CN116076364A - 一种淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法 - Google Patents
一种淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116076364A CN116076364A CN202310035492.7A CN202310035492A CN116076364A CN 116076364 A CN116076364 A CN 116076364A CN 202310035492 A CN202310035492 A CN 202310035492A CN 116076364 A CN116076364 A CN 116076364A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- epimedium
- seeds
- inducing
- proliferation
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 235000018905 epimedium Nutrition 0.000 title claims abstract description 50
- 241000893536 Epimedium Species 0.000 title claims abstract description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 33
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 31
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000004576 sand Substances 0.000 claims description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 17
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 16
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 16
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 16
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 16
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 16
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 15
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 12
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 8
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 4
- TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N Carbendazim Natural products C1=CC=C2NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- JNPZQRQPIHJYNM-UHFFFAOYSA-N carbendazim Chemical compound C1=C[CH]C2=NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 JNPZQRQPIHJYNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000006013 carbendazim Substances 0.000 claims description 3
- 239000003864 humus Substances 0.000 claims description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 3
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 claims description 3
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 3
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims description 2
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims description 2
- 230000035784 germination Effects 0.000 abstract description 13
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 abstract description 6
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 6
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 5
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N calcium nitrate Chemical compound [Ca+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241000133570 Berberidaceae Species 0.000 description 1
