CN110522908A - TACI-Fc融合蛋白用于制备治疗视神经脊髓炎谱系疾病和多发性硬化之药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及应用B淋巴细胞刺激因子受体‑抗体融合蛋白治疗自身免疫性疾病领域，更具体而言，涉及TACI‑Fc融合蛋白用于制备治疗视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)和多发性硬化(MS)之药物的应用。

Description

TACI-Fc融合蛋白用于制备治疗视神经脊髓炎谱系疾病和多 发性硬化之药物中的应用

技术领域

本发明涉及应用B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白治疗自身免疫性疾病领域，更具体而言，涉及TACI-Fc融合蛋白用于制备治疗视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)和多发性硬化(MS)之药物的应用。

背景技术

视神经脊髓炎(NMO)是一种视神经与脊髓同时或相继受累的急性或亚急性脱髓鞘病变。该病由Devic(1894)首次描述，其临床特征为急性或亚急性起病的单眼或双眼失明，在其前或其后数日或数周伴发横贯性或上升性脊髓炎，研究资料显示NMO占所有脱髓鞘病的比例最高可达22％，在西方国家比例偏低，在非高加索人比例偏高。该疾病以B细胞免疫紊乱为主，临床上以视神经和脊髓同时或相继受累为主要特征，病变多呈弥散性，可累及一个或数个脊髓节段；性质为轻重不等的脱髓鞘，硬化斑和坏死空洞形成，严重程度不一。

流行病学资料显示：视神经脊髓炎(NMO)的患病率是0.3-4.4/100,000。年发病率是0.05–0.4/100,000。男女均可发病，女性/男性患病比率约为9-12:1。平均发病年龄30-40岁，约10％的NMO患者发病年龄小于18岁。家族性NMO病例少见，在所有确诊NMO中少于3％。亚洲人群及高加索人群与NMO易感性相关。由此可见，遗传因素在NMO发病中有一定作用，但不是发病的主要原因。

视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)是一组疾病的总称。2014年，NMO诊断国际专家组(IPND)利用系统回顾及电子问卷调查形式达成了NMOSD的新诊断标准。将NMO统一纳入了NMOSD的规范体系，并且根据AQP4抗体状态，分为AQP抗体阳性和AQP4抗体阴性两大类。该病的主要临床类型为：视神经脊髓炎(NMO)、复发性视神经炎(RON)、纵向延伸横贯性脊髓炎(LETM)、视神经脊髓型多发性硬化(OSMS)、长阶段横断性脊髓炎、单侧或双侧视神经炎、伴自身免疫性疾病的视神经炎或脊髓炎、视神经炎或脊髓炎伴有症状性或无症状性脑内病灶等。NMOSD在东西方人群种族间存在差异，我国的NMOSD多发，患者群体大，并且患者人数在逐年扩大。

多发性硬化(MS)也是一种以中枢神经系统白质脱髓鞘为主要病理特点的自身免疫性疾病，其以T细胞免疫紊乱为主，其中以中枢神经系统白质内多发性脱髓鞘斑块为特征性病理改变，多发于侧脑室周围、视神经、脊髓、小脑和脑干的白质，该病多发于成年早期，女性多于男性，大多数患者表现为反复发作的神经功能障碍，多次缓解复发，病情每况愈下。已经有临床研究结果证实：多发性硬化患者症状以肢体麻木、疼痛或感觉异常的最多，以肌无力次之。

多发性硬化特征性病理改变是中枢神经系统白质内多发性脱髓鞘斑块，多位于侧脑室周围，伴反应性胶质增生，也可有轴突损伤。病变可累及大脑白质、脊髓、脑干、小脑和视神经。脑和脊髓冠状切面肉眼可见较多粉灰色分散的形态各异的脱髓鞘病灶，大小不一，直径1～20mm，以半卵圆中心和脑室周围，尤其是侧脑室前角最多见。镜下可见急性期髓鞘崩解和脱失，轴突相对完好，少突胶质细胞轻度变性和增生，可见小静脉周围炎性细胞(单核、淋巴和浆细胞)浸润。病变晚期轴突崩解，神经细胞减少，代之以神经胶质形成的硬化斑。

