MX2008004291A - Composicion herbaria para trastornos inflamatorios - Google Patents

Abstract

Esta invención se relaciona con una nueva composición herbaria que contiene un extracto de las cabezas florales y frutales de la planta Sphaeranthus indicus. El extracto de Sphaeranthus indicus contiene un compuesto, 3a-hidroxi-5a,9-dimetil-3-metilen-3a,4,5,5a,6,7,8,9b-octahidro-3H-nafto[l,2-b]furan-2-ona (7-hidroxi-4,11(13)-eudesmadien-12,6-ólido) (compuesto 1), como marcador bioactivo. La invención también se relaciona con una composición que contiene 3a-hidroxi-5a,9-dimetil-3-metilen-3a,4,5,5a,6,7,8,9b- octahidro-3H-nafto [1, 2-b]furan-2-ona (compuesto 1) como ingrediente activo. La invención también se relaciona con métodos de fabricación de las composiciones. La invención también se relaciona con métodos de administración de las composiciones a unindividuo que necesite el tratamiento para un trastorno inflamatorio. La invención también se relaciona con el la actividad inhibitoria del factor de necrosis tumoral a (TNF-a) e interleucinas (IL-1, IL-6, IL-8), mediante las composiciones. La invención se relaciona con la inhibición de la expresión de la molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM-1), la molécula de adhesión celular vascular 1 (VCAM-1) y la E-selectina por medio de las composiciones. De manera opcional, las composiciones contienen al menos un agente antinflamatorio o se pueden usar combinadas con al menos un agente antinflamatorio.

Description

COMPOSICIÓN HERBARIA PARA TRASTORNOS INFLAMATORIOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con una nueva composición herbaria que contiene un extracto de las cabezas florales y frutales de una planta, Sphaeranthus indicus . La presente invención también se relaciona con una composición herbaria que contiene un extracto obtenido de cabezas florales y frutales de la planta Sphaeranthus indicus, que comprende un compuesto, 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3 -metilen-3a, 4, 5, 5a, 6, 7, 8, 9b-octahidro-3H-nafto [1, 2-b] furan-2-ona (7-hidroxi-4 , 11 (13) -eudesmadien-12,6-ólido) (compuesto 1) como marcador bioactivo y opcionalmente otros principios activos para el tratamiento eficaz de trastornos inflamatorios. La presente invención también se relaciona con una composición farmacéutica que contiene 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3-metilen- 3a, 4, 5, 5a, 6, 7, 8, 9b-octahidro-3H-nafto [1, 2-b] furan-2-ona (compuesto 1) como ingrediente activo y vehículos farmacéuticamente aceptables, para usarse en el tratamiento de trastornos inflamatorios. La presente invención también se relaciona con un método de preparación de las composiciones. Las composiciones de la presente invención están adaptadas para el tratamiento de trastornos inflamatorios. La invención también se relaciona con la actividad inhibitoria de las composiciones del factor a de necrosis tumoral (TNF-a) y las interleucinas (IL-1, IL-6, IL-8) . La presente invención también se relaciona con la inhibición de la expresión de la molécula 1 de adhesión intercelular (ICAM-1) , la molécula 1 de adhesión celular vascular (VCAM-1) y E-selectina ejercida por las composiciones . La invención también expone métodos de administración de las composiciones para el tratamiento de trastornos inflamatorios. Opcionalmente, el extracto o composición que contiene el extracto o la composición que contiene el compuesto 1 se pueden usar en combinación con al menos otro agente antinflamatorio.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La inflamación desempeña una función fundamental en las defensas del hospedero y en el avance de una enfermedad mediada por el sistema inmune. La respuesta inflamatoria se inicia como respuesta a lesiones (por ejemplo, traumatismo, isquemia y partículas externas) y a infecciones (por ejemplo, infección bacteriana o viral) ocasionadas por diversos eventos, que incluyen mediadores químicos (por ejemplo, citocinas y prostaglandinas) y células inflamatorias (por ejemplo leucocitos) . Se caracteriza por un mayor flujo sanguíneo al tejido, causando fiebre, eritema, induración y dolor. La interacción delicada y bien equilibrada entre los elementos inmunes humorales y celulares en la respuesta inflamatoria permite la eliminación de agentes perjudiciales y el inicio de la reparación del tejido dañado. Cuando esta interacción sutilmente balanceada se altera, la respuesta inflamatoria puede ocasionar un daño considerable al tejido normal y puede ser más dañina que la lesión original que dio inicio a la reacción. En estos casos de respuestas inflamatorias descontroladas, se necesita la intervención clínica para prevenir la lesión del tejido y la disfunción orgánica. Enfermedades como artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad de Crohn, asma, alergias, síndrome de choque septicémico, ateroesclerosis, enfermedad inflamatoria de los intestinos, entre otros cuadros clínicos, se caracterizan por inflamación crónica. Las citocinas, en especial las IL-lß, IL-6, IL-8 y TNF-a desempeñan una importante función en el proceso inflamatorio. La TNF-a una citosina pleótropa, es producida principalmente por macrófagos, pero también pueden producirla otras células. La TNF-a muestra actividades benéficas y también patológicas. Tiene efectos estimuladores del crecimiento y propiedades inhibidoras del crecimiento, además es autorreguladora. Las funciones benéficas de la TNF-a incluyen el mantenimiento de la homeostasis al regular el ritmo circadiano del cuerpo, generando una respuesta inmune a las infecciones bacterianas, virales, fúngicas y parasitarias, reemplazando o remodelando el tejido lesionado al estimular el crecimiento de fibroblastos y como su nombre lo sugiere, exterminado algunos tumores . Aunque la TNF-a desempeña una función crítica en las respuestas inmunes innatas y adquiridas, la producción inadecuada de TNF-a puede producir cambios patológicos que dan como resultado la inflamación crónica y el daño en los tejidos. La TNF-a ha manifestado una función crucial en la patogénesis de muchas enfermedades inflamatorias crónicas como: enfermedad inflamatoria de los intestinos, artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, artritis psoriásica, osteoartritis, artritis reumatoide refractaria, artritis crónica no reumatoide, osteoporosis/resorción ósea, enfermedad cardiaca coronaria, vasculitis, colitis ulcerativa, psoriasis, síndrome de dificultad respiratoria en adultos, diabetes, trastornos de hipersensibilidad cutánea retardada y enfermedad de Alzheimer. La interleucina-1 (IL-1) es una parte importante del sistema inmune innato, que regula funciones del sistema inmune adaptativo. El balance entre IL-1 y el antagonista del receptor de IL-1 (IL-lra) en tejidos locales influye en el posible desarrollo de una enfermedad inflamatoria y en la lesión estructural resultante. En presencia de un exceso de IL-1, se pueden desarrollar trastornos inflamatorios y autoimunes en articulaciones, pulmones, tracto gastrointestinal, sistema nervioso central (SNC) o vasos sanguíneos . Entre los varios trastornos inflamatorios, la artritis reumatoide (RA) es un trastorno autoinmune . La RA es una enfermedad inflamatoria crónica, sistémica, articular de etiología desconocida. En la RA, el revestimiento sinovial normalmente fino de las articulaciones es reemplazado por un tejido de fibrocolagenasa invasivo e inflamatorio, muy vascularizado, (paño), que es destructivo para el cartílago y el hueso. Las áreas que pueden ser afectadas incluyen las articulaciones de las manos, muñecas, cuello, quijada, codos, rodilla, pies y tobillos. La destrucción del cartílago en la RA está asociada a una expresión anormal de citocinas y del factor de crecimiento en las articulaciones afectadas. Dos citocinas de importancia clínica liberadas en el fluido sinovial son la IL-lß y TNF-a. La TNF-a puede aumentar su propia expresión y también facilitar la expresión de otros genes implicados en la RA, que incluyen IL-lß, IL-6, IL-8, cicloxigenasa-2 (COX-2) , sintetasa inducible por óxido nítrico (iNOS) , molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM-1) , molécula de adhesión celular vascular 1 (VCAM-1) y E-selectina. Este tipo de ciclo positivo regulador puede amplificar y perpetuar respuestas inflamatorias locales. Por lo tanto, la expresión inapropiada o exagerada de TNF-a produce un aumento coordinado en la expresión de muchos genes cuyos productos participan en respuestas inflamatorias e inmunes y por lo mismo dan lugar a manifestaciones clínicas de la RA. El reestablecimiento y retención de los leucocitos es un evento clave en la patogénesis de todos los trastornos crónicos inflamatorios incluida la RA. Por otra parte, la adhesión de leucocitos circulantes, en especial los monocitos, al endotelio vascular es también un evento crucial en el desarrollo de la ateroesclerosis. Este proceso depende de la interacción entre las moléculas de adhesión expresadas en la superficie de células endoteliales como ICAM-1, VCAM-1 y E-selectina y sus ligandos análogos en leucocitos. Por consiguiente, las moléculas ICAM-1, VCAM-1 y E-selectina son responsables de la incorporación de células inflamatorias, como neutrófilos, eosinófilos y linfocitos T, de la circulación a la zona de inflamación. Estas proteínas de adhesión normalmente están a un nivel bajo en la superficie celular endotelial pero son intensamente inducidas por varias citocinas proinflamatorias como la TNF-a. La terapia más común para el tratamiento de trastornos inflamatorios incluye el uso de medicamentos antinflamatorios no esteroides (AINE) , por ejemplo, naproxeno, diclofenaco, ibuprofeno, para aliviar síntomas como el dolor. Sin embargo, a pesar del difundido uso de los AINE, muchos individuos no pueden tolerar las dosis necesarias para tratar el trastorno durante un periodo de tiempo prolongado ya que los AINE causan erosiones gástricas. Por otra parte, Los AINE sólo tratan los síntomas del trastorno y no la causa. Cuando los pacientes no responden a los AINE, se usan otros medicamentos como el metotrexato, las sales de oro, la D-penicilamina y los corticosteroides. Estos medicamentos tienen también efectos tóxicos importantes . Los medicamentos de anticuerpos monoclonales como infliximab, etanercept y adalimumab son útiles como agentes antinflamatorios pero tienen desventajas como la vía de administración (sólo parenteral) , elevado costo, inducción de alergias, activación de tuberculosis latente, alto riesgo de cáncer y enfermedad cardiaca congestiva. Por lo tanto, existe la necesidad del desarrollo de medicamentos mejorados y alternativos que tengan pocos efectos secundarios que sean útiles para la prevención y tratamiento de trastornos inflamatorios ocasionados por un aumento de IL-1 y TNF-a. Las plantas se han usado en todo el mundo para el tratamiento de muchos padecimientos. Existe la evidencia de que los productos derivados de las plantas tienen efectos farmacológicos y terapéuticos potenciales en los mamíferos y que tienden a presentar menos efectos secundarios nocivos que los medicamentos sintéticos. La presente invención describe una nueva composición herbaria, que contiene extracto de las cabezas florales y frutales de la planta, Sphaeranthus indicus . La composición se puede usar para el tratamiento de varios trastornos inflamatorios, con mínimos efectos secundarios. La planta Sphaeranthus indicus es una hierba común que se encuentra en los campos de arroz. Pertenece a la familia Asteraceae y en la literatura Ayurveda se conoce como maha undi o gorakhmundi . La planta, que se encuentra en toda India, es una planta ramificada con flores moradas. Se usa en trastornos hepáticos y gástricos. Se usa en la medicina tradicional como un remedio para varios padecimientos que incluyen desintería, dolor en el útero y la vagina, enfermedades del tórax, purificación y enriquecimiento de la sangre, infecciones de las vías urinarias, cicatrización de heridas y varias enfermedades más.

Una formulación poliherbaria "RV-08", que contiene Sphaeranthus indicus se ha desarrollado con la intención de contrarrestar trastornos inmunodeficientes (Indian Journal of Pharmacology, 33, 454-55, (2001)). Se ha reportado el aislamiento de un nuevo sesquiterpeno glicósido, el esferantanólido, a partir de las flores de Sphaeranthus indicus . El compuesto aislado, el esferantanólido, mostró actividad inmunoestimuladora. (Phytochemistry, 29(8), 2573-76, (1990)). Se ha reportado la actividad inmunomoduladora del extracto metanólico de las cabezas florales de Sphaeranthus indicus (Ars Pharmaceutica 45:3; 281-91, (2004)). El extracto acuoso obtenido de las raíces de Sphaeranthus indicus se reporta como moderadamente activo en la disminución de la producción de TNF-a e IL-8 inducida por Propionibacterium acnés . Sphaeranthus indicus produjo una pequeña, aunque significativa, supresión de especies de oxígeno reactivo (Phytomedicine, 10(1), 34-38, (2003)). Hasta donde sabemos, no existe ningún reporte de algún medicamento que contenga extracto de cabezas florales y frutales de Sphaeranthus indicus para el tratamiento de trastornos inflamatorios. Para superar los problemas de los efectos secundarios de la presente línea de tratamiento, por ejemplo, inducción de alergia, activación de tuberculosis latente, mielosupresión, mayor riesgo de cáncer y enfermedad cardiaca congestiva, asociados con las composiciones de la técnica anterior, los inventores de la presente han preparado una nueva composición herbaria eficaz contra la inflamación, que tiene actividad inhibidora contra TNF-a, interleucinas (IL-1, IL-6, IL-8) y la expresión de la molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM-1) , la molécula de adhesión celular vascular 1 (VCAM- 1) , y la E-selectina. Las composiciones de la presente invención también se puede usar en combinación con al menos un agente antinflamatorio más.

OBJETIVOS Y VENTAJAS DE LA INVENCIÓN Un objetivo de la presente invención está enfocado a proporcionar una nueva composición herbaria que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de un extracto de cabezas florales y frutales de Sphaeranthus indicus como ingrediente activo y vehículos farmacéuticamente aceptables. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3-metilen-3a, 4, 5, 5a, 6, 7, 8, 9b-octahidro-3H-nafto [1, 2-b] furan-2-ona (compuesto 1) como ingrediente activo y vehículos farmacéuticamente aceptables, para el tratamiento de trastornos inflamatorios.

Otro objetivo más de la presente invención es proporcionar un método de fabricación de las composiciones. Otro objetivo más de la presente invención es proporcionar una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del ingrediente activo seleccionado entre el extracto de Sphaeranthus indicus o el compuesto 1, para el tratamiento de trastornos mediados por TNF-a e interleucinas (IL-1, IL-6, IL-8). Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del ingrediente activo seleccionado entre el extracto de Sphaeranthus indicus o el compuesto 1, para el tratamiento de trastornos mediados por la molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM-1) , la molécula de adhesión celular vascular 1 (VCAM-1) y la E-selectina. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del ingrediente activo seleccionado entre el de Sphaeranthus indicus o el compuesto 1, para el tratamiento de trastornos inflamatorios. Otro objetivo más de la presente invención es proporcionar una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del ingrediente activo seleccionado entre el extracto de Sphaeranthus indicus o el compuesto 1, para tratar trastornos inflamatorios mediados por TNF-a.

Otro objetivo más de la presente invención es proporcionar una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del ingrediente activo seleccionado entre el extracto de Sp.haerant.hus indicus o el compuesto 1, para tratar trastornos inflamatorios mediados por interleucinas (IL-1, IL-6, IL-8). Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del ingrediente activo seleccionado entre el extracto de Sphaeranthus indicus o el compuesto 1, para tratar trastornos inflamatorios mediados por la molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM-1) , la molécula de adhesión celular vascular 1 (VCAM-1) y la E-selectina. Otro objetivo más de la presente invención es proporcionar una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del ingrediente activo seleccionado entre el extracto de Sphaeranthus indicus o el compuesto 1, en combinación con al menos una sustancia bioactiva y obtener así un efecto sinérgico. Otro objetivo de la invención es proporcionar el uso de las composiciones, solas o en combinación con al menos otro agente antinflamatorio, para tratar trastornos inflamatorios incluida la artritis reumatoide. Otros objetivos y alcance adicional de la aplicación de la presente invención serán evidentes a partir de la significativamente descripción detallada.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN De este modo, según un aspecto de la presente invención, se proporciona una nueva composición herbaria que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de un extracto de cabezas florales y frutales de Sphaeranthus indicus como ingrediente activo y vehículos farmacéuticamente aceptables . Según otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3-metilen-3a, 4, 5, 5a, 6, 7, 8, 9b-octahidro-3H-nafto [1, 2-b] furan-2 -ona (compuesto 1) como ingrediente activo y vehículos farmacéuticamente aceptables, para el tratamiento de trastornos inflamatorios. Según otro aspecto más de la presente invención, se proporciona un método de fabricación de las composiciones . Según otro aspecto más de la presente invención, se proporciona una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del ingrediente activo seleccionado entre el extracto de Sphaeranthus indicus o el compuesto 1, para el tratamiento de trastornos mediados por TNF-a e interleucinas (IL-1, IL-6, IL-8) .

Según otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del ingrediente activo seleccionado entre el extracto de Sphaeranthus indicus o el compuesto 1, para el tratamiento de trastornos mediados por la molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM-1) , la molécula de adhesión celular vascular 1 (VCA -1) y la E-selectina. Según otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del ingrediente activo seleccionado entre el extracto de Sphaeranthus indicus o el compuesto 1, para el tratamiento de trastornos inflamatorios. Según otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del ingrediente activo seleccionado entre el extracto de Sphaeranthus indicus o el compuesto 1, para tratar trastornos inflamatorios mediados por TNF-a. Según otro aspecto más de la presente invención, se proporciona una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del ingrediente activo seleccionado entre el extracto de Sphaeranthus indicus o el compuesto 1, para tratar trastornos inflamatorios mediados por interleucinas (IL-1, IL-6, IL-8) . Según otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del ingrediente activo seleccionado entre el extracto de Sphaeranthus indicus o el compuesto 1, para tratar trastornos inflamatorios mediados por la molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM-1) , la molécula de adhesión celular vascular 1 (VCAM-1) y la E-selectina. Según otro aspecto más de la presente invención, se proporciona un composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del ingrediente activo seleccionado entre el extracto de Sphaeranthus indicus o el compuesto 1, en combinación con al menos una sustancia bioactiva y así obtener un efecto sinérgico. Según otro aspecto de la presente invención, se proporciona el uso de las composiciones solas o en combinación con al menos otro agente antinflamatorio para tratar trastornos inflamatorios incluida la artritis reumatoide .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Se deberá entender que la descripción detallada y los ejemplos específicos, aun cuando señalan modalidades de la invención, se presentan sólo como ilustración, ya que varios cambios y modificaciones que quedan dentro del alcance de la invención serán evidentes para los expertos en la técnica. El experto en la técnica, con base en la descripción que aquí se presenta, puede utilizar la presente invención en toda su extensión. Las siguientes modalidades específicas se interpretarán sólo como ilustrativas y de ninguna manera limitativas del resto de la descripción. A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente tienen el mismo significado que comúnmente les da una persona con experiencia ordinaria en la técnica a la que pertenece la invención. El término "trastorno inflamatorio" en el sentido que se utiliza en la presente, se refiere a una enfermedad o padecimiento caracterizado por inflamación crónica entre los que se incluyen artritis reumatoide, osteoartritis, artritis reumatoide juvenil, artritis psoriásica, artritis reumatoide refractaria, artritis crónica no reumatoide, osteoporosis/resorción ósea, enfermedad cardiaca coronaria, ateroesclerosis, vasculitis, colitis ulcerativa, psoriasis, enfermedad de Crohn, síndrome dificultad respiratoria en adultos, trastornos de hipersensibilidad cutánea retardada, síndrome de choque septicémico y enfermedad intestinal inflamatoria. El término "farmacéuticamente aceptable" en el sentido que se utiliza en la presente se refiere a que el vehículo, diluyente, excipientes y/o la sal tienen que ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y no ser nocivos para el receptor de los mismos. El término "vehículo farmacéuticamente aceptable" en el sentido que se utiliza en la presente se refiere a un material encapsulante, diluyente, semisólido, sólido, inerte y no tóxico o a una formulación auxiliar de cualquier tipo. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como vehículos f rmacéuticamente aceptables son: azúcares como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones como almidón de maíz y almidón de papa; celulosa y sus derivados como carboximetil celulosa sódica, etil celulosa y acetato de celulosa; malta; gelatina; talco; también pueden estar presentes en la composición otros lubricantes compatibles y no tóxicos como laurilsulfato de sodio y estearato de magnesio, así como agentes colorantes, desmoldantes, agentes de recubrimiento, edulcorantes, saborizantes y aromatizantes, conservadores y antioxidantes, según el criterio del formulador. El término "cantidad terapéuticamente eficaz" en el sentido que se utiliza en la presente se refiere a una cantidad de compuesto o composición (por ejemplo, el extracto de Sphaeranthus indicus) suficiente para inducir de manera significativa una modificación positiva en la condición que se va a regular o a tratar, pero lo suficientemente baja para evitar efectos secundarios si los hubiera (en una razonable relación beneficio/riesgo) , según el acertado juicio médico. La cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto o composición variará con el padecimiento particular que se va a tratar, la edad y la condición física del usuario final, la gravedad del padecimiento que se va a tratar o prevenir, la duración del tratamiento, la naturaleza de la terapia concurrente, el compuesto o composición específica empleados, el vehículo farmacéuticamente aceptable utilizado, y factores similares. Tal como se utilizan en la presente, todos los porcentajes son en peso, a menos que se especifique de otro modo. En la presente, el término "marcador bioactivo" se usa para definir una característica (o un perfil fitoquímico) que se relaciona con un aceptable grado de actividad farmacéutica. La "dosis máxima viable" es la más alta cantidad de un medicamento que un adulto puede ingerir con seguridad. Cabe señalar, que tal como se usan en la especificación y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una, uno" y "el, la" incluyen los plurales, a menos que el contexto claramente lo indique de otro modo. Los términos "extracto de Sphaeranthus indicus" o "un extracto de Sphaeranthus indicus" , mencionados aquí, se refieren a una mezcla de compuestos presentes en la planta Sphaeranthus indicus . Estos compuestos se extraen de las cabezas florales y frutales secas de la planta mediante procedimientos de extracción muy conocidos en la técnica (por ejemplo, con solventes orgánicos como alcoholes de cadena corta, esteres alquílicos, éteres alquílicos, alquil cetonas, cloroformo, éter de petróleo, hexano y/o solventes inorgánicos como agua) . El presente proceso de extracción de los constituyentes derivados de las cabezas florales y frutales de Sphaeranthus indicus se puede adaptar para la preparación a gran escala. El término "ingrediente activo" En el sentido que se utiliza en la presente se refiere a "extracto de Sphaeranthus indicus" o "el compuesto 1" o "un extracto de Sphaeranthus indicus enriquecido que contiene una mezcla de uno o más compuestos activos" . El extracto de Sphaeranthus indicus se puede estandardizar mediante las técnicas convencionales como cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) o cromatografía en capa fina de alta resolución (HPTLC) . En una modalidad, la invención proporciona una composición herbaria que contiene extracto de Sphaeranthus indicus estandarizado y vehículos farmacéuticamente aceptables . Los compuestos marcadores bioactivos se pueden aislar a partir del extracto de cabezas florales y frutales de Sphaeranthus indicus por purificación cromatográfica en columna en función de la bioactividad y HPLC preparativa.

Los compuestos se pueden caracterizar por análisis de los datos espectrales. La composición herbaria de la presente invención contiene un extracto de cabezas florales y frutales de Sphaeranthus indicus, que a su vez contiene 2 a 9% de 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3 -metilen-3a, 4 , 5 , 5a, 6 , 7 , 8 , 9b-octahidro-3H-nafto [1, 2-b] furan-2-ona (compuesto 1), como marcador bioactivo y opcionalmente otro u otros compuestos activos . En una modalidad, la invención proporciona una composición que contiene 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3-metilen-3a, 4, 5, 5a, 6, 7, 8, 9b-octahidro-3H-nafto [1, 2-b] furan-2-ona (compuesto 1) como ingrediente activo y vehículos farmacéuticamente aceptables. En una modalidad, la invención proporciona el uso de la composición que contiene 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3-metilen-3a,4,5,5a,6,7,8, 9b-octahidro-3H-nafto [1, 2-b] furan- 2 -ona (compuesto 1) , para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de trastornos inflamatorios . La invención también está enfocada a un método para la fabricación de composiciones útiles en el tratamiento de trastornos inflamatorios. El extracto estandardizado de Sphaeranthus indicus se mezcla con vehículos farmacéuticamente aceptables ' y se formula en formas de dosificación terapéutica. La dosis que se administra diariamente se selecciona en función del efecto deseado. En una modalidad, se proporciona la composición herbaria que contiene el extracto de Sphaeranthus indicus estandarizado, para el tratamiento de trastornos inflamatorios . En otra modalidad de la invención, se proporciona la composición que contiene 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3 -metilen-3a, 4, 5, 5a, 6, 7, 8, 9b-octahidro-3H-nafto [1, 2-b] furan-2-ona (compuesto 1) y vehículos farmacéuticamente aceptables, para el tratamiento de trastornos inflamatorios. El compuesto 1, 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3-metilen-3a,4, 5, 5a, 6, 7, 8, 9b-octahidro-3H-nafto [1, 2-b] furan-2 -ona, se aisló a partir del extracto de Sphaeranthus indicus mediante un procedimiento propio de la técnica relacionada y se caracterizó por resonancia magnética nuclear (RMN) y espectrometría de masas. La composición contiene el compuesto 1, 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3 -metilen-3a, 4 , 5 , 5a, 6 , 7 , 8 , 9b-octahidro-3H-nafto [1, 2-b] furan-2-ona, este compuesto también se puede obtener a partir de otras plantas o se puede preparar por métodos de síntesis convencionales que son conocidos por los técnicos experimentados en la técnica. Por lo tanto, la presente invención abarca dentro de su alcance una composición farmacéutica que contiene el compuesto 1, el cual se puede obtener a partir de otras fuentes, para usarse en el tratamiento de trastornos inflamatorios . En otra modalidad de la invención, se proporciona un método de fabricación de una composición farmacéutica que contiene 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3-metilen- 3a, 4, 5, 5a, 6, 7, 8, 9b-octahidro-3H-nafto [1, 2-b] furan-2-ona (compuesto 1) , que consiste en mezclar el compuesto 1 con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables y formular en formas de dosificación terapéuticas. La dosis que se administra diariamente se selecciona en función del efecto deseado. Las composiciones de la presente invención se pueden administrar por vía oral, por ejemplo, en forma de pildoras, tabletas, tabletas recubiertas, cápsulas, granulos, elíxires o jarabe. El extracto de cabezas florales y frutales de Sphaeranthus indicus se usa para preparar preparaciones orales que contienen 3 a 70% en peso del extracto, el cual se mezcla homogéneamente con una base convencional como se describirá más adelante con detalle. El extracto de cabezas florales y frutales que contiene 2 a 9% (p/p) del compuesto 1 como marcador bioactivo, es suficiente para obtener los resultados deseados . El compuesto 1, 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3-metilen-3a, 4, 5, 5a, 6, 7, 8, 9b-octahidro-3H-nafto [1, 2-b] furan-2-ona, se usa para preparar preparaciones orales que contienen 3 a 99% en peso del compuesto, que se mezcla homogéneamente con una base convencional como se describirá más adelante con detalle. Las composiciones de la presente invención se pueden usar para administración tópica y transdérmica. Las composiciones tópicas útiles en la presente invención incluyen formulaciones adecuadas para la aplicación tópica en la piel. Las composiciones se pueden formular en una amplia variedad de tipos de productos que incluyen, entre otros, lociones, cremas, geles, barras, rocíos o ungüentos. El extracto de cabezas florales y frutales de Sphaeranthus indicus se usa para preparar preparaciones tópicas que contienen 1 a 15% en peso del extracto, que se mezcla homogéneamente con una base convencional como se describirá más adelante con detalle. El extracto de cabezas florales y frutales de Sphaeranthus indicus, que contiene aproximadamente 2 a 9% (p/p) del compuesto 1 como marcador bioactivo, es suficiente para obtener los resultados deseados . En una modalidad, las composiciones se destinan para el tratamiento de trastornos inflamatorios mediados por TNF-a e interleucinas (IL-1, IL-6, IL-8) . En una modalidad, las composiciones se destinan para el tratamiento de trastornos inflamatorios mediados por la molécula de adhesión intercelular 1 (IC7?M-1) , la molécula de adhesión celular vascular 1 (VCAM-1) y la E-selectina . Las proporciones reales del ingrediente activo, " Extracto de Sphaeranthus indicus" o del compuesto 1 en las composiciones de esta invención, pueden modificarse para obtener una cantidad del ingrediente activo que sea eficaz para lograr la respuesta terapéutica deseada en un paciente, composición y modo de administración particulares . La dosis seleccionada dependerá de una variedad de factores que incluyen la actividad del ingrediente activo particular, el "extracto Sphaeranthus indicus" o "el compuesto 1" empleado, la vía de administración, el tiempo de administración, la velocidad de excreción de la composición particular que se emplea, la duración del tratamiento, el uso en combinación con otros extractos, la edad, sexo, peso, condición, salud general e historial médico del paciente que se trata, y factores similares muy conocidos en el campo médico. En otra modalidad, la invención proporciona una composición que contiene el ingrediente activo, "extracto de Sphaeranthus indicus" o el compuesto 1, en combinación con al menos otro extracto herbario más que exhiba actividad antinflamatoria y obtener así un' efecto sinérgico. Esta otra planta se puede seleccionar entre plantas como Cúrcuma longa y Zingiber officinale . En otra modalidad más, la composición también contiene el ingrediente activo, "extracto de Sphaeranthus indicus" o el compuesto 1, en combinación con la menos una sustancia bioactiva para obtener un efecto sinérgico. En otra modalidad, la composición de la presente invención que contiene el ingrediente activo, "extracto de Sphaeranthus indicus" o el compuesto 1, opcionalmente puede contener al menos otro agente antinflamatorio más o también se puede usar en combinación con un agente antinflamatorio convencional . El antinflamatorio se puede seleccionar a partir de esteroides como prednisolona, hidrocortisona; medicamentos antirreumáticos modificadores de la enfermedad ( disease modifying antirheumatic drugs o DMARDs) como metotrexato, sulfasalazina; o AINE como naproxeno, diclofenaco, ibuprofeno y lo similar. En una modalidad, la composición herbaria que contiene el ingrediente activo, "extracto de Sphaeranthus indicus" o el compuesto 1 aislado del extracto de Sphaeranthus indicus, se destina al tratamiento de artritis reumatoide . Otra modalidad de la presente invención también se relaciona con la actividad inhibidora de TNF-a e interleucina (IL-1, IL-6, IL-8) de las composiciones que contienen el ingrediente activo.

Otra modalidad de la presente invención también se relaciona con la inhibición de la expresión en superficie celular de las moléculas de adhesión como la molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM-1) , la molécula de adhesión celular vascular 1 (VCAM-1) y la E-selectina, mediante las composiciones que contienen el ingrediente activo. Las composiciones de la presente invención son adecuadas para usarse en el tratamiento de formas crónicas y agudas de trastornos inflamatorios mediados por el TNF-a, interleucinas (IL-1, IL-6, IL-8) e ICAM-1, VCAM-1 y E-selectina, en particular, la artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, artritis psoriásica, osteoartritis, artritis reumatoide refractaria, artritis crónica no reumatoide, osteoporosis/resorción ósea, enfermedad cardiaca coronaria, vasculitis, colitis ulcerativa, psoriasis, síndrome de dificultad respiratoria en adultos y enfermedad de Alzheimer, en humanos. También, las composiciones de la presente invención se pueden usar para tratar la inflamación en enfermedades como enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, síndrome de choque septicémico, ateroesclerosis y varias enfermedades autoinmune, entre otros cuadros clínicos. La presente invención también se relaciona con un método para el tratamiento de trastornos inflamatorios que consiste en la administración selectiva de las composiciones por vía oral, aplicación tópica o aplicación transdérmica. Los siguientes ejemplos ilustran la invención pero no limitan su alcance. Las personas con experiencia ordinaria en la técnica comprenderán que la presente exposición comprende sólo modalidades ejemplificativas y no tiene el propósito de limitar los aspectos más amplios de la presente invención, estos aspectos quedan comprendidos en la estructura ejemplificativa.

