiza vestigialis MNPV、Condylorrhiza vestigialis複数型核多角体病ウイルス、Cryptophlebia peltastica核多角体病ウイルス、Cyclophragma undans核多角体病ウイルス、Dasychira plagiata核多角体病ウイルス、Dendrolimus kikuchii核多角体病ウイルス、Diaphania pulverulentalis核多角体病ウイルス、Dione juno MNPV tmk1/ARG/2003、Dione juno核多角体病ウイルス、Dirphia peruvianus核多角体病ウイルス、Ectropis grisescens核多角体病ウイルス、Epinotia granitalis核多角体病ウイルス、Euproctis digramma核多角体病ウイルス、Gilpinia hercyniae核多角体病ウイルス、Heliconius erato核多角体病ウイルス、Helicoverpa assulta核多角体病ウイルス、Helicoverpa gelotopoeon単一型核多角体病ウイルス、Heliothis peltigera SNPV、Heliothis zea核多角体病ウイルス、Hemerocampa vetusta核多角体病ウイルス、Hemileucaアルファバキュロウイルス、Hyposidra infixaria NPV、Hyposidra talaca NPV、Iragoides fasciata核多角体病ウイルス、Junonia coenia核多角体病ウイルス、Leucoma salicis核多角体病ウイルス、Lymantria mathura mutiple核多角体病ウイルス、Lymantria monacha核多角体病ウイルス、Lymantria xylina核多角体病ウイルス2、Malacosomaアルファバキュロウイルス、Malacosoma americanum核多角体病ウイルス、Malacosoma californicum核多角体病ウイルス、Malacosoma californicum pluviale核多角体病ウイルス、Malacosoma disstria核多角体病ウイルス、Malacosoma neustria核多角体病ウイルス、Mamestra configurata核多角体病ウイルス、Neophasiaアルファバキュロウイルス、Nepytia phantasmaria核多角体病ウイルス、Nymphalis io核多角体病ウイルス、Oak looperアルファバキュロウイルス、Ophiusa disjungens核多角体病ウイルス、Orgyia anartoides核多角体病ウイルス、Orgyia ericae核多角体病ウイルス、Orgyia pseudotsugata単一カプシド核多角体病ウイルス、Panolis flammea核多角体病ウイルス、Peridromaアルファバキュロウイルス、Peridroma margaritosa核多角体病ウイルス、Perina nuda核多角体病ウイルス、Phryganidia californica核多角体病ウイルス、Plusia acuta核多角体病ウイルス、Plusia orichalcea核多角体病ウイルス、Plutella maculipennis核多角体病ウイルス、Pseudaletiaアルファバキュロウイルス、Pseudoplusia includens核多角体病ウイルス、Pterolocera amplicornis核多角体病ウイルス、Rachiplusia nu核多角体病ウイルス、Rachiplusia nu単一型核多角体病ウイルス、Samia cynthia核多角体病ウイルス、Spilarctia obliqua核多角体病ウイルス、Spilosoma obliqua核多角体病ウイルス、Spilosoma phasma核多角体病ウイルス、Spodoptera cosmioides核多角体病ウイルス、Spodoptera eridania核多角体病ウイルス、Spodoptera exempta核多角体病ウイルス、Spodoptera littoralis複数カプシド核多角体病ウイルス、Spodoptera litura MNPV、Spodoptera litura核多角体病ウイルスII、Spodoptera terricola核多角体病ウイルス、Tineola bisselliella核多角体病ウイルス、Troides aeacus核多角体病ウイルス、Wiseana cervinata核
多角体病ウイルス、Agraulis sp.核多角体病ウイルス、Malacosoma sp.アルファバキュロウイルス、Malacosoma sp.核多角体病ウイルス、Neophasia sp.アルファバキュロウイルス、又は未同定の核多角体病ウイルス。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、以下の群から選択されるベータバキュロウイルスのウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる:Adoxophyes oranaグラニュロウイルス、Agrotis segetumグラニュロウイルス、Artogeia rapaeグラニュロウイルス、Pieris brassicaeグラニュロウイルス、Choristoneura fumiferanaグラニュロウイルス、Choristoneura occidentalisグラニュロウイルス、Clostera anachoretaグラニュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルスA、Clostera anastomosisグラニュロウイルスHenan、Clostera anastomosisグラニュロウイルスB、Cnaphalocrocis medinalisグラニュロウイルス、Cryptophlebia leucotretaグラニュロウイルス、Cydia pomonellaグラニュロウイルス、Cydia pomonella顆粒病ウイルス(メキシコ分離株)、Diatraea saccharalisグラニュロウイルス、Epinotia aporemaグラニュロウイルス、Erinnyis elloグラニュロウイルス、Harrisina brilliansグラニュロウイルス、Helicoverpa armigeraグラニュロウイルス、Lacanobia oleraceaグラニュロウイルス、Mocis latipesグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスA、Pseudalatia unipunctaグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスB、Mythimna unipunctaグラニュロウイルス、Phthorimaea operculellaグラニュロウイルス、Plodia interpunctellaグラニュロウイルス、Plutella xylostellaグラニュロウイルス、Spodoptera frugiperdaグラニュロウイルス、Spodoptera lituraグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルスLBIV-12、Xestia c-nigrumグラニュロウイルス、Achaea janataグラニュロウイルス、Adoxophyes honmaiグラニュロウイルス、Agrotis exclamationisグラニュロウイルス、Amelia palloranaグラニュロウイルス、Andraca bipunctataグラニュロウイルス、Autographa gammaグラニュロウイルス、Caloptilia theivoraグラニュロウイルス、Choristoneura murinanaグラニュロウイルス、Choristoneura viridisベータバキュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルス、Cnephasia longanaグラニュロウイルス、Estigmene acreaグラニュロウイルス、Euxoa ochrogasterグラニュロウイルス、Heliothis armigeraグラニュロウイルス、Hoplodrina ambiguaグラニュロウイルス、Hyphantria cuneaグラニュロウイルス、Natada narariaグラニュロウイルス、Nephelodes emmedoniaグラニュロウイルス、Pandemis limitataグラニュロウイルス、Peridorma morpontoraグラニュロウイルス、Pieris rapaeグラニュロウイルス、Plathypena scabraグラニュロウイルス、Pseudaletiaベータバキュロウイルス、Scotogramma trifoliiグラニュロウイルス、Spodoptera androgeaグラニュロウイルス、Spodoptera littoralisグラニュロウイルス、Tecia solanivoraグラニュロウイルス、又はMocis sp.グラニュロウイルス。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、以下の群から選択されるデルタバキュロウイルスのウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる:Culex nigripalpus核多角体病ウイルス、又はCulex nigripalpus NPV Florida/1997。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、以下の群から選択されるガンマバキュロウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる:Neodiprion lecontei核多角体病ウイルス、Neodiprion lecontei NPV(カナダ株)、Neodiprion sertifer核多角体病ウイルス、未分類のガンマバキュロウイルス、又はNeodiprion abietis NPV。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、以下の群から選択される、これまで未分類のBaculoviridaeウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる:Achaea faber核多角体病ウイルス、Aedes sollicitans核多角体病ウイルス、Aglais urticae核多角体病ウイルス、Agraulis vanillae核多角体病ウイルス、Anomis sabulifera核多角体病ウイルス、Antheraea yamamai核多角体病ウイルス、Anthophila fabricianaグラニュロウイルス、Aroa discalis核多角体病ウイルス、Baculovirus penaei、Cadra cautella核多角体病ウイルス、Chaliopsis junodi核多角体病ウイルス、Cotesia marginiventrisバキュロウイルス、Cynosarga ornata核多角体病ウイルス、Darna narariaグラニュロウイルス、Darna trimaグラニュロウイルス、Erannis defoliaria核多角体病ウイルス、Euplexia luciparaグラニュロウイルス、Euproctis chrysorrhoea核多角体病ウイルス、Euproctis similis核多角体病ウイルス、性腺特異的ウイルス、Homona coffeariaグラニュロウイルス、Hyblaea puera核多角体病ウイルス、Idaea seriata核多角体病ウイルス、Junonia coeniaグラニュロウイルス、Lasiocampa quercus核多角体病ウイルス、Lemyra imparilis核多角体病ウイルス、Mahasena corbetti核多角体病ウイルス、Melanchra persicariaeグラニュロウイルス、Operophtera bruceata核多角体病ウイルス、Orgyia antiqua核多角体病ウイルス、Orgyia mixta核多角体病ウイルス、Pachytrina philargyria核多角体病ウイルス、Pareuchaetes pseudoinsulata核多角体病ウイルス、Penaeus monodon核多角体病ウイルス、Phalera bucephala核多角体病ウイルス、Polygonia c-album核多角体病ウイルス、Samia ricini核多角体病ウイルス、Spilosoma luteaグラニュロウイルス、Spodoptera albula核多角体病ウイルス、Trabala vishnou核多角体病ウイルス、Uranotaenia sapphirina核多角体病ウイルス、Urbanus proteus核多角体病ウイルス、Utetheisa pulchella核多角体病ウイルス、Vanessa atalanta核多角体病ウイルス、Vanessa cardui核多角体病ウイルス、Wiseana cervinataグラニュロウイルス、又はBaculoviridae sp.。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Baculoviridaeウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、ベータバキュロウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Adoxophyes oranaグラニュロウイルス、Agrotis segetumグラニュロウイルス、Artogeia rapaeグラニュロウイルス、Pieris brassicaeグラニュロウイルス、Choristoneura fumiferanaグラニュロウイルス、Choristoneura occidentalisグラニュロウイルス、Clostera anachoretaグラニュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルスA、Clostera anastomosisグラニュロウイルスHenan、Clostera anastomosisグラニュロウイルスB、Cnaphalocrocis medinalisグラニュロウイルス、Cryptophlebia leucotretaグラニュロウイルス、Cydia pomonellaグラニュロウイルス、Cydia pomonella granulosis virus(メキシコ分離株)、Diatraea saccharalisグラニュロウイルス、Epinotia aporemaグラニュロウイルス、Erinnyis elloグラニュロウイルス、Harrisina brilliansグラニュロウイルス、Helicoverpa armigeraグラニュロウイルス、Lacanobia oleraceaグラニュロウイルス、Mocis latipesグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスA、Pseudalatia unipunctaグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスB、Mythimna unipunctaグラニュロウイルス、Phthorimaea operculellaグラニュロウイルス、Plodia interpunctellaグラニュロウイルス、Plutella xylostellaグラニュロウイルス、Spodoptera frugiperdaグラニュロウイルス、Spodoptera lituraグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルスLBIV-12、Xestia c-nigrumグラニュロウイルス、未分類のベータバキュロウイルス、Achaea janataグラニュロウイルス、Adoxophyes honmaiグラニュロウイルス、Agrotis exclamationisグラニュロウイルス、Amelia palloranaグラニュロウイルス、Andraca bipunctataグラニュロウイルス、Autographa gammaグラニュロウイルス、Caloptilia theivoraグラニュロウイルス、Choristoneura murinanaグラニュロウイルス、Choristoneura viridisベータバキュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルス、Cnephasia longanaグラニュロウイルス、Estigmene acreaグラニュロウイルス、Euxoa ochrogasterグラニュロウイルス、Heliothis armigeraグラニュロウイルス、Hoplodrina ambiguaグラニュロウイルス、Hyphantria cuneaグラニュロウイルス、Natada narariaグラニュロウイルス、Nephelodes emmedoniaグラニュロウイルス、Pandemis limitataグラニュロウイルス、Peridorma morpontoraグラニュロウイルス、Pieris rapaeグラニュロウイルス、Plathypena scabraグラニュロウイルス、Pseudaletiaベータバキュロウイルス、Scotogramma trifoliiグラニュロウイルス、Spodoptera androgeaグラニュロウイルス、Spodoptera littoralisグラニュロウイルス、Tecia solanivoraグラニュロウイルス、又はMocis sp.グラニュロウイルスと、を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Cydia pomonellaグラニュロウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Cydia pomonellaグラニュロウイルス分離株V22ウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Cydia pomonellaグラニュロウイルス分離株V22ウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、Cydia pomonellaグラニュロウイルス分離株V22ウイルスの濃度を含む。
一部の実施形態では、組み合わせ又は組成物は、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、Cydia pomonellaグラニュロウイルス分離株V22ウイルスと、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、組み合わせ又は組成物が、総組成物の約0.0001% w/w、0.0005% w/w、0.001% w/w、0.005% w/w、0.01% w/w、0.02% w/w、0.03% w/w、0.04% w/w、0.05% w/w、0.06% w/w、0.07% w/w、0.08% w/w、0.09% w/w、0.1% w/w、0.2% w/w、0.3% w/w、0.4% w/w、0.5% w/w、0.6% w/w、0.7% w/w、0.8% w/w、0.9% w/w、1% w/w、2% w/w、3% w/w、4% w/w、5% w/w、6% w/w、7% w/w、8% w/w、9% w/w、10% w/w、11% w/w、12% w/w、13% w/w、14% w/w、15% w/w、16% w/w、17% w/w、18% w/w、19% w/w、20% w/w、21% w/w、22% w/w、23% w/w、24% w/w、25% w/w、26% w/w、27% w/w、28% w/w、29% w/w、30% w/w、31% w/w、32% w/w、33% w/w、34% w/w、35% w/w、36% w/w、37% w/w、38% w/w、39% w/w、40% w/w、41% w/w、42% w/w、43% w/w、44% w/w、45% w/w、46% w/w、47% w/w、48% w/w、49% w/w、50% w/w、51% w/w、52% w/w、53% w/w、54% w/w、55% w/w、56% w/w、57% w/w、58% w/w、59% w/w、60% w/w、61% w/w、62% w/w、63% w/w、64% w/w、65% w/w、66% w/w、67% w/w、68% w/w、69% w/w、70% w/w、71% w/w、72% w/w、73% w/w、74% w/w、75% w/w、76% w/w、77% w/w、78% w/w、79% w/w、80% w/w、81% w/w、82% w/w、83% w/w、84% w/w、85% w/w、86% w/w、87% w/w、88% w/w、89% w/w、90% w/w、91% w/w、92% w/w、93% w/w、94% w/w、95% w/w、96% w/w、97% w/w、98% w/w、99% w/w、99.1% w/w、99.2% w/w、99.3% w/w、99.4% w/w、99.5% w/w、99.6% w/w、99.7% w/w、99.8% w/w、又は約99.9% w/wの範囲の、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素の濃度を含む。
本発明の使用方法
植物、植物部分、及び種子を保護するための方法
一部の実施形態では、本開示は、農学的及び/又は非農学的用途において有害無脊椎動物を制御するための方法を提供し、有害無脊椎動物又はその環境、植物表面又はその一部を含む固体表面を、農薬有効量の(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載される1つ以上の殺虫剤(IA)と、の組み合わせと接触させることを含む。
一部の実施形態では、本開示は、農学的及び/又は非農学的用途において有害無脊椎動物を制御するための方法を提供し、有害無脊椎動物又はその環境、植物表面又はその一部を含む固体表面を、農薬有効量の(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載される1つ以上の殺虫剤(IA)と、(3)1つ以上の賦形剤と、を含む組成物と接触させることを含む。例えば、一部の実施形態では、組成物は、(1)表Aに示される1つ以上のCRIPのセット(すなわち、A1~A68)と、(2)表Bに示される1つ以上の殺虫剤のセット(すなわち、B1~B479)と、(3)賦形剤と、を含むことができる。
(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載される1つ以上の殺虫剤(IA)と、(3)1つ以上の賦形剤と、を含む好適な組成物の例としては、液体溶液、エマルション、粉末、顆粒、ナノ粒子、マイクロ粒子、若しくはそれらの組み合わせの形態で送達される不活性成分が製剤化された当該組成物が挙げられる。
一部の実施形態では、有害無脊椎動物から畑作物を保護するための本発明の化合物、混合物、又は組成物との接触を達成するために、化合物又は組成物は、典型的には、作物を植える前の作物の種子、作物植物の葉(例えば、葉、茎、花、果実)、又は作物が植えられる前若しくは植えられた後の土壌若しくは他の成長培地に適用される。
接触方法の一実施形態は、噴霧による方法である。あるいは、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載される1つ以上の殺虫剤(IA)と、(3)1つ以上の賦形剤と、を含む粒状組成物は、植物の葉又は土壌に適用することができる。本発明の化合物はまた、植物を本発明の化合物を含む組成物と接触させることによって、植物の取り込みを通して効果的に送達され得、組成物が、液体製剤の土壌ドレンチ(soil drench)、土壌への顆粒製剤、育苗箱(nursery box)処理、又は移植ディップ(dip of transplant)として適用される。注目すべきは、土壌ドレンチ液体製剤の形態の本開示の組成物である。また、注目すべきは、有害無脊椎動物を制御するための方法であり、有害無脊椎動物又はその環境を生物学的有効量の本発明の組み合わせと接触させることを含む。更に注目すべきは、一部の例示的な実施形態では、例示的な方法は、土壌環境を企図し、組成物が土壌ドレンチ製剤として土壌に適用される。更に注目すべきは、本発明のCRIP及びIAの組み合わせは、蔓延部位に局所的に適用することによっても有効である。他の接触方法としては、直接及び残留噴霧、空中散布、ゲル、シードコーティング、マイクロカプセル化、浸透性摂取、ベイト、耳タグ、ボーラス、噴霧器、燻蒸剤、エアロゾル、粉塵、及び多くの他のものによる本発明の化合物又は組成物の適用が挙げられる。接触方法の一実施形態は、本発明の化合物又は組成物を含む寸法的に安定な肥料顆粒、スティック、又は錠剤である。本発明の化合物は、無脊椎動物制御デバイス(例えば、防虫ネット、衣類への適用、ロウソク製剤への適用など)を製造するための材料に含浸させることもできる。
一部の実施形態では、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載される1つ以上の殺虫剤(IA)と、任意選択的に(3)1つ以上の賦形剤と、を含む組み合わせは、種子を有害無脊椎動物から保護するための種子処理においても有用である。本開示及び特許請求の範囲の文脈において、種子を処理することは、当該種子を、農薬有効量の、本明細書に記載される(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはそれらの薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)典型的には本発明の組成物として製剤化される、1つ以上の殺虫剤(IA)と、の組み合わせと接触させることを意味する。この種子処理は、無脊椎動物の土壌害虫から種子を保護し、一般に、発芽する種子から発生する苗の、土壌と接触する根及び他の植物部分も保護することができる。種子処理はまた、発生中の植物内の(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載される1つ以上の殺虫剤(IA)と、の転流による葉の保護を提供することができる。種子処理は、全ての種類の種子に適用することができ、特殊な形質を発現するように遺伝的に形質転換された植物が発芽するであろう種子が含まれる。加えて、一部の実施形態では、CRIPは、すでに形質転換されている植物又はその一部(例えば、植物細胞又は植物種子)(例えば、グリホサートに対する耐性を提供するグリホサートアセチルトランスフェラーゼなどの除草剤耐性を発現するもの)に形質転換され得る。
種子処理の1つの方法は、種子を蒔く前に、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載される1つ以上の殺虫剤(IA)と、(3)1つ以上の賦形剤と、を含む組み合わせで種子を噴霧又は散布することによる。種子処理のために製剤化された組成物は、概して、本発明と被膜形成剤又は接着剤の組み合わせからなる。したがって、典型的には、本開示の種子コーティング組成物は、農薬有効量の(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載の1つ以上の殺虫剤(IA)と、被膜形成剤若しくは接着剤と、からなる。種子は、流動性懸濁液濃縮物を直接種子の転動床に噴霧し、次いで、種子を乾燥させることによってコーティングすることができる。あるいは、他の製剤タイプ(例えば、湿潤粉末、溶液、サスポエマルション、乳化可能な濃縮物、及び水中のエマルション)を種子に噴霧することができる。このプロセスは、種子にフィルムコーティングを適用するために特に有用である。様々なコーティング機及びプロセスが、当業者に利用可能である。好適なプロセスとしては、P.Kosters et al.,Seed Treatment:Progress and Prospects,1994 BCPC Monograph No.57に列挙されているものが挙げられる(それに列挙されている参考文献及びその開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される)。
処理された種子は、典型的には、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載される1つ以上の殺虫剤(IA)の組み合わせを、100kgの種子当たり約0.01g~1kg(すなわち、処理前の種子の約0.00001~1重量%)の範囲の量で含む。種子処理のために製剤化される流動性懸濁液は、典型的には、約0.5~約70%の活性成分、約0.5~約30%の被膜形成接着剤、約0.5~約20%の分散剤、0~約5%の増粘剤、0~約5%の顔料及び/又は色素、0~約2%の消泡剤、0~約1%の防腐剤、並びに0~約75%の揮発性液体希釈剤を含む。
製剤及び組成物の使用方法
一部の実施形態では、本発明は、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載の1つ以上の殺虫剤(IA)と、(3)1つ以上の賦形剤と、を含む組み合わせを使用する方法を提供し、当該方法が、組成物を調製することと、次いで、当該組成物を昆虫の部位に適用することと、を含む。
一部の実施形態では、本発明は、組成物を使用して昆虫を制御する方法を提供し、当該組成物が、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載される1つ以上の殺虫剤(IA)と、(3)1つ以上の賦形剤と、を含み、当該昆虫が、以下からなる群から選択される:アヒマスフィンクスモス(ホーンワーム)(Eumorpha achemon)、アルファルファキャタピラー(Colias eurytheme)、アーモンドモス(Caudra cautella)、アモルビアモス(Amorbia humerosana)、アーミーワーム(Spodoptera spp.(例えば、exigua、frugiperda、littoralis)、Pseudaletia unipuncta)、アーティチョークプルームモス(Platyptilia carduidactyla)、アゼリアキャタピラー(Datana major)、バッグワーム(Thyridopteryx)、ephemeraeformis)、バナナモス(Hypercompe scribonia)、バナナスキッパー(Erionota thrax)、ブラックヘディッドバドワーム(Acleris gloverana)、カルフォルニアオークワーム(Phryganidia californica)、スプリングキャンカーワーム(Paleacrita merriccata)、チェリーフルーツワーム(Grapholita packardi)、チャイナマークモス(Nymphula stagnata)、シトラスカットワーム(Xylomyges curialis)、コドリングモス(Cydia pomonella)、クランベリーフルーツワーム(Acrobasis vaccinii)、クロスストライプドキャベッジワーム(Evergestis rimosalis)、カットワーム(Noctuid種、Agrotis ipsilon)、ダグラスファータソックモス(Orgyia pseudotsugata)、エルロモス(ホーンワーム)(Erinnyis ello)、エルムスパンワーム(Ennomos subsignaria)、ヨーロピアングレープヴァインモス(Lobesia botrana)、ヨーロピアンスキッパー(Thymelicus lineola(エセックススキッパー)、フォールウェブワーム(Melissopus latiferreanus、フィルバートリーフローラー(Archips rosanus、フルーツツリーリーフローラー(Archips argyrospilia、グレープベリーモス(Paralobesia viteana、グレープリーフローラー(Platynota stultana、グレープリーフスケルトナイザー(Harrisina americana(グラウンドオンリー)、グリーンクローバーワーム(Plathypena scabra、グリーンストライプドメープルワーム(Dryocampa rubicunda、Gummosos-Batrachedra、Comosae(ホッジズ)、ジプシーモス(Lymantria dispar)、ヘムロックルーパー(Lambdina fiscellaria)、ホーンワーム(Manduca spp.)、インポーテッドキャベッジワーム(Pieris rapae)、アイオモス(Automeris io)、ジャックパインバドワーム(Choristoneura pinus)、ライトブラウンアップルモス(Epiphyas postvittana)、メロンワーム(Diaphania hyalinata)、ミモザウェブワーム(Homadaula anisocentra)、オブリークバンディッドリーフローラー(Choristoneura rosaceana)、オリアンダーモス(Syntomeida epilais)、オムニバラスリーフローラー(Playnota stultana)、オムニバラスルーパー(Sabulodes aegrotata)、オレンジドッグ(Papilio cresphontes)、オレンジトートリクス(Argyrotaenia citrana)、オリエンタルフルーツモス(Grapholita molesta)、ピーチツイグボーア(Anarsia lineatella)、パインバタフライ(Neophasia menapia)、ポッドワーム(Heliocoverpa zea)、レッドバンディッドリーフローラー(Argyrotaenia velutinana)、レッドハンプトキャタピラー(Schizura concinna)、リンドワームコンプレックス(Various Leps.)、サドルバックキャタピラー(Sibine stimulea )、サドルプロミネントキャタピラー(Heterocampa guttivitta)、ソルトマーシュキャタピラー(Estigmene acrea)、ソッドベッドワーム(Crambus spp.)、スパンワーム(Ennomos subsignaria )、フォールキャンカーワーム(Alsophila pometaria)、スプルースバドワーム(Choristoneura fumiferana)、テントキャタピラー(Various Lasiocampidae )、Thecla-Thecla Basilides(Geyr)Thecla basilides)、タバコホーンワーム(Manduca sexta)、タバコモス(Ephestia elutella)、タフテッドアップルバドモス(Platynota idaeusalis)、トゥイグボーア(Anarsia lineatella)、ベアリアゲイティドカットワーム(Peridroma saucia)、ベアリアゲイティドリーフローラー(Platynota flavedana)、ベルベットビーンキャタピラー(Anticarsia gemmatalis)、ウォルナットキャタピラー(Datana integerrima)、ウェブワーム(Hyphantria cunea)、ウエスタンタソックモス(Orgyia vetusta)、サザンコーンストークボーア(Diatraea crambidoides)、コーンイアワーム、スイートポテトウィービル、ペッパーウィービル、シトラスルートウィービル、ストロベリーウィービル、ピーカンウィービル、フィルバートウィービル、ライスウォーターウィービル、アルファルファウィービル、クローバーウィービル、ティーショット-ホールボーア、ルートウィービル、シュガーケインビートル、コーヒーベリーボーア、アニュアルブルーグラスウィービル(Listronotus maculicollis)、アジアティックガーデンビートル(Maladera castanea)、ヨーロピアンチェ―ファー(Rhizotroqus majalis)、グリーンジューンビートル(Cotinis nitida)、ジャパニーズビートル(Popillia japonica)、メイオアジューンビートル(Phyllophaga sp.)、ノーザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala borealis)、オリエンタルビートル(Anomala orientalis)、サザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala lurida)、ビルバグ(Curculionoidea)、Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
一部の実施形態では、本発明は、昆虫から植物を保護する方法を提供し、1つ以上のCRIP又はそれをコードするポリヌクレオチドと、1つ以上のペプチド-IAと、を発現する植物を提供することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、昆虫から植物を保護する方法を提供し、1つ以上のCRIP又はそれをコードするポリヌクレオチドを発現する植物を提供することと、当該植物に1つ以上の非ペプチド-IAを適用することと、を含む。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の、(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載される1つ以上の殺虫剤(IA)と、(3)1つ以上の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、当該組成物が、害虫の部位に、又は害虫による攻撃を受けやすい植物若しくは動物に適用される。
本明細書に記載の組成物のいずれかは、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法において使用することができ、農薬有効量の(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載される1つ以上の殺虫剤(IA)と、(3)1つ以上の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含む。
例えば、一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、CRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載される1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含む組成物を適用することを含み、CRIPが、表A(すなわち、A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20、A21、A22、A23、A24、A25、A26、A27、A28、A29、A30、A31、A32、A33、A34、A35、A36、A37、A38、A39、A40、A41、A42、A43、A44、A45、A46、A47、A48、A49、A50、A51、A52、A53、A54、A55、A56、A57、A58、A59、A60、A61、A62、A63、A64、A65、A66、A67、又はA68)から選択され、当該CRIPが、それぞれ、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、49、50、51、52、53、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、66、88、588、44、45、46、47、60、61、62、63、64、594、又は65に示されるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一である。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、CRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載される1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含む組成物を適用することを含み、CRIPペプチドが、配列番号192~370のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するクモペプチド、配列番号60~64、192~370、及び594のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するACTXペプチド(例えば、U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、κ-ACTX-Hv1a、κ+2-ACTX-Hv1a、ω-ACTX-Hv1a、及び/若しくはω+2-ACTX-Hv1a)、配列番号65のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a、配列番号1に示されるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチド、配列番号2~15、49~53、2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、若しくは653~654のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)、配列番号66、88~191のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するサソリペプチド、配列番号371~411のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するイソギンチャクペプチド、配列番号44に示されるアミノ酸配列を有するAnemonia viridis由来のAv3ポリペプチド、配列番号45~47のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有するAv3バリアントポリペプチド(AVP)、又はコノトキシンと、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を有するペプチドを含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、又はそれらからなり得、IAが、表Bに列挙されるIAであり、IAが、B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9、B10、B11、B12、B13、B14、B15、B16、B17、B18、B19、B20、B21、B22、B23、B24、B25、B26、B27、B28、B29、B30、B31、B32、B33、B34、B35、B36、B37、B38、B39、B40、B41、B42、B43、B44、B45、B46、B47、B48、B49、B50、B51、B52、B53、B54、B55、B56、B57、B58、B59、B60、B61、B62、B63、B64、B65、B66、B67、B68、B69、B70、B71、B72、B73、B74、B75、B76、B77、B78、B79、B80、B81、B82、B83、B84、B85、B86、B87、B88、B89、B90、B91、B92、B93、B94、B95、B96、B97、B98、B99、B100、B101、B102、B103、B104、B105、B106、B107、B108、B109、B110、B111、B112、B113、B114、B115、B116、B117、B118、B119、B120、B121、B122、B123、B124、B125、B126、B127、B128、B129、B130、B131、B132、B133、B134、B135、B136、B137、B138、B139、B140、B141、B142、B143、B144、B145、B146、B147、B148、B149、B150、B151、B152、B153、B154、B155、B156、B157、B158、B159、B160、B161、B162、B163、B164、B165、B166、B167、B168、B169、B170、B171、B172、B173、B174、B175、B176、B177、B178、B179、B180、B181、B182、B183、B184、B185、B186、B187、B188、B189、B190、B191、B192、B193、B194、B195、B196、B197、B198、B199、B200、B201、B202、B203、B204、B205、B206、B207、B208、B209、B210、B211、B212、B213、B214、B215、B216、B217、B218、B219、B220、B221、B222、B223、B224、B225、B226、B227、B228、B229、B230、B231、B232、B233、B234、B235、B236、B237、B238、B239、B240、B241、B242、B243、B244、B245、B246、B247、B248、B249、B250、B251、B252、B253、B254、B255、B256、B257、B258、B259、B260、B261、B262、B263、B264、B265、B266、B267、B268、B269、B270、B271、B272、B273、B274、B275、B276、B277、B278、B279、B280、B281、B282、B283、B284、B285、B286、B287、B288、B289、B290、B291、B292、B293、B294、B295、B296、B297、B298、B299、B300、B301、B302、B303、B304、B305、B306、B307、B308、B309、B310、B311、B312、B313、B314、B315、B316、B317、B318、B319、B320、B321、B322、B323、B324、B325、B326、B327、B328、B329、B330、B331、B332、B333、B334、B335、B336、B337、B338、B339、B340、B341、B342、B343、B344、B345、B346、B347、B348、B349、B350、B351、B352、B353、B354、B355、B356、B357、B358、B359、B360、B361、B362、B363、B364、B365、B366、B367、B368、B369、B370、B371、B372、B373、B374、B375、B376、B377、B378、B379、B380、B381、B382、B383、B384、B385、B386、B387、B388、B389、B390、B391、B392、B393、B394、B395、B396、B397、B398、B399、B400、B401、B402、B403、B404、B405、B406、B407、B408、B409、B410、B411、B412、B413、B414、B415、B416、B417、B418、B419、B420、B421、B422、B423、B424、B425、B426、B427、B428、B429、B430、B431、B432、B433、B434、B435、B436、B437、B438、B439、B440、B441、B442、B443、B444、B445、B446、B447、B448、B449、B450、B451、B452、B453、B454、B455、B456、B457、B458、B459、B460、B461、B462、B463、B464、B465、B466、B467、B468、B469、B470、B471、B472、B473、B474、B475、B476、B477、B478、B479、又はその組み合わせである。
TVP組成物(式I)の使用方法
