CN114304651A - 提高免疫力组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种功能性营养组合物,尤其是一种提高免疫力组合物。所述组合物包括:i)母乳低聚糖,所述母乳低聚糖至少包括中性岩藻糖基化的母乳低聚糖;ii)一种或多种的来源的β‑葡聚糖,其中,所述母乳低聚糖与所述β‑葡聚糖的用量比为33~50:1,并且所述组合物任选地包括其它营养性成分。
Description
技术领域
本发明属于食品领域,涉及一种功能性营养组合物,更具体的,涉及一种具有提高免疫力作用的功能性保健或营养组合物。
背景技术
正常生理状况下,肠道的细菌和毒素并不对机体产生危害,这与机体各系统之间的相互协调和肠道特有的完整屏障功能有关。其中,由肠上皮内淋巴细胞、固有层淋巴细胞、Peyer’s淋巴结等肠相关性淋巴组织成的肠道粘膜免疫屏障,在防御和抵制细菌、病毒和毒素的入侵中有着举足轻重的作用。肠道粘膜免疫是机体防止感染的第一防线。粘膜免疫除了IgA发挥重要作用外,位于小肠上皮内淋巴细胞(IEL)包括T细胞及B细胞也不可或缺。当细菌、病毒等突破第一道防线进入机体后,全身免疫发挥作用,识别并清除外来入侵的物质,使人体免于被攻击。因此,我们开发出提高婴幼儿、儿童及成人免疫力,增强肠道黏膜免疫及全身免疫的营养组合物,其中包括2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)和酵母β-葡聚糖两种成分。
母乳低聚糖(HMOs)是母乳中除乳糖和乳脂外的第三大固体组分,含量介于约5~12g/L(成熟母乳)之间。其不被人体的胃酸破坏,也不被消化酶分解,能直接达到大肠,刺激肠道中的有益菌群(双歧杆菌和乳杆菌)生长,间接抑制有害菌群生长,维持肠道微生态平衡。另外,HMOs能间接影响人体非特异性免疫反应,其抗原决定簇在免疫系统信息传递和免疫协调方面有着不可取代的作用。肠道是人体最大免疫器官,拥有人体70%的免疫细胞,双歧杆菌能刺激肠道产生免疫物质和抗体,增强细胞活性,从而提高机体对病原菌和肿瘤的免疫力。人类母乳中HMOs由5种单体组成:D-葡萄糖(D-glucose,Glc)、D-半乳糖(D-galactose,Gal)、N-乙酰氨基葡萄糖(N-acetylglucosamine,GlcNAc)、L-岩藻糖(L-fucose,Fuc)和唾液酸(sialic acid,Sia),其中,2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)是母乳中含量最高的HMOs,已被证明可以促进免疫调节。虽然我国尚未批准HMOs应用于婴幼儿配方食品,欧洲食品安全局于2015年已经得出结论,2’-FL与LNnT一起添加到婴儿配方食品和后续配方食品中时,对1岁以下的婴儿是安全的。
已知的是β-葡聚糖是由葡萄糖单位构成的,在微生物、植物和动物中广泛存在,是葡萄糖的多聚糖单位。结构上它们大部分是以β-1,3键结合,是一种聚合物,具有一定的生物活性。20世纪中叶,外国学者发现酵母细胞壁上存在着一种增强免疫功能的物质,20多年后才确定了这一活性物质就是β-1,3-葡聚糖。作为β-葡聚糖其中一种来源的酵母葡聚糖来源于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),由于其特殊的结构具有多种生理活性,并且在美国FDA已将它列入GRAS(通常认为是安全的)中,作为食品原料,被广泛运用于各种食品中。
β-葡聚糖被认为可以刺激免疫系统,调节体液免疫和细胞免疫,因此它们在对抗传染病(如细菌、病毒、真菌和寄生虫病)方面具有有益的作用。其作用于多种免疫受体,并激活一系列免疫细胞,包括巨噬细胞、中性粒细胞、单核细胞、自然杀伤细胞和树突状细胞。因此,β-葡聚糖可以调节先天性和适应性反应,也可以增强吞噬功能。小的β-葡聚糖片段最终被巨噬细胞释放,并被其他免疫细胞吸收,从而产生各种免疫反应。
虽然一些实验结果显示2’-岩藻糖基乳糖以及β-葡聚糖似乎存在调节免疫作用,提高人体免疫力的功效,但有关二者在食品等中的应用的研究并不充分,将多种具有保健功效的物质混合使用在目前最为普遍。例如:
引用文献1公开了一种包含低聚糖的个性化营养组合物,所述低聚糖的45%~55%是α-1,2岩藻糖基化的,该营养组合物对特定基因型妈妈哺育的婴幼儿生命早期肠道菌群的正常建立以及肠道免疫功能有一定促进作用,可预防腹泻。
引用文献2提出了冬虫夏草提取物与用途,对冬虫夏草非水溶性多糖进行了研究,得到了免疫活性较好的非水溶性多糖提取物(CEP),适合工艺大规模生产,其中,所述提取物中的β-葡聚糖的含量为42%~46%,免疫活性高。
引用文献3公开了一种促进智力发育和肠道健康的母乳化婴幼儿配方奶粉及其制备方法和应用,该配方奶粉是将牛乳/羊乳、脱盐乳清粉、复合植物油、复合母乳低聚糖、复合维生素和复合矿物质等混匀,溶解,均质,浓缩,喷雾干燥,再与乳铁蛋白、唾液酸、复合果粉和复合益生菌粉等混合均匀制得。其利用复合组分间协同增效,使其配方奶粉活性成分更接近于母乳。
引用文献:
引用文献1:CN112841316A