Ejemplo 1 Preparación extracto metanólico de Sphaeranthus indicus . Las cabezas florales y frutales secas de Sphaeranthus indicus (200 g) se pulverizaron. El material en polvo se extrajo con metanol (2.5 L) y se mantuvo agitación a 60°C durante 3 h. El extracto se filtró a vacío. Este proceso de extracción se repitió dos veces más. Los extractos se combinaron y concentraron.

Rendimiento: 23.29 g (11.65% p/p). Se encontró que el extracto del Ejemplo 1 contenía 6% del compuesto 1 (descrito en el Ejemplo 4) , según se determinó por HPTLC.

Ejemplo 2 Preparación extracto de Sphaeranthus indicus en acetato de etilo. Las cabezas florales y frutales secas de Sphaeranthus indicus (350g) se pulverizaron. El material pulverizado se extrajo con acetato de etilo (3 L) y se mantuvo en agitación a 60 °C durante 3 h. El extracto se filtró a vacío. Este proceso de extracción se repitió dos veces más. Los extractos se combinaron y se concentraron. Rendimiento: 19 g (9.5% p/p).

Ejemplo 3 Preparación extracto acuoso de Sphaeranthus indicus . Las cabezas florales y frutales secas de Sphaeranthus indicus (200g) se pulverizaron. El material pulverizado se extrajo con agua (1.2 L) y se mantuvo en agitación a 80°C-90°C durante 3 h. El extracto se filtró a vacío. Este proceso de extracción se repitió. Los extractos se combinaron y se concentraron para eliminar el agua. Después, el extracto crudo se secó por liofilización.

Rendimiento: 21 g (10.5 %p/p) .

Ejemplo 4 Aislamiento de 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3-metilen- 3a, 4 , 5 , 5a, 6, 7, 8, 9b-octahidro- 3H-nafto [1, 2-b] furan-2-ona (compuesto 1). El extracto metanólico (32 g) , preparado con el método descrito en el Ejemplo 1, se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, metanol en cloroformo) . La purificación final se hizo por medio de HPLC preparativa (columna de sílice, hexano: isopropanol, 95:5) para obtener compuesto esperado. 1H NMR (CDC13, 500 MHz): dl.085 (3H, CH3), 4.997 (1H, s) , 5.801 (1H, s) , 6.270 (1H, s) ; MS : m/e (ES) 248 (M+) . El compuesto se caracterizó por comparación de los datos espectrales obtenidos con la literatura reportada (Indian Journal of Chemistry, Vol. 25B, 233-238, (1986); J. Chem Soc. Perkin Trans . 1:(2), 157-160, (1988); J. Chem. Research (M) , 0501-0509, 1989).

RESULTADOS FARMACOLÓGICOS La eficacia de los extractos vegetales de la presente, compuestos aislados por purificación del extracto y formulaciones, para inhibir la actividad del TNF-a y las interleucinas (IL-1, IL-6 e IL-8) se determinó mediante varios ensayos farmacológicos de uso común en la técnica y que se describirán a continuación.

Tamizaje in vi tro para identificar inhibidores de TNF-a Ejemplo 5 Tamizaje primario - Células mononucleares de sangre periférica humana (hPBMC) . La producción de TNF-a a partir de lipopolisacáridos (LPS) en hPBMC se midió según el método descrito por Jansky, L. et al (Physiol. Res. 52: 593-598, (2003)). La sangre se extrajo de donadores sanos en tubos Vacutainer que contenían sal de potasio de EDTA (BD Vacutainer) . Las PBMC se aislaron con centrifugación en gradiente en solución Histopaque-1077 (Sigma) . Las PBMC aisladas se suspendieron en medio de cultivo RPMI 1640 (Gibco BRL, Pasley, UK) que contenía suero fetal de bovino al 10% (FBS) (Hyclone, Utah, USA) , 100 U/ml penicilina (Sigma Chemical Co. St Louis, MO) y 100 µg/ml de estreptomicina (Sigma Chemical Co. St Louis, MO) . La concentración de células se ajustó a lxlO6 células/ml. La viabilidad determinada por exclusión de colorante azul tripano fue de manera uniforme >98%. La suspensión de células (100 µl) se adicionó a los pozos de una placa de cultivo de 96 pozos. Después del depósito de células, se les adicionaron 79 µl del medio de cultivo y 1 µl de ocho diferentes concentraciones de las muestras de prueba (final concentración 0.03, 0.1, 0.3, 1, 3, 10, 30, 100 µg/ml) disueltas en DMSO (dimetilsulfóxido, Sigma, MO, USA) . La concentración final de DMSO se ajustó a 0.5%. El vehículo (DMSO 0.5%) se usó como control. Como estándar se usó Rolipram (100, 300 µM) . Las placas se incubaron durante 30 min a 37°C en atmósfera de C02 5%. Por último, se adicionaron 20 µl (10 µg/ml) de LPS por pozo, (Escherchia coli 0127 :B8, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) , para obtener una concentración final de 1 µg/ml. Las placas se incubaron a 37°C durante 5 h en atmósfera de C02 5%. Para evaluar el efecto citotóxico de los extractos vegetales, la viabilidad celular se determinó con reactivo MTS (3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -5- (3-carboximetoxifenil) -2- (4-sulfonil) -2H-tetrazolio) después de 5 h de incubación. Los sobrenadantes se recolectaron y se analizaron para evaluar el TNF-a por ELISA según las indicaciones del fabricante (estuches OptiEIA ELISA, BD Biosciences, Pharmingen) . Se registró el % de inhibición. Se evaluó el por ciento de citotoxicidad de las muestras de prueba en comparación con el control. Los resultados se resumen en el Cuadro 1 Cuadro 1: Inhibición del TNF-a en células mononucleares de sangre periférica humana Ejemplo 6 Efecto en citocinas proinflamatorias liberadas por las hPBMC estimuladas por LPS El efecto del extracto vegetal en las citocinas proinflamatorias : TNF-a, interleucina lß (IL-lß), interleucina 6 (IL-6) e interleucina 8 (IL-8) se determinó utilizando los sobrenadantes generados en la prueba de tamizaje primario. Los niveles de estas citocinas se evaluaron con la prueba ELISA según las indicaciones del fabricante, (estuches OptiEIA ELISA, BD Biosciences, Pharmingen) . Los valores de la concentración inhibitoria de 50% (IC50) se calcularon por el método de regresión no linear con el software GraphPad (Prism 3.03). Cuadro 2: Efecto del extracto del Ejemplo 1, en las citocinas proinflamatorias Conclusión: Se encontró que el extracto del Ejemplo 1 inhibe las citocinas proinflamatorias (TNF-a, IL-lß, IL-6 e IL-8) liberadas por HPBMC estimuladas por LPS.

Ejemplo 7 Efecto del compuesto 1, en las citocinas proinflamatorias liberadas por HPBMC estimuladas por LPS El compuesto 1 se obtuvo mediante el procedimiento del Ejemplo 4. La evaluación de la bioactividad se hizo conforme al procedimiento del Ejemplo 6. El efecto del compuesto 1 , en las citocinas proinflamatorias : TNF-a, interleucina lß (IL-lß), interleucina 6 (IL-6) e interleucina 8 (IL-8), se determinó utilizando los sobrenadantes generados en la prueba de tamizaje primario. Los niveles de estas citocinas se evaluaron con la prueba ELISA según las indicaciones del fabricante, (estuches OptiEIA ELISA, BD Biosciences, Pharmingen) . Los valores de la concentración inhibitoria de 50% (IC50) se calcularon por el método de regresión no linear con el software GraphPad (Prism 3.03) .

Los resultados se resumen en el Cuadro 3 Cuadro 3: Efecto del compuesto 1, en las citocinas proinflamatorias Conclusión: Se encontró que el compuesto 1 inhibe las citocinas proinflamatorias (TNF-a, IL-lß, IL-6 e IL-8) liberadas por HPBMC estimuladas por LPS.