根据发病情况，MS分为原发性MS(PPMS)、复发性MS(RRMS)和继发性MS(SPMS)。原发性MS的症状会不断恶化，但通常没有明显的复发或缓解期，大约有15％的MS患者被诊断为这种类型，剩下的85％都是复发形式的MS(RMS，包括RRMS和SPMS)，复发性MS的患者通常会经历症状恶化、恢复、再恶化的循环，这是由于炎症消退，我们的身体启动修复机制，但是免疫系统在修复后又会继续攻击髓鞘，导致病人病情循环往复。而一旦炎症在同一个位置反复出现，继发性MS就发生了，复发性MS的患者有80％最终会发展为继发性MS。

目前能够有效治疗视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)和多发性硬化(MS)的药物并不多。

针对NMOSD治疗而言，FDA已授予抗CD19单克隆抗体MEDI-551治疗视神经脊髓炎(NMO)和视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)的孤儿药地位。MEDI-551是一种人源化单克隆抗体，以高亲和力靶向结合CD19蛋白，该蛋白表达于广泛的B细胞上，包括名为浆母细胞(plasmablast)的特定B细胞。研究表明，在这些浆母细胞中产生的针对AQP4的自身抗体AQP4-Ab(或NMO-IgG)，在NMO的发病机制中发挥着关键作用。MEDI-551能够直接结合浆母细胞表面的CD19蛋白，并耗竭这些浆母细胞。目前，MEDI-551正处于一个全球临床试验阶段，正被研究用于NMO和NMOSD的潜在治疗。此外，MEDI-551治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤已处于II期临床。在此之前，尚无药物获批治疗NMO及NMOSD。

针对MS治疗而言，由于尚无治愈方法，故提倡早期治疗：急性期治疗以减轻症状、尽快改善残疾程度为主；缓解期治疗即疾病修正治疗(DMT)，以降低复发率、减少脑组织和脊髓病灶数目、延缓疾病进程，以及提高患者生活质量为主。其治疗可以分为急性期治疗和缓解期治疗。

针对急性期治疗，首选静脉注射甲泼尼龙(IVMP)：剂量为1g静脉滴注(1次/d)，每3日剂量减半直至停药，减至64mg时改为口服，短期激素冲击治疗可缩短急性期神经功能损害之恢复时间，但长期疗效尚不十分确定，规律的激素冲击治疗或许可以改善复发-缓解型多发性硬化患者长期预后。如果激素治疗效果不满意或不能耐受其不良反应，可以大剂量静脉注射免疫球蛋白和(或)血浆置换疗法。

针对缓解期治疗，美国食品与药品管理局(FDA)已批准10种用于多发性硬化的疾病修正药物(DMDs)。其中一线药物5种，包括醋酸格列默、芬戈莫德(FTY-720)等。二线药物5种，包括那他珠单抗(natalizumab)、米托蒽醌(mitoxantrone)、特立氟胺(terifunomide)、富马酸二甲酯(DMF)和克拉屈滨(cladribine)。上述药物均能有效减少复发和残疾进展，提高患者生活质量，因此对复发-缓解型多发性硬化行免疫调节治疗是十分必要的，目前国内尚无国产原研的相关药物上市。

TACI(Transmembrane activator and CAML interactor)最早是由美国著名学术机构St.Jude儿童医院科学家VonBulow和Bram发现的，但后来的研究发现，TACI胞外区的自然序列存在蛋白质易于降解的问题，不适合作为药物生产。此后，有几家公司对TACI原分子做了改进，包括美国著名的生物技术公司基因泰克(Genentech)、Amgen和ZymoGenetics。目前，ZymoGenetics公司与瑞士默克雪兰诺公司合作的TACI融合蛋白Atacicept已针对系统性红斑狼疮(SLE)、RA、淋巴瘤等疾病进行临床试验，结果表明Atacicept具有明确的生物学活性，无明显的副作用。

