KR100962984B1 - 유비퀴논-9를 함유하는 암 치료 또는 예방용 약제학적조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은, 유비퀴논-9(ubiquinone-9) 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 하여 토포이소메라제Ⅰ(topoisomeraseⅠ)활성을 억제하여 아폽토시스에 의해 암 세포를 사멸하는 것을 특징으로 하는 암 치료 또는 예방용 약제학적 조성물과 상기 약제학적 조성물을 이용하여 암 세포를 사멸하는 치료 또는 예방방법에 관한 것이다.

유비퀴논-9, 토포이소메라제Ⅰ, 혈액암 세포

Description

유비퀴논-9를 함유하는 암 치료 또는 예방용 약제학적 조성물{A Pharmaceutical Composition for Treating or Preventing Cancer Comprising Ubiquinone-9 or Pharmaceutically Acceptable Salt Thereof}

본 발명은 유비퀴논-9 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 하는 암 치료 또는 예방용 약제학적 조성물과 상기 약제학적 조성물을 사용하여 암 세포를 사멸하는 방법에 관한 것이다. 좀 더 상세하게는, 유비퀴논-9가 토포이소메라제Ⅰ 활성을 억제하여 암세포를 사멸하는 암 치료 또는 예방용 약제학적 조성물과 암 세포를 사멸하는 방법에 관한 것이다.

암은 혈액암에 의해 쉽게 예시되는 세포분화의 이상으로 간주될 수 있다. 성숙-정지 세포는 증식을 계속하고, 미성숙 암 세포의 집단이 출현하며 불리한 임상적인 소견을 나타낸다.

거의 모든 임상적으로 효과적인 항암제는 DNA 합성 또는 전사의 억제제이다. 항암 활성은 발암성 분화 정지의 단계를 지나서 민감성 암세포의 성숙을 유도하여 그들의 비제한성 증식능을 제거하는 DNA 표적 제제의 활성으로부터 비롯된다는 생각이 많은 연구 속에 함축되어 있다. 이러한 연구로부터 DNA-특이성 억제제만이 다 양한 종양 세포주의 분화를 효과적으로 유도할 수 있다는 것이 명백해졌다.

DNA 토포이소메라제Ⅰ및 Ⅱ는 각각 DNA의 단일 또는 이중 가닥을 끊고 다시 연결할 수 있는 능력에 의하여 DNA 및 염색사 내에서 구조적인 변이를 매개할 수 있는 핵 내 효소들이다. 이러한 효소는 DNA 위상 이성질체들 사이에서 여러 형태의 상호전환을 촉매할 수 있다.

토포이소메라제의 기작 중에서 중요한 면 중의 하나는 반응하는 동안에 단백질-DNA 공유 결합체를 형성하는 작용인데, 토포이소메라제Ⅰ은 효소 절단 부위의 3'말단 사이의 포스포티로실 결합을 형성하는 반면에, 토포이소메라제Ⅱ는 포스포티로실 결합이 5'말단 사이에서 형성된다. DNA 위상에 대한 이러한 작용 및 DNA 가닥의 절단 및 재연결로 미루어 볼 때, 토포이소메라제는 다양한 세포내 생명현상에 관여한다는 것이 명백하다.

따라서 이러한 토포이소메라제의 활성을 억제함으로써 항암효과를 일으키는 의약이 개발될 수 있었다. 하이캄틴은 난소암, 소세포폐암 및 자궁경부암 치료제로서, 아드리아마이신은 유방암 치료제로서, 그리고 토포티칸은 난소암, 유방암, 소세포 폐암, 대장암, 신장암 치료제로서 인정받고 있다.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해서 안출된 것으로서, 본 발명은 토포이소메라제Ⅰ 억제제를 사용하여 암을 사멸하는 약제학적 조성물을 제공하고 상기 약제학적 조성물을 사용하여 암을 치료 또는 예방하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명에 따른 암을 치료 또는 예방하기 위한 약제학적 조성물은 유효성분으로서 유비퀴논-9 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염; 및 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 상기 암이 난소암, 소세포폐암, 자궁경부암, 유방암, 대장암, 혈액암인 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 상기 유효성분을 0.0001 내지 100 mg/kg/일 함유하거나, 그의 세포내 농도가 50 μM 내지 200 μM 인 것을 특징으로 한다.