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)1つ以上の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)1つ以上の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、1つ以上の賦形剤が、トレハロース、マルトデキストリン、無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)、リン酸カリウム一塩基性(KHPO)、BIT、及び発酵固形物からなる群から選択される。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)1つ以上の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、組成物の総重量に対して、TVP又はTVP-殺虫タンパク質が、約2%~約16% wt/wtの範囲であり、トレハロースが、約5%~約40% wt/wtの範囲であり、BITが、約0.01%~約0.1% wt/wtの範囲であり、マルトデキストリンが、約10%~約50% wt/wtの範囲であり、無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)が、約1%~約5% wt/wtの範囲であり、リン酸カリウム一塩基性(KHPO)が、約0.10%~約1% wt/wtの範囲であり、発酵固形物が、約15%~約40% wt/wtの範囲である。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)1つ以上の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、組成物の総重量に対して、TVP又はTVP-殺虫タンパク質が、約7%~約9% wt/wtの範囲であり、トレハロースが、約20%~約30% wt/wtの範囲であり、BITが、約0.025%~約0.075% wt/wtの範囲であり、マルトデキストリンが、約30%~約40% wt/wtの範囲であり、無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)が、約2%~約3% wt/wtの範囲であり、リン酸カリウム一塩基性(KHPO)が、約0.2%~約0.6%の範囲であり、発酵固形物が、約20%~約30%の範囲である。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)1つ以上の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、組成物の総重量に対して、TVP又はTVP-殺虫タンパク質が、約8.5% wt/wtであり、トレハロースが、約25% wt/wtであり、BITが、約0.05% wt/wtであり、マルトデキストリンが、約36.3% wt/wtであり、無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)が、約2.6% wt/wtであり、リン酸カリウム一塩基性(KHPO)が、約0.4% wt/wtであり、発酵固形物が、約26.85% wt/wtである。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、1つ以上の賦形剤と、から本質的になる組成物を適用することを含み、組成物が、以下から本質的になる:組成物の総重量の、8.5% wt/wtである量のTVP又はTVP-殺虫タンパク質、25% wt/wtである量のトレハロース、0.05% wt/wtである量のBIT、36.3% wt/wtである量のマルトデキストリン、2.6% wt/wtである量の無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)、0.4% wt/wtである量のリン酸カリウム一塩基性(KHPO)、及び26.85% wt/wtである量の発酵固形物。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の、殺虫剤(IA)と、CRIPと、の組み合わせを含む組成物を適用することを含み、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質であり、組成物が、以下の量を有する:組成物の総重量に対して、TVP又はTVP-殺虫タンパク質の量が、8.5% wt/wtであり、トレハロースの量が、25% wt/wtであり、BITの量が、0.05% wt/wtであり、マルトデキストリンの量が、36.3% wt/wtであり、無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)の量が、2.6% wt/wtであり、リン酸カリウム一塩基性(KHPO)の量が、0.4% wt/wtであり、発酵固形物の量が、26.85% wt/wtである。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質が、式(I):E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T、又はSであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E、又はRであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在である)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列、又はその薬学的に許容される塩を含み、組成物が、組成物の総重量の8.5% wt/wtである量のTVPからなり、複数の賦形剤が、以下からなる:組成物の総重量の、25% wt/wtである量のトレハロース、0.05% wt/wtである量のBIT、36.3% wt/wtである量のマルトデキストリン、2.6% wt/wtである量の無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)、0.4% wt/wtである量のリン酸カリウム一塩基性(KHPO)、及び26.85% wt/wtである量の発酵固形物。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、TVPが、X、X、X、X、若しくはXに1つのアミノ酸置換、又はその薬学的に許容される塩を有する。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、TVPが、X、X、X、X、又はXに1つのアミノ酸置換を有し、Xが、グリシンであり、又はその薬学的に許容される塩である。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、TVPが、X、X、X、X、又はXに1つのアミノ酸置換を有し、Xが、不在であり、又はその薬学的に許容される塩である。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、TVPが、X、X、X、X、又はXに1つのアミノ酸置換を有し、X及びXが、不在であり、又はその薬学的に許容される塩である。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用すること含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、TVPが、配列番号2~15、49~53、2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、又は653~654のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、TVPが、配列番号17~30、54~58、又は655~688のうちのいずれか1つに示されるポリヌクレオチド配列若しくはその相補ポリヌクレオチド配列によってコードされる。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、TVPが、2つ以上のTVPのホモポリマー又はヘテロポリマーを更に含み、各TVPのアミノ酸配列が、同じ又は異なる。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、TVPが、TVPが、切断可能又は切断不能リンカーによって分離された2つ以上のTVPを含む融合タンパク質であり、各VPのアミノ酸配列が、同じか又は異なり得る。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、リンカーが、切断可能なリンカーである。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、切断可能なリンカーが、昆虫の腸又は血リンパ内で切断可能である。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質が、式(I):E-P-D-E-I-C-R-X-X-M-X-N-K-E-F-T-Y-X-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-X-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-X-X(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、A、S、又はNであり、Xが、R、Q、N、A、G、N、L、D、V、M、I、C、E、T、又はSであり、Xが、T又はPであり、Xが、K又はAであり、Xが、R又はAであり、Zが、T、S、A、F、P、Y、K、W、H、A、G、N、L、V、M、I、Q、C、E、又はRであり、Xが、K又は不在であり、Xが、G又は不在である)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列、又はその薬学的に許容される塩を含み、組成物が、組成物の総重量の8.5% wt/wtである量のTVPからなり、複数の賦形剤が、以下の:組成物の総重量の、25% wt/wtである量のトレハロース、0.05% wt/wtである量のBIT、36.3% wt/wtである量のマルトデキストリン、2.6% wt/wtである量の無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)、0.4% wt/wtである量のリン酸カリウム一塩基性(KHPO)、及び26.85% wt/wtである量の発酵固形物、からなり、ZがT又はSである場合、TVPがグリコシル化される。
前述のTVP、TVP-殺虫タンパク質、又はその薬学的に許容される塩のいずれも、本明細書及び以下に記載の製剤のいずれかで使用することができ、例えば、前述のTVP、TVP-殺虫タンパク質、又はその薬学的に許容される塩のいずれかは、製剤(水和剤若しくは顆粒製剤、又は液体濃縮物製剤)に使用することができる。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、害虫の部位に、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP又はTVP-殺虫タンパク質である、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、害虫が、以下からなる群から選択される:アヒマスフィンクスモス(ホーンワーム)(Eumorpha achemon)、アルファルファキャタピラー(Colias eurytheme)、アーモンドモス(Caudra cautella)、アモルビアモス(Amorbia humerosana)、アーミーワーム(Spodoptera spp.(例えば、exigua、frugiperda、littoralis)、Pseudaletia unipuncta)、アーティチョークプルームモス(Platyptilia carduidactyla)、アゼリアキャタピラー(Datana major)、バッグワーム(Thyridopteryx)、ephemeraeformis)、バナナモス(Hypercompe scribonia)、バナナスキッパー(Erionota thrax)、ブラックヘディッドバドワーム(Acleris gloverana)、カルフォルニアオークワーム(Phryganidia californica)、スプリングキャンカーワーム(Paleacrita merriccata)、チェリーフルーツワーム(Grapholita packardi)、チャイナマークモス(Nymphula stagnata)、シトラスカットワーム(Xylomyges curialis)、コドリングモス(Cydia pomonella)、クランベリーフルーツワーム(Acrobasis vaccinii)、クロスストライプドキャベッジワーム(Evergestis rimosalis)、カットワーム(Noctuid種、Agrotis ipsilon)、ダグラスファータソックモス(Orgyia pseudotsugata)、エルロモス(ホーンワーム)(Erinnyis ello)、エルムスパンワーム(Ennomos subsignaria)、ヨーロピアングレープヴァインモス(Lobesia botrana)、ヨーロピアンスキッパー(Thymelicus lineola(エセックススキッパー)、フォールウェブワーム(Melissopus latiferreanus、フィルバートリーフローラー(Archips rosanus、フルーツツリーリーフローラー(Archips argyrospilia、グレープベリーモス(Paralobesia viteana、グレープリーフローラー(Platynota stultana、グレープリーフスケルトナイザー(Harrisina americana(グラウンドオンリー)、グリーンクローバーワーム(Plathypena scabra、グリーンストライプドメープルワーム(Dryocampa rubicunda、Gummosos-Batrachedra、Comosae(ホッジズ)、ジプシーモス(Lymantria dispar)、ヘムロックルーパー(Lambdina fiscellaria)、ホーンワーム(Manduca spp.)、インポーテッドキャベッジワーム(Pieris rapae)、アイオモス(Automeris io)、ジャックパインバドワーム(Choristoneura pinus)、ライトブラウンアップルモス(Epiphyas postvittana)、メロンワーム(Diaphania hyalinata)、ミモザウェブワーム(Homadaula anisocentra)、オブリークバンディッドリーフローラー(Choristoneura rosaceana)、オリアンダーモス(Syntomeida epilais)、オムニバラスリーフローラー(Playnota stultana)、オムニバラスルーパー(Sabulodes aegrotata)、オレンジドッグ(Papilio cresphontes)、オレンジトートリクス(Argyrotaenia citrana)、オリエンタルフルーツモス(Grapholita molesta)、ピーチツイグボーア(Anarsia lineatella)、パインバタフライ(Neophasia menapia)、ポッドワーム(Heliocoverpa zea)、レッドバンディッドリーフローラー(Argyrotaenia velutinana)、レッドハンプトキャタピラー(Schizura concinna)、リンドワームコンプレックス(Various Leps.)、サドルバックキャタピラー(Sibine stimulea )、サドルプロミネントキャタピラー(Heterocampa guttivitta)、ソルトマーシュキャタピラー(Estigmene acrea)、ソッドベッドワーム(Crambus spp.)、スパンワーム(Ennomos subsignaria )、フォールキャンカーワーム(Alsophila pometaria)、スプルースバドワーム(Choristoneura fumiferana)、テントキャタピラー(Various Lasiocampidae )、Thecla-Thecla Basilides(Geyr)Thecla basilides)、タバコホーンワーム(Manduca sexta)、タバコモス(Ephestia elutella)、タフテッドアップルバドモス(Platynota idaeusalis)、トゥイグボーア(Anarsia lineatella)、ベアリアゲイティドカットワーム(Peridroma saucia)、ベアリアゲイティドリーフローラー(Platynota flavedana)、ベルベットビーンキャタピラー(Anticarsia gemmatalis)、ウォルナットキャタピラー(Datana integerrima)、ウェブワーム(Hyphantria cunea)、ウエスタンタソックモス(Orgyia vetusta)、サザンコーンストークボーア(Diatraea crambidoides)、コーンイアワーム、スイートポテトウィービル、ペッパーウィービル、シトラスルートウィービル、ストロベリーウィービル、ピーカンウィービル、フィルバートウィービル、ライスウォーターウィービル、アルファルファウィービル、クローバーウィービル、ティーショット-ホールボーア、ルートウィービル、シュガーケインビートル、コーヒーベリーボーア、アニュアルブルーグラスウィービル(Listronotus maculicollis)、アジアティックガーデンビートル(Maladera castanea)、ヨーロピアンチェ―ファー(Rhizotroqus majalis)、グリーンジューンビートル(Cotinis nitida)、ジャパニーズビートル(Popillia japonica)、メイオアジューンビートル(Phyllophaga sp.)、ノーザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala borealis)、オリエンタルビートル(Anomala orientalis)、サザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala lurida)、ビルバグ(Curculionoidea)、Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
TVP組成物(式II)の使用方法
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP又はTVP-殺虫タンパク質である、組み合わせと、(2)賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVPが、本明細書に記載のTVP(例えば、殺虫U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)のうちの1つ又は任意の組み合わせから選択され、当該TVPが、式(II):E-P-D-E-I-C-R-A-X-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-K-G(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、R又はQであり、Zが、T又はAである)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含み、組成物が、害虫の部位に、又は害虫による攻撃を受けやすい植物若しくは動物に適用される。
本明細書に記載の組成物のいずれも、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法の本方法で使用することができ、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP又はTVP-殺虫タンパク質である、組み合わせと、(2)賦形剤と、を含む組成物を適用することを含む。
例えば、一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVPである、組み合わせと、1つ以上の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、CRIPが、TVPであり、TVPが、式(II):E-P-D-E-I-C-R-A-X-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-K-G(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、R又はQであり、Zが、T又はAである)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列、又はその薬学的に許容される塩を含み、1つ以上の賦形剤が、トレハロース、マルトデキストリン、マルトース、リン酸カリウム二塩基性(KHPO)、リン酸カリウム一塩基性(KHPO)、リグノスルホン酸塩、石膏、ソルビトール、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸カリウム、EDTA、ベンゾイソチアゾリノン(BIT)、及び発酵固形物からなる群から選択される。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量のTVPを含む組成物(式中、Zが、Tであり、TVPが、グリコシル化されている)、又はその薬学的に許容される塩を適用することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量のTVPからなる組成物(式中、Xが、Qであり、Zが、Aである)、又はその薬学的に許容される塩を適用することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVPである、組み合わせを含む組成物を適用することを含み、TVPが、配列番号2、49、又は51のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列のうちのいずれかと、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVPである、組み合わせを含む組成物を適用することを含み、TVPが、配列番号17、54、又は56のうちのいずれか1つに示されるポリヌクレオチド配列若しくはその相補ヌクレオチド配列によってコードされる。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVPである、組み合わせを含む組成物を適用することを含み、TVPが、2つ以上のTVPのホモポリマー又はヘテロポリマーを更に含み、各TVPのアミノ酸配列が、同じ又は異なる。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVPである、組み合わせを含む組成物を適用することを含み、TVPが、切断可能リンカー又は切断不能なリンカーによって分離された2つ以上のTVPを含む融合タンパク質であり、各TVPのアミノ酸配列が、同じ又は異なる。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、リンカーを有するTVPであり、リンカーが、切断可能なリンカーである、組み合わせを含む組成物を適用することを含む。
一部の実施形態では、本発明の組成物は、切断可能なリンカーを有するTVPを含み、切断可能なリンカーが、昆虫の腸又は血リンパ内で切断可能である。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、リンカーを有するTVPである、組み合わせを含む組成物を適用することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVPである、組み合わせと、1つ以上の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、CRIPが、TVPであり、TVPが、式(II):E-P-D-E-I-C-R-A-X-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-K-G(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、R又はQであり、Zが、T又はAである)によるアミノ酸配列と、少なくとも50%同一、少なくとも55%同一、少なくとも60%同一、少なくとも65%同一、少なくとも70%同一、少なくとも75%同一、少なくとも80%同一、少なくとも81%同一、少なくとも82%同一、少なくとも83%同一、少なくとも84%同一、少なくとも85%同一、少なくとも86%同一、少なくとも87%同一、少なくとも88%同一、少なくとも89%同一、少なくとも90%同一、少なくとも91%同一、少なくとも92%同一、少なくとも93%同一、少なくとも94%同一、少なくとも95%同一、少なくとも96%同一、少なくとも97%同一、少なくとも98%同一、少なくとも99%同一、少なくとも99.5%同一、少なくとも99.6%同一、少なくとも99.7%同一、少なくとも99.8%同一、少なくとも99.9%同一、又は100%同一であるアミノ酸配列、又はその薬学的に許容される塩を含み、1つ以上の賦形剤が、トレハロース、マルトデキストリン、マルトース、リン酸カリウム二塩基性(KHPO)、リン酸カリウム一塩基性(KHPO)、リグノスルホン酸塩、石膏、ソルビトール、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸カリウム、EDTA、ベンゾイソチアゾリノン(BIT)、及び発酵固形物からなる群から選択され、ZがT又はSである場合、TVPが、グリコシル化されている。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)1つ以上の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)1つ以上の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、1つ以上の賦形剤が、トレハロース、マルトデキストリン、無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)、リン酸カリウム一塩基性(KHPO)、BIT、及び発酵固形物からなる群から選択される。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びyCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)1つ以上の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、組成物の総重量に対して、TVP又はTVP-殺虫タンパク質が、約2%~約16% wt/wtの範囲であり、トレハロースが、約5%~約40% wt/wtの範囲であり、BITが、約0.01%~約0.1% wt/wtの範囲であり、マルトデキストリンが、約10%~約50% wt/wtの範囲であり、無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)が、約1%~約5% wt/wtの範囲であり、リン酸カリウム一塩基性(KHPO)が、約0.10%~約1% wt/wtの範囲であり、発酵固形物が、約15%~約40% wt/wtの範囲である。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)1つ以上の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、組成物の総重量に対して、TVP又はTVP-殺虫タンパク質が、約7%~約9% wt/wtの範囲であり、トレハロースが、約20%~約30% wt/wtの範囲であり、BITが、約0.025%~約0.075% wt/wtの範囲であり、マルトデキストリンが、約30%~約40% wt/wtの範囲であり、無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)が、約2%~約3% wt/wtの範囲であり、リン酸カリウム一塩基性(KHPO)が、約0.2%~約0.6%の範囲であり、発酵固形物が、約20%~約30%の範囲である。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)1つ以上の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、組成物の総重量に対して、TVP又はTVP-殺虫タンパク質が、約8.5% wt/wtであり、トレハロースが、約25% wt/wtであり、BITが、約0.05% wt/wtであり、マルトデキストリンが、約36.3% wt/wtであり、無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)が、約2.6% wt/wtであり、リン酸カリウム一塩基性(KHPO)が、約0.4% wt/wtであり、発酵固形物が、約26.85% wt/wtである。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせを含む組成物を適用することを含み、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVPであり、組成物が、以下の量を有する:組成物の総重量の、8.5% wt/wtである量のTVP又はTVP-殺虫タンパク質、25% wt/wtである量のトレハロース、0.05% wt/wtである量のBIT、36.3% wt/wtである量のマルトデキストリン、2.6% wt/wtである量の無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)、0.4% wt/wtである量のリン酸カリウム一塩基性(KHPO)、26.85% wt/wtである量の発酵固形物。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせを含む組成物を適用することを含み、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVPであり、組成物が、以下の量を有する:組成物の総重量の、8.5% wt/wtである量のTVP又はTVP-殺虫タンパク質、25% wt/wtである量のトレハロース、0.05% wt/wtである量のBIT、36.3% wt/wtである量のマルトデキストリン、2.6% wt/wtである量の無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)、0.4% wt/wtである量のリン酸カリウム一塩基性(KHPO)、26.85% wt/wtである量の発酵固形物。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質が、式(II):E-P-D-E-I-C-R-A-X-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-K-G(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、R又はQであり、Zが、T又はAである)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列、又はその薬学的に許容される塩を含み、組成物が、組成物の総重量の8.5% wt/wtである量のTVPからなり、複数の賦形剤が、以下からなる:組成物の総重量の、25% wt/wtである量のトレハロース、0.05% wt/wtである量のBIT、36.3% wt/wtである量のマルトデキストリン、2.6% wt/wtである量の無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)、0.4% wt/wtである量のリン酸カリウム一塩基性(KHPO)、及び26.85% wt/wtである量の発酵固形物。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、Zが、Tであり、TVPが、グリコシル化されているか、又はその薬学的に許容される塩である。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、Xが、Qであり、Zが、A、又はその薬学的に許容される塩である。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用すること含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、TVPが、配列番号2、49、又は51のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用すること含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、TVPが、配列番号17、54、又は56のうちのいずれか1つに示されるポリヌクレオチド配列、又はその相補ヌクレオチド配列によってコードされる。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、TVPが、2つ以上のTVPのホモポリマー又はヘテロポリマーを更に含み、各TVPのアミノ酸配列が、同じ又は異なる。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、TVPが、TVPが、切断可能又は切断不能リンカーによって分離された2つ以上のTVPを含む融合タンパク質であり、各TVPのアミノ酸配列が、同じか又は異なり得る。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、リンカーが、切断可能なリンカーである。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質、切断可能なリンカーが、昆虫の腸又は血リンパ内で切断可能である。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、農薬有効量の(1)殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、TVP、TVP-殺虫タンパク質、又はそれらの組み合わせである、組み合わせと、(2)複数の賦形剤と、を含む組成物を適用することを含み、TVP又はTVP-殺虫タンパク質が、式(II):E-P-D-E-I-C-R-A-X-M-T-N-K-E-F-T-Y-K-S-N-V-C-N-N-C-G-D-Q-V-A-A-C-E-A-E-C-F-R-N-D-V-Y-Z-A-C-H-E-A-Q-K-G(式中、ポリペプチドが、配列番号1に示されるU1-アガトキシン-Ta1bの野生型配列と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、Xが、R又はQであり、Z1が、T又はAである)によるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列、又はその薬学的に許容される塩を含み、組成物が、組成物の総重量の8.5% wt/wtである量のTVPからなり、複数の賦形剤が、以下の:組成物の総重量の、25% wt/wtである量のトレハロース、0.05% wt/wtである量のBIT、36.3% wt/wtである量のマルトデキストリン、2.6% wt/wtである量の無水リン酸カリウム二塩基性(KHPO)、0.4% wt/wtである量のリン酸カリウム一塩基性(KHPO)、及び26.85% wt/wtである量の発酵固形物からなり、ZがT又はSである場合、TVPが、グリコシル化されている。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、害虫の部位に、農薬有効量の殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)である、組み合わせを含む組み合わせを適用することを含み、TVPが、配列番号2、49、又は51のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列、又はその薬学的に許容される塩を含む。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、害虫の部位に、農薬有効量の殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)である、組み合わせを含む組み合わせを適用することを含み、当該TVPが、配列番号2、49、又は51のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列、又はその薬学的に許容される塩を含む。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、害虫の部位に、農薬有効量の殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)である、組み合わせを含む組み合わせを適用することを含み、当該TVPが、配列番号2、49、又は51のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列、又はその薬学的に許容される塩からなる。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、害虫の部位に、農薬有効量の殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)である、組み合わせを含む組成物を適用することを含み、TVPが、配列番号51に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列、又はその薬学的に許容される塩を含む。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、害虫の部位に、農薬有効量の殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)である、組み合わせを含む組成物を適用することを含み、当該TVPが、配列番号51に示されるアミノ酸配列、又はその薬学的に許容される塩を含む。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、害虫の部位に、農薬有効量の殺虫剤(IA)及びCRIPの組み合わせであって、IAが、表Bに示されるIA(すなわち、B1~B479のうちのいずれか1つ以上)であり、CRIPが、殺虫性U-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)である、組み合わせを含む組み合わせを適用することを含み、当該TVPが、配列番号51に示されるアミノ酸配列、又はその薬学的に許容される塩からなる。
(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載の1つ以上の殺虫剤(IA)とを含む前述の組み合わせのいずれかは、本明細書に記載の組成物のいずれか、及びそれらを使用する方法、すなわち、害虫を駆除、制御、又は阻害するため、及び/又は害虫の部位に適用するために使用することができ、害虫が、以下からなる群から選択される:アヒマスフィンクスモス(ホーンワーム)(Eumorpha achemon)、アルファルファキャタピラー(Colias eurytheme)、アーモンドモス(Caudra cautella)、アモルビアモス(Amorbia humerosana)、アーミーワーム(Spodoptera spp.(例えば、exigua、frugiperda、littoralis)、Pseudaletia unipuncta)、アーティチョークプルームモス(Platyptilia carduidactyla)、アゼリアキャタピラー(Datana major)、バッグワーム(Thyridopteryx)、ephemeraeformis)、バナナモス(Hypercompe scribonia)、バナナスキッパー(Erionota thrax)、ブラックヘディッドバドワーム(Acleris gloverana)、カルフォルニアオークワーム(Phryganidia californica)、スプリングキャンカーワーム(Paleacrita merriccata)、チェリーフルーツワーム(Grapholita packardi)、チャイナマークモス(Nymphula stagnata)、シトラスカットワーム(Xylomyges curialis)、コドリングモス(Cydia pomonella)、クランベリーフルーツワーム(Acrobasis vaccinii)、クロスストライプドキャベッジワーム(Evergestis rimosalis)、カットワーム(Noctuid種、Agrotis ipsilon)、ダグラスファータソックモス(Orgyia pseudotsugata)、エルロモス(ホーンワーム)(Erinnyis ello)、エルムスパンワーム(Ennomos subsignaria)、ヨーロピアングレープヴァインモス(Lobesia botrana)、ヨーロピアンスキッパー(Thymelicus lineola(エセックススキッパー)、フォールウェブワーム(Melissopus latiferreanus、フィルバートリーフローラー(Archips rosanus、フルーツツリーリーフローラー(Archips argyrospilia、グレープベリーモス(Paralobesia viteana、グレープリーフローラー(Platynota stultana、グレープリーフスケルトナイザー(Harrisina americana(グラウンドオンリー)、グリーンクローバーワーム(Plathypena scabra、グリーンストライプドメープルワーム(Dryocampa rubicunda、Gummosos-Batrachedra、Comosae(ホッジズ)、ジプシーモス(Lymantria dispar)、ヘムロックルーパー(Lambdina fiscellaria)、ホーンワーム(Manduca spp.)、インポーテッドキャベッジワーム(Pieris rapae)、アイオモス(Automeris io)、ジャックパインバドワーム(Choristoneura pinus)、ライトブラウンアップルモス(Epiphyas postvittana)、メロンワーム(Diaphania hyalinata)、ミモザウェブワーム(Homadaula anisocentra)、オブリークバンディッドリーフローラー(Choristoneura rosaceana)、オリアンダーモス(Syntomeida epilais)、オムニバラスリーフローラー(Playnota stultana)、オムニバラスルーパー(Sabulodes aegrotata)、オレンジドッグ(Papilio cresphontes)、オレンジトートリクス(Argyrotaenia citrana)、オリエンタルフルーツモス(Grapholita molesta)、ピーチツイグボーア(Anarsia lineatella)、パインバタフライ(Neophasia menapia)、ポッドワーム(Heliocoverpa zea)、レッドバンディッドリーフローラー(Argyrotaenia velutinana)、レッドハンプトキャタピラー(Schizura concinna)、リンドワームコンプレックス(Various Leps.)、サドルバックキャタピラー(Sibine stimulea )、サドルプロミネントキャタピラー(Heterocampa guttivitta)、ソルトマーシュキャタピラー(Estigmene acrea)、ソッドベッドワーム(Crambus spp.)、スパンワーム(Ennomos subsignaria )、フォールキャンカーワーム(Alsophila pometaria)、スプルースバドワーム(Choristoneura fumiferana)、テントキャタピラー(Various Lasiocampidae )、Thecla-Thecla Basilides(Geyr)Thecla basilides)、タバコホーンワーム(Manduca sexta)、タバコモス(Ephestia elutella)、タフテッドアップルバドモス(Platynota idaeusalis)、トゥイグボーア(Anarsia lineatella)、ベアリアゲイティドカットワーム(Peridroma saucia)、ベアリアゲイティドリーフローラー(Platynota flavedana)、ベルベットビーンキャタピラー(Anticarsia gemmatalis)、ウォルナットキャタピラー(Datana integerrima)、ウェブワーム(Hyphantria cunea)、ウエスタンタソックモス(Orgyia vetusta)、サザンコーンストークボーア(Diatraea crambidoides)、コーンイアワーム、スイートポテトウィービル、ペッパーウィービル、シトラスルートウィービル、ストロベリーウィービル、ピーカンウィービル、フィルバートウィービル、ライスウォーターウィービル、アルファルファウィービル、クローバーウィービル、ティーショット-ホールボーア、ルートウィービル、シュガーケインビートル、コーヒーベリーボーア、アニュアルブルーグラスウィービル(Listronotus maculicollis)、アジアティックガーデンビートル(Maladera castanea)、ヨーロピアンチェ―ファー(Rhizotroqus majalis)、グリーンジューンビートル(Cotinis nitida)、ジャパニーズビートル(Popillia japonica)、メイオアジューンビートル(Phyllophaga sp.)、ノーザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala borealis)、オリエンタルビートル(Anomala orientalis)、サザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala lurida)、ビルバグ(Curculionoidea)、Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
農作物及び害虫
これらの方法によって制御され得る特定の作物害虫及び昆虫には、以下が含まれる:Dictyoptera(ゴキブリ)、Isoptera(シロアリ)、Orthoptera(ワタリバッタ、バッタ、コオロギ)、Diptera(イエバエ、カ、ツェツェバエ、ガガンボ、ショウジョウバエ)、Hymenoptera(アリ、スズメバチ、ミツバチ、ハバチ、ヒメバチ、及びタマバチ)、Anoplura(ハジラミ及びシラミ)、Siphonaptera(ノミ)、及びHemiptera(虫及びアブラムシ)、並びにAcari(ダニ及びダニ)などのクモ類、及びこれらの生物の各々が保有する寄生虫。
「害虫」には、昆虫、真菌、細菌、線虫、ダニ、マダニなどが含まれるが、これらに限定されない。
害虫としては、Coleoptera、Diptera、Hymenoptera、Lepidopteran、Mallophaga、Homoptera、Hemiptera、Orthroptera、Thysanoptera、Dermaptera、Isoptera、Anoplura、Siphonaptera、Trichopteraなどの目から選択される昆虫が挙げられるが、これらに限定されない。より具体的には、害虫としては、Coleoptera、Lepidoptera、及びDipteraが挙げられる。
殺虫性ポリペプチドによる処理に好適な農業的、家庭的及び/又は医学的/獣医学的重要性を有する昆虫には、以下のクラス及び命令のメンバーが含まれるが、これらに限定されない。
Coleopteraには、Adephaga及びPolyphagaが含まれる。Adephagaには、Caraboidea及びGyrinoideaのスーパーファミリーが含まれる。Polyphagaには、Hydrophiloidea、Staphylinoidea、Cantharoidea、Cleroidea、Elateroidea、Dascilloidea、Dryopoidea、Byrrhoidea、Cucujoidea、Meloidea、Mordelloidea、Tenebrionoidea、Bostrichoidea、Scarabaeoidea、Cerambycoidea、Chrysomeloidea、及びCurculionoideaのスーパーファミリーが含まれる。Caraboideaスーパーファミリーには、Cicindelidae、Carabidae、及びDytiscidaeが含まれる。Gyrinoideaスーパーファミリーには、Gyrinidaeが含まれる。スーパーファミリーHydrophiloideaには、Hydrophilidaeが含まれる。スーパーファミリーStaphylinoideaには、Silphidae及びStaphylinidaeが含まれる。スーパーファミリーCantharoideaには、Cantharidae及びLampyridaeが含まれる。スーパーファミリーCleroideaには、Cleridae及びDermestidaeが含まれる。スーパーファミリーElateroideaには、Elateridae及びBuprestidaeが含まれる。スーパーファミリーCucujoideaには、Coccinellidaeが含まれる。スーパーファミリーMeloideaには、Meloidaeが含まれる。スーパーファミリーTenebrionoideaには、Tenebrionidaeが含まれる。スーパーファミリーScarabaeoideaには、Passalidae及びScarabaeidaeが含まれる。スーパーファミリーCerambycoideaには、Cerambycidaeが含まれる。スーパーファミリーChrysomeloideaには、Chrysomelidaeが含まれる。スーパーファミリーCurculionoideaには、Curculionidae及びScolytidaeが含まれる。
Coleopteraの例としては、アメリカンビーンウィービル(American bean weevil)Acanthoscelides obtectus、リーフビートル(leaf beetle)Agelastica alni、クリックビートル(click beetle)(Agriotes lineatus、Agriotes obscurus、Agriotes bicolor)、グレインビートル(grain beetle)Ahasverus advena、サマーシェーファー(summer schafer)Amphimallon solstitialis、ファーニチャービートル(furniture beetle)Anobium punctatum、Anthonomus spp.(ウィービル(weevil))、ピグミーマンゴールドビートル(Pygmy mangold beetle)Atomaria linearis、カーペットビートル(carpet beetle)(Anthrenus spp、Attagenus spp)、カウピーウィービル(cowpea weevil)Callosobruchus maculates、フライドフルーツビートル(fried fruit beetle)Carpophilus hemipterus、キャベッジシードポッドウィービル(cabbage seedpod weevil)Ceutorhynchus assimilis、レイプウィンターステムウィービル(rape winter stem weevil)Ceutorhynchus picitarsis、ワイアワーム(wireworm)Conoderus vespertinus及びConoderus falli、バナナウィービル(banana weevil)Cosmopolites sordidus、ニュージーランドグラスグラブ(New Zealand grass grub)Costelytra zealandica、ジューンビートル(June beetle)Cotinis nitida、サンフラワーステムウィービル(sunflower stem weevil)Cylindrocopturus adspersus、ラーダービートル(larder beetle)Dermestes lardarius、コーンルートワーム(corn rootworm)Diabrotica virgifera、Diabrotica virgifera virgifera、及びDiabrotica barberi、メキシカンビーンビートル(Mexican bean beetle)Epilachna varivestis、オールドハウスボーア(old house borer)Hylotropes bajulus、ルーサンウィービル(lucerne weevil)Hypera postica、シャイニースパイダービートル(shiny spider beetle)Gibbium psylloides、シガレットビートル(cigarette beetle)Lasioderma serricorne、コロラドポテトビートル(Colorado potato beetle)Leptinotarsa decemlineata、リクタスビートル(Lyctus beetle)(Lyctus spp)、ポレンビートル(pollen beetle)Meligethes aeneus、コモンコックスシェーファー(common cockshafer)Melolontha melolontha、アメリカンスパイダービートル(American spider beetle)Mezium americanum、ゴールデンスパイダービートル(golden spider beetle)Niptus hololeucus、グレインビートル(grain beetle)Oryzaephilus surinamensis及びOryzaephilus mercator、ブラックヴァインウィービル(black vine weevil)Otiorhynchus sulcatus、マスタードビートル(mustard beetle)Phaedon cochleariae、クルーシファーフリービートル(crucifer flea beetle)Phyllotreta cruciferae、ストライプドフリービートル(striped flea beetle)Phyllotreta striolata、キャベッジステムフリービートル(cabbage steam flea beetle)Psylliodes chrysocephala、Ptinus spp(スパイダービートル(spider beetle))、レッサーグレインボーア(lesser grain borer)Rhizopertha dominica、ピーウィービル及びビーンウィービル(pea and been weevil)Sitona lineatus、ライスビートル及びグラナリービートル(rice and granary beetle)Sitophilus oryzae及びSitophilus granaries、レッドサンフラワーシードウィービル(red sunflower seed weevil)Smicronyx fulvus、ドラッグストアビートル(drugstore beetle)Stegobium paniceum、イエローミールワームビートル(yellow mealworm beetle)Tenebrio molitor、フラワービートル(flour beetle)Tribolium castaneum及びTribolium confusum、ウェアハウスビートル及びキャビネットビートル(warehouse and cabinet beetle)(Trogoderma spp)、及びサンフラワービートル(sunflower beetle)Zygogramma exclamationisが挙げられるが、これらに限定されない。
Dermaptera(イアーウィグ)の例としては、ヨーロピアンイアーウィッグ(European earwig)Forficula auricularia、及びストライプドイアウィッグ(European earwig)Labidura ripariaが挙げられが、これらに限定されない。
