CN116076728A - 促进双歧杆菌生长的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明属于微生物和培养基技术领域,具体而言,涉及一种促进双歧杆菌生长的组合物,所述组合物包含β‑葡聚糖、N‑乙酰神经氨酸和乳铁蛋白,以干重计,所述β‑葡聚糖、N‑乙酰神经氨酸和乳铁蛋白的质量比为(0.10~0.60):(0.08~0.70):(0.018~0.20),该组合物可以为一种培养基,也可以为一种食品组合物,前者在厌氧条件下表现出对双歧杆菌的生长优良的促进作用,同时后者在食用后,也能够促进人体肠道内双歧杆菌的生长,进而改善肠道健康。
Description
技术领域
本发明属于微生物和培养基技术领域,具体而言,涉及一种促进双歧杆菌生长的组合物。
背景技术
β-葡聚糖广泛存在于微生物(如酵母、细菌和真菌等)以及谷物(如大麦、小麦和燕麦等)的细胞壁中,是构成生物细胞壁的主要材料,具有多种结构和功能。微生物来源的β-葡聚糖常以葡萄糖通过β-1,3-糖苷键链接而形成主体,同时含有β-1,6-糖苷键支链;而植物来源的β-葡聚糖除含有β-1,3-糖苷键和β-1,6-糖苷键外,还存在β-1,4-糖苷键。β-葡聚糖的健康促进作用,如抗氧化、抗糖尿病、抗炎和抗肥胖功能,已被广泛研究。据报道,β-葡聚糖不能在唾液、胃和小肠环境条件下水解,在上消化道中表现出与其他膳食纤维一样的低生物利用度,可以通过消化系统而不被降解,并安全地到达肠道。β-葡聚糖可以通过抑制有害肠道菌群的增殖,促进有益健康的肠道菌群的生长来调节肠道菌群的结构和组成。引用文献1公开了一种复合益生元,其包括菊粉、低聚半乳糖、木糖醇、β-葡聚糖和低聚甘露糖,用于提高肠道内乳杆菌属细菌和肠道内双歧杆菌属细菌数量。
N-乙酰神经氨酸(N-Acetylneuraminic Acid,NANA),以其俗名唾液酸而闻名,是一种内源性营养单糖。N-乙酰神经氨酸在大脑功能发育中起着核心作用,特别是在神经细胞粘附分子(neural cell adhesion molecules,NCAM)的翻译后修饰中。有研究表明,N-乙酰神经氨酸对双歧杆菌具有潜在的选择性益生元活性,最近的一项调查证实了这一观点,一种婴儿肠道共生菌株假小链双歧杆菌Bif4含有41个负责中枢碳水化合物代谢的基因,具有一个用于摄取和代谢游离N-乙酰神经氨酸的基因簇,这种机制使该菌株能够利用其他肠道共生体释放的游离N-乙酰神经氨酸,对肠道健康产生积极的影响。引用文献2公开了使用母乳中发现的低聚糖组合(2'-岩藻糖基乳糖、3'-唾液酸乳糖和6'-唾液酸乳糖)可调节双歧杆菌的生长,引用文献3公开了使用唾液酸化寡糖和融合寡糖益生元组合物,可提高肠道有益菌双歧杆菌、乳酸杆菌、脆弱拟杆菌的丰度,并减少肠道病原体丰度。
乳铁蛋白被认为是一种安全有效的成分,可以促进人体对铁的吸收,调节细胞生长,清除自由基并抑制几种有毒化合物的形成。乳铁蛋白还具有抗菌、抗炎和抗癌活性,突出了这种多功能蛋白的治疗价值。引用文献4公开了乳铁蛋白在促进双歧杆菌、乳酸杆菌增殖中的应用。引用文献5公开了乳铁蛋白和/或乳铁蛋白水解物与人乳寡糖的组合物,可以协同地发挥对双歧杆菌属细菌的增殖促进效果。
假小链双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)是健康成人肠道内的优势双歧杆菌,并在各个年龄段人群中普遍存在,菌种资源丰富。该菌种的多个菌株已被证明具有改善糖脂代谢,调节机体免疫,改善焦虑及抑郁的益生功能。然而,由于假小链双歧杆菌不在法规允许的可用于食品的菌种名单中,因此没有办法通过外源性直接补充假小链双歧杆菌来提高其在人体肠道中的丰度,只能通过外源补充某些物质来间接刺激假小链双歧杆菌的生长。引用文献6公开了假小链双歧杆菌对人乳寡糖的同化能力。引用文献7公开了假小链双歧杆菌能够高效利用低聚半乳糖。迄今为止,研究能够促进假小链双歧杆菌增殖的物质的现有技术大多是关于低聚半乳糖和人乳寡糖的,未有现有技术公开β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸、乳铁蛋白组合物在促进假小链双歧杆菌生长中的作用。此外,也未有现有技术报道促进特定双歧杆菌生长的组合物的剂量效应。
引用文献:
引用文献1:CN108777998B;
引用文献2:EP14177597;
引用文献3:EP13775460;
引用文献4:CN112375727B;
引用文献5:CN113950247A;
引用文献6:CN111935995A;
引用文献7:CN113122471B。
发明内容
发明要解决的问题
上述现有技术中对于能够促进假小链双歧杆菌增殖的物质研究仍然不能说是充分的,进而本发明通过研究假小链双歧杆菌对β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸、乳铁蛋白以及三种物质组合物的利用能力,并探究三种物质及组合物的剂量效应,以开发一种促进双歧杆菌尤其是能够促进肠道内假小链双歧杆菌生长的组合物。
用于解决问题的方案
为了解决上述现有技术中的问题,本发明提供了以下技术方案:
[1]. 本发明首先提供了一种培养基组合物,其中,所述组合物包括基础营养组分以及添加组分,所述添加组分包含β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白,
其中,所述组合物中以干重计,所述β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白的质量比为(0.10~0.60):(0.08~0.70):(0.018~0.20)。
[2]. 根据[1]所述的组合物,其中,所述组合物中,所述β-葡聚糖为酵母-β-葡聚糖,所述N-乙酰神经氨酸为乳源N-乙酰神经氨酸或燕窝来源的N-乙酰神经氨酸或经生物发酵获得的N-乙酰神经氨酸。
[3]. 根据[1]或[2]所述的组合物,其中,所述组合物中,所述基础营养组分包括蛋白类成分、脂类成分、糖类成分、维生素类成分、矿物质类成分、pH调节成分中的一种或多种成分。