但是，最新的数据显示，Atacicept(阿泰西普)针对视神经炎(属于视神经脊髓炎谱系疾病NMOSD的一种)的临床实验(February 17,2016)失败，表明TACI融合蛋白可能无法用于治疗NMOSD。2年前，Atacicept(阿泰西普)治疗MS的随机、双盲、安慰剂对照的II期临床试验也宣告失败(MAR 20,2014)，结果表明atacicept治疗会导致MS复发率增高，因此，在本发明之前，现有技术中的数据表明TACI融合蛋白可能无法用于治疗MS。

本发明人已在多篇专利文献中公开了一种新的TACI-Fc融合蛋白，例如CN101323643B、CN102085367B和CN102085368B，其全部内容通过引用并入本文。与Atacicept的临床结果相反，本发明人在进一步的研究中出人意料地发现，上述TACI-Fc融合蛋白能够有效地治疗NMOSD和MS。

发明内容

本发明的一个方面提供了TACI-Fc融合蛋白用于制备治疗视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)药物的应用。

一方面，本发明涉及序列表SEQ ID NO:1所示的TACI-Fc融合蛋白用于制备治疗视神经脊髓炎(NMO)药物的应用；

另一方面，本发明涉及序列表SEQ ID NO:1所示的TACI-Fc融合蛋白用于制备治疗视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)药物的应用；

另一方面，本发明涉及序列表SEQ ID NO:1所示的TACI-Fc融合蛋白用于制备治疗多发性硬化(MS)药物的应用；

另一方面，所述的视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)包括：视神经脊髓炎、复发性视神经炎、纵向延伸横贯性脊髓炎、视神经脊髓型多发性硬化、长阶段横断性脊髓炎、单侧或双侧视神经炎、伴自身免疫性疾病的视神经炎或脊髓炎、视神经炎或脊髓炎伴有症状性或无症状性脑内病灶。

另一方面，本申请涉及一种治疗视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)或视神经脊髓炎(NMO)的方法，其包括给予患者治疗有效量的序列如SEQ ID NO:1所示的TACI-Fc融合蛋白。

另一方面，本申请涉及序列如SEQ ID NO:1所示的TACI-Fc融合蛋白，其用于治疗视神经脊髓炎(NMO)或视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)。

特别地，本发明所述的TACI-Fc融合蛋白的TACI部分包括来自TACI胞外区从氨基酸残基13开始的氨基末端区序列，富半胱氨酸区的全部序列，和柄区的部分序列，融合蛋白的免疫球蛋白Fc包括铰链区，CH2区和CH3区，TACI序列与Fc序列之间是直接融合或经连接序列融合。

在一些实施方案中，本发明的TACI-Fc融合蛋白的TACI序列优选TACI的第13至108氨基酸序列或第13至118氨基酸序列。

在一些实施方案中，本发明的免疫球蛋白Fc序列选自人或动物的免疫球蛋白Fc，是Fc全长或是部分序列，Fc选自IgG，IgM，IgD，IgA，每种免疫球蛋白类型包括各亚型，如IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，优选IgG1。

在一些实施方案中，本发明的TACI-Fc融合蛋白的TACI序列与免疫球蛋白Fc序列之间可以直接融合或经连接序列融合，如果经连接序列融合，优选经连接序列9Gly融合。

在一个优选的实施方案中，本发明的TACI-Fc融合蛋白优选由TACI的第13至118氨基酸序列和免疫球蛋白IgG1Fc融合而成，其包含如下序列：

SEQ ID NO:1(序列1)。

在一个具体的实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的TACI-Fc融合蛋白，即：RCT18。

本发明所述的TACI-Fc融合蛋白可与药学上可接受的载体以本领域常规方法制备视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)或多发性硬化(MS)的药物，所述载体包括赋形剂、稀释剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、稳定剂等。