더 바람직하게는, 상기 유효성분을 0.001 내지 10 mg/kg/일 함유하거나, 그의 세포내 농도가 100 μM 내지 120 μM 인 것을 특징으로 한다.

또한, 암을 치료 또는 예방하는 방법은 상기의 약제학적 조성물을 인간을 제외한 동물에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.

또한 암의 치료 또는 예방을 보조하기 위한 건강기능식품은 유효성분으로서 유비퀴논-9 또는 그의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 식품학적으로 허용 가능한 첨가제를 포함하는 것을 특징으로 한다.

이상에서 상술한 바와 같이 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 유비퀴논-9 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염; 및 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 유효성분으로 하여 토포이소메라제Ⅰ의 활성을 억제하여 암 세포를 사멸하는 효과가 있다. 특히, 유비퀴논-9가 암 세포를 아폽토시스에 의해 사멸시키는 방법을 제공함으로써 본 발명은 암을 치료하는데 탁월한 효과가 있다.

본 발명에 따른 하기 화학식 1의 유비퀴논-9는 하기 실시예의 결과로부터 입증되듯이 혈액암과 같은 암 치료에 사용될 수 있다. 구체적인 실시예에 따라 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들 구체적인 예에 한정되는 것은 아니다.

따라서 본 발명은 (a) 화학식1의 화합물 및 (b) 약제학적으로 허용되는 염; 및 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 함유함을 특징으로 하는 암 관련 질병을 치료 또는 예방하기 위한 약제학적 조성물을 제공한다.

본 명세서에서 용어 "약제학적 조성물(pharmaceutical composition)"은 본 발명의 활성 화합물과 약제학적으로 허용되는 담체와 같은 다른 화학 성분의 혼합물을 의미한다. 약제학적 조성물은 생물체 내로 화합물의 투여를 용이하게 한다. 용어 "담체(carrier)"는 세포 또는 조직내로 화합물이 부가되는 것을 용이하게 하는 화합물로 정의된다. 이러한 담체로는 락토즈, 덱스트로즈, 스크로스, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

화합물을 투여하는 다양한 기술들이 존재하는데, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골(macrogol), 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 사용하기에 적합한 약제학적 조성물에는 활성 성분이 그의 의도된 목적을 달성하기에 유효한 양으로 함유된다. 구체적으로, 치료 유효량은 치료될 객체의 생존을 연장하거나, 질환의 증상을 방지, 경감 또는 완화시키는데 유효한 화합물의 양을 의미한다. 화학식 1의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 화학식 1의 화합물은 0.0001 내지 100 mg/kg/일으로, 바람직하게는 0.001 내지 10 mg/kg/일으로 투여하는 것이 좋다. 또는 화학식 1의 화합물의 세포내 농도가 50 μM 내지 200 μM 으로, 바람직하게는 100 μM 내지 120 μM 가 되도록 하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위을 한정하는 것은 아니다.

또한, 화학식 1의 화합물과 그의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 식품학적 으로 허용 가능한 첨가제를 포함하는 건강기능식품으로 제조하여 암의 치료 또는 예방을 보조하는데 사용될 수도 있다.