- 241001362421 Epimedium brevicornu Species 0.000 description 1
- 241001016310 Epimedium grandiflorum Species 0.000 description 1
- 229930191978 Gibberellin Natural products 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N gibberellic acid GA3 Natural products OC(=O)C1C2(C3)CC(=C)C3(O)CCC2C2(C=CC3O)C1C3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003448 gibberellin Substances 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 description 1
- 150000002829 nitrogen Chemical class 0.000 description 1
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 1
- 235000019633 pungent taste Nutrition 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000019605 sweet taste sensations Nutrition 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/002—Culture media for tissue culture
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
- Y02P60/40—Afforestation or reforestation
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了一种淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法,包括以下步骤:S1.种子萌发;S2.幼苗获得;S3.子叶节消毒;S4.不定芽诱导培养;S5.芽增殖培养.本发明采用淫羊藿的子叶节为外植体,不经过愈伤组织,通过丛生芽途径建立淫羊藿的快速增殖体系;结合种子萌发、消毒、诱导培养与增殖培养建立淫羊藿的快速增殖无菌体系,降低污染率,提高淫羊藿的产量及质量;整个流程简单,繁殖周期短,种子发芽率最高可达97%,诱导率最高可达68.75%,增殖系数最高可达2.33,为淫羊藿种苗繁育及规模化繁殖提供技术指导,解决了淫羊藿种子发芽率低,发芽周期长而导致的育苗难的问题,对保护淫羊藿野生资源,实现可持续利用具有积极作用。
Description
技术领域
本发明属于药用植物组织培养技术领域,具体涉及一种淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法。
背景技术
淫羊藿(Epimedium brevicornum)又名仙灵脾、三枝九叶草、羊合草,为双子叶植物类群小檗科淫羊藿属植物,全草均具有药用价值,其味辛、甘,性温,是中国传统的补益类中药材,具有温补肾阳、强筋骨、祛风湿等功效。现代医学研究发现了其许多新的药理作用,比如抗衰老、促进骨骼生长、改善造血系统障碍、增强机体免疫力、抗肿瘤、抗病毒等作用,极具开发价值。当前淫羊藿的市场需求量巨大,主要以采挖野生资源方式获得,随着采挖量增大,野生淫羊藿资源不断减少,非常不利于资源的再生和可持续利用。因此建立淫羊藿人工栽培和快速繁殖技术就显得迫在眉睫。
自然条件下,淫羊藿主要以种子繁殖和分株繁殖为主。种子繁殖萌发率极低且发芽周期长,分株繁殖容易导致品种退化,两者都非常不利于淫羊藿的规模化种植。采用组织培养的方式,在保留母本优良性状的同时能够大量繁殖,有利于保护淫羊藿野生种质资源。相关技术中,可利用淫羊藿外植体诱导出愈伤组织,通过愈伤组织诱导不定芽从而获得淫羊藿的组培苗。但是,通过愈伤组织诱导不定芽获得淫羊藿的组培苗的方式,遗传稳定性不佳,容易发生变异,不利于保持药用植物的特定性状。
发明内容
为解决上述问题,本发明的目的在于,提供一种淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法,通过该方法以淫羊藿幼苗子叶节为外植体进行组织培养,使用淫羊藿的直接器官发生途径,不经过愈伤组织,直接诱导不定芽,进而增殖培养获得丛生芽,不仅能够大量繁殖淫羊藿,而且具有良好的遗传稳定性,不容易发生变异,能够有效地保持淫羊藿的特定药用性状。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
一种淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法,包括以下步骤:
S1.种子萌发:将淫羊藿种子去除杂质,然后选择充分成熟、饱满完整的种子,用流水冲洗1h之后,将种子消毒后沙藏保鲜,期间注意保湿和消毒,3-5个月种子陆续发芽。
S2.幼苗获得:将萌发的淫羊藿种子播于腐殖土的小花盆培养,待淫羊藿幼苗长出真叶,备用。
S3.子叶节消毒:将幼苗切去子叶,(截)取子叶附着点以下长度为0.5 cm的子叶节作为外植体,用流水冲洗30 min后,在超净工作台中,消毒处理。
S4.不定芽诱导培养:将消毒的子叶节接种到诱导培养基上培养,在温度为25 ℃,光照强度为2300-2500 lx,光照时长为12 h/d的条件下培养,得到淫羊藿不定芽。
S5.芽增殖培养:切取单个芽点,接种到增殖培养基上培养,在温度为25℃,光照强度为2300-2500 lx,光照时长为12 h/d的条件下培养,得到淫羊藿丛生芽。