Ejemplo 8 Efecto en citocinas proinflamatorias producidas por células sinoviales obtenidas a partir de un paciente con RA La producción de citocinas a partir de células sinoviales obtenidas de un paciente con artritis reumatoide (RA) sometido a cirugía de reemplazo de rodilla, determinada según el método descrito por Brennan, F. M. et al (The Lancet. July 29: 244-247, (1989)). El tejido de la membrana sinovial se sometió a digestión en DMEM (Gibco) que contenía FBS 10%, 100 U/ml de penicilina y 100 µg/ml de estreptomicina, 4 mg/ml de colagenasa tipo I (Worthington) , 1.5 µg/ml de Dnase tipo I (Sigma) y 15 U/ml de heparina incubada a 37°C durante 3 horas. Después de la incubación, el tejido digerido se filtró a través de una membrana de 70 -µm y las células se lavaron 3 veces en el medio completo (DMEM con FBS 10%) . Las células sinoviales se cultivaron a 1 x 106 células/ml en presencia y en ausencia de la muestra de prueba durante 10 horas. Los sobrenadantes se recolectaron por centrifugación y se midieron los niveles de citocinas (TNF-a, IL-lß, IL-6, IL-8) mediante la prueba ELISA. Para evaluar el efecto citotóxico de los extractos vegetales, la prueba de viabilidad celular se hizo utilizando el reactivo MTS. Los valores de la concentración inhibitoria de 50% (IC50) se calcularon por el método de regresión no linear con el software GraphPad (Prism 3.03). Conclusión: Se encontró que el extracto del Ejemplo 1 inhibe las citocinas proinflamatorias (TNF-a, IL-lß, IL-6 e IL-8) producidas por células sinoviales obtenidas a partir de un paciente de RA.

Ejemplo 9 Efecto del compuesto 1 en las citocinas proinflamatorias producidas por células sinoviales obtenidas a partir de un paciente con RA.

El efecto en las citocinas proinflamatorias producidas por células sinoviales obtenidas a partir de un paciente con RA se estudió para el compuesto 1, tal como se describe en el procedimiento del Ejemplo 8.

Los resultados se resumen en el Cuadro 4. Cuadro 4: Efecto del compuesto 1, en las citocinas proinflamatorias producidas por células sinoviales .

Conclusión: Se encontró que el compuesto 1 inhibe las citocinas proinflamatorias (TNF-a, IL-6 e IL-8) producidas por células sinoviales obtenidas de un paciente con RA.

Ejemplo 10 Prueba Cell-ELISA para la expresión de la molécula de adhesión La prueba se diseñó con base en la referencia Transplantation, Vol 63(5), 759-764, 1997, con modificaciones . Cultivo celular y reactivos: Las células endoteliales de vena umbilical humana (HUVEC) se obtuvieron de Cascade Biologics y se conservaron en M200 (Cascade Biologics, Portland, Or) suplementado con suplemento de crecimiento bajo en suero (LSGS) a 37°C en un incubador con C02 5%. Células U937 (ATCC, Manassas, VA) se cultivaron en el medio RPMI 1640 suplementado con FBS 10% (Hyclone, Logan, UT) . El TNF-a recombinante humano y los anticuerpos de VCAM-1, ICAM-1, E-selectina se obtuvieron de R&D Systems y el LPS de Sigma (St. Louis, MO) . Cell-ELISA para la expresión de molécula de adhesión Las HUVEC se depositaron a 7 x 105 células/pozo en placas de 96-pozos recubiertas con fibronectina. Las células se estimularon con TNF-a (10 ng/ml) o LPS (1 µg/ml) , 30 minutos después de la adición del compuesto de prueba. Después de la estimulación, las células (E-selectina e ICAM-1) se fijaron con paraformaldehído en solución salina amortiguada de fosfato (PBS) . La unión inespecífica se bloqueó con albúmina sérica bovina al 2% (BSA) en solución salina amortiguada de fosfato (PBS) durante 1 h, y las células se incubaron con anticuerpo primario durante 2 h. Para la detección de VCAM-1, las células se bloquearon, se incubaron con anticuerpo primario durante la noche y luego se fijaron. Las células se lavaron con BSA 0.1% en PBS y se incubaron con anticuerpo conjugado con peroxidasa (Ab) anti-inmunoglobulina G (IgG) de ratón durante 90 min. Después de lavar siete veces, se le adicionó sustrato líquido de 3 , 3 ' 5 , 5 ' -tetrametilbencidina (sustrato TMB) y se determinó la densidad óptica de cada pozo a 450 nm con un lector de placa de microvaloración (Spectramax, Molecular Devices, CA) . Se usó BAY 11-7082 [ (E) -3- ( 4-metilfenilsulfonil) -2-propenonitrilo] como estándar y DMSO como vehículo de control. Se evaluó el por ciento de inhibición de la muestra de prueba en comparación con el control. Los valores de la concentración inhibitoria de 50% (IC50) para cada muestra comparada con el control se determinaron por un método de regresión no lineal. Los resultados se resumen en el Cuadro 5. Cuadro 5: Cell-ELISA para la expresión de la molécula de adhesión para el extracto del Ejemplo 1 y el compuesto 1 Conclusión : El extracto del Ejemplo 1 y el compuesto 1 redujeron en función de la dosis la expresión en superficie inducida por TNF-a de moléculas de adhesión celular endotelial como ICAM-l, VCAM-1 y E-selectina.

Ejemplo 11 Adhesión de células mononucleares THP-1 a monocapas HUVEC Se realizaron estudios de adhesión con la línea celular promonocítica THP-1, la cual se estableció como un modelo útil para monocitos en estudios de adhesión en Circ.

Res., 97, 236-243, 2005, con modificaciones. Las células THP-1 se lavaron dos veces con medio marcador (M200 más LSGS) . Se marcaron células THP-1 (6xl05 células por mi) se con 10 µg/ml de bis-carboxietil-carboxifluoresceína acetoximetiléster (una sonda fluorescente, BCECF-AM; Sigma) durante 30 minutos a temperatura ambiente. Después de interrumpir con BSA 0.1%, el glóbulo se resuspendió en medio marcador. Para evaluar la adhesión de monocitos, las monocapas de HUVEC se trataron con TNF-a (1 ng/ml) en presencia o ausencia de varias concentraciones de la muestra de prueba. El medio se eliminó, se hizo un lavado y las células THP-1 marcadas se adicionaron a los pozos (6xl04 células por pozo) que se incubaron durante 10 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad. Después de la coincubación, los pozos se lavaron, se llenaron con amortiguador de lisis (Triton-X 0.1% en amortiguador tris 1.5M) y se incubaron durante 30 minutos. La fluorescencia se midió con un lector de fluorescencia (PolarStar Óptima, BMG Labtech) a excitación máxima de 485 nm y emisión máxima de 520 nm. Los valores son las medias + ESM (error estándar de la media) y representan datos de adhesión fluorescente. Se usó BAY 11-7082 [ (E) -3- (4-metilfenilsulfonil) -2-propenonitrilo] como estándar y DMSO como vehículo control. Los resultados se resumen en el Cuadro 6. Cuadro 6: Adhesión de células mononucleares THP-1 a monocapas de HUVEC para el extracto del Ejemplo 1 y el compuesto 1 Conclusión: El extracto del Ejemplo 1 y el compuesto 1 inhibieron la adhesión celular de THP-1 monocítica estimulada por TNF-a a HUVEC a 10 µg/ml y 1 µM respectivamente . Puesto que estos compuestos inhiben la expresión en la superficie celular de las moléculas de adhesión en las HUVEC así como la adhesión de monocitos a HUVEC, pueden por ello obstaculizar la migración de leucocitos, evento clave el enfermedades inflamatorias crónicas y podrían demostrar su beneficio en varios trastornos inflamatorios.

Estudios in vivo Ejemplo 12 Liberación de factor de necrosis tumoral (TNF) -a inducida por lipopolisacárido (LPS) en ratones BALB/c. Se siguió el protocolo descrito por Fukuda T. et al (Eur. J. Pharmacol., 391: 317-320, (2000)). Los ratones BALB/c se dividieron en grupos de diez cada uno. La muestra de prueba suspendida en Tween 80 y carboxi metilcelulosa (CMC) 0.5%, se administró por vía oral (p.o.) a los ratones. Una hora después, se administró LPS disuelto en solución salina estéril, libre de pirógenos por vía intraperitoneal (i.p.) a una dosis de 1 mg/kg. El grupo de control negativo recibió solución salina mediante inyección i.p., mientras que los otros grupos recibieron LPS. Se usó Rolipram (30 mg/kg, p.o.) como medicamento estándar. Una hora y media después, en condiciones de anestesia con uretano (1.5 g/kg, i.p.) se extrajo sangre de la arteria abdominal con una jeringa de 1 mi recubierta con heparina (500 IU/ml) . La heparina (5 µl) se usó como anticoagulante en los tubos de recolección. El plasma se separó por centrifugación a 10000 p.m. y a temperatura ambiente, se tomaron alícuotas t se almacenaron a -70°C hasta que se realizó el análisis. Los niveles de TNF-a en las muestras de sangre se evaluaron mediante la prueba ELISA y se calculó el por ciento de inhibición de la liberación de TNF-a se comparó con el grupo de control. Los resultados se resumen en el Cuadro 7.