[4]. 根据[1]~[3]任一项所述的组合物用于促进双歧杆菌生长的用途,其中,在厌氧条件下使用所述组合物以促进所述双歧杆菌的生长。
[5]. 本发明还提供了一种具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物,其中,所述具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物包含β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白,
并且以干重计,所述β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白的质量比为(0.10~0.60):(0.08~0.70):(0.018~0.20)。
[6]. 根据[5]所述的具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物,其中,所述双歧杆菌包括假小链双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)和短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)中的一种或多种。
[7]. 根据[5]或[6]所述的具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物,其中,所述具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物任选地包括其他营养性成分。
[8]. 根据[5]~[7]中任一项所述的具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物,其中,所述具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物为液体、半固体或固体。
[9]. 进一步本发明也提供了一种食品,其中,所述食品包括根据[5]~[8]任一项所述的具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物,或者尤其制备而得到。
[10]. 根据[9]所述的食品,其中,所述食品为粉末状可冲调食品、烘焙类食品、饮料、糖果、乳及乳制品、发酵制品、面食制品或口服制剂;优选地,所述口服制剂包括片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、茶剂、胶囊剂和口服液。
发明的效果
基于上述技术方案的实施,本发明能够获得如下的技术效果:
首先,本发明不同于现有技术仅研究单一某种物质(如人乳寡糖、低聚半乳糖)对假小链双歧杆菌的增殖效果,本发明研究了β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白的组合物促进双歧杆菌、尤其是假小链双歧杆菌的增殖效果,并意外发现,相比单一的β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸或乳铁蛋白,组合物对该双歧杆菌的促进增殖效果更为显著,β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白之间具有协同增效作用。
其次,本发明全面研究了组合物中各成分所需的含量,通过在单一某种物质条件下双歧杆菌尤其是假小链双歧杆菌增殖较好的情况下,设计组合物中各成分的剂量,又分别扩大和缩小这些剂量,最终选出了合适剂量范围。在适当的各成分剂量条件下,本发明提供的组合物能为双歧杆菌提供较多的营养物质,延长双歧杆菌的稳定期,减缓进入衰退期,有效促进双歧杆菌生长。
进一步,其也具有促使肠道中潜在的益生菌假小链双歧杆菌增多,改善肠道健康的功用。
附图说明
图1:假小链双歧杆菌在不同葡萄糖添加量的MRS培养基培养36h后的生长情况观察结果;其中,试管中培养基的葡萄糖浓度从左到右依次为2 g/100mL,1 g/100mL,0.5 g/100mL,0.25 g/100mL,0.15 g/100mL。
图2:假小链双歧杆菌在添加不同剂量的β-葡聚糖的MRS培养基中的生长曲线。
图3:假小链双歧杆菌在添加不同剂量的N-乙酰神经氨酸的MRS培养基中的生长曲线。
图4:假小链双歧杆菌在添加不同剂量的乳铁蛋白的MRS培养基中的生长曲线。
图5:假小链双歧杆菌在添加不同剂量的β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白组合物的MRS培养基中的生长曲线。
图6:在添加不同剂量的β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白组合物的MRS培养基中的假小链双歧杆菌稳定期菌液OD值;其中,小写字母为组间OD值差异显著性(p<0.05)的标识,两组OD值的标识中不含相同字母的表示二者之间存在显著差异,否则表示没有显著差异。
图7:在添加不同剂量的β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白组合物的MRS培养基中的假小链双歧杆菌菌液ΔOD600nm随时间变化统计结果。
具体实施方式
以下对本发明的实施方式进行说明,但本发明不限定于此。本发明不限于以下说明的各构成,在发明请求保护的范围内可以进行各种变更,而适当组合不同实施方式、实施例中各自公开的技术手段而得到的实施方式、实施例也包含在本发明的技术范围中。
定义
本说明书中,使用“数值A~数值B”表示的数值范围是指包含端点数值A、B的范围。
本说明书中,使用“以上”或“以下”表示的数值范围是指包含本数的数值范围。
本说明书中,使用“可以”表示的含义包括了进行某种处理以及不进行某种处理两方面的含义。
本说明书中,使用“任选”或“任选的”表示某些物质、组分、执行步骤、施加条件等因素使用或者不使用。
本说明书中,如没有特殊说明,所使用的“常温”通常指的23±2℃时的温度。
本说明书中,所使用的单位名称均为国际标准单位名称,并且如果没有特别声明,所使用的“%”均表示重量或质量百分含量。