引用文献2:CN110511292A
引用文献3:CN112535218A
发明内容
发明要解决的问题
如前所述,本领域中已经提出了与提高免疫力相关的各种功能性组合物。但在具体的研究实践中,发明人也发现了如下问题:
引用文献1中公开了一种包含人乳低聚糖(HMO)的营养组合物,为中国母亲母乳喂养的婴儿提供精准的营养方案,但没有单独研究中性岩藻糖基化的HMO对于提高免疫力有何促进作用,同时也且并未涉及β-葡聚糖。引用文献2中虽公开了所述冬虫夏草提取物中含有较多的β-葡聚糖,但未明确其与提高免疫力等效果之间的联系,也未涉及中性岩藻糖基化的HMO。引用文献3虽公开了含有HMOs与酵母β-葡聚糖的促进益智和肠道健康的配方奶粉,但未通过实验验证中性岩藻糖基化的HMO,尤其是没有验证2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)与酵母β-葡聚糖的用量比是否能够带来协同效应。
因此,针对现有技术存在的上述不足,本发明要解决的问题在于提供一种组成简单的具有提高免疫力作用的组合物,通过科学设计该组合物中中性岩藻糖基化的HMO,尤其是2’-岩藻糖基乳糖与β-葡聚糖的配比,能够获得协同增效作用,满足了市场对增强免疫力功能组合物的需求。
用于解决问题的方案
通过本发明发明人长期的研究,发现通过以下的技术方案能够解决上述技术问题:
[1].一种功能性组合物,其特征在于,所述组合物包括:
i)一种或多种的母乳低聚糖(HMOs),所述母乳低聚糖至少包括中性岩藻糖基化的母乳低聚糖;
ii)一种或多种的来源的β-葡聚糖,
其中,所述组合物中,所述母乳低聚糖与所述β-葡聚糖的用量比为33~50:1,并且所述组合物任选地包括其它营养性成分。
[2].根据[1]所述的组合物,其特征在于,所述母乳低聚糖与所述β-葡聚糖的用量比为35~47:1。
[3].根据[1]或[2]所述的组合物,其特征在于,所述母乳低聚糖的含量为0.1质量%以上,所述β-葡聚糖的含量为0.01质量%以上。
[4].根据[1]~[3]任一项所述的组合物,其特征在于,所述中性岩藻糖基化的母乳低聚糖包括2’-岩藻糖基乳糖;所述β-葡聚糖包括酵母β-葡聚糖。
[5].根据[4]所述的组合物,其特征在于,所述2’-岩藻糖基乳糖选自从发酵培养基中获得,或分离纯2’-岩藻糖基乳糖获得,或人工合成得到;所述β-葡聚糖选自来源于植物或者真菌的β-葡聚糖中的一种或多种。
[6].根据[1]~[5]任一项所述的组合物,其特征在于,所述组合物为液体、半固体或固体。
[7].一种提高免疫力组合物,其特征在于,所述组合物包括根据[1]~[6]任一项所述的组合物。
[8].一种食品,其特征在于,所述食品经由根据[1]~[7]任一项所述的组合物而得到。
[9].根据[8]所述的食品,其特征在于,所述食品包括面食、饮料、可冲调食品、烘焙糕点、酱料或功能性营养补充食品。
[10].根据[9]所述的食品,其特征在于,所述食品为儿童或婴儿食品。
发明的效果
通过上述技术方案的实施,本发明具有如下优势以及能够获得如下的技术效果:
1)本发明提供的提高免疫力功能性组合物,组成简单明确,更有利于方便、准确的复配,也更有利于便利地添加或制备各种食品或保健品;
2)本发明的组合物中中性岩藻糖基化的母乳低聚糖,尤其是2’-岩藻糖基乳糖与β-葡聚糖在限定的用量的配合下,能够获得协同增效作用,增强肠道粘膜免疫以及全身免疫,提高机体对疾病的抵抗力。
3)本发明的组合物中的2’-岩藻糖基乳糖与β-葡聚糖用量均在安全用量范围内,因此可以长期使用,同时适用于婴幼儿、儿童、成人等各类人群;
具体实施方式
以下,针对本发明的内容进行详细说明。以下所记载的技术特征的说明基于本发明的代表性的实施方案、具体例子而进行,但本发明不限定于这些实施方案、具体例子。需要说明的是:
本说明书中,使用“数值A~数值B”表示的数值范围是指包含端点数值A、B的范围。
本说明书中,使用“以上”或“以下”表示的数值范围是指包含本数的数值范围。
本说明书中,使用“可以”表示的含义包括了进行某种处理以及不进行某种处理两方面的含义。
本说明书中,使用“任选”或“任选的”表示某些物质、组分、执行步骤、施加条件等因素使用或者不使用。
本说明书中,所使用的单位名称均为国际标准单位名称,并且如果没有特别声明,所使用的“%”均表示重量或质量百分含量。
本说明书中,使用“基本上”表示与理论模型或理论数据的标准偏差在5%、优选为3%、更优选为1%范围以内。
本说明书中,所提及的“一些具体/优选的实施方案”、“另一些具体/优选的实施方案”、“实施方案”等是指所描述的与该实施方案有关的特定要素(例如,特征、结构、性质和/或特性)包括在此处所述的至少一种实施方案中,并且可存在于其它实施方案中或者可不存在于其它实施方案中。另外,应理解,所述要素可以任何合适的方式组合在各种实施方案中。
<第一方面>
本发明的第一方面中,提供了一种包括i)一种或多种母乳低聚糖和ii)一种或多种的来源的β-葡聚糖的功能性组合物。并且,所述母乳低聚糖至少包括中性岩藻糖基化的母乳低聚糖。另外,所述组合物任选地包括其它营养性成分。该组合物中的上述二者组分表现出了明显的协同增效作用,以增强肠道粘膜免疫以及全身免疫,提高机体对疾病的抵抗力。