Cuadro 7: Liberación de factor de necrosis tumoral (TNF) -a inducida por lipopolisacárido (LPS) en ratones BALB/c para el extracto del Ejemplo 1 y para el compuesto 1.

Conclusión: El extracto del Ejemplo 1 y el compuesto 1, inhibe la liberación de TNF-a en ratones BALB/c.

Ejemplo 13 Artritis inducida por colágeno (CÍA) en ratones DBA/1J Ratones macho DBA/1J, de 8 a 10 semanas de edad, se inmunizaron con 200 µg de colágeno tipo II en forma de emulsión en auxiliar completo de Freund, mediante inyección intradérmica en la base de la cola. Veintiún días después, se administró a los ratones una aplicación de refuerzo de 100 µg de colágeno tipo II. En forma paralela se mantuvo un grupo de ratones sin tratamiento previo. Del día 23 en adelante, los ratones se evaluaron para detectar la aparición de artritis reumatoide utilizando el índice articular como parámetro. Los ratones con una calificación mínima de 2 para ocultamiento de la pata se ingresaron al estudio. El extracto del Ejemplo 1 se administró a una dosis de 400 m.p.k (miligramos por kilogramo de peso corporal) por vía oral dos veces al día durante 12 días. El compuesto 1 se administró a una dosis de 50 m.p.k. y 100 m.p.k. por vía oral dos veces al día durante 12 días. Se usó Enbrel (3 mg/kg) como estándar y se aplicó por vía subcutánea una vez al día. El volumen de la pata y el índice articular se registraron diariamente. Los datos se analizaron para evaluar su significación estadística . Al término del experimento las patas de los ratones se procesaron para evaluación histopatológica . Los datos de la reducción en el grosor de la pata y la reducción en el índice articular se resumen en el Cuadro 8.

Análisis histopatológico: Se evaluó el efecto benéfico del extracto del Ejemplo 1 y el compuesto 1 en la patología de ratones artríticos (CÍA) DBA/1J. La microscopía se llevó a cabo después de teñir con hematoxilina y eosina y también con safranina O las articulaciones sinoviales. El análisis histopatológico mostró que tanto el extracto del Ejemplo 1 como el compuesto 1 ejercieron efectos benéficos en términos de reducción de la destrucción del cartílago, la destrucción ósea y la sinovitis en comparación con el grupo tratado con vehículo. Conclusión: Tanto el extracto del Ejemplo 1 como el compuesto 1 ejercieron efectos benéficos en el modelo CÍA de artritis.

ESTUDIOS DE TOXICIDAD Ejemplo 14 Toxicidad oral aguda El extracto del Ejemplo 1 evaluó respecto a la toxicidad oral aguda en ratas Sprague Dawley de conformidad con los lineamientos establecidos en el Acta de Medicamentos y Cosméticos ("Schedule Y", Drugs and Cosmetics Act, 1940) (India) . El extracto del Ejemplo 1, suspendido en Tween 80 al 0.5% en agua, se administró por vía oral por sonda nasogástrica como dosis única a un grupo de cinco ratas macho y cinco ratas hembra a la dosis máxima viable de 2000 mg/kg de peso corporal. Los animales se observaron para detectar la mortalidad y los signos de intoxicación durante un periodo de 14 días posteriores a la dosis y también se registraron sus pesos corporales. La necropsia se practicó en todas las ratas a la terminación del estudio. Conclusión: En el presente estudio, la administración oral única del extracto del Ejemplo 1 a ratas Sprague Dawley a la dosis máxima viable de 2000 mg/kg, no causó mortalidad en las ratas tratadas. Se encontró que la mediana de la dosis letal (LD50) del extracto del Ejemplo 1 después de la administración oral como dosis única en ratas Dawley, tanto en machos como en hembras, es mayor de 2000 mg/kg de peso corporal .

Ejemplo 15 Toxicidad oral subaguda El estudio de toxicidad oral subaguda (día 28) del extracto del Ejemplo 1 en ratas Sprague Dawley se realizó de conformidad con los lineamientos establecidos en el "Schedule Y" de la Drugs and Cosmetics Act, 1940. (India) . A grupos de seis ratas macho y seis ratas hembra Sprague Dawley se les administraron dosis diarias de 0, 250, 500 ó 1000 mg/kg de peso corporal, del extracto del Ejemplo 1 por sonda nasogástrica durante 28 días y se sacrificaron el día 29 para evaluar la toxicidad. Las ratas se observaron diariamente para detectar signos de toxicidad. El peso corporal y el consumo de alimento se registraron durante el periodo experimental junto con todas las incidencias de mortalidad y signos de enfermedad. Se realizaron investigaciones de laboratorio en sangre a la terminación del estudio. Todos los animales, después de sacrificarse en forma terminal se sometieron a necropsia completa y se registró el peso de algunos órganos. La evaluación histopatológica se llevó a cabo en todos los tejidos mencionados en el protocolo en todos los animales de los grupos de control y de dosis altas. Todos los animales que recibieron el extracto del Ejemplo 1 a la dosis de 1000 mg/kg sobrevivieron a lo largo del periodo de tratamiento. No se observaron signos clínicos de toxicidad en ninguno de los animales tratados. Los datos del aumento de peso corporal y consumo de alimento indicaron que no hubo efectos adversos debidos al producto de prueba y a la dosis máxima de 1000 mg/kg. Conclusión: Con base en los resultados de este estudio, se encontró que el nivel de efectos adversos no observables (NOAEL) del extracto del Ejemplo 1 en ratas, después de la administración oral durante 28 días es mayor de 1000 mg/kg de peso corporal.

FORMULACIONES Ejemplo 16 Preparación de cápsulas Procedimiento general: Los ingredientes 01' a 05 en la cantidad especificada se pesaron y transfirieron a un mezclador adecuado. El contenido se mezcló muy bien y se adicionaron los ingredientes 09, 10 y 11 y el mezclado continuó. A esta mezcla se adicionaron los ingredientes 06, 07 y 08 y la masa se mezcló durante 30 a 45 minutes. La mezcla se pasó a través de un tamiz malla 40 y se utilizó para llenar las cápsulas. Cuadro 9: Formulación de cápsulas de Sphaeran thus indicus Cada cápsula contiene: Ejemplo 17 Preparación de tabletas Procedimiento general: Los ingredientes 01 a 05 en la cantidad especificada se pesaron y transfirieron a un mezclador adecuado. Se adicionó el ingrediente 13 y la masa húmeda se mezcló en forma homogénea. Se le adicionaron los ingredientes 09, 10, 11 y 12 y el mezclado continuó hasta obtener una masa homogénea. Esta masa húmeda se pasó por un tamiz malla 16 y los granulos húmedos se secaron a 70°C ± 5°C. Los ingredientes 06, 07 y 08 Se adicionaron a los granulos obtenidos previamente y la masase mezcló durante 30 a 45 minutos. Luego, la mezcla se pasó a través de un tamiz malla 40 y se obtuvieron los comprimidos utilizando el punzón adecuado. Cuadro 10: Formulación de las tabletas de Sphaeran thus indicus Cada tableta contiene: Sólo para granulación Ejemplo 18 Preparación del jarabe Procedimiento general Se pesó el ingrediente 01 y se le agregó el ingrediente 15 con agitación continua. A esta mezcla se le adicionaron las cantidades pesadas de los ingredientes 03, 04, 05, 06, 08, 09, 10, 11, 12 y 14 con agitación continua para su disolución. Los ingredientes 02 y 13 se pesaron y se disolvieron en el ingrediente 07. A esta mezcla se le adicionó agua purificada para ajustar el volumen a 10 mi. La solución obtenida se filtró a través de de un filtro prensa/tela nylon.

