CN116064538B - 植物促根基因ltp2、其启动子、表达产物、表达载体及应用 - Google Patents

植物促根基因ltp2、其启动子、表达产物、表达载体及应用 Download PDF

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Abstract

本申请公开了一种植物促根基因LTP2、其启动子、表达产物、表达载体及应用，旨在从分子生物学方面解决利用栽培措施改良植物根系发育效果有效且不稳定的技术问题。本申请鉴定出一个可调控根系发育的基因LTP2，构建了LTP2基因的过表达载体，并分别转化获得过表达株系；经表型鉴定和检测表明，LTP2能够调控植物根系发育；还鉴定出一个根系特异表达的LTP2启动子；设计了一种用于植物遗传转化的真核表达载体，可以驱动目标基因在根系特异表达。本申请关于LTP2基因及其启动子的功能研究有利于调控植物根系发育，以及植物根系发育机制的深度研究及利用。

Description

植物促根基因LTP2、其启动子、表达产物、表达载体及应用
技术领域
本申请涉及生物工程技术领域，具体涉及一种植物促根基因LTP2、其启动子、表达产权、表达载体及应用。
背景技术
植物根系对于植株固定、水分和营养吸收、根际微生物富集等具有重要作用。此外，烟碱作为烟草特有的次生代谢产物，不仅对烟叶品质具有重要意义，同时在植物源农药和医药开发中具有广阔前景。研究发现，烟碱在烟草根系特异合成，通过木质部运输到叶片等其他组织。因此，促进烟草根系发育对增强烟株抗性，提高烟叶品质具有重要意义。目前，烟叶生产中主要是利用栽培措施促进烟株根系发育；此类传统的促根方式需要投入大量的财力、物力和人力，且效果不稳定，结合生物技术手段改良烟草品种是促进根系发育的有效手段。目前，未见烟草内源基因促进根系发育的报道。
大量的研究表明，植物脂质转移蛋白(lipid transfer protein, LTPs)广泛参与植物的代谢和生长发育过程，包括磷脂运输、角质和蜡质的形成、和生殖过程等。此外，植物LTPs对病原菌表现出广谱抗性，当病原体入侵植物的同时，LTPs被大量诱导，进而诱导植物的免疫反应。近年来，许多研究表明植物LTPs还能广泛参与非生物胁迫应答。例如，烟草LTPs可以参与介质层的合成，减少表皮水分的散失；小麦LTP4能够被SA、ethylene、MeJA和ABA等激素诱导，参与多种环境胁迫的应答；玉米中过表达ZmLTP3基因可以抑制体内ROS的积累，进而增强植株的抗盐胁迫能力。综上所述，LTPs在调控植物的生长发育过程、提高各种生物和非生物胁迫抗性中发挥关键作用，而目前关于烟草LTPs成员的功能研究较少。
公开于该背景技术部分的信息仅用于加深对本申请的背景技术的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成本领域技术人员所公知的现有技术。
发明内容
本申请的目的在于提供一种能促进植物根系发育的基因，并利用其表达载体转化植物，以期从分子生物学方面解决利用栽培措施改良植物根系发育效果有效且不稳定的技术问题，同时还提供了一种植物根部特异表达的启动子，为研究根系发育的调控机制奠定基础。
根据本公开的一个方面，基于对烟草根部优势表达基因的长期分析研究，鉴定出一个能够调控烟草根系发育的基因LTP2，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
根据本公开的另一个方面，克隆并分析烟草LTP2启动子的驱动特性，确定其为根部特异表达启动子，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
在本公开的一些实施例中，在植物根部优势表达基因LTP2前插入强启动子35S，构建过表达载体，转化受体植物可得过表达植株。
在具体研究过程中，以上述载体通过农杆菌介导法转化烟草栽培品种云烟87，获得了LTP2过表达株系。
对上述所得LTP2过表达株系和对照进行水培，跟踪观察烟苗形态变化，结果发现，LTP2过表达株系的烟苗长势均优于对照，其地上部分和根系重量均显著高于对照。应用根系扫描仪分析对照和转基因株系的根部参数发现，LTP2过表达株系的根系总长、总表面积和总体积均显著高于对照。以上结果表明，在烟草中过表达LTP2基因可以促进根系发育，进而有助于烟苗地上部分的生长，LTP2基因在植物根系发育改良中具有重要的应用价值。
本申请实施例中提供的一个或多个技术方案，至少具有如下任一技术效果或优点：
1. 筛选鉴定出了烟草LTP2基因，基于其过表达株系的表型鉴定研究表明，其能够调控植物根系发育，具体而言，其在促进根系发育，进而有助于植物地上部分的生长等方面具有重要的应用价值。
2. 所得根部优势表达启动子能够克服组成型启动子非特异、持续、高效表达所造成的浪费，减少目的基因对植物其它组织正常生长的影响，可以用于驱动目的基因在根部特异表达。
3. 所鉴定得到的烟草LTP2基因及其启动子在研究植物根系发育调控，以及根系的分子调控机制方面具有重要意义。
附图说明
图1为本申请一实施例中LTP2的保守域和三级结构预测分析图。
图2为本申请一实施例中烟草LTP2基因的烟草组织表达特性分析图。
图3为本申请一实施例中烟草LTP2启动子的组织驱动特性分析图。
图4为本申请一实施例中35S: LTP2株系的筛选鉴定；图中M，Marker；L1~8，转基因纯系；P，35S:NtLTP2重组表达载体；CK，未转化植株。
图5为本申请一实施例中对照和35S:NtLTP2株系的无菌苗根系对比观察；图中， **表示极显著差异（p＜0.01）。
图6为本申请一实施例中对照和35S:NtLTP2株系的烟苗长势和根系形态对比观察。
以上图4、图5中，CK为未转化烟苗云烟87，L4、L6和L7为35S:NtLTP2过表达株系。
具体实施方式
在以下实施例中所涉及的仪器设备如无特别说明，均为常规仪器设备；所涉及的试剂原料如无特别说明，均为市售常规产品；所涉及的检测及试验方法，如无特别说明，均为常规方法。
植物LTPs广泛地参与植物的代谢和生长发育过程，包括磷脂运输、角质和蜡质的形成、和生殖过程等。发明人对普通烟草(Nicotiana tobacum) LTP2基因进行组织表达特性分析，并研究其启动子组织驱动特性，研究发现其在根系中优势表达，功能研究表明LTP2基因能够调控植物根系发育。
实施例一：根系优势表达基因LTP2的克隆和组织表达分析
1. 烟草LTP2的克隆
（1）用TRIZOL提取普通烟草云烟87的总RNA。
（2）反转录cDNA：使用PrimerScript RT reagent Kit（TaKaRa，Japan）将RNA反转录为cDNA。
（3）基因的克隆：基于本申请发明人的前期实验结果，使用高保真Pfu酶进行 PCR扩增。反应条件为：95℃ 5 min；95℃ 45s，55℃ 45s，72℃ 45s，35 次循环；72℃ 10 min。PCR 产物回收、纯化后进行加A反应，然后连入接到 pMD19-T克隆载体，筛选阳性克隆提取质粒，送华大生物公司进行序列测定。扩增引物为：
F：5'-CACTTCTCTTTTCTCTCTTCTCAA-3'，
R：5'-AAGATTCTAACAGCTGGGAGTG-3'。
2. 序列保守域的预测
通过CD Search（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi）对蛋白的保守域进行分析预测。利用SWISS-MODEL（http:// https://swissmodel.expasy.org/）进行蛋白三级结构的分析预测。
结果如图1所示，烟草LTP2编码区全长 294 bp，编码97个氨基酸(如SEQ ID NO.3所示)。预测其分子量为10.11 kDa，等电点为8.67，其N端信号肽包含25个氨基酸（MKKGGNSFAAIILVVTLVLFLGEFL），第26位的缬氨酸(valine, V)为信号肽切割位点。保守域分析显示其具有一个疏水腔(hydrophobic cavity)，同时具有nsLTP2和 AAI-LTSS超家族的保守域。三级结构预测发现，其具有LTP蛋白的典型结构，包括4个α-螺旋和1个脂质分子的疏水腔。
3. 组织表达特性分析
大田现蕾期时分别收集烟草的根、茎、中部叶、腋芽和花蕾，按照Trizol 法提取各组织总RNA，并反转录为cDNA。
使用 Premier Prime 5.0 软件设计LTP2基因的实时定量PCR引物(F3: 5'-GCAAGATGAAGAAGGGTGGTAAT-3'，R3: 5'-TGGCTGTGGCGACGAGAT-3')。以NtL25作为内参基因(F: 5'-GCTTTCTTCGTCCCATCA A-3'，R: 5'-CCCCAAGTACCCTCGTA-3')，在LightCycler®480 Ⅱ型荧光定量 PCR 仪上进行qPCR反应。
PCR反应条件：95℃ 5min；95℃ 50s，60℃ 50s，72 ℃ 30s，28个循环；72℃10min。
结果如图2所示，烟草LTP2在根部的表达量最高，约为其它组织的6～12倍，NtLTP2在叶、茎、腋芽、花蕾和种子中仅微量表达。由此可见，LTP2为根部优势表达基因。
实施例二：烟草LTP2启动子的组织驱动特性分析
1. 烟草LTP2启动子的克隆
（1）提取普通烟草云烟87的根、茎、叶片DNA，等比混合后作为PCR模板。
（2）根据本发明人的前期实验结果，使用高保真Pfu酶进行 PCR 扩增。反应条件为：95℃ 5 min；95℃ 45 s，56℃ 45 s，72℃ 3 min，35次循环；72℃ 10min。PCR 产物回收、纯化后进行加A反应，然后连入接到 pMD19-T克隆载体，筛选阳性克隆提取质粒，送华大生物公司进行序列测定。扩增引物为：
F：5'-AAAACCGTCTCAATCATGTAAGT-3'，
R：5'-ACCAGTCAGTGTCAGAAGGAGA-3'。
序列分析结果显示成功克隆烟草LTP2启动子2610 bp（核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示）。
2. ProLTP2:GUS表达载体的构建
以测序正确的质粒为模板，在烟草LTP2启动子的5'和3'分别添加酶切位点HindIII和BamH I，设计引物(F：5'-GAGAggtctcAAGCTTAAAACCGTCTCAATCATGTAAGT-3'和R：5'-GAGAggtctcGAATTCGTTAACAGAGTTTTGAGTTGCTG-')进行PCR反应。通过双酶切将测序正确的LTP2启动子序列替换pCAMBIA-NPT-GUS表达载体的35S启动子，获得重组表达载体ProLTP2: GUS。
3. ProLTP2:GUS载体转入农杆菌
（1）将7 μl质粒（约 500ng）与EHA105农杆菌感受态细胞在冰上静置30 min后，转入液氮中冻8 min，再转入37℃水浴锅中热激5 min；
（2）热激结束后迅速将装感受态细胞置于冰上5 min后，在28℃摇床中160 rmp/min活化2 h；
（3）菌液涂布在含有Kan抗性的YEB平板上培养2天，筛选阳性菌斑。
4. 烟草LTP2启动子的组织驱动特性分析
通过农杆菌侵染法将对ProLTP2:GUS载体转化烟草叶片，转化后的叶片放置在含有30 mg/L Kan的分化培养基上进行筛选。选择阳性植株进行GUS染色。
样品置于 GUS 染色液中（含有 1mmol/L EDTA，0.1%Triton X-100，2 mmol/L 铁氰化钾，2 mmol/L 亚铁氰化钾，100 μg/mL 氯霉素的 50 mmol/L 磷酸缓冲液 pH=7.0），中加入 100 mg/mL X-Gluc 母液（N,N-二甲基甲酰胺溶解，终浓度为 1mg/mL）， 37℃下染色过夜，70%乙醇脱色至植株失绿，观察各组织的染色情况。结果如图3所示，空白组野生型没有出现蓝色。
试验组ProLTP2:GUS植株能够被染上蓝色，且染色部位仅在植株根部，叶片和茎部未染成蓝色，说明LTP2启动子能够特异性启动GUS基因在烟草的根部特异表达。
实施例三：烟草LTP2基因过表达株系的获得
1. 过表达载体的构建
将烟草LTP2基因插入表达载体pCXSN-FLAG的35S启动子后面（核苷酸序列如SEQID NO.2所示）。
（1）在LTP2的开放阅读框的5'和3'分别添加酶切位点BamH I 和和EcoR I，设计克隆引物(F: 5'-cgggatccCACTTCTCTTTTCTCTCTTCTCAA-3'，R: 5'-cggaattcAAGATTCTAACAGCTGGGAGTG-3')进行PCR反应。
PCR反应体系为：2 μl cDNA（50 ng/μl）；1 μl DNA聚合酶；2 μl 引物1（10 μM）；2μl 引物2（10 μM）；10 μl 5× PCR反应 Buffer；4 μl dNTPs（2.5 mM）；29 μl 水；总体积为50μl。
PCR反应程序为：95℃预变性 5 min；95℃ 40s，60℃ 40s，72℃ 1 min，35个循环；72℃延伸 10 min；16℃下保温。
（2）电泳检测：凝胶电泳检测结果显示约在300 bp的位置出现目标条带。
（3）切胶回收条带：电泳结束后，从凝胶中切下目标条带，进行DNA片段回收。
（4）酶切和灭活：用BamH I 和和EcoR I分别双酶切回收后的DNA片段和ProLTP2: GUS载体；
酶切反应体系为：10 ul DNA（100 ng/μl）；1 ul内切酶1（15 U/μl）；1 ul内切酶2（15 U/μl）；5 ul酶切反应液10× Buffer；总体积为50 μl；37℃酶切反应5 h后，65℃灭活5min。
（5）切胶回收DNA：凝胶电泳回收LTP2和载体骨架片段。
（6）载体连接：将回收后的LTP2和载体骨架片段进行连接；
连接反应体系：7μl LTP2；1μl 载体骨架；1μl T4连接酶；1μl 10×T4连接酶Buffer；总体积为10μl；16℃下连接过夜。
（7）筛选：热激转化大肠杆菌菌株，利用Kan抗性的LB平板进行筛选，提取重组质粒，命名为35S:LTP2，置于-20℃下备用。
2. 转基因植株的获得
利用热击法将重组载体导入农杆菌EHA105中，通过农杆菌侵染法对烟草云烟87的叶片进行遗传转化，转化后的叶片放置在含有30 mg/L Kan的分化培养基上进行筛选。提取烟草叶片DNA，在35S启动子序列设计正向引物（5'-TTCATTTGGAGAGAACACGG-3'），克隆LTP2 全长使用的R为反向引物，通过PCR技术鉴定阳性植株。通过连续自交获得35S:LTP2纯系。
转基因株系基因表达量比较：培养对照和转基因株系至五叶期，提取叶片总RNA。利用qPCR技术分析LTP2基因的相对表达量，方法同上。
结果如图4所示，通过Kan抗性筛选和PCR 技术检测获得8个阳性转基因纯系。通过qPCR技术比较未转化植株（CK）和8个转基因纯系（L1~8）中LTP2基因的相对表达量，结果显示 8个转基因纯系中LTP2表达量均高于对照植株，其表达量约为对照的1.91～3.76倍；8个转基因纯系中LTP2表达量差异较大；其中L4、L6 和L7中LTP2的表达量最高，约为对照的3.04~3.76倍。
实施例四：35S:LTP2株系的表型鉴定与检测
以普通栽培烟草品种云烟87为对照，以实施例三所构建重组的35S:LTP2转基因株系为试验组，进行烟苗和根系的形态观察和统计分析。
1.无菌苗形态观察
取对照和各转基因株系种子各20粒于1.5 mL离心管中，加入1 mL 10% 次氯酸钠溶液消毒8 min，然后用无菌蒸馏水清洗5次，完成种子消毒。每个株系取3粒种子，用牙签均匀点播在含1.0%琼脂的MS固体培养基上，垂直放置于光照培养箱中培养，设置三皿重复，期间跟踪观察种子的萌发和幼苗的生长过程，三周后统计幼苗的根长和侧根数。实验重复三次。
结果如图4所示，三个35S:LTP2转基因株系的根系长势均优于对照，其侧根数目超过对照一倍。该结果表明在烟草中过表达LTP2基因可以促进侧根发育。
2.根系参数分析
取对照和各转基因株系种子点播于漂浮盘中，进行水培培养，每周浇灌一次Hoagland营养液。培养至五叶期时对地上部分和根系进行称重。将根系放于根系扫描仪根盘中，加入少量蒸馏水浸泡，使根系在水中分布均匀，进行根系图像扫描，应用WinRHIZO(Pro 2009a, Regent Instruments)软件分析根系的总长、总表面积、总体积和平均直径。
结果如图5、图6和表1所示，三个35S: LTP2转基因株系的烟苗长势均优于对照，其地上部分和根系重量均显著高于对照。应用根系扫描仪分析对照和转基因株系的根部参数发现，三个35S: LTP2转基因株系的根系总长、总表面积和总体积均显著高于对照，而对照和转基因株系的根系平均直径无显著差异。以上结果表明在烟草中过表达LTP2基因可以促进根系发育，进而有助于烟苗地上部分的生长。
表1对照和转基因株系的地上部分和根系参数比较
注：小写字母代表不同株系之间存在显著差异（P<0.05）。
以上结果证明，LTP2在植株根系发育中具有关键作用，对于根系发育的调控具有重要的应用价值。
尽管已描述了本发明的一些优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本申请权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (2)

1.核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的植物促根基因LTP2、含有所述植物促根基因LTP2的表达载体、或含有强启动子35S和所述植物促根基因LTP2的重组质粒在促进烟草根系发育中的应用。
2.一种改良烟草根系发育的方法，其特征在于，过表达核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的植物促根基因LTP2。
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108070594A (zh) * 2017-12-22 2018-05-25 河南农业大学 烟草腺毛ttr1启动子、其表达载体及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108070594A (zh) * 2017-12-22 2018-05-25 河南农业大学 烟草腺毛ttr1启动子、其表达载体及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Harada,E.等.Nicotiana tabacum NtLTP2 mRNA for putative non-specific lipid-transfer protein type 2 subfamily, complete cds，AB518680.1.《Genbank》.2010,第1页. *
NtLTP2基因在烟草根系发育中的功能分析;段史江等;《烟草科技》;第56卷(第6期);第1-7页 *
Tobacco NtLTP1, a glandular-specific lipid transfer protein, is required for lipid secretion from glandular trichomes;Yong Eui Choi等;《Plant J》;第70卷(第3期);第480-491页 *

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