本说明书中,术语“约”或“基本上”、“实质上”可以表示:一个值包括测定该值所使用的装置或方法的误差的标准偏差。用以界定本发明的数值范围与参数皆是约略的数值,此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而,任何数值本质上不可避免地含有因前述测试装置或方法所致的标准偏差。因此,除非另有明确的说明,应当理解本发明所用的所有范围、数量、数值与百分比均经过“约”的修饰。在此处,“约”通常是指实际数值与理论模型或理论数据的标准偏差在3%、优选为2%、更优选为1%范围以内。
本说明书中,所提及的“一些具体/优选的实施方案”、“另一些具体/优选的实施方案”、“实施方案”等是指所描述的与该实施方案有关的特定要素(例如,特征、结构、性质和/或特性)包括在此处所述的至少一种实施方案中,并且可存在于其它实施方案中或者可不存在于其它实施方案中。另外,应理解,所述要素可以任何合适的方式组合在各种实施方案中。
另外,除非另有定义,本发明所用的其他的技术和科学术语具有与本发明所属技术领域中的普通技术人员所通常理解的相同含义。
本发主要是基于如下见解而得到:
首先,在本发明一些典型的实施方案中,分别在葡萄糖添加量为2g/100mL,1g/100mL,0.5g/100mL,0.25g/100mL,0.15g/100mL的MRS培养基培养双歧杆菌,发现0.15g/100mL葡萄糖添加量的MRS培养基中双歧杆菌生长速度适当,便于后续实验。
进一步本发明发现,单一的β-葡聚糖可以促进双歧杆菌增殖,其中β-葡聚糖在培养基中的添加量为0.2550-0.5738 mg/mL;单一的N-乙酰神经氨酸可以促进双歧杆菌增殖,其中N-乙酰神经氨酸在培养基中的添加量为0.2058-0.5145 mg/mL;单一的乳铁蛋白可以促进双歧杆菌增殖,其中乳铁蛋白在培养基中的添加量例如可以为0.0459 mg/mL。
更进一步的地,本发明采用多种物质组合的方式,不同的物质具有不同的特性,益生菌对不同物质具有不同的降解策略,多种物质组合相对于单一某种物质能更有效地促进有益菌的增殖。本发明通过大量的实验测定,发现当β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白分别以特定比例(例如浓度)添加于培养基时,能够更加有效的促进双歧杆菌尤其是假小链双歧杆菌增殖。在此基础上,本发明提供了一种组合物,所述组合物能够高效地促进双歧杆菌增殖,且优于三种单一物质的效果,效果最好时稳定期生长量为空白对照组的1.8倍。
以下对本发明的技术方案进行进一步的描述:
培养基组合物
本发明首先提供了一种培养基组合物,所述组合物包括基础营养组分以及添加组分,所述添加组分包含β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白。该组合物表现出了具有明显的协同增效作用,其在厌氧条件下可以有效促双歧杆菌的增殖,特别是促进假小链双歧杆菌的增殖。
(基础营养组分)
对于本发明中培养基组合物可以使用基础营养组分,没有特别的限制,其以为现有的MRS培养基中常规使用的基础性组分。
在一些具体的实施方案中,这样的基础营养组分包括蛋白类成分、脂类成分、糖类成分、维生素类成分、矿物质类成分、pH调节成分中的一种或多种成分。
对于这些成分的使用比例,本发明没有特别的要求,可以遵照现有技术中通常的技术指引而进行配置。
在本发明一些优选的实施方案中,所述培养基可以包括以下组分,胰蛋白胨、酵母粉、牛肉膏、葡萄糖、七水合硫酸镁、一水合硫酸锰、乙酸钠、柠檬酸氢二铵、三水合磷酸氢二钾和吐温80等。
(β-葡聚糖)
β-葡聚糖是来源于细胞壁的一种多糖。目前研究表明,β-葡聚糖具有调节免疫力,抗肿瘤,降血脂等多方面的促进身体健康的功效,同时β-葡聚糖可以有效促进肠道内双歧杆菌等益生菌菌群的建立,有效缓解各种胃肠道消化问题。
目前针对β-葡聚糖的提取工艺相对成熟,因此,本发明对于所述β-葡聚糖的提取工艺不做特别限定,例如,可以通过醋酸等进行酸水解法提取,或通过氢氧化钠等进行碱法提取,或通过酸碱结合进行提取。此外,也可以通过商购获得β-葡聚糖成品。
此外,对于β-葡聚糖的来源,本发明没有特别的限定,可以为源自于各种植物、菌类或藻类等的β-葡聚糖,可以列举的包括燕麦、大麦、酵母、蘑菇或海藻等。并且,在本发明一些优选的实施方案中,从更有利地促进双歧杆菌的生长的角度考虑,所述的β-葡聚糖可以为源自于酵母的β-葡聚糖,它是以β-1,3-D-葡聚糖为主链,β-1,6-D-葡聚糖为支链的高分子多糖。
(N-乙酰神经氨酸)
N-乙酰神经氨酸又称为唾液酸(N-Acetylneuraminic Acid,NANA),是大脑神经节苷脂的重要组成部分。研究表明,N-乙酰神经氨酸广泛存在于各种生物组织中,是糖蛋白、低聚糖和糖脂的重要成分,通常在糖蛋白和糖脂的末端以糖甙的形式存在,特别在哺乳动物的脑、神经组织、血液、颌下腺、黏蛋白、初乳中存在较多。N-乙酰神经氨酸具有促进智力发育,提高肠道吸收能力,提高免疫力等多方面的有益功效。同时,研究显示N-乙酰神经氨酸对双歧杆菌具有潜在的选择性益生元活性。
目前,N-乙酰神经氨酸生产方法主要有天然原料提取法、化学合成法、多聚物分解法、酶及固定化酶法和微生物发酵法等。本发明对于N-乙酰神经氨酸的来源和提取工艺不做特别限定,例如可以为乳源N-乙酰神经氨酸,或燕窝来源的N-乙酰神经氨酸,或经生物发酵获得的N-乙酰神经氨酸,也可以通过商购获得成品N-乙酰神经氨酸。
(乳铁蛋白)
乳铁蛋白(lactoferrin,LF)是一个分子量为80 kDa的铁结合糖蛋白,属于转铁蛋白家族。乳铁蛋白广泛分布于人和哺乳动物乳汁和其他多种组织及其分泌液中,乳汁中含量较高,其中牛初乳中乳铁蛋白含量最高。研究表明,乳铁蛋白具有广谱抗菌,抗病毒感染作用,能调节体内铁的平衡,调节骨髓细胞的生成,促进细胞的生长,调节机体免疫功能,增强机体抗病能力,抑制人体肿瘤细胞等方面的作用。同时,研究显示,乳铁蛋白可促进双歧杆菌和乳酸菌的繁殖,以维持健康的肠道微生态环境。