本发明的技术方案主要是基于如下的见解而得到:
本发明通过实验研究了不同含量、不同比例的中性岩藻糖基化的母乳低聚糖,尤其是2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)与酵母β-葡聚糖的组合物对免疫功能的影响。通过进行组合物免疫功效动物实验,分别对二者各自的、以及在不同用量配合的情况下增强免疫力的功能进行评价,因此,意外的发现了在特定含量的配合下,中性岩藻糖基化的母乳低聚糖与酵母β-葡聚糖在提高人体免疫力方面能够产生明显的协同增效作用。
(母乳低聚糖)
母乳低聚糖HMOs是母乳中天然存在的聚合度≥3的低聚糖的统称。它是在乳糖分子的基础上终端位置由5种单体进行修饰,即葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)、岩藻糖(Fuc)和N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)。HMO每个分子包含3至32个单糖,这些单糖通过不同的糖苷键加以连接,构成了HMO的多样性和复杂性。
HMOs基于其核心结构可分为中性岩藻糖基化HMO(其在末端位置含有岩藻糖)、中性非岩藻糖基化的HMO(末端含有N-乙酰氨基葡萄糖)、和酸性或唾液酸化的HMO(末端含有唾液酸)三种类型,其在母乳低聚糖中的比率通常分别为35~50%、42~55%、和12~14%。
岩藻糖基化低聚糖是具有岩藻糖残基的低聚糖。岩藻糖基化低聚糖的岩藻糖基表位可在粘膜表面处充当“诱饵(decoy)”。该表位可利用竞争效应来防止并/或限制致感染的病原体(病毒或细菌来源)或病原体所分泌物质(如毒素)发挥作用,尤其是避免病原体或病原体所分泌物质与天然配体结合,因此降低感染/炎症风险。以下举例说明岩藻糖基化低聚糖的种类:2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL),其为由L-岩藻糖、D-半乳糖和D-葡萄糖单元组成的中性三糖,其中单糖L-岩藻糖通过α(1→2)键与二糖D-乳糖相连。其分子式为C18H31O15,分子量为488.439g/mol,分子结构如下:
3’-岩藻糖基乳糖(3’-FL),其为由L-岩藻糖、D-半乳糖和D-葡萄糖单元组成的中性三糖,其中单糖L-岩藻糖通过α(1→3)键与D-葡萄糖相连。其分子式为C18H32O15,分子量为488.44g/mol;
乳糖-N-岩藻五糖I(LNFP I),其为由L-岩藻糖、D-葡萄糖、2分子D-半乳糖、N-乙酰氨基葡萄糖单元组成的中性五糖,其中单糖L-岩藻糖通过α(1→3)键与D-葡萄糖相连。其分子式为C32H55NO25,分子量为853.77g/mol;
乳糖-N-二岩藻六糖I(LNDFH I),其为由2分子L-岩藻糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、N-乙酰氨基葡萄糖单元组成的中性六糖,其中单糖L-岩藻糖通过α(1→2)键、α(1→4)键分别与D-半乳糖、N-乙酰氨基葡萄糖相连。其分子式为C38H65NO29,分子量为999.91g/mol;
乳糖-N-二岩藻六糖II(LNDFH II),其为由2分子L-岩藻糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、N-乙酰氨基葡萄糖单元组成的中性六糖,其中单糖L-岩藻糖通过α(1→3)键、α(1→4)键分别与D-葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖相连。其分子式为C38H65NO29,分子量为999.91g/mol。
本发明中所述的母乳低聚糖HMOs至少包括上述的中性岩藻糖基化的低聚糖,并且,中性岩藻糖基化的低聚糖优选为2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)。
2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)是人乳中的一类低聚糖。其生物学功能已经引起人们广泛关注,是当今国际营养学研究的热点。已有诸多研究结果提示,低聚糖类在促进婴幼儿生产发育,调节肠道菌群等方面有重要意义。
2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)为白色至乳白色粉末,有吸湿性,无味,在水中的溶解度为500g/L,作为低聚糖类的2’-FL,其产品特性比较稳定,在生产加工过程中以及货架期几乎不会出现损失。
本发明中对于2’-岩藻糖基乳糖的来源没有特别限制,在本发明中一些具体的实施方案中,通过发酵工艺制备,利用一系列过滤和色谱步骤,从发酵培养基中获得,或分离纯2’-岩藻糖基乳糖获得,也可以人工合成得到,并且优选地,可以通过人工合成得到。
进一步,对于2’-岩藻糖基乳糖的使用方式,没有特别限制,可以先将2’-岩藻糖基乳糖制备为溶液使用。