本发明所述药物可制成临床上可接受的各种剂型，包括但不限于口服制剂或注射制剂，优选注射剂。

在某些实施方案中，本发明的TACI-Fc融合蛋白每至少28天、每至少27天、每至少26天、每至少25天、每至少24天、每至少23天、每至少22天、每至少21天、每至少20天、每至少19天、每至少18天、每至少17天、每至少16天、每至少15天、每至少14天、每至少13天、每至少12天、每至少11天、每至少10天、每至少9天、每至少8天、每至少7天、每至少6天、每至少5天、每至少4天、每至少3天、每至少2天、每至少1天一次向所述患者施用。

在某些实施方案中，本发明的TACI-Fc融合蛋白每至多28天、每至多21天、每至多15天、每至多14天、每至多13天、每至多12天、每至多11天、每至多10天、每至多9天、每至多8天、每至多7天、每至多6天、每至多5天、每至多4天、每至多3天、每至多2天、每至多1天一次向所述患者施用。

在某些实施方案中，本发明的TACI-Fc融合蛋白每6-8天、每13-15天、每20-22天、每27-29天一次向所述患者施用。

在某些实施方案中，本发明的TACI-Fc融合蛋白每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周一次向所述患者施用。

在某些实施方案中，本发明的TACI-Fc融合蛋白以25mg/次、40mg/次、75mg/次、80mg/次、120mg/次、150mg/次、160mg/次、200mg/次、240mg/次、280mg/次、320mg/次、360mg/次、400mg/次、440mg/次、480mg/次、520mg/次、560mg/次、600mg/次的剂量施用。

在某些实施方案中，患者符合2015年的视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)国际共识诊断标准，和/或AQP4-IgG阳性。

本发明的TACI-Fc融合蛋白可通过任何适宜的途径施用，例如鼻内、皮内、皮下、肌内或静脉内施用。

本文使用的“治疗有效量”或“有效量”是指足以显示其对于所施用患者益处的剂量。施用的实际量，以及施用的速率和时间过程会取决于所治疗者的自身情况和严重程度。治疗的处方(例如对剂量的决定等)最终是全科医生及其它医生的责任并依赖其做决定，通常考虑所治疗的疾病、患者个体的情况、递送部位、施用方法以及对于医生来说已知的其它因素。

本文使用的“TACI-Fc融合蛋白”、“TACI-Fc”、“TACI-Ig”可互换地使用，均表示与免疫球蛋白的Fc区相融合的TACI蛋白。

本发明通过建立EAE小鼠模型，并对动物临床症状进行评分，从药理学层面分析了TACI-Fc对EAE小鼠模型的治疗作用，通过实验证实了本申请的融合蛋白对于正常外周淋巴细胞增殖以及凋亡没有影响，同时降低了APPIL等外周细胞因子的分泌，抑制活化B细胞增殖，从而减轻了CNS炎症浸润，改善脊髓等部位脱髓鞘程度发挥治疗作用，对EAE小鼠模型具有显著的治疗效果。

此外，本发明所述的TACI-Fc融合蛋白能够最大限度的保留TACI氨基末端区的大部分氨基酸残基，相对于现有技术大幅提高了融合蛋白与Blys的亲和力，药物与靶标的亲和力增加即意味着达到药物预期疗效的使用浓度下降，并且还能够实现药物使用副作用的降低，降低了患者的用药成本，更适合于大规模用药和工业化生产。

申请人通过蛋白质前体加工酶人工神经网络分析找到了天然TACI降解的位点，最大限度的保留TACI氨基末端区的大部分氨基酸残基，使TACI-Fc融合蛋白出人意料地解决了TACI降解的难题并具有更好的生物学活性。

申请人出人意料地发现，本发明的TACI-Fc融合蛋白能够用于治疗视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)和多发性硬化(MS)，本发明所提供的治疗视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)和多发性硬化(MS)的药物具有生物学活性高、用量小、安全有效的优点。