本发明对于乳铁蛋白的来源和制备方法不做特别限定,例如,可以利用色谱法、超滤法等分离纯化方法从牛乳中分离乳铁蛋白,或利用重组蛋白表达技术获得外源表达的乳铁蛋白,也可以通过商购获得成品乳铁蛋白。
(协同增效)
尽管现有技术中,对于β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白的研究显示三者均可能存在一定的促进双歧杆菌属细菌增殖的作用,但现有技术中仅是针对三种单一的物质进行了研究,而对于三者是否存在或可能形成协同增效的促双歧杆菌增殖能力并无研究和报告。
本发明中,意外发现β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白组合使用时,在厌氧条件下,对双歧杆菌,尤其是假小链双歧杆菌的促增殖能力具有协同增效的现象。且组合使用时其所需剂量不同于单独使用三种单一物质促进假小链双歧杆菌生长时所需的剂量。
本发明首先设计探究假小链双歧杆菌在单一物质上的生长情况,可以看出不同剂量的单一某种物质对假小链双歧杆菌的增殖效果。
在一些实施方案中,单一的β-葡聚糖在浓度为0.2550~0.5738 mg/mL时,对假小链双歧杆菌具有促增殖效果。
在一些实施方案中,单一的N-乙酰神经氨酸在浓度为0.2058~0.5145 mg/mL时,对假小链双歧杆菌具有促增殖效果。
在一些实施方案中,单一的乳铁蛋白在浓度为0.0459 mg/mL时,对假小链双歧杆菌具有促增殖效果。
本发明通过进一步的探究,发现组合使用β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白时其所需剂量不同于上述单一物质促进假小链双歧杆菌生长所需的剂量。
具体而言,
所述培养基组合物中,以干重计,本发明所述的β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白的质量比为(0.10~0.60):(0.08~0.70):(0.018~0.20)。
在一些优选的实施方案中,所述β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白的质量比可以为(0.11~0.59):(0.09~0.68):(0.020~0.15),更优选地,可以为(0.12~0.55):(0.10~0.60):(0.021~0.11);示例性的,所述β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白的质量比可以为0.255:0.50:0.05,或0.255:0.21:0.05,或0.51:0.40:0.09,或0.51:0.10:0.05,或0.13:0.57:0.023等。
此外,只要满足上述质量比例,在保证协同效果及用量安全性的前提下,本发明对β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白的用量没有原则上的限制。
本发明对于培养基组合物的形态没有特别限定,在一些实施方案中,本发明所述的培养基组合物中可以包含溶剂,例如水等。因此,其形态例如可以为液态(水溶液等)或者半固体(浆料)等形式。
通过上述组成的培养基使用,在厌氧条件下对双歧杆菌、尤其是假小链双歧杆菌具有优异的生长促进功用。
具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物
进一步,本发明提供了一种具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物,其包含上文所述的β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白,及任选地包括其他营养性成分。
对于β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白的用量关系,也可以为具有如下的质量比例关系:(0.10~0.60):(0.08~0.70):(0.018~0.20)。
在一些优选的实施方案中,所述β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白的质量比可以为(0.11~0.59):(0.09~0.68):(0.020~0.15),更优选地,可以为(0.12~0.55):(0.10~0.60):(0.021~0.11)。
同样,在满足上述比例的条件下,对于β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白各自占组合物的质量含量,没有特别限制,可以遵照通常的用量以及相关法律法规的要求而进行添加。
另外,在一些实施方案中,本发明所述的双歧杆菌包括假小链双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)、青春双歧杆菌(Bifidobacteriumadolescentis)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)和短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)中的一种或多种。上述双歧杆菌属细菌可以在人肠道内定植。
特别的,本发明所述的组合物可以促进肠道内假小链双歧杆菌的生长繁殖,假小链双歧杆菌属于肠道有益菌,而其却并不属于法规允许的可用于食品的菌种。因此本法明提供的具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物具有特别的意义,其可以通过在肠道内发挥促假小链双歧杆菌生长的作用,进而利用假小链双歧杆菌的有益效果促进人体健康。
除了组合物中必须的β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白,根据最终产品的食用需求,本发明所述的具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物中还可以包含任选地其他营养性成分,可以列举的包括:例如可以包括植物或其提取物、含乳成分、动物类成分、功能性添加组分、微量元素补充剂和/或任意的在食品上可接受的辅料。
