EA014070B1

EA014070B1 - Применение растительной композиции для лечения воспалительных нарушений

Info

Publication number: EA014070B1
Application number: EA200800850A
Authority: EA
Inventors: Виджей Чаухан; Ашиш СУТХАР; Дхананджай Сапре; Свати Бал-Тембе; Ашок Кумар Гангопадхяй; Аша Кулкарни-Алмеида; Сапна Хасит Парик
Original assignee: Пирамал Лайф Сайнсиз Лимитед
Priority date: 2005-09-30
Filing date: 2006-09-28
Publication date: 2010-08-30
Also published as: EP1931366B1; AU2006296197A2; AU2006296197A1; MA29890B1; AU2006296197B2; US7635494B2; HK1112418A1; WO2007036900A2; CA2624049C; JP2009510051A; US20080254157A1; CA2624049A1; US20090269427A1; US8206756B2; JP5331962B2; EA200800850A1; EP1931366A2; PL1931366T3; WO2007036900A3; GEP20115332B

Abstract

Данное изобретение касается применения растительной композиции для лечения воспалительного нарушения, опосредованного фактором некроза опухоли-α (TNF-α ) и интерлейкинами (IL-1, IL-6, IL-8), включающей экстракт цветочных и плодовых головок растения Sphaeranthus indicus. Экстракт Sphaeranthus indicus содержит соединение 3а-гидрокси-5а,9-диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9b-октагидро-3Н-нафто[1,2-b]фуран-2-он (7-гидрокси-4,11(13)-эудесмадиен-12,6-олид) (соединение 1) как биоактивный маркер. Данное изобретение также касается применения композиции для лечения воспалительного нарушения, опосредованного фактором некроза опухоли-α (TNF-α) и интерлейкинами (IL-1, IL-6, IL-8), включающей 3а-гидрокси-5а,9-диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9b-октагидро-3Н-нафто[1,2-b]фуран-2-он (соединение 1) как активный ингредиент. Данное изобретение также касается способа лечения указанного воспалительного нарушения, который включает введение субъекту композиции, включающей терапевтически эффективное количество экстракта цветочных и плодовых головок растения Sphaeranthus indicus в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемых носителей. Данное изобретение также касается способа лечения указанного воспалительного нарушения, который включает введение субъекту композиции, включающей терапевтически эффективное количество 3а-гидрокси-5а,9-диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9b-октагидро-3Н-нафто[1,2-b]фуран-2-он (соединение 1) в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемых носителей.

Description

Область данного изобретения

Данное изобретение касается новой растительной композиции, включающей экстракт цветочных и плодовых головок растения 8рйаегап1йи8 ίηάίοιίδ. Данное изобретение дополнительно касается растительной композиции, содержащей экстракт, полученный из цветочных и плодовых головок ЗрйаегапШик шбюи8, включающий соединение 3а-гидрокси-5а,9-диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро-3Ннафто[1,2-Ь]фуран-2-он (7-гидрокси-4,11(13)-эудесмадиен-12,6-олид) (соединение 1) как биоактивный маркер и необязательно другой активный(ые) компонент(ы), для эффективного лечения воспалительных нарушений. Данное изобретение также касается фармацевтической композиции, включающей 3 агидрокси-5а,9-диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро-3Н-нафто[1,2-Ь]фуран-2-он (соединение 1) как активный ингредиент и фармацевтически приемлемые носители, для применения в лечении воспалительных нарушений. Данное изобретение также касается способа получения композиций. Композиции по данному изобретению адаптированы для лечения воспалительных нарушений. Данное изобретение также касается ингибиторной активности композиций по отношению к фактору некроза опухоли-α (ΤΝΡ-α) и интерлейкину (1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-8). Данное изобретение дополнительно касается ингибирования композициями экспрессии молекулы межклеточной адгезии 1 (1САМ-1), молекулы адгезии васкулярных клеток 1 (УСАМ-1) и Е-селектина.

Данное изобретение также раскрывает способы введения композиций для лечения воспалительных нарушений. Необязательно экстракт или композицию, включающую указанный экстракт, или композицию, включающую соединение 1, можно применять в комбинации по меньшей мере с одним другим противовоспалительным агентом.

Предпосылки данного изобретения

Воспаление играет фундаментальную роль в иммунной защите и прогрессировании болезней, опосредованных иммунитетом. Воспалительный ответ инициируется в ответ на повреждение (например, травма, ишемия и чужеродные частицы) и инфекцию (например, бактериальная или вирусная инфекция) множеством путей, включая химические медиаторы (например, цитокины и простагландины) и воспалительные клетки (например, лейкоциты). Он характеризуется усилением кровотока к ткани, вызывая пирексию, эритему, уплотнение и боль.

Чувствительное хорошо сбалансированное взаимодействие между гуморальными и клеточными иммунными элементами в воспалительном ответе позволяет элиминировать вредоносные агенты и инициировать восстановление поврежденной ткани. Если это чувствительно сбалансированное взаимодействие разрушено, воспалительный ответ может привести к значительному повреждению нормальной ткани и может быть более вредоносным, чем изначальное повреждение, которое инициирует реакцию. В таких случаях нерегулируемых воспалительных ответов необходимо клиническое вмешательство для предотвращения повреждения ткани и дисфункции органа. Болезни, такие как ревматоидный артрит, остеоартрит, болезнь Крона, астма, аллергии, синдром септического шока, атеросклероз, болезнь воспаления кишечника, среди других клинических состояний характеризуются хроническим воспалением.

Цитокины, особенно 1Ь-1 β, 1Ь-6, 1Ь-8 и ΤΝΡ-α, играют важную роль в воспалительном процессе.

ΤΝΡ-α, плеотропный цитокин, продуцируется, главным образом, макрофагами, но может также продуцироваться другими типами клеток. ΤΝΡ-α демонстрирует благоприятную, а также патологическую активности. Он обладает и эффектами, стимулирующими рост, и способностями, ингибирующими рост, помимо того, что является саморегулирующимся. Благоприятные функции ΤΝΡ-α включают поддержание гомеостаза регуляцией циркадного ритма организма, установкой иммунного ответа на бактериальные, вирусные, грибковые и паразитарные инфекции, заменой или реконструкцией поврежденной ткани путем стимулирования роста фибробласта и, как предполагает название, убивая определенные опухоли.

Хотя ΤΝΡ-α играет критическую роль во врожденных и приобретенных иммунных ответах, неадекватное продуцирование ΤΝΡ-α может произвести патологические изменения, приводящие к хроническому воспалению и повреждению ткани. Показали, что ΤΝΡ-α играет критическую роль в патогенезе многих хронических воспалительных болезней, таких как болезнь воспаления кишечника, ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит, псориазный артрит, остеоартрит, рефракторный ревматоидный артрит, хронический неревматоидный артрит, остеопороз/резорбция кости, коронарная болезнь сердца, васкулит, язвенный колит, псориаз, синдром расстройства дыхания у взрослых, диабет, нарушения гиперчувствительности кожи замедленного типа и болезнь Альцгеймера. Интерлейкин-1 (1Ь-1) является важной частью системы врожденного иммунитета, который регулирует функции адаптивной иммунной системы. Баланс между 1Ь-1 и антагонистом рецептора 1Ь-1 (1Ь-1га) в локальных тканях влияет на возможное развитие воспалительной болезни и проистекающее структуральное повреждение. В присутствии чрезмерного количества 1Ь-1 воспалительные и аутоиммунные нарушения могут развиваться в суставах, легких, желудочно-кишечном тракте, центральной нервной системе (ЦНС) или кровеносных сосудах.

Среди различных воспалительных нарушений ревматоидный артрит (РА) является аутоиммунным нарушением. РА представляет собой хроническую, системную, воспалительную болезнь сустава неиз

- 1 014070 вестной этиологии. При РА обычно тонкая синовиальная выстилка суставов заменяется воспалительной, высоко васкуляризованной, инвазивной фиброколлагеназной тканью (паннусом), которая разрушает и хрящ, и кость. Зоны, которые могут быть затронуты, включают суставы рук, запястья, шею, челюсть, локти, колено, ступню и лодыжки. Разрушение хряща при РА связаны с нарушенной экспрессией цитокинов и фактора роста в пораженных суставах.

Двумя клинически важными цитокинами, высвобождаемыми в синовиальную оболочку, являются Σ0-1β и ΤΝΕ-α. ΤΝΕ-α может активировать свою собственную экспрессию, а также облегчать экспрессию других генов, вовлеченных в РА, включая ΣΟ-1 β, Юб, 1Ь-8, циклооксигеназу-2 (СОХ-2), индуцируемую синтетазу оксида азота (ίΝΟδ), молекулу межклеточной адгезии 1 (1САМ-1), молекулу адгезии васкулярных клеток 1 (УСАМ-1) и Е-селектин. Этот тип положительной системы регулирования может усилить и сохранить локальные воспалительные ответы. Поэтому неадекватность или надэкспрессия ΤΝΕ-α приводит к координированному усилению экспрессии многих генов, чьи продукты опосредуют воспалительный и иммунный ответы и, таким образом, приводят к клиническим проявлениям РА.

Рекрутмент и ретенция лейкоцитов является критическим событием в патогенезе всех хронических воспалительных нарушений, включая РА. Более того, адгезия циркулирующих лейкоцитов, особенно моноцитов, для васкулярного эндотелия также является критическим событием в развитии атеросклероза. Этот процесс зависит от взаимодействия между адгезийными молекулами, экспрессированными на поверхности эндотелиальных клеток, таких как 1САМ-1, УСАМ-1, Е-селектин, и родственных им лигандов на лейкоцитах. Поэтому 1САМ-1, УСАМ-1 и Е-селектин отвечают за рекрутмент воспалительных клеток, таких как нейтрофилы, эозинофилы и Т-лимфоциты, от циркуляции до участка воспаления. Эти адгезийные протеины находятся в норме на низком уровне на поверхности эндотелиальных клеток, но значительно индуцируются различными провоспалительными цитокинами, такими как ΤΝΕ-α.

Самая общая терапия для лечения воспалительных нарушений включает применение нестероидных противовоспалительных лекарственных средств (Ν8ΛΙΌ). например напроксен, диклофенак, ибупрофен, для облегчения симптомов, таких как боль. Однако, несмотря на широко распространенное применение №А1Э, многие индивидуумы не могут переносить дозы, необходимые для лечения нарушения в течение длительного периода времени, поскольку №А1Э, как известно, причиняют эрозии желудка. Кроме того, №А1Э просто лечат симптомы нарушения, а не причину.

Если пациенты не реагируют на №А1Э, применяются другие лекарственные средства, такие как метотрексат, соли золота, Ό-пеницилламин и кортикостероиды. Такие лекарственные средства также обладают существенными токсическими эффектами. Лекарственные средства моноклональных антител, такие как инфликсимаб, этанерсепт и адалимумаб, применяются как противовоспалительные агенты, но имеют недостатки, такие как способ введения (только парентеральный), высокая стоимость, индукция аллергии, активация латентного туберкулеза, повышение риска рака и болезни сердечной недостаточности. Следовательно, существует необходимость в развитии улучшенных и альтернативных лекарственных средств с пониженными побочными эффектами для предотвращения и лечения воспалительных нарушений, вызванных усилением Ю-1 и ΤΝΕ-α. Травы были известны и применялись во всем мире для лечения многих состояний. Имеется свидетельство, что продукты, полученные из растений, обладают потенциальными фармакологическими и терапевтическими эффектами на млекопитающих и имеют тенденцию проявлять менее вредные побочные эффекты, чем синтетические лекарственные средства.

Данное изобретение раскрывает новую растительную композицию, которая содержит экстракт цветочных и плодовых головок растения 8р11аегап11ш5 шбюиз. Композицию можно применять для лечения различных воспалительных нарушений с минимальными побочными эффектами. 8р11аегап11ш5 шбюиз представляет собой общеизвестный сорняк, встречающийся на рисовых полях.

Это растение принадлежит семейству АЫегасеае, а в произведениях Аюрведы известно как шайаιηιιπάί или догакйшипбт Растение, растущее по всей Индии, представляет собой разветвленное травянистое растение с пурпурными цветками. Его применяют при нарушениях печени и желудка. Растение применяют в народной медицине как средство при различных заболеваниях, включая дизентерию, боль в матке и влагалище, болезнях груди, при очистке и обогащении крови, инфекциях мочевыводящих путей, заживлении ран и некоторых других болезнях.

Полирастительная формуляция К.У-08, содержащая ЗрйаегапНиз шбкиз, разработана для противодействия иммунодефицитным нарушениям (Ιηάίηη 1оита1 ок Рйагшасо1оду, 33, 454-55, (2001)).

Сообщили о выделение нового сесквитерпенового гликозида сфаерантанолида из цветков 8р1аегап1111.15 1пб1си8. Выделенное соединение сфаерантанолид проявляло иммуностимулирующую активность (Рйу1осйеш181гу, 29(8), 2573-76, (1990)).

Сообщили об иммуномодулирующей активности метанольного экстракта цветочных головок 8р11аегап11ш5 шбюиз (Агз. РйагшасеиНса 45:3; 281 -91, (2004)).

Сообщают, что водный экстракт, полученный из корней 8р11аегап11ш5 шбюиз, являлся умеренно активным в подавлении РгорюшЬас1егшш аспез, индуцируя образование ΤΝΕ-α и 1Ь-8. 8р11аегап11ш5 шбюиз причинял меньшую, но все еще значительную, супрессию видов, реагирующих с кислородом (Р1 у1ошебюше, 10 (1), 34-38, (2003)).

- 2 014070

Насколько известно, не встречаются сообщения о каком-либо лекарственном средстве, содержащем экстракт цветочных и плодовых головок 8рНаегап11ш5 шбюик для лечения воспалительных нарушений. Для преодоления проблем побочных эффектов существующего направления лечения, таких как индукция аллергии, активация латентного туберкулеза, миелосупрессия, повышение риска рака и болезнь сердечной недостаточности, связанных с известными в данной области композициями, данное изобретение обеспечивает новую растительную композицию, эффективную против воспаления, обладающую ингибиторной активностью против ΤΝΕ-α, интерлейкинов (1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-8) и экспрессии молекулы межклеточной адгезии 1 (1САМ-1), молекулы адгезии васкулярных клеток 1 (УСАМ-1) и Е-селектина. Композиции по данному изобретению можно также применять в комбинации по меньшей мере с одним другим противовоспалительным агентом.

Цели данного изобретения

Цель данного изобретения направлена на обеспечение новой растительной композиции, включающей терапевтически эффективное количество экстракта цветочных и плодовых головок 8р11аегап11ш5 ίη61СИ8 в качестве активного ингредиента вместе с фармацевтически приемлемыми носителями.

Другой целью данного изобретения является обеспечение композиции, включающей терапевтически эффективное количество 3а-гидрокси-5а,9-диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро-3Ннафто[1,2-Ь]фуран-2-она (соединение 1) в качестве активного ингредиента вместе с фармацевтически приемлемыми носителями, для лечения воспалительных нарушений.

Другой дополнительной целью данного изобретения является обеспечение способа получения композиций.

Еще одной дополнительной целью данного изобретения является обеспечение композиции, включающей терапевтически эффективное количество активного ингредиента, выбранного из экстракта 8рНаегап11ш5 шбюик или соединения 1, для лечения нарушений, опосредованных ΤΝΕ-α и интерлейкинами (1Ь-1, 1Ь-6, Ш-8).

Следующей дополнительной целью данного изобретения является обеспечение композиции, включающей терапевтически эффективное количество активного ингредиента, выбранного из экстракта 8рНаегап11ш5 шбюик или соединения 1, для лечения нарушений, опосредованных молекулой межклеточной адгезии 1 (1САМ-1), молекулой адгезии васкулярных клеток 1 (УСАМ-1) и Е-селектином.

Другой целью данного изобретения является обеспечение композиции, включающей терапевтически эффективное количество активного ингредиента, выбранного из экстракта 8рНаегап11ш5 шбюик или соединения 1, для лечения воспалительных нарушений.

Еще одной целью данного изобретения является обеспечение композиции, включающей терапевтически эффективное количество активного ингредиента, выбранного из экстракта 8рНаегап11ш5 шбюик или соединения 1, для лечения воспалительных нарушений, опосредованных ΤΝΕ-α.

Еще одной целью данного изобретения является обеспечение композиции, включающей терапевтически эффективное количество активного ингредиента, выбранного из экстракта 8рНаегап11ш5 шбюик или соединения 1, для лечения воспалительных нарушений, опосредованных интерлейкинами (1Ь-1, 1Ь-6, Ш-8).

Следующей целью данного изобретения является обеспечение композиции, включающей терапевтически эффективное количество активного ингредиента, выбранного из экстракта 8рНаегап11ш5 шбюик или соединения 1, для лечения воспалительных нарушений, опосредованных молекулой межклеточной адгезии 1 (1САМ-1), молекулой адгезии васкулярных клеток 1 (УСАМ-1) и Е-селектином.

Еще одной целью данного изобретения является обеспечение композиции, включающей терапевтически эффективное количество активного ингредиента, выбранного из экстракта 8рНаегап11ш5 шбюик или соединения 1, в комбинации по меньшей мере с одним биоактивным веществом, для получения синергического эффекта.

Следующей целью данного изобретения является обеспечение применения указанных композиций отдельно или в комбинации по меньшей мере с одним другим противовоспалительным агентом для лечения воспалительных нарушений, включающих ревматоидный артрит.

Другие цели и дополнительная возможность применимости данного изобретения станут очевидными из следующего детального описания.

Краткое описание данного изобретения

Таким образом, согласно одному аспекту данного изобретения предусмотрена новая растительная композиция, включающая терапевтически эффективное количество экстракта цветочных и плодовых головок 8рНаегап11ш5 шбюик в качестве активного ингредиента вместе с фармацевтически приемлемыми носителями.

Согласно другому аспекту данного изобретения предусмотрена композиция, включающая терапевтически эффективное количество 3а-гидрокси-5а,9-диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро-3Ннафто[1,2-Ь]фуран-2-она (соединение 1) в качестве активного ингредиента вместе с фармацевтически приемлемыми носителями, для лечения воспалительных нарушений.

Согласно дополнительному аспекту данного изобретения предусмотрен способ получения композиций.

- 3 014070

Согласно другому дополнительному аспекту данного изобретения предусмотрена композиция, включающая терапевтически эффективное количество активного ингредиента, выбранного из экстракта 8р11аегап11ш8 тбюиз или соединения 1, для лечения нарушений, опосредованных ΤΝΕ-α и интерлейкинами (1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-8).

Согласно следующему дополнительному аспекту данного изобретения предусмотрена композиция, включающая терапевтически эффективное количество активного ингредиента, выбранного из экстракта ЗрйаегапШиз шбюиз или соединения 1, для лечения нарушений, опосредованных молекулой межклеточной адгезии 1 (1САМ-1), молекулой адгезии васкулярных клеток 1 (УСАМ-1) и Е-селектином.

Согласно дополнительному аспекту данного изобретения предусмотрена композиция, включающая терапевтически эффективное количество активного ингредиента, выбранного из экстракта 8рНаегап11ш5 шбсиз или соединения 1, для лечения воспалительных нарушений.

Согласно дополнительному аспекту данного изобретения предусмотрена композиция, включающая терапевтически эффективное количество активного ингредиента, выбранного из экстракта 8р11аегап11ш8 ίηάχιΐδ или соединения 1, для лечения воспалительных нарушений, опосредованных ΤΝΕ-α.

Согласно дополнительному аспекту данного изобретения предусмотрена композиция, включающая терапевтически эффективное количество активного ингредиента, выбранного из экстракта 8р11аегап11ш8 ίηάχιΐδ или соединения 1, для лечения воспалительных нарушений, опосредованных интерлейкинами (1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-8).

Согласно дополнительному аспекту данного изобретения предусмотрена композиция, включающая терапевтически эффективное количество активного ингредиента, выбранного из экстракта 8р11аегап11ш8 шбюиз или соединения 1, для лечения воспалительных нарушений, опосредованных молекулой межклеточной адгезии 1 (1САМ-1), молекулой адгезии васкулярных клеток 1 (УСАМ-1) и Е-селектином.

Согласно следующему дополнительному аспекту данного изобретения предусмотрена композиция, включающая терапевтически эффективное количество активного ингредиента, выбранного из экстракта 8рйаегапШиз шбюиз или соединения 1 в комбинации по меньшей мере с одним биоактивным веществом для достижения синергического эффекта.

Согласно другому дополнительному аспекту данного изобретения предусмотрено применение композиций отдельно или в комбинации по меньшей мере с одним другим противовоспалительным агентом для лечения воспалительных нарушений, включающих ревматоидный артрит.

Детальное описание данного изобретения

Следует понимать, что детальное описание и специфические примеры, определяющие примеры осуществления данного изобретения, приведены только для иллюстрации, поскольку различные изменения и модификации в идее и объеме данного изобретения станут очевидными специалисту в данной области. Специалист в данной области на основе описания сможет использовать данное изобретение в его самых широких пределах. Следующие специфические примеры осуществления следует рассматривать только как иллюстративные, а не ограничивающие следующее из описания каким-либо путем.

Если не определено иначе, все технические и научные выражения, применяемые здесь, имеют те же значения, что и общепринятые в области, к которой принадлежит данное изобретение.

Выражение воспалительное нарушение, как применяется здесь, означает болезнь или состояние, характеризующееся хроническим воспалением, включая, но не ограничиваясь, ревматоидный артрит, остеоартрит, ювенильный ревматоидный артрит, псориазный артрит, рефракторный ревматоидный артрит, хронический неревматоидный артрит, остеопороз/резорбцию кости, коронарную болезнь сердца, атеросклероз, васкулит, язвенный колит, псориаз, болезнь Крона, синдром расстройства дыхания у взрослых, нарушение гиперчувствительности кожи замедленного типа, синдром септического шока и болезнь воспаления кишечника.

Выражение фармацевтически приемлемые, как применяется здесь, означает носитель, растворитель, наполнители и/или соли, которые должны быть совместимыми с другими ингредиентами формуляции и не вредным для реципиента.

Выражение фармацевтически приемлемый носитель, как применяется здесь, означает нетоксичное, инертное твердое вещество, полутвердое вещество, растворитель, капсулирующий материал или вспомогательную формуляцию какого-либо типа. Некоторые примеры материалов, которые могут служить фармацевтически приемлемыми носителями, представляют собой сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлозу и ее производные, такие как натрия карбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза и целлюлоза ацетат; солод; желатин; тальк; а также другие нетоксичные совместимые смазывающие агенты, такие как натрия лаурилсульфат и магния стеарат, а также подкрашивающие агенты, агенты высвобождения, покрывающие агенты, подсластители, вкусовые и ароматизирующие агенты; консерванты и антиоксиданты также могут присутствовать в композиции согласно обсуждению разработчика рецептур.

Выражение терапевтически эффективное количество, как применяется здесь, означает количество соединения или композиции (например, экстракта 8р11аегап11ш8 шбюиз), достаточное для значительной индукции положительной модификации в состоянии, требующем регуляции или лечения, но достаточно

- 4 014070 низкое для избежания побочных эффектов (при разумном соотношении пользы к риску), в рамках обоснованного медицинского обсуждения. Терапевтически эффективное количество соединения или композиции будет варьировать в зависимости от конкретного состояния, которое лечат, возраста и физического состояния пациента, серьезности состояния, которое лечат/предупреждают, продолжительности лечения, природы конкурентной терапии, применяемого специфического соединения или композиции, конкретного применяемого фармацевтически приемлемого носителя и подобных факторов. Как применяется здесь, все проценты определяются по весу, если не определено иначе.

Выражение биоактивный маркер применяется здесь для определения характеристики (или фитохимического профиля), которая коррелирует с приемлемой степенью фармацевтической активности.

Максимальная применимая доза представляет собой самое большое количество лекарственного средства, которое взрослый может безопасно принять. Следует отметить, что, как применяется в описании и приложенной формуле, формы единственного числа включают множественное число обозначенного, если из контекста явно не следует иное.

8р11асгап11и.15 ίηάίοιίδ экстракт или экстракт 8р11аегап11и.15 ίηάίοιίδ. упомянутый здесь, означает смесь соединений, присутствующих в растении 8р11аегап11ш5 ίηάίοιίδ. Эти соединения экстрагируют из сухих цветочных и плодовых головок растения с помощью методик экстракции, хорошо известных в данной области (например, применение органических растворителей, таких как низшие спирты, алкильные сложные эфиры, алкильные простые эфиры, алкильные кетоны, хлороформ, простой эфир нефти, гексан, и/или неорганических растворителей, таких как вода). Данный процесс экстракции входящих в состав растительных производных из цветочных и плодовых головок 8р11аегап11ш5 ίηάίοιίδ можно расширить до крупномасштабного получения.

Выражение активный ингредиент, как применяется здесь, означает экстракт 8р11аегап11ш5 ίηЙ1СИ8, или соединение 1, или обогащенный экстракт 8р11аегап11и.15 тЛсик, содержащий смесь двух или более активных соединений.

Экстракт 8р11аегап11ш5 тйюик можно стандартизировать с помощью традиционных методов, таких как высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) или высокоэффективная тонкослойная хроматография (ВЭТСХ).

В примере осуществления данное изобретение касается растительной композиции, включающей стандартизированный экстракт 8р11аегап11ш5 шФсик вместе с фармацевтически приемлемыми носителями.

Биоактивные маркерные соединения можно выделить из экстракта цветочных и плодовых головок 8р11аегап11ш5 шйюик путем очистки на определяющей биоактивность колоночной хроматографии и препаративной ВЭЖХ. Соединения можно охарактеризовать анализом данных спектра.

Растительная композиция по данному изобретению содержит экстракт цветочных и плодовых головок 8р11аегап11и.15 шйкик, включая 2-9% 3а-гидрокси-5а,9-диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро3Н-нафто[1,2-Ь]фуран-2-она (соединение 1) как биоактивный маркер и необязательно другой активный(ые) агент(ы). В примере осуществления данное изобретение касается композиции, включающей 3агидрокси-5а,9-диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро-3Н-нафто[1,2-Ь]фуран-2-он (соединение 1) как активный ингредиент вместе с фармацевтически приемлемыми носителями. В примере осуществления данное изобретение касается применения указанной композиции, включающей 3а-гидрокси-5а,9диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро-3Н-нафто[1,2-Ь]фуран-2-он (соединение 1), для получения лекарственного средства для лечения воспалительных нарушений. Данное изобретение дополнительно направлено на способ получения композиций, приемлемых для лечения воспалительных нарушений. Стандартизированный экстракт 8р11аегап11ш5 шйюик смешивают с фармацевтически приемлемыми носителями и формулируют в терапевтические дозированные формы. Доза для ежедневного введения должна быть выбрана для удовлетворения желательного эффекта. В примере осуществления указанная растительная композиция, включающая стандартизированный экстракт 8р11аегап11ш5 шФсик, предусмотрена для лечения воспалительных нарушений. В другом примере осуществления по данному изобретению композиция, включающая 3а-гидрокси-5а,9-диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро-3Ннафто[1,2-Ь]фуран-2-он (соединение 1) вместе с фармацевтически приемлемыми носителями, предусмотрена для лечения воспалительных нарушений. Соединение 1 3а-гидрокси-5а,9-диметил-3-метилен3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро-3Н-нафто[1,2-Ь]фуран-2-он выделили из экстракта ЗрйаетапЛик шйюик методикой, известной в родственных областях, и характеризовали с помощью ядерного магнитного резонанса (ЯМР) и масс-спектрометрии. Композиция включает соединение 1 3а-гидрокси-5а,9-диметил-3-метилен3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро-3Н-нафто[1,2-Ь]фуран-2-он, которое также можно получить из других растительных источников или можно получить традиционными синтетическими способами, известными специалисту в данной области. В объем данного изобретения включена фармацевтическая композиция, содержащая соединение 1, которое можно получить из других источников, для применения в лечении воспалительных нарушений. В следующем примере осуществления данного изобретения предусмотрен способ получения фармацевтической композиции, включающей 3а-гидрокси-5а,9-диметил-3-метилен3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро-3Н-нафто[1,2-Ь]фуран-2-он (соединение 1), путем смешивания соединения 1 с одним или более фармацевтически приемлемым носителем и формулирования в терапевтические дози

- 5 014070 рованные формы. Дозу для ежедневного введения нужно выбрать для приемлемого желательного эффекта. Композиции по данному изобретению можно вводить орально, например, в форме пилюль, таблеток, покрытых таблеток, капсул, гранул, эликсиров или сиропа. Экстракт цветочных и плодовых головок 8р11асгап11и.15 шбюик применяют для получения оральных препаратов, содержащих 3-70 вес.% указанного экстракта, который тщательно смешивают с традиционной основой, как будет ниже описано в деталях. Экстракта цветочных и плодовых головок, содержащего 2-9% (вес./вес.) соединения 1 как биоактивного маркера, достаточно для достижения желательных результатов. Соединение 1 3а-гидрокси-5а,9-диметил3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро-3Н-нафто[1,2-Ь]фуран-2-он применяют для получения оральных препаратов, содержащих 3-99 вес.% указанного соединения, которое тщательно смешивают с традиционной основой, как будет ниже описано в деталях. Композиции по данному изобретению можно применять для местного и чрескожного введения. Местные композиции, применяемые в данном изобретении, включают формуляции, приемлемые для местного нанесения на кожу. Композиции можно формулировать в широко варьирующие типы продукта, что включают, но не ограничиваются, лосьоны, кремы, гели, стики, спреи или мази. Экстракт цветочных и плодовых головок 8р11аегаШ1ш5 шбюик применяют для получения местных препаратов, содержащих 1-15 вес.% указанного экстракта, который тщательно смешивают с традиционной основой, как будет ниже описано в деталях. Экстракта цветочных и плодовых головок §рйаегап1йи8 шбюик, содержащего около 2-9% (вес./вес.) соединения 1 как биоактивного маркера, достаточно для достижения желательных результатов.

В примере осуществления композиции предусмотрены для лечения воспалительных нарушений, опосредованных ΤΝΡ-α и интерлейкинами (1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-8).

В примере осуществления композиции предусмотрены для лечения воспалительных нарушений, опосредованных молекулой межклеточной адгезии 1 (1САМ-1), молекулой адгезии васкулярных клеток 1 (УСАМ-1) и Е-селектином.

Актуальные уровни дозировки активного ингредиента, экстракта 8рйаегап!йи8 шбюик или соединения 1, в композициях по данному изобретению могут варьировать для получения количества активного ингредиента, которое эффективно для достижения желательного терапевтического ответа для конкретного пациента, композиции и способа введения.

Выбранный уровень дозировки будет зависеть от ряда факторов, включая активность конкретного применяемого активного ингредиента, экстракта 8р11аегаШ1ш5 шбюик или соединения 1, способ введения, время введения, скорость выведения конкретной используемой композиции, продолжительность лечения, применение в комбинации с другими экстрактами, возраст, пол, вес, состояние, общее состояние здоровья и предшествующая история болезни пациента, нуждающегося в лечении, и подобные факторы, хорошо известные в медицине. В другом примере осуществления данное изобретение касается композиции, включающей активный ингредиент, экстракт 8р11аегаШ1ш5 шбюик или соединение 1, в комбинации по меньшей мере с одним другим растительным экстрактом, проявляющим противовоспалительную активность, для получения синергического эффекта. Это другое растение можно выбрать из растений, таких как Сигсита 1опда и 2шд1Ьет оШс1иа1е.

В следующем примере осуществления композиция дополнительно содержит активный ингредиент, экстракт 8р11аегаШ1ш5 шбюик или соединение 1, в комбинации по меньшей мере с одним биоактивным веществом для получения синергического эффекта. В следующем примере осуществления композиция по данному изобретению, включающая активный ингредиент, экстракт 8р11аегаШ1ш5 шбюик или соединение 1, может необязательно содержать по меньшей мере один другой противовоспалительный агент или может также применяться в комбинации с традиционным противовоспалительным агентом. Противовоспалительный агент можно выбрать из стероидов, таких как преднизолон, гидрокортизон; модифицирующих болезнь противоревматических лекарственных средств (ЭМАКЭ), таких как метотрексат, сульфасалазин; или Ν8ΑΙΌ, таких как напроксен, диклофенак, ибупрофен и подобное. В примере осуществления растительная композиция, включающая активный ингредиент, экстракт 8р11аегаШ1ш5 шбюик или соединение 1, выделенное из экстракта 8р11аегаЩ1и.15 шбюик, предусмотрена для лечения ревматоидного артрита.

Другой пример осуществления по данному изобретению также касается ингибиторной активности на ΤΝΡ-α и интерлейкин (ГС-1, ΙΕ-6, ΙΕ-8) композиций, включающих активный ингредиент.

Следующий пример осуществления по данному изобретению также касается ингибирования экспрессии на клеточной поверхности молекул адгезии, таких как молекула межклеточной адгезии 1 (1САМ-1), молекула адгезии васкулярных клеток 1 (УСАМ-1) и Е-селектин, композициями, включающими активный ингредиент.

Композиции по данному изобретению являются приемлемыми для применения в лечении острой и хронической форм воспалительных нарушений, опосредованных ΤΝΡ-α, интерлейкинами (1Б-1, ΙΕ-6, ΙΕ-8), 1САМ-1, УСАМ-1 и Е-селектином, в частности ревматоидного артрита, ювенильного ревматоидного артрита, псориазного артрита, остеоартрита, рефракторного ревматоидного артрита, хронического неревматоидного артрита, остеопороза/резорбции кости, коронарной болезни сердца, васкулита, язвенного колита, псориаза, синдрома расстройства дыхания у взрослых, болезни Альцгеймера у людей. Так

- 6 014070 же композиции по данному изобретению можно применять для лечения воспаления при болезнях, подобных болезни воспаления кишечника, болезни Крона, синдрома септического шока, атеросклероза и различных аутоиммунных болезней среди других клинических состояний. Данное изобретение также касается способа лечения воспалительных нарушений, включающего введение композиций селективно оральным путем, местным нанесением, чрескожным нанесением.

Следующие примеры иллюстрируют, но не ограничивают, объем данного изобретения. Специалисту в данной области будет понятно, что данное обсуждение представляет собой только типичные примеры осуществления, не предназначенные для ограничения более широких аспектов данного изобретения, которые являются примером осуществления в типичном понимании.

Пример 1. Приготовление метанольного экстракта 8рйаегап1йи8 шбюи8.

Сухие цветочные и плодовые головки 8рйаегап11ш8 шбюи8 (200 г) измельчили. Порошковый материал экстрагировали с помощью метанола (2,5 л) взбалтыванием при 60°С на протяжении 3 ч. Экстракт отфильтровали под вакуумом. Этот процесс экстракции повторили еще два раза. Экстракты объединили и выпарили. Выход: 23,29 г (11,65% вес./вес.). Выяснили, что экстракт примера 1 содержит 6% соединения 1 (описанного в примере 4), как оценили с помощью ВЭТСХ.

Пример 2. Приготовление этилацетатного экстракта 8рйаегап1йи5 шбюи8.

Сухие цветочные и плодовые головки 8рйаегап11ш8 шбюи8 (350 г) измельчили. Порошковый материал экстрагировали с помощью этилацетата (3 л) взбалтыванием при 60°С на протяжении 3 ч. Экстракт отфильтровали под вакуумом. Этот процесс экстракции повторили еще два раза. Экстракты объединили и выпарили. Выход: 19 г (9,5% вес./вес.).

Пример 3. Приготовление водного экстракта 8рйаегап!йи8 шбюи8.

Сухие цветочные и плодовые головки 8рйаегап11ш8 шбюи8 (200 г) измельчили. Порошковый материал экстрагировали с помощью воды (1,2 л) взбалтыванием при 80-90°С на протяжении 3 ч. Экстракт отфильтровали под вакуумом. Этот процесс экстракции повторили. Экстракты объединили и выпарили для удаления воды. Далее неочищенный экстракт высушили сушкой вымораживанием. Выход: 21 г (10,5% вес./вес.).

Пример 4. Выделение 3а-гидрокси-5а,9-диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро-3Ннафто[1,2-Ь]фуран-2-она (соединение 1).

Метанольный экстракт (32 г), приготовленный способом, описанным в примере 1, очистили колоночной хроматографией (силикагель, метанол в хлороформе). Окончательную очистку выполнили препаративной ВЭЖХ (колонка силикагеля, гексан:изопропанол, 95:5) для получения указанного соединения. 1Н ЯМР (СЭС1₃, 500 ΜΗζ): 51,085 (3Н, СН₃), 4,997 (1Н, §), 5,801 (1Н, 8), 6,270 (1Н, 8); МС: т/е (Е8) 248 (М').

Соединение охарактеризовали сравнением полученных данных спектра с известными в литературе (Ιηάίηη 1оита1 οί С1ет18!гу, νοί. 25В, 233-238, (1986); 1. Сйет. 8ос. Регкш Тгап8. 1: (2), 157-160, (1988); ί. Сйет. Ке8еагсй (Μ), 0501-0509, 1989).

Фармакологические результаты

Эффективность данных растительных экстрактов, соединений, выделенных очисткой экстракта, и формуляций по ингибированию активности ΤΝΡ-α и интерлейкинов (1Ь-1, 1Ь-6 и 1Ь-8) определяли рядом фармакологических исследований, хорошо известных в данной области и описанных ниже. Ιη νίίτο обследование для идентификации ингибиторов ΤΝΡ-α.

Пример 5. Первичное обследование - мононуклеарные клетки периферийной крови человека (1РВМС).

ΤΝΡ-α, продуцируемые липополисахаридами (ЬР8) в 1РВМС, измерили согласно способу, описанному 1ап8ку Ь. еί а1. (Рйу8ю1. Ве8. 52: 593-598, (2003)). Кровь отбирали у здоровых доноров в пробирки с вакуумом (ΒΌ вакутейнер) с калия ΕΌΤΑ (этилендиаминтетрауксусная кислота). РВМС выделили с помощью градиентного центрифугирования в растворе Н|81орас.|ие-1077 (81§та). Выделенные РВМС суспендировали в культуральной среде ВРМ1 (С1Ьсо ВРЬ, Ра81еу, Великобритания), содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки (РВ8) (Нус1опе, Шай, США), 100 Единиц/мл пенициллина (8фта Сйеттса1 Со. 8ί. Ьош8, МО) и 100 мкг/мл стрептомицина (8щта Сйетюа1 Со. 8ί. Ьош8, МО). Концентрацию клеток отрегулировали до 1х 10⁶ клеток/мл. Жизнеспособность, как определено удалением красителя трипанового синего, составляла равномерно >98%. Клеточную суспензию (100 мкл) добавили в лунки 96-лункового культурального планшета. После посева клеток 79 мкл культуральной среды и 1 мкл восьми различных концентраций анализируемых образцов (окончательная концентрация 0,03, 0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30, 100 мкг/мл), растворенных в ΌΜ8Ο (диметилсульфоксид, 81дта, МО, США), добавили к клеткам. Окончательную концентрацию ΌΜ8Ο довели до 0,5%. Растворитель (0,5% ΌΜ8Ο) использовали как контроль. Ролипрам (100, 300 мкМ) использовали как стандарт. Планшеты инкубировали 30 мин при 37°С в атмосфере 5% СО₂. В заключение добавили 20 мкл (10 мкг/мл) на лунку ЬР8, (Е8сйетсйта сой 0127:В8, 8фта Сйеттса1 Со., 8ί. Ьош8, МО) до окончательной концентрации 1 мкг/мл. Планшеты инкубировали при 37°С 5 ч в атмосфере 5% СО2. Для оценивания цитотоксического эффекта растительных экстрактов анализ клеточной жизнеспособности выполняли с помощью реагента ΜΤ8 (3-(4,5-диметил

- 7 014070 тиазол-2-ил)-5-(3-карбоксиметоксифенил)-2-(4-сульфонил)-2Н-тетразолиум) после 5 ч инкубации. Супернатанты собрали и исследовали по ΤΝΕ-α с помощью ЕЬ18А (твердофазный иммуноферментный анализ), как описано производителем (ΟρΐίΕΙΑ ЕЬ18А 5С15. ΒΌ Вю5С1Спес5. Рйагтшдеи). Регистрировали процент ингибирования. Оценивали процент цитотоксичности анализируемых образцов по сравнению с контролем.

Результаты приведены в табл. 1.

Таблица 1

Ингибирование ΤΝΕ-α в мононуклеарных клетках периферической крови человека

Образец	Концентрация (мкг/мл)	% ингибирования ΤΝΓ	% токсичности за 5 часов
Экстракт примера 1	0,1	0,0	0
	1	14,0	0
	10	96,0	7
	100	97,0	0
Экстракт примера 2	0,1	0,0	20
	1	34,0	13
	10	97,0	22
	100	97,0	8
Экстракт примера 3	0,1	0,0	0
	1	0,0	11
	10	4,0	0
	100	96,0	0
Ролипрам (мкМ)	100 300	84,0 90,0	2 21

Пример 6. Эффект на провоспалительные цитокины. высвобождаемые стимулируемыми ЬР8 ЬРВМС.

Эффект растительного экстракта на провоспалительные цитокины: ΤΝΕ-α. интерлейкин-ΐβ (ТС-1 β). интерлейкин-6 (1Ь-6) и интерлейкин-8 (1Ь-8) измерили с помощью образования супернатантов в первичном исследовании. Уровни этих цитокинов оценили с помощью ЕЫ8А. как описано производителем (ΟρΐίΕΙΑ ЕЬ18А 5еК ΒΌ Вю8С1еиее8. Рйагттдеи). Значение 50% ингибиторной концентрации (1С₅₀) рассчитали методом нелинейной регрессии с помощью программного обеспечения СгарйРаб (Рпкт 3.03).

Таблица 2

Эффект экстракта примера 1 на провоспалительные цитокины

Серийный номер	Провоспалительные цитокины	Экстракт примера 1, 1С₅₀ мкг/мл, (ЪРВМС)
01	ΤΝΕ-α	5,1
02	Ή-Ιβ	4,9
03	1Ь-6	26,8
04	1Ь-8	31,0

Заключение: выявили ингибирование экстрактом примера 1 провоспалительных цитокинов (ΤΝΕ-α. ТС-1 β. 1Ь-6 и 1Ь-8). высвобождаемых стимулируемыми ЬР8 11РВМС.

Пример 7. Эффект соединения 1 на провоспалительные цитокины. высвобождаемые стимулируемыми ЬР8 11РВМС.

Соединение 1 получили с помощью методики примера 4. Оценивание биоактивности выполнили по методике примера 6. Эффект соединения 1 на провоспалительные цитокины: ΤΝΕ-α. интерлейкин-1в (1И-1 β). интерлейкин-6 (1Ь-6) и интерлейкин-8 (1Ь-8). измерили с помощью образования супернатантов в первичном исследовании. Уровни этих цитокинов оценили с помощью ЕЫ8А. как описано производителем (ОрОЕ1А ЕЬ18А 5еК ΒΌ Вюкыеисек. Рйагтшдеи). Значения 50% ингибиторной концентрации (1С₅₀) рассчитали методом нелинейной регрессии с помощью программного обеспечения СгарйРаб (Рпкт 3.03). Результаты приведены в табл. 3.

- 8 014070

Таблица 3

Эффект соединения 1 на провоспалительные цитокины

Серийный номер	Провоспалительные цитокины	Соединение 1,1С_;о мкМ, (ЬРВМС)
01	ΤΝΡ-α	0,7
02	Ш-Ιβ	0,4
03	1И-6	1,6
04	1Ь-8	8,9

Заключение: выявили ингибирование соединением 1 провоспалительных цитокинов (ΤΝΡ-α, ΙΤ-1β, 1Ь-б и 1Ь-8), высвобождаемых стимулируемыми ЬР8 1РВМС.

Пример 8. Эффект на провоспалительные цитокины, образованные синовиальными клетками, полученными от пациента с РА.

Образование цитокинов синовиальными клетками, полученными от пациента с ревматоидным артритом (РА), перенесшего хирургическое замещение на колене, измерили согласно способу, описанному Вгеппап, Р.М. с1 а1. (Т11С Ьапсс!., 1и1у, 29: 244-247, (1989)). Ткань синовиальной мембраны поместили в ЭМЕМ (среда Игла, модифицированная Дюльбекко) (С1Ьсо), содержащую 10% РВ8, 100 Единиц/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина, 4 мг/мл коллагеназы типа I (Аог11ип§1оп). 1,5 мкг/мл ДНКазы типа I (81дта) и 15 Единиц/мл гепарина, и инкубировали при 37°С 3 ч. После инкубации погруженную ткань отфильтровали через 70-мкм мембрану, а клетки промыли 3 раза в полной среде (ИМЕМ с 10% РВ8). Синовиальные клетки культивировали при 1 х 10^б клеток/мл в присутствии/отсутствии анализируемого образца в течение 10 ч. Супернатанты собрали центрифугированием, а уровни цитокинов (ΤΝΡ-α, 1Ь-1 β, 1Ь-б, 1Ь-8) измерили с помощью ЕЬ18А. Для оценивания цитотоксического эффекта растительных экстрактов анализ клеточной жизнеспособности выполняли с помощью реагента МТ8. Значение 50% ингибиторной концентрации (1С₅₀) рассчитали методом нелинейной регрессии с помощью программного обеспечения СгарНРак (Рпкт 3.03).

Заключение: выявили ингибирование экстрактом примера 1 провоспалительных цитокинов (ΤΝΡ-α, 1Ь-1 β, 1Ь-б и 1Ь-8), продуцируемых синовиальными клетками, полученными от пациента с РА.

Пример 9. Эффект соединения 1 на провоспалительные цитокины, продуцируемые синовиальными клетками, полученными от пациента с РА.

Эффект соединения 1 на провоспалительные цитокины, продуцируемые синовиальными клетками, полученными от пациента с РА, изучали по соединению 1, как описано методикой примера 8.

Результаты приведены в табл. 4.

Таблица 4

Эффект соединения 1 на провоспалительные цитокины, продуцируемые синовиальными клетками

Серийный номер	Провоспалительные цитокины	Соединение 1, 1С₅₀ (мкМ), синовиальные клетки
01	ΤΝΡ-α	0,8
03	1Ь-6	1,4
04	1Ь-8	10,9

Заключение: выявили ингибирование соединением 1 провоспалительных цитокинов (ΤΝΡ-α, 1Ь-б и 1Ь-8), продуцируемых синовиальными клетками, полученными от пациента с РА.

Пример 10. Клеточный ЕЬ18А для экспрессии адгезийных молекул.

Исследование разработали на основе ссылки на Τ^аηкρ1аηΐаΐ^οη, νοί. б3(5), 759-7б4, 1997 с модификациями.

Клеточная культура и реагенты.

Эндотелиальные клетки пупочной вены человека (НИУЕС) получили от Саксакс Вю1ощск и выдерживали в М200 (Саксакс Вю1од1ск, Роткапк, Ог), дополненной ростовой добавкой с низким содержанием сыворотки (Ь8С8) при 37°С в инкубаторе с 5% СО₂. Клетки И937 (АТСС, Мапаккак, УА) выращивали на среде РРМ1 1б40, дополненной 10% РВ8 (Нус1опс, Ьодап, ϋΤ). Рекомбинантный человеческий ΤΝΡ-α, антитела к УСАМ-1, 1САМ-1, Е-селектину получили от Κ&Ό 8ук1стк, а ЬР8 получили от 8щта (81. Ьошк, МО).

Клеточный ЕЫ8А для экспрессии адгезийных молекул.

НИУЕС высеяли при 7х10⁵ клеток/лунка в 9б-луночные планшеты, покрытые фибронектином. Клетки стимулировали ΤΝΡ-α (10 нг/мл) или ЬР8 (1 мкг/мл) через 30 мин после добавления анализируе

- 9 014070 мого соединения. После стимуляции клетки (Е-селектин и 1САМ-1) фиксировали параформальдегидом в фосфатном буферном растворе (РВ8). Неспецифическое связывание блокировали 2% бычьим сывороточным альбумином (В8А) в фосфатном буферном растворе (РВ8) в течение 1 ч, а клетки инкубировали с первичным антителом в течение 2 ч. Для определения УСАМ-1 клетки блокировали, инкубировали с первичным антителом на протяжении ночи, а затем фиксировали. Клетки промыли 0,1% В8А в РВ8 и инкубировали с конъюгированным с пероксидазой антителом (АЬ) к мышиному иммуноглобулину С (1дС), добавленным в течение 90 мин. После семикратного промывания добавили 3,3'5,5'-тетраметилбензидиновый жидкий субстрат (ТМВ субстрат) и определяли оптическую плотность каждой лунки при 450 нм с помощью считывающего устройства микротитровального планшета (8рес1гатах, Мо1еси1аг Эе\зсс5. СА). ВАУ 11-7082 [(Е)-3-(4-метилфенилсульфонил)-2-пропеннитрил] использовали как стандарт, а ΌΜ8Θ как контроль растворителя. Оценивали процент ингибирования анализируемого образца по сравнению с контролем. Значение 50% ингибирующей концентрации (1С₅₀) для каждого образца по сравнению с контролем определяли методом нелинейной регрессии. Результаты приведены в табл. 5.

Таблица 5

Клеточный ЕБ18А для экспрессии адгезийных молекул для экстракта примера 1 и соединения 1

	Экстракт примера 1, 1С50 (мкг/мл)	Соединение 1 Κ_ί0 (мкМ)
1САМ-1	7,6	0,52
УСАМ-1	6,4	0,4
Е-селектин	3,5	0,2

Заключение: экстракт примера 1 и соединение 1 в зависимости от дозы снижают ΤΝΕ-α-индуцированную поверхностную экспрессию в эндотелиальных клетках адгезийных молекул, таких как 1САМ-1, УСАМ-1 и Е-селектин.

Пример 11. Адгезия ТНР-1 мононуклеарных клеток к НИУЕС монослоям.

Исследования адгезии выполняли на линии промоноцитных клеток ТНР-1, которая признана как приемлемая модель для моноцитов при исследованиях адгезии в С1гс. Кек., 97, 236-243, 2005 с модификациями. Клетки ТНР-1 дважды промыли средой для мечения (М200 плюс Ь8С8). Клетки ТНР-1 (6х10⁵клеток на мл) пометили 10 мкг/мл ацетоксиметилового эфира бис-карбоксиэтилкарбоксифлюоресцина (флуоресцентная проба, ВСЕСЕ-АМ; 81дта) в течение 30 мин при комнатной температуре. После гашения с 0,1% В8А гранулу ресуспендировали в среде для мечения. Для оценки адгезии с моноцитами НИУЕС монослои обработали ΤΝΕ-α (1 нг/мл) в присутствии или отсутствии различных концентраций анализируемого образца. Среду удалили, промыли, добавили клетки, меченные ТНР-1 в лунки (6х10⁴клеток на лунку), и инкубировали 10 мин при комнатной температуре в темноте. После совместного инкубирования лунки промыли, наполнили лизирующим буфером (0,1% Тритон-Х в 1,5 М Тгщ буфера) и инкубировали 30 мин. Флуоресценцию измерили с помощью считывающего устройства для флуоресценции (Ро1аг81аг Орйта, ВМС БаЫесН) с пиком возбуждения 485 нм и пиком эмиссии 520 нм. Значения являются средними значениями + 8ЕМ (стандартная ошибка среднего значения), представляя данные флуоресценции адгезии. ВАУ 11-7082 [(Е)-3-(4-метилфенилсульфонил)-2-пропеннитрил] использовали как стандарт, а ИМ8О как контроль растворителя. Результаты приведены в табл. 6.

- 10 014070

Таблица 6

Адгезия ТНР-1 мононуклеарных клеток к НИУЕС монослоям для экстракта примера 1 и соединения 1

Серийный номер	Анализируемый образец	Концентрация	Интенсивность флуоресценции	Кратность контроля
01	Экстракт примера 1	1 (мкг/мл)	39768	23
		3 (мкг/мл)	35302	21
		10 (мкг/мл)	13183	6
		30 (мкг/мл)	10236	5
02	Соединение 1	0,1 (мкМ)	33421	13
		0,3 (мкМ)	34024	13
		1 (мкМ)	10195	4
		3 (мкМ)	5728	2
03	ΒΑΥ 11-7082	0,5 (мкМ)	18442	10
		1 (мкМ)	14271	8
04	Нестимулированный ОМ8О контроль		2544	1
	Стимулированный ПМ8О контроль		30791	18

Заключение: экстракт примера 1 и соединение 1 ингибировали стимулированную ΤΝΡ-α адгезию моноцитных ТНР-1 клеток к НИУЕС при 10 мкг/мл и 1 мкМ соответственно. Поскольку эти соединения ингибируют на поверхности клеток экспрессию адгезии молекул на НИУЕС, а также моноцитную адгезию к НИУЕС, таким образом, они могут затруднять миграцию лейкоцитов, что является ключевым событием в хронических воспалительных болезнях, и могли бы быть полезными при ряде воспалительных нарушений.

Ιη νίνο исследования

Пример 12. Высвобождение фактора некроза опухоли (ΤΝΡ)- α, индуцированного липополисахаридами (ЬР8), у мышей ВАИВ/с.

Протокол, описанный Еикиба Т. е1 а1. (Еиг. I. РНагтасоИ 391: 317-320, (2000)), является следующим. Мышей ВАИВ/с распределили на группы по десять в каждой. Анализируемый образец суспендировали в Ъуееп 80 и 0,5% карбоксиметилцеллюлозе (КМЦ), орально (р.о.) вводили мышам. Через один час ЬР8, растворенные в стерильном апирогенном солевом растворе, вводили 1.р. (интраперитониально) при дозе 1 мг/кг. Группа отрицательного контроля получала солевой раствор в виде 1.р. инъекции, тогда как все остальные группы получали ЬР8. Ролипрам (30 мг/кг, р.о.) использовали как стандартное лекарственное средство. Через один час и полчаса под уретановой анестезией (1,5 г/кг, 1.р.) кровь отбирали из абдоминальной артерии с помощью 1-мл шприца, промытого гепарином (500 международных единиц/мл). Гепарин (5 мкл) использовали как антикоагулянт в пробирках с собранной кровью. Плазму отделили центрифугированием при 10000 грт при комнатной температуре, поделили на аликвоты и хранили при -70°С до анализа. Уровни ΤΝΡ-α в образцах крови исследовали с помощью ЕЫ8А и рассчитали процент ингибирования высвобождения ΤΝΡ-α по сравнению с контрольной группой. Результаты приведены в табл. 7.

Таблица 7

Высвобождение фактора некроза опухоли (ΤΝΡ)-α, индуцированного липополисахаридами (ЬР8), у мышей ВАИВ/с для экстракта примера 1 и для соединения 1

Серийный номер	Анализируемый образец	Доза мг/кг	% ингибирования
01	Экстракт примера 1	100	43,21± 14,52
02	Соединение 1	10 30 100	28,69± 13,71 39,98±10,32 87,10±3,67

Заключение: экстракт примера 1 и соединение 1 ингибируют высвобождение ΤΝΡ-α у мышей ВАИВ/с.

- 11 014070

Пример 13. Индуцированный коллагеном артрит (ИКА) у мышей ИВА/И.

Самцов мышей ИВА/11 возрастом 8-10 недель иммунизировали 200 мкг коллагена типа II в виде эмульсии в полном адъюванте Фрейнда внутрикожной инъекцией в основании хвоста. Через двадцать один день мышам ввели бустерную дозу 100 мкг коллагена типа II. Ряд наивных мышей также выдерживали рядом. Начиная с дня 23, мышей оценили на возникновение ревматоидного артрита с помощью суставного индекса в качестве параметра. В исследовании использовали мышей с минимальной оценкой на задней лапе 2. Экстракт примера 1 вводили при дозе 400 т.р.к (миллиграм на килограмм веса тела) оральным путем дважды в день в течение 12 дней. Соединение 1 вводили при дозе 50 т.р.к. и 100 т.р.к. оральным путем дважды в день в течение 12 дней. Энбрел (3 мг/кг) использовали как стандарт и вводили подкожно один раз в день. Ежедневно регистрировали объем лапы и суставной индекс. Данные анализировали по статистической значимости. В конце эксперимента лапы мышей обработали для гистопатологической оценки. Данные снижения толщины лапы и снижение суставного индекса приведены в табл. 8.

Таблица 8

Эффективность экстракта примера 1 и соединения 1 на модели ИКА

Анализируемый образец	Параметры
ИКА
Доза мг/кг	Снижения толщины лапы	Снижение Суставного Индекса
Экстракт	400	Статистически значимое	Статистически значимое
примера 1		по сравнению с контролем при уровне значимости 0,01	по сравнению с контролем при уровне значимости от 0,05 до 0,06
Соединение I	50	Статистически значимое по сравнению с контролем при уровне значимости 0,05	Статистически значимое по сравнению с контролем при уровне значимости 0,05
	100	Статистически значимое по сравнению с контролем при уровне значимости 0,01	Статистически значимое по сравнению с контролем при уровне значимости 0,01

Гистопатологический анализ.

Оценивали благоприятный эффект экстракта примера 1 и соединения 1 на патологию артрита (ИКА) мышей ИВА/И. Микроскопию выполняли после окрашивания синовиальных суставов гематоксилином и эозином, а также сафранином О. Гистопатологический анализ показал, что и экстракт примера 1, и соединение 1 проявляли благоприятные эффекты на снижение разрушения хряща, разрушение кости и синовит по сравнению с группой, обработанной растворителем.

Заключение: и экстракт примера 1, и соединение 1 проявляли благоприятные эффекты на ИКА модели артрита.

Исследования токсичности

Пример 14. Острая оральная токсичность.

Экстракт примера 1 анализировали по острой оральной токсичности на крысах 8ртадие Иа\\1су в соответствии с руководящими принципами, установленными в Списке Υ Закона о лекарственных и косметических средствах, 1940 (Индия).

Экстракт примера 1, суспендированный в 0,5% Тетееи 80 в воде, вводили орально принудительным путем как отдельную дозу группе крыс из пяти самцов и пяти самок с максимально приемлемой дозой 2000 мг/кг веса тела. Животных наблюдали по смертности и признакам интоксикации в течение 14-дневного периода после введения дозы, и также регистрировали вес их тел. В завершении исследования на всех крысах выполнили некропсию.

Заключение: в данном исследовании отдельное оральное введение экстракта примера 1 крысам 8ргадие Иа\\1еу с максимальной приемлемой дозой 2000 мг/кг не вызвало смертность у обработанных крыс.

Выяснили, что средняя летальная доза (ЬИ₅₀) экстракта примера 1 после орального введения в виде отдельной дозы крысам 8ргадие Иа\\1еу. и самцам, и самкам, составила более чем 2000 мг/кг веса тела.

Пример 15. Подострая оральная токсичность.

Изучение подострой оральной токсичности (28 дней) экстракта примера 1 на крысах 8ртадие Иате1еу в соответствии с руководящими принципами, установленными в Списке Υ Закона о лекарственных и косметических средствах, 1940 (Индия).

Группам шести самцов и шести самок крыс 8ртадие ИаМеу вводили ежедневно дозы 0, 250, 500 или

- 12 014070

1000 мг/кг веса тела экстракта примера 1 принудительным оральным путем в течение 28 дней, и на день 29 крыс забили для оценки его токсичности. Крыс обследовали ежедневно на признаки токсичности. Вес тела и потребление пищи для отдельных крыс регистрировали на протяжении периода эксперимента вместе со всеми случаями смертности и признаками ухудшения здоровья. По окончании исследования выполнили лабораторные обследования крови.

Всех животных подвергли полной некропсии и зарегистрировали вес определенных органов. Гистопатологическую оценку выполнили на всех перечисленных протоколом тканях у всех животных контрольных групп и групп высокой дозировки.

Все животные, получавшие экстракт примера 1 при дозах 1000 мг/кг и не более 1000 мг/кг, выжили в течение периода лечения. Не наблюдалось клинических признаков токсичности у какого-либо из обработанных животных. Данные прибавления веса тела и приема пищи не показали никакого неблагоприятного эффекта из-за анализируемого образца при дозах 1000 мг/кг и не более 1000 мг/кг.

Заключение: на основе полученных данных этого исследования не наблюдали никакой уровень неблагоприятного эффекта ^ОАЕЬ) экстракта примера 1 на крысах после орального введения в течение 28 дней не более чем 1000 мг/кг веса тела.

Формуляции

Пример 16. Приготовление капсулы.

Общая методика: ингредиенты 01-05 в определенном количестве взвесили и поместили в приемлемый миксер. Содержимое хорошо смешали, добавили ингредиенты 09, 10 и 11, а смешивание продолжили. К этой смеси добавили ингредиенты 06, 07 и 08 и массу смешивали 30-45 мин. Смесь пропустили сквозь сито 40 меш и использовали для наполнения капсул.

Таблица 9

Капсульная формуляция ЗрйаегапЛиз 1пФси5. Каждая капсула содержит

Серийный номер	Ингредиент	Количество % вес/вес
01	Экстракт примера 1	69,72
02	Натрия метил парабен	0,39
03	Натрия пропил парабен	0,13
04	Бромерол	0,18
05	Натрия бензоат	0,39
06	Тальк	2,61
07	Магния стеарат	1,74
08	Аэросил	0,87
09	Натрия крахмал гликолят	2,18
10	Лактоза	8,72
11	Двухосновный кальция фосфат	13,07

Пример 17. Приготовление таблетки.

Общая методика: ингредиенты 01-05 в определенном количестве взвесили и поместили в приемлемый миксер. Добавили ингредиент 13 и влажную массу хорошо смешали. К этому добавили ингредиенты 09, 10, 11 и 12 и смешивание продолжили до получения гомогенизированной массы. Эту увлажненную массу пропустили сквозь сито 16 меш и влажные гранулы сушили при 70°С±5°С. К полученным гранулам добавили ингредиенты 06, 07 и 08 и массу смешивали 30-45 мин. Затем смесь пропустили сквозь сито 40 меш и прессовали таблетки с помощью приемлемого пуансона.

- 13 014070

Таблица 10

Таблеточная формуляция 8рйаегап1йи5 шбкш. Каждая таблетка содержит

Серийный номер	Ингредиент	Количество % вес/вес
01	Экстракт примера 1	66,53
02	Натрия метил парабен	0,37
03	Натрия пропил парабен	0,12
04	Бромерол	0,17
05	Натрия бензоат	0,37
06	Тальк	2,50
07	Магния стеарат	1,66
08	Аэросил	0,83
09	Натрия крахмал гликолят	2,50
10	Лактоза	8,32
11	Двухосновный кальция фосфат	12,47
12	Крахмал	4,16
13	Изопропанол	ф

*только при грануляции

Пример 18. Приготовление сиропа.

Общая методика: ингредиент 01 взвесили и добавили к нему ингредиент 15 при постоянном перемешивании. К этому добавили отвешенные количества ингредиентов 03, 04, 05, 06, 08, 09, 10, 11, 12 и 14 при постоянном перемешивании до растворения. Ингредиенты 02 и 13 отвесили и растворили в ингредиенте 07. К этому добавили очищенную воду до объема 10 мл. Полученный раствор отфильтровали сквозь фильтр-пресс/нейлоновую ткань.

Таблица 11

Сиропная формуляция 8рйаегап1йи5 тФсик.

Каждые 10 мл сиропа содержат

Серийный номер	Ингредиент	Количество % вес/вес
01	Экстракт примера 1	4
02	Порошок мяты перечной	0,025
03	Мед	0,25
04	Сахар	50
05	Раствор сорбитола 70%	5
06	Жидкая глюкоза	10
07	Пропиленгликоль	5
08	Моногидрат лимонной кислоты	0,5
09	Натрия метил парабен	0,2
10	Натрия пропил парабен	0,02
11	Натрия бензоат	0,2
12	Бронопол	0,02
13	Вкусовая добавка свежей мяты “8”	0,25
14	Краситель жженого сахара	0,75
15	Очищенная вода	До 10 мл

- 14 014070

Пример 19. Приготовление формуляции крема.

Общая методика: ингредиент 01 взвесили и суспендировали в ингредиенте 17. Расплавили ингредиенты 02-07. Взвесили ингредиенты 08, 09, 10, 11, 13 и 14 и смешали с порцией 18. Ингредиент 12 взвесили, добавили к оставшейся порции ингредиента 18 и смешали с ингредиентами 15 и 16. Содержимое всех этапов смешали при 55°С и гомогенизировали, позволили охладиться и запаковали в приемлемый тюбик.

Таблица 12

Формуляция крема 8рйаегап1йи5 ίηάίοικ

Каждые 100 г крема содержат

Серийный номер	Ингредиент	Количество % вес/вес
01	Экстракт примера 1	05,00
02	Цетостеариловый спирт - 12,0 г	12,00
03	Цетомакрогол-1000	03,00
04	Сорбитана моноолеат	02,00
05	8.Е. глицерол моностеарат	03,00
06	Изопропилмиристат	02,50
07	Стеариновая кислота	02,50
08	Натрия метил парабен	00,40
09	Натрия пропил парабен	00,08
10	Феноксиэтанол	00,52
11	Динатрия ΕϋΤΑ	00,02
12	Карбомер-940	00,75
13	Натрия лаурилсульфат	00,75
14	Симетикон	01,00
15	Триэтаноламин	01,00
16	Пропиленгликоль	05,00
17	Изопропанол	10,00
18	Вода	50,48

Пример 20. Приготовление формуляции геля.

Общая методика: ингредиент 01 взвесили и суспендировали в ингредиенте 06. Ингредиент 04 растворили в ингредиенте 07. Ингредиенты 05 и 08 смешали. Ингредиенты 02 и 03 смешали. Смесь хорошо перемешали и запаковали в приемлемый тюбик.

Таблица 13

Формуляция геля 8рйаегап1йи5 ίηάίοικ

Каждые 100 г геля содержат

Серийный номер	Ингредиент	Количество % вес/вес
01	Экстракт примера 1	05,00
02	Бутилированный гидрокситолуол	00,025
03	Бутилированный гидроксианизол	00,025
04	Карбопол-940	02,95
05	Полиэтиленгликоль-400	30,00
06	Изопропанол	05,00
07	Пропиленгликоль	55,00
08	Сорбитан моноолеат	02,00

- 15 014070

Пример 21. Приготовление формуляции мази.

Общая методика: ингредиенты 02-06 взвесили и расплавили в приемлемом сосуде. К этому добавили ингредиент 01. К смеси добавили ингредиенты 07 и 08. Содержимое хорошо перемешали и запаковали в приемлемый тюбик.

Таблица 14

Формуляция мази БрйаегаиШик тбюик. Каждые 100 г мази содержат

Серийный номер	Ингредиент	Количество % вес/вес
01	Экстракт примера 1	05,00
02	Белый пчелиный воск	15,00
03	Твердый парафин	25,00
04	Микрокристаллический воск	15,00
05	Белый мягкий парафин	30,00
06	Легкий жидкий парафин	09,95
07	Бутилированный гидрокситолуол	0,025
08	Бутилированный гидроксианизол	0,025

Пример 22. Приготовление таблетки.

Общая методика: ингредиенты 01 и 02 взвесили отдельно, просеяли сквозь сито 20 меш и смешали. Ингредиенты 03-07 взвесили и просеяли сквозь сито 40 меш. Ингредиенты 03, 04, 05 и 07 смешали и добавили к смеси ингредиентов 01 и 02. К этой смеси добавили ингредиент 06 и смешали. Полученную смазанную смесь прессовали на приемлемом механическом устройстве.

Таблица 15

Таблеточная формуляция соединения 1. Каждая таблетка содержит

Серийный номер	Ингредиент	Количество % вес/вес
01	Соединение 1	58,33
02	Микрокристаллическая целлюлоза	35,97
03	Тальк	2,50
04	Натрия крахмал гликолят	1,60
05	Коллоидный диоксид кремния	0,80
06	Магния стеарат	0,50
07	Краситель хинолиновый желтый	0,30

Пример 23. Приготовление таблетки.

Общая методика: ингредиенты 01 и 02 взвесили отдельно и просеяли сквозь сито 20 меш. Ингредиент 04 растворили в ингредиент 08 при перемешивании. Полученную смесь гранулировали с помощью связывающего раствора. Влажную массу пропустили сквозь приемлемое сито. Просеянную массу сушили при комнатной температуре (25°С), а затем при около 40°С. Сухую массу просеяли сквозь приемлемое сито. Ингредиенты 03, 05 и 07 отдельно просеяли сквозь сито 40 меш и смешали. Добавили к этой сухой массе и смешали. К этой смеси добавили ингредиент 06 и смазанную смесь прессовали на приемлемом механическом устройстве.

- 16 014070

Таблица 16

Серийный номер	Ингредиент	Количество % вес/вес
01	Соединение 1	61,40
02	Лактозы моногидрат	35,15
03	Натрия кросскармелоза	1,40
04	Поливинилпирролидон	0,85
05	Коллоидный диоксид кремния	0,35
06	Магния стеарат	0,50
07	Краситель хинолиновый желтый	0,35
08	Изопропиловый спирт	Необходимое количество

Пример 24. Приготовление капсулы.

Общая методика: ингредиенты 01 и 02 взвесили отдельно, просеяли сквозь сито 20 меш и смешали. Ингредиент 03 взвесили и просеяли сквозь сито 40 меш. Все ингредиенты смешали и смазали ингредиентом 04. Смесью наполнили пустую твердую желатиновую капсулу с помощью приемлемого механического устройства.

Таблица 17

Формуляция капсулы соединения 1. Каждая капсула содержит

Серийный номер	Ингредиент	Количество % вес/вес
01	Соединение 1	98,59
02	Микрокристаллическая целлюлоза	0,75
03	Коллоидный диоксид кремния	0,47
04	Магния стеарат	0,19

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение композиции для лечения воспалительного нарушения, опосредованного фактором некроза опухоли-α (ΤΝΕ-α) и интерлейкинами (1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-8), причем указанная композиция включает терапевтически эффективное количество экстракта цветочных и плодовых головок растения 8рНаегап11шз 1пб1си8 как активного ингредиента и фармацевтически приемлемые носители.
2. Применение по п.1, где экстракт 8рНаегап11шз шбюиз содержит биоактивный маркер.
3. Применение по п.2, где биоактивный маркер, содержащийся в экстракте 8рйаегап1йиз шбюиз, является 3а-гидрокси-5а,9-диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро-3Н-нафто[1,2-Ь]фуран-2-оном (соединение 1).
4. Применение по п.3, где экстракт ЗрЬаетапШиз шбюиз содержит 2-9% соединения 1.
5. Применение композиции для лечения воспалительного нарушения, опосредованного фактором некроза опухоли-α (ΤΝΕ-α) и интерлейкинами (1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-8), причем указанная композиция включает терапевтически эффективное количество 3а-гидрокси-5а,9-диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9Ьоктагидро-3Н-нафто[1,2-Ь]фуран-2-она (соединение 1) как активного ингредиента и фармацевтически приемлемые носители.
6. Применение по п.1 или 5, где воспалительное нарушение опосредовано молекулой межклеточной адгезии 1 (1САМ-1), молекулой адгезии васкулярных клеток 1 (УСАМ-1) и Е-селектином.
7. Применение по любому из предыдущих пп.1-6, где указанная композиция адаптирована для орального, местного или чрескожного введения субъекту, нуждающемуся в лечении воспалительного нарушения.
8. Применение по п.7, где указанная композиция, адаптированная для орального введения, сформулирована в форме таблетки, капсулы или сиропа.
9. Применение по п.7, где указанная композиция, адаптированная для местного введения, сформулирована в форме крема, геля или мази.
10. Применение по любому из предыдущих пп.1-9, где воспалительное нарушение выбрано из группы, состоящей из болезни воспаления кишечника, ревматоидного артрита, ювенильного ревматоид- 17 014070 ного артрита, псориазного артрита, остеоартрита, рефракторного ревматоидного артрита, хронического неревматоидного артрита, остеопороза/резорбции кости, коронарной болезни сердца, атеросклероза, васкулита, язвенного колита, псориаза, синдрома расстройства дыхания у взрослых, диабета, нарушений гиперчувствительности кожи замедленного типа и болезни Альцгеймера.
11. Применение по любому из предыдущих пп.1-9, где воспалительное нарушение является ревматоидным артритом.
12. Применение по любому из предыдущих пп.1-9, где воспалительное нарушение является болезнью воспаления кишечника.
13. Применение по любому из предыдущих пп.1-9, где воспалительное нарушение является язвенным колитом.
14. Применение по любому из предыдущих пп.1-9, где воспалительное нарушение является атеросклерозом.
15. Способ лечения воспалительного нарушения, опосредованного фактором некроза опухоли-α (ΤΝΕ-α) и интерлейкинами (1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-8), причем указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, композиции, включающей терапевтически эффективное количество экстракта цветочных и плодовых головок растения 8рНаегап11ш5 тбюиз в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемых носителей.
16. Способ лечения воспалительного нарушения, опосредованного фактором некроза опухоли-α (ΤΝΕ-α) и интерлейкинами (1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-8), причем указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, композиции, включающей терапевтически эффективное количество 3 агидрокси-5а,9-диметил-3-метилен-3а,4,5,5а,6,7,8,9Ь-октагидро-3Н-нафто[1,2-Ь]фуран-2-он (соединение 1) в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемых носителей.
17. Способ по п.15 или 16, где воспалительное нарушение опосредовано молекулой межклеточной адгезии 1 (1САМ-1), молекулой адгезии васкулярных клеток 1 (УСАМ-1) и Е-селектином.
18. Способ по любому из предыдущих пп.15-17, где указанная композиция адаптирована для орального, местного или чрескожного введения субъекту, нуждающемуся в лечении воспалительного нарушения.
19. Способ по п.18, где композиция, адаптированная для орального введения, сформулирована в форме таблетки, капсулы или сиропа.
20. Способ по п.18, где композиция, адаптированная для местного введения, сформулирована в форме таблетки, капсулы или сиропа.
21. Способ по любому из предыдущих пп.15-20, где воспалительное нарушение выбрано из группы, состоящей из болезни воспаления кишечника, ревматоидного артрита, ювенильного ревматоидного артрита, псориазного артрита, остеоартрита, рефракторного ревматоидного артрита, хронического неревматоидного артрита, остеопороза/резорбции кости, коронарной болезни сердца, атеросклероза, васкулита, язвенного колита, псориаза, синдрома расстройства дыхания у взрослых, диабета, нарушения гиперчувствительности кожи замедленного типа и болезни Альцгеймера.
22. Способ по любому из предыдущих пп.15-21, где воспалительное нарушение является ревматоидным артритом.
23. Способ по любому из предыдущих пп.15-21, где воспалительное нарушение является болезнью воспаления кишечника.
24. Способ по любому из предыдущих пп.15-20, где воспалительное нарушение является язвенным колитом.
25. Способ по любому из предыдущих пп.15-20, где воспалительное нарушение является атеросклерозом.

Евразийская патентная организация, ЕАПВ

Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2