실시예 1 (유비퀴논-9 정제)

큰느타리버섯(Pleurotus eryngii) 2 kg을 건조하고 가루로 만든 후 클로로포름 10 L로 7일 동안 추출하였다. 클로로포름 추출액을 농축한 후 진공액상크로마토그라피(vacuum liquid chromatography)에 걸어 헥산(hexane), 에틸아세테이트(EtOAc), 메탄올(MeOH)을 사용하여 분획하였다. 이들 중 헥산 추출물(3.8 g)을 실리카 겔 (5-30 cm, 230-400 mesh) 컬럼에 걸어 헥산/디에틸에테르 구배 [100:1 (0.2 L), 80:1 (0.2 L), 60:1 (0.2 L), 40:1 (0.4 L), 20:1 (0.4 L), 10:1 (0.1 L)]를 이용하여 A에서 F까지의 분획을 받았다. 분획 E를 실라카 겔 컬럼(1.5-20 cm, 230-400 mesh, 90 mg)에 걸어 헥산/디에틸에테르 (100:1 → 10:1)으로 용출하면서 분획하여 유비퀴논-9을 얻었다.

실시예 2 (유비퀴논-9의 구조 분석)

실시예 1에서 얻은 유비퀴논-9의 구조는 다음과 같은 실험 데이터를 통해서 확인하였다.

(1) 노란색

(2) 녹는 점(mp) : 44-45℃

(3) EIMS m/z (relative intensity) : 797 (M⁺, 22 %), 795 (22), 235 (100), 197 (55), 196 (12)

(4) HREIMS m/z : 794.6213 [M⁺] (calcd for C₅₄H₈₂O₄, 794.6216)

(5) IR (KBr) _max : 2923, 2852, 1780, 1742, 1650, 1611, 1455 cm^-1

(6) ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)

:δ 1.59 (21H, s), 1.67 (3H, s), 1.74 (3H, s), 1.93-2.09 (32H, m), 2.01 (3H, s), 3.18 (2H, d, J = 6.98 Hz), 3.97 (3H, s), 3.99 (3H, s), 4.93 (1H, t, J = 6.97 Hz), 5.06 (1H, m), 5.10 (7H, m)

(7) ¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃)

:δ 184.7 (C-4, s), 183.9 (C-1, s), 144.4 (C-5, s), 144.3 (C-6, s), 141.7 (C-2, s), 138.9 (C-3, s), 137.6 (C-3', s), 1.34-1.35 (4 carbon of isoprene), 131.2 (4 carbon of isoprene), 123.9-125.1 (CH of isoprene), 118.9 (C-2', t), 61.1 (OCH₃, s), 39.7 (CH₂ of isoprene), 25.7 (CH₃ of isoprene), 25.3 (C-1', t), 17.7 (CH₃ of isoprene), 16.4 (C-4', q), 16.2 (CH₃ of isoprene), 11.9 (C-3, q).

실시예 3 (토포이소메라제Ⅰ활성 측정)

토포이소메라제Ⅰ 활성은 초나선(supercoil)의 DNA를 이완시키는 정도를 이용하여 아가로스 겔 전기영동으로 확인할 수 있다.

10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM KCl, 4 mM MgCl₂, 0.1 mM EDTA, 10 ㎍/ml 소혈청 알부민이 함유된 완충액에 1 ㎍의 초나선 pUC118 DNA, 토포이소메라제Ⅰ (1 unit)을 혼합하고, 30℃에서 1시간 인큐베이션하였다. 그리고 유비퀴논-9를 다양한 농도로 첨가하였다. 반응 후 전체 반응액 1/4 부피의 스톱 완충액(stop buffer, 50 mM EDTA, 1 % SDS, 50 % glycerol, 0.05 % bromophenol blue)를 가한 후, 0.7 % 아가로스 겔에서 전기영동을 하였다. 전기영동 한 겔을 브롬화 에티듐(0.5 ㎍/ml)으로 염색한 후, 300 nm의 자외선 하에서 pUC118 DNA를 관찰하였다.

초나선의 pUC118 DNA를 기질로 하여 토포이소메라제Ⅰ의 활성을 측정한 결과, 도 1에서 보는 바와 같이 토포이소메라제Ⅰ을 넣지 않았을 때에 비해(lane 1) 토포이소메라제Ⅰ을 넣고 반응했을 때(lane 2) 이완된(relaxed) 형태의 DNA가 나타났다. 반응액에 유비퀴논-9를 0.01~1 mM 첨가하였을 때(lanes 3~7), 유비퀴논-9 농도가 증가함에 따라 토포이소메라제Ⅰ의 활성 저해 정도가 증가되었으며, 약 50 μM의 유비퀴논-9 농도에서 토포이소메라제Ⅰ 활성의 50 %가 저해되었다. 그래서 유비퀴논-9의 토포이소메라제 I에 대한 IC₅₀ 값은 약 50 μM이다.

실시예 4 (혈액암 세포 U937 및 정상세포의 사멸도 측정)

DNA 토포이소메라제Ⅰ 저해제로 판명된 유비퀴논-9가 실제로 혈액암세포를 죽일수 있는지 조사하였다.

96-홈판(96-well plate)에 배지 100 μl 씩 넣고 사람의 혈액암 세포인 U937 세포(ATCC사, 미국)를 1 × 10⁴개 심어 16 시간 배양한 후, 유비퀴논-9를 0-400 μM의 농도로 첨가하여 37 ℃, 5 % CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 48 시간 후 MTS [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium] 용액을 판(well) 당 20 μl 씩 첨가하고, 37 ℃, 5 % CO₂ 인큐베이터에서 2시간 정치한 다음 ELISA reader로 흡광도를 측정 하였다.

도 2.에서 보는 것처럼, 100 μM의 유비퀴논-9 농도에서 약 42 %의 U937 세포가 죽으며, 200 μM의 농도에서는 거의 모든 U937 세포가 죽는 것으로 나타났다. 그래서 유비퀴논-9은 혈액암 세포를 죽일 수 있으며, 이 때 LD₅₀ 은 약 110 μM인 것으로 판명되었다.

어떤 약제가 효과적인 항암제로 사용되기 위해서는 적어도 암세포를 죽이는 약제 농도에서는 정상세포가 영향을 받지 않아야 한다. 그래서 암세포가 아닌 정상세포에 대한 유비퀴논-9의 세포독성을 조사하였다. 쥐와 래트(rat)의 정상 섬유아세포(fibroblast) 세포주인 NIH3T3, 3Y1를 배양하면서 유비퀴논-9를 50-400 μM 첨가하였다. 48시간 동안 처리한 후 MTS assay(측정)로 세포사멸 정도를 측정하였다. 그 결과, 도 3.에서 보는 바와 같이 약 50 %의 U937세포를 죽이는 110 μM 농도에서도 유비퀴논-9는 NIH3T3 및 3Y1 세포를 전혀 죽이지 않았으며, 낮은 농도에서는 오히려 정상세포의 생존을 촉진하였다. 그리고 암세포를 거의 다 죽이는 200 μM 농도에서는 3Y1세포는 거의 영향을 받지 않았고 NIH3T3 세포는 50 % 사멸하였다.

따라서 유비퀴논-9는 항암제로 사용될 수 있는 약제임을 확인할 수 있다.

대체로 항암제로 사용되는 약제는 암세포를 아폽토시스로 죽이며, 토포이소메라제I 저해제 역시 암세포를 아폽토시스로 죽이는 것으로 보고되었다. 그래서 이하에서는 유비퀴논-9에 의한 세포사멸이 아폽토시스에 의한 것인지 여러 가지 방법으로 조사하였다.

실시예 5 (웨스톤 블로팅에 의한 아폽토시스 측정)

세포가 아폽토시스로 죽을 때는 PARP(poly ADP-ribose polymerase) 및 프로카스파제-3(procaspase-3)의 절단이 특징적으로 일어나기 때문에, 이를 통해 아폽토시스 정도를 측정할 수 있다.