植物或植物提取成分,包括无花果、石榴、猕猴桃、橘子、橙子、菠萝、草莓、苹果、橡胶、葡萄、梨、樱桃、蓝莓、黑莓、覆盆莓和山桑子等水果或它们的提取物;洋蔥、黄瓜、番茄、花椰菜、红萝卜、菠菜、芥蓝、球芽甘蓝、大蒜、罗勒、奧勒冈草等果蔬类物质或它们的提取物;稻类(籼稻、粳稻、糯稻)、麦类(小麦、大麦、燕麦、黑麦)、玉米、高粱、粟、黍、黄米、荞麦、大豆、蚕豆、豌豆、绿豆、红小豆、芸豆等谷物或它们的提取物;核桃、开心果、腰果、榛子、扁桃、杏仁、松子、花生、瓜子、板栗、夏威夷果、白果等坚果类物质或它们的提取物;咖啡或其提取物。
含乳成分或蛋白成分,所述含乳成分包括乳品包括以来源于生鲜牛(羊)乳的鲜乳、乳粉、乳清蛋白或奶酪等;对于蛋白成分可以来自于植物蛋白,例如大豆蛋白、花生蛋白等。
动物类成分,包括牛、羊、鱼或禽类的肉制品成分。
脂肪成分,所述脂肪可以包括饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、OPO结构脂、DHA、EPA、ARA、磷脂中的至少一种,更具体地说所述脂肪包括红花籽油、核桃油,花生油,大豆油,阿甘油、橄榄油、茶油、美藤果油、橄榄油、椰子油、紫苏油、深海鱼油、可可油、棕榈油、牛油、奶油、猪油、中链甘油三酯或卵磷脂等。
功能性添加组分,包括维生素(维生素A、β-胡萝卜素、维生素D3、维生素E、维生素K1、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素C、泛酸、叶酸、烟酸、胆碱、肌醇、生物素中的一种或多种)、淀粉、改性淀粉、氨基酸(L-赖氨酸-L-谷氨酸、L-谷氨酸、L-精氨酸、L-色氨酸、L-谷氨酰胺、牛磺酸、L-缬氨酸、L-异亮氨酸或L-亮氨酸等)、中药或中药提取物、膳食纤维(菊粉、魔芋粉、低聚半乳糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖、大豆多糖、环糊精、抗性糊精或大豆纤维等)。
微量元素补充剂,可以包括有机酸类的金属离子盐,例如柠檬酸钙、L-乳酸钙、磷酸氢钙、葡萄糖酸钾、柠檬酸钠、葡萄糖酸亚铁、碘化钾、葡萄糖酸锌、亚硒酸钠、葡萄糖酸铜、硫酸铬、葡萄糖酸锰和葡萄糖酸镁中的一种或多种。
任意食品上可接受的辅料,包括但不限于溶剂、抗氧剂、抗菌剂、增稠剂、稀释剂、助溶剂、稳定剂、乳化剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、包衣材料、抗结块剂、矫味剂、甜味剂、食用香精、食用色素等。
此外,本发明对于所述具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物的形态没有特别限定,例如,可以为液体、半固体或固体。
食品
本发明提供了一种食品,其包含上述组合物或具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物。
对于本发明的食品,没有特别限制,通常可以为粉末状可冲调食品、烘焙类食品、饮料、糖果、乳及乳制品、发酵制品、面食制品或口服制剂。
对于粉末状可冲调食品,典型的可以为可冲调的奶粉制品,例如婴幼儿奶粉、成人奶粉等,也可以为速溶咖啡、谷物粉,坚果粉或藕粉等。
对于烘焙类食品,可以为主要基于奶油、鸡蛋和发酵粉类的烘焙蛋糕或饼干等。
对于饮料,可以包括碳酸类饮料、果蔬汁饮料、功能饮料、茶类饮料、乳饮料或酒精饮料等。
对于糖果,可以包括硬质糖果、硬质夹心糖果、乳脂糖果、凝胶糖果、抛光糖果、胶基糖果、充气糖果和压片糖果等。
对于乳及乳制品,可以包括来源于生鲜牛(羊)乳的鲜乳、乳粉、乳清粉、发酵乳、奶酪或炼乳等。
对于发酵制品,典型的可以为发酵牛乳、发酵豆乳等,也可以包括发酵酱料。
对于面食制品,可以包括作为主食的面粉类原料加工或制作的主食、杂粮类主食等,具体的例如馒头类、饼类、面条类、馅类主食等。
对于口服制剂,可以包括片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、茶剂、胶囊剂和口服液。
本发明提供的食品原则上适合所有人群,尤其适合于对改善肠道健康有需求的人群,对于针对不同特性的人群也可以对食品中的组分进行相应的调整。
在一些具体的实施方案中,以所述食品的总质量计,所述β-葡聚糖的含量为0.05~0.5%,优选为0.06~0.4%,更优选为0.06~0.35%,进一步优选为0.1~0.25%;所述N-乙酰神经氨酸的含量为0.01~0.3%,优选为0.015~0.2%,更优选为0.02~0.15%,进一步优选为0.025~0.1%;所述乳铁蛋白的含量为0.01~0.1%,优选为0.01~0.07%,更优选为0.01~0.05%,进一步优选为0.01~0.03%。典型的,所述食品可以为奶粉,尤其是婴幼儿奶粉、儿童奶粉、中老年奶粉等。
实施例
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。除非特别说明,本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规的试剂、方法和设备。
下述实施例中涉及的假小链双歧杆菌菌体的制备方法如下:
假小链双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)菌株(原始编号为8-7,以下简称假小链双歧杆菌)来源于江苏省无锡市一位健康婴儿的粪便样品,保存于江南大学食品学院生物技术中心。进行活化程序将假小链双歧杆菌活化。首先,将假小链双歧杆菌甘油管以2%(V/V)的菌量培养于液体MRS培养基中,37℃厌氧条件下培养36 h。然后将假小链双歧杆菌划线于mMRS(mMRS是加了0.05%半胱氨酸的MRS)固体培养基上,37℃厌氧条件下培养36h,得到单菌落;挑取单菌落接种于5 mL mMRS液体培养基中,37℃厌氧条件下培养36h进行活化,连续活化两代,得到活化液。所述细菌解冻及活化后,即可用于后续试验。
此外,下述实施例中使用的葡聚糖均为市售酵母β-葡聚糖。
