CN116036149A - 纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的制备方法及其应用 - Google Patents

纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的制备方法及其应用，方法包括如下步骤：制备小分子果核酸提取物原液；制备果核酸酯混合乳液；制备中药混合粉末；将果核酸酯混合乳液和中药混合粉末，并添加蜂蜡、脂肪酸橄榄油、蜂蜜、黏度调节剂、乳化稳定剂、薄荷油，制备成纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶。本发明制备方法制备的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶，不仅可有效加速伤口处细胞的迁移，而且上调了伤口处的血管相关生长因子的表达，可以促进伤口处胶原蛋白的沉积的表达，进而更加快速促进伤口的愈合；通过修复病变组织增强自然防御功能，提高人体免疫力，摒弃化学抗生素耐药性、依赖性缺陷。

Description

纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的制备方法及其应用
技术领域
本发明属于皮肤病药技术领域，特别涉及一种纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的制备方法及其应用。
背景技术
皮肤是人体面积最大的重要器官之一，各种皮肤的损伤不仅影响人体的生理功能甚至危及生命安全。目前皮肤组织修复领域成为了生物医学研究的热点。然而，伤口愈合是一个动态而复杂的过程，根据其特征可分为三个主要的重叠阶段：炎症阶段、增殖阶段和重构阶段。皮肤伤口的正常愈合是上述各阶段在精细而高度的级联调节过程中完成的，很多因素会影响上述过程而导致伤口迁延不愈或瘢痕过度增生，影响皮肤组织的正常生理功能，如感染，年龄、营养、疾病、药物以及伤口的反复刺激等。愈合过程中如果胶原纤维过度增生则会引起伤口过度愈合即纤维化，形成较大的瘢痕，引起组织的部分功能缺失。因此，皮肤损伤的修复与愈合是人类最复杂的生物学过程之一，干扰上述的每一个环节都会影响组织的正常愈合。由于皮肤组织损伤修复过程中的慢性迁延不愈的非正常皮肤伤口愈合和纤维化导致的功能缺失和视觉感受影响着伤口低质量愈合。目前在皮肤伤口愈合的治疗中广泛使用了化学抗生素类药物，但化学抗生素存在耐药性、依赖性的缺陷。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的制备方法及其应用，本发明制备方法制备的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶不仅可有效加速伤口处细胞的迁移，而且上调了伤口处的血管相关生长因子的表达，可以促进伤口处胶原蛋白的沉积的表达，进而更加快速促进伤口的愈合；通过修复病变组织增强自然防御功能，提高人体免疫力，摒弃化学抗生素耐药性、依赖性缺陷。通过本制备方法制备的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶，具有化学合成类抗生素、消杀制剂无法比拟的安全、无抗药性，具有杀菌、抗病毒、抑菌和修复皮肤上皮细胞的综合显著功效，是无生物毒性、生物性能优良的抑菌凝胶。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明提供了一种纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的制备方法，包括如下步骤：
步骤S1，制备小分子果核酸提取物原液；
(1)以蔷薇科植物果核、鼠李科枣属植物、核桃皮胡桃科植物、椴树属的植物木屑中的一种或任意比例混合的两种为原料，将原料进行粉碎、烘干备用；
(2)将粉碎、烘干后的原料置于密闭容器内的工业微波炉中，采用微波热解技术，在容器下部设置有用于调节气量闸阀，容器顶部设置排气口，排气口与排烟风机连接；开启微波炉，微波直接与被分离物原料粉末作用，使整个物料同时被加热，随着炉内温度升高，适当调节进气阀的开度，使原料粉末在微氧状态下热解制取木质纤维素热解液，从而保证了能量的快速传导和充分利用；
(3)截取170℃以下、170-350℃、350℃以上，这三个温度段的由密闭容器排气口排出的热解烟气，热解烟气通过顶部管道进入冷凝系统，温度控制在30℃±3-5℃，热解烟气经冷凝器冷却后产生冷凝液，将该液体收集到储罐中自然静置，分离焦油和杂质，抽取中间段液体，将木质纤维素热解液粗液与文丘里臭氧气液发生器产生的气体混合，粗液经臭氧处理，可去除粗液中的杂质、杀菌、消毒、去味、去除重金属；
(4)一次精制：将上述木质纤维素热解液粗液经碳纤维毛毡过滤，并用果壳颗粒活性炭吸附以去除粗液中的酚类、醇类杂质；
(5)二次精制：将一次精制的木质纤维素热解液置于专用高速离心机中，再次脱除杂质，最终所得的精制木质纤维素热解液，即为小分子果核酸提取物原液；