Dictvonteraの例としては、オリエンタルコックローチ(oriental cockroach)Blatta orientalis、ジャーマンコックローチ(German cockroach)Blatella germanica、マデイラコックローチ(Madeira cockroach)Leucophaea maderae、アメリカンコックローチ(American cockroach)Periplaneta americana、及びスモーキーブラウンコックローチ(smokybrown cockroach)Periplaneta fuliginosaが挙げられるが、これらに限定されない。
Diplonodaの例としては、スポッテッドスネークミリピード(spotted snake millipede)Blaniulus guttulatus、フラットバックミリピード(flat-back millipede)Brachydesmus superus、及びグリーンハウスミリピード(greenhouse millipede)Oxidus gracilisが挙げられるが、これらに限定されない。
Diptera目には、Nematocera、Brachycera、及びCyclorrhapha亜目が含まれる。Nematocera亜目には、Tipulidae、Psychodidae、Culicidae、Ceratopogonidae、Chironomidae、Simuliidae科が含まれる。Brachycera亜目には、Stratiomyidae、Tabanidae、Therevidae、Asilidae、Mydidae、Bombyliidae、及びDolichopodidae科が含まれる。Cyclorrhapha亜目には、Aschiza及びAschiza門が含まれる。Aschiza門には、Phoridae、Syrphidae、及びConopidae科が含まれる。Aschiza門には、Acalyptratae及びCalyptratae節が含まれる。Acalyptratae節には、Otitidae、Tephritidae、Agromyzidae、及びDrosophilidae科が含まれる。Calyptratae節には、Hippoboscidae、Oestridae、Tachinidae、Anthomyiidae、Muscidae、Calliphoridae、及びSarcophagidae科が含まれる。
イエバエ(house fly)(Musca domestica)、アフリカンタンブフライ(African tumbu fly)(Cordylobia anthropophaga)、バイティングミッジ(biting midge)(Culicoides spp.)、ビーラウス(bee louse)(Braula spp.)、ビートフライ(beet fly)Pegomyia betae、ブラックフライ(black fly)(Cnephia spp.、Eusimulium spp.、Simulium spp.)、ボットフライ(bot fly)(Cuterebra spp.、Gastrophilus spp.、Oestrus spp.)、クレーンフライ(cranefly)(Tipula spp.)、アイナット(eye gnat)(Hippelates spp.)、フィルスブリーディングフライ(filth-breeding fly)(Calliphora spp.、Fannia spp.、Hermetia spp.、Lucilia spp.、Musca spp.、Muscina spp.、Phaenicia spp.、Phormia spp.)、フレッシュフライ(flesh fly)(Sarcophaga spp.、Wohlfahrtia spp.)、フリットフライ(flit fly)Oscinella frit、ショウジョウバエ(frit,fruitfly)(Dacus spp.、Drosophila spp.)、ヘッド及びキャノンフライ(head and canon fly)(Hydrotea spp.)、ヘシアンフライ(hessian fly)Mayetiola destructor、ホーン及びバッファローフライ(horn and buffalo fly)(Haematobia spp.)、ホース及びディアフライ(horse and deer fly)(Chrysops spp.、Haematopota spp.、Tabanus spp.)、ラウスフライ(louse fly)(Lipoptena spp.、Lynchia spp.、及びPseudolynchia spp.)、メドフライ(medfly)(Ceratitus spp.)、蚊(Aedes spp.、Anopheles spp.、Culex spp.、Psorophora spp.)、サンドフライ(sandfly)(Phlebotomus spp.、Lutzomyia spp.)、スクリューワームフライ(screw-worm fly)(Chtysomya bezziana及びCochliomyia hominivorax)、シープケッド(sheep ked)(Melophagus spp.)、ステーブルフライ(stable fly)(Stomoxys spp.)、ツェツェバエ(tsetse fly)(Glossina spp.)、及びワーブルフライ(warble fly)(Hypoderma spp.)。
Isontera(シロアリ)の例としては、Hodotennitidae、Kalotermitidae、Mastotermitidae、Rhinotennitidae、Serritermitidae、Termitidae、及びTermopsidae科の種が挙げられるが、これらに限定されない。
Heteropteraの例としては、ベッドバグ(bed bug)Cimex lectularius、コットンステイナー(cotton stainer)Dysdercus intermedius、サンペスト(Sunn pest)Eurygaster integriceps、ターニッシュドプラントバグ(tarnished plant bug)Lygus lineolaris、グリーンスティンクバグ(green stink bug)Nezara antennata、サザングリーンスティンクバグ(southern green stink bug)Nezara viridula、及びトリアトミドバグ(triatomid bug)Panstrogylus megistus、Rhodnius ecuadoriensis、Rhodnius pallescans、Rhodnius prolixus、Rhodnius robustus、Triatoma dimidiata、Triatoma infestans、及びTriatoma sordidaが挙げられるが、これらに限定されない。
Homopteraの例としては、カリフォルニアレッドスケール(California red scale)Aonidiella aurantii、ブラックビーンエイフィド(black bean aphid)Aphis fabae、コットンエイフィド又はメロンエイフィド(cotton or melon aphid)Aphis gossypii、グリーンアップルエイフィド(green apple aphid)Aphis pomi、シトラススパイニーホワイトフライ(citrus spiny whitefly)Aleurocanthus spiniferus、オリアンダースケール(oleander scale)Aspidiotus hederae、スイートポテトホワイトフライ(sweet potato whitefly)Bemesia tabaci、キャベッジエイフィド(cabbage aphid)Brevicoryne brassicae、ペアシラ(pear psylla)Cacopsylla pyricola、カーラントエイフィド(currant aphid)Cryptomyzus ribis、グレープフィロキセラ(grape phylloxera)Daktulosphaira vitifoliae、シトラスシラ(citrus psylla)Diaphorina citri、ポテトリーフホッパー(potato leafhopper)Empoasca fabae、ビーンリーフホッパー(bean leafhopper)Empoasca solana、ヴァインリーフホッパー(vine leafhopper)Empoasca vitis、ウーリーエイフィド(woolly aphid)Eriosoma lanigerum、ヨーロピアンフルーツスケール(European fruit scale)Eulecanium corni、ミーリープラムエイフィド(mealy plum aphid)Hyalopterus arundinis、スモールブラウンプラントホッパー(small brown planthopper)Laodelphax striatellus、ポテトエイフィド(potato aphid)Macrosiphum euphorbiae、グリーンピーエイフィド(green peach aphid)Myzus persicae、グリーンライスリーフホッパー(green rice leafhopper)Nephotettix cinticeps、ブラウンプラントホッパー(brown planthopper)Nilaparvata lugens、ゴールフォーミングエイフィド(gall-forming aphid)(Pemphigus spp.)、ホップエイフィド(hop aphid)Phorodon humuli、バードチェリーエイフィド(bird-cherry aphid)Rhopalosiphum padi、ブラックスケール(black scale)Saissetia oleae、グリーンバグ(greenbug)Schizaphis graminum、グレインエイフィド(grain aphid)Sitobion avenae、及びグリーンハウスホワイトフライ(greenhouse whitefly)Trialeurodes vaporariorumが挙げられるが、これらに限定されない。
Isopodaの例としては、限定されないが、コモンピルバグ(common pillbug)Armadillidium vulgare及びコモンウッドラウス(common woodlouse)Oniscus asellusが挙げられるが、これらに限定されない。
Lepidoptera目には、Papilionidae、Pieridae、Lycaenidae、Nymphalidae、Danaidae、Satyridae、Hesperiidae、Sphingidae、Saturniidae、Geometridae、Arctiidae、Noctuidae、Lymantriidae、Sesiidae、及びTineidae科が含まれる。
Lepidopteraの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:Adoxophyes orana(サマーフルーツトートリクスモス(summer fruit tortrix moth))、Agrotis ipsolon(ブラックカットワーム(black cutworm))、Archips podana(フルーツツリートートリクスモス(fruit tree tortrix moth))、Bucculatrix pyrivorella(ペアリーフマイナー(pear leafminer))、Bucculatrix thurberiella(コットンリーフパーフォレーター(cotton leaf perforator))、Bupalus piniarius(パインルーパー(pine looper))、Carpocapsa pomonella(コドリングモス(codling moth))、Chilo suppressalis(ストライプドライスボーア(striped rice borer))、Choristoneura fumiferana(イースタンスプルースバドワーム(eastern spruce budworm))、Cochylis hospes(バンディッドサンフラワーモス(banded sunflower moth))、Diatraea grandiosella(サウスウエスタンコーンボーア(southwestern corn borer))、Earls insulana(エジプシャンボールワーム(Egyptian bollworm))、Euphestia kuehniella(メディタレイニアンフラワーモス(Mediterranean flour moth))、Eupoecilia ambiguella(ヨーロピアングレープベリーモス(European grape berry moth))、Euproctis chrysorrhoea(ブラウンテイルモス(brown-tail moth))、Euproctis subflava(オリエンタルツソックモス(oriental tussock moth))、Galleria mellonella(グレーターワックスモス(greater wax moth))、Helicoverpa armigera(コットンボールワーム(cotton bollworm))、Helicoverpa zea(コットンボールワーム)、Heliothis virescens(タバコバドワーム(tobacco budworm))、Hofmannophila pseudopretella(ブラウンハウスモス(brown house moth))、Homeosoma electellum(サンフラワーモス(sunflower moth))、Homona magnanima(オリエンタルティーツリートートリクスモス(oriental tea tree tortrix moth))、Lithocolletis blancardella(スポッテッドテンティフォームリーフマイナー(spotted tentiform leafminer))、Lymantria dispar(ジプシーモス(gypsy moth))、Malacosoma neustria(テントキャタピラー(tent caterpillar))、Mamestra brassicae(キャベッジアーミーワーム(cabbage armyworm))、Mamestra configurata(バーサアーミーワーム(Bertha armyworm))、ホーンワーム(hornworm)Manduca sexta及びManuduca quinquemaculata、Operophtera brumata(ウィンターモス(winter moth))、Ostrinia nubilalis(ヨーロピアンコーンボーア(European corn borer))、Panolis flammea(パインビューティーモス(pine beauty moth))、Pectinophora gossypiella(ピンクボールワーム(pink bollworm))、Phyllocnistis citrella(シトラスリーフマイナー(citrus leafminer))、Pieris brassicae(キャベッジホワイトバタフライ(cabbage white butterfly))、Plutella xylostella(ダイアモンドバックモス(diamondback moth))、Rachiplusia ni(ソイビーンルーパー(soybean looper))、Spilosoma virginica(イエローベアモス(yellow bear moth))、Spodoptera exigua(ビートアーミー(beet armyworm))、Spodoptera frugiperda(フォールアーミーワーム(fall armyworm))、Spodoptera littoralis(コットンリーフワーム(cotton leafworin))、Spodoptera litura(コモンカットワーム(common cutworm))、Spodoptera praefica(イエローストライプドアーミーワーム(yellowstriped armyworm))、Sylepta derogata(コットンリーフローラー(cotton leaf roller))、Tineola bisselliella(ウェビングクローズモス(webbing clothes moth))、Tineola pellionella(ケースメイキングクローズモス(case-making clothes moth))、Tortrix viridana(ヨーロピアンオークリーフローラー(European oak leafroller))、Trichoplusia ni(キャベッジルーパー(cabbage looper))、及びYponomeuta padella(スモールエルミンモス(small ermine moth))。
Orthopteraの例としては、コモンクリケット(common cricket)Acheta domesticus、ツリーローカスト(tree locust)(Anacridium spp.)、マイグラトリローカスト(migratory locust)Locusta migratoria、ツーストライプドグラスホッパー(twostriped grasshopper)Melanoplus bivittatus、ディファレンシャルグラスホッパー(differential grasshopper)Melanoplus dfferentialis、レッドレッグドグラスホッパー(redlegged grasshopper)Melanoplus femurrubrum、マイグラトリグラスホッパー(migratory grasshopper)Melanoplus sanguinipes、ノーザンモールクリケット(northern mole cricket)Neocurtilla hexadectyla、レッドローカスト(red locust)Nomadacris septemfasciata、ショートウィングドモールクリケット(shortwinged mole cricket)Scapteriscus abbreviatus、サザンモールクリケット(southern mole cricket)Scapteriscus borellii、タウニーモールクリケット(tawny mole cricket)Scapteriscus vicinus、及びデザートローカスト(desert locust)Schistocerca gregariaが挙げられるが、これらに限定されない。
Phthirapteraの例としては、キャトルバイティングラウス(cattle biting louse)Bovicola bovis、biting lice(Damalinia spp.)、キャットラウス(cat louse)Felicola subrostrata、ショートノーズドキャトルラウス(shortnosed cattle louse)Haematopinus eloysternus、テイルスイッチラウス(tail-switch louse)Haematopinus quadriperiussus、ホッグラウス(hog louse)Haematopinus suis、フェースラウス(face louse)Linognathus ovillus、フットラウス(foot louse)Linognathus pedalis、ドッグサッキングラウス(dog sucking louse)Linognathus setosus、ロングノーズドキャトルラウス(long-nosed cattle louse)Linognathus vituli、チキンボディラウス(chicken body louse)Menacanthus stramineus、ポールトリシャフトラウス(poultry shaft louse)Menopon gallinae、ヒューマンボディラウス(human body louse)Pediculus humanus、ピュビックラウス(pubic louse)Phthirus pubis、リトルブルーキャトルラウス(little blue cattle louse)Solenopotes capillatus、及びドッグバイティングラウス(dog biting louse)Trichodectes canisが挙げられるが、これらに限定されない。
Psocopteraの例としては、ブックライス(booklice)Liposcelis bostrychophila、Liposcelis decolor、Liposcelis entomophila、及びTrogium pulsatoriumが挙げられるが、これらに限定されない。Siphonapteraの例としては、トリノミ(bird flea)Ceratophyllus gallinae、イヌノミ(dog flea)Ctenocephalides canis、ネコノミ(cat flea)Ctenocephalides fells、ヒトノミ(human flea)Pulex irritans、及びケオプスネズミノミ(oriental rat flea)Xenopsylla cheopisが挙げられるが、これらに限定されない。
Symphylaの例としては、ガーデンシンフィラン(garden symphylan)Scutigerella immaculateが挙げられるが、これに限定されない。
Thysanuraの例としては、グレイシルバーフィッシュ(gray silverfish)Ctenolepisma longicaudata、フォーラインドシルバーフィッシュ(four-lined silverfish)Ctenolepisma quadriseriata、コモンシルバーフィッシュ(common silverfish)Lepisma saccharina、及びファイアブラット(firebrat)Thennobia domesticaが挙げられるが、これらに限定されない。
Thysanopteraの例としては、タバコトリプ(tobacco thrip)Frankliniella fusca、フラワートリプ(flower thrip)Frankliniella intonsa、ウエスタンフラワートリプ(western flower thrip)Frankliniella occidentalis、コットンバドトリプ(cotton bud thrip)Frankliniella schultzei、バンディッドグリーンハウストリプ(banded greenhouse thrip)Hercinothrips femoralis、ソイビーントリプ(soybean thrip)Neohydatothrips variabilis、ケリーズシトラストリプ(Kelly’s citrus thrip)Pezothrips kellyanus、アボガドトリプ(avocado thrip)Scirtothrips perseae、メロントリプ(melon thrip)Thrips palmi、及びオニオントリプ(onion thrip)Thrips tabaciが挙げられるが、これらに限定されない。
Nematodeの例としては、限定されないが、ネコブ線虫(root-knot nematode)、シスト線虫(cyst nematode)、及びネグサレ線虫(lesion nematode)などの寄生線虫が挙げられ、Heterodera spp.、Meloidogyne spp.、及びGlobodera spp.が含まれる。特に、以下のシスト線虫のメンバーが含まれるが、これらに限定されない:Heterodera glycines(ダイズシスト線虫(soybean cyst nematode))、Heterodera schachtii(ビートシスト線虫(beet cyst nematode))、Heterodera avenae(穀類シスト線虫(cereal cyst nematode))、及びGlobodera rostochiensis及びGlobodera pailida(ポテトシスト線虫(potato cyst nematode))。ネグサレ線虫には、以下が含まれるが、これらに限定されない:Pratylenchus種。
本開示の1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A34のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせに感受性のある他の昆虫種には、例えば、蚊(例えば、Aedes、Anopheles、及びCulex属由来の蚊)、ダニ、ノミ、及びハエなどの公衆衛生及び動物衛生上の懸念を引き起こす有害節足動物が含まれる。
一実施形態では、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A34のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせは、外部寄生虫を処理するために用いることができる。外部寄生虫には、ノミ(fleas)、ダニ(ticks)、マンジ(mange)、コダニ(mites)、蚊、厄介なハエ(nuisance flies)及びアブ(biting flies)、シラミ(lice)、並びに前述の外部寄生虫のうちの1つ以上を含む組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。「ノミ」という用語は、Siphonaptera目の寄生ノミの通常種又は偶生種、特に、Ctenocephalides種特に、C.fells及びC.cams、ネズミノミ(rat flea)(Xenopsylla cheopis)、及びヒトノミ(human flea)(Pulex irritans)を含む。
主要作物についての本発明の害虫には、以下が含まれるが、これらに限定されない:トウモロコシ:Ostrinia nubilalis ヨーロピアンコーンボーア(corn borer)、Agrotis ipsilon ブラックカットワーム(black cutworm)、Helicoverpa zea コーンイアワーム(corn earworm)、Spodoptera frugiperda フォールアーミーワーム(fall armyworm)、Diatraea grandiosella サウスウエスタンコーンボーア(southwestern corn borer)、Elasmopalpus lignosellus レッサーコーンストークボーア(lesser cornstalk borer)、Diatraea saccharalis シュガーケインボーア(surgarcane borer)、Diabrotica virgifera ウエスタンコーンルートワーム(western corn rootworm)、Diabrotica longicornis barberi ノーザンコーンルートワーム(northern corn rootworm)、Diabrotica undecimpunctata howardi サザンコーンルートワーム(southern corn rootworm)、Melanotus spp.ワイヤワーム(wireworm)、Cyclocephala borealis ノーザンマスクドチェイファー(northern masked chafer)(ホワイトグラブ(white grub))、Cyclocephala immaculata サザンマスクドチェイファー(southern masked chafer)(ホワイトグラブ(white grub))、Popillia japonica ジャパニーズビートル(Japanese beetle)、Chaetocnema pulicaria コーンフリービートル(corn flea beetle)、Sphenophorus maidis メイズビルバグ(maize billbug)、Rhopalosiphum maidis コーンリーフエイフィド(corn leaf aphid)、Anuraphis maidiradicis コーンルートエイフィド(corn root aphid)、Blissus leucopterus leucopterus チンチバグ(chinch bug)、Melanoplus femurrubrum レッドレッグドグラスホッパー(redlegged grasshopper)、Melanoplus sanguinipes マイグラトリグラスホッパー(migratory grasshopper)、Hylemya platura シードコーンマゴット(seedcorn maggot)、Agromyza parvicornis コーンブロットリーフマイナー(corn blot leafminer)、Anaphothrips obscrurus グラストリップス(grass thrip)、Solenopsis milesta スィーフアント(thief ant)、Tetranychus urticae ツースポッテッドスパイダーマイト(twospotted spider mite)。モロコシ:Chilo partellus ソルガムボーア(sorghum borer)、Spodoptera frugiperda フォールアーミーワーム(fall armyworm)、Helicoverpa zea コーンイアワーム(corn earworm)、Elasmopalpus lignosellus レッサーコーンストークボーア(lesser cornstalk borer)、Feltia subterranea グラニュレイトカットワーム(granulate cutworm)、Phyllophaga crinita ホワイトグラブ(white grub)、Eleodes Conoderus and Aeolus spp.ワイアワーム(wireworm)、Oulema melanopus シリアルリーフビートル(cereal leaf beetle)、Chaetocnema pulicaria コーンフリービートル(corn flea beetle)、Sphenophorus maidis メイズビルバグ(maize billbug)、Rhopalosiphum maidis コーンリーフエイフィド(corn leaf aphid)、Sipha flava イエローシュガーケインエイフィド(yellow sugarcane aphid)、Blissus leucopterus leucopterus チンチバグ(chinch bug)、Contarinia sorghicola ソルガムミッジ(sorghum midge)、Tetranychus cinnabarinus カーミンスパイダーマイト(carmine spider mite)、Tetranychus urticae ツースポッテッドスパイダーマイト(twospotted spider mite)。コムギ:Pseudaletia unipunctata アーミーワーム(army worm)、Spodoptera frugiperda フォールアーミーワーム(fall armyworm)、Elasmopalpus lignosellus レッサーコーンストークボーア(lesser cornstalk borer)、Agrotis orthogonia ウエスタンカットワーム(western cutworm)、Elasmopalpus lignosellus レッサーコーンストークボーア(lesser cornstalk borer)、Oulema melanopus シリアルリーフビートル(cereal leaf beetle)、Hypera punctata クローバーリーフウィービル(clover leaf weevil)、Diabrotica undecimpunctata howardi サザンコーンルートワーム(southern corn rootworm)、ロシアンウィートエイフィィド(Russian wheat aphid)、Schizaphis graminum グリーンバグ(greenbug)、Macrosiphum avenae イングリッシュグレインエイフィド(English grain aphid)、Melanoplus femurrubrum レッドレッグドグラスホッパー(redlegged grasshopper)、Melanoplus differentialis ディファレンシャルグラスホッパー(differential grasshopper)、Melanoplus sanguinipes マイグラトリグラスホッパー(migratory grasshopper)、Mayetiola destructor ヘシアンフライ(Hessian fly)、Sitodiplosis mosellana ウィートミッジ(wheat midge)、Meromyza americana ウィートステムマゴット(wheat stem maggot)、Hylemya coarctata ウィートバルブフライ(wheat bulb fly)、Frankliniella fusca タバコスリップス(tobacco thrip)、Cephus cinctus ウィートステムソーフライ(wheat stem sawfly)、Aceria tulipae ウィートカールマイト(wheat curl mite)。ヒマワリ:Suleima helianthana サンフラワーバドモス(sunflower bud moth)、Homoeosoma electellum サンフラワーモス(sunflower moth)、Zygogramma exclamationis サンフラワービートル(sunflower beetle)、Bothyrus gibbosus キャロットビートル(carrot beetle)、Neolasioptera murtfeldtiana サンフラワーシードミッジ(sunflower seed midge)。ワタ:Heliothis virescens コットンバドワーム(cotton budworm)、Helicoverpa zea コットンボールワーム(cotton bollworm)、Spodoptera exigua ビートアーミーワーム(beet armyworm)、Pectinophora gossypiella ピンクボールワーム(pink bollworm)、Anthonomus grandis ボールウィービル(boll weevil)、Aphis gossypii コットンエイフィド(cotton aphid)、Pseudatomoscelis seriatus コットンフリーホッパー(cotton fleahopper)、Trialeurodes abutilonea バンディッドウィングドホワイトフライ(banded winged whitefly)、Lygus lineolaris ターニシュドプラントバグ(tarnished plant bug)、Melanoplus femurrubrum レッドレッグドグラスホッパー(redlegged grasshopper)、Melanoplus differentialis ディファレンシャルグラスホッパー(differential grasshopper)、Thrips tabaci オニオントリプ(onion thrip)、Franklinkiella fusca タバコトリプ(tobacco thrip)、Tetranychus cinnabarinus カーミンスパイダーマイト(carmine spider mite)、Tetranychus urticae ツースポッテッドスパイダーマイト(twospotted spider mite)。イネ:Diatraea saccharalis シュガーケインボーア(sugarcane borer)、Spodoptera frugiperda フォールアーミーワーム(fall armyworm)、Helicoverpa zea コーンイアワーム(corn earworm)、Colaspis brunnea グレープコラスピス(grape colaspis)、Lissorhoptrus oryzophilus ライスウォーターウィービル(rice water weevil)、Sitophilus oryzae ライスウィービル(rice weevil)、Nephotettix nigropictus ライスリーフホッパー(rice leafhopper)、Blissus leucopterus チンチバグ(chinch bug)、Acrosternum hilare グリーンスティンクバグ(green stink bug)。ダイズ:Pseudoplusia includens ソイビーンルーパー(soybean looper)、Anticarsia gemmatalis ベルベットビーンキャタピラー(velvet bean caterpillar)、Plathypena scabra グリーンクローバーワーム(green clover worm)、Ostrinia nubilalis ヨーロピアンコーンボーア(European corn borer)、Agrotis ipsilon ブラックカットワーム(black cutworm)、Spodoptera exigua ビートアーミーワーム(beet armyworm)、Heliothis virescens コットンバドワーム(cotton
budworm)、Helicoverpa zea コットンボールワーム(cotton bollworm)、Epilachna varivestis メキシカンビーンビートル(Mexican bean beetle)、Myzus persicae グリーンビーチエイフィド(green peach aphid)、Empoasca fabae ボテトリーフホッパー(potato leafhopper)、Acrosternum hilare グリーンスティンクバグ(green stink bug)、Melanoplus femurrubrum レッドレッグドグラスホッパー(redlegged grasshopper)、Melanoplus differentialis ディファレンシャルグラスホッパー(differential grasshopper)、Hylemya platura シードコーンマゴット(seedcorn maggot)、Sericothrips variabilis ソイビーントリプ(soybean thrip)、Thrips tabaci オニオントリプ(onion thrip)、Tetranychus turkestani ストロベリースパイダーマイト(strawberry spider mite)、Tetranychus urticae ツースポッテッドスパイダーマイト(twospotted spider mite)。オオムギ:Ostrinia nubilalis ヨーロピアンコーンボーア(European corn borer)、Agrotis ipsilon ブラックカットワーム(black cutworm)、Schizaphis graminum グリーンバグ(greenbug)、Blissus leucopterus leucopterus チンチバグ(chinch bug)、Acrosternum hilare グリーンスティンクバグ(green stink bug)、Euschistus servus ブラウンスティンクバグ(brown stink bug)、Delia platura シードコーンマゴット(seedcorn maggot)、Mayetiola destructor ヘシアンフライ(Hessian fly)、Petrobia latens ブラウンウィートマイト(brown wheat mite)。セイヨウアブラナ:Brevicoryne brassicae キャベッジエイフィド(cabbage aphid)、Phyllotreta cruciferae フリービートル(Flea beetle)、Mamestra configurata バーサアーミーワーム(Bertha armyworm)、Plutella xylostella ダイアモンドバックモス(Diamond-back moth)、Delia ssp.ルートマゴット(Root maggot)。
一部の実施形態では、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A34のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせを用いて、前述の昆虫のうちのいずれか1つ以上を処理することができる。
本発明の組み合わせ及び組成物に感受性のある昆虫として、以下が挙げられるが、これらに限定されない:以下のような科がCyt毒素に影響を受ける:Blattaria、Coleoptera、Collembola、Diptera、Echinostomida、Hemiptera、Hymenoptera、Isoptera、Lepidoptera、Neuroptera、Orthoptera、Rhabditida、Siphonoptera、及びThysanoptera。属種は以下のように示される:Actebia fennica、Agrotis ipsilon、A.segetum、Anticarsia gemmatalis、Argyrotaenia citrana、Artogeia rapae、Bombyx mori、Busseola fusca、Cacyreus marshall、Chilo suppressalis、Christoneura fumiferana、C.occidentalis、C.pinus pinus、C.rosacena、Cnaphalocrocis medinalis、Conopomorpha cramerella、Ctenopsuestis obliquana、Cydia pomonella、Danaus plexippus、Diatraea saccharallis、D.grandiosella、Earias vittella、Elasmolpalpus lignoselius、Eldana saccharina、Ephestia kuehniella、Epinotia aporema、Epiphyas postvittana、Galleria mellonella、Genus-Species、Helicoverpa zea、H.punctigera、H.armigera、Heliothis virescens、Hyphantria cunea、Lambdina fiscellaria、Leguminivora glycinivorella、Lobesia botrana、Lymantria dispar、Malacosoma disstria、Mamestra brassicae、M.configurata、Manduca sexta、Marasmia patnalis、Maruca vitrata、Orgyia leucostigma、Ostrinia nubilalis、O.furnacalis、Pandemis pyrusana、Pectinophora gossypiella、Perileucoptera coffeella、Phthorimaea opercullela、Pianotortrix octo、Piatynota stultana、Pieris brassicae、Plodia interpunctala、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Rachiplusia nu、Sciropophaga incertulas、Sesamia calamistis、Spilosoma virginica、Spodoptera exigua、S.frugiperda、S.littoralis、S.exempta、S.litura、Tecia solanivora、Thaumetopoea pityocampa、Trichoplusia ni、Wiseana cervinata、Wiseana copularis、Wiseana jocosa、Blattaria blattella、Collembola xenylla、C.folsomia、Echinostomida fasciola、Hemiptera oncopeltrus、He.bemisia、He.macrosiphum、He.rhopalosiphum、He.myzus、Hymenoptera diprion、Hy.apis、Hy.Macrocentrus、Hy.Meteorus、Hy.Nasonia、Hy.Solenopsis、Isopoda porcellio、Isoptera reticulitermes、Orthoptera Achta、Prostigmata tetranychus、Rhabitida acrobeloides、R.caenorhabditis、R.distolabrellus、R.panagrellus、R.pristionchus、R.pratylenchus、R.ancylostoma、R.nippostrongylus、R.panagrellus、R.haemonchus、R.meloidogyne、及びSiphonaptera ctenocephalides。
本開示は、植物形質転換のための方法を提供し、これは、任意の植物種(単子葉植物及び双子葉植物を含むが、これらに限定されない)の形質転換のために使用され得る。トランスジェニックアプローチが特に有用であろう作物としては、アルファルファ、ワタ、トマト、トウモロコシ、コムギ、トウモロコシ、スイートコーン、ルーサン、ダイズ、モロコシ、エンドウ、アマニ、ベニバナ、ナタネ、セイヨウアブラナ、イネ、ダイズ、オオムギ、ヒマワリ、木(針葉樹及び落葉樹を含む)、花(商業的に栽培されるもの、温室で栽培されるものを含む)、ハウチワマメ、スイッチグラス、サトウキビ、ジャガイモ、トマト、タバコ、ジュウジバナ、ピーマン、サトウダイコン、オオムギ、及びセイヨウアブラナ、アブラナ属種、ライムギ、アワ、ピーナッツ、サツマイモ、キャッサヤ、コーヒー、ココナッツ、パイナップル、柑橘類、カカオ、チャ、バナナ、アボカド、イチジク、グアバ、マンゴー、オリーブ、カセイ、パパイア、カシュー、マカダミア、アーモンド、カラスムギ、野菜、観賞植物又は針葉樹が挙げられるが、これらに限定されない。
殺虫剤耐性害虫
殺虫剤に対する耐性は、害虫集団の殺虫剤に対する感受性に遺伝的変化がある場合に生じる。この感受性の変化は、殺虫剤が、意図した通りに使用された場合、所望の結果及び/又は期待される程度の制御を達成することができないことが観察され得る。交差耐性とは、害虫がある殺虫剤に耐性を持ち、その結果、当該害虫が他の殺虫剤と対峙したことがない場合でも、別の異なる殺虫剤に耐性を付与することを指す。殺虫剤耐性に関する情報は、殺虫剤抵抗性対策委員会(IRAC)のウェブサイト(https://www.irac-online.org/)にある。昆虫及び他の害虫における殺虫剤耐性の報告、並びにそれらに関する殺虫剤は、節足動物農薬耐性データベース(APRD)(https://www.pesticideresistance.org/)に見出すことができる。
一部の実施形態では、昆虫及び/又は害虫は、1つ以上の殺虫剤に耐性又は少なくとも部分的に耐性であり得る。例えば、一部の実施形態では、昆虫及び/又は害虫は、以下の殺虫剤のうちの1つ以上に耐性又は少なくとも部分的に耐性であり得る:アセチルコリンエステラーゼ(AchE)阻害剤:例えば、カルバメート(例えば、アラニカルブ、アルジカルブ、ベンジオカルブ、ベンフラカルブ、ブトカルボキシム、ブトキシカルボキシム、カルバリル、カルボフラン、カルボスルファン、エチオフェンカルブ、フェノブカルブ、ホルメタネート、フラチオカルブ、イソプロカルブ、メチオカルブ、メソミル、メトルカルブ、オキサミル、ピリミカルブ、プロポクスル、チオジカルブ、チオファノックス、トリアザメート、トリメタカルブ、XMC、及びキシリルカルブ)、及び有機リン酸塩(例えば、アセフェート、アザメチホス、アジンホスエチル、アジンホスメチル、カズサホス、クロルエトキシホス、クロルフェンビンホス、クロルメホス、クロルピリホス、クロルピリホスメチル、クマホス、シアノホス、デメトン-s-メチル、ダイアジノン、ジクロルボス/ddvp、ジクロトホス、ジメトエート、ジメチルビンホス、ジスルホトン、エペリゾン、エチオン、エトプロホス、ファムフール、フェナミホス、フェニトロチオン、フェンチオン、ホスチアゼート、ヘプテノホス、イソフェンホス、イソキサチオン、マラチオン、メカルバム、メタミドホス、メチダチオン、メビンホス、モノクロトホス、ナレド、オメトエート、オキシデメトンメチル、パラチオン、パラチオンメチル、フェントエート、ホサロン、ホレート、ホスメット、ホスファミドン、ホキシム、プロフェノホス、プロペテタンホス、プロチオホス、ピラクロホス、ピリダフェンチオン、キナルホス、スルホテプ、テブピリムホス、テメホス、テルブホス、テトラクロルビンホス、チオメトン、トリアゾホス、トリクロルホン、バミドチオン、ピリミホスメチル、イミシアホス、及びイソプロピルo-(メトキシアミノチオホスホリル)サリチレート)、GABA依存性クロライドチャネル遮断薬:例えば、シクロジエン有機塩素系化合物(例えば、クロルデン及びエンドスルファン)、及びフェニルピラゾール(フィプロール)(例えば、エチプロール及びフィプロニル)、ナトリウムチャネル調節剤:例えば、ピレスロイド及びピレトリン(例えば、アクリナトリン、アレトリン、d-cis-transアレトリン、d-transアレトリン、ビフェントリン、ビオアレトリン、ビオアレトリンs-シクロペンテニル、ビオレスメトリン、シクロプロトリン、シフルトリン、β-シフルトリン、シハロトリン、λ-シハロトリン、γ-シハロトリン、シペルメトリン、α-シペルメトリン、β-シペルメトリン、θ-シペルメトリン、ζ-シペルメトリン、シフェノトリン[(1r)-トランス異性体]、デルタメトリン、エンペントリン[(ez)-(1r)-異性体]、エスフェンバレレート、エトフェンプロックス、フェンプロパトリン、フェンバレレート、フルシトリネート、フルメトリン、τ-フルバリネート、カダトリン、ピレトリン(ジョチュウギク)、ハルフェンプロックス、フェノトリン[(1r)-trans-異性体]、プラレトリン、レスメトリン、シラフルオフェン、テフルトリン、テトラメトリン、テトラメトリン[(1r)-異性体]、トラロメトリン、トランスフルトリン、及びペルメトリン)、DDT、及びメトキシクロル、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAchR)競合調節剤、例えば、ネオニコチノイド(例えば、アセタミプリド、クロチアニジン、ジノテフラン、イミダクロプリド、ニテンピラム、チアクロプリド、チアメトキサム)、ニコチン、スルホキシミン(例えば、スルホキサフロール)、ブテノリド(例えば、フルピラジフロン)、及びメソイオン(例えば、トリフルメゾピリム)、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAchR)アロステリック調節剤-部位I:例えば、スピノシン(例えば、スピネトラム及びスピノサド)、グルタミン酸依存性クロライドチャネル(GluCl)アロステリック調節剤:例えば、アベルメクチン及びミルベマイシン(例えば、アバメクチン、安息香酸エマメクチン、レピメクチン、及びミルベメクチン)、幼若ホルモン模倣体:例えば、幼若ホルモン類似体(例えば、ヒドロプレン、キノプレン、及びメトプレン)、フェノキシカルブ、及びピリプロキシフェン、その他の非特異的(マルチサイト)阻害剤:例えば、ハロゲン化アルキル(例えば、臭化メチル及び他のハロゲン化アルキル)、クロルピクリン、フッ化物(例えば、氷晶石、及びフッ化スルフリル)、ホウ酸塩(例えば、ホウ砂、ホウ酸、八ホウ酸二ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、及びメタホウ酸ナトリウム)、吐酒石及びイソチオシアン酸メチル発生剤(例えば、ダゾメット及びメタム)、弦音器官のTRPVチャネル調節剤:例えば、ピリジンアゾメチン誘導体(例えば、ピメトロジン、ピリフルキナゾン)、及びピロペン(例えば、アフィドピロペン)、ダニ成長阻害剤:例えば、クロフェンテジン及びジフロビダジン、ヘキシチアゾクス(例えば、クロフェンテジン、ジフロビダジン、及びヘキシチアゾックス、及びエトキサゾール)、ミトコンドリアATPシンターゼの阻害剤:例えば、ジアフェンチウロン、有機スズ殺ダニ剤(例えば、アゾシクロチン、シヘキサチン、フェンブタチンオキシド)、プロパルギット、及びテトラジホン、プロトン勾配の破壊による酸化的リン酸化の脱共役剤:例えば、ピロール、ジニトロフェノール、及びスルフルラミド(例えば、クロルフェナピル、DNOC、及びスルフルラミド)、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAchR)チャネル遮断剤:例えば、ネライストキシン類似体(例えば、ベンスルタップ、カルタップ塩酸塩、チオシクラム、チオスルタップナトリウム)、エクジソン受容体アゴニスト:例えば、ジアシルヒドラジン(例えば、クロマフェノジド、ハロフェノジド、メトキシフェノジド、及びテブフェノジド)、オクトパミン受容体アゴニスト:例えば、アミトラズ、ミトコンドリア複合体III電子伝達阻害剤:例えば、ヒドラメチルノン、アセキノシル、フルアクリピリム、及びビフェナゼート、ミトコンドリア複合体I電子伝達阻害剤:例えば、METI殺ダニ剤及び殺虫剤(例えば、フェナザキン、フェンピロキシメート、ピリミジフェン、ピリダベン、テブフェンピラド、及びトルフェンピラド)、及びロテノン、電位依存性ナトリウムチャネル遮断剤:例えば、オキサジアジン(例えば、インドキサカルブ)、及びセミカルバゾン(例えば、メタフルミゾン)、アセチルCoAカルボキシラーゼの阻害剤:例えば、テトロン酸及びテトラム酸誘導体(例えば、スピロジクロフェン、スピロメシフェン、スピロピジオン、及びスピロテトラマト)、ミトコンドリア複合体IV電子伝達阻害剤:例えば、リン化物(例えば、リン化アルミニウム、リン化カルシウム、ホスフィン、リン化亜鉛)、及びシアン化物(例えば、シアン化カルシウム、シアン化カリウム、及びシアン化ナトリウム)、ミトコンドリア複合体II電子伝達阻害剤:例えば、β-ケトニトリル誘導体(例えば、シエノピラフェン及びシフルメトフェン)、及びカルボキシアニリド(例えば、ピフルブミド)、リアノジン受容体調節剤:例えば、ジアミン(例えば、クロラントラニリプロール、シアントラニリプロール、シクラニリプロール、フルベンジアミド、及びテトラニリプロール)、弦音器官調節剤-未定義の標的部位:例えば、フロニカミド、並びに/又はGABA依存性クロライドチャネルアロステリック調節剤:例えば、メタ-ジアミド及びイソキサゾリン(例えば、ブロフラニリド、フルキサメタミド)。