实施例1:假小链双歧杆菌在不同葡萄糖含量的MRS培养基中的生长
将上述假小链双歧杆菌接入不同葡萄糖添加量(分别为2 g/100mL,1 g/100mL,0.5 g/100mL,0.25 g/100mL,0.15 g/100mL)的mMRS液体培养基,于37℃厌氧培养48 h后,观察假小链双歧杆菌的生长情况。如图1所示(试管中培养基的葡萄糖浓度从左到右递减),36h后,假小链双歧杆菌在0.15 g/100mL葡萄糖的MRS培养基中生长缓慢,可以勉强维持生长。故减糖MRS培养基中葡萄糖的浓度定为0.15 g/100mL,以用于后续β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸、乳铁蛋白促进假小链双歧杆菌生长的实验。
实施例2:假小链双歧杆菌在不同剂量β-葡聚糖的MRS培养基中的生长
以市售奶粉冲调比例为基准,将其中β-葡聚糖的液体浓度0.06375 mg/mL作为基准剂量,在基准剂量基础上,分别设置1/4,1/2,1,2,4,9倍(其中9倍为法规最大添加量)剂量,浓度分别为0.01594 mg/mL,0.03188 mg/mL,0.06375 mg/mL,0.1275 mg/mL,0.2550mg/mL,0.5738 mg/mLβ-葡聚糖。将活化两代后的假小链双歧杆菌,取1 mL菌液于无菌离心管中,5000 r/min离心15 min后弃去上层培养基得到菌泥,再用1 mL无菌生理盐水重悬,再以2%(V/V)的接种量接种于添加上述6种不同剂量β-葡聚糖的减糖MRS培养基中,接种不添加β-葡聚糖的减糖MRS培养基作为空白对照,置于酶标仪中,37℃下厌氧培养36 h,培养过程中,间隔4小时测量培养液的OD600。不同剂量β-葡聚糖下假小链双歧杆菌的生长曲线如图2所示。
由图2可知,假小链双歧杆菌在含有6种剂量的β-葡聚糖的培养基中和在对照组培养基中虽然差不多时刻进入到对数生长期,但是与对照组相比,假小链双歧杆菌在含有基准β-葡聚糖剂量的4倍和9倍的培养基时在稳定期具有更大的吸光度值,总细菌数最高,尤其在β-葡聚糖含量为基准剂量4倍时,OD600的值最大。此结果表明,假小链双歧杆菌对β-葡聚糖的利用存在剂量依赖作用,基准剂量4-9倍浓度(0.2550~0.5738 mg/mL)的β-葡聚糖对假小链双歧杆菌的生长存在促进作用。
实施例3:假小链双歧杆菌在不同剂量N-乙酰神经氨酸的MRS培养基中的生长
以市售奶粉冲调比例为基准,将其中N-乙酰神经氨酸的液体浓度0.05145 mg/mL作为基准剂量,在基准剂量基础上,分别设置1/4,1/2,1,2,4,10,22倍(其中22倍为法规最大添加量)剂量,浓度分别为0.01286 mg/mL,0.02573 mg/mL,0.05145 mg/mL,0.1029 mg/mL,0.2058 mg/mL,0.5145 mg/mL,1.1319 mg/mL N-乙酰神经氨酸。将活化两代后的假小链双歧杆菌,取1 mL菌液于无菌离心管中,5000 r/min离心15 min后弃去上层培养基得到菌泥,再用1 mL无菌生理盐水重悬,再以2%(V/V)的接种量接种于添加上述7种不同剂量N-乙酰神经氨酸的减糖MRS培养基,接种不添加N-乙酰神经氨酸的减糖MRS培养基作为空白对照,置于酶标仪中,37℃下厌氧培养36h,培养过程中,间隔4小时测量培养液的OD600。不同剂量N-乙酰神经氨酸下假小链双歧杆菌的生长曲线如图3所示。
由图3可知,假小链双歧杆菌在含有7种剂量的N-乙酰神经氨酸的培养基中和在对照组培养基中虽然差不多时刻进入到对数生长期,但是与对照组相比,假小链双歧杆菌在含有4倍-10倍基准剂量N-乙酰神经氨酸的培养基中在稳定期具有更大的吸光度值,总细菌数最高,OD600的值最大。此结果表明,假小链双歧杆菌对N-乙酰神经氨酸的利用存在剂量依赖作用,基准剂量4-10倍浓度(0.2058-0.5145 mg/mL)的N-乙酰神经氨酸对假小链双歧杆菌的生长存在促进作用。
实施例4:假小链双歧杆菌在不同剂量乳铁蛋白的MRS培养基中的生长
以市售奶粉冲调比例为基准,将其中乳铁蛋白的液体浓度0.0459 mg/mL作为基准剂量,在基准剂量基础上,分别往上设置2个梯度(2倍、4倍),往下设置2个梯度(1/2、1/4)即可得到5种浓度的乳铁蛋白培养物,其中4倍基准剂量超过法规允许添加量上限。因此,设置浓度分别为0.01148 mg/mL,0.02295 mg/mL,0.0459 mg/mL,0.0918 mg/mL,0.1500 mg/mL乳铁蛋白。将活化两代后的假小链双歧杆菌,取1 mL菌液于无菌离心管中,5000 r/min离心15 min后弃去上层培养基得到菌泥,再用1 mL无菌生理盐水重悬,再以2%(V/V)的接种量接种于添加上述5种不同剂量乳铁蛋白的减糖MRS培养基中,接种不添加乳铁蛋白的减糖MRS培养基作为空白对照,置于酶标仪中,37℃下厌氧培养36 h,培养过程中,间隔4小时测量培养液的OD600。不同剂量乳铁蛋白下假小链双歧杆菌的生长曲线如图4所示。
由图4可知,假小链双歧杆菌在含有5种剂量的乳铁蛋白的培养基中和在对照组培养基中虽然差不多时刻进入到对数生长期,但是与对照组相比,假小链双歧杆菌在1倍基线乳铁蛋白中无论是对数生长期还是稳定期都具有更大的吸光度值,总细菌数最高。在对数生长期,假小链双歧杆菌在1/4倍和2倍基准乳铁蛋白剂量中的OD600比对照组要低,在稳定期时间段内,假小链双歧杆菌在基准剂量1/2和4倍的乳铁蛋白中的OD600也比对照组要低。此结果表明,适中的乳铁蛋白剂量才能促进假小链双歧杆菌的生长,过多或过少促进假小链双歧杆菌的增殖效果都不明显,例如,1倍基准剂量(0.0459 mg/mL)的乳铁蛋白适合假小链双歧杆菌的生长。
实施例5:假小链双歧杆菌在不同剂量组合物的MRS培养基中的生长