附图说明

图1.A图显示了RCT-18对小鼠正常T细胞的增殖影响(细胞凋亡检测结果)；B图显示了RCT-18浓度与小鼠正常T细胞增殖的关系。

图2.A图显示了RCT-18对小鼠正常B细胞的增殖影响(细胞周期检测结果)；B图显示了RCT-18浓度与G1期小鼠正常B细胞增殖的关系。

图3显示了EAE小鼠治疗的临床评分情况。

图4.A图显示了TACI-Ig治疗后CNS炎症浸润情况(LFB染色)；B图显示了TACI-Ig治疗后CNS炎症浸润情况(炎症细胞计数)。

图5.A图显示了TACI-Ig治疗后CNS脱髓鞘程度评估(LFB染色)；B图显示了TACI-Ig治疗后CNS脱髓鞘程度评估(脱髓鞘评分)。

图6显示了TACI-Ig外周免疫系统B细胞增殖的影响。

图7显示了TACI-Ig对外周APRIL细胞因子分泌的影响。

具体实施方式

本发明人通过蛋白前体加工酶人工神经网络系统对TACI蛋白氨基酸序列的分析发现：TACI胞外区序列中包含两个PC酶切位点(第9和第135氨基酸)以及两个积分亦接近PC酶切位点临界值的位点(第12和第120氨基酸)。接着，本发明人在设计TACI-Fc融合蛋白时避开了这些位点，得到了TACI-Fc融合蛋白，其特征是：包含TACI氨基末端区域的大部分序列；包含富含半胱氨酸区的全部序列；包含柄区的序列。

以下实施例是对本发明的进一步的阐述和解释，不应该被认为是对本发明的限制。

实施例1：TACI-Fc融合蛋白对淋巴细胞增殖和凋亡的影响

磁珠分选正常小鼠脾脏T、B细胞

无菌分离6-8周龄的C57/BL6小鼠脾脏，置于预冷的PBS中70μm滤网上，将脾脏顺时针小心碾磨；滤液置于15ml离心管中，破红处理；加入50μl/ml的大鼠血清封闭；转移至5ml圆底分离管中；加入50μl/ml的Isolation Cocktail，室温孵育10min；涡旋30s；加入75μl/ml微球，室温孵育2.5min；定容至2.5ml，放于磁铁中，室温放置3min；倒出液体中即为分离出的T细胞或B细胞悬液。

将RCT-18干粉成品(荣昌生物制药(烟台)有限公司)使用注射用水分别配制成0.04mg/ml，0.4mg/ml，0.8mg/ml浓度，根据不同剂量组实验动物体重及给药剂量计算药物给药体积。阳性对照：FTY-720(2-氨基-2-[2-(4-正辛基苯基)乙基]-1,3-丙二醇盐酸盐)，使用2％乙醇配制成0.72mg/ml浓度，根据阳性对照组动物体重计算给药体积。

添加不同浓度TACI-Ig后检测细胞凋亡和增殖

体外培养原代分离的CD4+T细胞和CD19+B细胞24h后，分别添加0nM、1nM、10nM、100nM、1000nM TACI-Ig与细胞共培养，48h后收集细胞，按照FITC-Annexin V凋亡检测试剂盒和细胞周期检测试剂盒说明书操作。图1和图2所示的实验结果表明：不同浓度的TACI-Ig对于正常T细胞和B细胞增殖及凋亡无影响。