Cuadro 11: Formulación de jarabe de Sphaeran thus indicus Cada 10 mi de jarabe contienen: Ejemplo 19 Preparación formulación en crema Procedimiento general El ingrediente 01 se pesó y se suspendió en el ingrediente 17. Los ingredientes 02 a 07 se fundieron. Los ingredientes 08, 09, 10, 11, 13 y 14 se pesaron y se mezclaron con una porción de 18. El ingrediente 12 se pesó y se adicionó a la porción restante del ingrediente 18 y se mezclaron con los ingredientes 15 y 16. El contenido de todos los pasos se mezcló a 55°C, se homogenizó, se dejó enfriar y se empacó en un tubo adecuado.

Cuadro 12: Formulación en crema de Sphaeran thus indicus Cada 100 g de crema contiene: Ejemplo 20 Preparación de formulación en gel Procedimiento general El ingrediente 01 se pesó y se suspendió en el ingrediente 06. El ingrediente 04 se disolvió en el ingrediente 07. Se mezclaron los ingredientes 05 y 08. Se mezclaron los ingredientes 02 y 03. La mezcla se homogenizó y se empacó en un tubo adecuado. Cuadro 13: Formulación en gel de Sphaeran th us indicus Cada 100 g de gel contienen: Ejemplo 21 Preparación de la formulación en ungüento Procedimiento general Los ingredientes 02 a 06 se pesaron y se fundieron en un recipiente adecuado. A esta mezcla se le adicionó el ingrediente 01. Los ingredientes 07 y 08 se adicionaron a la mezcla. El contenido se mezcló homogéneamente y se empacó en un tubo adecuado. Cuadro 14: Formulación en ungüento de Sphaeranthus indicus Cada 100 g de ungüento contienen: Ejemplo 22 Preparación de tabletas Procedimiento general Los ingredientes 01 y 02 se pesaron por separado, se tamizaron a través de una malla 20 y se mezclaron. Los ingredientes 03 a 07 se pesaron y se tamizaron a través de malla 40. Los ingredientes 03, 04, 05 y 07 se mezclaron y a esta mezcla se le adicionaron los ingredientes 01 y 02. Luego, se adicionó a esta mezcla el ingrediente 06 y todo se mezcló. La mezcla lubricada obtenida se comprimió en una tableteadora adecuada. Cuadro 15: Formulación en tableta del compuesto 1 Cada tableta contiene: Ejemplo 23 Preparación de tableta Procedimiento general Los ingredientes 01 y 02 se pesaron por separado y se tamizaron a través de malla 20. El ingrediente 04 se disolvió en el ingrediente 08 con agitación. La mezcla anterior se sometió a granulación utilizando una solución aglutinante. La masa húmeda se pasó a través de una malla adecuada. La masa tamizada se secó a temperatura ambiente (25 °C) y luego a 40 °C aproximadamente. La masa seca se tamizó a través de una malla adecuada. Los ingredientes 03, 05 y 07 se tamizaron por separado a través de una malla 40 y se mezclaron. Estos se adicionaron a la masa seca y se mezclaron. A esta mezcla se le adicionó el ingrediente 06 y la mezcla lubricada se comprimió con una tableteadora adecuada . Cuadro 16: Formulación en tableta del compuesto 1 Cada tableta contiene: Ejemplo 24 Preparación de cápsulas Procedimiento general Los ingredientes 01 y 02 se pesaron por separado, se tamizaron a través de un tamiz malla 20 y se mezclaron. El ingrediente 03 se pesó y se tamizó a través de una malla 40. Todos los ingredientes se mezclaron y se lubricaron con el ingrediente 04. La mezcla se transfirió a cápsulas de gelatina dura utilizando el equipo adecuado.

Cuadro 17: Formulación de cápsulas del compuesto Cada cápsula contiene:

Claims (26)

1. REIVINDICACIONES 1. Una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de un extracto de las cabezas florales y frutales de la planta Sphaeranthus indicus como ingrediente activo y vehículos farmacéuticamente aceptables.
2. 2. La composición según la reivindicación 1, en donde el extracto de Sphaeranthus indicus contiene un marcador bioactivo.
3. 3. La composición según la reivindicación 2, en donde el marcador bioactivo contenido en el extracto de Sphaeranthus indicus es 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3-metilen-3a, 4, 5, 5a, 6, 7, 8, 9b-octahidro-3H-nafto [1, 2-b] furan- 2 -ona (compuesto 1) .
4. 4. La composición según la reivindicación 3, en donde el extracto de Sphaeranthus indicus contiene de 2 a 9% del compuesto 1.
5. 5. Una composición que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de 3a-hidroxi-5a, 9-dimetil-3 -metilen-3a, 4, 5, 5a, 6, 7, 8, 9b-octahidro-3H-nafto [1, 2-b] furan-2-ona (compuesto 1) como ingrediente activo y vehículos farmacéuticamente aceptables.
6. 6. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde la composición se destina al tratamiento de trastorno mediado por el factor de necrosis tumoral a (TNF-a) e interleucinas (IL-1, IL-6, IL-8) .
7. 7. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde la composición está adaptada para tratamiento de un trastorno inflamatorio.
8. 8. La composición según la reivindicación 7, en donde el trastorno inflamatorio es mediado por TNF-a.
9. 9. La composición según la reivindicación 7, en donde el trastorno inflamatorio es mediado por interleucinas (IL-1, IL-6, IL-8).
10. 10. La composición según la reivindicación 7, en donde el trastorno inflamatorio es mediado por la molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM-l) , la molécula de adhesión celular vascular 1 (VCAM-1) y E-selectina.
11. 11. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde la composición se administra por vía oral, tópica o transdérmica a un individuo que necesita el tratamiento para un trastorno inflamatorio.
12. 12. La composición según la reivindicación 11, en donde la composición se formula para la administración oral en la forma de una tableta, cápsula o j árabe .
13. 13. La composición según la reivindicación 11, en donde la composición se formula para administración tópica en la forma de crema, gel o ungüento.
14. 14. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 13, en donde el trastorno inflamatorio se selecciona entre: enfermedad intestinal inflamatoria, artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, artritis psoriásica, osteoartritis, artritis reumatoide refractaria, artritis crónica no reumatoide, osteoporosis/resorción ósea, enfermedad cardiaca coronaria, vasculitis, colitis ulcerativa, psoriasis, síndrome de dificultad respiratoria en adultos, diabetes, trastornos de hipersensibilidad cutánea retardada y enfermedad de Alzheimer.
15. 15. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 13, en donde el trastorno inflamatorio es artritis reumatoide.
16. 16. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 13, en donde el trastorno inflamatorio es enfermedad inflamatoria intestinal.
17. 17. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 13, en donde el trastorno inflamatorio es colitis ulcerativa.
18. 18. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 13, en donde el trastorno inflamatorio es ateroesclerosis.
19. 19. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que además contiene al menos un agente antinflamatorio.
20. 20. La composición según la reivindicación 19, en donde el agente antinflamatorio se selecciona entre prednisolona, hidrocortisona, metotrexato, sulfasalazina, naproxeno, diclofenaco, ibuprofeno.
21. 21. Uso de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno inflamatorio .
22. 22. Uso de la composición según la reivindicación 21, en donde el trastorno inflamatorio se selecciona entre: enfermedad intestinal inflamatoria, artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, artritis psoriásica, osteoartritis, artritis reumatoide refractaria, artritis crónica no reumatoide, osteoporosis/resorción ósea, enfermedad cardiaca coronaria, vasculitis, colitis ulcerativa, psoriasis, síndrome de dificultad respiratoria en adultos, diabetes, trastornos de hipersensibilidad cutánea retardada y enfermedad de Alzheimer.
23. 23. Uso de la composición según las reivindicaciones 21 ó 22, en donde el trastorno inflamatorio es artritis reumatoide.
24. 24. Uso de la composición según las reivindicaciones 21 ó 22, en donde el trastorno inflamatorio es enfermedad inflamatoria intestinal.
25. 25. Uso de la composición según las reivindicaciones 21 ó 22, en donde el trastorno inflamatorio es colitis ulcerativa.
26. 26. Uso de la composición según las reivindicaciones 21 ó 22, en donde el trastorno inflamatorio es ateroesclerosis.