进一步的,在步骤S1中,所述将种子消毒后沙藏保鲜的步骤为:喷洒0.1 %多菌灵对种子消毒后,将种子与含水率为55 %-60 %细河沙按1:3的比例混匀,之后在4 ℃的冷藏室内沙藏保鲜。
进一步的,在步骤S2中,所述淫羊藿种子播入小花盆内后,在环境温度为20 ℃,土壤湿度为25 %-30 %,空气相对湿度为70 %-80 %,光照强度为2000 lx,光照时长为12 h/d的条件下培养。
进一步的,在步骤S3中,所述消毒处理具体为:将取得的子叶节,先用75 %酒精消毒30 s,无菌水冲洗3次,再用0.1 %氯化汞消毒5 min,无菌水冲洗5次。
进一步的,在步骤S4中,所述诱导培养基为:MS/WPM/B5 +0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L6-BA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖,调节pH为5 .8。
进一步的,在步骤S5中,所述增殖培养基为:MS/WPM/B5+0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L6-BA + 0.5 mg/L GA3+7 g/L琼脂+30g/L蔗糖,调节pH为5.8。
在本发明中:
所述MS是指多数植物组织培养快速繁殖用的基本培养基。
所述WPM是指根据MS培养基改良的培养基,使用了硫酸钾替换了KNO3,NH4NO3的含量也降低到了MS培养基的1/4,氮盐也主要以硝酸钙的形式供应。
所述B5是指含有较低的铵,主要用于培养双子叶植物的培养基。
所述NAA是指a-萘乙酸,能促进细胞分裂与伸长。
所述6-BA是指6-苄氨基嘌呤,促进芽的形成。
所述GA3是指赤霉素,能促进植株生长,同时对植株的增殖倍数等方面也有一定的促进作用。
另:
种子发芽率=发芽种子粒数/供试种子粒数×100%。
不定芽诱导率=诱导不定芽数/接种子叶节数×100%。
丛生芽增殖系数=增殖芽数/接种芽数。
本发明采用淫羊藿的子叶节为外植体,不经过愈伤组织,通过丛生芽途径建立淫羊藿的快速增殖体系;结合种子萌发、消毒、诱导培养与增殖培养建立淫羊藿的快速增殖无菌体系,降低污染率,提高淫羊藿的产量及质量;整个流程简单,繁殖周期短,种子发芽率最高可达97 %,诱导率最高可达68.75%,增殖系数最高可达2.33,为淫羊藿种苗繁育及规模化繁殖提供技术指导,解决了淫羊藿种子发芽率低,发芽周期长而导致的育苗难的问题,对保护淫羊藿野生资源,实现可持续利用具有积极作用。
附图说明
图1为本发明淫羊藿低温沙藏种子萌发时的示意图;
图2为本发明淫羊藿实生苗的示意图;
图3为本发明外植体淫羊藿子叶节的示意图;
图4为本发明淫羊藿不定芽诱导情况的示意图;
图5为本发明淫羊藿丛生芽增殖情况的示意图。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式,熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
需要说明的是,术语“包括”或者任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包含一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
实施例:
本实施例提供一种淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法,包括以下步骤:
S1.种子萌发:将淫羊藿种子去除杂质,然后选择充分成熟、饱满完整的种子,用流水冲洗1h之后,喷洒0.1 %多菌灵对种子消毒,然后将消毒后的种子分成三组,即A组、B组、C组,将三组种子分别与含水率为55 %-60 %细河沙混匀,其中A组与细河沙的混匀比例为1:3,B组与细河沙的混匀比例为1:4,C组与细河沙的混匀比例为1:5,之后分别放入4 ℃的冷藏室内沙藏保鲜(如图1所示),期间注意保湿和消毒,3-5个月种子陆续发芽,5个月后统计各组种子发芽率。
统计结果见表1:
表1种子发芽率统计
序号 | 种子沙藏保鲜条件, | 发芽率(%) |
A组 | 消毒后的种子与含水率为55 %-60 %细河沙的比例为1:3,温度4℃ | 97.0 |
B组 | 消毒后的种子与含水率为55 %-60 %细河沙的比例为1:4,温度4℃ | 85.91 |
C组 | 消毒后的种子与含水率为55 %-60 %细河沙的比例为1:5,温度4℃ | 72.52 |
由表1可知,A组的种子发芽率最高,达到了97.0%,效果最佳,故采用将消毒后的种子与含水率为55 %-60 %细河沙按1:3的比例混匀,之后在4 ℃的冷藏室内沙藏保鲜。
S2.幼苗获得:将萌发的淫羊藿种子播于腐殖土的小花盆内,在环境温度为20 ℃,土壤湿度为25 %-30 %,空气相对湿度为70 %-80 %,光照强度为2000 lx,光照时长为12 h/d的条件下培养,待淫羊藿幼苗长出真叶(如图2所示),备用。
S3.子叶节消毒:将幼苗切去子叶,(截)取子叶附着点以下长度为0.5 cm的子叶节作为外植体(幼苗子叶节如图3所示),用流水冲洗30 min后,在超净工作台中,先用75 %酒精消毒30 s,无菌水冲洗3次,再用0.1 %氯化汞消毒5 min,无菌水冲洗5次。
S4.不定芽诱导培养:
预制三组诱导培养基,即1号诱导培养基、2号诱导培养基、3号诱导培养基备用,其中,
1号诱导培养基为:MS+0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖,调节pH为5 .8;
2号诱导培养基为:WPM+0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖,调节pH为5 .8;
3号诱导培养基为:B5+0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖,调节pH为5 .8;
接着将消毒的子叶节分别接种到上述三组诱导培养基上,然后都在温度为25 ℃,光照强度为2300-2500 lx,光照时长为12 h/d的条件下培养,以得到淫羊藿不定芽(如图4所示),接种21 d后统计诱导率。