在本发明一些具体的实施方案中,所述母乳低聚糖中,所述2’-岩藻糖基乳糖的含量为80质量%以上,优选为85质量%以上,更优选为90质量%以上,再优选为95质量%以上。
(β-葡聚糖)
Beta-葡聚糖(简称β-葡聚糖),属于纤维类多糖(复合糖),结构上,它们大部分是以β-1,3键结合的一种聚合物,并且可来源于多种微生物、动物或植物。
本发明中对于β-葡聚糖的具体来源没有特别限制,可以适用于本发明的β-葡聚糖的来源包括酵母、燕麦、大麦、真菌(菇类)以及藻类等中的一种或它们的混合物。可以进一步具体列举的例如燕麦β-葡聚糖、海带β-葡聚糖、热凝胶β-葡聚糖、金藻昆布β-葡聚糖、香菇β-葡聚糖、地衣β-葡聚糖、平菇β-葡聚糖、酵母多糖、黑木耳β-葡聚糖、大麦多糖。
在本发明一些优选的实施方案中,对于β-葡聚糖,可以使用来自于酵母、燕麦、大麦来源的β-葡聚糖中的一种或它们的混合物,更优选地,选自酵母β-葡聚糖和/或燕麦β-葡聚糖。
在本发明中一些具体的实施方案中,对于β-葡聚糖可以使用含有该成分的植物、真菌等原料以赋予最终组合物中的一定含量的β-葡聚糖,另外优选的,也可以直接使用从这些原料中提取的具有较高纯度的β-葡聚糖有效成分。
进一步,对于使用提取的β-葡聚糖的使用方式,没有特别限制,可以直接使用这样的β-葡聚糖形成混合物,也可以先将β-葡聚糖制备为溶液或乳液的方式使用。
(协同增效)
尽管现有技术中,对于母乳低聚糖和β-葡聚糖的研究有初步的结论显示了二者均可能存在一定的提高免疫力的功效,但对于二者是否存在或者可能形成协同增效的免疫力改善能力并无研究和报告。
本发明中,认为以特定含量将中性岩藻糖基化的母乳低聚糖,尤其是2’-岩藻糖基乳糖与β-葡聚糖组合使用,能够意外的发现对于提高免疫力具有协同增效的现象。具体而言,本发明提供的功能性组合物中,从保证协同效果以及用量安全性的角度考虑,所述2’-岩藻糖基乳糖与β-葡聚糖含量过低,则有导致协同效果不佳的担忧,含量过高也存在人体安全性不佳的担忧。
在一些具体的实施方案中,中性岩藻糖基化的母乳低聚糖,尤其是2’-岩藻糖基乳糖与β-葡聚糖的用量比在33:1以上,优选为34:1以上,更优选为35:1以上,可以具体列举的为(36,37或38):1以上。另外,可以在140:1以下,优选为50:1以下,更优选在48:1以下,可以列举的包括(47、46、45、44、43、42或41):1以下。
另外,对于组合物中中性岩藻糖基化的母乳低聚糖与β-葡聚糖的绝对含量(尤其是上限绝对含量),本发明没有特别的限制,一方面与食品安全规定有关,另一方面也与不同产品的形态和使用方式相关。可以列举的是,在一些具体的实施方案中,本发明提供的功能性营养组合物中,以组合物的总质量计,从保证协同效果以及用量安全性的角度考虑,所述中性岩藻糖基化的母乳低聚糖,尤其是2’-岩藻糖基乳糖的含量为0.10质量%以上,所述β-葡聚糖的含量为0.01质量%以上。在一些实施方案中,2’-岩藻糖基乳糖的含量可以为0.10~8.00质量%(例如0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2、2.4、2.6、2.8、3.0、3.2、3.4、3.6、3.8、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5质量%等);在一些实施方案中,β-葡聚糖的含量0.01~0.3量%(例如0.015、0.02、0.025、0.035、0.04、0.045、0.05、0.055、0.06、0.065、0.07、0.075、0.08、0.085、0.09、0.095、0.1、0.12、0.14、0.16、0.18、0.20、0.22、0.24、0.26、0.28、0.30质量%等)。
本发明进一步发现,单独使用2’-岩藻糖基乳糖或β-葡聚糖对于提高免疫力的效果而言并不能说是明显的但通过上述含量的匹配,发现二者满足上述使用条件,则可以观察到协同增效效用。
(组合物)
本发明的功能性组合物至少包括了上文所描述的中性岩藻糖基化的母乳低聚糖,尤其是2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)和β-葡聚糖。对于组合物的形成方式,没有特别的限定,可以由上文所述的包含这些成分的植物、真菌等物质混合而成,也可以是将高纯度的两种提取物进行混合。
此外,对于本发明的组合物中还可以使用的其他组分,没有特别限定,在不损害本发明效果的前提下,可以使用本领域常用的其他可食用成分、食品添加剂或溶剂组分等。
本发明的功能性组合物可以为液态方式存在,也可以为半固态或固态方式而存在。
进一步,本发明的上述组合物通过动物实验验证,发现其不仅可增强肠道黏膜免疫,也能调节全身免疫,因此,可以作为一种功能性保健品或功能性保健添加物而被使用。
<第二方面>
本发明的第二方面中,提供了一种功能性营养补充食品,尤其是适合于婴幼儿、儿童、及成人的提高免疫力食品。其经由根据上述第一方面所描述的功能性组合物而加工得到。
对于本发明的食品,没有特别限制,通常可以为面食、饮料、可冲调食品、烘焙糕点、酱料或功能性营养补充食品。
对于面食,可以包括作为主食的面粉类原料加工或制作的主食、杂粮类主食等,具体的例如馒头类、饼类、面条类、馅类主食等。
对于烘焙糕点,可以为主要基于奶油、鸡蛋和发酵粉类的烘焙蛋糕或饼干等。
对于饮料,没有特别限制,可以为水果类饮品、蔬菜类饮品、奶茶类饮品、茶类饮品、牛奶、酸奶、维生素类饮料等。对于水果或蔬菜类饮品,除了可以包括本发明的两种功能性组分以外,还可以包括水果或蔬菜的汁液、或它们的固体成分等。对于维生素饮料,除了可以包括本发明的两种功能性组分以外,还主要的包含功能性的各种维生素以及其他功能性成分,具体可以例如包括白砂糖、甜蜜素、安赛蜜、牛磺酸、山梨酸钾、赖氨酸、肌醇、维生素pp、维生素B6、维生素B12、柠檬酸等。
对于可冲调食品,典型地可以为可冲调的奶粉制品,例如婴幼儿奶粉、成人奶粉、中老年奶粉等,尤其地,本发明的组合物非常适合于婴幼儿奶粉的制备。
另外,对于功能性营养补充食品,没有特别限制,可以作为营养补充剂或替代餐而使用,这样的食品中,除了包括本发明的两种功能性组分以外还可以包括如下组分中的一种或多种:蛋白质、脂肪、必要的碳水化合物、膳食纤维、补充元素、维生素、植物或膳食成分等。
其中,所述蛋白质选自乳清蛋白粉、大豆分离蛋白、全脂奶粉、全蛋粉、乳铁蛋白、牛初乳、氨基酸、蛋白肽中的至少一种;并且,所述氨基酸选自L-赖氨酸-L-谷氨酸、L一谷氨酸、L一精氨酸、L-色氨酸、L一谷氨酰胺、牛磺酸、L一缬氨酸、L-异亮氨酸、L一亮氨酸中的至少一种;所述蛋白肽选自大豆低聚肽、小麦蛋白肽、蚕蛹蛋白肽、海洋鱼低聚肽粉、可乐肽、氨基肽、卵白蛋白肽中的一种或多种。
所述脂肪可以包括饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、OPO结构脂、DHA、EPA、ARA、磷脂中的至少一种,更具体地说所述脂肪包括红花籽油、核桃油,花生油,大豆油,阿甘油、橄榄油、茶油、美藤果油、橄榄油、椰子油、紫苏油、深海鱼油、可可油、棕榈油、牛油、奶油、猪油、中链甘油三酯、卵磷脂。
所述碳水化合物包括淀粉或改性淀粉。所述膳食纤维包含菊粉、魔芋粉、低聚半乳糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖、大豆多糖、环糊精、抗性糊精、大豆纤维中的一种或多种。
所述补充元素选自柠有机酸类的金属离子盐,例如檬酸钙、L-乳酸钙、磷酸氢钙、葡萄糖酸钾、柠檬酸钠、葡萄糖酸亚铁、碘化钾、葡萄糖酸锌、亚硒酸钠、葡萄糖酸铜、硫酸铬、葡萄糖酸锰和葡萄糖酸镁中的一种或多种。
所述维生素选自维生素A、β-胡萝卜素、维生素D3、维生素E、维生素K1、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素C、泛酸、叶酸、烟酸、胆碱、肌醇、生物素中的一种或多种。
所述植物或膳食成分包括谷类、豆类、薯类、蔬菜类、菌藻类、坚果种子类、鱼虾类、禽畜肉类、水果类中的一种或多种。
实施例
以下,将通过具体的实施例对本发明进行进一步具体说明。除非特别说明,本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规的试剂、方法和设备。
组合物免疫功效动物实验
1材料与方法
1.1主要试剂
本试验中所用的主要试剂包括:RPMI-1640培养基(HyClone)、胎牛血清(HyClone)、Hank’s液(北京索莱宝)、无水乙醇、冰醋酸、Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒,日本同仁)、sIgA试剂盒(泉州科诺迪)、转化生长因子-β(TGF-β)试剂盒(泉州科诺迪)。
1.2主要仪器设备
LDZF-50KB-II立式压力蒸汽灭菌器、VD-1320型洁净工作台、HPG-9245烘箱、全系列Eppendorf移液器、GL-21M高速冷冻离心机、电子显微镜、PL2002型及AL104型电子天平、涡旋振荡器、HF90型CO2培养箱、AE-30倒置生物显微镜、Model 680型酶标仪。
1.3实验动物
选用北京维通利华实验动物技术有限公司[许可证号:SCXK(京)2016-0006]繁殖的BALB/c雌性小鼠144只。实验动物使用许可证号:SYXK(黑)2019-0001。维持饲料由沈阳茂华生物科技有限公司[许可证号:SCXK(辽)2017-0001]生产。
1.4实验分组
实验动物饲养室内温度20-25℃,相对湿度40-70%,24小时明亮交替,自由饮水饮食,适应性喂养7天后开始正式实验。144只雌性BALB/c小鼠随机分为12组,每组12只。动物实验实施例2-12持续30天隔天灌胃样品,动物实验实施例1灌胃等量生理盐水,各组均饲喂维持饲料。具体实验剂量见下表。
通过将2’-FL、酵母β-葡聚糖按照如下表1中所示的在组合物中的占比制备对比例和实验例。
表1:动物实验剂量
1.5检测指标
1.5.1小鼠结肠细胞因子测定
准确称量100mg的结肠组织,将结肠样本切成小块,然后将结肠和900μLPBS放入玻璃研磨器进行研磨,制成10%的悬液,4℃10000rpm离心10min,最后将结肠上清液移入离心管。利用ELISA试剂盒(科诺迪生物公司,泉州,中国)测定上清液TGF-β的含量,按照试剂盒说明书进行检测。
1.5.2小鼠粪便sIgA测定
准确称量100mg的粪便,加入1000μL PBS,放在振荡器上振动15s,制成悬液。4℃10000rpm离心10min,最后将粪便上清液移入离心管。通过ELISA试剂盒(科诺迪生物公司,泉州,中国)测定sIgA的含量,按照试剂盒说明书进行检测。
1.5.3小鼠脾细胞提取
固定小鼠,摘眼球放血,颈椎脱臼处死小鼠后,将其放入盛有75%乙醇的烧杯中浸泡3-5min,在超净台上沿腹腔中线剪开小鼠胸腔,无菌取出脾脏,将其置于200目不锈钢网筛,网筛中央浸没于盛有Hank’s液的平皿中,用无菌注射器芯研磨脾脏组织,用Hank’s液把网上剩余组织吹洗掉,收集脾脏组织悬液于无菌离心管中,1000r/min离心5min,弃去上清液,加入2-3mL红细胞裂解液到洗过的细胞中,混匀后静置2-3min,待红细胞完全破碎,再以1000r/min离心5min后弃上清液,以除去血红细胞,再用RPMI-1640不完全培养基离心洗涤细胞2次。收集细胞,含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养基重悬细胞,细胞悬液用台盼蓝染色后,血球计数板计数,确保活细胞比例不小于95%,计数后用含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养基调整脾细胞浓度为1×104个/mL备用。
1.5.4NK细胞活性的测定
将脾细胞(效应细胞)和靶细胞各100μL/孔接种于96孔板,作为反应对照孔(C);效应细胞孔(B),其中加入效应细胞和RPMI-1640完全培养液各100μL;靶细胞自然释放孔(A),加靶细胞和RPMI-1640完全培养液各100μL,以加入无血清的RPMI-1640培养液200μL作为对照孔(调零孔)。细胞在37℃、5%CO2培养箱中培养20h,加入15μL/孔CCK-8溶液,继续培养4h,振荡混匀;之后用酶标仪在450nm处测定各孔光密度值。按下列方式计算NK细胞活性:NK细胞活性(%)=(A+B-C)/A×100%
1.6统计学分析
实验数据以平均数±标准差(mean±SD)的方式来表示,每个实验至少独立重复三次,采用GraphPad Prism 8.00、Excel 2018及R语言绘制图表,应用SPSS 16.0软件对实验数据进行统计分析,运用单因素方差分析(Duncan’smultiple range test)。P<0.05代表差异显著。
2.结果
2.1各受试物对小鼠结肠TGF-β分泌的影响
为评价受试物单独或混合处理对小鼠肠道黏膜免疫功能的影响,测定了各组结肠抗炎细胞因子TGF-β的分泌,如表2所示。
表2:各受试物对小鼠结肠TGF-β分泌的影响(mean±SD,n=12)
注:*与空白对照组比较P<0.05,**与空白对照组比较P<0.01,#与2’-FL组为2790.0mg/kg.bw比较P<0.05,##与2’-FL为2790.0mg/kg.bw组比较P<0.01,^与酵母β-葡聚糖为117.6mg/kg.bw组比较P<0.05,^^与酵母β-葡聚糖为117.6mg/kg.bw组比较P<0.01。
上表中,与对照组相比,2’-FL用量为2790.0mg/kg.bw组、酵母β-葡聚糖用量为117.6mg/kg.bw组可增加结肠TGF-β的分泌,说明这两种成分均有助于增强小鼠肠道黏膜免疫。
另外,如果实验例1和实验例2二者数值直接叠加,则认为“相对于对照组的增量”中的数值应当不超过28.95+8.32=37.27(pg/ml),那么,可以看到实验例10和实验例11的数据显示出了两种物质在特定比例下具有协同增效的效果。
2.2各受试物对小鼠结肠sIgA分泌的影响
表3:各受试物对小鼠结肠sIgA分泌的影响(mean±SD,n=12)
注:*与空白对照组比较P<0.05,**与空白对照组比较P<0.01,#与2’-FL组为2790.0mg/kg.bw比较P<0.05,##与2’-FL为2790.0mg/kg.bw组比较P<0.01,^与酵母β-葡聚糖为117.6mg/kg.bw组比较P<0.05,^^与酵母β-葡聚糖为117.6mg/kg.bw组比较P<0.01。
与空白对照组相比,2’-FL为2790.0mg/kg.bw组、酵母β-葡聚糖为117.6mg/kg.bw组可显著增加结肠sIgA的分泌,说明这两种成分均有助于增强小鼠肠道黏膜免疫。
另外,从上表可以看出,动物实验实施例1和2相对于空白对照组使sIgA的分泌分别增加了48.05μg/mL和24.43μg/mL,如果二者直接叠加,则认为“相对于对照组的增量”中的数值应当不超过48.05+24.43=72.48μg/mL。而动物实验实施例11相对于空白对照组使sIgA的分泌增加了89.11,大于之前的二者直接叠加的树脂,表明2’-FL和酵母β-葡聚糖之间存在协同效应,能够协同增加sIgA的分泌。
2.3各受试物对小鼠NK细胞活性的影响
表4:各受试物对小鼠NK细胞活性的影响(mean±SD,n=12)