通过委托第三方检测机构(CMA认证)对步骤S1制备的小分子果核酸提取物原液的各项技术指标进行检测。经检测各项指标均符合GB15193—94《食品安全性毒理学评价程序和方法》的相关标准，达到实际无毒级；通过对实验动物皮肤黏膜刺激及腐蚀强度(皮肤刺激性试验)符合(消毒技术规范)的要求；小分子果核酸提取物原液的抑菌率(细菌菌落总数，大肠菌群，金黄色葡萄球菌，绿脓杆菌，溶血性链球菌，真菌菌落总数)符合GB15979-2002的要求；果核酸提取液成分中含有总多酚、超氧化歧化酶、总黄酮、有机酸、矿物质、氨基酸等指标均符合GB/T5009《食品安全国家标准》，符合GB29921-2013食品安全国家标准食品中致病菌限量和GB2762-2012食品中污染物限量的要求。
步骤S2，制备果核酸酯混合乳液；
以制备100克制备果核酸酯混合乳液计，羊毛脂与步骤S1制备的小分子果核酸提取液按重量1:4的比例混合，制备过程如下：首先在容器中加入医用羊毛脂,水浴加热使其熔化，再加入重量为羊毛脂重量4倍的小分子果核酸提取物原液，与羊毛脂混合，水浴加热至45-55℃,边加热边搅拌,做到充分搅拌均匀；这一过程中加入适量的乙醇溶液,并不断搅拌,使流动相中的小分子果核酸提取液在羊毛脂的表面沉积形成乳液，得到果核酸酯混合乳液；
步骤S3，制备中药混合粉末；
一剂中药混合粉末中各成分重量配比为：没药3-5克、珍珠粉1-4克、川芎1-1.5克、牡丹皮10-15克、紫草5-9克，经超声粉碎至纳米级中药混合粉末；
步骤S4，将步骤S2制备的果核酸酯混合乳液和步骤S3制备的中药混合粉末，按每100克果核酸酯混合乳液搭配一剂中药混合粉末的比例混合，并添加蜂蜡、脂肪酸橄榄油、蜂蜜、薄荷油，制备成纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶。
作为优选，步骤S4具体操作为：
(1)取蜂蜡适量水浴加热至熔化，加入适量的脂肪酸橄榄油加热溶解，充分混合均匀；
(2)另取步骤S2制备的果核酸酯混合乳液、蜂蜜，进行水浴加热，加入步骤S3制备的纳米级中药粉充分混合均匀，其中，每100克果核酸酯混合乳液搭配一剂中药混合粉末；
(3)取适量的黏度调节剂和乳化稳定剂；
(4)将本步骤S4中小步骤(1)(2)(3)的物料混合后，在温度均为80℃下溶解，快速搅拌均匀、进入高速均质乳化机加工成乳膏状成品，然后在温度30℃±5℃，加入薄荷油适量，再充分搅拌均匀，置真空干燥箱内保持25℃，减压气泡后取出，密封包装储存，得到纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶。
作为优选，步骤S1的小步骤(1)中将原料粉碎，得到粒度100-200目的原料粉末，将其烘干，水分含量＜5％备用；步骤S1的小步骤(5)中高速离心机中的转速为20000/每分钟。
作为优选，步骤S1制备的小分子果核酸提取物原液颜色呈浅黄色，密度为1.00-1.13g/cm3，酚类以苯酚的量计，不低于0.5mg/mL；有机酸含量(乙酸计)不低于1.5mg/mL；pH值以酸度计法测量达到2.27-3.32；采用氧谱核磁测试仪器测试所述小分子果核酸提取物原液，测试结果小分子团半幅宽46.46Hz，属小分子团液体。(文献报道中把半幅宽小于100Hz由6个小分子水组成的水称为小分子水)
上述方法制备的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶应用于因意外造成皮肤挫伤或手术伤口的愈合，见于组织缺损少、创缘整齐、无感染、经粘合或缝合后创面对合严密的伤口，使用纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶可使破损伤口不结血痂，不会给伤口带来二次损伤，上药时，伤口不疼；清创效果好，肉芽组织生长快；伤口愈合和表皮恢复时间快，伤口恢复时表皮不瘙痒，形成疤痕少。使用时对正常皮肤或损伤皮肤表面进行清洁处理并擦干，将本品直接涂抹于所需部位，每日2-3次。或将抑菌凝胶置于雾化喷瓶内，进行雾化治疗，每次喷完后皮肤表面呈一层薄油状层，但是不粘，每次用时2-3分钟，皮肤光滑不起皮，对蚊虫叮咬所导致的有害病菌、病毒、异味等传播，提供环境和人身的安全防护。
在本发明中，创新性地采用流动相亲和溶合法技术制备纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶。其中果核酸酯在制备过程中，使流动相中的小分子果核酸液在羊毛脂的表面沉积，在恒定的温度下逐步滴加水的方法，随着水含量的增加表面活性剂经历相反转，最终得到O/W液滴粒径20-300nm纳米乳液，乳液具有良好的生物兼容性，可以加速诱导组织中胶原蛋白的合成。
相比传统产品，例如碘伏、酒精、碘酒、双氧水、红霉素软膏、莫匹罗星软膏等产品，存在的刺激性、过敏、使用受限等问题。以及长期外用糖皮质激素，患者出现皮肤萎缩、色素沉着、毛细管扩张容易诱发二重感染、患者出现激素依赖性皮炎，产生多种不良反应。纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶是一种天然植物与脂类的抗生素组合，含有多酚、有机酸、甾醇类、脂肪醇类和三萜烯醇类等活性组分元素，与中药方剂的组合，不仅有效加速伤口处细胞的迁移，而且上调了伤口处的血管相关生长因子的表达，可以促进伤口处胶原蛋白的沉积的表达，进而更加快速促进伤口的愈合；而且有机酸组分可以被人体轻易分解，具有渗透力强、吸收快的特点；通过修复病变组织增强自然防御功能，提高人体免疫力，摒弃化学抗生素耐药性、依赖性缺陷，在皮肤组织修复领域展现出巨大潜力。综上，新型的小分子果核酸酯复合抑菌凝胶有望成为下一代皮肤伤口修复敷料。