统计结果表2所示:
表2 不同诱导培养基结果统计
序号 | 培养基配方 | 诱导率(%) |
1 | MS +0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖L | 68.75 |
2 | WPM+0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖 | 61.11 |
3 | B5+0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖 | 43.75 |
由表2可知,1号诱导培养基的诱导率最高,达到了68.75%,其不定芽诱导培养效果最佳,故不定芽诱导培养选用1号诱导培养基。
S5.芽增殖培养:
预制三组增殖培养基,即1号增殖培养基、2号增殖培养基、3号增殖培养基备用,其中,
1号增殖培养基为:MS+0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L GA3+7 g/L琼脂+30g/L蔗糖,调节pH为5 .8;
2号增殖培养基为:WPM+0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L GA3+7 g/L琼脂+30g/L蔗糖,调节pH为5 .8;
3号增殖培养基为:B5+0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L GA3+7 g/L琼脂+30g/L蔗糖,调节pH为5 .8;
接着切取1号诱导培养基培养的淫羊藿不定芽的单个芽点,并分别接种到三组增殖培养基上,然后在温度为25℃,光照强度为2300-2500 lx,光照时长为12 h/d的条件下培养,以得到淫羊藿丛生芽(如图5所示),接种21 d后统计增殖系数。
结果如表3所示:
表3不同增殖培养基结果统计
序号 | 培养基配方 | 增殖系数 |
1 | <![CDATA[MS+0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L GA<sub>3</sub>+7 g/L琼脂+30g/L蔗糖]]> | 2.33 |
2 | <![CDATA[WPM+0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L GA<sub>3</sub>+7 g/L琼脂+30g/L蔗糖]]> | 2.14 |
3 | <![CDATA[B5+0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L GA<sub>3</sub>+7 g/L琼脂+30g/L蔗糖]]> | 1.4 |
由表3可知,1号增殖培养基增殖系数最高,达到了2.33,其芽增殖培养效果最佳,故芽增殖培养选用1号增殖培养基。
本发明其他未详尽之处均为本领域技术人员所公知的常规技术。
本发明的保护范围不限于具体实施方式所公开的技术方案,凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何修改、等同替换、改进等,均落入本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1.种子萌发:将淫羊藿种子去除杂质,然后选择充分成熟、饱满完整的种子,用流水冲洗1h之后,将种子消毒后沙藏保鲜,期间注意保湿和消毒,3-5个月种子陆续发芽;
S2.幼苗获得:将萌发的淫羊藿种子播于腐殖土的小花盆培养,待淫羊藿幼苗长出真叶,备用;
S3.子叶节消毒:将幼苗切去子叶,取子叶附着点以下长度为0.5 cm的子叶节作为外植体,用流水冲洗30 min后,在超净工作台中,消毒处理;
S4.不定芽诱导培养:将消毒的子叶节接种到诱导培养基上培养,在温度为25 ℃,光照强度为2300-2500 lx,光照时长为12 h/d的条件下培养,得到淫羊藿不定芽;
S5.芽增殖培养:切取单个芽点,接种到增殖培养基上培养,在温度为25℃,光照强度为2300-2500 lx,光照时长为12 h/d的条件下培养,得到淫羊藿丛生芽。
2. 根据权利要求1所述淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法,其特征在于,在步骤S1中,所述将种子消毒后沙藏保鲜的步骤为:喷洒0.1 %多菌灵对种子消毒后,将种子与含水率为55 %-60 %细河沙按1:3的比例混匀,之后在4 ℃的冷藏室内沙藏保鲜。
3. 根据权利要求1所述淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法,其特征在于,在步骤S2中,所述淫羊藿种子播入小花盆内后,在环境温度为20 ℃,土壤湿度为25 %-30 %,空气相对湿度为70 %-80 %,光照强度为2000 lx,光照时长为12 h/d的条件下培养。
4. 根据权利要求1所述淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法,其特征在于,在步骤S3中,所述消毒处理具体为:将取得的子叶节,先用75 %酒精消毒30 s,无菌水冲洗3次,再用0.1 %氯化汞消毒5 min,无菌水冲洗5次。
5. 根据权利要求1所述淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法,其特征在于,在步骤S4中,所述诱导培养基为:MS/WPM/B5 +0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖,调节pH为5 .8。