그래서 먼저 유비퀴논-9(50~100 μM)로 48시간 처리한 U937 세포와 처리하지 않은 U937 세포를 각각 모아 용해시킨 후 세포 추출물을 만들고, 이를 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 하여 단백질을 분리한 후 니트로셀룰로스 막에 이동시켰다. 이러한 니트로셀룰로스 막을 이용하여 절단된 PARP를 인식하는 항체와 프로카스파제-3을 인식하는 항체로 웨스톤 블로팅(Western blotting)을 수행하였다.

그 결과, 도 4에서 보는 바와 같이, 유비퀴논-9로 처리한 경우 처리하지 않은 대조구에 비해 절단된 PARP 단편(89 kDa)이 증가한 반면, 절단되지 않은 프로카 스파제-3의 양은 감소하였다. 이러한 결과로부터 유비퀴논-9가 U937 혈액암세포를 아폽토시스에 의해 죽인다는 사실을 확인할 수 있다.

실시예 6 (DNA 단편화 분석에 의한 아폽토시스 측정)

세포가 아폽토시스로 죽을 때 나타나는 또다른 특징은 세포 내 염색체 DNA의 단편화(fragmentation)이다. 그래서 유비퀴논-9에 의해 혈액암 세포가 죽을 때 DNA의 단편화가 일어나는지 조사하였다.

유비퀴논-9를 처리하여 48시간 배양한 U937 세포를 1,000×g에서 5분간 원심 분리하고, 4℃의 PBS로 수세한 후, 1 ml의 라이시스 완충액(Lysis buffer, 200 mM NaCl, 0.2 % SDS, 100 mM Tris-HCl, pH 7.4, 5 mM EDTA)를 넣어 얼음에서 45분간 용해시켰다. 15,000×g에서 20분간 원심 분리하여 침전물이 딸려오지 않도록 조심스럽게 상등액을 모으고, 여기에 페놀/클로로포름(1:1)을 상등액 부피와 동량으로 넣어 반응시켜 단백질을 제거시키고, 99 % 이소프로판올(isopropanol)과 3 M 아세트산(acetic acid)를 넣어 -20 ℃에서 하룻밤 정치하여 염색체 DNA를 침전시켰다. 염을 제거하기 위해 75 % 에탄올(ethanol)로 씻어주고 DNA를 말린 후, Tris-EDTA 완충액(buffer) (10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA)로 희석시켜 RNase A(0.1 mg/ml)를 첨가하여 37℃에서 3시간 반응시켰다. 1 % 아가로스 겔에 전기 영동한 후 0.5 ㎍/ml의 EtBr로 염색하여 DNA를 확인하였다.

그 결과 도 5.에서 보는 바와 같이 유비퀴논-9 (50-100 μM)로 48시간 처리하였을 때 특징적인 DNA 래더(ladder)가 나타났다. 도 5.에서 SM은 DNA 크기의 마 커(size marker)를 나타낸다. 이러한 결과를 통해, 유비퀴논-9가 U937 혈액암세포를 아폽토시스에 의해 죽인다는 것을 확인할 수 있다.

실시예 7 (FACS 분석 분석에 의한 아폽토시스 측정)

아폽토시스의 또 다른 특징은 핵의 단편화로 인한 sub-G1기 세포의 증가이다. 그래서 유비퀴논-9로 처리한 U937세포의 아폽토시스 정도를 유세포분석기(flow cytometry)로 측정하였다.

유비퀴논-9로 48시간 처리한 U937 세포와 유비퀴논-9로 처리하지 않은 U937 세포를 각각 모아 65 % 에탄올로 고정했다. 고정된 세포를 50 mg/ml DNase-free RNase A, 25 mg/ml 요오드화 프로피디엄(propidium iodide), 0.6 % 구연산소다(sodium citrate) 용액 (37 ^oC)으로 30분간 처리한 후, 세포분리기(Coulter Elite ESP Cell Sorter (Beckman))로 DNA 함량을 유세포분석을 하였다.