实施例2：建立EAE小鼠模型

将8-10周C57BL/6J雌性小鼠，每只小鼠臀部皮下均匀分三个点注射200μl包含100μg MOG35-55(GL Biochem)的完全弗氏佐剂(含有热致死结核杆菌(MTB))(H37Ra strain；Difco)。具体方法：(1)将MOG33-35溶解于PBS中，配置成初始浓度为1mg/ml的A液；(2)称取一定质量的MTB于研钵中，将与PBS等体积的IFA(Incomplete Freund’s adjuvant；Sigma-Aldrich)缓慢滴加入研钵中，边加边研磨，配制成5mg/ml的B液；(3)分别用两支玻璃注射器吸取A液、B液，连接三通管，在冰上来回推动至明显感觉难以推动为止，再取一滴混悬液在水中，呈现不扩散，即可注射造模。MOG的最终浓度为0.5mg/ml,MTB的最终浓度为2.5mg/ml。所有操作均在冰上进行。造模当天给每只老鼠腹腔注射200μl含有200ngPTX(pertussistoxin；Difco laboratories)的PBS，48小时后以同样剂量再注射一次。

给药后动物经10天左右潜伏期进入发病期，根据动物临床症状进行评分。0级：无任何临床症状；1级：动物尾巴无力，2级：尾部无力+肢体无力，3级：肢体轻度麻痹，4级：肢体严重麻痹，被动翻身后不能复原；5级：濒死状态或死亡。

实施例3

EAE小鼠治疗方案

动物分组分为阴性对照组、阳性对照组及实验组，其中实验组设置给药剂量0.350、1.105、3.333、10和30mg/kg，阳性对照组给予FTY-720，剂量5mg/kg，自发病高峰期即免疫后第16天隔天腹腔注射，连续治疗至炎症消退期即第35天。阴性对照组在相同时间点腹腔注射生理盐水。每天记录小鼠评分及体重，评分时由独立第2人盲法评价。根据图3所示的实验结果表明：经过TACI-Ig治疗后，EAE小鼠的临床症状明显改善，临床评分与阴性对照有统计学差异，与阳性对照组无明显差异。此外，通过ELISA法检测发现，经治疗后各组的APRIL水平均明显下降(P<0.01)。

实施例4组织形态学鉴定

免疫第35天处死小鼠，取脊髓腰膨大节段，浸于4％多聚甲醛中固定后石蜡包埋，以5μm厚度在同个节段处切片，脱蜡和梯度水合后进行HE染色和LFB染色。染色后于倒置显微镜下观察，分别拍摄4X和20X镜下照片。HE染色由独立第2人盲法随机截取脊髓白质10处面积为1mm²区域进行炎症细胞计数，计算每平方毫米炎症细胞数，进行统计分析。LFB通过IPP6.0软件截取全部脊髓白质区脱髓鞘区域和总白质区域，计算脱髓鞘区占总白质区面积比例。图4和图5所示的实验结果表明：各个治疗组脱髓鞘程度均明显改善。这一结果表明，本发明的TACI-Ig能够有效治疗或缓解NMOSD和MS。

实施例5外周免疫水平变化情况

处死小鼠后取脾脏，制备成单细胞悬液后分成两组，一组经PTX-百日咳毒素刺激后进行固定破膜操作，与CD4、IL-4、IL-17A以及IFN-γ抗体一起孵育；一组与CD19、CD21/35、CD23、IgM、IgD表面抗体一起孵育。孵育后上流式细胞仪检测细胞各细胞比例。

取外周血后静置凝固2h，2300g×10min离心后取上清，进行APRIL和BLyS等ELISA检测，按相应试剂盒说明进行。

根据图6的实验结果表明：经治疗后，各组小鼠Th1、Th2、Th17等T细胞亚群和记忆B细胞(CD19CD27)无明显变化。CD21/35和CD23是活化B细胞的表面标志物，经治疗后10mg/kg治疗组的活化B细胞明显下降(P<0.01)，0.35mg/kg组无明显差异(P>0.01)。这一结果表明，本发明的TACI-Ig有望通过抑制B细胞活化实现对NMOSD和MS的有效治疗或缓解。