根据实施例2选取β-葡聚糖促进假小链双歧杆菌增殖比较好的剂量是4倍基准剂量,其次为9倍和1倍。根据实施例3选取N-乙酰神经氨酸的最优剂量为4倍基准剂量,其次为10倍,1倍和22倍。根据实施例4选取乳铁蛋白的最佳剂量为1倍基准剂量。将β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸、乳铁蛋白以上述获得的可促进假小连双歧杆菌增殖的基准剂量倍数组合起来(1:4:1,9:4:1,4:1:1,4:10:1,4:22:1,4:4:1),然后分别将这些组合剂量扩大2倍(超过法规最大添加量则取消),缩小2倍,分别得到1:4:1,1/2:2:1/2,2:8:2,9:4:1,9/2:2:1/2,4:1:1,2:1/2:1/2,8:2:2,4:10:1,8:20:2,2:5:1/2,4:22:1,2:11:1/2,4:4:1,2:2:1/2,8:8:2的β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸、乳铁蛋白基准剂量倍数的组合物,共16个比例。将活化两代后的假小链双歧杆菌,取1 mL菌液于无菌离心管中,5000 r/min离心15 min后弃去上层培养基得到菌泥,再用1 mL无菌生理盐水重悬,再以2%(V/V)的接种量接种于添加上述16种不同剂量的β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸、乳铁蛋白组合物的减糖MRS培养基中,接种不添加任何组合物的减糖MRS培养基作为空白对照,置于酶标仪中,37℃下厌氧培养36 h,培养过程中,间隔4小时测量培养液的OD600。不同剂量组合物下假小链双歧杆菌的生长曲线如图5所示。
由图5可知,假小链双歧杆菌在16种剂量组合物中和对照组差不多时刻进入到对数生长期。由图6可知,在稳定期内,4:10:1,4:4:1,8:8:2,2:8:2,9/2:2:1/2,8:2:2,2:11:1/2等组合物均促进假小链双歧杆菌的生长,增加OD600值。尤其是4:10:1组合物促进假小链双歧杆菌生长最显著,约为对照组OD600的1.8倍,4:10:1,4:4:1,8:8:2剂量的组合物使假小链双歧杆菌的稳定期更长,这3种剂量的组合物可以提供更加充分的营养物质供假小链双歧杆菌利用,而2:8:2,9/2:2:1/2,8:2:2,2:11:1/2等组合物也有延长假小链双歧杆菌稳定期的趋势,其他剂量组合物和对照组条件下的假小链双歧杆菌稳定期较短,很快进入衰退期。综合考虑组合物对双歧杆菌的增殖能力,优选的方案包括组合物中β-葡聚糖2-8倍基准剂量,N-乙酰神经氨酸2-11倍基准剂量,乳铁蛋白0.5-2倍基准剂量,浓度分别为0.1275-0.5100 mg/mL,0.1029-0.5660 mg/mL,0.0230-0.0918 mg/mL。
实施例6:假小链双歧杆菌在适宜剂量的β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸、乳铁蛋白及组合物的MRS培养基中的生长
根据实施例2选取β-葡聚糖促进假小链双歧杆菌增殖比较好的剂量是4倍基准剂量,根据实施例3选取N-乙酰神经氨酸的最优剂量为4倍基准剂量,根据实施例4选取乳铁蛋白的最佳剂量为1倍基准剂量,根据实施例5选取组合物的适宜剂量为三者分别以4:10:1,4:4:1,8:8:2,2:8:2,9/2:2:1/2,8:2:2,2:11:1/2倍数的基准剂量进行的组合。将活化两代后的假小链双歧杆菌,取1 mL菌液于无菌离心管中,5000 r/min离心15 min后弃去上层培养基得到菌泥,再用1 mL无菌生理盐水重悬,再以2%(V/V)的接种量接种于分别添加上述3种最优剂量的β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸、乳铁蛋白以及7种适宜剂量组合物的减糖MRS培养基中,接种不添加β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸、乳铁蛋白或任何组合物的减糖MRS培养基作为空白对照,置于酶标仪中,37℃下厌氧培养36 h,培养过程中,间隔4小时测量培养液的OD600。适宜剂量的β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸、乳铁蛋白及组合物培养条件下假小链双歧杆菌ΔOD600(扣除空白对照)随时间变化情况如图7所示,具体数值如表1、2和3所示。
表1:不同比例β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白组合物与4倍β-葡聚糖培养条件下假小链双歧杆菌ΔOD600nm(扣除空白对照)随时间变化情况
注:*、**以及***分别表示组合物与4倍β-葡聚糖培养条件下的ΔOD600nm相比,P<0.05、P<0.01以及P<0.001。
表2:不同比例β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白组合物与4倍N-乙酰神经氨酸培养条件下假小链双歧杆菌ΔOD600nm(扣除空白对照)随时间变化情况
注:*、**以及***分别表示组合物与4倍N-乙酰神经氨酸培养条件下的ΔOD600nm相比,P<0.05、P<0.01以及P<0.001。
表3:不同比例β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白组合物与1倍乳铁蛋白培养条件下假小链双歧杆菌ΔOD600nm(扣除空白对照)随时间变化情况
注:*、**以及***分别表示组合物与1倍乳铁蛋白培养条件下的ΔOD600nm相比,P<0.05、P<0.01以及P<0.001。
由图7可知,单一的β-葡聚糖(4倍基准剂量)、N-乙酰神经氨酸(4倍基准剂量)和乳铁蛋白(1倍基准剂量)均能促进假小链双歧杆菌的生长(ΔOD600nm不为零)。该实施例所选取的7个比例组合物(4:10:1,4:4:1,8:8:2,2:8:2,9/2:2:1/2,8:2:2,2:11:1/2)也促进了假小链双歧杆菌的生长(ΔOD600nm不为零),且ΔOD600nm随时间迁移均保持了增加的趋势,这说明随培养时间的增加,假小链双歧杆菌保持了较好的、平稳的生长态势,而随着对照组后期快速进入了衰退期,因此组合物与对照的OD600nm差距拉大,组合物ΔOD600nm增加更为明显。通过表1、表2以及表3的数据可以看出,7个比例组合物培养条件下对应时间的ΔOD600nm很多情况下都显著高于单一的β-葡聚糖(4倍基准剂量)、N-乙酰神经氨酸(4倍基准剂量)和乳铁蛋白(1倍基准剂量)培养条件下的ΔOD600nm值(P<0.05、P<0.01或P<0.001),尤其是4:4:1、8:8:2、4:10:1、8:2:2以及2:11:1/2这几个比例的组合物,ΔOD600nm值更高,且这种显著性差异持续时间更长(从8h直到36h)。在所有这些组合物中,又以4:10:1培养条件下的ΔOD600nm值最高,与单一的β-葡聚糖(4倍基准剂量)、N-乙酰神经氨酸(4倍基准剂量)和乳铁蛋白(1倍基准剂量)培养条件相比显著性差异持续时间最长,从培养的第4h直到第36h。上述数据说明,本实施例所选取的7个组合物均能不同程度地促进假小链双歧杆菌的生长,且β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白对假小链双歧杆菌的增殖具有协同增效的作用。细菌生长繁殖的条件包括充足的营养物质,适宜酸碱度,合适的温度,必要的气体环境等。细菌表面积大,代谢旺盛,代谢类型多样,生长繁殖迅速,具有十分复杂的生长模式。在促进益生菌生长的实施例中,当组合物的促进作用大于组合物中任一单一物质的促进作用时,即可认为该组合物具有协同增效作用,即接种菌株的组合物培养基OD600值大于任一单一物质培养基OD600值。如申请号为CN202110770059.9的中国专利申请公开了由龙眼、枸杞和红枣复合而成的组合物促进复合益生菌株增殖的效果高于单一多糖,组合物具有协同益生增效作用。
综上,进一步证明最优选的组成配比可以为β-葡聚糖2-8倍基准剂量,N-乙酰神经氨酸2-11倍基准剂量,乳铁蛋白0.5-2倍基准剂量,浓度分别为0.1275-0.5100 mg/mL,0.1029-0.5660 mg/mL,0.0230-0.0918 mg/mL的组合物能有效促进假小链双歧杆菌的增殖,三者有协同增效的作用。该组合物可促进假小链双歧杆菌生长为对照组(不含β-葡聚糖,N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白的条件)的1.8倍,能为假小链双歧杆菌提供较多的营养物质,延长假小链双歧杆菌的稳定期,减缓进入衰退期。因此,可以使肠道中潜在的益生菌假小链双歧杆菌增多,改善肠道健康。
产业上的可利用性
本发明提供的组合物在食品、保健品等行业可以广泛应用。
Claims (10)
1.一种培养基组合物,其特征在于,所述组合物包括基础营养组分以及添加组分,所述添加组分包含β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白,
其中,所述组合物中以干重计,所述β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白的质量比为(0.10~0.60):(0.08~0.70):(0.018~0.20)。
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述组合物中,所述β-葡聚糖为酵母-β-葡聚糖,所述N-乙酰神经氨酸为乳源N-乙酰神经氨酸或燕窝来源的N-乙酰神经氨酸或经生物发酵获得的N-乙酰神经氨酸。
3.根据权利要求1或2所述的组合物,其特征在于,所述组合物中,所述基础营养组分包括蛋白类成分、脂类成分、糖类成分、维生素类成分、矿物质类成分、pH调节成分中的一种或多种成分。
4.根据权利要求1~3任一项所述的组合物用于促进双歧杆菌生长的用途,其中,在厌氧条件下使用所述组合物以促进所述双歧杆菌的生长。
5.一种具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物,其特征在于,所述具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物包含β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白,
并且以干重计,所述β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸和乳铁蛋白的质量比为(0.10~0.60):(0.08~0.70):(0.018~0.20)。
6.根据权利要求5所述的具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物,其特征在于,所述双歧杆菌包括假小链双歧杆菌Bifidobacterium pseudocatenulatum、青春双歧杆菌Bifidobacterium adolescentis、婴儿双歧杆菌Bifidobacterium infantis、两歧双歧杆菌Bifidobacterium bifidum、长双歧杆菌Bifidobacterium longum和短双歧杆菌Bifidobacterium breve中的一种或多种。
7.根据权利要求5或6所述的具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物,其特征在于,所述具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物任选地包括其他营养性成分。
8.根据权利要求5或6所述的具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物,其特征在于,所述具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物为液体、半固体或固体。
9.一种食品,其特征在于,所述食品包括根据权利要求5~8任一项所述的具有促进肠道内双歧杆菌生长功效的组合物,或者由其制备而得到。
10.根据权利要求9所述的食品,其特征在于,所述食品为粉末状可冲调食品、烘焙类食品、饮料、糖果、乳及乳制品、发酵制品、面食制品或口服制剂。
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