注:*与空白对照组比较P<0.05,**与空白对照组比较P<0.01,#与2’-FL组为2790.0mg/kg.bw比较P<0.05,##与2’-FL为2790.0mg/kg.bw组比较P<0.01,^与酵母β-葡聚糖为117.6mg/kg.bw组比较P<0.05,^^与酵母β-葡聚糖为117.6mg/kg.bw组比较P<0.01。
与空白对照组相比,2’-FL为2790.0mg/kg.bw组可显著增加NK细胞活性,而酵母β-葡聚糖为117.6mg/kg.bw组对NK细胞活性无影响,说明仅2’-FL有助于增强小鼠全身免疫。
根据前文的比对方式可以看出,实验例8~11能够显示出协同增效的效果。
从以上实验结果可知,本发明的组合物中的以2’-FL为代表的中性岩藻糖基化母乳低聚糖和酵母β-葡聚糖配比在33~50:1的范围内可以期待能够取得协同增效的效果,可显著增加结肠抗炎细胞因子TGF-β及免疫球蛋白sIgA的分泌,从而增强小鼠肠道黏膜免疫。此外,对于NK细胞的活性也有显著的提高作用,增强了小鼠的全身免疫。组合物具有提高免疫功能的作用,且免疫调节作用明显优于对比样品。
本发明提供了中性岩藻糖基化母乳低聚糖和酵母β-葡聚糖组合物在免疫功能方面的研究,为未来功能性食品的开发提供了新思路。尤其的2’-FL、酵母β-葡聚糖在调节机体免疫力方面前景广阔,二者组合不仅可增强肠道黏膜免疫,也能调节全身免疫。
<应用例>
以下应用例中的“份”均为重量份数,成分的%含量均为重量%含量。
另外,在以下各应用例中,除非另有说明,否则使用的原料来源如下:
生牛乳:牧场(P06-11)
全脂乳粉:黑龙江飞鹤乳业有限公司
脱脂乳粉:爱尔兰Kerry
脱盐乳清粉(D90):芬兰Valio(维利奥)
浓缩乳清蛋白粉:美国Hilmar
食用植物调和油:嘉吉粮油(南通)有限公司
无水奶油:新西兰Tatua(大拓)
2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL 93%):荷兰皇家菲仕兰公司
酵母β-葡聚糖(可溶性,98%):美国Kerry
乳糖:美国Hilmar
固体玉米糖浆:保龄宝生物股份有限公司
低聚果糖:保龄宝生物股份有限公司
低聚异麦芽糖:保龄宝生物股份有限公司
碳酸钙:南通励成生物工程有限公司
磷酸氢钙:郑州瑞普生物工程有限公司
氯化钾:郑州瑞普生物工程有限公司
柠檬酸钠:日照金禾生化集团股份有限公司
复配氯化胆碱:北京金康普食品科技有限公司
复配维生素:帝斯曼维生素(上海)有限公司
复配矿物质:帝斯曼维生素(上海)有限公司
复配营养素:帝斯曼维生素(上海)有限公司
应用例1
含2’-FL和酵母β-葡聚糖的婴儿配方奶粉,每1000份婴儿配方奶粉由如下重量份的组分制得:
本发明的奶粉所用的原料有:脱盐乳清粉(D90)470份,食用植物调和油207份,生牛乳181份(以干物质计),乳糖97份,2’-FL21.5份(每份中2’-FL含量为93%),柠檬酸钠5份,碳酸钙3份,磷酸氢钙3份,复配氯化胆碱2.8份,氯化钾2份,酵母β-葡聚糖1.7份(每份中酵母β-葡聚糖含量为98%),复配维生素3份,复配矿物质2份,复配营养素1份。产品中2’-FL含量为2.00%,酵母β-葡聚糖含量为0.17%。
应用例2
含2’-FL和酵母β-葡聚糖的婴儿配方奶粉,每1000份婴儿配方奶粉由如下重量份的组分制得:
本发明的奶粉所用的原料有:脱盐乳清粉(D90)470份,食用植物调和油207份,生牛乳181份(以干物质计),乳糖75.5份,2’-FL43份(每份中2’-FL含量为93%),柠檬酸钠5份,碳酸钙3份,磷酸氢钙3份,复配氯化胆碱2.8份,氯化钾2份,酵母β-葡聚糖1.7份(每份中酵母β-葡聚糖含量为98%),复配维生素3份,复配矿物质2份,复配营养素1份。产品中2’-FL含量为4.00%,酵母β-葡聚糖含量为0.17%。
应用例3
含2’-FL和酵母β-葡聚糖的较大婴儿配方奶粉,每1000份较大婴儿配方奶粉由如下重量份的组分制得:
本发明的奶粉所用的原料有:生牛乳318份(以干物质计),脱盐乳清粉(D90)300份,乳糖241.2份,食用植物调和油115份,2’-FL 4.3份(每份中2’-FL含量为93%),柠檬酸钠4份,碳酸钙3份,复配氯化胆碱2.8份,磷酸氢钙2份,氯化钾2份,酵母β-葡聚糖1.7份(每份中酵母β-葡聚糖含量为98%),复配维生素3份,复配矿物质2份,复配营养素1份。产品中2’-FL含量为0.40%,酵母β-葡聚糖含量为0.17%。
应用例4
含2’-FL和酵母β-葡聚糖的幼儿配方奶粉,每1000份幼儿配方奶粉由如下重量份的组分制得:
本发明的奶粉所用的原料有:脱盐乳清粉(D90)400份,生牛乳372份(以干物质计),乳糖131份,食用植物调和油80份,2’-FL 4.3份(每份中2’-FL含量为93%),碳酸钙4份,复配氯化胆碱2.8份,酵母β-葡聚糖0.9份(每份中酵母β-葡聚糖含量为98%),复配维生素3份,复配矿物质1份,复配营养素1份。产品中2’-FL含量为0.40%,酵母β-葡聚糖含量为0.09%。
应用例5
含2’-FL和酵母β-葡聚糖的调制乳粉,适用于儿童食用,每1000份调制乳粉由如下重量份的组分制得:
本发明的奶粉所用的原料有:生牛乳267份(以干物质计),全脂乳粉265份,脱盐乳清粉(D90)214份,脱脂乳粉155份,低聚果糖80份,浓缩乳清蛋白粉5份,碳酸钙5份,2’-FL4.3份(每份中2’-FL含量为93%),复配氯化胆碱1.4份,复配维生素2份,复配矿物质1份,酵母β-葡聚糖0.3份(每份中酵母β-葡聚糖含量为98%)。产品中2’-FL含量为0.40%,酵母β-葡聚糖含量为0.03%。
应用例6
含2’-FL和酵母β-葡聚糖的调制乳粉,适用于成人及中老年人食用,每1000份调制乳粉由如下重量份的组分制得:
本发明的奶粉所用的原料有:全脂乳粉700份,乳糖112.8份,固体玉米糖浆110份,低聚异麦芽糖40份,2’-FL 21.5份(每份中2’-FL含量为93%),碳酸钙12份,复配氯化胆碱1.4份,复配维生素1份,复配矿物质1份,酵母β-葡聚糖0.3份(每份中酵母β-葡聚糖含量为98%)。产品中2’-FL含量为2.00%,酵母β-葡聚糖含量为0.03%。
应用例7
含2’-FL和酵母β-葡聚糖的调制乳粉,适用于成人及中老年人食用,每1000份调制乳粉由如下重量份的组分制得:
本发明的奶粉所用的原料有:全脂乳粉700份,乳糖112.2份,固体玉米糖浆110份,低聚异麦芽糖40份,2’-FL 21.5份(每份中2’-FL含量为93%),碳酸钙12份,复配氯化胆碱1.4份,复配维生素1份,复配矿物质1份,酵母β-葡聚糖0.9份(每份中酵母β-葡聚糖含量为98%)。产品中2’-FL含量为2.00%,酵母β-葡聚糖含量为0.09%。
应用例8
含2’-FL和酵母β-葡聚糖的调制乳粉,适用于成人及中老年人食用,每1000份调制乳粉由如下重量份的组分制得:
本发明的奶粉所用的原料有:全脂乳粉700份,固体玉米糖浆110份,乳糖91.3份,2’-FL 43份(每份中2’-FL含量为93%),低聚异麦芽糖40份,碳酸钙12份,复配氯化胆碱1.4份,复配维生素1份,复配矿物质1份,酵母β-葡聚糖0.3份(每份中酵母β-葡聚糖含量为98%)。产品中2’-FL含量为4.00%,酵母β-葡聚糖含量为0.03%。
应用例9
含2’-FL和酵母β-葡聚糖的调制乳粉,适用于成人及中老年人食用,每1000份调制乳粉由如下重量份的组分制得:
本发明的奶粉所用的原料有:全脂乳粉700份,固体玉米糖浆110份,乳糖90.7份,2’-FL 43份(每份中2’-FL含量为93%),低聚异麦芽糖40份,碳酸钙12份,复配氯化胆碱1.4份,复配维生素1份,复配矿物质1份,酵母β-葡聚糖0.9份(每份中酵母β-葡聚糖含量为98%)。产品中2’-FL含量为4.00%,酵母β-葡聚糖含量为0.09%。
产业上的可利用性
本发明所提供的功能性组合物可以在工业上制备,并适用于提高免疫力。
Claims (10)
1.一种功能性组合物,其特征在于,所述组合物包括:
i)一种或多种的母乳低聚糖(HMOs),所述母乳低聚糖至少包括中性岩藻糖基化的母乳低聚糖;
ii)一种或多种的来源的β-葡聚糖,
其中,所述组合物中,所述母乳低聚糖与所述β-葡聚糖的用量比为33~50:1,并且所述组合物任选地包括其它营养性成分。
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述母乳低聚糖与所述β-葡聚糖的用量比为35~47:1。
3.根据权利要求1或2所述的组合物,其特征在于,所述母乳低聚糖的含量为0.1质量%以上,所述β-葡聚糖的含量为0.01质量%以上。
4.根据权利要求1~3任一项所述的组合物,其特征在于,所述中性岩藻糖基化的母乳低聚糖包括2’-岩藻糖基乳糖;所述β-葡聚糖包括酵母β-葡聚糖。
5.根据权利要求4所述的组合物,其特征在于,所述2’-岩藻糖基乳糖选自从发酵培养基中获得,或分离纯2’-岩藻糖基乳糖获得,或人工合成法得到;所述β-葡聚糖选自来源于植物或者真菌的β-葡聚糖中的一种或多种。
6.根据权利要求1~5任一项所述的组合物,其特征在于,所述组合物为液体、半固体或固体。
7.一种提高免疫力组合物,其特征在于,所述组合物包括根据权利要求1~6任一项所述的组合物。
8.一种食品,其特征在于,所述食品经由根据权利要求1~7任一项所述的组合物而得到。
9.根据权利要求8所述的食品,其特征在于,所述食品包括面食、饮料、可冲调食品、烘焙糕点、酱料或功能性营养补充食品。
10.根据权利要求9所述的食品,其特征在于,所述食品为儿童或婴儿食品。
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WO2013025104A1 (en) * | 2011-08-16 | 2013-02-21 | Friesland Brands B.V. | Nutritional compositions comprising human milk oligosaccharides and uses thereof |
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