此外，图7的实验结果表明：经过治疗后各治疗组的APRIL水平均明显下降(P<0.01)。

本申请实施例的数据显示为平均数(S.D.)，通过GraphPad Prism 6.0进行one-way ANOVA统计分析，P<0.05设为统计水准。

总体结论

TACI-Ig对正常T、B细胞体外增殖和凋亡无明显影响。对EAE小鼠有显著治疗作用，经治疗后小鼠CNS脱髓鞘程度和炎症浸润程度得到显著降低和改善，证明本发明的TACI-Fc融合蛋白能够有效地治疗NMOSD和MS。

实施例6 RCT-18融合蛋白的临床试验

1.临床试验方案设计：

本临床试验方案采用平行随机化分组的样本分组模式，采用双盲试验验证方式开展针对视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)的治疗效果临床实验。

2.受试者的选择标准：

1)符合2015年的视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)国际共识诊断标准，且AQP4-IgG阳性(签署知情同意书前24周内检测结果均可接受)的患者；

2)男性或女性，年龄18～65周岁；

3)EDSS评分≤7.5；

4)在筛选期育龄期有生育能力女性受试者的妊娠试验结果应为阴性，且在研究期间采用有效的避孕措施；

5)随机化前2年内至少经历过2次复发，和/或随机化前1年内至少经历过1次复发；

6)自愿签署知情同意书。

3.受试者排除标准：

1).需要排除受试者的异常实验室指标包括但不限于下述指标：白细胞计数<3×109/L，中性粒细胞<1.5×109/L，血红蛋白<85g/L，血小板计数<80×109/L，血清肌酐＞1.5×ULN。总胆红素＞1.5×ULN，AST(GOT)＞3×ULN，ALT(GPT)＞3×ULN，碱性磷酸酶＞2×ULN，AST＝天冬氨酸氨基转移酶；GOT＝谷草转氨酶；ALT＝丙氨酸氨基转移酶；GPT＝谷丙转氨酶；

2).目前患有活动性肝炎或患有肝脏严重病变及病史者。根据下列HBsAg、抗HBc抗体和抗HBs抗体检测结果，有乙型肝炎病毒感染的血清学证据：HBsAg阳性的患者应排除；HBsAg阴性但抗HBc抗体阳性的患者，无论抗HBs抗体是阳性还是阴性，均需检测HBV-DNA，确定其情况：如果HBV-DNA阳性，患者需要排除；如果HBV-DNA阴性，患者可参加试验；

3).除视神经脊髓炎谱系疾病以外，具有其他慢性活动性免疫系统病或者病情稳定但是需要糖皮质激素治疗的患者排除：如类风湿关节炎、硬皮病、肖格伦综合征、溃疡性结肠炎、艾滋病(AIDS)、遗传免疫缺陷或药物引起免疫缺陷；仅自身抗体阳性但没有临床表现的患者可以入组试验；随机化前使用糖皮质激素维持治疗的患者可在停用药物即可参加试验；

4).孕妇、哺乳期妇女及试验期间有生育计划的患者；

5).过敏反应：对胃肠外给药的造影剂、人源性生物制品有过敏史的患者；

6).随机化前28天接种活疫苗除外接种带状疱疹疫苗的患者；

7).随机化前6个月内使用过利妥昔单抗或其他单抗的患者；

8).随机化前28天内使用过静脉注射免疫球蛋白(IVIG)的患者；

9).随机化前接受过造血干细胞移植、淋巴照射的患者；

10).随机化前使用过硫唑嘌呤(Azathioprine,AZA，半衰期t1/2＝6hrs)、吗替麦考酚酯(Mycophenolate Mofetil，t1/2＝16hrs)、来氟米特(Leflunomide,LEF，t1/2＝14.7hrs)、他克莫司(Tacrolimus，t1/2＝43hrs)、特立氟胺(Teriflunomide，t1/2＝18days)、环孢素(Cyclosporin,CsA，t1/2＝27hrs.)、甲氨喋呤(Methotrexate,MTX，t1/2＝14hrs)、米托蒽醌(Mitoxantrone,NVT，t1/2＝37hrs)、环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX，t1/2＝6hrs)等免疫抑制剂的患者，除来氟米特和特立氟胺外，停药间隔超过5倍半衰期即可以入组。来氟米特和特立氟胺需要服用考来烯胺进行洗脱，可以停药并采取以下措施：服用考来烯胺8克，每日3次，持续11天，如果8克的剂量不能耐受，可改为每次口服4克，时间和次数同前；