1、纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶对皮肤损伤后的愈合作用机理
伤口本身污染的程度与以后是否发生感染有很大的关系，伤口分为清洁伤口(无发炎现象、手术伤口)、清洁污染伤口(进入呼吸道、消化道、生殖道、泌尿道等管道，而无特殊污染的手术伤口)、污染伤口(开放性的、新的、意外性的伤口)和感染伤口(有坏死组织的外伤伤口)。在本发明中我们主要选择清洁伤口和清洁污染伤口，根据皮肤损伤后愈合的不同阶段特点，通过以下方法研究纳米级小分子果核酸酯抑菌凝胶对皮肤损伤后的愈合作用，观察其对伤口愈合每一阶段的作用，发现其作用特点，避开刺激性等不利因素，找出具有针对性的最佳用药时机，以获得最大效果。
1)纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶对皮肤伤口的愈合是否有促进作用
①以C57BL/6小鼠为模型动物，观察了抑菌凝胶对清洁伤口(外科手术并缝合)与皮肤切除的污染伤口是否具有促进愈合的作用，比较其在治疗意外性的、开放性的污染伤口中是否有优势。在损伤后的第3天、第7天和第15天分别从外观上测量并观察伤口愈合的百分比。
②为了明确伤口愈合的质量，更加精确的评价实验①的结果，采用免疫组化的方法观察伤口愈合区域的组织形态学变化，对伤口的愈合程度和质量进行评估。首先观察伤口边界的距离，计算损伤后第3、7、15天愈合的百分率。
③由于伤口收缩和肌成纤维细胞在伤口愈合的重塑阶段均起着重要作用，为了体现伤口的愈合过程、并证明抑菌凝胶是通过干预这一过程来促进愈合的，减少人为的干扰因素与实验误差，通过免疫组化方法观察alpha smooth muscle actin(α-SMA)在损伤后第3、7、15天的表达量，这是一个肌成纤维细胞特异性指标，其表达量与时间的关系在一定程度上能够反映伤口愈合的进度和预后。如果开始表达时间延迟说明修复的前阶段没能顺利进行，而修复后该指标仍有较高的表达，则可能会形成较大的瘢痕，影响修复后的功能，预后不良。
2)纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶对皮肤伤口的愈合作用：
炎症阶段是皮肤损伤后修复的第一阶段，分为止血和炎性细胞的浸润过程，是控制损伤后的感染、促进伤口清理的重要环节，为组织再生与重构提供好的条件，是伤口愈合中最关键的第一步。
①首先观察抑菌凝胶是否有止血作用，我们采用生化的检测方法，确认其是否对凝血和止血有作用。
②观察凝胶对损伤后炎症反应的影响。
炎症不仅可以阻断微生物入侵引起的感染，还能有效的清除损伤和坏死的组织和异物，感染和反复的损伤刺激会引起持续的过激的炎症反应，是影响伤口愈合和预后的重要因素。在这一阶段观察凝胶对炎症进程的影响：在损伤后的第1-3天观察组织中中性粒细胞和巨噬细胞的浸润，在第3天观察与损伤修复相关的细胞因子的表达。
由于凝胶的酸性特征，会对开放损伤的组织产生刺激，会刺激炎症过程，加速清除作用。
3)纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶对皮肤伤口的愈合的增殖与重构阶段的作用：
纤维细胞的增殖和胶原纤维的产生和沉积在损伤修复的第二阶段进程中有非常重要的作用。这一过程还包括血管的再生，为新生组织提供丰富的血液供应。为了明确凝胶在这一过程中的作用，我们将通过以下方法明确果核酸酯抑菌凝胶对损伤修复增殖阶段进程的影响。
①观察成熟的胶原蛋白沉积，了解组织修复程度。
②观察成纤维细胞的特征性指标vimentin和细胞增殖的标志物proliferatingcellnuclear antigen(PCNA)及其定位关系，衡量损伤修复的活跃程度。
③观察新生血管生成，了解肉芽组织生成的速度与进展。
④通过观察上皮细胞标志物CK 14的表达衡量上皮细胞再生的情况。
上述实验中，通过对皮肤伤口愈合的不同阶段的特异性标志物观察，评估损伤修复的进程，在评价小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的损伤修复作用时各项实验数据支持。根据小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的作用特点，调整给药时机，使抑菌凝胶能为皮肤损伤后的修复和再生过程提供最佳条件，达到最大疗效，减少疤痕形成。实验中选用了常用的“积雪苷霜软膏”作为对照药物，经实验观察得到用药效果由好到差依次是纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶、积雪苷霜软膏、羊毛脂养护霜。积雪苷霜软膏在临床上已应用多年，主要治疗的病症有：瘢痕、硬皮病、轻度烧伤。
2、本发明具有如下有益效果
本发明所提供的一种纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的制备方法及其应用，通过本制备方法制备的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶组方含有羊毛脂、小分子果核酸提取物原液，和没药、蜂蜡、珍珠粉、川弓、牡丹皮、紫草等中药科学配伍，无化学合成制剂添加，采用羊毛脂与植物亲和溶合技术制备而成。经志愿者试用验证对溃烂褥疮、创伤、烧伤、晒伤等抑制皮肤感染和愈合具有很好的效果，其效果超过了国外同类产品。
通过本发明制备方法制备的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶是一种具有良好吸水性、滋润性、亲油性、乳化性和分散性的产品。可使因缺少天然水分而干燥或粗糙的皮肤软化并得到恢复。它是通过延迟、而不是完全阻止水分透过表皮层来维持皮肤通常的含水量(10％-30％)。另外，它还有良好的乳化和渗透作用，能被皮肤和毛发吸收，无抗药性、杀菌、抗病毒、抑菌和修复皮肤上皮细胞的综合显著功效。
小分子果核酸酯混合乳液与中药组分复合而成的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶是一种系统的促进伤口愈合的外用膏剂，具有可调理伤口，去腐生肌，激发生长因子的释放，消除水肿等不利于伤口愈合的因素，对延期愈合的伤口，有较强的驱动力。具有明显的抑菌作用，增加肌体对病菌抵抗力，并发挥其祛邪扶正、消炎排毒、托毒外出、消肿镇痛、加速局部血液循环等功效，促进成纤维细胞生长，促进创面快速愈合。
纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶可用于治疗各种皮肤破损，术后伤口愈合、烫伤、晒伤、冻伤等症状。可用于脚气、手足干裂(也可提前护理)、蚊虫叮咬、湿疹、皮肤瘙痒、表皮损伤，也可用于对易损伤部位皮肤的提前防护。可以制作润肤霜、洗面奶、香脂、防晒霜、防裂膏等各种化妆品产品。可广泛用于深度创伤(割伤、划伤)，皮肤的瞬间应急止血，防止感染；对烧伤、烫伤皮肤覆盖，防止烧伤、烫伤引起的皮肤起泡，缓解痛感；对后期伤口的治疗和愈合的处理，预防皮肤细菌感染而引起的危及生命的疾病。
1)羊毛脂组分特性及作用：
羊毛脂是附着在羊毛上的一种分泌油脂，主要成分是甾醇类、脂肪醇类和三萜烯醇类与大约等量的脂肪酸所生成的酯，约占95％，还含有游离醇4％，并有少量的游离脂肪酸和烃类物质。白色或浅黄色至深棕色膏状半透明体。常用作油包水型乳化剂，是优良的滋润性物质。可使因缺少天然水分而干燥或粗糙的皮肤软化并得到恢复。它是通过延迟，而不是完全阻止水分透过表皮层来维持皮肤通常的含水量。
羊毛脂的作用效果：
①保湿：羊毛脂可谓是天然的皮肤润滑剂，可为干燥的肌肤补充水分。另外，它也是一种乳化剂，可防止水分流失，对极干性肤质有很好的改善效果。
②抗老化：羊毛脂含有维他命E成分，可清理有害的酸性物质，补充养分，提高肌肤弹力，延缓衰老。
③促进肌肤再生、保护肌肤：含有羊毛脂的产品对受损伤的肌肤有很好的修复作用，并可促进细胞再生。此外，它还可提高肌肤对有害物质的抵抗力，让肌肤得到全面保护。
2)小分子果核酸提取物原液组分特性及作用：
本发明是以桃果核为原料，桃属蔷薇科植物，桃果核是干燥成熟后的种子，桃果味道鲜美，且富含多种营养成分，在我国已有几千年的栽培历史，其产量位居苹果、梨之后，是第三大水果。新鲜桃果实中含有很高的抗氧化成分如抗坏血酸,多酚和多糖类成分等。桃果实中酚类物质是桃果实在发育过程中重要的次生代谢产物之一，主要包括绿原酸、新绿原酸、儿茶素、芦丁和槲皮素等化合物。与苹果、葡萄等其它水果相比，桃果实中的酚类物质具有较高的清除自由基能力和抗氧化能力。研究表明,从桃子果实中已分离鉴定出40余种酚类化合物，分别属于酚酸类、黄烷醇类、黄酮醇类和花色苷类等物质。具有抗氧化、抗微生物等多种生物活性。
①小分子果核酸提取物原液属小分子团水，具有渗透力强、吸收快的特点。
②酸类和酚类化合物使得果核酸液呈酸性，其中，乙酸等低分子酸类和愈创木酚、丁香酚、苯酚及其衍生物分别给予了小分子果核酸强抗微生物和抗氧化活性。具有溶解角质、止痒、消炎、收敛及促进吸收等作用,对有害病菌真菌具有强力的杀灭作用，对病毒具有极强的抑制复制作用。
③由于其特殊合理成分组合，同时能使人体白血球细胞快速大量增长，噬食有毒细胞微粒，清除皮肤粘膜淤血厚层，加速新陈代谢，提高机体免疫功能，加快伤口愈合，迅速修复皮肤黏膜"破洞"，重新生长新的致密、牢固、持久的皮肤粘膜保护层，使其不再受病毒侵入，达到彻底治愈。
3)中药组方的特性及作用：
①蜂分泌的蜡，中医学上蜂蜡有解毒、生肌、止痢、定痛的功效，在临床上外用于溃疡不敛、臁疮糜烂，外伤破溃、烧、烫伤等。蜂蜡来源于蜜蜂科昆虫中华蜜蜂或意大利蜂分泌的蜡，将蜂巢置水中加热，过滤，冷凝取蜡或再精制而成。蜂蜡属于微温的药物，外用适量，溶化敷于患处，常作为成药的赋型剂及油膏基质。西医方面由于蜂蜡的主要成分是高级脂肪酸和高级一元醇所形成的酯，与矿物油混合，将其制成各种软膏、乳剂、栓剂，可以治疗溃疡、疖、烧伤创伤、皮炎、湿疹等多种疾病。
②没药是一味中药，来源于橄榄科植物地丁树或哈地丁树的干燥树脂。没药的性味辛、苦，平。归心经、肝经和脾经，没药的功效与作用是散瘀定痛、消肿生肌，用于治疗胸痹心痛、胃脘疼痛、痛经经闭、产后瘀阻、癥瘕腹痛、风湿痹痛、跌打损伤、痈肿疮疡等。没药的药性苦泄辛散，药性相对平和，功能行散气滞、活血祛瘀、止痛。
③珍珠粉是以珍珠为原料，经消毒灭菌后用机械碾磨加工而成的粉末状物质，呈白色，有特殊腥味，它具有镇心安神、清肝明目、解毒生肌、美容养颜等功效，为名贵中药材。珍珠主要成分为碳酸钙和有机质，有机质包括氨基酸、牛磺酸、小分子活性肽、卟啉及金属卟啉、维生素B族及微量元素等，其临床应用较为广泛。
④川芎是一味中药，来源于伞形科植物川芎的干燥根茎。它的性味辛温，归肝经、胆经和心包经。川芎的功效与作用是活血行气、祛风止痛，可用于治疗血瘀气滞的痛证。本品辛散温通，既能活血化瘀，又能行气止痛，为血中之气药，具有通达气血的功效，所以善于治疗气滞血瘀的胸胁、腹部各种疼痛症状。
⑤紫草是一种中药药材，具有清热解毒、活血化瘀、透疹消斑的功效，对于湿疹、烫伤、麻疹、血热毒盛、斑疹紫黑等均有不错的治疗效果。紫草还对多种细菌、病毒具有抑制作用，能够对一些细菌病毒感染具有治疗作用。另外，紫草具有保肝、抗肿瘤、止血等作用。
⑥中草药牡丹皮具有清热凉血,活血化瘀的功效,其中含有牡丹酚及糖苷类成分,具有消炎止痛的作用,而牡丹皮中的甲醇提取物具有抑制血小板的作用,牡丹酚具有镇静、降温、解热、镇痛、解痉等中枢神经抑制作用。
具体实施方式
为使本领域技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作详细说明。
实施例1
本实施例提供了一种纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的制备方法，包括如下步骤：
步骤S1，制备小分子果核酸提取物原液。
(1)以蔷薇科植物果核、鼠李科枣属植物、核桃皮胡桃科植物、椴树属的植物木屑中的一种或任意比例混合的两种为原料，将原料进行粉碎得到粒度100-200目的原料粉末，将其烘干，水分含量＜5％备用。
(2)将粉碎、烘干后的原料置于密闭容器内的工业微波炉中，采用微波热解技术，在容器下部设置有用于调节气量闸阀，容器顶部设置排气口，排气口与排烟风机连接；开启微波炉，微波直接与被分离物原料粉末作用，使整个物料同时被加热，随着炉内温度升高，适当调节进气阀的开度，使原料粉末在微氧状态下热解制取木质纤维素热解液，从而保证了能量的快速传导和充分利用。
(3)截取170℃以下、170-350℃、350℃以上，这三个温度段的由密闭容器排气口排出的热解烟气，热解烟气通过顶部管道进入冷凝系统，温度控制在30℃±3-5℃，热解烟气经冷凝器冷却后产生冷凝液，将该液体收集到储罐中自然静置，分离焦油和杂质，抽取中间段液体，将木质纤维素热解液粗液与文丘里臭氧气液发生器产生的气体混合，粗液经臭氧处理，可去除粗液中的杂质、杀菌、消毒、去味、去除重金属。
(4)一次精制：将上述木质纤维素热解液粗液经碳纤维毛毡过滤，并用果壳颗粒活性炭吸附以去除粗液中的酚类、醇类杂质。
(5)二次精制：将一次精制的木质纤维素热解液置于专用高速离心机中，高速离心机转速为20000/每分钟，再次脱除杂质，最终所得的精制木质纤维素热解液，即为小分子果核酸提取物原液。
本步骤制备的小分子果核酸提取物原液颜色呈浅黄色，密度为1.00-1.13g/cm3，酚类以苯酚的量计，不低于0.5mg/mL；有机酸含量(乙酸计)不低于1.5mg/mL；pH值以酸度计法测量达到2.27-3.32；采用氧谱核磁测试仪器测试所述小分子果核酸提取物原液，测试结果小分子团半幅宽46.46Hz，属小分子团液体。
步骤S2，制备果核酸酯混合乳液。
果核酸酯混合乳液是由羊毛脂与小分子果核酸提取液采用亲和溶合技术制备而成。其中羊毛脂是附着在羊毛上的一种分泌油脂，主要成分是甾醇类、脂肪醇类和三萜烯醇类与大约等量的脂肪酸所生成的酯，约占95％，还含有游离醇4％，并有少量的游离脂肪酸和烃类物质。白色或浅黄色至深棕色膏状半透明体，有臭味无水物的相对密度0.946。软化点38-44℃、酸值<1.0mgKOH/g、皂化值为92-106mgKOH/g、碘值约18-36mgKOH/g。由于羊毛脂在氯仿或乙醚中易溶，在热乙醇中溶解，在乙醇中极微溶解，在水中不溶，但能与约2倍量的水均匀混合的特点，使流动相中的小分子果核酸提取液在羊毛脂酯的表面沉积形成乳液，具体制备方法如下：
以制备100克制备果核酸酯混合乳液计，羊毛脂与步骤S1制备的小分子果核酸提取液按重量1:4的比例混合，制备过程如下：首先在容器中加入医用羊毛脂,水浴加热使其熔化，再加入重量为羊毛脂重量4倍的小分子果核酸提取物原液，与羊毛脂混合，水浴加热至45-55℃,边加热边搅拌,做到充分搅拌均匀；这一过程中加入适量的乙醇溶液,并不断搅拌,使流动相中的小分子果核酸提取液在羊毛脂的表面沉积形成乳液，得到果核酸酯混合乳液。
步骤S3，制备中药混合粉末。
一剂中药混合粉末中各成分重量配比为：没药3.5克、珍珠粉2克、川芎1.2克、牡丹皮12克、紫草7克，经超声粉碎至纳米级中药混合粉末。
步骤S4，将步骤S2制备的果核酸酯混合乳液和步骤S3制备的中药混合粉末，按每100克果核酸酯混合乳液搭配一剂中药混合粉末的比例混合，并添加蜂蜡、脂肪酸橄榄油、蜂蜜、薄荷油，制备成纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶。具体操作为：
(1)取蜂蜡适量水浴加热至熔化，加入适量的脂肪酸橄榄油加热溶解，充分混合均匀。
(2)另取步骤S2制备的果核酸酯混合乳液、蜂蜜，进行水浴加热，加入步骤S3制备的纳米级中药粉充分混合均匀，其中，每100克果核酸酯混合乳液搭配一剂中药混合粉末。
(3)取适量的黏度调节剂和乳化稳定剂。
(4)将本步骤S4中小步骤(1)(2)(3)的物料混合后，在温度均为80℃下溶解，快速搅拌均匀、进入高速均质乳化机加工成乳膏状成品，然后在温度30℃±5℃，加入薄荷油适量，再充分搅拌均匀，置真空干燥箱内保持25℃，减压气泡后取出，密封包装储存，得到纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶。
本实施例制备的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶，外观呈浅黄色乳状，酸值：<3，有机酸：(乙酸计)﹤4.0％，总多酚：(愈创木酚计)﹤3.8％，含量：>99.0％。
实施例2
本实施例提供了一种纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的制备方法，包括如下步骤：
步骤S1，制备小分子果核酸提取物原液。
(1)以蔷薇科植物果核、鼠李科枣属植物、核桃皮胡桃科植物、椴树属的植物木屑中的一种或任意比例混合的两种为原料，将原料进行粉碎得到粒度100-200目的原料粉末，将其烘干，水分含量＜5％备用。
(2)将粉碎、烘干后的原料置于密闭容器内的工业微波炉中，采用微波热解技术，在容器下部设置有用于调节气量闸阀，容器顶部设置排气口，排气口与排烟风机连接；开启微波炉，微波直接与被分离物原料粉末作用，使整个物料同时被加热，随着炉内温度升高，适当调节进气阀的开度，使原料粉末在微氧状态下热解制取木质纤维素热解液，从而保证了能量的快速传导和充分利用。
(3)截取170℃以下、170-350℃、350℃以上，这三个温度段的由密闭容器排气口排出的热解烟气，热解烟气通过顶部管道进入冷凝系统，温度控制在30℃±3-5℃，热解烟气经冷凝器冷却后产生冷凝液，将该液体收集到储罐中自然静置，分离焦油和杂质，抽取中间段液体，将木质纤维素热解液粗液与文丘里臭氧气液发生器产生的气体混合，粗液经臭氧处理，可去除粗液中的杂质、杀菌、消毒、去味、去除重金属。
(4)一次精制：将上述木质纤维素热解液粗液经碳纤维毛毡过滤，并用果壳颗粒活性炭吸附以去除粗液中的酚类、醇类杂质。
(5)二次精制：将一次精制的木质纤维素热解液置于专用高速离心机中，高速离心机转速为20000/每分钟，再次脱除杂质，最终所得的精制木质纤维素热解液，即为小分子果核酸提取物原液。
本步骤制备的小分子果核酸提取物原液颜色呈浅黄色，密度为1.00-1.13g/cm3，酚类以苯酚的量计，不低于0.5mg/mL；有机酸含量(乙酸计)含量不低于1.5mg/mL；pH值以酸度计法测量达到2.27-3.32；采用氧谱核磁测试仪器测试所述小分子果核酸提取物原液，测试结果小分子团半幅宽46.46Hz，属小分子团液体。
步骤S2，制备果核酸酯混合乳液。
果核酸酯混合乳液是由羊毛脂与小分子果核酸提取液采用亲和溶合技术制备而成。其中羊毛脂是附着在羊毛上的一种分泌油脂，主要成分是甾醇类、脂肪醇类和三萜烯醇类与大约等量的脂肪酸所生成的酯，约占95％，还含有游离醇4％，并有少量的游离脂肪酸和烃类物质。白色或浅黄色至深棕色膏状半透明体，有臭味无水物的相对密度0.946。软化点38-44℃、酸值<1.0mgKOH/g、皂化值为92-106mgKOH/g、碘值约18-36mgKOH/g。由于羊毛脂在氯仿或乙醚中易溶，在热乙醇中溶解，在乙醇中极微溶解，在水中不溶，但能与约2倍量的水均匀混合的特点，使流动相中的小分子果核酸提取液在羊毛脂酯的表面沉积形成乳液，具体制备方法如下：
以制备100克制备果核酸酯混合乳液计，羊毛脂与步骤S1制备的小分子果核酸提取液按重量1:4的比例混合，制备过程如下：首先在容器中加入医用羊毛脂,水浴加热使其熔化，再加入重量为羊毛脂重量4倍的小分子果核酸提取物原液，与羊毛脂混合，水浴加热至45-55℃,边加热边搅拌,做到充分搅拌均匀；这一过程中加入适量的乙醇溶液,并不断搅拌,使流动相中的小分子果核酸提取液在羊毛脂的表面沉积形成乳液，得到果核酸酯混合乳液。
步骤S3，制备中药混合粉末。
一剂中药混合粉末中各成分重量配比为：没药5克、珍珠粉4克、川芎1.5克、牡丹皮15克、紫草9克，经超声粉碎至纳米级中药混合粉末。
步骤S4，将步骤S2制备的果核酸酯混合乳液和步骤S3制备的中药混合粉末，按每100克果核酸酯混合乳液搭配一剂中药混合粉末的比例混合，并添加蜂蜡、脂肪酸橄榄油、蜂蜜，制备成纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶。具体操作为：
(1)取蜂蜡适量水浴加热至熔化，加入适量的脂肪酸橄榄油加热溶解，充分混合均匀；
(2)另取步骤S2制备的果核酸酯混合乳液、蜂蜜，进行水浴加热，加入步骤S3制备的纳米级中药粉充分混合均匀，其中，每100克果核酸酯混合乳液搭配一剂中药混合粉末。
(3)取适量的黏度调节剂和乳化稳定剂。
(4)将本步骤S4中小步骤(1)(2)(3)的物料混合后，在温度均为80℃下溶解，快速搅拌均匀、进入高速均质乳化机加工成乳膏状成品，然后在温度30℃±5℃，加入薄荷油适量，再充分搅拌均匀，置真空干燥箱内保持25℃，减压气泡后取出，密封包装储存，得到纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶。
本实施例制备的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶，外观呈浅黄色乳状，酸值：<3，有机酸：(乙酸计)﹤4.33％，总多酚：(愈创木酚计)﹤4.18％，含量：>99.0％。
两个实施例制备的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶样品检验依据GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C6《化妆品安全技术规范》(2015年版)第四章1.2、1.3、1.4。
结论：1)批号为18072101的样品，32℃存放3个月后，原液作用2分钟对白色念株菌有较强抑菌作用，符合GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》有效期为2年的要求。2)该样品铅、砷、汞的检测结果均符合《化妆品安全技术规范》(2015年版)的要求。
具体案例：
案例1、患者因意外造成皮肤挫伤或手术伤口的愈合，使用“纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶”可使破损伤口不结血痂，不会给伤口带来二次损伤，上药时，伤口不疼；清创效果好，肉芽组织生长快；伤口愈合和表皮恢复时间快，伤口恢复时表皮不瘙痒，形成疤痕少。
案例2：烫伤、紫外线灼伤(晒、)使用“纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶”基本上不产生色素沉淀，大面积晒伤和小面积烫伤可快速修复表皮，使其不易脱皮和皮肤不起泡。
案例3、患者因蚊虫叮咬感染伤口，使用“纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶”用药后5天愈合。
案例4、患者为59岁，女性，患顽固性皮炎30多年，使用过各种外用药物制剂，均不见好转。从照片上可以看到使用前患皮炎处皮肤很厚、角质化很严重。使用“纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶”2.5个月后患处皮炎有十分明显好转。
案例5：患者陈女士，女，63岁,该女士八年前(2009年)因摔伤腰部神经受损，造成腰部以下瘫痪。在此期间查出糖尿病并形成了综合症，导致其下肢之溃烂八年余。右腿膝盖上部呈圆形深度溃烂，表面分布绿色菌膜，创面直径约70mm。主要指标糖化血红蛋白为11.7，陈女士皮肤溃烂是由于糖尿病患者长期受到高血糖的影响，下肢血管硬化，血管壁增厚，弹性下降，血管容易形成血栓，并集结成斑块，而造成下肢血管闭塞，支端神经损伤，从而造成下肢组织病变。
使用“纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶”,对陈女士双腿溃烂病灶处表层细胞进行抑菌修复，使其溃烂面逐渐愈合。同时服用“小分子果核酸萃取口服液”，对胰脏β细胞和肝细胞进行修复，使其葡萄糖指标，糖化血红蛋白指标下降，逐步解决细胞的糖代谢障碍，促进能量源的分解和吸收，改善下肢血管的微循环障碍。
案例6：对于产后妇女母乳乳头疼痛、乳头破裂，使用“纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶”能有效缓解疼痛，帮助伤口快速恢复，促进伤口愈合，防止继发性感染。使用凝胶涂抹乳房可防止水分流失，滋润干燥肌肤的作用。
案例7：患者60岁，男性，患红斑狼疮10年，双下肢皮肤出现盘状红斑特异皮损，使用”纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶”贴敷，一个月后复查形成的皮损全部愈合，病情得到显著缓解。
案例8：患者69岁，女性，患下肢淋巴水肿病变，局部血液循环不良，造成局部感染，使用常规外用药膏伤口愈合迟缓，临床上使用”纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶”贴敷后，伤口很快愈合，对改善局部血液循环起到显著作用。
以上通过实施例对本发明实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明实施例的示例性实施例，不能被认为用于限定本发明实施例的实施范围。本发明实施例的保护范围由权利要求书限定。凡利用本发明实施例所述的技术方案，或本领域的技术人员在本发明实施例技术方案的启发下，在本发明实施例的实质和保护范围内，设计出类似的技术方案而达到上述技术效果的，或者对申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明实施例的专利涵盖保护范围之内。

Claims (6)

1.一种纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤S1，制备小分子果核酸提取物原液；
(1)以蔷薇科植物果核、鼠李科枣属植物、核桃皮胡桃科植物、椴树属的植物木屑中的一种或任意比例混合的两种为原料，将原料进行粉碎、烘干备用；
(2)将粉碎、烘干后的原料置于密闭容器内的工业微波炉中，采用微波热解技术，在容器下部设置有用于调节气量闸阀，容器顶部设置排气口，排气口与排烟风机连接；开启微波炉，微波直接与被分离物原料粉末作用，使整个物料同时被加热，随着炉内温度升高，适当调节进气阀的开度，使原料粉末在微氧状态下热解制取木质纤维素热解液，从而保证了能量的快速传导和充分利用；
(3)截取170℃以下、170-350℃、350℃以上，这三个温度段的由密闭容器排气口排出的热解烟气，热解烟气通过顶部管道进入冷凝系统，温度控制在30℃±3-5℃，热解烟气经冷凝器冷却后产生冷凝液，将该液体收集到储罐中自然静置，分离焦油和杂质，抽取中间段液体，将木质纤维素热解液粗液与文丘里臭氧气液发生器产生的气体混合，粗液经臭氧处理，可去除粗液中的杂质、杀菌、消毒、去味、去除重金属；
(4)一次精制：将上述木质纤维素热解液粗液经碳纤维毛毡过滤，并用果壳颗粒活性炭吸附以去除粗液中的酚类、醇类杂质；
(5)二次精制：将一次精制的木质纤维素热解液置于专用高速离心机中，再次脱除杂质，最终所得的精制木质纤维素热解液，即为小分子果核酸提取物原液；
步骤S2，制备果核酸酯混合乳液；
以制备100克制备果核酸酯混合乳液计，羊毛脂与步骤S1制备的小分子果核酸提取液按重量1:4的比例混合，制备过程如下：首先在容器中加入医用羊毛脂,水浴加热使其熔化，再加入重量为羊毛脂重量4倍的小分子果核酸提取物原液，与羊毛脂混合，水浴加热至45-55℃,边加热边搅拌,做到充分搅拌均匀；这一过程中加入适量的乙醇溶液,并不断搅拌,使流动相中的小分子果核酸提取液在羊毛脂的表面沉积形成乳液，得到果核酸酯混合乳液；
步骤S3，制备中药混合粉末；
一剂中药混合粉末中各成分重量配比为：没药3-5克、珍珠粉1-4克、川芎1-1.5克、牡丹皮10-15克、紫草5-9克，经超声粉碎至纳米级中药混合粉末；
步骤S4，将步骤S2制备的果核酸酯混合乳液和步骤S3制备的中药混合粉末，按每100克果核酸酯混合乳液搭配一剂中药混合粉末的比例混合，并添加蜂蜡、脂肪酸橄榄油、蜂蜜、薄荷油，制备成纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶。
2.根据权利要求1所述的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的制备方法，其特征在于，步骤S4具体操作为：
(1)取蜂蜡适量水浴加热至熔化，加入适量的脂肪酸橄榄油加热溶解，充分混合均匀；
(2)另取步骤S2制备的果核酸酯混合乳液、蜂蜜，进行水浴加热，加入步骤S3制备的纳米级中药粉充分混合均匀，其中，每100克果核酸酯混合乳液搭配一剂中药混合粉末；
(3)取适量的黏度调节剂和乳化稳定剂；
(4)将本步骤S4中小步骤(1)(2)(3)的物料混合后，在温度均为80℃下溶解，快速搅拌均匀、进入高速均质乳化机加工成乳膏状成品，然后在温度30℃±5℃，加入薄荷油适量，再充分搅拌均匀，置真空干燥箱内保持25℃，减压气泡后取出，密封包装储存，得到纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶。
3.根据权利要求1所述的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的制备方法，其特征在于，步骤S1的小步骤(1)中将原料粉碎，得到粒度100-200目的原料粉末，将其烘干，水分含量＜5％备用；步骤S1的小步骤(5)中高速离心机中的转速为20000/每分钟。
4.根据权利要求1所述的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的制备方法，其特征在于，步骤S1制备的小分子果核酸提取物原液颜色呈浅黄色，密度为1.00-1.13g/cm3，酚类以苯酚的量计，不低于0.5mg/m L；有机酸含量，以乙酸计不低于1.5mg/m L；pH值以酸度计法测量达到2.27-3.32；采用氧谱核磁测试仪器测试所述小分子果核酸提取物原液，测试结果小分子团半幅宽46.46Hz，属小分子团液体。
5.权利要求1-4任一权利要求所述方法制备的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的应用，其特征在于，可用于治疗各种皮肤破损，术后伤口愈合、烫伤、晒伤、冻伤。
6.权利要求1-4任一权利要求所述方法制备的纳米级小分子果核酸酯复合抑菌凝胶的应用，其特征在于，可用于治疗脚气、手足干裂、蚊虫叮咬、湿疹、皮肤瘙痒、表皮损伤，也可用于对易损伤部位皮肤的提前防护。
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