一部の実施形態では、昆虫及び/又は害虫は、本明細書に記載される殺虫剤のうちのいずれか1つ以上に耐性又は少なくとも部分的に耐性であり得る。
一部の実施形態では、本発明の組成物、組み合わせ、及び/又は方法は、1つ以上の殺虫剤に耐性又は少なくとも部分的に耐性のある昆虫及び/又は害虫の部位に適用することができ、当該昆虫及び/又は害虫は、以下の一般的に知られている昆虫及び/又は害虫からなる群から選択される:黄熱病蚊、コーンストークボーア、アジアティックライスボーア、イエカ、ミナミイエカ、ウエスタンコーンルートワーム、シュガーケインボーア、コットンボールワーム、コーンイアワーム、タバコバドワーム、コロラドポテトビートル、アジアンコーンボーア、ヨーロピアンコーンボーア、ピンクボールワーム、インディアンミールモス、ダイアモンドバックモス、ソイビーンルーパー、ビートアーミーワーム、レッサーアーミーワーム、フォールアーミーワーム、エジプシャンコットンリーフワーム、アーミーワーム、又はキャベッジルーパー。
一部の実施形態では、本発明の組成物、組み合わせ、及び/又は方法は、1つ以上の殺虫剤に耐性又は少なくとも部分的に耐性のある昆虫及び/又は害虫の部位に適用することができ、選択される当該昆虫及び/又は害虫は、ブラックフライ又は厄介なハエ(例えば、Psychoda種及びChironomus spp.)である。
一部の実施形態では、昆虫及び/又は害虫は、1つ以上の殺虫剤に耐性又は少なくとも部分的に耐性であり得、Lepidopteran(例えば、ダイヤモンドバックモス)であり得る。
一部の実施形態では、本発明の組成物、組み合わせ、及び/又は方法は、1つ以上の殺虫剤に耐性又は少なくとも部分的に耐性である昆虫及び/又は害虫の部位に適用することができ、当該昆虫及び/又は害虫が、以下からなる群から選択される:ルーパー、オムニバラスリーフローラー、ホーンワーム、インポーテッドキャベッジワーム、ダイアモンドバックモス、グリーンクローバーワーム、ウェブワーム、ソルトマーシュキャタピラー、アーミーワーム、カットワーム、クロスストライプドキャベッジワーム、ポッドワーム、ベルベットビーンキャタピラー、ソイビーンルーパー、トマトフルーツワーム、ベアリアゲイティドカットワーム、メロンワーム、リンドワームコンプレックス、フルーツツリーリーフローラー、シトラスカットワーム、ヘリオティス、オレンジドッグ、シトラスカットワーム、レッドハンプドキャタピラー、テントキャタピラー、フォールウェブワーム、ウォールナッツキャタピラー、カンカーワーム、ジプシーモス、ベアリアゲイティドリーフローラー、レッドバンディッドリーフローラー、タフテッドアップルバドモス、オリエンタルフルーツモス、フィルバートリーフローラー、オブリークバンディッドリーフローラー、コドリングモス、トゥイグボーア、グレープリーフスケルトナイザー、グレープリーフローラー、アキーマスフィンクスモス(ホーンワーム)、オレンジトートリクス、タバコバドワーム、グレープベリーモス、スパンワーム、アルファルファキャタピラー、コットンボールワーム、ヘッドモス、アもビアモス、オムニバラスルーパー、エローモス(ホーンワーム)、イオモス、オリアンダーモス、アゼリアキャタピラー、ホーンワーム、リーフローラー、バナナスキッパー、Batrachedra comosae(ホッジ)、テクラモス、アーティチョークプルームモス、シスルバタフライ、バッグワーム、スプリング&フォールカンカーワーム、エルムスパンワーム、カルフォルニアオーク、パインバタフライ、スプルースバドワーム、サドルプロミネントキャタピラー、ダグラスファアタソックモス、ウエスタンタソックモス、ブラックヘディッドバドワーム、ミモザウェブワーム、ジャックパインバドワーム、サドルバックキャタピラー、グリーンストライプドメープルワーム、又はヘムロックルーパー。
一部の実施形態では、昆虫及び/又は害虫は、1つ以上の殺虫剤に耐性又は少なくとも部分的に耐性であり得、コロラドポテトビートル又はエルムリーフビートルであり得る。
一部の実施形態では、本発明の組成物、組み合わせ、及び/又は方法は、1つ以上の殺虫剤に耐性又は少なくとも部分的に耐性である昆虫及び/又は害虫の部位に適用することができ、当該昆虫及び/又は害虫が、以下からなる群から選択される:アヒマスフィンクスモス(ホーンワーム)(Eumorpha achemon)、アルファルファキャタピラー(Colias eurytheme)、アーモンドモス(Caudra cautella)、アモルビアモス(Amorbia humerosana)、アーミーワーム(Spodoptera spp.(例えば、exigua、frugiperda、littoralis)、Pseudaletia unipuncta)、アーティチョークプルームモス(Platyptilia carduidactyla)、アゼリアキャタピラー(Datana major)、バッグワーム(Thyridopteryx)、ephemeraeformis)、バナナモス(Hypercompe scribonia)、バナナスキッパー(Erionota thrax)、ブラックヘディッドバドワーム(Acleris gloverana)、カルフォルニアオークワーム(Phryganidia californica)、スプリングキャンカーワーム(Paleacrita merriccata)、チェリーフルーツワーム(Grapholita packardi)、チャイナマークモス(Nymphula stagnata)、シトラスカットワーム(Xylomyges curialis)、コドリングモス(Cydia pomonella)、クランベリーフルーツワーム(Acrobasis vaccinii)、クロスストライプドキャベッジワーム(Evergestis rimosalis)、カットワーム(Noctuid種、Agrotis ipsilon)、ダグラスファータソックモス(Orgyia pseudotsugata)、エルロモス(ホーンワーム)(Erinnyis ello)、エルムスパンワーム(Ennomos subsignaria)、ヨーロピアングレープヴァインモス(Lobesia botrana)、ヨーロピアンスキッパー(Thymelicus lineola(エセックススキッパー)、フォールウェブワーム(Melissopus latiferreanus、フィルバートリーフローラー(Archips rosanus、フルーツツリーリーフローラー(Archips argyrospilia、グレープベリーモス(Paralobesia viteana、グレープリーフローラー(Platynota stultana、グレープリーフスケルトナイザー(Harrisina americana(グラウンドオンリー)、グリーンクローバーワーム(Plathypena scabra、グリーンストライプドメープルワーム(Dryocampa rubicunda、Gummosos-Batrachedra、Comosae(ホッジズ)、ジプシーモス(Lymantria dispar)、ヘムロックルーパー(Lambdina fiscellaria)、ホーンワーム(Manduca spp.)、インポーテッドキャベッジワーム(Pieris rapae)、アイオモス(Automeris io)、ジャックパインバドワーム(Choristoneura pinus)、ライトブラウンアップルモス(Epiphyas postvittana)、メロンワーム(Diaphania hyalinata)、ミモザウェブワーム(Homadaula anisocentra)、オブリークバンディッドリーフローラー(Choristoneura rosaceana)、オリアンダーモス(Syntomeida epilais)、オムニバラスリーフローラー(Playnota stultana)、オムニバラスルーパー(Sabulodes aegrotata)、オレンジドッグ(Papilio cresphontes)、オレンジトートリクス(Argyrotaenia citrana)、オリエンタルフルーツモス(Grapholita molesta)、ピーチツイグボーア(Anarsia lineatella)、パインバタフライ(Neophasia menapia)、ポッドワーム(Heliocoverpa zea)、レッドバンディッドリーフローラー(Argyrotaenia velutinana)、レッドハンプトキャタピラー(Schizura concinna)、リンドワームコンプレックス(Various Leps.)、サドルバックキャタピラー(Sibine stimulea )、サドルプロミネントキャタピラー(Heterocampa guttivitta)、ソルトマーシュキャタピラー(Estigmene acrea)、ソッドベッドワーム(Crambus spp.)、スパンワーム(Ennomos subsignaria )、フォールキャンカーワーム(Alsophila pometaria)、スプルースバドワーム(Choristoneura fumiferana)、テントキャタピラー(Various Lasiocampidae )、Thecla-Thecla Basilides(Geyr)Thecla basilides)、タバコホーンワーム(Manduca sexta)、タバコモス(Ephestia elutella)、タフテッドアップルバドモス(Platynota idaeusalis)、トゥイグボーア(Anarsia lineatella)、ベアリアゲイティドカットワーム(Peridroma saucia)、ベアリアゲイティドリーフローラー(Platynota flavedana)、ベルベットビーンキャタピラー(Anticarsia gemmatalis)、ウォルナットキャタピラー(Datana integerrima)、ウェブワーム(Hyphantria cunea)、ウエスタンタソックモス(Orgyia vetusta)、サザンコーンストークボーア(Diatraea crambidoides)、コーンイアワーム、スイートポテトウィービル、ペッパーウィービル、シトラスルートウィービル、ストロベリーウィービル、ピーカンウィービル、フィルバートウィービル、ライスウォーターウィービル、アルファルファウィービル、クローバーウィービル、ティーショット-ホールボーア、ルートウィービル、シュガーケインビートル、コーヒーベリーボーア、アニュアルブルーグラスウィービル(Listronotus maculicollis)、アジアティックガーデンビートル(Maladera castanea)、ヨーロピアンチェ―ファー(Rhizotroqus majalis)、グリーンジューンビートル(Cotinis nitida)、ジャパニーズビートル(Popillia japonica)、メイオアジューンビートル(Phyllophaga sp.)、ノーザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala borealis)、オリエンタルビートル(Anomala orientalis)、サザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala lurida)、ビルバグ(Curculionoidea)、Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、又はXanthogaleruca luteola。
一部の実施形態では、本発明の組成物、組み合わせ、及び/又は方法は、1つ以上の殺虫剤に耐性又は少なくとも部分的に耐性である昆虫及び/又は害虫の部位に適用することができ、上式で当該昆虫及び/又は害虫が、以下からなる群から選択される成虫の甲虫である:アジアティックガーデンビートル(Maladera castanea)、ゴールドスポッテッドオークボーア(Agrilus coxalis auroguttatus)、グリーンジューンビートル(Cotinis nitida)、ジャパニーズビートル(Popillia japonica)、メイ又はジューンビートル(Phyllophaga sp.)、オリエンタルビートル(Anomala orientalis)、及びソープベリーボーア(Agrilus prionurus)。
一部の実施形態では、本発明の組成物、組み合わせ、及び/又は方法は、1つ以上の殺虫剤に耐性又は少なくとも部分的に耐性である昆虫及び/又は害虫の部位に適用することができ、当該昆虫及び/又は害虫が、以下からなる群から選択される幼虫(アニュアルホワイトグラブ)である:アニュアルブルーグラスウィービル(Listronotus maculicollis)、アジアティックガーデンビートル(Maladera castanea)、ヨーロピアンチェ―ファー(Rhizotroqus majalis)、グリーンジューンビートル(Cotinis nitida)、ジャパニーズビートル(Popillia japonica)、メイ又はジューンビートル(Phyllophaga sp.)、ノーザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala borealis)、オリエンタルビートル(Anomala orientalis)、サザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala lurida)、及びビルバグ(Curculionoidea)。
Bt毒素耐性害虫
一部の実施形態では、昆虫及び/又は害虫は、1つ以上の殺虫剤(例えば、1つ以上のBt毒素)に耐性又は少なくとも部分的に耐性であり得る。Bt毒素の例示的な記載は、Adang et al.,(2014)Diversity of bacillus thuringiensis crystal toxins and mechanism of action.In:Dhadialla,Tarlochan and Gill,Sarjeet(eds.)Insect Midgut and Insecticidal Proteins.Advances in Insect Physiology,47.Academic Press,pp.39-87、及びPCT出願第WO2009/076475号に開示されており、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の実施形態では、昆虫及び/又は害虫は、本明細書に記載される1つ以上のBt毒素に耐性又は少なくとも部分的に耐性であり得る。
一部の実施形態では、昆虫及び/又は害虫は、Bt毒素に耐性又は少なくとも部分的に耐性であり得る。例えば、一部の実施形態では、昆虫及び/又は害虫は、Bacillus thuringiensis毒素、Bacillus thuringiensis Cry11Aaタンパク質、Bacillus thuringiensis Cry11Baタンパク質、Bacillus thuringiensis Cry1Acタンパク質、Bacillus thuringiensis Cry1A.105タンパク質、Bacillus thuringiensis Cry1Aaタンパク質、Bacillus thuringiensis Cry1Abタンパク質、Bacillus thuringiensis Cry1Daタンパク質、Bacillus thuringiensis Cry1Fタンパク質、Bacillus thuringiensis Cry2Aタンパク質、Bacillus thuringiensis Cry2Abタンパク質、Bacillus thuringiensis Cry2Ab2タンパク質、Bacillus thuringiensis Cry2Aeタンパク質、Bacillus thuringiensis Cry4Aaタンパク質、Bacillus thuringiensis Cry4Bタンパク質、Bacillus thuringiensis CryIAaタンパク質、Bacillus thuringiensis結晶性CryICタンパク質、Bacillus thuringiensis CryIJaタンパク質、Bacillus thuringiensis HD73胞子/結晶タンパク質、Bacillus thuringiensis var.kurstaki HD-1タンパク質、Bacillus thuringiensis var.tenebrionenisタンパク質、Bacillus thuringiensis var.aizawaiタンパク質、Bacillus thuringiensis var.aizawai ATTC SD-1372タンパク質、Bacillus thuringiensis var.israelensisタンパク質、Bacillus thuringiensis var.kurstakiタンパク質、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Dipel)タンパク質、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Javelin)タンパク質、Bacillus thuringiensis Vip3Aタンパク質、Cry1A.105タンパク質、Cry1Ahタンパク質、Cry1Baタンパク質、Cry1Cタンパク質、Cry1Caタンパク質、Cry1Ieタンパク質、Cry2Aaタンパク質、Cry3Bb1タンパク質、Cry4Baタンパク質、又はCryIIBタンパク質に耐性又は少なくとも部分的に耐性であり得る。
一部の実施形態では、Bt毒素に耐性又は少なくとも部分的に耐性であり得る昆虫及び/又は害虫は、以下の目から選択され得る:Culicidae diptera、Chrysomelidae coleoptera、Pyralidae lepidoptera、Gelechiidae lepidoptera、Pyralidae lepidoptera、Plutellidae lepidoptera、又はNoctuidae lepidoptera。
一部の実施形態では、Bt毒素に耐性又は少なくとも部分的に耐性であり得る昆虫及び/又は害虫は、以下の種から選択され得る:Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
一部の実施形態では、1つ以上のCRIP(例えば、CRIP:表AのA1~A34のうちの1つ以上)と、1つ以上のIA(例えば、IA:表BのB1~B479のうちの1つ以上)と、を含む組み合わせを使用して、前述の殺虫剤耐性昆虫又はBt耐性昆虫のうちのいずれかを処理することができる。
例示的な組み合わせ及び方法
一部の実施形態では、本発明は、システインリッチ殺虫ペプチド(CRIP)と、殺虫剤(IA)と、を含む組み合わせを提供する。
一部の実施形態では、本発明は、システインリッチ殺虫ペプチド(CRIP)と、殺虫剤(IA)と、を含む組み合わせを提供し、IAが、細菌毒素、真菌毒素、レクチン、Azadirachta indica化合物、ホウ素化合物、ウイルス、又はそれらの組み合わせである。
一部の実施形態では、細菌毒素は、Bacillus thuringiensis毒素(Bt)又はPhotorhabdus毒素である。
一部の実施形態では、Bt毒素は、以下からなる群から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である:Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)、Bacillus thuringiensis var.aizawai、Bacillus thuringiensis var.aizawai/pacificus、Bacillus thuringiensis var.alesti、Bacillus thuringiensis var.amagiensis、Bacillus thuringiensis var.andalousiensis、Bacillus thuringiensis var.argentinensis、Bacillus thuringiensis var.asturiensis、Bacillus thuringiensis var.azorensis、Bacillus thuringiensis var.balearica、Bacillus thuringiensis var.berliner、Bacillus thuringiensis var.bolivia、Bacillus thuringiensis var.brasilensis、Bacillus thuringiensis var.cameroun、Bacillus thuringiensis var.canadensis、Bacillus thuringiensis var.chanpaisis、Bacillus thuringiensis var.chinensis、Bacillus thuringiensis var.colmeri、Bacillus thuringiensis var.coreanensis、Bacillus thuringiensis var.dakota、Bacillus thuringiensis var.darmstadiensis、Bacillus thuringiensis var.dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus/subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.finitimus、Bacillus thuringiensis var.fukuokaensis、Bacillus thuringiensis var.galechiae、Bacillus thuringiensis var.galleriae、Bacillus thuringiensis var.graciosensis、Bacillus thuringiensis var.guiyangiensis、Bacillus thuringiensis var.higo、Bacillus thuringiensis var.huazhongensis、Bacillus thuringiensis var.iberica、Bacillus thuringiensis var.indiana、Bacillus thuringiensis var.israelensis/tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.japonensis、Bacillus thuringiensis var.jegathesan、Bacillus thuringiensis var.jinghongiensis、Bacillus thuringiensis var.kenyae、Bacillus thuringiensis var.kim、Bacillus thuringiensis var.kumamtoensis、Bacillus thuringiensis var.kunthalanags3、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX24、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX27、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX28、Bacillus thuringiensis var.kyushuensis、Bacillus thuringiensis var.leesis、Bacillus thuringiensis var.londrina、Bacillus thuringiensis var.malayensis、Bacillus thuringiensis var.medellin、Bacillus thuringiensis var.mexicanensis、Bacillus thuringiensis var.mogi、Bacillus thuringiensis var.monterrey、Bacillus thuringiensis var.morrisoni、Bacillus thuringiensis var.muju、Bacillus thuringiensis var.navarrensis、Bacillus thuringiensis var.neoleonensis、Bacillus thuringiensis var.nigeriensis、Bacillus thuringiensis var.novosibirsk、Bacillus thuringiensis var.ostriniae、Bacillus thuringiensis var.oswaldocruzi、Bacillus thuringiensis var.pahangi、Bacillus thuringiensis var.pakistani、Bacillus thuringiensis var.palmanyolensis、Bacillus thuringiensis var.pingluonsis、Bacillus thuringiensis var.pirenaica、Bacillus thuringiensis var.poloniensis、Bacillus thuringiensis var.pondicheriensis、Bacillus thuringiensis var.pulsiensis、Bacillus thuringiensis var.rongseni、Bacillus thuringiensis var.roskildiensis、Bacillus thuringiensis var.san diego、Bacillus thuringiensis var.seoulensis、Bacillus thuringiensis var.shandongiensis、Bacillus thuringiensis var.silo、Bacillus thuringiensis var.sinensis、Bacillus thuringiensis var.sooncheon、Bacillus thuringiensis var.sotto、Bacillus thuringiensis var.sotto/dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.sumiyoshiensis、Bacillus thuringiensis var.sylvestriensis、Bacillus thuringiensis var.thailandensis、Bacillus thuringiensis var.thompsoni、Bacillus thuringiensis var.thuringiensis、Bacillus thuringiensis var.tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.toguchini、Bacillus thuringiensis var.tohokuensis、Bacillus thuringiensis var.tolworthi、Bacillus thuringiensis var.toumanoffi、Bacillus thuringiensis var.vazensis、Bacillus thuringiensis var.wratislaviensis、Bacillus thuringiensis var.wuhanensis、Bacillus thuringiensis var.xiaguangiensis、Bacillus thuringiensis var.yosoo、Bacillus thuringiensis var.yunnanensis、Bacillus thuringiensis var.zhaodongensis、及びBacillus thuringiensis var.konkukian毒素。
一部の実施形態では、Bt毒素は、以下からなる群から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である:Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、及びBacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)。
一部の実施形態では、Bt毒素は、傍胞子結晶性毒素、分泌タンパク質、β-エキソトキシン、41.9-kDa殺虫毒素、スフェリコリシン、アルベオリシン、又はエンハンシン様タンパク質である。
一部の実施形態では、傍胞子結晶性毒素は、δ-エンドトキシンである。
一部の実施形態では、δ-エンドトキシンは、3ドメイン(3D)Cryファミリータンパク質、バイナリBin様ファミリー毒素、ETX_MTX2様ファミリー毒素、Toxin-10ファミリー毒素、エロリジンファミリー毒素、又は細胞溶解素である。
一部の実施形態では、δ-エンドトキシンは、3ドメイン(3D)Cry毒素、殺蚊Cry毒素(Mtx)、バイナリ様(Bin)毒素、又はCyt毒素である。
一部の実施形態では、δ-エンドトキシンは、3ドメイン(3D)Cry毒素又はCyt毒素である。
一部の実施形態では、δ-エンドトキシンは、以下からなる群から選択される:Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A様、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb様、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H様、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I様、Cry1I様、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1様、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A様、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba様、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8様、Cry8様、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa、like、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9様、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A様、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa様、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20様、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21Da1、Cry
21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43様、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1、又はCry78Aa1、Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa様、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba様、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B様、Cyt2Ca1、及びCyt3Aa1。
一部の実施形態では、Cry毒素又はCyt毒素は、配列番号412~481によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、Bt毒素は、分泌タンパク質である。
一部の実施形態では、分泌タンパク質は、植物性殺虫タンパク質(Vip)、分泌型殺虫タンパク質(Sip)、Bin様ファミリータンパク質、又はETX_MTX2ファミリータンパク質である。
一部の実施形態では、分泌タンパク質は、Vipである。
一部の実施形態では、Vipは、Vip1ファミリータンパク質、Vip2ファミリータンパク質、Vip3ファミリータンパク質、又はVip4ファミリータンパク質である。
一部の実施形態では、Vipは、以下からなる群から選択される:Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4、及びVip4Aa1。
一部の実施形態では、Vipタンパク質は、配列番号482~587に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、細菌毒素は、Photorhabdus毒素である。
一部の実施形態では、Photorhabdus毒素は、Photorhabdus akhurstii毒素、Photorhabdus asymbiotica毒素、Photorhabdus asymbiotica subsp.asymbiotica毒素、Photorhabdus asymbiotica subsp.asymbiotica ATCC 43949毒素、Photorhabdus australis毒素、Photorhabdus australis DSM 17609毒素、Photorhabdus bodei毒素、Photorhabdus caribbeanensis毒素、Photorhabdus cinerea毒素、Photorhabdus hainanensis毒素、Photorhabdus heterorhabditis毒素、Photorhabdus kayaii毒素、Photorhabdus khanii毒素、Photorhabdus khanii NC19毒素、Photorhabdus khanii subsp.guanajuatensis毒素、Photorhabdus kleinii毒素、Photorhabdus laumondii毒素、Photorhabdus laumondii subsp.clarkei毒素、Photorhabdus laumondii subsp.laumondii毒素、Photorhabdus laumondii subsp.laumondii TTO1毒素、Photorhabdus luminescens毒素、Photorhabdus luminescens BA1毒素、Photorhabdus luminescens NBAII H75HRPL105毒素、Photorhabdus luminescens NBAII HiPL101毒素、Photorhabdus luminescens subsp.luminescens毒素、Photorhabdus luminescens subsp.luminescens ATCC 29999毒素、Photorhabdus luminescens subsp.mexicana毒素、Photorhabdus luminescens subsp.sonorensis毒素、Photorhabdus namnaonensis毒素、Photorhabdus noenieputensis毒素、Photorhabdus stackebrandtii毒素、Photorhabdus tasmaniensis毒素、Photorhabdus temperata毒素、Photorhabdus temperata J3毒素、Photorhabdus temperata subsp.phorame毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata M1021毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata Meg1毒素、Photorhabdus thracensis毒素、未分類のPhotorhabdus毒素、Photorhabdus sp.毒素、Photorhabdus sp.3014毒素、Photorhabdus sp.3240毒素、Photorhabdus sp.Az29毒素、Photorhabdus sp.BS21毒素、Photorhabdus sp.CbKj163毒素、Photorhabdus sp.CRCIA-P01毒素、Photorhabdus sp.ENY毒素、Photorhabdus sp.FL2122毒素、Photorhabdus sp.FL480毒素、Photorhabdus sp.FsIw96毒素、Photorhabdus sp.GDd233毒素、Photorhabdus sp.H3086毒素、Photorhabdus sp.H3107毒素、Photorhabdus sp.H3240毒素、Photorhabdus sp.HB301毒素、Photorhabdus sp.HB78毒素、Photorhabdus sp.HB89毒素、Photorhabdus sp.HIT毒素、Photorhabdus sp.HO1毒素、Photorhabdus sp.HUG-39毒素、Photorhabdus sp.IT毒素、Photorhabdus sp.JUN毒素、Photorhabdus sp.KcTs129毒素、Photorhabdus sp.KJ13.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ14.3 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ24.5 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ29.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ37.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ7.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ8.2 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ9.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ9.2 TH毒素、Photorhabdus sp.KK1.3 TH毒素、Photorhabdus sp.KK1.4 TH毒素、Photorhabdus sp.KMD74毒素、Photorhabdus sp.KOH毒素、Photorhabdus sp.MID10毒素、Photorhabdus sp.MOL毒素、Photorhabdus sp.MSW_058毒素、Photorhabdus sp.MSW_079毒素、Photorhabdus sp.NK2.1 TH毒素、Photorhabdus sp.NK2.5 TH毒素、Photorhabdus sp.NnMt2h毒素、Photorhabdus sp.NP1毒素、Photorhabdus sp.OH10毒素、Photorhabdus sp.OnIr40毒素、Photorhabdus sp.OnKn2毒素、Photorhabdus sp.PB10.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB16.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB17.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB17.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB2.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB22.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB22.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB32.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB33.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB33.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB37.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB39.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB4.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB41.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB45.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB47.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB47.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB5.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB5.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB50.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB51.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB52.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB54.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB59.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB6.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB67.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB67.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB68.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB7.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB78.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB80.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB80.4 TH毒素、Photorhabdus sp.Pjun毒素、Photorhabdus sp.RW14-46毒素、Photorhabdus sp.S10-54毒素、Photorhabdus sp.S12-55毒素、Photorhabdus sp.S14-60毒素、Photorhabdus sp.S15-56毒素、Photorhabdus sp.S5P8-50毒素、Photorhabdus sp.S7-51毒素、Photorhabdus sp.S8-52毒素、Photorhabdus sp.S9-53毒素、Photorhabdus sp.SJ2毒素、Photorhabdus sp.SN259毒素、Photorhabdus sp.SP1.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP16.4 TH毒素、Photorhabdus sp.SP21.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP3.4 TH毒素、Photorhabdus sp.SP4.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP7.3 TH毒素、Photorhabdus sp.TyKb140毒素、Photorhabdus sp.UK76毒素、Photorhabdus sp.VMG毒素、Photorhabdus sp.WA21C毒素、Photorhabdus sp.WkSs43毒素、Photorhabdus sp.Wx13毒素、Photorhabdus sp.X4毒素、Photorhabdus sp.YNb90毒素、及びPhotorhabdus sp.ZM毒素からなる群から選択される。
一部の実施形態では、Photorhabdus毒素は、Photorhabdus luminescens毒素である。
一部の実施形態では、真菌毒素は、Ascomycete真菌毒素である。
一部の実施形態では、Ascomycete真菌毒素は、Cordycipitaceae科の真菌毒素である。
一部の実施形態では、Cordycipitaceae真菌毒素は、Akanthomyces毒素、Ascopolyporus毒素、Beauveria毒素、Beejasamuha毒素、Cordyceps毒素、Coremiopsis毒素、Engyodontium毒素、Gibellula毒素、Hyperdermium毒素、Insecticola毒素、Isaria毒素、Lecanicillium毒素、Microhilum毒素、Phytocordyceps毒素、Pseudogibellula毒素、Rotiferophthora毒素、Simplicillium毒素、又はTorrubiella毒素である。
一部の実施形態では、Cordycipitaceae真菌毒素は、Beauveria毒素である。
一部の実施形態では、Beauveria毒素は、Beauveria alba毒素、Beauveria amorpha毒素、Beauveria arenaria毒素、Beauveria asiatica毒素、Beauveria australis毒素、Beauveria bassiana毒素、Cordyceps bassiana毒素、Beauveria brongniartii毒素、Beauveria brumptii毒素、Beauveria caledonica毒素、Beauveria chiromensis毒素、Beauveria coccorum毒素、Beauveria cretacea毒素、Beauveria cylindrospora毒素、Beauveria delacroixii毒素、Beauveria densa毒素、Beauveria dependens毒素、Beauveria doryphorae毒素、Beauveria effusa毒素、Beauveria epigaea毒素、Beauveria felina毒素、Beauveria geodes毒素、Beauveria globulifera毒素、Beauveria heimii毒素、Beauveria hoplocheli毒素、Beauveria kipukae毒素、Beauveria laxa毒素、Beauveria malawiensis毒素、Beauveria medogensis毒素、Beauveria melolonthae毒素、Beauveria nubicola毒素、Beauveria oryzae毒素、Beauveria paradoxa毒素、Beauveria paranensis毒素、Beauveria parasitica毒素、Beauveria petelotii毒素、Beauveria pseudobassiana毒素、Beauveria rileyi毒素、Beauveria rubra毒素、Beauveria shiotae毒素、Beauveria sobolifera毒素、Beauveria spicata毒素、Beauveria stephanoderis毒素、Beauveria sulfurescens毒素、Beauveria sungii毒素、Beauveria tenella毒素、Beauveria tundrensis毒素、Beauveria velata毒素、Beauveria varroae毒素、Beauveria vermiconia毒素、Beauveria vexans毒素、Beauveria viannai毒素、又はBeauveria virella毒素である。
一部の実施形態では、レクチンは、以下からなる群から選択される:Galanthus nivalis凝集素(GNA)、Sambucus nigraレクチン(SNA)、Maackia amurensis-II(MAL-II)、Erythrina cristagalliレクチン(ECL)、Ricinus communis凝集素-I(RCA)、ピーナッツ凝集素(PNA)、コムギ胚芽凝集素(WGA)、Griffonia simplicifolia-II(GSL-II)、Con A、Lens culinaris凝集素(LCA)、マンノース結合レクチン(MBL)、BanLec、ガレクチン、Phaseolus vulgaris白血球凝集素(PHA-L)、Phaseolus vulgaris赤血球凝集素(PHA-E)、及びDatura stramoniumレクチン(DSL)。
一部の実施形態では、レクチンは、GNAである。
一部の実施形態では、Azadirachta indica化合物は、アザジラクチン、アザジラジオン、アザジラジオノリド、デアセチルゲデュニン、デアセチルアザジラクチノール、デスフラノアザジラジオン、エポキシアザジラジオン、ゲデュニン、マムーディン、ニームフルイチンA、ニームフルイチンB、ニンボリド、ニンビン、ニモリシノール、酢酸オーチニン、サランニン、サランノール、アルファ-ニモラクトン、ベータ-ニモラクトン、2’,3’-ジヒドロサラニン、3-デアセチルサランニン、6-デアセチルニンビン、7-アセチル-16,17-デヒドロ-16-ヒドロキシネオトリキレノン、7-ベンゾイルニンボシノール、7-デアセチル-7-ベンゾイルエポキシアザジラジオン、7-デアセチル-7-ベンゾイルゲデュニン、7-デアセチル-17-エピニモリシノール、15-ヒドロキシアザジラジオン、17-エピ-17-ヒドロキシアザジラジオン、17-エピアザジラジオン、20,21,22,23-テトラヒドロ-23-オキソアザジロン、22,23-ジヒドロニモシノール、又は28-デオキソニンボリドである。
一部の実施形態では、ホウ素化合物は、ホウ砂、ホウ酸、八ホウ酸二ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、メタホウ酸ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム十水和物、酸化ホウ素、炭化ホウ素、窒化ホウ素、三臭化ホウ素、三塩化ホウ素、及び三フッ化ホウ素からなる群から選択される。
一部の実施形態では、ウイルスは、Baculoviridaeウイルスである。
一部の実施形態では、Baculoviridaeウイルスは、ベータバキュロウイルスである。
一部の実施形態では、ベータバキュロウイルスは、Adoxophyes oranaグラニュロウイルス、Agrotis segetumグラニュロウイルス、Artogeia rapaeグラニュロウイルス、Pieris brassicaeグラニュロウイルス、Choristoneura fumiferanaグラニュロウイルス、Choristoneura occidentalisグラニュロウイルス、Clostera anachoretaグラニュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルスA、Clostera anastomosisグラニュロウイルスHenan、Clostera anastomosisグラニュロウイルスB、Cnaphalocrocis medinalisグラニュロウイルス、Cryptophlebia leucotretaグラニュロウイルス、Cydia pomonellaグラニュロウイルス、Cydia pomonella granulosis virus(Mexican分離株)、Diatraea saccharalisグラニュロウイルス、Epinotia aporemaグラニュロウイルス、Erinnyis elloグラニュロウイルス、Harrisina brilliansグラニュロウイルス、Helicoverpa armigeraグラニュロウイルス、Lacanobia oleraceaグラニュロウイルス、Mocis latipesグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスA、Pseudalatia unipunctaグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスB、Mythimna unipunctaグラニュロウイルス、Phthorimaea operculellaグラニュロウイルス、Plodia interpunctellaグラニュロウイルス、Plutella xylostellaグラニュロウイルス、Spodoptera frugiperdaグラニュロウイルス、Spodoptera lituraグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルス LBIV-12、Xestia c-nigrumグラニュロウイルス、未分類のベータバキュロウイルス、Achaea janataグラニュロウイルス、Adoxophyes honmaiグラニュロウイルス、Agrotis exclamationisグラニュロウイルス、Amelia palloranaグラニュロウイルス、Andraca bipunctataグラニュロウイルス、Autographa gammaグラニュロウイルス、Caloptilia theivoraグラニュロウイルス、Choristoneura murinanaグラニュロウイルス、Choristoneura viridisバキュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルス、Cnephasia longanaグラニュロウイルス、Estigmene acreaグラニュロウイルス、Euxoa ochrogasterグラニュロウイルス、Heliothis armigeraグラニュロウイルス、Hoplodrina ambiguaグラニュロウイルス、Hyphantria cuneaグラニュロウイルス、Natada narariaグラニュロウイルス、Nephelodes emmedoniaグラニュロウイルス、Pandemis limitataグラニュロウイルス、Peridorma morpontoraグラニュロウイルス、Pieris rapaeグラニュロウイルス、Plathypena scabraグラニュロウイルス、Pseudaletiaバキュロウイルス、Scotogramma trifoliiグラニュロウイルス、Spodoptera androgeaグラニュロウイルス、Spodoptera littoralisグラニュロウイルス、Tecia solanivoraグラニュロウイルス、又はMocis種Granulovirusである。
一部の実施形態では、IAは、Photorhabdus luminescens毒素、Beauveria bassiana毒素、Galanthus nivalis凝集素(GNA)、アザジラクチン化合物、ホウ酸、及びCydia pomonellaグラニュロウイルス(CpGV)からなる群から選択される。
一部の実施形態では、Photorhabdus luminescens毒素は、Photorhabdus luminescens毒素複合体(Tca)を含む。
一部の実施形態では、Tcaは、TcaAタンパク質(配列番号616)、TcaBタンパク質(配列番号617)、TcaCタンパク質(配列番号618)、及びTcaZタンパク質(配列番号619)を含む。
一部の実施形態では、Beauveria bassiana毒素は、ビューベリシン毒素である。
一部の実施形態では、ビューベリシン毒素は、化学式C4557を有するビューベリシン毒素、化学式C4659を有するビューベリシンA毒素、又は化学式C4761を有するビューベリシンB毒素である。
一部の実施形態では、Beauveria bassiana毒素は、Beauveria bassiana株ANT-03胞子から単離されたビューベリシン毒素である。
一部の実施形態では、GNAは、配列番号35に示されるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、CpGVは、Cydia pomonellaグラニュロウイルス分離株V22ウイルスである。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である。
一部の実施形態では、Btt毒素は、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である。
一部の実施形態では、CRIPは、U1-アガトキシン-Ta1bペプチド、U1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)、イソギンチャク毒素、Av3バリアントポリペプチド(AVP)、Phoneutria毒素、又はアトラコトキシン(ACTX)である。
一部の実施形態では、U1-アガトキシン-Ta1bペプチドは、配列番号1に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、U1-アガトキシン-Ta1bペプチドは、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、TVPは、配列番号2~15、49~53、2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、及び653~654のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、TVPは、配列番号2~15、49~53、2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、又は653~654のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、イソギンチャク毒素は、Av2毒素又はAv3毒素である。
一部の実施形態では、Av2毒素は、配列番号588に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、Av2毒素は、配列番号588に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、Av3毒素は、配列番号44に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、Av3毒素は、配列番号44に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、AVPは、AVPaペプチド、AVPa-C1ペプチド、又はAVPbペプチドである。
一部の実施形態では、AVPa毒素は、配列番号45に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、AVPa毒素は、配列番号45に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、AVPa-C1毒素は、配列番号46に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、AVPa-C1毒素は、配列番号46に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、AVPb毒素は、配列番号47に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、AVPb毒素は、配列番号47に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、CRIPは、クテニトキシン(CNTX)である。
一部の実施形態では、CNTXは、Γ-CNTX-Pn1aである。
一部の実施形態では、Γ-CNTX-Pn1aは、配列番号65に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、Γ-CNTX-Pn1aは、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、CRIPは、ACTXである。
一部の実施形態では、ACTXは、U-ACTXペプチド、オメガ-ACTXペプチド、又はカッパ-ACTXペプチドである。
一部の実施形態では、ACTXは、U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、κ-ACTX-Hv1a、κ+2-ACTX-Hv1a、ω-ACTX-Hv1a、又はω+2-ACTX-Hv1aである。
一部の実施形態では、ACTXは、配列番号60~64及び594のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、ACTXは、配列番号60~64及び594のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、ACTXは、配列番号61に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、ACTXは、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、CRIPは、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチド、配列番号2~15、49~53、2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、若しくは653~654のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するTVP、配列番号47に示されるアミノ酸配列を有するAv3バリアントポリペプチド(AVP)、配列番号65に示されるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a、又は配列番号61に示されるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1aからなる群から選択される。
一部の実施形態では、IAとCRIPの比は、約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、又は1:10,000である。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素であり、CRIPは、ACTXであり、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、及び毒素とACTXの比は、約1:1~約1:5000である。
一部の実施形態では、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素とACTXの比は、約1:4000である。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素であり、CRIPは、ACTXであり、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素とACTXの比は、約1:1~約1:10である。
一部の実施形態では、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素とACTXの比は、約1:9.2である。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素であり、CRIPは、AVPであり、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素とAVPの比は、約1:1~約1:1.5である。
一部の実施形態では、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素とAVPの比は、約1:1.375である。
一部の実施形態では、IAは、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素であり、CRIPは、ACTXであり、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素とACTXの比は、約1:1~約1:10である。
一部の実施形態では、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素とACTXの比は、約1:8.75である。
一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)本明細書に記載の1つ以上の殺虫剤(IA)と、を含む組み合わせを含み、賦形剤を更に含む、組成物を提供する。
一部の実施形態では、本発明は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、を含む組み合わせを提供する。
一部の実施形態では、本発明は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、を含む組み合わせを提供する。
一部の実施形態では、本発明は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3-バリアントポリペプチド(AVP)と、を含む組み合わせを提供する。
一部の実施形態では、本発明は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、を含む組み合わせを提供する。
一部の実施形態では、本発明は、Beauveria bassiana株ANT-03胞子と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含む組み合わせを提供する。
一部の実施形態では、本発明は、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176株から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含む組み合わせを提供する。
一部の実施形態では、本発明は、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含む組み合わせを提供する。
一部の実施形態では、本発明は、Bacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含む組み合わせを提供する。
一部の実施形態では、本発明は、Photorhabdus luminescens毒素と、ACTXと、を含む組み合わせを提供し、Photorhabdus luminescens毒素が、TcaA(配列番号616)、TcaB(配列番号617)、TcaC(配列番号618)、及びTcaZ(配列番号619)を含むPhotorhabdus luminescens毒素複合体(Tca)であり、ACTXペプチドが、U+2-ACTX-Hv1a毒素(配列番号61)である。
一部の実施形態では、本発明は、Galanthus nivalis凝集素(GNA)と、ACTXと、を含む組み合わせを提供し、GNAが、配列番号35に示されるアミノ酸配列を有し、ACTXペプチドが、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素である。
一部の実施形態では、本発明は、アザジラクチンと、ACTXと、を含む組み合わせを提供し、アザジラクチンが、化学式:C354416を有し、ACTXが、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素である。
一部の実施形態では、本発明は、ホウ酸化合物と、ACTXと、を含む組み合わせを提供し、ホウ酸化合物が、HBOの化学式を有し、ACTXペプチドが、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素である。
一部の実施形態では、本発明は、Cydia pomonellaグラニュロウイルス(CpGV)と、ACTXと、を含む組み合わせを提供し、CpGVが、Cydia pomonellaグラニュロウイルス分離株V22ウイルスであり、ACTXペプチドが、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素である。
一部の実施形態では、本発明は、昆虫を制御するために、本明細書に記載される(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)1つ以上の殺虫剤(IA)と、(3)1つ以上の賦形剤と、を含む組み合わせを使用する方法であって、当該方法が、少なくとも1つのCRIPと、少なくとも1つのIAと、の組み合わせを提供することと、昆虫の部位に、当該組み合わせを適用することと、を含む。
一部の実施形態では、昆虫は、以下からなる群から選択される:アヒマスフィンクスモス(ホーンワーム)(Eumorpha achemon)、アルファルファキャタピラー(Colias eurytheme)、アーモンドモス(Caudra cautella)、アモルビアモス(Amorbia humerosana)、アーミーワーム(Spodoptera spp.(例えば、exigua、frugiperda、littoralis)、Pseudaletia unipuncta)、アーティチョークプルームモス(Platyptilia carduidactyla)、アゼリアキャタピラー(Datana major)、バッグワーム(Thyridopteryx)、ephemeraeformis)、バナナモス(Hypercompe scribonia)、バナナスキッパー(Erionota thrax)、ブラックヘディッドバドワーム(Acleris gloverana)、カルフォルニアオークワーム(Phryganidia californica)、スプリングキャンカーワーム(Paleacrita merriccata)、チェリーフルーツワーム(Grapholita packardi)、チャイナマークモス(Nymphula stagnata)、シトラスカットワーム(Xylomyges curialis)、コドリングモス(Cydia pomonella)、クランベリーフルーツワーム(Acrobasis vaccinii)、クロスストライプドキャベッジワーム(Evergestis rimosalis)、カットワーム(Noctuid種、Agrotis ipsilon)、ダグラスファータソックモス(Orgyia pseudotsugata)、エルロモス(ホーンワーム)(Erinnyis ello)、エルムスパンワーム(Ennomos subsignaria)、ヨーロピアングレープヴァインモス(Lobesia botrana)、ヨーロピアンスキッパー(Thymelicus lineola(エセックススキッパー)、フォールウェブワーム(Melissopus latiferreanus、フィルバートリーフローラー(Archips rosanus、フルーツツリーリーフローラー(Archips argyrospilia、グレープベリーモス(Paralobesia viteana、グレープリーフローラー(Platynota stultana、グレープリーフスケルトナイザー(Harrisina americana(グラウンドオンリー)、グリーンクローバーワーム(Plathypena scabra、グリーンストライプドメープルワーム(Dryocampa rubicunda、Gummosos-Batrachedra、Comosae(ホッジズ)、ジプシーモス(Lymantria dispar)、ヘムロックルーパー(Lambdina fiscellaria)、ホーンワーム(Manduca spp.)、インポーテッドキャベッジワーム(Pieris rapae)、アイオモス(Automeris io)、ジャックパインバドワーム(Choristoneura pinus)、ライトブラウンアップルモス(Epiphyas postvittana)、メロンワーム(Diaphania hyalinata)、ミモザウェブワーム(Homadaula anisocentra)、オブリークバンディッドリーフローラー(Choristoneura rosaceana)、オリアンダーモス(Syntomeida epilais)、オムニバラスリーフローラー(Playnota stultana)、オムニバラスルーパー(Sabulodes aegrotata)、オレンジドッグ(Papilio cresphontes)、オレンジトートリクス(Argyrotaenia citrana)、オリエンタルフルーツモス(Grapholita molesta)、ピーチツイグボーア(Anarsia lineatella)、パインバタフライ(Neophasia menapia)、ポッドワーム(Heliocoverpa zea)、レッドバンディッドリーフローラー(Argyrotaenia velutinana)、レッドハンプトキャタピラー(Schizura concinna)、リンドワームコンプレックス(Various Leps.)、サドルバックキャタピラー(Sibine stimulea )、サドルプロミネントキャタピラー(Heterocampa guttivitta)、ソルトマーシュキャタピラー(Estigmene acrea)、ソッドベッドワーム(Crambus spp.)、スパンワーム(Ennomos subsignaria )、フォールキャンカーワーム(Alsophila pometaria)、スプルースバドワーム(Choristoneura fumiferana)、テントキャタピラー(Various Lasiocampidae )、Thecla-Thecla Basilides(Geyr)Thecla basilides)、タバコホーンワーム(Manduca sexta)、タバコモス(Ephestia elutella)、タフテッドアップルバドモス(Platynota idaeusalis)、トゥイグボーア(Anarsia lineatella)、ベアリアゲイティドカットワーム(Peridroma saucia)、ベアリアゲイティドリーフローラー(Platynota flavedana)、ベルベットビーンキャタピラー(Anticarsia gemmatalis)、ウォルナットキャタピラー(Datana integerrima)、ウェブワーム(Hyphantria cunea)、ウエスタンタソックモス(Orgyia vetusta)、サザンコーンストークボーア(Diatraea crambidoides)、コーンイアワーム、スイートポテトウィービル、ペッパーウィービル、シトラスルートウィービル、ストロベリーウィービル、ピーカンウィービル、フィルバートウィービル、ライスウォーターウィービル、アルファルファウィービル、クローバーウィービル、ティーショット-ホールボーア、ルートウィービル、シュガーケインビートル、コーヒーベリーボーア、アニュアルブルーグラスウィービル(Listronotus maculicollis)、アジアティックガーデンビートル(Maladera castanea)、ヨーロピアンチェ―ファー(Rhizotroqus majalis)、グリーンジューンビートル(Cotinis nitida)、ジャパニーズビートル(Popillia japonica)、メイオアジューンビートル(Phyllophaga sp.)、ノーザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala borealis)、オリエンタルビートル(Anomala orientalis)、サザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala lurida)、ビルバグ(Curculionoidea)、Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
一部の実施形態では、本発明は、Bacillus thuringiensis毒素耐性昆虫を制御するために、本明細書に記載される(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)1つ以上の殺虫剤(IA)と、任意選択的に(3)1つ以上の賦形剤と、の組み合わせを使用する方法を提供し、少なくとも1つのCRIPと、少なくとも1つのIAと、の組み合わせを提供することと、次いで、昆虫の部位に、当該組み合わせを適用することと、を含む。
一部の実施形態では、Bacillus thuringiensis毒素耐性昆虫は、以下からなる群から選択される:Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
一部の実施形態では、本発明は、害虫を駆除、制御、又は阻害する方法を提供し、害虫の部位に、又は害虫による攻撃を受けやすい植物若しくは動物に、農薬有効量の、本明細書に記載される(1)1つ以上のCRIP若しくはその薬学的に許容される塩、1つ以上のCRIP-殺虫タンパク質若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの組み合わせと、(2)1つ以上の殺虫剤(IA)と、任意選択的に(3)1つ以上の賦形剤と、を含む組み合わせを適用することを含む。
一部の実施形態では、害虫は、以下からなる群から選択される:アヒマスフィンクスモス(ホーンワーム)(Eumorpha achemon)、アルファルファキャタピラー(Colias eurytheme)、アーモンドモス(Caudra cautella)、アモルビアモス(Amorbia humerosana)、アーミーワーム(Spodoptera spp.(例えば、exigua、frugiperda、littoralis)、Pseudaletia unipuncta)、アーティチョークプルームモス(Platyptilia carduidactyla)、アゼリアキャタピラー(Datana major)、バッグワーム(Thyridopteryx)、ephemeraeformis)、バナナモス(Hypercompe scribonia)、バナナスキッパー(Erionota thrax)、ブラックヘディッドバドワーム(Acleris gloverana)、カルフォルニアオークワーム(Phryganidia californica)、スプリングキャンカーワーム(Paleacrita merriccata)、チェリーフルーツワーム(Grapholita packardi)、チャイナマークモス(Nymphula stagnata)、シトラスカットワーム(Xylomyges curialis)、コドリングモス(Cydia pomonella)、クランベリーフルーツワーム(Acrobasis vaccinii)、クロスストライプドキャベッジワーム(Evergestis rimosalis)、カットワーム(Noctuid種、Agrotis ipsilon)、ダグラスファータソックモス(Orgyia pseudotsugata)、エルロモス(ホーンワーム)(Erinnyis ello)、エルムスパンワーム(Ennomos subsignaria)、ヨーロピアングレープヴァインモス(Lobesia botrana)、ヨーロピアンスキッパー(Thymelicus lineola(エセックススキッパー)、フォールウェブワーム(Melissopus latiferreanus、フィルバートリーフローラー(Archips rosanus、フルーツツリーリーフローラー(Archips argyrospilia、グレープベリーモス(Paralobesia viteana、グレープリーフローラー(Platynota stultana、グレープリーフスケルトナイザー(Harrisina americana(グラウンドオンリー)、グリーンクローバーワーム(Plathypena scabra、グリーンストライプドメープルワーム(Dryocampa rubicunda、Gummosos-Batrachedra、Comosae(ホッジズ)、ジプシーモス(Lymantria dispar)、ヘムロックルーパー(Lambdina fiscellaria)、ホーンワーム(Manduca spp.)、インポーテッドキャベッジワーム(Pieris rapae)、アイオモス(Automeris io)、ジャックパインバドワーム(Choristoneura pinus)、ライトブラウンアップルモス(Epiphyas postvittana)、メロンワーム(Diaphania hyalinata)、ミモザウェブワーム(Homadaula anisocentra)、オブリークバンディッドリーフローラー(Choristoneura rosaceana)、オリアンダーモス(Syntomeida epilais)、オムニバラスリーフローラー(Playnota stultana)、オムニバラスルーパー(Sabulodes aegrotata)、オレンジドッグ(Papilio cresphontes)、オレンジトートリクス(Argyrotaenia citrana)、オリエンタルフルーツモス(Grapholita molesta)、ピーチツイグボーア(Anarsia lineatella)、パインバタフライ(Neophasia menapia)、ポッドワーム(Heliocoverpa zea)、レッドバンディッドリーフローラー(Argyrotaenia velutinana)、レッドハンプトキャタピラー(Schizura concinna)、リンドワームコンプレックス(Various Leps.)、サドルバックキャタピラー(Sibine stimulea )、サドルプロミネントキャタピラー(Heterocampa guttivitta)、ソルトマーシュキャタピラー(Estigmene acrea)、ソッドベッドワーム(Crambus spp.)、スパンワーム(Ennomos subsignaria )、フォールキャンカーワーム(Alsophila pometaria)、スプルースバドワーム(Choristoneura fumiferana)、テントキャタピラー(Various Lasiocampidae )、Thecla-Thecla Basilides(Geyr)Thecla basilides)、タバコホーンワーム(Manduca sexta)、タバコモス(Ephestia elutella)、タフテッドアップルバドモス(Platynota idaeusalis)、トゥイグボーア(Anarsia lineatella)、ベアリアゲイティドカットワーム(Peridroma saucia)、ベアリアゲイティドリーフローラー(Platynota flavedana)、ベルベットビーンキャタピラー(Anticarsia gemmatalis)、ウォルナットキャタピラー(Datana integerrima)、ウェブワーム(Hyphantria cunea)、ウエスタンタソックモス(Orgyia vetusta)、サザンコーンストークボーア(Diatraea crambidoides)、コーンイアワーム、スイートポテトウィービル、ペッパーウィービル、シトラスルートウィービル、ストロベリーウィービル、ピーカンウィービル、フィルバートウィービル、ライスウォーターウィービル、アルファルファウィービル、クローバーウィービル、ティーショット-ホールボーア、ルートウィービル、シュガーケインビートル、コーヒーベリーボーア、アニュアルブルーグラスウィービル(Listronotus maculicollis)、アジアティックガーデンビートル(Maladera castanea)、ヨーロピアンチェ―ファー(Rhizotroqus majalis)、グリーンジューンビートル(Cotinis nitida)、ジャパニーズビートル(Popillia japonica)、メイオアジューンビートル(Phyllophaga sp.)、ノーザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala borealis)、オリエンタルビートル(Anomala orientalis)、サザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala lurida)、ビルバグ(Curculionoidea)、Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
一部の実施形態では、害虫は、以下からなる群から選択される:Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
本明細書の実施例は、本発明を限定することを意図するものではなく、また本発明を限定するために使用されるべきではなく、それらは本発明を例示するために提供されているに過ぎない。
実施例1:Bti毒素及びU+2-ACTX-Hv1a
3齢Aedes aegypti(蚊)幼虫に対する液体溶液アッセイにおいて、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)毒素及びU+2-ACTX-Hv1aの組み合わせを、それらの殺虫活性について評価した。簡潔に、以下のいずれかの処理:(1)U+2-ACTX-Hv1aとBti毒素との組み合わせ、(2)Bti毒素単独、(3)U+2-ACTX-Hv1a単独、又は(4)水(未処理対照として)を蚊の幼虫に適用し、次いで、死亡率を評価した。
処理
処理は、以下の成分からなる組成物であった:
(1)Bti毒素(0.25μg/mL又は0.25ppm)。Bti毒素の効果を評価するために、Becker Microbial Products,Inc.からのAQUABAC XT(登録商標)を使用した。AQUABAC XT(登録商標)は、以下の成分:6~10%(約8%)のBacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144の固形物、胞子、及び殺虫毒素(当該殺虫毒素が、δ-エンドトキシンであり、1,200国際毒性単位(ITU/mg)に相当する(48.4億ITU/ガロン又は12億ITU/リットル))と、約92%の他の/不活性成分と、からなる。AQUABAC XT(登録商標)は、Becker Microbial Products,Inc.,11146 N.W.69th Place,Parkland,FL 33076,U.S.A.から市販されている。ウェブサイト:https://beckermicrobialproductsinc.com/、製品コード:27376、EPA登録番号62637-1。
(2)U+2-ACTX-Hv1a(1mg/mL)。本明細書に記載の方法に従って、「GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA」(配列番号61)のアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a(「Spear」とも称される)を得た。
(3)Bti毒素+U+2-ACTX-Hv1a。Bti毒素及びU+2-ACTX-Hv1aを、上記のように調製し、組み合わせた。最終的な組み合わせ組成物は、以下の成分からなっていた:組成物の総体積の0.1% w/vのU+2-ACTX-Hv1a、0.000025% v/vのBti毒素、及び残りは水。
(4)対照(水)。
U+2-ACTX-Hv1aの生成
簡潔に、U+2-ACTX-Hv1aを得るために、組換えK.lactis発現システムを使用した。発現ベクターであるpKLAC1及びK.lactis株であるYCT306のいずれもNew England Biolabs(登録商標)(Ipswich,MA,USA)から入手することができる。U+2-ACTX-Hv1aをコードし、LAC4プロモーターの制御下で動作可能なコドン最適化導入遺伝子を、pKLAC1にクローニングし、YCT306に形質転換した。得られた形質転換体は、α接合因子シグナルペプチド、Kex2切断部位、及び成熟U+2-ACTX-Hv1aを含むプレプロペプチドを産生した。α接合因子シグナルペプチドは、プレプロペプチドを内因性分泌経路を経由するように誘導し、その後、成熟U+2-ACTX-Hv1aが、増殖培地に放出される。逆相HPLCを使用して、0.1%のトリフロロ酢酸を含む水、及びアセトニトリルを移動相として使用して、モノリシックC18カラムを介して増殖培地からU+2-ACTX-Hv1aを精製した。20~40%のアセトニトリルを使用する溶出プロトコルをU+2-ACTX-Hv1aの精製に使用した。U+2-ACTX-Hv1aは、34~36%のアセトニトリルの範囲で溶出された。次いで、得られたU+2-ACTX-Hv1aペプチドは、水を凝集剤として使用して、界面活性剤とともに、U+2-ACTX-Hv1aペプチドをブレンドして凝集させ、湿潤性顆粒(WG)に製剤化した。WGを生成するための方法は当該技術分野で周知である。
液体溶液アッセイ
各処理を9回試験した(N=9)。ここで、使用したBti毒素の量は、0.25μg/mL、又は0.25ppmである。この実施例で使用したU+2-ACTX-Hv1aの量は、1mg/mLであった。
前述の処理を試験するために、30mLの水を含む59mLカップからなるアリーナを確立した。各カップに、蚊の3齢幼虫(N=10)を加えた。餌は提供されなかった。次に、所与の処理溶液をカップに加え、カップを蓋で密封した。次いで、カップを、蛍光成長灯(fluorescent grow light)下のトレイ上に置いた。各処理について3つの複製を提供した。
24時間後、U+2-ACTX-Hv1aとBti毒素の組み合わせは、95%の死亡率に対応する、驚くべき相乗効果をもたらした。あるいは、Bti毒素単独では57%の死亡率しかもたらさず、U+2-ACTX-Hv1a単独では4%の死亡率しかもたらさなかった。したがって、U+2-ACTX-Hv1aとBti毒素の組み合わせは、U+2-ACTX-Hv1aとBti毒素の組み合わせの予想される相加効果よりも大きく、驚くべき相乗効果をもたらした。図1.
実施例2:Btk毒素及びΓ-CNTX-Pn1a
Spodoptera exigua(ビートアーミーワーム)に対する葉面噴霧バイオアッセイにおいて、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)毒素及びΓ-CNTX-Pn1aの組み合わせを、それらの殺虫活性について評価した。簡潔に、以下のいずれかの処理:(1)Γ-CNTX-Pn1a単独、(2)Btk毒素単独、(3)Γ-CNTX-Pn1a及びBtk毒素の組み合わせ、又は(4)対照(0.125%のVintre、界面活性剤)を葉に噴霧し、次いで、死亡率を評価した。
処理
処理は、以下の成分からなる組成物であった:
(1)Btk毒素(0.0107% v/v)。Btk毒素を評価するために、AEF Global Inc.のBioProtec Plus(商標)を使用した。BioProtec Plus(商標)は、14.49%のBacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19の発酵固形物、胞子、及び殺虫毒素(製品1mg当たり17,500キャベッジルーパー単位(CLU)(製品1ガロン当たり760億CLUに相当)の効力を有する)と、85.51%の他の/不活性成分と、からなる。14.49%のBacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19の発酵固形物、胞子、及び殺虫毒素からなるBioProtec Plus(商標)は、AEF Global Inc.から市販されている(925 des calfats,US-QC,Levis,G6Y9E8,Canadaウェブサイト:http://www.aefglobal.com/en/、CAS番号:68038-71-1、ロット番号:31G18)。
(2)Γ-CNTX-Pn1a(0.034% w/v、0.152% w/v、及び0.675% w/v)。「GSCADINGACKSDCDCCGDSVTCDCYWSDSCKCRESNFKIGMAIRKKFC」(配列番号65)のアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1aを、以下に記載の方法に従って、イオン交換クロマトグラフィーを使用して得た。
(3)Btk毒素+-CNTX-Pn1a.Btk毒素及びΓ-CNTX-Pn1aを上記のように調製し、組み合わせた。試験した最終的な組み合わせ組成物は、以下の通りであった:
低用量Γ-CNTX-Pn1a:組成物の総体積の0.034% w/vのΓ-CNTX-Pn1a、0.125% v/vのVintre、0.0107% v/vのBtk毒素、残りは水。
中間用量Γ-CNTX-Pn1a:組成物の総体積の0.152% w/vのΓ-CNTX-Pn1a、0.125% v/vのVintre、0.0107% v/vのBtk毒素、残りは水。
高用量Γ-CNTX-Pn1a:組成物の総体積の0.675% w/vのΓ-CNTX-Pn1a、0.125% v/vのVintre、0.0107% v/vのBtk毒素、残りは水。
(4)対照(0.125%のVintre(登録商標))。Vintre(登録商標)(ここ及び上記の治療で使用)は、界面活性剤であり、これは、8.92%のアルコールエトキシレートと、91.08%の噴霧アジュバントとしての無効成分(ORO AGRI,Inc,990 Trophy Club Dr.,Trophy Club,TX 76262 USA)と、からなる。Vintreは、いくつかのベンダーから市販されており、当業者に周知の製品である。
Γ-CNTX-Pn1aの生成
「GSCADINGACKSDCDCCGDSVTCDCYWSDSCKCRESNFKIGMAIRKKFC」(配列番号65)のアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1aのDNA構築物をコドン最適化し、Kluyveromyces lactis α接合因子プレ/プロ配列(αMF)との融合体として合成し、pKlac1(New England Biolabs)のNotI及びHindIII制限部位にライゲーションした。ベクターをSacIIで消化し、線状化し、細菌Ori及び選択マーカーを除去し、次いで、Kluyveromyces lactisのエレクトロコンピテント細胞にエレクトロポレーションした。唯一の窒素源としてアセトアミドを含む選択プレート上で、複数の遺伝子コピー形質転換体を選択した。Γ-CNTX-Pn1aを発現するクローンを、Chromolith C18カラム(4.6×100mm)でのHPLCによって評価し、2mL/分の流速で、8分間にわたる15-33%のアセトニトリルの勾配で溶出した。
Sephadex C-25樹脂を使用したカチオン交換クロマトグラフィーによって、Γ-CNTX-Pn1aを精製した。上清を樹脂に結合させ、塩化ナトリウムの濃度を増加させながら溶出した。溶出液を透析し、凍結乾燥し、水に再懸濁した。
葉面噴霧バイオアッセイ
Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)毒素とΓ-CNTX-Pn1aを組み合わせた効果を、Lepidopteran種であるビートアーミーワーム(Spodoptera exigua)に対して試験した。ビートアーミーワームの死亡率は、(1)Γ-CNTX-Pn1a単独、(2)Btk毒素単独、(3)Γ-CNTX-Pn1a及びBtk毒素の組み合わせ、又は(4)対照(0.125%のVintre、界面活性剤)のいずれかを昆虫と対峙させて評価した。
これらの組み合わせの効果を試験するために、ロメインレタスを直径30mmのディスクに切断し、次いで、140ppmの漂白剤溶液を使用して滅菌し、次いで、ディスクを3回すすいだ。次いで、ロメインレタスのディスクを発泡スチロール板に固定し、所与の処理液を噴霧した。ディスクを裏返し、再度噴霧し、乾燥させ、アリーナに配置した。
アリーナは、5mLの1%の寒天を含むる32ウェル飼育トレイであった。1つのロメインレタスのディスクを各ウェルに配置し、1枚の葉ディスク当たり1匹の2齢ビートアーミーワームを配置した。次いで、トレイを、28℃のインキュベーターに配置した。各処理を、12枚のディスクで試験し、3回の複製を行った(N=36)。
まず、Btk毒素と組み合わせた場合のΓ-CNTX-Pn1aの観察を可能にするために、Btk毒素の亜致死量(すなわち、集団の約20%を死滅させる用量、又は約LD20)を決定した。
ここで、Btk毒素の亜致死量は736ppm(0.736mg/mL)であり、集団の25%が死亡した。図2.Btk毒素の亜致死量が特定されたら、Γ-CNTX-Pn1a+Btk毒素の組み合わせについて、LD50量に達するまでΓ-CNTX-Pn1aの用量を増加させた。したがって、最終的な組み合わせ組成物は、以下の通りであった:(1)低用量のΓ-CNTX-Pn1a:組成物の総体積の0.034% w/vのΓ-CNTX-Pn1a、0.125% v/vのVintre、0.0107% v/vのBtk毒素、残りは水、(2)中間用量のΓ-CNTX-Pn1a:組成物の総体積の0.152% w/vのΓ-CNTX-Pn1a、0.125% v/vのVintre、0.0107% v/vのBtk毒素、残りは水、及び(3)高用量のΓ-CNTX-Pn1a:組成物の総体積の0.675% w/vのΓ-CNTX-Pn1a、0.125% v/vのVintre、0.0107% v/vのBtk毒素、残りは水。
図2に示されるように、1.6mg/mLのΓ-CNTX-Pn1aの使用は、6%の死亡率をもたらしたが、0.736mg/mLのBtk毒素と組み合わせた場合、死亡率は28%に跳ね上がった。同様に、6.75mg/mLのΓ-CNTX-Pn1aは、3%の死亡率をもたらしたが、0.736mg/mLのBtk毒素と組み合わせた場合、死亡率は50%であった。この実施例は、Btk毒素とΓ-CNTX-Pn1aの組み合わせが、予期しない効果をもたらすことを示す。
実施例3:Btk毒素及びAVP
Spodoptera exigua(ビートアーミーワーム)に対する葉面噴霧バイオアッセイにおいて、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki(Btk)毒素とAv3バリアントポリペプチド(AVP)の組み合わせを、それらの殺虫活性について評価した。簡潔に、以下のいずれかの処理:(1)AVP単独、(2)Btk毒素単独、(3)AVP及びBtk毒素の両方の組み合わせ、又は(4)対照(0.125%のVintre、界面活性剤)を葉に噴霧し、次いで、死亡率を評価した。
処理
処理は、以下の成分からなる組成物であった:
(1)Btk毒素(800ppm又は0.8mg/mL)。Btk毒素を評価するために、AEF Global Inc.のBioProtec Plus(商標)を使用した。BioProtec Plus(商標)は、14.49%のBacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19の発酵固形物、胞子、及び殺虫毒素(製品1mg当たり17,500キャベッジルーパー単位(CLU)(製品1ガロン当たり760億CLUに相当)の効力を有する)と、85.51%の他の/不活性成分と、からなる。14.49%のBacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19の発酵固形物、胞子、及び殺虫毒素からなるBioProtec Plus(商標)は、AEF Global Inc.から市販されている(925 des calfats,US-QC,Levis,G6Y9E8,Canadaウェブサイト:http://www.aefglobal.com/en/、CAS番号:68038-71-1、ロット番号:31G18)。
(2)AVP(1、3、及び9mg/mL)。評価したAv3バリアントポリペプチド(AVP)は、「KSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPK」(配列番号47)(AVPb)のアミノ酸配列を有する。AVPを生成する方法を、以下に詳細に提供する。
(3)Btk毒素+AVP。Btk毒素及びAVPを上記のような量で調製し、組み合わせた。試験した最終的な組み合わせ組成物は、以下の通りであった:
低用量AVP:組成物の総体積の0.1% w/vのAVP、0.125% v/vのVintre、0.0116% v/vのBtk毒素、残りは水。
中間用量AVP:組成物の総体積の0.3% w/vのAVP、0.125% v/vのVintre、0.0116% v/vのBtk毒素、残りは水。
高用量AVP:組成物の総体積の0.9% w/vのAVP、0.125% v/vのVintre、0.0116% v/vのBtk毒素、残りは水。
(4)対照(0.125%のVintre(登録商標))。Vintre(登録商標)は、界面活性剤であり、これは、8.92%のアルコールエトキシレートと、91.08%の噴霧アジュバントとしての無効成分(ORO AGRI,Inc,990 Trophy Club Dr.,Trophy Club,TX 76262 USA)と、からなる。Vintreは、いくつかのベンダーから市販されており、当業者に周知の製品である。
AVPの生成
評価したAv3バリアントポリペプチド(AVP)は、簡潔に、アミノ酸配列「RSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPKV」(配列番号44)を有するWT-Av3ペプチドを鋳型として使用し、R1K置換及びC末端欠失を有するペプチドを産生するように変異させた。得られた変異体ペプチドは、アミノ酸配列「KSCCPCYWGGCPWGQNCYPEGCSGPK」(配列番号47)を有するAVPbペプチドである。
まず、AVPペプチドの発現ベクターを生成することによって、AVPbを得た。これは、pKLAC1酵母発現ベクター(NEW ENGLAND BIOLABS(登録商標)から入手可能)に基づいて生成された。AVPは、分泌ペプチドとして発現され、アセトアミダーゼ遺伝子の発現を選択マーカーとした。pLB102の発現ベクターを、制限酵素SacIIで消化することによって線状化し、次いで、エレクトロポレーションによって、線状pLB102プラスミドをK.lactis細胞に形質転換し、得られた96の陽性形質転換コロニーを培養した。2L発酵の接種のための産生株の種培養を、3%のsolulys 095K+3%のグルコース、及び50μg/mLのカナマイシンを含む種培地で24時間前に行った。次いで、30mLの種培養物を使用して、2L発酵タンクに、1Lの基礎塩培地(BMS(g/L)、下記)に接種した:Solulys 095K 40、サプレッサー3519 0.1mL、85%のリン酸 13mL、CaSO 0.5、KSO 9.1、MgSO.7HO 7.5、KOH 2.1、(NHSO 5、デキストロース 10)、1.2% Pichia微量金属(PTM(g/L):CuSO.5HO 6、NaI 0.08、MgSO.HO 3、NaMoO.2HO 0.2、HBO 0.02、CoCl.6HO 0.5、ZnCl 20、FeSO.6HO 65、HSO 5mL)、及び5% サプレッサー7153 2mL。発酵のバッチ相は、27℃、pH4.80、及び15%の溶存酸素で、制御された温度で6時間続けた。6時間のバッチ発酵後、温度を23.5℃に下げ、糖アルコールの供給を開始し、発酵プロセスの残りは、23.5℃で温度制御しながら120時間継続した。供給培地を、速度を徐々に増加させながら(3.4mL/時間で24時間、4.4mL/時間で30時間、7.2mL/時間で24時間、8.8mL/時間で12時間、及び11mL/時間で供給培地が完全に消費されるまで)供給した。逆相HPLCを使用して、0.1%のトリフロロ酢酸を含む水、及びアセトニトリルを移動相として使用して、モノリシックC18カラムを介して発酵ビール(すなわち、使用済み培地)からAVPを精製した。20~40%のアセトニトリルを使用する溶出プロトコルをAVPの精製に使用した。AVPは、34~36%のアセトニトリルの範囲で溶出された。
AVPを得る例示的な方法は、国際出願PCT/US2019/051093号に開示されている(その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
葉面噴霧バイオアッセイ
Btk毒素とAv3bバリアントポリペプチド(AVP)を組み合わせる効果を、Lepidopteran種であるビートアーミーワーム(Spodoptera exigua)に対して試験した。(1)AVP単独、(2)Btk毒素単独、(3)AVP及びBtk毒素の両方の組み合わせ、又は(4)対照(0.125%のVintre、界面活性剤)のいずれかを昆虫と対峙させた場合のビートアーミーワームの死亡率を評価した。
これらの組み合わせの効果を試験するために、ロメインレタスを直径30mmのディスクに切断し、次いで、140ppmの漂白剤溶液を使用して滅菌し、次いで、ディスクを3回すすいだ。次いで、ロメインレタスのディスクを発泡スチロール板に固定し、所与の処理液を噴霧した。ディスクを裏返し、再度噴霧し、乾燥させ、アリーナに配置した。
アリーナは、5mLの1%の寒天を含むる32ウェル飼育トレイであった。1つのロメインレタスのディスクを各ウェルに配置し、葉ディスク当たり1匹の2齢ビートアーミーワームを配置した。次いで、トレイを、28℃のインキュベーターに配置した。各処理を、12枚のディスクで試験し、3回の複製を行った(N=36)。
まず、Btk毒素と組み合わせた場合の殺虫ペプチドの観察を可能にし、続いて、2つの生成物間の相乗効果の観察を可能にするために、Btk毒素の亜致死量(すなわち、集団の約20%を死滅させる用量、又は約LD20)を決定した。
ここで、Btk毒素の亜致死量は800ppm(0.8mg/mL)であり、集団の31%が死亡した。図3.これらの実験でBtk毒素の亜致死量が特定されたら、AVP+Btk毒素の組み合わせについて、LD50量に達するまでAVPの用量を増加させた。したがって、最終的な組み合わせ組成物は、以下の通りであった:(1)低用量のAVP:組成物の総体積の0.1% w/vのAVP、0.125% v/vのVintre、0.0116% v/vのBtk毒素、残りは水、(2)中間用量のAVP:組成物の総体積の0.3% w/vのAVP、0.125% v/vのVintre、0.0116% v/vのBtk毒素、残りは水、及び(3)高用量のAVP:組成物の総体積の0.9% w/vのAVP、0.125% v/vのVintre、0.0116% v/vのBtk毒素、残りは水。
図3に示されるように、1.1mg/mLのAVPの使用は、5%の死亡率をもたらしたが、0.8mg/mLのBtk毒素と組み合わせた場合、死亡率は50%に増加した。同様に、3mg/mLの用量でAVPを単独で使用した場合、死亡率は11%であったが、0.8mg/mLのBtk毒素と組み合わせた場合、死亡率は67%に増加した。最後に、9mg/mLの用量でAVPを単独で使用すると、10%の死亡率をもたらしたが、Btk毒素と組み合わせた場合、死亡率は88%であった。この実施例は、Btk毒素及びAVPの組み合わせが、予想外の相乗効果をもたらし、この組み合わせが、予想される相加効果よりも大きな効果をもたらすことを実証する。
実施例4:Btk毒素、Ta1b、及びTVP
(1)Btk毒素と野生型Ta1bの組み合わせ、又は(2)Btk毒素とTa1b-バリアントポリペプチド(TVP)の組み合わせの効果を、それぞれ、Lepidopteran種、コーンイアワーム(Helicoverpa zea)に対して、注射アッセイで、及び葉バイオアッセイで試験した。
WT-Ta1b及びTVP-R9Q
本明細書で評価したCRIPは、WT-Ta1b、及びTa1b-バリアントポリペプチドTVP-R9Qであった。WT-Ta1bは、以下のアミノ酸配列を有する:「EPDEICRARMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYTACHEAQKG」(配列番号1)。TVP-R9Qは、以下のアミノ酸配列を有する:
「EPDEICRAQMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYTACHEAQKG」(配列番号2)。
TVP-R9Qペプチドを得るために、アミノ酸配列:「EPDEICRARMTNKEFTYKSNVCNNCGDQVAACEAECFRNDVYTACHEAQKG」(配列番号1)を有する野生型Ta1bペプチドを鋳型として使用し、残基位置番号9を変異させ、R9Q置換を得た。したがって、TVP-R9Qは、野生型(配列番号1)と比較してR9Qアミノ酸置換を有する。
WT-Ta1b及びTVP-R9Qを生成するために、WT-Ta1b又はTVP-R9Qをコードするように動作可能なヌクレオチド配列を含むDNA構築物をコドン最適化し、Kluyveromyces lactis α接合因子プレ/プロ配列(αMF)との融合体として合成し、pKlac1(NEW ENGLAND BIOLABS(登録商標))のNotI及びHindIII制限部位にライゲーションした。ベクターをSacIIで消化し、線状化し、細菌Ori及び選択マーカーを除去し、次いで、Kluyveromyces lactisのエレクトロコンピテント細胞にエレクトロポレーションした。唯一の窒素源としてアセトアミドを含む選択プレート上で、複数の遺伝子コピー形質転換体を選択した。WT-Ta1b又はTVP-R9Qを発現するクローンをChromolith C18カラム(4.6×100mm)上でHPLCによって評価し、2mL/分の流速及び8分間にわたる15-33%のアセトニトリルの勾配で溶出した。
実施例5:WT-Ta1b及びTVP-R9Qの安定性アッセイ
TVP-R9Qは、Lepidopteran腸プロテアーゼに耐性がある。簡潔に、TVP-R9Q及びWT-Ta1bの分解を以下のように行った:5齢初期のHelicoverpa zea幼虫を解剖して、インタクトの消化管を他の組織及び血リンパから取り出した。Helicoverpa腸抽出物(HGE)を得るために、腸管内容物がチューブに採取され得るように、腸上皮に小さな切開を行った。複数の解剖をプールし、すぐに使用できるように氷上に保管したか、又は将来使用するために-80℃で保管した。
野生型Ta1b(配列番号1)を鋳型として使用し、9位のアミノ酸置換(すなわち、R9;配列番号1)で変異させて、野生型アミノ酸配列(配列番号1)の9位のアルギニン(すなわち、R9)のアミノ酸Q(TVP-R9Q)による置換を生成した。WT-Ta1b及びTVP-R9Qを、Helicoverpa腸抽出物(HGE)と対峙させ、Lepidopteran腸内環境での消化をシミュレートした。ここで、WT-Ta1b及びTVP-R9Qを、20μLのHGE、205μLの30mMのTris-HCl(pH8.8)(Helicoverpa腸内環境のpHをアルカリ性に維持する)、及び25μLの15.7mg/mLのWT-Ta1b又はTVP-R9Qとインキュベートした。
消化したTa1b又はTVPの試料を、0、20、40、60、180、及び1260分の時点で回収した。消化プロセスをクエンチするために、82μLのTris-HCl(pH8.8)及び3μLの25%のHClを試料に添加し、消化されたTVPの試料を、逆相HPLCを使用して直ちに分析して、TVPピーク面積を定量した。図4~5に示されるように、TVP-R9Qは、WT-Ta1bと比較して、HGE中で安定である。
実施例6:Ta1b、TVP-R9Q、及びBtk毒素の葉アッセイ
Btk毒素と、WT-Ta1b又はTVP-R9Qとの組み合わせの効果を試験するために、ロメインレタスを直径30mmのディスクに切断し、次いで、140ppmの漂白剤溶液を使用して滅菌した。次いで、ディスクを3回すすいだ。次いで、ロメインレタスのディスクを発泡スチロール板に固定し、所与の処理液を噴霧した。ディスクを裏返し、再度噴霧し、乾燥させ、アリーナに配置した。
アリーナは、5mLの1%の寒天を含むる32ウェル飼育トレイであった。1枚のロメインレタスのディスクを各ウェルに配置し、1枚の葉ディスクにつき1匹の2齢ビートアーミーワームを置いた。その後、トレイを28℃のインキュベーターに配置した。各処理を、4つの実験的複製物(N=48)を用いて、12枚のディスクで試験した。
処理
処理は、以下の成分からなる噴霧溶液組成物であった:
(1)ストック濃度14.51mg/mLのWT-Ta1bを、0、1、3、及び9mg/mLの用量に希釈し、0.25% v/vのLoadUp界面活性剤と組み合わせて、0.0% w/v、0.1% w/v、0.3% w/v、又は0.9% w/vのいずれかのWT-Ta1b、0.25% v/vのLoadUp、及び残りが水の最終製剤にした。
(2)ストック濃度25.46mg/mLのTVP-R9Qを、0、1、3、及び9mg/mLの用量に希釈し、0.25% v/vのLoadUp界面活性剤と組み合わせて、組成物の総体積の0.0% w/v、0.1% w/v、0.3% w/v、又は0.9% w/vのいずれかのTVP-R9Q、0.25% v/vのLoadUp界面活性剤、及び残りが水の最終製剤にした。
(3)0.25%のLoadUp界面活性剤(対照)。本明細書及び上記及び下記の全ての列挙された処理において使用される「LoadUp」は、56.10%のアルキルフェノールエトキシレート、プロピレングリコール、アルキルアミンエトキシレート、及び硫酸と、43.9%の噴霧アジュバントとして他の無効成分と、からなる界面活性剤である。LoadUpは、J.R.Simplot Company(P.O.Box 70013,Boise,ID 83707,USA)から入手可能である。
(4)Btk毒素(15ppm Btk毒素、又は15μL/mL、又は0.015mL/mL)。この処理において、製剤は、組成物の総体積の0.0015% v/vのBtk毒素と残りの水からなる。
Btk毒素を評価するために、市販製品Leprotec(登録商標)を使用した。Leprotec(登録商標)は、14.49%のBacillus thuringiensis ssp.kurstaki(Btk)株EVB-113-19の発酵固形物、胞子、及び殺虫毒素(製品1mg当たり17,500キャベッジルーパー単位(CLU)(製品1ガロン当たり760億CLUに相当)の効力を有する)と、85.51%の他の/不活性成分と、からなる。Leprotec(登録商標)は、AEF Global Inc.(925 des calfats,US-QC,Levis,G6Y9E8,Canadaから入手可能である。ウェブサイト:http://www.aefglobal.com/en/;CAS番号:68038-71-1;ロット番号:23J19M.)。
これらの実験で使用するLeprotec(登録商標)の量(すなわち、15ppm)を選択するために、Leprotec(登録商標)の亜致死量(すなわち、集団の約20%を死滅させる用量、又は約LD20)を複数の種について確立した。この最初の試験により、以下の種についてのLeprotec(登録商標)の亜致死量(約LD20)が明らかになった:キャベッジルーパー=2.5ppm、フォールアーミーワーム=383ppm、ビートアーミーワーム=87ppm、及びコーンイアワーム=15ppm。
Leprotec(登録商標)の亜致死量を確立するための最初の作業を行って、Leprotec(登録商標)とTa1b又はTVP-R9Qの組み合わせた効果の観察を可能にし、その後、それらの組み合わせにおいて相加効果よりも大きな効果が示されるかどうかの決定を可能にした。
(5)WT-Ta1b+Btk毒素。ここでは、WT-Ta1b及びBtk毒素を組み合わせた。WT-Ta1b(14.51mg/mL)のストック濃度を、0、1、3、及び9mg/mLの用量に希釈し、0.25% v/vのLoadUp界面活性剤、及び15ppmのBtk毒素(Leprotec(登録商標);上記参照)と組み合わせた。これにより、組成物の総体積の0.0% w/v、0.1% w/v、0.3% w/v、又は0.9% w/vのいずれかのWT-Ta1b、0.25% v/vのLoadUp、0.0015% v/vのBtk毒素、残りが水の最終組成物が得られた。
(6)TVP-R9Q+Btk毒素。ここでは、TVP-R9Q及びBtk毒素を組み合わせた。TVP-R9Q(25.46mg/mL)のストック濃度を、0、1、3、及び9mg/mLの用量に希釈し、0.25% v/vのLoadUp界面活性剤、及び15ppmのBtk毒素(Leprotec(登録商標);上記参照)と組み合わせた。これにより、組成物の総体積の0.0% w/v、0.1% w/v、0.3% w/v、又は0.9% w/vのいずれかのWT-Ta1b、0.25% v/vのLoadUp、0.0015% v/vのBtk毒素、残りが水の最終組成物が得られた。
次いで、前述の処理をリーフディスクに噴霧した。
図6~9に、葉バイオアッセイの結果を示す。ここで、TVP-R9QとBtk毒素を組み合わせた場合、落葉が減少し、死亡率が増加し、これらの落葉及び死亡率への影響は、TVP-R9Q単独、Ta1b単独、又はTa1bとBtk毒素の組み合わせよりも良好であった。
図9に示されるように、コーンイアワーム孵化幼虫では、亜致死量のLeprotecと組み合わせたTVP-R9QのLD50は、2pptであった(標準誤差=0.9)。図9.したがって、TVP-R9Q変異は、摂取した場合、WT-Ta1bと比較して、殺虫活性の大幅な増加を引き起こす。
実施例7:飼料混入アッセイ(Diet incorporation assay):Btt毒素及びU+2-ACTX-Hv1a
Alphitobius diaperinus(ダークリングビートル)に対する飼料混入アッセイにおいて、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)毒素及びU+2-ACTX-Hv1aの組み合わせを、それらの殺虫活性について評価した。簡潔に、以下のいずれかの処理:(1)U+2-ACTX-Hv1a単独、(2)Btt毒素単独、(3)U+2-ACTX-Hv1a及びBtt毒素の両方の組み合わせ、又は(4)未処理対照(水)。
ダークリングビートル(ゴミムシダマシ)、Alphitobius diaperinus(Coleoptera目:Tenebrionidae科)は、幼虫の段階ではレッサーミールワームとも呼ばれ、養鶏場では深刻な害虫である。この甲虫の幼虫は、床の鶏の餌、肥料、死骸などを食べる。また、幼虫は、ニワトリに食べられると媒介性疾患(vector disease)になる。そして、幼虫は、発泡スチロールの断熱材に穴を開け、建物の熱効率を低下させる。
Bacillus thuringiensis var.tenebrionis毒素(Btt毒素)とU+2-ACTX-Hv1aの組み合わせの食餌摂取の効果を、Coleoptera種であるダークリングビートル(Alphitobius diaperinus)に対して試験した。以下の処理のうちの1つを昆虫の餌に組み込んだ後に、ダークリングビートルの死亡率を評価した:(1)U+2-ACTX-Hv1a単独、(2)Btt毒素単独、(3)U+2-ACTX-Hv1a及びBtt毒素の両方の組み合わせ、又は(4)未処理対照(水)。処理について、以下に記載する。
処理
処理は、以下の成分からなる組成物であった:
(1)Btt毒素。Btt毒素を評価するために、VALENT(登録商標)U.S.A.LLC Agricultural ProductsからのNOVODOR(登録商標)FCを使用した。NOVODOR(登録商標)FC(又は流動性濃縮物)は、10%のBacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176の発酵固形物及び可溶物(製品1グラム当たり15,000Leptinotarsa単位(LTU)(製品1クォート当たり1630万LTUに相当)の効力を有する)と、90%の他の/不活性成分と、からなる。Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176の発酵固形分及び可溶性物からなるNOVODOR(登録商標)FCは、VALENT(登録商標)U.S.A.LLC Agricultural Products(1333 N California Blvd,Suite 600,US-CA,Walnut Creek,94596-8025,U.S.A.、ウェブサイト:https://www.valent.com/;製品コード番号:96017;リスト番号:60220;ロット番号:235-222-3L-00)から市販されている。
(2)U+2-ACTX-Hv1a(1mg/mL)。「GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA」(配列番号61)のアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a(「Spear」とも称される)を、液体製剤中ではあるが、実施例1に記載の方法に従って得た。
(3)Btt毒素+U+2-ACTX-Hv1a.Bti毒素及びU+2-ACTX-Hv1aを、上記のように調製し、組み合わせた。最終的な組み合わせ組成は、以下の通りであった:
低用量のU+2-ACTX-Hv1a:組成物の総体積の0.1% w/vのU+2-ACTX-Hv1a、及び0.0040% v/vのBtt毒素、残りはサザンコーンルートワーム人工飼料である(Frontier Agricultural Services #F9800B)。
中間用量のU+2-ACTX-Hv1a:組成物の総体積の0.3% w/vのU+2-ACTX-Hv1a、及び0.0040% v/vのBtt毒素、残りはサザンコーンルートワーム人工飼料である(Frontier Agricultural Services #F9800B)。
高用量のU+2-ACTX-Hv1a:組成物の総体積の0.8% w/vのU+2-ACTX-Hv1a、及び0.0040% v/vのBtt毒素、残りはサザンコーンルートワーム人工飼料である(Frontier Agricultural Services #F9800B)。
(4)対照。水
飼料混入アッセイ
これらの組み合わせの効果を試験するために、128ウェルのバイオアッセイトレイを含むアリーナを作製し、そこに2匹の(N=2)1齢のレッサーミールワーム(すなわち、ウェルごとに2匹のミールワーム)を加えた。次いで、処理のうちの1つと混合したサザンコーンルートワーム(SCR)飼料(Frontier Scientific,Newark,DE 19713、製品番号F9800B)からなる食餌を、ミールワームに与えた。食餌は、処理のうちの1つと混合した1mLの寒天ベースのSCR飼料からなる。65℃で保持された15mLのSCR飼料と10mLの2.5倍処理溶液を組み合わせることによって、ストック食餌混合物を作った。次いで、ウェルを通気性蓋で固定し、トレイを以下の環境条件でインキュベーターに配置した:32℃、相対湿度50~70%、及び遮光。各処理条件についての4つの複製を完了した(N=4)。
Btt毒素と組み合わせた場合の殺虫ペプチドの観察を可能にし、続いて、2つの生成物間の相乗効果の観察を可能にするために、Btt毒素の亜致死量(すなわち、集団の約20%を死滅させる用量、又は約LD20)を決定した。
ここで、Btt毒素の亜致死量は400ppm(0.4mg/mL)であり、集団の18%が死亡した。図10.これらの実験でBtt毒素の亜致死量が特定されたら、U+2-ACTX-Hv1a+Btt毒素の組み合わせについて、LD50量に達するまでU+2-ACTX-Hv1aの用量を増加させた。したがって、最終的な組み合わせ組成物は、以下の通りであった:(1)低用量のU+2-ACTX-Hv1a:組成物の総体積の0.1% w/vのU+2-ACTX-Hv1a、及び0.0040% v/vのBtt毒素、残りはサザンコーンルートワーム人工飼料(Frontier Agricultural Services #F9800B)である、(2)中間用量のU+2-ACTX-Hv1a:組成物の総体積の0.3% w/vのU+2-ACTX-Hv1a、及び0.0040% v/vのBtt毒素であり、残りはサザンコーンルートワーム人工飼料(Frontier Agricultural Services #F9800B)である、及び(3)高用量のU+2-ACTX-Hv1a:0.8% w/vのU+2-ACTX-Hv1a、及び組成物の総体積の残りは0.0040% v/vのBtt毒素である(Frontier Agricultural Services #F9800B)。
図10に示されるように、1mg/mLのU+2-ACTX-Hv1aを単独で使用すると、20%の死亡率をもたらしたが、0.4mg/mLのBtt毒素と組み合わせた場合、死亡率は50%に増加した。同様に、3mg/mLの用量でU+2-ACTX-Hv1aを単独で使用した場合、死亡率は44%であったが、0.4mg/mLのBtt毒素と組み合わせた場合、死亡率は91%に増加した。最後に、8mg/mLの用量のU+2-ACTX-Hv1aを単独で使用すると、74%の死亡率をもたらした。しかし、8.0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1aと0.4mg/mLのBtt毒素を組み合わせた場合、死亡率は95%に増加した。この実施例は、Btt毒素及びU+2-ACTX-Hv1aの組み合わせが、予想外の相乗効果をもたらし、この組み合わせが、予想される相加効果よりも大きな効果をもたらすことを実証する。
実施例8:噴霧アッセイ:Btt毒素及びU+2-ACTX-Hv1a
噴霧アッセイを実施して、コロラドポテトビートル(コロラドハムシ)(Leptinotarsa decemlineate)の死亡率に対するBtt毒素とU+2-ACTX-Hv1aを含む噴霧の使用の効果を決定した。
裏返したペトリ皿(25×100mm)に入った濾紙(Whatman#3、直径90mm)の上に、約16匹の1齢コロラドポテトビートルを配置した。次に、ミニ噴霧ボトル(Qosmedix)を使用して、以下を含む2mLの処理溶液をコロラドポテトビートルに噴霧した:水、10ppT(0.01mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a、及び20ppT(0.02mg/mL)のBtt毒素。次いで、ペトリ皿をパラフィルムで密封し、インキュベーター(28℃、相対湿度50%、照明あり)に4時間保管した。甲虫に、(1)U+2-ACTX-Hv1a単独、(2)Btt毒素単独、(3)U+2-ACTX-Hv1a及びBtt毒素の両方の組み合わせ、又は(4)未処理対照(水)を噴霧した。処理は、噴霧形態に製剤化されてはいるが、実施例8に記載されているものと同じであった。
噴霧処理後、個々の甲虫を飼育トレイのウェルに移し、そこでホルムアルデヒドを含むコロラドポテトビートル人工飼料(Frontier Scientific,Newark,DE 19713、製品番号F9380B)を、ウェル当たり1mL与えた。死亡率は、次の4日間、24時間ごとに測定した。
図11に示されるように、24時間(1日)後、U+2-ACTX-Hv1aのみで処理した甲虫の死亡率は4%であった。Btt毒素のみで処理した甲虫は、2%の死亡率を有していた。U+2-ACTX-Hv1a単独又はBtt毒素単独のいずれかの死亡率とは全く対照的に、U+2-ACTX-Hv1aをBtt毒素と組み合わせた場合、24時間後、79%の死亡率をもたらした。この相乗効果のパターンは、その後の時点でも続いた。48時間(2日)では、U+2-ACTX-Hv1a単独で処理した甲虫は、9%の死亡率を有した。Btt毒素のみで処理した甲虫は、6%の死亡率を有していた。U+2-ACTX-Hv1aとBtt毒素を組み合わせることによって、死亡率は48時間で81%に増加した。72時間(3日)では、U+2-ACTX-Hv1a単独で処理した甲虫は、7%の死亡率を有した。Btt毒素のみで処理した甲虫は、23%の死亡率を有していた。U+2-ACTX-Hv1aとBtt毒素を組み合わせることによって、死亡率は72時間で94%に増加した。最後に、96時間(4日)では、U+2-ACTX-Hv1a単独で処理した甲虫は、19%の死亡率を有した。Btt毒素のみで処理した甲虫は、68%の死亡率を有していた。U+2-ACTX-Hv1aとBtt毒素を組み合わせることによって、死亡率は96時間で91%に増加した。
実施例9:Photorhabdus luminescens毒素U+2-ACTX-Hv1aの複合体
Photorhabdus luminescensは、線虫Heterorhabditis bacteriophoraによって媒介される非常に毒性の高い昆虫病原体である。この細菌は、毒素複合体として知られる大きなタンパク質複合体を産生し、分泌する。このタンパク質複合体は、「毒素複合体a」又は「Tca」と称される。Tcaは、以下の4つの異なるタンパク質で構成される:TcaA、TcaB、TcaC、及びTcaZ。ここでは、Photorhabdus luminescens毒素及びU+2-ACTX-Hv1aの組み合わせを、それらの殺虫活性について評価した。
処理
(1)Photorhabdus luminescens毒素(4.75% v/v)。毒素複合体a(Tca)は、American Type Culture Collection(ATCC)(10801 University Blvd Manassas,VA 20110,USA)からP.luminescensを調達することによって得た。P.luminescens cells(製品番号2999;株:Hb[DSM3368,HB1,NCIB12670];寄与者:(Thomas及びPoinar)、Boemare et al.)を、製造業者の推奨に従って培養した。毒素複合体を、細胞をスピンダウンし、30分子量カットオフ(mwco)フィルターで培養液を濃縮することによって精製した。ここで使用されるTca複合体抽出物は、以下の4つの異なるタンパク質からなる:TcaA(配列番号616)、TcaB(配列番号617)、TcaC(配列番号618)、及びTcaZ(配列番号619)。
(2)U+2-ACTX-Hv1a。「GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA」(配列番号61)のアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1aを、SPEAR(登録商標)-T液体濃縮物(ロット番号14143019 Vestaron(登録商標)、4717 Campus Drive、Kalamazoo、MI 49008 USA)から入手した。
(3)Photorhabdus luminescens毒素+U+2-ACTX-Hv1a。Photorhabdus luminescens毒素及びU+2-ACTX-Hv1aを、上記の処理に記載されるように調製/取得し、組み合わせた。最終的な組み合わせ組成物は、以下の通りであった:組成物の総体積の1% w/vのU+2-ACTX-Hv1a、及び4.75% v/vのPhotorhabdus luminescens毒素複合体抽出物、残りは水。
(4)対照。水。
飼料混入アッセイ
コーンイアワーム(Helicoverpa zea)に対して、飼料混入バイオアッセイを行った。バイオアッセイは、128ウェルトレイで実施した。各ウェルに、所与の処理(N=16、処理当たりのウェル)を注入した200μLの寒天ベースの一般的なLepidopteran飼料を充填した。1匹の孵化幼虫コーンイアワーム(Helicoverpa zea)を各ウェルに配置し、その生存を4日間にわたって評価した。前述の処理を次のように適用した:
(a)水、
(b)毒素複合体単独(4.75% v/v)、
(c)10mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(1% w/v)、及び
(d)10mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(1% w/v)との毒素複合体(4.75% w/v)。
図12に示されるように、4日後、Tca単独で処理したコーンイアワーム幼虫の死亡率は、13%であった。U+2-ACTX-Hv1a単独で処理したコーンイアワームの死亡率は、19%であった。Tca単独又はU+2-ACTX-Hv1a単独のいずれかの死亡率とは全く対照的に、U+2-ACTX-Hv1aをTca毒素と組み合わせた場合、4日後に44%の死亡率が得られた。
ここでの結果は、コーンイアワームに対するPhotorhabdus luminescens毒素複合体とU+2-ACTX-Hv1aとの間の相乗効果の証拠を提供する。すなわち、ここでの例は、TcaとU+2-ACTX-Hv1aの組み合わせが予期せぬ相乗効果をもたらし、その組み合わせが、予想される相加効果よりも大きな効果をもたらすことを実証する。
実施例10:スノードロップレクチン(GNA)及びACTX
スノードロップレクチン又はGalanthus nivalis(GNA)は、マンノース結合タンパク質である。ここで、コーンイアワーム(CEW)(Helicoverpa zea)孵化幼虫を、GNA及び/又はU+2-ACTX-Hv1aの溶液と対峙させ、餌後の死亡率を評価した。
処理
(1)スノードロップレクチン(GNA)。
配列番号35に示されるアミノ酸配列:「MAKASLLILATIFLGVITPSCLSENILYSGETLPTGGFLSSGSFVFIMQEDCNLVLYNVDKPIWATNTGGLSSDCSLSMQNDGNLVVFTPSNKPIWASNTDGQNGNYVCILQKDRNVVIYGTNRWATGTYTGAVGIPESPPSEKYPSAGKIKLVTAK」を有するGNAは、Vector Laboratories(3390 South Service Rd,Burlington,ON L7N 3J5,Canada,カタログ番号L-1240,ロット番号ZD1016)から入手した。本明細書に記載されるようにU+2-ACTX-Hv1aを得た。
(2)U+2-ACTX-Hv1a。「GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA」(配列番号61)のアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1aを、SPEAR(登録商標)-T液体濃縮物(ロット番号14143019 Vestaron(登録商標)、4717 Campus Drive、Kalamazoo、MI 49008 USA)から入手した。
(3)GNA+U+2-ACTX-Hv1a。GNA及びU+2を調製し、上記の処理に記載されるように取得し、組み合わせた。最終的な組み合わせ組成物は、以下の通りであった:組成物の総体積の0.5% w/vのU+2-ACTX-Hv1a、及び0.25% w/vのGNA、残りは水。
(4)対照。水。
飼料混入アッセイ
飼料混入アッセイを以下のように行った。第1の液滴バイオアッセイアリーナを、寒天の上にパラフィルムを含む32ウェルアッセイトレイを作製することによって構築した。次に、3μLの液滴(3回)を、5匹のCEW孵化幼虫とともにパラフィルム上に配置した。液滴を毎日補充した。これを処理当たり4回複製した。
前述の処理を次のように適用した:
(a)2.5mg/mLのGNA(0.25% w/v)、5mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.5% w/v)、
(b)0mg/mLのGNA(0% w/v)、5mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.5% w/v)、
(c)2.5mg/mLのGNA(0.25% w/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)、及び
(d)0mg/mLのGNA(0% w/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)(対照)。
幼虫の死亡率を3日間毎日評価した。図13に、バイオアッセイの3日目の死亡率を提示する。
図13に示されるように、対照のベースライン死亡率は、20%であった。U+2-ACTX-Hv1a単独では、5mg/mLの用量で45%の死亡率をもたらした。GNA単独の死亡率は、15%であった。ベースラインの死亡率を差し引くと、U+2-ACTX-Hv1a単独の死亡率は約25%に変化するが、GNAの死亡率はほぼゼロになる。しかし、U+2-ACTX-Hv1a(5mg/mL)とGNA(2.5mg/mL)との組み合わせは、相乗効果を有し、75%の死亡率をもたらした。ベースラインの死亡率を考慮して正規化すると、U+2-ACTX-Hv1a(5mg/mL)とGNA(2.5mg/mL)との組み合わせの死亡率は、約55%となり、U+2-ACTX-Hv1a単独の量の約2倍となる。
実施例11:キチナーゼとU+2-ACTX-Hv1a
キチナーゼを評価するために、フォールアーミーワーム(ツマジロクサヨトウ)(Spodoptera frugiperda)を、一定用量のU+2-ACTX-Hv1a及び/又はキチナーゼと対峙させて、それらの効果を単独で及び組み合わせて試験した。
処理
(1)キチナーゼ。キチナーゼを評価するために、Trichoderma viride由来のキチナーゼを使用した。配列番号620に示されるアミノ酸配列を有するキチナーゼを、Sigma Aldrich(3050 Spruce Street,St Louis,MO 63103 U.S.A)(製品番号C8241-25UN;ロット番号128M4015V)から入手した。
(2)U+2-ACTX-Hv1a。「GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA」(配列番号61)のアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1aを、SPEAR(登録商標)-T液体濃縮物(ロット番号14143019 Vestaron(登録商標)、4717 Campus Drive、Kalamazoo、MI 49008 USA)から入手した。
(3)キチナーゼ+U+2-ACTX-Hv1a。キチナーゼ及びU+2-ACTX-Hv1aを調製し、上記の処理に記載されるように調製/取得し、組み合わせた。最終的な組み合わせ組成物は、以下の通りであった:組成物の総体積の0.5% w/vのU+2-ACTX-Hv1a、0.01% w/vのキチナーゼ、残りは水。
(4)対照。水。
飼料混入アッセイ
以下の成分濃度を含む3つの液滴(各3μL)を、32ウェルトレイのトレイの中の5匹の孵化幼虫フォールアーミーワーム(ツマジロクサヨトウ)(Spodoptera frugiperda)に与えた。
(a)0μL/Lのキチナーゼ(0% w/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)、スクロース(10% w/v)、
(b)100μL/Lのキチナーゼ(0.01% w/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)、スクロース(10% w/v)、
(c)0μL/Lのキチナーゼ(0% w/v)、5mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.5% w/v)、スクロース(10% w/v)、及び
(d)100μL/Lのキチナーゼ(0.01% w/v)、5mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.5% w/v)、スクロース(10% w/v)。
次いで、死亡率を3日後に評価した。
図14に示されるように、未処理対照の死亡率は、35%であった。これは、脆弱な孵化幼虫の使用、並びに/又は昆虫を使用した飼料混入研究で一般的な典型的なストレス及び/若しくは食物若しくは栄養枯渇の結果である可能性がある。ここで、キチナーゼ単独では、対照処理と比較して効果がなかった(すなわち、死亡率が35%)。したがって、キチナーゼ単独の効果は、対照を超える死亡率の増加を引き起こしたとは言えなかった。他方では、U+2-ACTX-Hv1aは昆虫に対して75%の死亡率を示した。また、キチナーゼ及びU+2-ACTX-Hv1aを組み合わせた処理では、死亡率に対する、相加効果よりも大きい効果(すなわち、85%)が観察された。
したがって、ここでの実施例は、キチナーゼ及びU+2-ACTX-Hv1aの組み合わせが、予想外の相乗効果をもたらし、この組み合わせが、予想される相加効果よりも大きな効果をもたらすことを実証する。
実施例12:昆虫成長制御剤(アザジラクチン)及びU+2-ACTX-Hv1a
昆虫の成長制御剤剤(IGR)は、幼虫が次の齢へと脱皮する能力を妨げることによって作用する。IGRの作用メカニズム(MoA)は、キチンシンターゼの干渉及び/又は阻害である。
前述の仮説を試験するために、コーンイアワーム(CEW)(Helicoverpa zea)孵化幼虫を、アザジラクチン、並びにアザジラクチン及びU+2-ACTX-Hv1aの組み合わせと対峙させた。アザジラクチンは、ニーム油抽出物由来の製剤化殺虫剤で、殺虫活性を有する。アザジラクチンは、以下の化学式:C354416、及び図15に示される化学構造を有する。
処理
(1)アザジラクチン。ここで、アザジラクチンは、有効成分であるアザジラクチンを含む市販製品NEEMIX(登録商標)4.5から入手した。NEEMIX(登録商標)4.5(商品コード:168600;ロット番号:72371909;CAS番号:11141-17-6)は、Certis USAL.L.C.(9145 Guilford Road Suite 175 Columbia,MD 21046)から入手した。
(2)U+2-ACTX-Hv1a。「GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA」(配列番号61)のアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1aを、SPEAR(登録商標)-T液体濃縮物(ロット番号14143019 Vestaron(登録商標)、4717 Campus Drive、Kalamazoo、MI 49008 USA)から入手した。
(3)アザジラクチン+U+2-ACTX-Hv1a。アザジラクチン及びU+2-ACTX-Hv1aを、上記の処理に記載されるように調製/取得し、組み合わせた。最終的な組み合わせ組成物は、以下の通りであった:組成物の総体積の1% w/vのU+2-ACTX-Hv1a、及び0.008% w/vのアザジラクチン、残りは水。
(4)対照。水。
飼料混入アッセイ
前述の処理を次のように適用した:
(a)0μL/Lのアザジラクチン(0% v/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)(対照)、
(b)80μL/Lのアザジラクチン(0.008% v/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)、
(c)0μL/Lのアザジラクチン(0% v/v)、10mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(1% w/v)、及び
(c)80μL/Lのアザジラクチン(0.008% v/v)、10mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(1% w/v)。
バイオアッセイのアリーナは、128ウェルのトレイからなった。各ウェルに、上記の処理を注入した200μLの寒天ベースの一般的なLepidopteran飼料を充填し、処理ごとに16ウェルを評価した(N=16)。1匹の孵化幼虫コーンイアワーム(Helicoverpa zea)を各ウェルに配置し、4日後にその生存を評価した。
図16に示されるように、アザジラクチンを単独で使用すると、37.5%の死亡率をもたらした。U+2-ACTX-Hv1a単独では、18.75%の死亡率をもたらした。しかし、U+2-ACTX-Hv1a及びアザジラクチンの組み合わせは、81.25%の死亡率をもたらした。したがって、アザジラクチン単独とは対照的に、U+2-ACTX-Hv1a及びアザジラクチンの全ての処理で、コーンイアワームのより高い死亡率が観察された。
したがって、ここでの実施例は、アザジラクチン及びU+2-ACTX-Hv1aの組み合わせが、予想外の相乗効果をもたらし、この組み合わせが、予想される相加効果よりも大きな効果をもたらすことを実証する。
実施例13:その他の非特異的阻害剤(ホウ酸)及びU+2-ACTX-Hv1a
その他の非特異的(多部位)阻害剤としては、ホウ砂、ホウ酸、八ホウ酸二ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、及びメタホウ酸ナトリウムなどが挙げられる。その他の非特異的阻害剤の効果を評価するために、ホウ酸及び/又はU+2-ACTX-Hv1aを、レッサーミールワーム(ガイマイゴミムシダマシ)(Alphitobius diaperinus)孵化幼虫で評価した。
処理
(1)ホウ酸。ホウ酸(化学式:HBO)を、販売業者VWR International,Inc.(Goshen Parkway 1310,P.O.Box 2656 West Chester,PA 19380-0906 www.vwr.com)(Code:315181000;CAS10043-35-3;EC:233-139-2;ロット:A0254726)から入手した。
(2)U+2-ACTX-Hv1a。「GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA」(配列番号61)のアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1aを、SPEAR(登録商標)-T液体濃縮物(ロット番号14143019 Vestaron(登録商標)、4717 Campus Drive、Kalamazoo、MI 49008 USA)から入手した。
(3)ホウ酸+U+2-ACTX-Hv1a。ホウ酸及びU+2-ACTX-Hv1aを、上記のように得て、組み合わせた。最終的な組み合わせ組成物は、以下の通りであった:組成物の総体積の0.1% w/vのU+2-ACTX-Hv1a、及び0.25% w/vのホウ酸、残りは水。
(4)対照。水。
飼料混入アッセイ
以下のように処理溶液及び濃度を適用した。
(a)0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)、0mg/mLのホウ酸(0% w/v)(対照)、
(b)0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)、2.5mg/mLのホウ酸(0.25% w/v)、
(c)1mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.1% w/v)、0mg/mLのホウ酸(0% w/v)、及び
(d)1mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.1% w/v)、2.5mg/mLのホウ酸(0.25% w/v)。
バイオアッセイのアリーナは、128ウェルトレイで実施した。上記処理のうちの1つを注入した1mLの寒天ベースのコーンルートワーム飼料を、各ウェルに充填した。処理当たり16ウェルを充填した(N=16)。次いで、1匹の孵化幼虫レッサーミールワーム(Alphitobius diaperinus)を各ウェルに配置し、その生存を4日間にわたって評価した。
図17に示されるように、ホウ酸単独は、10.3%の死亡率をもたらし、一方、U+2-ACTX-Hv1a単独は、20%の死亡率をもたらした。しかしながら、ホウ酸単独又はU+2-ACTX-Hv1a単独の死亡率とは全く対照的に、ホウ酸とU+2-ACTX-Hv1aの組み合わせは、68.75%の死亡率をもたらした。
したがって、ここでの実施例は、ホウ酸及びU+2-ACTX-Hv1aの組み合わせが、予想外の相乗効果をもたらし、この組み合わせが、予想される相加効果よりも大きな効果をもたらすことを実証する。
実施例14:昆虫病原性真菌及びU+2-ACTX-Hv1a
Beauveria bassiana(白きょう病菌)は、幅広い昆虫に感染する昆虫病原性真菌である。Beauveria bassianaの殺虫活性は、おそらくそれが分泌する化合物に由来し、次いで、それが昆虫のクチクラを分解する。B.bassianaによって分泌される殺虫剤化合物のうちの1つに、ビューベリシンがある。殺虫作用があるとされるビューベリシンには、以下の3種類がある:(1)ビューベリシン(C4557)、(2)ビューベリシンA(C4659)、及び(3)ビューベリシンB(C4761)。
いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、摂取された場合、B.bassianaによって産生される化合物は、本発明の及び本明細書に記載のCRIPと組み合わせて、CRIP、ビューベリシン、及び/又はそれらの組み合わせのバイオアベイラビリティ及び/又は殺虫効果の増加をもたらすことができると仮定される。前述の仮説を評価するために、コドリングモス(コドリンガ)(Cydia pomonella)を、一定用量のU+2-ACTX-Hv1a及び/又はビューベリシンと対峙させて、それらの効果を単独で及び組み合わせで試験した。
処理
(1)Beauveria bassiana毒素。Beauveria bassiana、並びにその毒素、胞子、及び/又はタンパク質を試験するために、BIOCERES(登録商標)WPを使用した。BIOCERES(登録商標)WPは、20%のBeauveria bassiana株ANT-03の胞子と、80%の他の/不活性成分と、を含む配合製品である。BIOCERES(登録商標)WP(ロット番号:19206-LDBC-719-03,CAS:63428-82-0)は、Anatis Bioprotection Inc.(278,rang Saint-Andre St-Jacques-le-Mineur,Quebec J0J 1Z0,Canada)から市販されている。
(2)U+2-ACTX-Hv1a。「GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA」(配列番号61)のアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1aを、SPEAR(登録商標)-T液体濃縮物(ロット番号14143019 Vestaron(登録商標)、4717 Campus Drive、Kalamazoo、MI 49008 USA)から入手した。
(3)Beauveria bassiana毒素+U+2-ACTX-Hv1a。Beauveria bassiana毒素及びU+2-ACTX-Hv1aを、上記のように得て、組み合わせた。最終的な組み合わせ組成物は、以下の通りであった:組成物の総体積の0.2% w/vのU+2-ACTX-Hv1a、及び0.12% w/vのBeauveria bassiana毒素、残りは水。
(4)対照。水。
飼料混入アッセイ
前述の処理を次のように適用した:
(a)0mg/mLのBeauveria bassiana毒素(0% w/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)(対照)、
(b)1.2mg/mLのBeauveria bassiana毒素(0.12% w/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)、
(c)0mg/mLのBeauveria bassiana毒素、2mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.2% w/v)、及び
(d)1.2mg/mLのBeauveria bassiana毒素(0.12% w/v)、2mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.2% w/v)。
バイオアッセイのアリーナは、128ウェルトレイで実施した。上記の処理のうちの1つを注入した200μLの寒天ベースの一般的なLepidopteran飼料を各ウェルに充填した。処理当たり16ウェルを充填した(N=16、処理当たりのウェル)。次いで、1匹の孵化幼虫コドリングモス(コドリンガ)(Cydia pomonella)を各ウェルに配置し、生存を7日間にわたって評価した。
図18に示されるように、0mg/mLのBIOCERES(登録商標)WPと0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(対照)による処理は、18.75%の死亡率をもたらした。1.2mg/mLのBIOCERES(登録商標)WPと0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1aからなる処理は、死亡をもたらさなかった。0mg/mLのBIOCERES(登録商標)WPと2mg/mLのU+2-ACTX-Hv1aによる処理は、対照と同じ死亡率(18.75%)であった。驚くべきことに、1.2mg/mLのBIOCERES(登録商標)WPと2mg/mLのU+2-ACTX-Hv1aを組み合わせた処理は、50%の死亡率をもたらした。
したがって、ここでの実施例は、BIOCERES(登録商標)WP及びU+2-ACTX-Hv1aの組み合わせが、予想外の相乗効果をもたらし、この組み合わせが、予想される相加効果よりも大きな効果をもたらすことを実証する。
実施例15:バキュロウイルス及びU+2-ACTX-Hv1a
Baculoviridaeは、節足動物に特有のウイルスの科である。Baculoviridae内には、26種を含むベータバキュロウイルスとして知られる属があり、Cydia pomonellaグラニュロウイルスが含まれる。Cydia pomonellaグラニュロウイルス(CpGV)は、とりわけ、Cydia pomonella(コドリングモス(コドリンガ)として一般に知られている)のウイルスである。Cydia pomonellaグラニュロウイルスが感染するには、コドリングモスの幼虫が、ウイルス閉塞体(OB)を摂取する必要がある。閉塞体は、感染性核酸粒子を取り囲み、保護するタンパク質格子又はマトリックスである。
(1)Cydia pomonellaグラニュロウイルス(CpGV)。Cydia pomonellaグラニュロウイルスを試験するために、MADEX(登録商標)HPを使用した。MADEX(登録商標)HPは、Andermatt Biocontrol AG(Stahlermatten 6,CH-6146 Grossdietwil,Switzerland;https://www.andermattbiocontrol.com/index.html)によって製造され、Certis USA LLC(9145 Guilford Road,Suite 175 Columbia,MD 21046)(https://www.certisusa.com/)によって米国内で流通している。MADEX(登録商標)HP(EPA Reg.No.69553-1;EPA Est.No.70051-CA-001;ロット番号31240799)は、以下の成分:0.06%のCydia pomonellaグラニュロウイルス分離株V22と、99.94%の他の/不活性成分と、からなる。
(2)U+2-ACTX-Hv1a。「GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA」(配列番号61)のアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1aを、SPEAR(登録商標)-T液体濃縮物(ロット番号14143019 Vestaron(登録商標)、4717 Campus Drive、Kalamazoo、MI 49008 USA)から入手した。
(3)CpGV+U+2-ACTX-Hv1a。CpGV及びU+2-ACTX-Hv1aを、上記のように得て、組み合わせた。最終的な組み合わせ組成物は、以下の通りであった:組成物の総体積の0.2% w/vのU+2-ACTX-Hv1a、及び0.0.00585% w/vのCpGV、残りは水。
(4)対照。水。
飼料混入アッセイ
前述の処理を次のように適用した:
(a)0μL/LのCpGV(0% w/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)(対照)、
(b)58.5μL/LのCpGV(0.00585% w/v)、0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0% w/v)、
(c)0μL/LのCpGV(0% w/v)、2mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.2% w/v)、及び
(d)58.5μL/LのCpGV(0.00585% w/v)、2mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(0.2% w/v)。
バイオアッセイのアリーナは、128ウェルトレイで実施した。各ウェルに、上記の処理を注入した200μLの寒天ベースの一般的なLepidopteran飼料を充填した。次いで、処理当たり16ウェルを充填した(N=16、処理当たり)。次いで、1匹の孵化幼虫コドリングモス(Cydia pomonella)を各ウェルに配置し、それらの生存を2日間にわたって評価した。
図19に示されるように、0μL/LのMADEX(登録商標)HPと0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1a(対照)、及び58.5μL/LのMADEX(登録商標)HPと0mg/mLのU+2-ACTX-Hv1aの両方の処理は、死亡率ゼロをもたらした。2mg/mLのU+2-ACTX-Hv1aを単独で使用すると、9%の死亡率をもたらした。また、58.5μL/LのMADEX(登録商標)HPと2mg/mLのU+2-ACTX-Hv1aの組み合わせは、38.5%の死亡率をもたらした。
したがって、ここでの実施例は、MADEX(登録商標)HP及びU+2-ACTX-Hv1aの組み合わせが、予想外の相乗効果をもたらし、この組み合わせが、予想される相加効果よりも大きな効果をもたらすことを実証する。
実施例16:予期しない効果
前述の実施例(すなわち、実施例1~15)では、IA単独又はCRIP単独のいずれか1つの相加効果よりも大きい予期しない効果を実証することが示された。実際に、以下に示す試験の結果は、(相加効果よりも大きい効果を示さなかった)実施例1~15の加相加効果よりも大きい予期せぬ効果を証明している。ここでは、U+2-ACTX-Hv1a、及びNovaluron、ナノ粒子、及び凍結石の組み合わせは、相加効果よりも大きな効果をもたらさなかった。
昆虫成長制御剤(IGR):Novaluron(ノバルロン)
昆虫の成長制御剤剤(IGR)は、幼虫が次の齢へと脱皮する能力を妨げることによって作用する。一般に、IGRの作用メカニズムは、キチンシンターゼの干渉及び/又は阻害であり、昆虫の腸内の殺虫ペプチドの生物学的利用能を可能にすることができる。Novaluron、すなわち(±)-1-[3-クロロ-4-(1,1,2-トリフルオロ-2-トリフルオロ-メトキシエトキシ)フェニル]-3-(2,6-ジフルオロベンゾイル)尿素(カタログ番号116714-46-6)は、IGRである。ここでは、U+2-ACTX-Hv1aとNovaluronの組み合わせを試験して、その殺虫効果を決定した。
Novaluronは、10%のNovaluronと90%の他の成分とからなるPedestal(登録商標)の形態で入手した(OHP,Inc.P.O.Box 746 Bluffton,South Carolina,29910 USA)。ここで、「GSQYCVPVDQPCSLNTQPCCDDATCTQERNENGHTVYYCRA」(配列番号61)のアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1aを、SPEAR(登録商標)-T液体濃縮物(ロット番号14143019 Vestaron(登録商標)、4717 CampusDrive、Kalamazoo、MI 49008 USA)から得た。Pedestalは、製剤化された殺虫剤であり、CHS1に影響を与えるキチン生合成の阻害剤である。Novaluronは、IRACの15グループの一部である。
ここで、以下の濃度のNovaluronを評価する処理を試験した(U+2-ACTX-Hv1aの有無にかかわらず):
(a)80μL/LのNovaluron(0.008% w/v)、
(b)8μL/LのNovaluron(0.0008% w/v)、
(c)0.8μL/LのNovaluron(0.00008% w/v)、及び
(d)0μL/LのNovaluron(0% w/v)。
バイオアッセイのアリーナは、以下の通りであった:128ウェルトレイを配置し、各ウェルに、上記の処理を注入した200μLの寒天ベースの一般的なLepidopteran飼料を充填した。ここでは、処理当たり16ウェルを充填した。1匹の孵化幼虫コーンイアワーム(Helicoverpa zea)を各ウェルに配置し、その生存を4日間にわたって評価した。
図20は、3日後の死亡率の結果を示すグラフを図示する。ここに示されるように、コーンイアワーム(Helicoverpa zea)飼料混入アッセイにおいて、NovaluronとU+2-ACTX-Hv1aを組み合わせた場合、相加効果よりも大きい効果を示す証拠はなかった。
ナノ粒子
ナノ粒子は、密着結合の弛緩を誘導し、マウスにおけるインスリンの経口送達を可能にする。インテグリンがナノ粒子に結合されている場合、それらは、MLCK酵素を活性化するシグナル伝達経路を刺激することができる。ここで、5pptのU+2-ACTX-Hv1a(0.5mg/mL)(0.5% w/v)の有無で、ナノ粒子溶液を評価した。ここで、ナノ粒子は、NanoXactシリカナノスフィア(nanoCompsix,4878 Ronson Ct Ste J,San Diego,CA 92111)の形態で入手した。
ナノ粒子の濃度は、以下の通りであった:
(a)50nmアミノ化シリカ(2700ppm)、
(b)50シリカ(2575ppm)、
(c)20nmシリカ(1177ppm)、及び
(d)10nmシリカ(12500ppm)。
液滴バイオアッセイのアリーナは、128ウェルトレイで実施し、これには、寒天、ワックスペーパー、3μLのナノ粒子溶液、及び1匹の孵化幼虫H.zea(コーンイアワーム)が含まれた。ここで、16ウェル(幼虫)を処理ごとに評価し、比例死亡率(proportional mortality)について3日間、毎日評価した。
「比例死亡率(proportion mortality)」又は「比例死亡率(proportional mortality)」は、実験の過程で死んだ個々の昆虫の割合を指す。比例死亡率は、以下のように式(IV)に従って計算することができる。
Figure 2023524083000079
図21に、3日後の死亡率の結果を示す。示されるように、ナノ粒子とU+2-ACTX-Hv1aを組み合わせた場合、相加効果よりも大きい効果の証拠はない。
消化中毒剤
消化中毒剤であるクライオライトを、U+2-ACTX-Hv1aと組み合わせて評価した。クライオライト(NaAlF、ヘキサフルオロアルミン酸ナトリウム)は、IRAC群8C:「その他の非特異的(多部位)阻害剤」である。クライオライトは、昆虫の内臓で溶解し、フッ化物イオンによる毒性を引き起こす可能性があるが、脊椎動物(哺乳類を含む)などの非標的に対する毒性は低い。
10pptのSpear(全組成物の1mg/mL又は1% w/v)の有無で、クライオライトの処理濃度(以下の通り)を評価した:
(a)10000ppm、
(b)2000ppm、
(c)400ppm、及び
(d)0ppm。
クライオライトは、Prokil(登録商標)の形態で、すなわち、96%のクライオライト(ナトリウムアルミノフッ化物)と、4%の他の成分(Gowan(登録商標),370 South Main Street,Yuma,Arizona 85364 USA)と、からなるクライオライトの市販の形態で入手した。
バイオアッセイのアリーナは、以下の通りであった:128ウェルトレイを配置し、各ウェルに、上記の処理を注入した200μLの寒天ベースの一般的なLepidopteran飼料を充填した。ここでは、処理当たり16ウェルを充填した。1匹の孵化幼虫コーンイアワーム(Helicoverpa zea)を各ウェルに配置し、その生存を4日間にわたって評価した。
図22に示されるように、U+2-ACTX-Hv1aとクライオライトを組み合わせた場合、加算効果よりも大きい効果の証拠はない。

Claims (106)

  1. システインリッチ殺虫ペプチド(CRIP)と、殺虫剤(IA)と、を含む、組み合わせ。
  2. 前記IAが、細菌毒素、真菌毒素、レクチン、Azadirachta indica化合物、ホウ素化合物、ウイルス、又はそれらの組み合わせである、請求項1に記載の組み合わせ。
  3. 前記細菌毒素が、Bacillus thuringiensis(Bt)毒素又はPhotorhabdus毒素である、請求項2に記載の組み合わせ。
  4. 前記Bt毒素が、以下からなる群から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である、請求項3に記載の組み合わせ:Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)、Bacillus thuringiensis var.aizawai、Bacillus thuringiensis var.aizawai/pacificus、Bacillus thuringiensis var.alesti、Bacillus thuringiensis var.amagiensis、Bacillus thuringiensis var.andalousiensis、Bacillus thuringiensis var.argentinensis、Bacillus thuringiensis var.asturiensis、Bacillus thuringiensis var.azorensis、Bacillus thuringiensis var.balearica、Bacillus thuringiensis var.berliner、Bacillus thuringiensis var.bolivia、Bacillus thuringiensis var.brasilensis、Bacillus thuringiensis var.cameroun、Bacillus thuringiensis var.canadensis、Bacillus thuringiensis var.chanpaisis、Bacillus thuringiensis var.chinensis、Bacillus thuringiensis var.colmeri、Bacillus thuringiensis var.coreanensis、Bacillus thuringiensis var.dakota、Bacillus thuringiensis var.darmstadiensis、Bacillus thuringiensis var.dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus、Bacillus thuringiensis var.entomocidus/subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.finitimus、Bacillus thuringiensis var.fukuokaensis、Bacillus thuringiensis var.galechiae、Bacillus thuringiensis var.galleriae、Bacillus thuringiensis var.graciosensis、Bacillus thuringiensis var.guiyangiensis、Bacillus thuringiensis var.higo、Bacillus thuringiensis var.huazhongensis、Bacillus thuringiensis var.iberica、Bacillus thuringiensis var.indiana、Bacillus thuringiensis var.israelensis/tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.japonensis、Bacillus thuringiensis var.jegathesan、Bacillus thuringiensis var.jinghongiensis、Bacillus thuringiensis var.kenyae、Bacillus thuringiensis var.kim、Bacillus thuringiensis var.kumamtoensis、Bacillus thuringiensis var.kunthalanags3、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX24、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX27、Bacillus thuringiensis var.kunthalaRX28、Bacillus thuringiensis var.kyushuensis、Bacillus thuringiensis var.leesis、Bacillus thuringiensis var.londrina、Bacillus thuringiensis var.malayensis、Bacillus thuringiensis var.medellin、Bacillus thuringiensis var.mexicanensis、Bacillus thuringiensis var.mogi、Bacillus thuringiensis var.monterrey、Bacillus thuringiensis var.morrisoni、Bacillus thuringiensis var.muju、Bacillus thuringiensis var.navarrensis、Bacillus thuringiensis var.neoleonensis、Bacillus thuringiensis var.nigeriensis、Bacillus thuringiensis var.novosibirsk、Bacillus thuringiensis var.ostriniae、Bacillus thuringiensis var.oswaldocruzi、Bacillus thuringiensis var.pahangi、Bacillus thuringiensis var.pakistani、Bacillus thuringiensis var.palmanyolensis、Bacillus thuringiensis var.pingluonsis、Bacillus thuringiensis var.pirenaica、Bacillus thuringiensis var.poloniensis、Bacillus thuringiensis var.pondicheriensis、Bacillus thuringiensis var.pulsiensis、Bacillus thuringiensis var.rongseni、Bacillus thuringiensis var.roskildiensis、Bacillus thuringiensis var.san diego、Bacillus thuringiensis var.seoulensis、Bacillus thuringiensis var.shandongiensis、Bacillus thuringiensis var.silo、Bacillus thuringiensis var.sinensis、Bacillus thuringiensis var.sooncheon、Bacillus thuringiensis var.sotto、Bacillus thuringiensis var.sotto/dendrolimus、Bacillus thuringiensis var.subtoxicus、Bacillus thuringiensis var.sumiyoshiensis、Bacillus thuringiensis var.sylvestriensis、Bacillus thuringiensis var.thailandensis、Bacillus thuringiensis var.thompsoni、Bacillus thuringiensis var.thuringiensis、Bacillus thuringiensis var.tochigiensis、Bacillus thuringiensis var.toguchini、Bacillus thuringiensis var.tohokuensis、Bacillus thuringiensis var.tolworthi、Bacillus thuringiensis var.toumanoffi、Bacillus thuringiensis var.vazensis、Bacillus thuringiensis var.wratislaviensis、Bacillus thuringiensis var.wuhanensis、Bacillus thuringiensis var.xiaguangiensis、Bacillus thuringiensis var.yosoo、Bacillus thuringiensis var.yunnanensis、Bacillus thuringiensis var.zhaodongensis、及びBacillus thuringiensis var.konkukian毒素。
  5. 前記Bt毒素が、以下からなる群から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である、請求項4に記載の組み合わせ:Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)、及びBacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)。
  6. 前記Bt毒素が、傍胞子結晶性毒素(parasporal crystal toxin)、分泌タンパク質、β-エキソトキシン、41.9-kDa殺虫毒素、スフェリコリシン(sphaericolysin)、アルベオリシン(alveolysin)、又はエンハンシン(enhancin)様タンパク質である、請求項5に記載の組み合わせ。
  7. 前記傍胞子結晶性毒素が、δ-エンドトキシンである、請求項6に記載の組み合わせ。
  8. 前記δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cryファミリータンパク質、バイナリBin様ファミリー毒素、ETX_MTX2様ファミリー毒素、Toxin-10ファミリー毒素、エロリジンファミリー毒素、又は細胞溶解素である、請求項7に記載の組み合わせ。
  9. 前記δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cry毒素、殺蚊Cry毒素(Mtx)、バイナリ様(Bin)毒素、又はCyt毒素である、請求項8に記載の組み合わせ。
  10. 前記δ-エンドトキシンが、3ドメイン(3D)Cry毒素又はCyt毒素である、請求項9に記載の組み合わせ。
  11. 前記δ-エンドトキシンが、以下からなる群から選択される、請求項10に記載の組み合わせ:Cry1Aa1、Cry1Aa2、Cry1Aa3、Cry1Aa4、Cry1Aa5、Cry1Aa6、Cry1Aa7、Cry1Aa8、Cry1Aa9、Cry1Aa10、Cry1Aa11、Cry1Aa12、Cry1Aa13、Cry1Aa14、Cry1Aa15、Cry1Aa16、Cry1Aa17、Cry1Aa18、Cry1Aa19、Cry1Aa20、Cry1Aa21、Cry1Aa22、Cry1Aa23、Cry1Aa24、Cry1Aa25、Cry1Ab1、Cry1Ab2、Cry1Ab3、Cry1Ab4、Cry1Ab5、Cry1Ab6、Cry1Ab7、Cry1Ab8、Cry1Ab9、Cry1Ab10、Cry1Ab11、Cry1Ab12、Cry1Ab13、Cry1Ab14、Cry1Ab15、Cry1Ab16、Cry1Ab17、Cry1Ab18、Cry1Ab19、Cry1Ab20、Cry1Ab21、Cry1Ab22、Cry1Ab23、Cry1Ab24、Cry1Ab25、Cry1Ab26、Cry1Ab27、Cry1Ab28、Cry1Ab29、Cry1Ab30、Cry1Ab31、Cry1Ab32、Cry1Ab33、Cry1Ab34、Cry1Ab35、Cry1Ab36、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ab様、Cry1Ac1、Cry1Ac2、Cry1Ac3、Cry1Ac4、Cry1Ac5、Cry1Ac6、Cry1Ac7、Cry1Ac8、Cry1Ac9、Cry1Ac10、Cry1Ac11、Cry1Ac12、Cry1Ac13、Cry1Ac14、Cry1Ac15、Cry1Ac16、Cry1Ac17、Cry1Ac18、Cry1Ac19、Cry1Ac20、Cry1Ac21、Cry1Ac22、Cry1Ac23、Cry1Ac24、Cry1Ac25、Cry1Ac26、Cry1Ac27、Cry1Ac28、Cry1Ac29、Cry1Ac30、Cry1Ac31、Cry1Ac32、Cry1Ac33、Cry1Ac34、Cry1Ac35、Cry1Ac36、Cry1Ac37、Cry1Ac38、Cry1Ac39、Cry1Ad1、Cry1Ad2、Cry1Ae1、Cry1Af1、Cry1Ag1、Cry1Ah1、Cry1Ah2、Cry1Ah3、Cry1Ai1、Cry1Ai2、Cry1Aj1、Cry1A様、Cry1Ba1、Cry1Ba2、Cry1Ba3、Cry1Ba4、Cry1Ba5、Cry1Ba6、Cry1Ba7、Cry1Ba8、Cry1Bb1、Cry1Bb2、Cry1Bb3、Cry1Bc1、Cry1Bd1、Cry1Bd2、Cry1Bd3、Cry1Be1、Cry1Be2、Cry1Be3、Cry1Be4、Cry1Be5、Cry1Bf1、Cry1Bf2、Cry1Bg1、Cry1Bh1、Cry1Bi1、Cry1Bj1、Cry1Ca1、Cry1Ca2、Cry1Ca3、Cry1Ca4、Cry1Ca5、Cry1Ca6、Cry1Ca7、Cry1Ca8、Cry1Ca9、Cry1Ca10、Cry1Ca11、Cry1Ca12、Cry1Ca13、Cry1Ca14、Cry1Ca15、Cry1Cb1、Cry1Cb2、Cry1Cb3、Cry1Cb様、Cry1Da1、Cry1Da2、Cry1Da3、Cry1Da4、Cry1Da5、Cry1Db1、Cry1Db2、Cry1Dc1、Cry1Dd1、Cry1Ea1、Cry1Ea2、Cry1Ea3、Cry1Ea4、Cry1Ea5、Cry1Ea6、Cry1Ea7、Cry1Ea8、Cry1Ea9、Cry1Ea10、Cry1Ea11、Cry1Ea12、Cry1Eb1、Cry1Fa1、Cry1Fa2、Cry1Fa3、Cry1Fa4、Cry1Fb1、Cry1Fb2、Cry1Fb3、Cry1Fb4、Cry1Fb5、Cry1Fb6、Cry1Fb7、Cry1Ga1、Cry1Ga2、Cry1Gb1、Cry1Gb2、Cry1Gc1、Cry1Ha1、Cry1Hb1、Cry1Hb2、Cry1Hc1、Cry1H様、Cry1Ia1、Cry1Ia2、Cry1Ia3、Cry1Ia4、Cry1Ia5、Cry1Ia6、Cry1Ia7、Cry1Ia8、Cry1Ia9、Cry1Ia10、Cry1Ia11、Cry1Ia12、Cry1Ia13、Cry1Ia14、Cry1Ia15、Cry1Ia16、Cry1Ia17、Cry1Ia18、Cry1Ia19、Cry1Ia20、Cry1Ia21、Cry1Ia22、Cry1Ia23、Cry1Ia24、Cry1Ia25、Cry1Ia26、Cry1Ia27、Cry1Ia28、Cry1Ia29、Cry1Ia30、Cry1Ia31、Cry1Ia32、Cry1Ia33、Cry1Ia34、Cry1Ia35、Cry1Ia36、Cry1Ia37、Cry1Ia38、Cry1Ia39、Cry1Ia40、Cry1Ib1、Cry1Ib2、Cry1Ib3、Cry1Ib4、Cry1Ib5、Cry1Ib6、Cry1Ib7、Cry1Ib8、Cry1Ib9、Cry1Ib10、Cry1Ib11、Cry1Ic1、Cry1Ic2、Cry1Id1、Cry1Id2、Cry1Id3、Cry1Ie1、Cry1Ie2、Cry1Ie3、Cry1Ie4、Cry1Ie5、Cry1If1、Cry1Ig1、Cry1I様、Cry1I様、Cry1Ja1、Cry1Ja2、Cry1Ja3、Cry1Jb1、Cry1Jc1、Cry1Jc2、Cry1Jd1、Cry1Ka1、Cry1Ka2、Cry1La1、Cry1La2、Cry1La3、Cry1Ma1、Cry1Ma2、Cry1Na1、Cry1Na2、Cry1Na3、Cry1Nb1、Cry1様、Cry2Aa1、Cry2Aa2、Cry2Aa3、Cry2Aa4、Cry2Aa5、Cry2Aa6、Cry2Aa7、Cry2Aa8、Cry2Aa9、Cry2Aa10、Cry2Aa11、Cry2Aa12、Cry2Aa13、Cry2Aa14、Cry2Aa15、Cry2Aa16、Cry2Aa17、Cry2Aa18、Cry2Aa19、Cry2Aa20、Cry2Aa21、Cry2Aa22、Cry2Aa23、Cry2Aa23、Cry2Aa25、Cry2Ab1、Cry2Ab2、Cry2Ab3、Cry2Ab4、Cry2Ab5、Cry2Ab6、Cry2Ab7、Cry2Ab8、Cry2Ab9、Cry2Ab10、Cry2Ab11、Cry2Ab12、Cry2Ab13、Cry2Ab14、Cry2Ab15、Cry2Ab16、Cry2Ab17、Cry2Ab18、Cry2Ab19、Cry2Ab20、Cry2Ab21、Cry2Ab22、Cry2Ab23、Cry2Ab24、Cry2Ab25、Cry2Ab26、Cry2Ab27、Cry2Ab28、Cry2Ab29、Cry2Ab30、Cry2Ab31、Cry2Ab32、Cry2Ab33、Cry2Ab34、Cry2Ab35、Cry2Ab36、Cry2Ac1、Cry2Ac2、Cry2Ac3、Cry2Ac4、Cry2Ac5、Cry2Ac6、Cry2Ac7、Cry2Ac8、Cry2Ac9、Cry2Ac10、Cry2Ac11、Cry2Ac12、Cry2Ad1、Cry2Ad2、Cry2Ad3、Cry2Ad4、Cry2Ad5、Cry2Ae1、Cry2Af1、Cry2Af2、Cry2Ag1、Cry2Ah1、Cry2Ah2、Cry2Ah3、Cry2Ah4、Cry2Ah5、Cry2Ah6、Cry2Ai1、Cry2Aj1、Cry2Ak1、Cry2Al1、Cry2Ba1、Cry2Ba2、Cry3Aa1、Cry3Aa2、Cry3Aa3、Cry3Aa4、Cry3Aa5、Cry3Aa6、Cry3Aa7、Cry3Aa8、Cry3Aa9、Cry3Aa10、Cry3Aa11、Cry3Aa12、Cry3Ba1、Cry3Ba2、Cry3Ba3、Cry3Bb1、Cry3Bb2、Cry3Bb3、Cry3Ca1、Cry4Aa1、Cry4Aa2、Cry4Aa3、Cry4Aa4、Cry4A様、Cry4Ba1、Cry4Ba2、Cry4Ba3、Cry4Ba4、Cry4Ba5、Cry4Ba様、Cry4Ca1、Cry4Ca2、Cry4Cb1、Cry4Cb2、Cry4Cb3、Cry4Cc1、Cry5Aa1、Cry5Ab1、Cry5Ac1、Cry5Ad1、Cry5Ba1、Cry5Ba2、Cry5Ba3、Cry5Ca1、Cry5Ca2、Cry5Da1、Cry5Da2、Cry5Ea1、Cry5Ea2、Cry6Aa1、Cry6Aa2、Cry6Aa3、Cry6Ba1、Cry7Aa1、Cry7Aa2、Cry7Ab1、Cry7Ab2、Cry7Ab3、Cry7Ab4、Cry7Ab5、Cry7Ab6、Cry7Ab7、Cry7Ab8、Cry7Ab9、Cry7Ac1、Cry7Ba1、Cry7Bb1、Cry7Ca1、Cry7Cb1、Cry7Da1、Cry7Da2、Cry7Da3、Cry7Ea1、Cry7Ea2、Cry7Ea3、Cry7Fa1、Cry7Fa2、Cry7Fb1、Cry7Fb2、Cry7Fb3、Cry7Ga1、Cry7Ga2、Cry7Gb1、Cry7Gc1、Cry7Gd1、Cry7Ha1、Cry7Ia1、Cry7Ja1、Cry7Ka1、Cry7Kb1、Cry7La1、Cry8Aa1、Cry8Ab1、Cry8Ac1、Cry8Ad1、Cry8Ba1、Cry8Bb1、Cry8Bc1、Cry8Ca1、Cry8Ca2、Cry8Ca3、Cry8Ca4、Cry8Ca5、Cry8Da1、Cry8Da2、Cry8Da3、Cry8Db1、Cry8Ea1、Cry8Ea2、Cry8Ea3、Cry8Ea4、Cry8Ea5、Cry8Ea6、Cry8Fa1、Cry8Fa2、Cry8Fa3、Cry8Fa4、Cry8Ga1、Cry8Ga2、Cry8Ga3、Cry8Ha1、Cry8Hb1、Cry8Ia1、Cry8Ia2、Cry8Ia3、Cry8Ia4、Cry8Ib1、Cry8Ib2、Cry8Ib3、Cry8Ja1、Cry8Ka1、Cry8Ka2、Cry8Ka3、Cry8Kb1、Cry8Kb2、Cry8Kb3、Cry8La1、Cry8Ma1、Cry8Ma2、Cry8Ma3、Cry8Na1、Cry8Pa1、Cry8Pa2、Cry8Pa3、Cry8Qa1、Cry8Qa2、Cry8Ra1、Cry8Sa1、Cry8Ta1、Cry8様、Cry8様、Cry9Aa1、Cry9Aa2、Cry9Aa3、Cry9Aa4、Cry9Aa5、Cry9Aa、like、Cry9Ba1、Cry9Ba2、Cry9Bb1、Cry9Ca1、Cry9Ca2、Cry9Cb1、Cry9Da1、Cry9Da2、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Db1、Cry9Dc1、Cry9Ea1、Cry9Ea2、Cry9Ea3、Cry9Ea4、Cry9Ea5、Cry9Ea6、Cry9Ea7、Cry9Ea8、Cry9Ea9、Cry9Ea10、Cry9Ea11、Cry9Eb1、Cry9Eb2、Cry9Eb3、Cry9Ec1、Cry9Ed1、Cry9Ee1、Cry9Ee2、Cry9Fa1、Cry9Ga1、Cry9様、Cry10Aa1、Cry10Aa2、Cry10Aa3、Cry10Aa4、Cry10A様、Cry11Aa1、Cry11Aa2、Cry11Aa3、Cry11Aa4、Cry11Aa5、Cry11Aa様、Cry11Ba1、Cry11Bb1、Cry11Bb2、Cry12Aa1、Cry13Aa1、Cry13Aa2、Cry14Aa1、Cry14Ab1、Cry15Aa1、Cry16Aa1、Cry17Aa1、Cry18Aa1、Cry18Ba1、Cry18Ca1、Cry19Aa1、Cry19Ba1、Cry19Ca1、Cry20Aa1、Cry20Ba1、Cry20Ba2、Cry20様、Cry21Aa1、Cry21Aa2、Cry21Aa3、Cry21Ba1、Cry21Ca1、Cry21Ca2、Cry21
    Da1、Cry21Ea1、Cry21Fa1、Cry21Ga1、Cry21Ha1、Cry22Aa1、Cry22Aa2、Cry22Aa3、Cry22Ab1、Cry22Ab2、Cry22Ba1、Cry22Bb1、Cry23Aa1、Cry24Aa1、Cry24Ba1、Cry24Ca1、Cry24Da1、Cry25Aa1、Cry26Aa1、Cry27Aa1、Cry28Aa1、Cry28Aa2、Cry29Aa1、Cry29Ba1、Cry30Aa1、Cry30Ba1、Cry30Ca1、Cry30Ca2、Cry30Da1、Cry30Db1、Cry30Ea1、Cry30Ea2、Cry30Ea3、Cry30Ea4、Cry30Fa1、Cry30Ga1、Cry30Ga2、Cry31Aa1、Cry31Aa2、Cry31Aa3、Cry31Aa4、Cry31Aa5、Cry31Aa6、Cry31Ab1、Cry31Ab2、Cry31Ac1、Cry31Ac2、Cry31Ad1、Cry31Ad2、Cry32Aa1、Cry32Aa2、Cry32Ab1、Cry32Ba1、Cry32Ca1、Cry32Cb1、Cry32Da1、Cry32Ea1、Cry32Ea2、Cry32Eb1、Cry32Fa1、Cry32Ga1、Cry32Ha1、Cry32Hb1、Cry32Ia1、Cry32Ja1、Cry32Ka1、Cry32La1、Cry32Ma1、Cry32Mb1、Cry32Na1、Cry32Oa1、Cry32Pa1、Cry32Qa1、Cry32Ra1、Cry32Sa1、Cry32Ta1、Cry32Ua1、Cry32Va1、Cry32Wa1、Cry32Wa2、Cry32Xa1、Cry32Ya1、Cry33Aa1、Cry34Aa1、Cry34Aa2、Cry34Aa3、Cry34Aa4、Cry34Ab1、Cry34Ac1、Cry34Ac2、Cry34Ac3、Cry34Ba1、Cry34Ba2、Cry34Ba3、Cry35Aa1、Cry35Aa2、Cry35Aa3、Cry35Aa4、Cry35Ab1、Cry35Ab2、Cry35Ab3、Cry35Ac1、Cry35Ba1、Cry35Ba2、Cry35Ba3、Cry36Aa1、Cry37Aa1、Cry38Aa1、Cry39Aa1、Cry40Aa1、Cry40Ba1、Cry40Ca1、Cry40Da1、Cry41Aa1、Cry41Ab1、Cry41Ba1、Cry41Ba2、Cry41Ca1、Cry42Aa1、Cry43Aa1、Cry43Aa2、Cry43Ba1、Cry43Ca1、Cry43Cb1、Cry43Cc1、Cry43様、Cry44Aa1、Cry45Aa1、Cry45Ba1、Cry46Aa1、Cry46Aa2、Cry46Ab1、Cry47Aa1、Cry48Aa1、Cry48Aa2、Cry48Aa3、Cry48Ab1、Cry48Ab2、Cry49Aa1、Cry49Aa2、Cry49Aa3、Cry49Aa4、Cry49Ab1、Cry50Aa1、Cry50Ba1、Cry50Ba2、Cry51Aa1、Cry51Aa2、Cry52Aa1、Cry52Ba1、Cry52Ca1、Cry53Aa1、Cry53Ab1、Cry54Aa1、Cry54Aa2、Cry54Ab1、Cry54Ba1、Cry54Ba2、Cry55Aa1、Cry55Aa2、Cry55Aa3、Cry56Aa1、Cry56Aa2、Cry56Aa3、Cry56Aa4、Cry57Aa1、Cry57Ab1、Cry58Aa1、Cry59Ba1、Cry59Aa1、Cry60Aa1、Cry60Aa2、Cry60Aa3、Cry60Ba1、Cry60Ba2、Cry60Ba3、Cry61Aa1、Cry61Aa2、Cry61Aa3、Cry62Aa1、Cry63Aa1、Cry64Aa1、Cry64Ba1、Cry64Ca1、Cry65Aa1、Cry65Aa2、Cry66Aa1、Cry66Aa2、Cry67Aa1、Cry67Aa2、Cry68Aa1、Cry69Aa1、Cry69Aa2、Cry69Ab1、Cry70Aa1、Cry70Ba1、Cry70Bb1、Cry71Aa1、Cry72Aa1、Cry72Aa2、Cry73Aa1、Cry74Aa、Cry75Aa1、Cry75Aa2、Cry75Aa3、Cry76Aa1、Cry77Aa1、又はCry78Aa1、Cyt1Aa1、Cyt1Aa2、Cyt1Aa3、Cyt1Aa4、Cyt1Aa5、Cyt1Aa6、Cyt1Aa7、Cyt1Aa8、Cyt1Aa様、Cyt1Ab1、Cyt1Ba1、Cyt1Ca1、Cyt1Da1、Cyt1Da2、Cyt2Aa1、Cyt2Aa2、Cyt2Aa3、Cyt2Aa4、Cyt2Ba1、Cyt2Ba2、Cyt2Ba3、Cyt2Ba4、Cyt2Ba5、Cyt2Ba6、Cyt2Ba7、Cyt2Ba8、Cyt2Ba9、Cyt2Ba10、Cyt2Ba11、Cyt2Ba12、Cyt2Ba13、Cyt2Ba14、Cyt2Ba15、Cyt2Ba16、Cyt2Ba様、Cyt2Bb1、Cyt2Bc1、Cyt2B様、Cyt2Ca1、及びCyt3Aa1。
  12. 前記Cry毒素又はCyt毒素が、配列番号412~481によるアミノ酸配列を有する、請求項11に記載の組み合わせ。
  13. 前記Bt毒素が、分泌タンパク質である、請求項6に記載の組み合わせ。
  14. 前記分泌タンパク質が、植物性殺虫タンパク質(Vip)、分泌型殺虫タンパク質(Sip)、Bin様ファミリータンパク質、又はETX_MTX2ファミリータンパク質である、請求項13に記載の組み合わせ。
  15. 前記分泌タンパク質が、Vipである、請求項14に記載の組み合わせ。
  16. 前記Vipが、Vip1ファミリータンパク質、Vip2ファミリータンパク質、Vip3ファミリータンパク質、又はVip4ファミリータンパク質である、請求項15に記載の組み合わせ。
  17. 前記Vipが、以下からなる群から選択される、請求項16に記載の組み合わせ:Vip1Aa1、Vip1Aa2、Vip1Aa3、Vip1Ab1、Vip1Ac1、Vip1Ad1、Vip1Ba1、Vip1Ba2、Vip1Bb1、Vip1Bb2、Vip1Bb3、Vip1Bc1、Vip1Ca1、Vip1Ca2、Vip1Da1、Vip2Aa1、Vip2Aa2、Vip2Aa3、Vip2Ab1、Vip2Ac1、Vip2Ac2、Vip2Ad1、Vip2Ae1、Vip2Ae2、Vip2Ae3、Vip2Af1、Vip2Af2、Vip2Ag1、Vip2Ag2、Vip2Ba1、Vip2Ba2、Vip2Bb1、Vip2Bb2、Vip2Bb3、Vip2Bb4、Vip3Aa1、Vip3Aa2、Vip3Aa3、Vip3Aa4、Vip3Aa5、Vip3Aa6、Vip3Aa7、Vip3Aa8、Vip3Aa9、Vip3Aa10、Vip3Aa11、Vip3Aa12、Vip3Aa13、Vip3Aa14、Vip3Aa15、Vip3Aa16、Vip3Aa17、Vip3Aa18、Vip3Aa19.0、Vip3Aa19、Vip3Aa20、Vip3Aa21、Vip3Aa22、Vip3Aa23、Vip3Aa24、Vip3Aa25、Vip3Aa26、Vip3Aa27、Vip3Aa28、Vip3Aa29、Vip3Aa30、Vip3Aa31、Vip3Aa32、Vip3Aa33、Vip3Aa34、Vip3Aa35、Vip3Aa36、Vip3Aa37、Vip3Aa38、Vip3Aa39、Vip3Aa40、Vip3Aa41、Vip3Aa42、Vip3Aa43、Vip3Aa44、Vip3Aa45、Vip3Aa46、Vip3Aa47、Vip3Aa48、Vip3Aa49、Vip3Aa50、Vip3Aa51、Vip3Aa52、Vip3Aa53、Vip3Aa54、Vip3Aa55、Vip3Aa56、Vip3Aa57、Vip3Aa58、Vip3Aa59、Vip3Aa60、Vip3Aa61、Vip3Aa62、Vip3Aa63、Vip3Aa64、Vip3Aa65、Vip3Aa66、Vip3Ab1、Vip3Ab2、Vip3Ac1、Vip3Ad1、Vip3Ad2、Vip3Ad3、Vip3Ad4、Vip3Ad5、Vip3Ad6、Vip3Ae1、Vip3Af1、Vip3Af2、Vip3Af3、Vip3Af4、Vip3Ag1、Vip3Ag2、Vip3Ag3、Vip3Ag4、Vip3Ag5、Vip3Ag6、Vip3Ag7、Vip3Ag8、Vip3Ag9、Vip3Ag10、Vip3Ag11、Vip3Ag12、Vip3Ag13、Vip3Ag14、Vip3Ag15、Vip3Ah1、Vip3Ah2、Vip3Ai1、Vip3Aj1、Vip3Aj2、Vip3Ba1、Vip3Ba2、Vip3Bb1、Vip3Bb2、Vip3Bb3、Vip3Bc、Vip3Ca1、Vip3Ca2、Vip3Ca3、Vip3Ca4、及びVip4Aa1。
  18. Vipタンパク質が、配列番号482~587に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する、請求項17に記載の組み合わせ。
  19. 前記細菌毒素が、Photorhabdus毒素である、請求項3に記載の組み合わせ。
  20. 前記Photorhabdus毒素が、以下からなる群から選択される、請求項19に記載の組み合わせ:Photorhabdus akhurstii毒素、Photorhabdus asymbiotica毒素、Photorhabdus asymbiotica subsp.asymbiotica毒素、Photorhabdus asymbiotica subsp.asymbiotica ATCC 43949毒素、Photorhabdus australis毒素、Photorhabdus australis DSM 17609毒素、Photorhabdus bodei毒素、Photorhabdus caribbeanensis毒素、Photorhabdus cinerea毒素、Photorhabdus hainanensis毒素、Photorhabdus heterorhabditis毒素、Photorhabdus kayaii毒素、Photorhabdus khanii毒素、Photorhabdus khanii NC19毒素、Photorhabdus khanii subsp.guanajuatensis毒素、Photorhabdus kleinii毒素、Photorhabdus laumondii毒素、Photorhabdus laumondii subsp.clarkei毒素、Photorhabdus laumondii subsp.laumondii毒素、Photorhabdus laumondii subsp.laumondii TTO1毒素、Photorhabdus luminescens毒素、Photorhabdus luminescens BA1毒素、Photorhabdus luminescens NBAII H75HRPL105毒素、Photorhabdus luminescens NBAII HiPL101毒素、Photorhabdus luminescens subsp.luminescens毒素、Photorhabdus luminescens subsp.luminescens ATCC 29999毒素、Photorhabdus luminescens subsp.mexicana毒素、Photorhabdus luminescens subsp.sonorensis毒素、Photorhabdus namnaonensis毒素、Photorhabdus noenieputensis毒素、Photorhabdus stackebrandtii毒素、Photorhabdus tasmaniensis毒素、Photorhabdus temperata毒素、Photorhabdus temperata J3毒素、Photorhabdus temperata subsp.phorame毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata M1021毒素、Photorhabdus temperata subsp.temperata Meg1毒素、Photorhabdus thracensis毒素、未分類のPhotorhabdus毒素、Photorhabdus sp.毒素、Photorhabdus sp.3014毒素、Photorhabdus sp.3240毒素、Photorhabdus sp.Az29毒素、Photorhabdus sp.BS21毒素、Photorhabdus sp.CbKj163毒素、Photorhabdus sp.CRCIA-P01毒素、Photorhabdus sp.ENY毒素、Photorhabdus sp.FL2122毒素、Photorhabdus sp.FL480毒素、Photorhabdus sp.FsIw96毒素、Photorhabdus sp.GDd233毒素、Photorhabdus sp.H3086毒素、Photorhabdus sp.H3107毒素、Photorhabdus sp.H3240毒素、Photorhabdus sp.HB301毒素、Photorhabdus sp.HB78毒素、Photorhabdus sp.HB89毒素、Photorhabdus sp.HIT毒素、Photorhabdus sp.HO1毒素、Photorhabdus sp.HUG-39毒素、Photorhabdus sp.IT毒素、Photorhabdus sp.JUN毒素、Photorhabdus sp.KcTs129毒素、Photorhabdus sp.KJ13.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ14.3 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ24.5 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ29.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ37.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ7.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ8.2 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ9.1 TH毒素、Photorhabdus sp.KJ9.2 TH毒素、Photorhabdus sp.KK1.3 TH毒素、Photorhabdus sp.KK1.4 TH毒素、Photorhabdus sp.KMD74毒素、Photorhabdus sp.KOH毒素、Photorhabdus sp.MID10毒素、Photorhabdus sp.MOL毒素、Photorhabdus sp.MSW_058毒素、Photorhabdus sp.MSW_079毒素、Photorhabdus sp.NK2.1 TH毒素、Photorhabdus sp.NK2.5 TH毒素、Photorhabdus sp.NnMt2h毒素、Photorhabdus sp.NP1毒素、Photorhabdus sp.OH10毒素、Photorhabdus sp.OnIr40毒素、Photorhabdus sp.OnKn2毒素、Photorhabdus sp.PB10.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB16.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB17.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB17.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB2.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB22.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB22.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB32.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB33.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB33.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB37.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB39.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB4.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB41.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB45.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB47.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB47.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB5.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB5.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB50.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB51.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB52.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB54.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB58.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB59.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB6.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB67.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB67.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB68.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB7.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.1 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.4 TH毒素、Photorhabdus sp.PB76.5 TH毒素、Photorhabdus sp.PB78.2 TH毒素、Photorhabdus sp.PB80.3 TH毒素、Photorhabdus sp.PB80.4 TH毒素、Photorhabdus sp.Pjun毒素、Photorhabdus sp.RW14-46毒素、Photorhabdus sp.S10-54毒素、Photorhabdus sp.S12-55毒素、Photorhabdus sp.S14-60毒素、Photorhabdus sp.S15-56毒素、Photorhabdus sp.S5P8-50毒素、Photorhabdus sp.S7-51毒素、Photorhabdus sp.S8-52毒素、Photorhabdus sp.S9-53毒素、Photorhabdus sp.SJ2毒素、Photorhabdus sp.SN259毒素、Photorhabdus sp.SP1.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP16.4 TH毒素、Photorhabdus sp.SP21.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP3.4 TH毒素、Photorhabdus sp.SP4.5 TH毒素、Photorhabdus sp.SP7.3 TH毒素、Photorhabdus sp.TyKb140毒素、Photorhabdus sp.UK76毒素、Photorhabdus sp.VMG毒素、Photorhabdus sp.WA21C毒素、Photorhabdus sp.WkSs43毒素、Photorhabdus sp.Wx13毒素、Photorhabdus sp.X4毒素、Photorhabdus sp.YNb90毒素、及びPhotorhabdus sp.ZM毒素。