6. 根据权利要求1所述淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法,其特征在于,在步骤S5中,所述增殖培养基为:MS/WPM/B5+0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L GA3+7 g/L琼脂+30g/L蔗糖,调节pH为5.8。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310035492.7A CN116076364B (zh) | 2023-01-10 | 2023-01-10 | 一种淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310035492.7A CN116076364B (zh) | 2023-01-10 | 2023-01-10 | 一种淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN116076364A true CN116076364A (zh) | 2023-05-09 |
CN116076364B CN116076364B (zh) | 2024-01-30 |
Family
ID=86204042
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202310035492.7A Active CN116076364B (zh) | 2023-01-10 | 2023-01-10 | 一种淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN116076364B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116897776A (zh) * | 2023-06-25 | 2023-10-20 | 神农架林区中医药产业协会 | 一种淫羊藿种子的贮存方法、培养方法和种植方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102577959A (zh) * | 2012-02-27 | 2012-07-18 | 贵州同济堂制药有限公司 | 巫山淫羊藿的组培快繁方法和繁育的巫山淫羊藿 |
CN113711911A (zh) * | 2021-08-02 | 2021-11-30 | 四川协力制药股份有限公司 | 一种柔毛淫羊藿无菌体系的建立及快速增殖的方法 |
-
2023
- 2023-01-10 CN CN202310035492.7A patent/CN116076364B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102577959A (zh) * | 2012-02-27 | 2012-07-18 | 贵州同济堂制药有限公司 | 巫山淫羊藿的组培快繁方法和繁育的巫山淫羊藿 |
CN113711911A (zh) * | 2021-08-02 | 2021-11-30 | 四川协力制药股份有限公司 | 一种柔毛淫羊藿无菌体系的建立及快速增殖的方法 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116897776A (zh) * | 2023-06-25 | 2023-10-20 | 神农架林区中医药产业协会 | 一种淫羊藿种子的贮存方法、培养方法和种植方法 |
CN116897776B (zh) * | 2023-06-25 | 2024-03-29 | 神农架林区中医药产业协会 | 一种淫羊藿种子的贮存方法、培养方法和种植方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN116076364B (zh) | 2024-01-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103380730A (zh) | 一种杜梨组培快繁方法 | |
CN107155898A (zh) | 一种铁皮石斛利用茎段薄片进行扩繁的方法 | |
CN104885948A (zh) | 一种油茶子叶节直接再生植株的方法 | |
CN101803571B (zh) | 一种水半夏的组培快繁法 | |
CN105265316B (zh) | 一种葱属植物鳞茎盘快速繁殖方法 | |
CN116076364B (zh) | 一种淫羊藿不定芽诱导及快速增殖的方法 | |
CN104542283A (zh) | 一种高效的白芷繁种育苗体系 | |
CN115250922A (zh) | 一种诱导新麦草上胚轴形成愈伤组织并再生植株的方法 | |
CN103070078A (zh) | 一种利用芋头茎尖进行组织培养的快繁方法 | |
CN103125393A (zh) | 裸花紫珠无菌播种与快速组培繁殖方法 | |
CN103155868B (zh) | 樱桃砧木zy-1组培快速育苗方法 | |
CN104488723A (zh) | 一种朝鲜淫羊藿组培快速繁殖方法 | |
CN104938335B (zh) | 利用油茶下胚轴获得再生植株的方法 | |
CN106613079A (zh) | 一种半夏种茎生产方法 | |
CN105265317A (zh) | 一种茖葱快速繁殖方法 | |
CN103609444A (zh) | 常绿萱草的组织培养法 | |
CN109156350B (zh) | 一种抗风桐繁芽与生根培养基及促进抗风桐离体快速繁殖的方法 | |
CN105766636A (zh) | 一种牡丹组织培养再生的方法 | |
CN111557242B (zh) | 一种莲组培苗培养与快速扩繁的方法 | |
CN112470926B (zh) | 一种凉粉草茎尖脱毒种苗的快速扩繁方法 | |
CN109105257B (zh) | 一种烤烟组培快繁育苗的方法 | |
CN111448985A (zh) | 一种细梗蔷薇的组织培养方法 | |
CN108077067B (zh) | 一种木芙蓉的组培快繁方法 | |
CN113875587B (zh) | 一种促进大莪术不定芽诱导和丛生芽增殖的方法 | |
CN118077581B (zh) | 一种牧地狼尾草的组织培养方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |