CN116019813A - Vesatolimod在制备预防和/或治疗中枢神经系统疾病的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物技术领域，公开了Vesatolimod在制备预防和/或治疗中枢神经系统疾病的药物中的应用。本发明首次公开了Vesatolimod或其衍生物可显著改善EAE发病症状，减轻脊髓白质炎性细胞浸润和脱髓鞘(提高MBP蛋白表达水平)，减轻T细胞和巨噬细胞的浸润，抑制小胶质细胞肥大增生(抑制Iba1蛋白表达)，并降低血浆中IL‑12(p40)和Eotaxin等相关炎性因子的表达水平，抑制自噬(抑制自噬相关蛋白的表达)可以达到预防和/或治疗多发性硬化症等中枢神经系统疾病的效果。

Description

Vesatolimod在制备预防和/或治疗中枢神经系统疾病的药物中的应用

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体涉及Vesatolimod在制备预防和/或治疗中枢神经系统疾病的药物中的应用。

背景技术

多发性硬化症(multiple sclerosis，MS)是一种中枢神经系统(Central NervousSystem，CNS)的慢性神经炎症和脱髓鞘性自身免疫性疾病，其病理过程包括血脑屏障的破坏、炎性细胞浸润，多灶性炎症、脱髓鞘、少突胶质细胞丢失、反应性胶质增生和轴突变性。早期症状包括疲劳、麻木、视力模糊、刺痛、行走困难；其他症状包括肌肉僵硬、认知障碍以及排尿和排便困难。

MS的发病机制到目前还不清楚，目前认为是由遗传因素和环境因素相互作用而导致的自身性免疫疾病。在环境因素方面,从多发性硬化症的流行病学来看：维生素D缺乏或暴露在UVB紫外线、感染爱泼斯坦-巴尔二氏病毒(EBV)、肥胖和吸烟对多发性硬化症发病有明显影响。在发病机制方面，根据患者CNS内大量淋巴细胞浸润、免疫治疗的有效性以及与遗传因素等关联证据，普遍认为，多发性硬化症主要由淋巴细胞(尤其是T细胞)介导针对CNS髓鞘的免疫应答所致。其中CD4+T细胞存在于MS患者的中枢神经系统病灶部位和脑脊液中，在这些CD4+T细胞中，主要是产生干扰素γ(IFN-γ)的Th1细胞和分泌IL-17、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSFs)的Th17细胞，它们进入中枢神经系统后，激活小胶质细胞和星形胶质细胞产生大量细胞因子和趋化因子，因此，通过调节免疫反应和病原性T细胞在中枢神经系统浸润的治疗策略有助于提高治疗效果。

Vesatolimod(GS-9620，维沙莫德)是吉利德开发的一种TLR7小分子激动剂，临床显示具有很好的抗病毒效应，因此正在开发该药用于HBV和HIV的功能性治愈。目前，暂无将Vesatolimod用于防治中枢神经系统疾病的报道。

发明内容

本发明第一个方面的目的，在于提供Vesatolimod或其衍生物在制备预防和/或治疗中枢神经系统疾病的药物中的应用。

本发明第二个方面的目的，在于提供一种药物。

为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供Vesatolimod或其衍生物在制备药物中的应用；

所述药物具有(a1)～(a11)中至少一种功能：

(a1)预防和/或治疗中枢神经系统疾病；

(a2)抑制炎性细胞浸润；

(a3)抑制中枢神经系统脱髓鞘；

(a4)抑制T细胞浸润；

(a5)抑制巨噬细胞浸润；

(a6)抑制小胶质细胞肥大增生；

(a7)抑制炎性因子表达；

(a8)提高MBP蛋白表达水平；

(a9)抑制Iba1蛋白表达；

(a10)抑制自噬；

(a11)抑制自噬相关蛋白表达。

Vesatolimod，又名GS-9620，中文名维沙莫德，分子式为C₂₂H₃₀N₆O₂，分子量：410.513，CAS号：1228585-88-3，其化学结构式如式(I)所示。

优选地，所述衍生物包含Vesatolimod在药学上可以接受的盐、酯、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体和前药。

优选地，所述中枢神经系统疾病包含多发性硬化、视神经脊髓炎、急性散播性脑脊髓炎、同心圆硬化中的至少一种；进一步包含多发性硬化、视神经脊髓炎、急性散播性脑脊髓炎中的至少一种；进一步包含多发性硬化症。

优选地，所述炎性因子包含IL-17A(白介素17A)、IL-6(白介素6)、IL-12(白介素12)、G-CSF(粒细胞集落刺激因子)、Eotaxin(嗜酸性粒细胞趋化因子)、TNF-α(肿瘤坏死因子α)、IL-1β(白介素1β)、IL-10(白介素10)、IL-23(白介素23)、MCP-1(单核细胞趋化蛋白-1)、IFN-γ(干扰素γ)、IFN-α(干扰素α)、IFN-β(干扰素β)、RANTES(CCL5)、GM-CSF(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)中的至少一种；进一步包含IL-17A、IL-6、IL-12、G-CSF、Eotaxin中的至少一种；更进一步包含IL-12、Eotaxin中的至少一种。

优选地，所述自噬相关蛋白包含ATG5、ATG7、ATG12中的至少一种；进一步包含ATG5、ATG7中的至少一种。

优选地，所述炎性细胞、T细胞、巨噬细胞、MBP蛋白、Iba1蛋白、自噬相关蛋白和/或小胶质细胞来自脊髓。

优选地，所述药物还包含一种或多种药学上可接受的辅料。

优选地，所述的辅料包含缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、润滑剂中的至少一种。

优选地，所述药物的剂型包含固体制剂、液体制剂、半固体制剂中的至少一种。

优选地，所述固体制剂包含片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂中的至少一种。

优选地，所述液体制剂包含注射剂。

优选地，所述半固体制剂包含软膏剂、霜剂中的至少一种。

优选地，所述Vesatolimod的给药剂量为2～5mg/kg小鼠。

优选地，所述Vesatolimod的给药方式为注射。

本发明的第二方面，提供一种药物，包含以下成分：

(1)Vesatolimod和/或其衍生物；和

(2)药学上可接受的辅料。

Vesatolimod，又名GS-9620，中文名维沙莫德，分子式为C₂₂H₃₀N₆O₂，分子量：410.513，CAS号：1228585-88-3，其化学结构式如式(I)所示。

优选地，所述衍生物包含Vesatolimod在药学上可以接受的盐、酯、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体和前药。

优选地，所述的辅料包含缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、润滑剂中的至少一种。

优选地，所述药物的剂型包含固体制剂、液体制剂、半固体制剂中的至少一种。

优选地，所述固体制剂包含片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂中的至少一种。

优选地，所述液体制剂包含注射剂。

优选地，所述半固体制剂包含软膏剂、霜剂中的至少一种。

所述药物具有(a1)～(a11)中至少一种功能：

(a1)预防和/或治疗中枢神经系统疾病；

(a2)抑制炎性细胞浸润；

(a3)抑制中枢神经系统脱髓鞘；

(a4)抑制T细胞浸润；

(a5)抑制巨噬细胞浸润；

(a6)抑制小胶质细胞肥大增生；

(a7)抑制炎性因子表达；

(a8)提高MBP蛋白表达水平；

(a9)抑制Iba1蛋白表达；

(a10)抑制自噬；

(a11)抑制自噬相关蛋白表达。

优选地，所述中枢神经系统疾病包含中枢神经系统炎症性脱髓鞘疾病；进一步包含多发性硬化、视神经脊髓炎、急性散播性脑脊髓炎中的至少一种；进一步包含多发性硬化症。

优选地，所述炎性因子包含IL-17A(白介素17A)、IL-6(白介素6)、IL-12(白介素12)、G-CSF(粒细胞集落刺激因子)、Eotaxin(嗜酸性粒细胞趋化因子)、TNF-α(肿瘤坏死因子α)、IL-1β(白介素1β),IL-10(白介素10)、IL-23(白介素23)、MCP-1(单核细胞趋化蛋白-1)、IFN-γ(干扰素γ)、IFN-α(干扰素α)、IFN-β(干扰素β)、GM-CSF(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)的至少一种；进一步包含IL-17A、IL-6、IL-12、G-CSF、Eotaxin中的至少一种；更进一步包含IL-12、Eotaxin中的至少一种。

优选地，所述自噬相关蛋白包含ATG5、ATG7、ATG12中的至少一种；进一步包含ATG5、ATG7中的至少一种。

优选地，所述炎性细胞、T细胞、巨噬细胞、MBP蛋白、Iba1蛋白、自噬相关蛋白和/或小胶质细胞来自脊髓。

本发明的有益效果是：

本发明首次公开了Vesatolimod或其衍生物可显著改善EAE发病症状，减轻脊髓白质炎性细胞浸润和脱髓鞘(提高MBP蛋白表达水平)，减轻T细胞和巨噬细胞的浸润，抑制小胶质细胞肥大增生(抑制Iba1蛋白表达)，并降低血浆中IL-12(p40)和Eotaxin等相关炎性因子的表达水平，抑制自噬(抑制自噬相关蛋白的表达)，可以达到预防和/或治疗多发性硬化症等中枢神经系统疾病的效果，可用于制备预防和/或治疗中枢神经系统疾病的药物。

本发明还提供了一种药物，包含以下组分：(1)Vesatolimod和/或其衍生物；和(2)药学上可接受的辅料；该药物可显著改善EAE发病症状，减轻脊髓白质炎性细胞浸润和脱髓鞘(提高MBP蛋白表达水平)，减轻T细胞和巨噬细胞的浸润，抑制小胶质细胞肥大增生(抑制Iba1蛋白表达)，并降低血浆中IL-12(p40)和Eotaxin等相关炎性因子的表达水平，抑制自噬(抑制自噬相关蛋白的表达)，可以达到预防和/或治疗多发性硬化症等中枢神经系统疾病的效果。

附图说明

图1是不同处理的小鼠的体重图：n_治疗组＝10；n_模型组＝9；n_正常组＝10。

图2是不同处理的小鼠的EAE评分图：n_治疗组＝10；n_模型组＝9；n_正常组＝10。

图3是不同处理的小鼠的脊髓切片的H&E染色图，比例尺为200、100μm。

图4是不同处理的小鼠的脊髓切片的MBP免疫荧光染色图及半定量分析图：其中，A是不同处理的小鼠的脊髓切片的MBP免疫荧光染色图，比例尺为100μm；B是不同处理的小鼠的脊髓切片的MBP western blot条带图；C是不同处理的小鼠的脊髓切片的MBP蛋白条带标准化统计图(n_治疗组＝3；n_模型组＝3；n_正常组＝3)。

图5是不同处理的小鼠的脊髓切片的CD3免疫荧光染色图，比例尺为100、50μm。

图6是不同处理的小鼠的脊髓切片的CD107b免疫组织化学染色图，比例尺为100、50μm。

图7是不同处理的小鼠的脊髓切片的IBA-1免疫组织化学染色图及半定量分析图：其中，A是不同处理的小鼠的脊髓切片的IBA-1免疫组织化学染色图，比例尺为200、100、50μm；B是不同处理的小鼠的脊髓切片的Iba1 western blot条带图；C是不同处理的小鼠的脊髓切片的Iba1蛋白条带标准化统计图(n_治疗组＝3；n_模型组＝3；n_正常组＝3)。

图8是不同处理的小鼠的外周血中IL-17A表达水平图：n_治疗组＝3；n_模型组＝3；n_正常组＝3。

图9是不同处理的小鼠的外周血中IL-6表达水平图：n_治疗组＝3；n_模型组＝3；n_正常组＝3。

图10是不同处理的小鼠的外周血中IL-12(p40)表达水平图：n_治疗组＝3；n_模型组＝3；n_正常组＝3。

图11是不同处理的小鼠的外周血中G-CSF表达水平图：n_治疗组＝3；n_模型组＝3；n_正常组＝3。

图12是不同处理的小鼠的外周血中Eotaxin表达水平图：n_治疗组＝3；n_模型组＝3；n_正常组＝3。

图13是不同处理的小鼠的脊髓切片的自噬相关蛋白免疫组织化学染色图及半定量分析图：其中，A是不同处理的小鼠的脊髓切片的自噬相关蛋白免疫组织化学染色图，比例尺为100μm；B是不同处理的小鼠的脊髓切片的自噬相关蛋白ATG5 western blot条带图；C是不同处理的小鼠的脊髓切片的自噬相关蛋白ATG5蛋白条带标准化统计图(n_治疗组＝3；n_模型组＝3；n_正常组＝3)；D是不同处理的小鼠的脊髓切片的自噬相关蛋白ATG7 western blot条带图；E是不同处理的小鼠的脊髓切片的自噬相关蛋白ATG7蛋白条带标准化统计图(n_治疗组＝3；n_模型组＝3；n_正常组＝3)。

具体实施方式

以下通过具体的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。

本实施例中所采用的原料，除特殊说明外，均通过常规手段制备或者通过商业渠道购买。

实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)是多发性硬化症最常用的小鼠动物模型，被证明最能概括MS的发病机制。MS和EAE具有共同的病理生理特征，包括CNS的炎症、胶质增生、脱髓鞘，以及最终的神经变性。

本发明基于多发性硬化症小鼠模型(实验性自身免疫性脑脊髓炎)，通过腹腔注射Vesatolimod，通过体外行为学、组织病理染色、免疫组织化学(IHC)、免疫荧光(IF)、Luminex液相悬浮芯片，评价Vesatolimod对多发性硬化症的治疗效果。

C57BL/6小鼠：SPF级C57BL/6小鼠(8～10周龄，20～24g，雄性)购自广东省医学实验动物中心，饲养于深圳大学SPF级动物房内，鼠笼和所用器皿均严格消毒，自由采食和饮用纯净水；实验前观察小鼠有无临床症状，备用。所有实验获得深圳大学的动物伦理委员会的批准。

实施例1

(1)EAE模型的诱导及评分

1)将髓鞘少突胶质细胞糖蛋白肽35-55(MOG35-55,MCE)溶于预冷PBS后(浓度1.25mg/mL)，与等体积包含有热灭活结核杆菌(H37Ra，在完全弗氏佐剂中的浓度为5mg/mL)的完全弗氏佐剂(CFA,Chondrex)混匀后，转移至三通管连接的两个注射器中，在冰上来回吹打直至形成油包水乳剂(MOG35-55的终浓度0.625mg/mL)。

2)模型组和治疗组的C57BL/6小鼠后背(脊柱两侧)皮下分4个点注射0.4mL步骤1)得到的油包水乳剂(250μg MOG35-55)，并于0小时(注射油包水乳剂时)和48小时分别给模型组和治疗组小鼠腹腔注射百日咳毒素0.4μg/只(正常组小鼠不做处理)。EAE模型小鼠的神经功能评分标准如下：0分，不发病；1分，尾巴无力脱垂；2分，单侧后肢瘫痪或双后肢半瘫；3分，双侧后肢瘫痪：4分，双侧后肢和任一前肢瘫痪；5分，濒临死亡；症状位于两症状之间取平均数，如取0.5分，1.5分，2.5分等。EAE模型小鼠发病(评分为1)后随机分为模型组和治疗组。

(2)分组和给药

将Vesatolimod溶于溶剂(3v/v％二甲基亚砜+40v/v％PEG300+5v/v％Tween100+52v/v％生理盐水)配制成注射用药。

治疗组(10只)：造模后，于发病(评分为1)之日第二天(造模第14天)起，每只小鼠每天腹腔给药3mg/kg，每天一次，连续七天。

模型组(9只)：造模后，于发病(评分为1)之日第二天(造模第14天)起，每只小鼠每天腹腔注射等量溶剂，每天一次，连续七天。

正常组(10只)：与治疗组同一天起，每只小鼠每天腹腔注射等量溶剂，每天一次，连续七天。

(3)体外行为学

从小鼠造模第一天起，记录小鼠体重和EAE评分情况，以用于评价小鼠发病和恢复情况。

(4)组织病理染色

给药七天后，各组分别取一只小鼠，用200μL 1wt％戊巴比妥钠进行深度麻醉，然后用0.9wt％NaCl心脏灌流去除各器官中的外周血，接着用4wt％多聚甲醛灌流进行固定。取脊髓组织样品用4wt％多聚甲醛4℃固定过夜，经20wt％和30wt％蔗糖脱水。O.C.Tcompound包埋后冰冻切片，切片厚度为20μm，H&E染色分析炎症浸润。

(5)免疫组织化学(IHC)

将(4)中得到的厚度为20μm脊髓腰段冰冻切片，4℃孵育一抗Iba-1 Rabbit mAb(1:100,CST)和Purified Rat CD107b(1：30，BD Pharmingen)过夜，回收一抗后，PBST洗三遍，每遍10分钟，室温孵育二抗HRP-linked anti-rabbit IgG(1:200,CST),HRP-linkedAnti-rat IgG,(1:200,CST)孵育一个半小时，PBST洗三遍，每遍10分钟，滴入DAB显色液，待阳性胞体显色完成后即终止(其中CD107b与苏木精复染)，后进行酒精梯度脱水，二甲苯脱色，中性树胶封片，显微镜下观察(Iba-1为小胶质细胞标记物，CD107b用于标记巨噬细胞)。

(6)免疫荧光(IF)

将(4)中得到的20μ脊髓腰段冰冻切片，4℃孵育一抗MBP Rabbit mAb(1:300，CST)，Anti-CD3 antibody(1:150,abcam)，ATG5 antibody(1:200,rabbit,proteintech)，ATG7 antibod y(1:200,rabbit,proteintech)和ATG12 antibody(1:100,rabbitproteintech)过夜，回收一抗后，PBST洗三遍，每遍10分钟，室温避光孵育二抗AlexaFluro-conjugated anti-rabbit IgG(1：400,Invitrogen)，PBST洗三遍，每遍10分钟(避光)，DAPI封片液封片，荧光显微镜下观察(MBP(Myelin Basic Protein，髓鞘碱性蛋白)用于标记脊髓，CD3用于标记T细胞)。

(7)蛋白免疫印迹(WB)

给药七天后，从三组实验组随机选取多只小鼠，麻醉小鼠，解剖取小鼠腰段脊髓，用预冷RIPA缓冲液(雅酶,中国)加1mM PMSF抑制剂(雅酶,中国)，冰上溶解30分钟。4℃，12000转/分，离心5分钟后，收集上清液。BCA蛋白测定试剂盒(雅酶,中国)测定组织蛋白浓度。后将全蛋白裂解液与蛋白样品上样缓冲液完全混合，煮沸5分钟，得到需要上样的样品。蛋白上样量(30μg)，用12.5％SDS-PAGE凝胶电泳分离(110V,1.5h)。分离的蛋白质转移到PVDF膜上，在室温下用快速蛋白封闭液(雅酶,中国)封闭30分钟。4℃孵育一抗Iba-1RabbitmAb(1:500,CST)、MBP Rabbit mAb(1:1500，CST)、anti-ATG5(1:1000,proteint ech),anti-ATG7(1:600,proteintech)和GAPDH Rabbit mAb(1；1500,CST)过夜。回收一抗后，TBST洗三遍，每遍10分钟.在室温下孵育二抗HRP-linked anti-rabbit IgG(1:2500,CST)一小时。弃二抗，TBST洗三遍，每遍10分钟。

利用SuperSignalTM West Pico plus Stable Peroxide(thermos scientific,USA)对蛋白条带进行可视化，用ImageJ测量蛋白信号进行半定量分析。