  21. 前記Photorhabdus毒素が、Photorhabdus luminescens毒素である、請求項20に記載の組み合わせ。
  22. 前記真菌毒素が、Ascomycete真菌毒素である、請求項2に記載の組み合わせ。
  23. 前記Ascomycete真菌毒素が、Cordycipitaceae科真菌毒素である、請求項22に記載の組み合わせ。
  24. Cordycipitaceae真菌毒素が、Akanthomyces毒素、Ascopolyporus毒素、Beauveria毒素、Beejasamuha毒素、Cordyceps毒素、Coremiopsis毒素、Engyodontium毒素、Gibellula毒素、Hyperdermium毒素、Insecticola毒素、Isaria毒素、Lecanicillium毒素、Microhilum毒素、Phytocordyceps毒素、Pseudogibellula毒素、Rotiferophthora毒素、Simplicillium毒素、又はTorrubiella毒素である、請求項23に記載の組み合わせ。
  25. 前記Cordycipitaceae真菌毒素が、Beauveria毒素である、請求項24に記載の組み合わせ。
  26. 前記Beauveria毒素が、Beauveria alba毒素、Beauveria amorpha毒素、Beauveria arenaria毒素、Beauveria asiatica毒素、Beauveria australis毒素、Beauveria bassiana毒素、Cordyceps bassiana毒素、Beauveria brongniartii毒素、Beauveria brumptii毒素、Beauveria caledonica毒素、Beauveria chiromensis毒素、Beauveria coccorum毒素、Beauveria cretacea毒素、Beauveria cylindrospora毒素、Beauveria delacroixii毒素、Beauveria densa毒素、Beauveria dependens毒素、Beauveria doryphorae毒素、Beauveria effusa毒素、Beauveria epigaea毒素、Beauveria felina毒素、Beauveria geodes毒素、Beauveria globulifera毒素、Beauveria heimii毒素、Beauveria hoplocheli毒素、Beauveria kipukae毒素、Beauveria laxa毒素、Beauveria malawiensis毒素、Beauveria medogensis毒素、Beauveria melolonthae毒素、Beauveria nubicola毒素、Beauveria oryzae毒素、Beauveria paradoxa毒素、Beauveria paranensis毒素、Beauveria parasitica毒素、Beauveria petelotii毒素、Beauveria pseudobassiana毒素、Beauveria rileyi毒素、Beauveria rubra毒素、Beauveria shiotae毒素、Beauveria sobolifera毒素、Beauveria spicata毒素、Beauveria stephanoderis毒素、Beauveria sulfurescens毒素、Beauveria sungii毒素、Beauveria tenella毒素、Beauveria tundrensis毒素、Beauveria velata毒素、Beauveria varroae毒素、Beauveria vermiconia毒素、Beauveria vexans毒素、Beauveria viannai毒素、又はBeauveria virella毒素である、請求項25に記載の組み合わせ。
  27. 前記レクチンが、以下からなる群から選択される、請求項2に記載の組み合わせ:Galanthus nivalis凝集素(GNA)、Sambucus nigraレクチン(SNA)、Maackia amurensis-II(MAL-II)、Erythrina cristagalliレクチン(ECL)、Ricinus communis凝集素-I(RCA)、ピーナッツ凝集素(PNA)、コムギ胚芽凝集素(WGA)、Griffonia simplicifolia-II(GSL-II)、Con A、Lens culinaris凝集素(LCA)、マンノース結合レクチン(MBL)、BanLec、ガレクチン、Phaseolus vulgaris白血球凝集素(PHA-L)、Phaseolus vulgaris赤血球凝集素(PHA-E)、及びDatura stramoniumレクチン(DSL)。
  28. 前記レクチンが、GNAである、請求項27に記載の組み合わせ。
  29. 前記Azadirachta indica化合物が、アザジラクチン、アザジラジオン、アザジラジオノリド、デアセチルゲデュニン(Deacetylgedunin)、デアセチルアザジラクチノール(Deacetylazadirachtinol)、デスフラノアザジラジオン、エポキシアザジラジオン、ゲデュニン(Gedunin)、マムーディン(Mahmoodin)、ニームフルイチンA、ニームフルイチンB、ニンボリド、ニンビン、ニモリシノール、酢酸オーチニン、サランニン、サランノール、アルファ-ニモラクトン、ベータ-ニモラクトン、2’,3’-ジヒドロサランニン、3-デアセチルサランニン、6-デアセチルニンビン、7-アセチル-16,17-デヒドロ-16-ヒドロキシネオトリキレノン、7-ベンゾイルニンボシノール、7-デアセチル-7-ベンゾイルエポキシアザジラジオン、7-デアセチル-7-ベンゾイルゲデュニン、7-デアセチル-17-エピニモリシノール、15-ヒドロキシアザジラジオン、17-エピ-17-ヒドロキシアザジラジオン、17-エピアザジラジオン、20,21,22,23-テトラヒドロ-23-オキソアザジロン、22,23-ジヒドロニモシノール、又は28-デオキソニンボリドである、請求項2に記載の組み合わせ。
  30. 前記ホウ素化合物が、ホウ砂、ホウ酸、八ホウ酸二ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、メタホウ酸ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム十水和物、酸化ホウ素、炭化ホウ素、窒化ホウ素、三臭化ホウ素、三塩化ホウ素、及び三フッ化ホウ素からなる群から選択される、請求項2に記載の組み合わせ。
  31. 前記ウイルスが、Baculoviridaeウイルスである、請求項2に記載の組み合わせ。
  32. 前記Baculoviridaeウイルスが、ベータバキュロウイルスである、請求項31に記載の組み合わせ。
  33. 前記ベータバキュロウイルスが、Adoxophyes oranaグラニュロウイルス(granulovirus)、Agrotis segetumグラニュロウイルス、Artogeia rapaeグラニュロウイルス、Pieris brassicaeグラニュロウイルス、Choristoneura fumiferanaグラニュロウイルス、Choristoneura occidentalisグラニュロウイルス、Clostera anachoretaグラニュロウイルス、Clostera anastomosisグラニュロウイルスA、Clostera anastomosisグラニュロウイルスHenan、Clostera anastomosisグラニュロウイルスB、Cnaphalocrocis medinalisグラニュロウイルス、Cryptophlebia leucotretaグラニュロウイルス、Cydia pomonellaグラニュロウイルス、Cydia pomonella顆粒病ウイルス(メキシコ分離株)、Diatraea saccharalisグラニュロウイルス、Epinotia aporemaグラニュロウイルス、Erinnyis elloグラニュロウイルス、Harrisina brilliansグラニュロウイルス、Helicoverpa armigeraグラニュロウイルス、Lacanobia oleraceaグラニュロウイルス、Mocis latipesグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスA、Pseudalatia unipunctaグラニュロウイルス、Mythimna unipunctaグラニュロウイルスB、Mythimna unipunctaグラニュロウイルス、Phthorimaea operculellaグラニュロウイルス、Plodia interpunctellaグラニュロウイルス、Plutella xylostellaグラニュロウイルス、Spodoptera frugiperdaグラニュロウイルス、Spodoptera lituraグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルス、Trichoplusia niグラニュロウイルス LBIV-12、Xestia c-nigrumグラニュロウイルス、未分類のベータバキュロウイルス、Achaea janataグラニュロウイルス、Adoxophyes honmaiグラニュロウイルス、Agrotis exclamationisグラニュロウイルス、Amelia palloranaグラニュロウイルス、Andraca bipunctataグラニュロウイルス、Autographa gammaグラニュロウイルス、Caloptilia theivoraグラニュロウイルス、Choristoneura murinanaグラニュロウイルス、Choristoneura viridis betabaculovirus、Clostera anastomosisグラニュロウイルス、Cnephasia longanaグラニュロウイルス、Estigmene acreaグラニュロウイルス、Euxoa ochrogasterグラニュロウイルス、Heliothis armigeraグラニュロウイルス、Hoplodrina ambiguaグラニュロウイルス、Hyphantria cuneaグラニュロウイルス、Natada narariaグラニュロウイルス、Nephelodes emmedoniaグラニュロウイルス、Pandemis limitataグラニュロウイルス、Peridorma morpontoraグラニュロウイルス、Pieris rapaeグラニュロウイルス、Plathypena scabraグラニュロウイルス、Pseudaletia betabaculovirus、Scotogramma trifoliiグラニュロウイルス、Spodoptera androgeaグラニュロウイルス、Spodoptera littoralisグラニュロウイルス、Tecia solanivoraグラニュロウイルス、又はMocis sp.グラニュロウイルスである、請求項32に記載の組み合わせ。
  34. 前記IAが、Photorhabdus luminescens毒素、Beauveria bassiana毒素、Galanthus nivalis凝集素(GNA)、アザジラクチン化合物、ホウ酸、及びCydia pomonellaグラニュロウイルス(CpGV)からなる群から選択される、請求項1に記載の組み合わせ。
  35. 前記Photorhabdus luminescens毒素が、Photorhabdus luminescens毒素複合体(Tca)を含む、請求項34に記載の組み合わせ。
  36. 前記Tcaが、TcaAタンパク質(配列番号616)、TcaBタンパク質(配列番号617)、TcaCタンパク質(配列番号618)、及びTcaZタンパク質(配列番号619)を含む、請求項35に記載の組み合わせ。
  37. 前記Beauveria bassiana毒素が、ビューベリシン毒素である、請求項34に記載の組み合わせ。
  38. 前記ビューベリシン毒素が、化学式C4557を有するビューベリシン毒素、化学式C4659を有するビューベリシンA毒素、又は化学式C4761を有するビューベリシンB毒素である、請求項37に記載の組み合わせ。
  39. 前記Beauveria bassiana毒素が、Beauveria bassiana株ANT-03胞子から単離されたビューベリシン毒素である、請求項38に記載の組み合わせ。
  40. 前記GNAが、配列番号35に示されるアミノ酸配列を有する、請求項34に記載の組み合わせ。
  41. 前記CpGVが、Cydia pomonellaグラニュロウイルス分離株V22ウイルスである、請求項34に記載の組み合わせ。
  42. 前記IAが、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である、請求項1に記載の組み合わせ。
  43. 前記IAが、Bacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である、請求項42に記載の組み合わせ。
  44. 前記IAが、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である、請求項1に記載の組み合わせ。
  45. 前記IAが、Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である、請求項44に記載の組み合わせ。
  46. 前記IAが、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である、請求項1に記載の組み合わせ。
  47. 前記Btt毒素が、Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素である、請求項46に記載の組み合わせ。
  48. 前記CRIPが、U1-アガトキシン-Ta1bペプチド、U1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)、イソギンチャク毒素、Av3バリアントポリペプチド(AVP)、Phoneutria毒素、又はアトラコトキシン(Atracotoxin)(ACTX)である、請求項1~47のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  49. 前記U1-アガトキシン-Ta1bペプチドが、配列番号1に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する、請求項48に記載の組み合わせ。
  50. 前記U1-アガトキシン-Ta1bペプチドが、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する、請求項49に記載の組み合わせ。
  51. 前記TVPが、配列番号2~15、49~53、2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、及び653~654のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する、請求項48に記載の組み合わせ。
  52. 前記TVPが、配列番号2~15、49~53、2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、及び653~654のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する、請求項51に記載の組み合わせ。
  53. 前記イソギンチャク毒素が、Av2毒素又はAv3毒素である、請求項48に記載の組み合わせ。
  54. 前記Av2毒素が、配列番号588に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する、請求項53に記載の組み合わせ。
  55. 前記Av2毒素が、配列番号588に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する、請求項54に記載の組み合わせ。
  56. 前記Av3毒素が、配列番号44に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する、請求項53に記載の組み合わせ。
  57. 前記Av3毒素が、配列番号44に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する、請求項56に記載の組み合わせ。
  58. 前記AVPが、AVPaペプチド、AVPa-C1ペプチド、又はAVPbペプチドである、請求項48に記載の組み合わせ。
  59. 前記AVPa毒素が、配列番号45に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する、請求項58に記載の組み合わせ。
  60. 前記AVPa毒素が、配列番号45に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する、請求項59に記載の組み合わせ。
  61. 前記AVPa-C1毒素が、配列番号46に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する、請求項58に記載の組み合わせ。
  62. 前記AVPa-C1毒素が、配列番号46に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する、請求項61に記載の組み合わせ。
  63. 前記AVPb毒素が、配列番号47に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する、請求項58に記載の組み合わせ。
  64. 前記AVPb毒素が、配列番号47に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する、請求項63に記載の組み合わせ。
  65. 前記CRIPが、クテニトキシン(ctenitoxin)(CNTX)である、請求項48に記載の組み合わせ。
  66. 前記CNTXが、Γ-CNTX-Pn1aである、請求項65に記載の組み合わせ。
  67. 前記Γ-CNTX-Pn1aが、配列番号65に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する、請求項66に記載の組み合わせ。
  68. 前記Γ-CNTX-Pn1aが、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する、請求項67に記載の組み合わせ。
  69. 前記CRIPが、ACTXである、請求項48に記載の組み合わせ。
  70. 前記ACTXが、U-ACTXペプチド、オメガ-ACTXペプチド、又はカッパ-ACTXペプチドである、請求項69に記載の組み合わせ。
  71. 前記ACTXが、U-ACTX-Hv1a、U+2-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b、κ-ACTX-Hv1a、κ+2-ACTX-Hv1a、ω-ACTX-Hv1a、又はω+2-ACTX-Hv1aである、請求項69に記載の組み合わせ。
  72. 前記ACTXが、配列番号60~64及び594のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する、請求項71に記載の組み合わせ。
  73. 前記ACTXが、配列番号60~64及び594のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する、請求項72に記載の組み合わせ。
  74. 前記ACTXが、配列番号61に示されるアミノ酸配列と、少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する、請求項69に記載の組み合わせ。
  75. 前記ACTXが、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有する、請求項74に記載の組み合わせ。
  76. 前記CRIPが、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチド、配列番号2~15、49~53、2~15、49~53、621~622、624~628、631~640、642~651、及び653~654のうちのいずれか1つに示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するTVP、配列番号47に示されるアミノ酸配列を有するAv3バリアントポリペプチド(AVP)、配列番号65に示されるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a、又は配列番号61に示されるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1aからなる群から選択される、請求項1~48のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  77. IAとCRIPの比が、約10,000:1、5,000:1、1,000:1、500:1、250:1、200:1、100:1、99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、1:1、45:55、40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95、1:99、1:100、1:200、1:250、1:500、1:1,000、1:5,000、又は1:10,000である、請求項1~76のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  78. 前記IAが、Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素であり、前記CRIPが、ACTXであり、前記Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、及び毒素と、前記ACTXの比が、約1:1~約1:5000である、請求項77に記載の組み合わせ。
  79. 前記Bacillus thuringiensis var.israelensis(Bti)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、前記ACTXの前記比が、約1:4000である、請求項78に記載の組み合わせ。
  80. 前記IAが、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素であり、前記CRIPが、ACTXであり、前記Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、前記ACTXの前記比が、約1:1~約1:10である、請求項77に記載の組み合わせ。
  81. 前記Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、前記ACTXの前記比が、約1:9.2である、請求項80に記載の組み合わせ。
  82. 前記IAが、Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素であり、前記CRIPが、AVPであり、前記Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、AVPの前記比が、約1:1~約1:1.5である、請求項77に記載の組み合わせ。
  83. 前記Bacillus thuringiensis var.kurstaki(Btk)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、AVPの前記比が、約1:1.375である、請求項82に記載の組み合わせ。
  84. 前記IAが、Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素であり、前記CRIPが、ACTXであり、前記Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、前記ACTXの前記比が、約1:1~約1:10である、請求項77に記載の組み合わせ。
  85. 前記Bacillus thuringiensis var.tenebrionis(Btt)から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、前記ACTXの前記比が、約1:8.75である、請求項84に記載の組み合わせ。
  86. 賦形剤を更に含む、請求項1~82のいずれか一項に記載の組み合わせを含む、組成物。
  87. Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号1に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bペプチドと、を含む、組み合わせ。
  88. Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号2に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU1-アガトキシン-Ta1bバリアントポリペプチド(TVP)と、を含む、組み合わせ。
  89. Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号67に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するAv3バリアントポリペプチド(AVP)と、を含む、組み合わせ。
  90. Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号65に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するΓ-CNTX-Pn1a毒素と、を含む、組み合わせ。
  91. Beauveria bassiana株ANT-03胞子と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含む、組み合わせ。
  92. Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis株NB-176から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含む、組み合わせ。
  93. Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki株EVB-113-19から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含む、組み合わせ。
  94. Bacillus thuringiensis ssp.israelensis株BMP144から単離された1つ以上の発酵固形物、胞子、又は毒素と、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素と、を含む、組み合わせ。
  95. Photorhabdus luminescens毒素と、ACTXと、を含む組み合わせであって、前記Photorhabdus luminescens毒素が、TcaA(配列番号616)、TcaB(配列番号617)、TcaC(配列番号618)、及びTcaZ(配列番号619)を含むPhotorhabdus luminescens毒素複合体(Tca)であり、ACTXペプチドが、U+2-ACTX-Hv1a毒素(配列番号61)である、組み合わせ。
  96. Galanthus nivalis凝集素(GNA)と、ACTXと、を含む組み合わせであって、前記GNAが、配列番号35に示されるアミノ酸配列を有し、ACTXペプチドが、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素である、組み合わせ。
  97. アザジラクチンと、ACTXと、を含む組み合わせであって、前記アザジラクチンが、化学式:C354416を有し、前記ACTXが、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素である、組み合わせ。
  98. ホウ酸化合物と、ACTXと、を含む組み合わせであって、前記ホウ酸化合物が、HBOの化学式を有し、ACTXペプチドが、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素である、組み合わせ。
  99. Cydia pomonellaグラニュロウイルス(CpGV)と、ACTXと、を含む組み合わせであって、前記CpGVが、Cydia pomonellaグラニュロウイルス分離株V22ウイルスであり、ACTXペプチドが、配列番号61に示されるアミノ酸配列によるアミノ酸配列を有するU+2-ACTX-Hv1a毒素である、組み合わせ。
  100. 少なくとも1つのCRIP及び少なくとも1つのIAの組み合わせを提供することと、請求項1~105のいずれか一項に記載の組み合わせを、昆虫の部位に適用することと、を含む、昆虫を制御するために請求項1~99のいずれか一項に記載の組み合わせを使用する、方法。
  101. 前記昆虫が、以下からなる群から選択される、請求項100に記載の方法:アヒマスフィンクスモス(Achema Sphinx Moth)(ホーンワーム(Hornworm))(Eumorpha achemon)、アルファルファキャタピラー(Alfalfa Caterpillar)(Colias eurytheme)、アーモンドモス(Almond Moth)(Caudra cautella)、アモルビアモス(Amorbia Moth)(Amorbia humerosana)、アーミーワーム(Armyworm)(Spodoptera spp.(例えば、exigua、frugiperda、littoralis)、Pseudaletia unipuncta)、アーティチョークプルームモス(Artichoke Plume Moth)(Platyptilia carduidactyla)、アゼリアキャタピラー(Azalea Caterpillar)(Datana major)、バッグワーム(Bagworm)(Thyridopteryx)、ephemeraeformis)、バナナモス(Banana Moth)(Hypercompe scribonia)、バナナスキッパー(Banana Skipper)(Erionota thrax)、ブラックヘディッドバドワーム(Blackheaded Budworm)(Acleris gloverana)、カルフォルニアオークワーム(California Oakworm)(Phryganidia californica)、スプリングキャンカーワーム(Spring Cankerworm)(Paleacrita merriccata)、チェリーフルーツワーム(Cherry Fruitworm)(Grapholita packardi)、チャイナマークモス(China Mark Moth)(Nymphula stagnata)、シトラスカットワーム(Citrus Cutworm)(Xylomyges curialis)、コドリングモス(Codling Moth)(Cydia pomonella)、クランベリーフルーツワーム(Cranberry Fruitworm)(Acrobasis vaccinii)、クロスストライプドキャベッジワーム(Cross-striped Cabbageworm)(Evergestis rimosalis)、カットワーム(Cutworm)(Noctuid種、Agrotis ipsilon)、ダグラスファータソックモス(Douglas Fir Tussock Moth)(Orgyia pseudotsugata)、エルロモス(Ello Moth)(ホーンワーム(Hornworm))(Erinnyis ello)、エルムスパンワーム(Elm Spanworm)(Ennomos subsignaria)、ヨーロピアングレープヴァインモス(European Grapevine Moth)(Lobesia botrana)、ヨーロピアンスキッパー(European Skipper)(Thymelicus lineola(エセックススキッパー)、フォールウェブワーム(Fall Webworm)(Melissopus latiferreanus、フィルバートリーフローラー(Filbert Leafroller)(Archips rosanus、フルーツツリーリーフローラー(Fruittree Leafroller)(Archips argyrospilia、グレープベリーモス(Grape Berry Moth)(Paralobesia viteana、グレープリーフローラー(Grape Leafroller)(Platynota stultana、グレープリーフスケルトナイザー(Grapeleaf Skeletonizer)(Harrisina americana(グラウンドオンリー(ground only))、グリーンクローバーワーム(Green Cloverworm)(Plathypena scabra、グリーンストライプドメープルワーム(Greenstriped Mapleworm)(Dryocampa rubicunda、Gummosos-Batrachedra、Comosae(ホッジ(Hodges))、ジプシーモス(Gypsy Moth)(Lymantria dispar)、ヘムロックルーパー(Hemlock Looper)(Lambdina fiscellaria)、ホーンワーム(Hornworm)(Manduca spp.)、インポーテッドキャベッジワーム(Imported Cabbageworm)(Pieris rapae)、アイオモス(Io Moth)(Automeris io)、ジャックパインバドワーム(Jack Pine Budworm)(Choristoneura pinus)、ライトブラウンアップルモス(Light Brown Apple Moth)(Epiphyas postvittana)、メロンワーム(Melonworm)(Diaphania hyalinata)、ミモザウェブワーム(Mimosa Webworm)(Homadaula anisocentra)、オブリークバンディッドリーフローラー(Obliquebanded Leafroller)(Choristoneura rosaceana)、オリアンダーモス(Oleander Moth)(Syntomeida epilais)、オムニバラスリーフローラー(Omnivorous Leafroller)(Playnota stultana)、オムニバラスルーパー(Omnivorous Looper)(Sabulodes aegrotata)、オレンジドッグ(Orangedog)(Papilio cresphontes)、オレンジトートリクス(Orange Tortrix)(Argyrotaenia citrana)、オリエンタルフルーツモス(Oriental Fruit Moth)(Grapholita molesta)、ピーチツイグボーア(Peach Twig Borer)(Anarsia lineatella)、パインバタフライ(Pine Butterfly)(Neophasia menapia)、ポッドワーム(Podworm)(Heliocoverpa zea)、レッドバンディッドリーフローラー(Redbanded Leafroller)(Argyrotaenia velutinana)、レッドハンプトキャタピラー(Redhumped Caterpillar)(Schizura concinna)、リンドワームコンプレックス(Rindworm Complex)(Various Leps.)、サドルバックキャタピラー(Saddleback Caterpillar)(Sibine stimulea )、サドルプロミネントキャタピラー(Saddle Prominent Caterpillar)(Heterocampa guttivitta)、ソルトマーシュキャタピラー(Saltmarsh Caterpillar)(Estigmene acrea)、ソッドベッドワーム(Sod Webworm)(Crambus spp.)、スパンワーム(Spanworm)(Ennomos subsignaria )、フォールキャンカーワーム(Fall Cankerworm)(Alsophila pometaria)、スプルースバドワーム(Spruce Budworm)(Choristoneura fumiferana)、テントキャタピラー(Tent Caterpillar)(Various Lasiocampidae )、Thecla-Thecla Basilides(Geyr)Thecla basilides)、タバコホーンワーム(Tobacco Hornworm)(Manduca sexta)、タバコモス(Tobacco Moth)(Ephestia elutella)、タフテッドアップルバドモス(Tufted Apple Budmoth)(Platynota idaeusalis)、トゥイグボーア(Twig Borer)(Anarsia lineatella)、ベアリアゲイティドカットワーム(Variegated Cutworm)(Peridroma saucia)、ベアリアゲイティドリーフローラー(Variegated Leafroller)(Platynota flavedana)、ベルベットビーンキャタピラー(Velvetbean Caterpillar)(Anticarsia gemmatalis)、ウォルナットキャタピラー(Walnut Caterpillar)(Datana integerrima)、ウェブワーム(Webworm)(Hyphantria cunea)、ウエスタンタソックモス(Western Tussock Moth)(Orgyia vetusta)、サザンコーンストークボーア(Southern Cornstalk Borer)(Diatraea crambidoides)、コーンイアワーム(Corn Earworm)、スイートポテトウィービル(Sweet potato weevil)、ペッパーウィービル(Pepper weevil)、シトラスルートウィービル(Citrus root weevil)、ストロベリーウィービル(Strawberry root weevil)、ピーカンウィービル(Pecan weevil)、フィルバートウィービル(Filbert weevil)、ライスウォーターウィービル(Ricewater weevil)、アルファルファウィービル(Alfalfa weevil)、クローバーウィービル(Clover weevil)、ティーショット-ホールボーア(Tea shot-hole borer)、ルートウィービル(Root weevil)、シュガーケインビートル(Sugarcane beetle)、コーヒーベリーボーア(Coffee berry borer)、アニュアルブルーグラスウィービル(Annual blue grass weevil)(Listronotus maculicollis)、アジアティックガーデンビートル(Asiatic garden beetle)(Maladera castanea)、ヨーロピアンチェ―ファー(European chafer)(Rhizotroqus majalis)、グリーンジューンビートル(Green June beetle)(Cotinis nitida)、ジャパニーズビートル(Japanese beetle)(Popillia japonica)、メイオアジューンビートル(May or June beetle)(Phyllophaga sp.)、ノーザンマスクドチェ―ファー(Northern masked chafer)(Cyclocephala borealis)、オリエンタルビートル(Oriental beetle)(Anomala orientalis)、サザンマスクドチェ―ファー(Southern masked chafer)(Cyclocephala lurida)、ビルバグ(Billbug)(Curculionoidea)、Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossyp
    iella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
  102. 少なくとも1つのCRIP及び少なくとも1つのIAの組み合わせを提供することと、次いで、前記組み合わせを昆虫の部位に適用することとを含む、Bacillus thuringiensis毒素耐性昆虫を制御するために、請求項1~99のいずれか一項に記載の組み合わせを使用する、方法。
  103. 前記Bacillus thuringiensis耐性毒素昆虫が、以下からなる群から選択される、請求項102に記載の方法:Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
  104. 害虫を駆除、制御、又は抑制する方法であって、農薬有効量の請求項1~99のいずれか一項に記載の組み合わせを、前記害虫の部位に、又は前記害虫による攻撃を受けやすい植物若しくは動物に適用することを含む、方法。
  105. 前記害虫が、以下からなる群から選択される、請求項104に記載の方法:アヒマスフィンクスモス(ホーンワーム)(Eumorpha achemon)、アルファルファキャタピラー(Colias eurytheme)、アーモンドモス(Caudra cautella)、アモルビアモス(Amorbia humerosana)、アーミーワーム(Spodoptera spp.(例えば、exigua、frugiperda、littoralis)、Pseudaletia unipuncta)、アーティチョークプルームモス(Platyptilia carduidactyla)、アゼリアキャタピラー(Datana major)、バッグワーム(Thyridopteryx)、ephemeraeformis)、バナナモス(Hypercompe scribonia)、バナナスキッパー(Erionota thrax)、ブラックヘディッドバドワーム(Acleris gloverana)、カルフォルニアオークワーム(Phryganidia californica)、スプリングキャンカーワーム(Paleacrita merriccata)、チェリーフルーツワーム(Grapholita packardi)、チャイナマークモス(Nymphula stagnata)、シトラスカットワーム(Xylomyges curialis)、コドリングモス(Cydia pomonella)、クランベリーフルーツワーム(Acrobasis vaccinii)、クロスストライプドキャベッジワーム(Evergestis rimosalis)、カットワーム(Noctuid種、Agrotis ipsilon)、ダグラスファータソックモス(Orgyia pseudotsugata)、エルロモス(ホーンワーム)(Erinnyis ello)、エルムスパンワーム(Ennomos subsignaria)、ヨーロピアングレープヴァインモス(Lobesia botrana)、ヨーロピアンスキッパー(Thymelicus lineola(エセックススキッパー)、フォールウェブワーム(Melissopus latiferreanus、フィルバートリーフローラー(Archips rosanus、フルーツツリーリーフローラー(Archips argyrospilia、グレープベリーモス(Paralobesia viteana、グレープリーフローラー(Platynota stultana、グレープリーフスケルトナイザー(Harrisina americana(グラウンドオンリー)、グリーンクローバーワーム(Plathypena scabra、グリーンストライプドメープルワーム(Dryocampa rubicunda、Gummosos-Batrachedra、Comosae(ホッジズ)、ジプシーモス(Lymantria dispar)、ヘムロックルーパー(Lambdina fiscellaria)、ホーンワーム(Manduca spp.)、インポーテッドキャベッジワーム(Pieris rapae)、アイオモス(Automeris io)、ジャックパインバドワーム(Choristoneura pinus)、ライトブラウンアップルモス(Epiphyas postvittana)、メロンワーム(Diaphania hyalinata)、ミモザウェブワーム(Homadaula anisocentra)、オブリークバンディッドリーフローラー(Choristoneura rosaceana)、オリアンダーモス(Syntomeida epilais)、オムニバラスリーフローラー(Playnota stultana)、オムニバラスルーパー(Sabulodes aegrotata)、オレンジドッグ(Papilio cresphontes)、オレンジトートリクス(Argyrotaenia citrana)、オリエンタルフルーツモス(Grapholita molesta)、ピーチツイグボーア(Anarsia lineatella)、パインバタフライ(Neophasia menapia)、ポッドワーム(Heliocoverpa zea)、レッドバンディッドリーフローラー(Argyrotaenia velutinana)、レッドハンプトキャタピラー(Schizura concinna)、リンドワームコンプレックス(Various Leps.)、サドルバックキャタピラー(Sibine stimulea )、サドルプロミネントキャタピラー(Heterocampa guttivitta)、ソルトマーシュキャタピラー(Estigmene acrea)、ソッドベッドワーム(Crambus spp.)、スパンワーム(Ennomos subsignaria )、フォールキャンカーワーム(Alsophila pometaria)、スプルースバドワーム(Choristoneura fumiferana)、テントキャタピラー(Various Lasiocampidae )、Thecla-Thecla Basilides(Geyr)Thecla basilides)、タバコホーンワーム(Manduca sexta)、タバコモス(Ephestia elutella)、タフテッドアップルバドモス(Platynota idaeusalis)、トゥイグボーア(Anarsia lineatella)、ベアリアゲイティドカットワーム(Peridroma saucia)、ベアリアゲイティドリーフローラー(Platynota flavedana)、ベルベットビーンキャタピラー(Anticarsia gemmatalis)、ウォルナットキャタピラー(Datana integerrima)、ウェブワーム(Hyphantria cunea)、ウエスタンタソックモス(Orgyia vetusta)、サザンコーンストークボーア(Diatraea crambidoides)、コーンイアワーム、スイートポテトウィービル、ペッパーウィービル、シトラスルートウィービル、ストロベリーウィービル、ピーカンウィービル、フィルバートウィービル、ライスウォーターウィービル、アルファルファウィービル、クローバーウィービル、ティーショット-ホールボーア、ルートウィービル、シュガーケインビートル、コーヒーベリーボーア、アニュアルブルーグラスウィービル(Listronotus maculicollis)、アジアティックガーデンビートル(Maladera castanea)、ヨーロピアンチェ―ファー(Rhizotroqus majalis)、グリーンジューンビートル(Cotinis nitida)、ジャパニーズビートル(Popillia japonica)、メイオアジューンビートル(Phyllophaga sp.)、ノーザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala borealis)、オリエンタルビートル(Anomala orientalis)、サザンマスクドチェ―ファー(Cyclocephala lurida)、ビルバグ(Curculionoidea)、Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
  106. 前記害虫が、以下からなる群から選択される、請求項105に記載の方法:Aedes aegypti、Busseola fusca、Chilo suppressalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus、Diabrotica virgifera、Diatraea saccharalis、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Leptinotarsa decemlineata、Ostrinia furnacalis、Ostrinia nubilalis、Pectinophora gossypiella、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pseudoplusia includens、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Trichoplusia ni、及びXanthogaleruca luteola。
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