11).随机化前28天或试验药物的5倍半衰期(取时间较短者)内给予过任何临床试验药物的患者；

12).有严重精神疾病症状，临床不能配合的患者；

13).恶性肿瘤患者；

14).随机化前12周内经历了以下任何事件的患者：心肌梗塞、不稳定型缺血性心脏病、中风或纽约心脏病协会Ⅳ级心力衰竭；

15).筛选期感染带状疱疹、HCV抗体阳性或HIV抗体阳性者；

16).试验期间无法进行磁共振成像检查的患者；

17).研究者认为不适合参加试验的患者。

4.施药方案

1)治疗组：注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体－抗体融合蛋白冻干粉(规格：80mg/支)，采用皮下注射方式，每周用药1次。

2)对照组：安慰剂冻干粉(规格：80mg/支)，采用皮下注射方式，每周用药1次。

序列表

<110> 荣昌生物制药（烟台）有限公司

<120> TACI-Fc融合蛋白用于制备治疗视神经脊髓炎谱系疾病和多发性硬化之药物中的应用

<130> 1

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 333

<212> PRT

<213> 人工序列(融合蛋白)

<400> 1

Ser Arg Val Asp Gln Glu Glu Arg Phe Pro Gln Gly Leu Trp Thr Gly

1 5 10 15

Val Ala Met Arg Ser Cys Pro Glu Glu Gln Tyr Trp Asp Pro Leu Leu

20 25 30

Gly Thr Cys Met Ser Cys Lys Thr Ile Cys Asn His Gln Ser Gln Arg

35 40 45

Thr Cys Ala Ala Phe Cys Arg Ser Leu Ser Cys Arg Lys Glu Gln Gly

50 55 60

Lys Phe Tyr Asp His Leu Leu Arg Asp Cys Ile Ser Cys Ala Ser Ile

65 70 75 80

Cys Gly Gln His Pro Lys Gln Cys Ala Tyr Phe Lys Glu Asn Lys Leu

85 90 95

Arg Ser Pro Val Asn Leu Pro Pro Glu Leu Asp Lys Pro His Thr Cys

100 105 110

Pro Leu Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

115 120 125

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

130 135 140

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

145 150 155 160

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

165 170 175

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

180 185 190

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

195 200 205

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

210 215 220

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

225 230 235 240

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

245 250 255

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

260 265 270

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Ala Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

275 280 285

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

290 295 300

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

305 310 315 320

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

Claims (7)

1.序列如SEQ ID NO：1所示的TACI-Fc融合蛋白用于制备治疗视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)药物的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，所述视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)包括：视神经脊髓炎、复发性视神经炎、纵向延伸横贯性脊髓炎、视神经脊髓型多发性硬化、长阶段横断性脊髓炎、单侧或双侧视神经炎、伴自身免疫性疾病的视神经炎或脊髓炎、伴有症状性或无症状性脑内病灶的视神经炎或脊髓炎。

3.序列如SEQ ID NO：1所示的TACI-Fc融合蛋白用于制备治疗视神经脊髓炎(NMO)的药物的应用。

4.序列如SEQ ID NO：1所示的TACI-Fc融合蛋白用于制备治疗多发性硬化(MS)药物的应用。

5.根据权利要求1-4中任一项权利要求所述的应用，所述药物包含TACI-Fc融合蛋白和药学可接受的载体。

6.根据权利要求5所述的应用，所述载体包括赋形剂、稀释剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、或稳定剂。

7.根据权利要求1-6中任一项权利要求所述的应用，所述药物为口服制剂或注射制剂。