(8)Luminex液相悬浮芯片

各组分别取三只小鼠，眼眶取血，室温静置自然凝固20分钟，4℃离心(2000～3000转/分)10分钟，-80℃冻存，寄送至上海华盈生物医药科技有限公司，通过Luminex液相悬浮芯片检测相关细胞因子表达水平。

(9)统计分析

检测结果统计学差异用one way ANOVA test分析,数值表示为Mean±SD,P小于0.5被认为有统计学差异。显著性差异用*表示，其中*P<0.05，**P<0.1，***P<0.001，****P<0.0001。

(9)结果

各组小鼠体重和EAE评分情况如图1、2所示：模型组和治疗组小鼠从第十三天开始发病，表明造模成功，治疗组、模型组和正常组从第十四天起给小鼠进行给药处理(治疗组给药Vesatolimod，模型组和正常组给药溶剂)，给药一段时间后(4天左右)，与模型组相比，治疗组小鼠体重逐渐恢复，EAE评分减少，而模型组小鼠，EAE评分持续增加，体重持续下降，表明Vesatolimod可以改善EAE的疾病严重程度，缓解EAE的疾病进展。

苏木精和伊红(H&E)病理染色用于观察炎性浸润，各组小鼠脊髓切片的H&E染色结果如图3所示：与正常组相比，模型组和治疗组出现炎性浸润；与模型组相比，治疗组浸润程度更轻微，表明Vesatolimod可显著减轻炎性细胞浸润。

髓鞘碱性蛋白(MBP)是一种富集的中枢神经系统(CNS)髓鞘膜蛋白，对神经髓鞘形成起着重要作用。对其进行免疫荧光染色可观察中枢神经系统脱髓鞘情况，各组小鼠脊髓切片的MBP免疫荧光染色结果如图4中A所示：脱髓鞘主要为靠近脊髓前角的白质区域，其不着色或着色较浅；与正常组相比，模型组和治疗组脱髓鞘区域较大；与模型组相比，治疗组脱髓鞘区域显著减少。此外，通过对MBP的半定量分析如图4中B和图4中C所示，模型组MBP蛋白表达量明显少于正常组与治疗组。综合表明Vesatolimod可抑制中枢神经系统脱髓鞘。

各组小鼠脊髓切片的CD3免疫荧光染色结果、CD107b免疫组织化学染色结果如图5、6所示：与正常组相比，模型组、治疗组的白质区域可观察到T细胞和巨噬细胞浸润；与模型组相比，治疗组的白质区域的T细胞和巨噬细胞浸润程度显著减少，仅观察到极少的浸润，说明Vesatolimod可明显抑制T细胞和巨噬细胞的浸润。

各组小鼠脊髓切片的IBA-1免疫组织化学染色结果如图7中A所示：与正常组相比，模型组、治疗组的小胶质细胞出现增生、肥大和/或瘢痕：其中，模型组小胶质细胞大量增生，胞型肥大，且出现小胶质细胞瘢痕，而治疗组小胶质细胞肥大增生减少，且无瘢痕出现，接近正常组小胶质细胞状态。同时如图7中B和图7中C所示，模型组Iba1蛋白表达量显著高于正常组和治疗组。结果表明Vesatolimod可明显抑制小胶质细胞肥大增生。

各组小鼠外周血相关细胞因子(IL-17A是致病Th17细胞主要效应细胞因子，靶向自身免疫性Th17细胞分泌的效应细胞因子IL-17A已被证明是治疗疾病的有效途径。IL-6参与诱导Th17细胞分化，IL-6的缺乏损害了Th17细胞的分化和Th17介导的免疫。IL-12主要由B细胞和巨噬细胞产生，可刺激活化型T细胞增殖，促进Th0细胞向Th1细胞分化，Th1细胞是被普遍认为介导EAE发病的主要致病细胞之一。G-CSF(粒细胞集落刺激因子)可促进粒细胞或抗原提呈细胞(APC)的产生。Eotaxin是一种噬酸粒细胞趋化因子，可能在中枢神经系统发挥生理和病理功能。)表达水平的结果如图8～12所示：与正常组相比，模型组IL-17A，IL-6，IL-12(p40)，G-CSF和Eotaxin的表达水平显著性提高；与模型组相比，治疗组IL-17A，IL-6，IL-12(p40)，G-CSF和Eotaxin的表达水平均下降，尤其，IL-12(p40)和Eotaxin的表达水平显著下降，表明Vesatolimod可降低IL-17A，IL-6，IL-12(p40)，G-CSF和Eotaxin等炎性因子的表达。

自噬在维持细胞稳态中起着重要作用。它的功能之一是降解不必要的细胞器和蛋白质以回收能量或氨基酸以维持细胞生存。自噬消融导致神经变性。多发性硬化症(MS)是中枢神经系统(CNS)的一种自身免疫性疾病，是慢性炎症性脱髓鞘障碍的典型代表。许多研究表明自噬直接参与了MS或实验性自身免疫性脑脊髓炎的进展。发明人通过免疫荧光和蛋白免疫印迹法观察自噬相关蛋白ATG5，ATG7和ATG12的表达水平。如图13所示，在EAE小鼠脊髓白质发现强烈的荧光信号(图13中A)，而治疗组荧光信号明显减弱。此外，蛋白条带和其统计图(图13中B～D)显示，与模型组相比，治疗组自噬相关蛋白ATG5和ATG7表达水平降低。结果表明，EAE小鼠脊髓白质区发现自噬相关蛋白的表达，Vesatolimod的治疗作用可能与抑制自噬相关蛋白的表达水平有关。

综上所述，经Vesatolimod或其衍生物处理后，可显著改善EAE发病症状，减轻脊髓白质炎性细胞浸润和脱髓鞘(提高MBP蛋白表达水平)，减轻T细胞和巨噬细胞的浸润，抑制小胶质细胞肥大增生(抑制Iba1蛋白表达)，并降低血浆中IL-12(p40)和Eotaxin等相关炎性因子的表达水平，抑制自噬(抑制自噬相关蛋白的表达)，可以达到预防和/或治疗多发性硬化症等中枢神经系统疾病的效果。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.Vesatolimod或其衍生物在制备药物中的应用；

所述药物具有(a1)～(a11)中至少一种功能：

(a1)预防和/或治疗中枢神经系统疾病；

(a2)抑制炎性细胞浸润；

(a3)抑制中枢神经系统脱髓鞘；

(a4)抑制T细胞浸润；

(a5)抑制巨噬细胞浸润；

(a6)抑制小胶质细胞肥大增生；

(a7)抑制炎性因子表达；

(a8)提高MBP蛋白表达；

(a9)抑制Iba1蛋白表达；

(a10)抑制自噬；

(a11)抑制自噬相关蛋白表达。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述中枢神经系统疾病包含多发性硬化、视神经脊髓炎、急性散播性脑脊髓炎、同心圆硬化中的至少一种；进一步包含多发性硬化、视神经脊髓炎、急性散播性脑脊髓炎中的至少一种；更进一步包含多发性硬化症。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：

所述炎性因子包含IL-17A、IL-6、IL-12、IL-1β、G-CSF、Eotaxin、TNF-α、IL-10、IL-23、MCP-1、RANTES、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、GM-CSF中的至少一种；

优选地，所述自噬相关蛋白包含ATG5、ATG7、ATG12中的至少一种。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的应用，其特征在于：

所述衍生物包含Vesatolimod在药学上可以接受的盐、酯、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体和前药。

5.根据权利要求1～3中任一项所述的应用，其特征在于：

所述药物还包含一种或多种药学上可接受的辅料。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

所述辅料包含缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、润滑剂中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：

所述药物的剂型包含固体制剂、液体制剂、半固体制剂中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：

所述固体制剂包含片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂中的至少一种。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：

所述液体制剂包含注射剂。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：

所述半固体制剂包含软膏剂、霜剂中的至少一种。

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