도 6.에서 보는 바와 같이 유비퀴논-9(50-100 μM)로 48시간 처리하였을 때, sub-G1기의 세포가 각각 46.9 %와 56.2 %로서 대조구(6.8 %)보다 매우 증가하였다. 이러한 결과를 통해 유비퀴논-9가 U937 혈액암 세포를 아폽토시스에 의해 사멸함을 확인할 수 있다.

실험예 8 (약제학적 조성물의 제조)

산제로 제조하는 경우에는 20 mg의 유비퀴논-9, 100 mg의 유당, 10 mg의 탈 크를 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

정제로 제조하는 경우에는 10 mg의 유비퀴논-9, 100 mg의 옥수수전분, 100 mg의 유당, 2 mg의 스테아린산 마그네슘을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

캅셀제로 제조하는 경우에는 10 mg의 유비퀴논-9, 3 mg의 결정성 셀룰로오스, 14.8 mg의 락토오스, 0.2 mg의 마그네슘 스테아레이트를 혼합한 후 젤라틴 캡슐에 충전하여 통상상의 캡슐제 제조방법에 캅셀제를 제조한다.

주사제를 제조하는 경우에는 10 mg의 유비퀴논-9, 180 mg의 만니톨, 2974 mg의 주사용 멸균 증류수, 26 mg의 Na₂HPO₄12H₂ 을 가지고 제조하되, 통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

액제로 제조하는 경우에는 20 mg의 유비퀴논-9, 10 g의 이성화당, 5 g의 만니톨을 정제수에 용해시키고, 레몬향을 적량 가하여 전체 100 ㎖가 되도록 정제수를 가하여, 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

실시예 9 (건강음료의 제조)

100 ㎎의 유비퀴논-9, 15 g의 비타민 C, 100 g의 비타민 E (분말), 19.75 g의 젖산철, 3.5 g의 산화아연, 3.5 g의 니코틴산아미드, 0.2 g의 비타민 A, 0.25 g의 비타민 B₁, 0.3 g의 비타민 B₂, 정량의 물을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

도 1. 유비퀴논-9에 의한 토포이소메라제I 활성 저해를 보여주는 도면이다.

도 2. 유비퀴논-9에 의한 U937 세포 사멸을 보여주는 도면이다.

도 3. 정상세포 NIH3T3, 3Y1에 대한 유비퀴논-9의 영향을 보여주는 도면이다.

도 4. PARP와 프로카스파제-3의 절단 측정을 통한 유비퀴논-9에 의한 U937 세포의 아폽토시스 결과를 보여주는 도면이다.

도 5. 염색체 DNA의 단편화 조사를 통한 유비퀴논-9에 의한 U937 세포의 아폽토시스 결과를 보여주는 도면이다.

도 6. 유세포 분석기로 측정한 유비퀴논-9에 의한 U937 세포의 아폽토시스 결과를 보여주는 도면이다.

Claims (6)

1. 토포이소머라제 I을 억제하는 유효성분인 유비퀴논-9과, 그의 약제학적으로 허용되는 염, 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 난소암, 소세포폐암, 자궁경부암, 유방암, 대장암 및 혈액암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 암의 치료 또는 예방하기 위한 약제학적 조성물.
2. 삭제
3. 제 1 항에 있어서, 유효성분을 0.0001 내지 100 mg/kg/일 함유하거나, 그의 세포내 농도가 50 μM 내지 200 μM인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
4. 제 3 항에 있어서, 유효성분을 0.001 내지 10 mg/kg/일 함유하거나, 그의 세포내 농도가 100 μM 내지 120 μM인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
5. 제 1 항, 제3항 또는 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 약제학적 조성물을 인간을 제외한 동물에게 투여하는 단계를 포함하는 암을 치료 또는 예방하는 방법.
6. 토포이소머라제 I을 억제하는 유효성분인 유비퀴논-9과 식품학적으로 허용 가능한 첨가제를 포함하는 암 예방을 보조하기 위한 건강기능식품.

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